一种复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂及其制备方法
【专利摘要】一种复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂及其制备方法,本发明属于医药本发明属于医药技术领域，本发明提供一种复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂，本
【发明内容】
的技术方案如下:一种复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂，所述的凝胶剂包含有如下重量百分比的组分：低分子肝素钠0.05％?0.1％；尿囊素0.025％?0.5％；脂质成分1％?5％、膜软化剂0.025％?0.05％和凝胶基质1％?5％，乙醇5％?10％,其余为水合介质。本发明的有益效果在于，所述的复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂，将低分子肝素钠和尿囊素包封进脂质体中，可增加皮肤局部的药物浓度，促进经皮渗透，增强疗效。
【专利说明】
一种复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂及其制备方法
技术领域
本发明属于医药本发明属于医药技术领域，特别涉及用于治疗皮肤挤压造成的损伤、外周血管栓塞性皮肤疾病的含复方低分子肝素类特制的脂质体凝胶剂及其制备方法。
【背景技术】
褥疮，又称压疮、压力性溃疡，是由于人体皮肤组织长期受压迫(有时伴随擦伤)导致缺血坏死、溃烂，医又称席疮，因久着席褥而得名，多见于年老体弱、骨折、慢性消耗性疾病的病人，常见于因瘫痪或手术而长期卧床的人，褥疮及其相关并发症是导致患者死亡的重要原因。目前对于褥疮的治疗，方法很多，药物繁杂，西医已从分子水平采用钠米技术治疗，中医亦在分子水平进行促进褥疮愈合药物的研究，另外对于褥疮护理的研究也日益受到重视，中西医技术的结合是未来的必然趋势，但目前的研究仍有设计缺陷，尚未形成一套完整的褥疮治疗体系。
低分子肝素钠(Low Molecular Weight Heparin,LMffH)是由肝素钠降解或分级得到的低分子量组分或片段。低分子肝素钠除具有抗凝血和抗血栓作用外，还有抗炎、止痒、止痛等作用，可用于治疗静脉曲张引起的肿、胀、酸、痛，促进外伤、软组织挫伤所致的水肿、血肿的吸收。肝素类药物局部应用可用于治疗皮炎、单纯糠疹、冻疮、皲裂性皮肤病、寻常性鱼鳞病等皮肤病。
尿囊素[allantoin]尿素的衍生物，又是尿素的复合物，是一种重要的精细化工产品和尿素深加工产品，被广泛应用于医药、农业和轻化工领域，因最早被发现于牛的尿囊液中而得名。尿囊素又是尿酸的衍生物，实验和临床研究表明，它具有角质松解、水合、麻醉镇痛、抗刺激物、促进上皮生长、消炎、抑菌等作用，正作为外用制剂广泛用于皮肤科临床，为手足皲裂、鱼鳞病、银肩病、多种角化性皮肤病、扩创和清洁创面及消化性溃疡的治疗提供了新的有效途径。
【发明内容】
为解决上述提到的问题，本发明提供一种复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂，本
【发明内容】
的技术方案如下:
一种复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂，所述的凝胶剂包含有如下重量百分比的组分:低分子肝素钠0.05%-0.1%；尿囊素0.025%-0.5%；脂质成分I %_5 %、膜软化剂
0.025%-0.05%和凝胶基质I %~5%,其余为水合介质。其中低分子肝素钠和尿囊素为药理活性成分，将低分子肝素钠和尿囊素做成复方制剂，使二者的药理作用协同，更好的预防皮肤挤压创面形成和促进褥疮修复，减轻痛苦，皮肤给药时有望更好地促进患处血液循环，改善患处皮肤生长环境，具有预防压创面的形成和促进皮肤创面愈合及生肌的作用。但低分子肝素钠为聚阴离子亲水性化合物，分子量大(平均分子量3000-8000Da)，难以透过皮肤角质层。尿囊素是一种两性化合物，能结合多种物质形成复盐。
进一步的，所述的低分子肝素钠是肝素钠降解或分级得到的低分子量组分或片段，平均分子量为3000-8000Da(道尔顿)。
所述的尿囊素一般是市售或通过常规方法制备得到，其含量不少于98 %。
