一种胸腺法新缓释微球制剂及其制备方法

一种胸腺法新缓释微球制剂及其制备方法
【专利摘要】本发明提供了一种胸腺法新缓释微球制剂及其制备方法，一种胸腺法新缓释微球制剂，它是由微球重量0.1%?30%的胸腺法新和微球重量50%?99.9%的分子量为5000?200000道尔顿的可生物降解且具生物相容性的高分子材料，以及占微球重量0%?20%的药学上可接受的其他辅料制备而成的制剂。本发明还提供了一种制备胸腺法新缓释微球制剂的制备方法，即高压静电微胶囊成型法。本发明制备的胸腺法新缓释微球达到了胸腺法新的有效包埋并缓慢释放，缓释效果可以达到40天，可有效降低胸腺法新的毒副作用，提高生物利用度，延长代谢半衰期，同时减少给药次数，为患者减轻经济与精神负担。
【专利说明】
一种胸腺法新缓释微球制剂及其制备方法
技术领域
[0001]本发明属于缓释微球制剂技术领域，涉及一种免疫调节剂的长效缓释微球制剂及其制备方法，具体涉及一种胸腺法新缓释微球制剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002]胸腺法新，即胸腺肽α?，是1984年发现并由胸腺分泌的一种重要的T淋巴细胞调节因子，与细胞免疫调节有关。胸腺法新是一个N端乙酰化的酸性多肽，由28个氨基酸残基组成，主要用于慢性乙肝及作为免疫损害病者的免疫应答增强剂。
[0003]胸腺法新作为一种免疫调节剂，它的良好疗效已得到确证，临床应用前景可观。乙型肝炎病毒(HBV)感染是人类最常见的病毒性感染之一，全世界慢性HBV感染者约有3亿，其中大部分在亚洲地区。我国人群中慢性HBV携带者约占1 % -15 %，慢性乙型肝炎(CHB)患者中每年发生肝硬化和肝细胞癌者分别占2 %和I %。显然，积极治疗HBV感染，阻止其向肝硬化和肝癌发展，具有重要意义。此外，胸腺法新对爱滋病、恶性肿瘤等疾病具有良好疗效。
[0004]目前已有注射用胸腺法新上市销售，该制剂为冻干粉针剂，其在治疗慢性乙型肝炎的推荐量是每针1.6mg皮下注射每周二次，两剂量大约相隔3-4日，治疗应连续6个月(52针)期间不可中断。这样的给药方式病人的顺应性很差，因此开发出能够每月给药一次的缓释微球制剂可以极大的提尚病人的顺应性，提尚该疾病的治愈率。
[0005]当前胸腺法新缓释微球制剂的制备方法的文献与专利越来越多，主要有复乳法(W/0/W)、乳化溶剂扩散法、熔融挤出法等，其中复乳法是一种制备聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)缓释微球的典型方法。中国人民解放军第二军医大学的钟延强等发表的文章和专利(CN200610118413.5)中采用了复乳法(W/0/W)制备了胸腺法新缓释微球。专利申请号为200310119386.X公开了一种利用PLGA提取、合成胸腺肽微囊缓释针的方法。何熠等，胸腺肽聚乳酸微球的制备和释药性能研究，中国医药工业杂志，2006，37(3)，公开了用乳化溶剂挥发制备胸腺肽聚乳酸微球，其中以PLGA为载体，以乳化挥发法制备微球。邹良等，胸腺肽明胶微球的制备和体外释药的特征，中国医院药学杂志2004，24(9)，公开了胸腺肽的明胶微球。用乳化交联法制备的胸腺肽微球的研究，以药物A型明胶为囊材。张海松、陈阳述，胡军高，等，口服胸腺微球的研究，中国药房，1999，10(2): 58，等。以上传统的方法容易存在聚集、融合，分离及纯化产品困难，大部分时间和成本用于除去残留溶剂和多余药物，不适宜工业化生产，而喷雾干燥法、熔融法、盐析法等操作简单、重现性好，但制备过程比较激烈，所使用的温度较高或PH值变化较大，对药物的稳定性有较高的要求，不适合多肽、蛋白类药物或其他热敏性物质，此外，以上方法制备的胸腺法新缓释微球表面无孔，内部中空或互相不管通的空洞，使得微球载药量低，对给药不利。因此，当前亟需一款可以解决上述缺点的胸腺法新实心多孔缓释微球及其制备方法。

【发明内容】

[0006]本发明的目的在于提供一种胸腺法新缓释微球及其制备方法，所述方法是不需要分离纯化、避免了第二次乳液及高温操作的高压静电微胶囊成型法，该法制备的胸腺法新缓释微球为大小均匀、药物含量高的实心多孔微球，能有效延长药物在体内作用时间，降低了胸腺法新的给药频率。
[0007]目前国内还没有采用高压静电微胶囊成型法制备出胸腺法新-聚乳酸长效缓释微球制剂的单位或个人，且本发明制备的胸腺法新缓释微球是国内首次制备的表面开孔，内外孔洞相互贯通的胸腺法新-聚乳酸多孔缓释微球。L-聚乳酸是具有优良的生物相容性和生物降解性的聚合物，是经CFDA批准可用作药物载体，在体内代谢的最终产物为0)2和出0，中间产物乳酸也是体内正常糖代谢的产物，不会在重要器官聚集，因此聚乳酸微球作为药物载体得到了广泛的研究和应用。
[0008]本发明采用如下技术方案:
[0009]—种采用高压静电微胶囊成型法制备胸腺法新缓释微球技术，具体如下:
[0010]I) —定量的L-聚乳酸(PLLA)溶解在有机溶剂中，得到聚乳酸共聚物浓度为(I %-40% )(W/V，g/ml)的油相，其中有机溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯中的一种或其任意组合物；稳定剂为包含但不仅限于普朗罗尼F_127(Pluronic F127)，其质量分数为0.01%_1.2%。[0011 ] 2)将胸腺法新、保护剂溶、致孔剂溶于水，得胸腺法新为I %-60% (W/V)的内水相。
[0012]3)将上述油相与内水相混合，用细胞破碎仪超声乳化一定时间，乳化时间一般为(0.5-2 )min (功率200W、超声I s，间隔I s)形成均匀、稳定的W/0乳液。
[0013]4)将新鲜配备的质量分数为1.5%_30%的海藻酸钠或壳聚糖水溶液作为水相(W)加入上述乳液中，用细胞破碎仪超声乳化一定时间，乳化时间一般为(0.5-2)min(功率200W、超声I s，间隔I s)形成均匀、稳定的W/0/W乳液。
[0014]5)将制得的W/0/W乳液立即装入注射器中，通过高压微胶囊成型装置和注射栗，注射到新配制的5%-10%的氯化钙水溶液中，因海藻酸钠与氯化钙相遇反应生成海藻酸钙而形成胸腺法新缓释微球。
[0015]进一步，步骤2)中所述的保护剂主要为:人血清白蛋白、明胶、海藻糖、甘露糖或甘露醇等中的一种或几种混合物，其中保护剂的质量分数一般在0.0l%-5.0%,致孔剂包含但不仅限于碳酸氢铵，质量百分含量为:0.01 % -1.0 %。
[0016]进一步，步骤5)中高压微胶囊成型装置的工艺参数为:电压25KV;推进速度:(81-100)111111/11、236针头，接收距离(41-60)1111]1。磁力搅拌接收后的溶液60-80111；[11，用漏斗过滤掉溶液中的白色絮状物，7000rpm离心5min，即可收集胸腺法新-聚乳酸实心微球，冷冻干燥以除去H20、二氯甲烷、NH3及C02，可得到干燥的胸腺法新实心多孔缓释微球。
[0017]本发明所制备的胸腺法新多孔缓释微球制剂可以缓释30-40天。
【附图说明】
[0018]图1是本发明实施例1制备的胸腺法新缓释微球的扫描电镜图；
[0019]图2是本发明实施例2制备的胸腺法新缓释微球的扫描电镜图；
[0020]图3是本发明实施例3制备的胸腺法新缓释微球的扫描电镜图；
[0021]图4是本发明实施例1制备的胸腺法新缓释微球制剂的体外累积释放曲线；
[0022]图5是本发明实施例2制备的胸腺法新缓释微球制剂的体外累积释放曲线；
[0023]图6是本发明实施例3制备的胸腺法新缓释微球制剂的体外累积释放曲线；
[0024]图7是本发明实施例1、2、3制备的胸腺法新缓释微球制剂的体外累积释放曲线对比图。
【具体实施方式】
[0025]实施例1
[0026]200mg的L-聚乳酸(PLLA)溶解在5ml的二氯甲烷中，得到聚乳酸共聚物的油相，并加入3mg的稳定剂普朗罗尼F-127。将80mg胸腺法新、15mg的明胶、0.5ml的碳酸氢钱溶于600ml的注射用水中，将油相加入到水相中，采用细胞破碎仪超声乳化1.5min(功率200W、超声ls，间隔Is)形成均匀、稳定的W/0乳液。将上述溶液加入到新配制的100ml质量分数为2%的海藻酸钠水溶液，并用细胞破碎仪超声乳化1.5min，超声乳化条件同上，形成均匀、稳定的W/0/W乳液，将制得的W/0/W乳液立即装入注射器中，通过高压微囊成型装置，注射到500ml配置好的质量分数为10%的氯化钙溶液中，磁力搅拌乳液1.5小时，用漏斗过滤掉白色絮状物，7000rpm离心5min，收集胸腺法新-PLLA微球。冷冻干燥即得到胸腺法新多孔缓释微球，微球粒径小于ΙΟΟμπι，载药量为5.2%,胸腺法新多孔缓释微球扫描电镜如图1。
[0027]实施例2