进一步的，所述的脂质成分包括大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、胆固醇、十八胺或十六烷基三甲基溴化铵中的一种以上，其中可选用的十八胺，十六烷基三甲基溴化铵是带正电的脂质成分，在形成脂质体时插入到磷脂双分子层间，通过静电作用将低分子肝素钠吸附包裹在脂质体表面或腔体内部，极大提高水溶性低分子肝素钠的包封率。
进一步的，所述的膜软化剂为胆酸钠、脱氧胆酸钠或吐温80中的一种以上，本发明所述的膜软化剂是指其能使脂质体膜具有高度的变形能力，使其携带的药物更易透过皮肤，在脂质体中加入膜软化剂胆酸钠，使其具有变形能力而易透过皮肤。
进一步的，所述的凝胶基质包括有凝胶材料、PH调节剂和水合介质，凝胶材料为重量百分比1%-5%，重量百分比pH调节剂(40%-50%)，重量百分比水合介质40%-50%。
进一步的，所述的凝胶材料为甲基纤维素、羟丙甲纤维素、羟甲基纤维素钠、海藻酸钠或卡波姆940中的一种以上，优选甲基纤维素、羟丙甲纤维素或卡波姆940。最佳选择甲基纤维素，甲基纤维素钠凝胶作为赋形剂，制成复方低肝素钠脂质体凝胶剂，更好的发挥这两种药物预防和治疗褥疮的疗效，将为临床提供一种治疗和预防皮肤挤压创面形成和促进褥疮修复，使用方便的新制剂。
进一步的，所述的PH调节剂选自盐酸、氢氧化钠或三乙醇胺中的一种，将凝胶剂的pH调整至6-8之间。
进一步的，所述的水合介质为磷酸盐缓冲溶液、纯化水或注射用水中的一种，优选磷酸盐缓冲溶液。
一种复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂的制备方法，所述的方法为:将如下重量份的组分混合后搅拌均匀即可:低分子肝素钠0.05%-0.1%;尿囊素0.025%-0.5%;脂质成分I %-5% ;膜软化剂0.025%~5%；凝胶基质I %-5%和乙醇5%-10%，其余为水合介质。
本发明所述的复方低分子肝素钠脂质体，能过以下方法和步骤制备:①将占总重量百分比为1%-5%脂质成分溶解在乙醇中，制成脂质溶液;②将占总重量百分比为0.005%-
0..01%的低分子肝素钠、占总重量百分比为0.025%-0.5%尿囊素和占总重量百分比为
0.025%~5%膜软化剂溶解在水合介质中；③脂质溶液缓慢注入于搅拌下的水合介质中，制成脂质分散溶液;④将脂质分散溶液经超声(300W，5min，on5s，ofT5s)或高压均质(800bar，3cycles)处理，得复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂。选择乙醇作为有机溶剂，是因为乙醇不仅作为溶解脂质成分的有机溶剂，还有药物渗透促进作用，分散在凝胶剂中对皮肤无刺激作用。
本发明的有益效果在于，所述的复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂，将低分子肝素钠和尿囊素包封进脂质体中，可增加皮肤局部的药物浓度，促进经皮渗透，增强疗效。
【附图说明】
图1为实施例3制备的复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂的动物实验创面组织切片效果图；
图2为实施例3制备的复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂的动物实验创面炎症分子检测结果图； 图3为实施例3制备的复方低分子肝素钠尿囊素脂质体对人永生化表皮细胞HaCaT细胞存活率影响试验结果图。
【具体实施方式】
下面结合具体的实施方式，对本案做进一步的说明。
实施例1
I.取蛋黄卵磷脂2g，胆固醇500mg，十八胺40mg，加5ml乙醇，完全溶解后形成脂质溶液；
2.将14000IU的低分子肝素钠(140mg)，10mg尿囊素溶液，200mg的胆酸钠溶解在磷酸盐缓冲溶液中，其中低分子肝素钠含量350IU/g，尿囊素溶液尿囊素的含量3mg/g;3.脂质溶液缓慢注入搅拌下的上述磷酸盐缓冲溶液中，制成重量为1g的脂质体粗分散溶液;将脂质体粗分散溶液经超声法处理(300W ,5min,on5s, off5s)得复方低分子肝素钠脂质体温悬液。
取卡波姆940 0.4g，加I，2—丙二醇4.0g润湿分散;取16.6g磷酸盐缓冲溶液加入到分散有卡波姆940的I，2—丙二醇中，均匀溶胀过夜后，用三乙醇胺调节pH至6.5，搅拌均匀形成重量为1g的空白凝胶剂。
将脂质体粗分散溶液混悬液加入到空白凝胶剂中，继续搅拌均匀，即得总重量为40g的复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂(低分子肝素钠含量700IU/g，尿囊素的含量5mg/g)0
实施例2
取蛋黄卵磷脂lg，胆固醇150mg，十六烧基三甲基溴化钱40mg，加4ml乙醇，完全溶解后形成脂质溶液;将18000IU的低分子肝素钠(180mg)，0.1g尿囊素，10mg的脱氧胆酸钠溶解在纯化水中；脂质溶液缓慢注入搅拌下的上述溶液中，制成重量为1g的脂质体粗分散溶液;将脂质体粗分散溶液经高压均质(SOObar，3cycles)得复方低分子肝素钠脂质体温悬液。
取薄荷醇0.4g，加I，2—丙二醇4.0g使其溶解后;加入羟丙甲纤维素3.2g，搅拌使之分散;用lmol/L的盐酸调节纯化水的pH至6.5，将分散有羟丙甲纤维素和薄荷醇的I，2—丙二醇加入到PH为6.5纯化水中，搅拌均匀形成重量为20g的空白凝胶剂。
将制备好的复方低分子肝素钠脂质体混悬液加入到形成的空白凝胶剂中，继续搅拌均匀，即得总重量为20g的复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂(低分子肝素钠含量900IU/g，尿囊素的含量5mg/g)。
实施例3
取大豆卵磷脂800mg，胆固醇200mg，十六烧基三甲基溴化钱6mg，加5ml乙醇，完全溶解后形成脂质溶液;将20000IU的低分子肝素钠(200mg)，200mg尿囊素，300mg的胆酸钠溶解在磷酸盐缓冲溶液中；脂质溶液缓慢注入搅拌下的上述磷酸盐缓冲溶液中，制成重量为1g的脂质体粗分散溶液;将脂质体粗分散溶液经超声法处理(300W，5min，on5s，ofT5s)得复方低分子肝素钠脂质体温悬液。
取甲基纤维素钠0.7g，加丙三醇2.0g润湿分散;加入超纯水后，均匀溶胀过夜后，用三乙醇胺调节PH至6.5，搅拌均匀形成重量为1g的空白凝胶剂。
将制备好的复方低分子肝素钠脂质体混悬液加入到形成的空白凝胶剂中，继续搅拌均匀，即得总重量为20g的复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂(低分子肝素钠含量1000IU/g，尿囊素的含量5mg/g)。
实施例4
复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂对小鼠皮肤挤压创面形成和修复的影响试验。小鼠皮肤挤压创面形成和修复影响试验步骤如下:小鼠背部压创模型的制备，取健康NIH小鼠[NIH小鼠，雌雄不限，体重在20-30g，35-45天，购于广东省实验动物中心，许可证号为:SCXK(粵)2013-0002]30只，随机分三组，每组10只。10%的水合氯醛麻醉后，从背部中央外机械褪毛后脱毛膏处理3分钟，温水擦去残留脱毛膏，暴露5*5cm2的无损伤、无皮疹的光滑皮肤适应24h。取直径10mm、厚度1mm、重0.5g、磁力10000高斯的两块磁铁，对称夹在小鼠暴露的背部皮肤两侧，3h后撤去磁铁。第I组为模型对照组，不进行任何涂抹;第2组为空白对照组，空白脂质体凝胶剂0.2g均匀涂抹于挤压部位;第3组为复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂凝胶组，按实例3制备复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂凝胶剂0.2g均匀涂抹于挤压部位。每12h涂抹一次，每24h对压创面拍照一次，初次抹药48h后对所有小鼠断胫处死，取压创处皮肤进行组织学分子生物学检测。
[0033]复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂对人永生化表皮细胞HaCaT细胞存活率影响试验。
HaCaT细胞存活率试验步骤如下:将HaCaT细胞按每孔5000-10000接种于96孔板中接种60个孔，培养24h后将60个孔平均分配成6组，每组10个孔，分别按O 1.5 3 6 12 24ug/ml给予实例3制备复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂，24h后按MTT比色法检测每孔细胞活性。
由图1结果可以看出，按实例3制备的复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂凝胶剂对NIH小鼠皮肤挤压创面形成有明显的抑制作用，对创面修复有明显的抑制作用。由图2的结果可以看出，按实例3制备的复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂凝胶剂对NIH小鼠皮肤挤压创面的炎症有明显的抑制作用。由图3的结果可以看出，按实例3制备的复方低分子肝素钠尿囊素脂质体对细胞的有一定的毒性，但在一定范围内未达到半数致死量。
【主权项】
1.一种复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂，其特征在于，所述的凝胶剂包含有如下重量百分比的组分:低分子肝素钠0.05%-0.1% ;尿囊素0.025%-0.5% ;脂质成分1%_.5%、膜软化剂0.025%~0.05%和凝胶基质I %-5%，乙醇5%-10%，其余为水合介质。2.如权利要求1所述的复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂，其特征在于，所述的低分子肝素钠是肝素钠降解或分级得到的低分子量组分或片段，平均分子量为3000-8000Da。3.如权利要求1所述的复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂，其特征在于，所述的脂质成分包括大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、胆固醇、十八胺或十六烷基三甲基溴化铵中的一种以上。4.如权利要求1所述的复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂，其特征在于，所述的膜软化剂为胆酸钠、脱氧胆酸钠或吐温80中的一种以上。5.如权利要求1所述的复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂，其特征在于，明所述的凝胶基质包括有凝胶材料、PH调节剂和水合介质，凝胶材料为重量百分比1%_5%，重量百分比40 % -50 %的pH调节剂，重量百分比40 % -50 %的水合介质。6.如权利要求5所述的复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂，其特征在于，所述的凝胶材料为甲基纤维素、羟丙甲纤维素、羟甲基纤维素钠、海藻酸钠或卡波姆940中的一种以上。7.如权利要求5所述的复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂，其特征在于，所述的pH调节剂选自盐酸、氢氧化钠或三乙醇胺中的一种，将凝胶剂的pH调整至6-8之间。8.如权利要求1所述的复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂，其特征在于，所述的水合介质为磷酸盐缓冲溶液或纯化水。9.一种复方低分子肝素钠尿囊素脂质体凝胶剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤: .1.将占总重量百分比为1%-5%脂质成分溶解在乙醇中，制成脂质溶液； .2.将占总重量百分比为0.05%-0.1%的低分子肝素钠、占总重量百分比为0.025%-.0.5%尿囊素和占总重量百分比为0.025 %~0.05%膜软化剂溶解在水合介质中； .3.脂质溶液缓慢注入于搅拌下的水合介质中，制成脂质分散溶液； .4.将脂质分散溶液经超声处理或高压均质处理，超声处理持续时间为4-6分钟，每5S—次，每次超声处理的时间间隔是5S，得到脂质体粗分散溶液；高压均质处理的压力为.800bar； .5.凝胶基质的配置:将凝胶材料加入有机溶剂润湿分散，然后加入水合介质，搅拌均匀后件PH调节剂调节PH位于6-8之间，得到空白凝胶剂；. 6.将脂质体粗分散溶液混悬液加入到空白凝胶剂中，搅拌均匀后得凝胶剂。
【文档编号】A61K31/727GK105920030SQ201610302185
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年5月9日
【发明人】史小军, 王林, 王一林, 李建科, 朱咸兵, 陈后杰
【申请人】清华大学深圳研究生院