[0028]300mg的L-聚乳酸(PLLA)溶解在1ml的乙酸乙酯中，得到聚乳酸共聚物的油相，并加入3.5mg的稳定剂普朗罗尼F-127。将150mg胸腺法新、20mg的海藻糖、4.0ml的碳酸氢铵溶于100ml的注射用水中，将油相加入到水相中，采用细胞破碎仪超声乳化1.5min(功率200W、超声I s，间隔Is)形成均匀、稳定的W/0乳液。将上述溶液加入到1500ml新配制的质量分数为5%的海藻酸钠水溶液，并用细胞破碎仪超声乳化1.5min，超声乳化条件同上，形成均匀、稳定的W/0/W乳液，将制得的W/0/W乳液立即装入注射器中，通过高压微囊成型装置，注射到100ml配置好的质量分数为8%的氯化钙溶液中，磁力搅拌乳液1.5小时，用漏斗过滤掉白色絮状物，7000rpm离心5min，收集胸腺法新-PLLA微球。冷冻干燥即得到胸腺法新多孔缓释微球，微球粒径小于ΙΟΟμπι，载药量为6.0%，胸腺法新多孔缓释微球扫描电镜如图2。
[0029]实施例3
[0030]400mg的L-聚乳酸(PLLA)溶解在1ml的二氯甲烷中，得到聚乳酸共聚物的油相，并加入4.8mg的稳定剂普朗罗尼F-127。将10mg胸腺法新、1mg的海藻糖、1.0ml的碳酸氢铵溶于800ml的注射用水中，将油相加入到水相中，采用细胞破碎仪超声乳化1.5min(功率200W、超声ls，间隔Is)形成均匀、稳定的W/0乳液。将上述溶液加入到1200ml新配制的质量分数为5%的海藻酸钠水溶液，并用细胞破碎仪超声乳化1.5min，乳化条件同上，形成均匀、稳定的W/0/W乳液，将制得的W/0/W乳液立即装入注射器中，通过高压微囊成型装置，注射到1200ml配置好的质量分数为6%的氯化钙溶液中，磁力搅拌乳液1.5小时，用漏斗过滤掉白色絮状物，7000rpm离心5min，收集胸腺法新-PLLA微球。冷冻干燥即得到胸腺法新多孔缓释微球，微球粒径小于ΙΟΟμπι，载药量为5.8%,胸腺法新多孔缓释微球扫描电镜如图3。
[0031 ] 实施例4
[0032]胸腺法新缓释微球体外释放测定
[0033]将上述实施例制备的胸腺法新缓释微球制剂进行体外释放测定，测定方法为:
[0034]精密称取干燥的含药微球0.1OOg置于1ml具塞试管中，以pH为7.4的磷酸盐缓冲液(含0.02%叠氮化钠作为抑菌剂，0.05%的吐温80为润湿剂HOml为释放介质，置于恒温水域摇床中，在震荡速度10rpm、温度37 °C ± 0.5 °(:条件下进行微球的体外释放度测定。分别在O小时、3小时、I天、3天、5天、7天、9天、14天、18天、21天、24天、28天、30天、40天各取
0.5ml释放介质用于高效液相色谱法测定胸腺法新的含量，并补充新鲜的释放介质。图4、5、
6、7分别为实施例4、5、6所制备的胸腺法新缓释微球制剂的体外累计释放曲线及对比曲线。由图4、5、6、7可以看出，本发明所制备的胸腺法新缓释微球制剂具有良好的释放效果，7天内均小于20%，其释放周期为30-40天。
[0035]以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，所作出了任何修改、等同替换、改进等，都应视为属于本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种胸腺法新缓释微球制剂，其特征在于:它是由微球重量的0.1%-30%的胸腺法新和微球重量的50%-99.9%的分子量为5000-200000道尔顿的可生物降解且具生物相容性的高分子材料，以及占微球重量0%_20%的药学上可接受的其他辅料制备而成的制剂，所述的缓释微球平均粒径为50-1 ΟΟμπι。2.根据权利要求1所述的一种胸腺法新缓释微球制剂，其特征在于，包含质量百分数为0.1%-5.0%的保护剂，该保护剂为人血清白蛋白、明胶、海藻酸糖或甘露醇中的一种或其中任意组合物。3.根据权利要求1所述的一种胸腺法新缓释微球制剂，其特征在于，所述的可降解具有生物相容性的高分子材料，选自聚乙交酯-丙交酯、明胶、L-聚乳酸、聚乳酸-乙醇酸、聚乙醇酸、聚乙烯醇、聚乙二醇、羟基乙酸、聚乳酸-聚乙二醇、聚羟基丁酸酯-羟基戊酸共聚物中的一种或两种及以上任意混合物。4.根据权利要求3所述的一种胸腺法新缓释微球制剂，其特征在于，所述的可降解具有生物相容性的高分子材料，优选L-聚乳酸、聚乙交酯-丙交酯、聚乳酸-聚乙二醇中的一种，以L-聚乳酸为最佳。5.根据权利要求1所述的一种胸腺法新缓释微球制剂，其特征在于，所述的可降解具有生物相容性的高分子材料，分子量范围均在5000-200000道尔顿。6.根据权利要求1所述的一种胸腺法新缓释微球制剂，其特征在于，所述的胸腺法新的缓释周期为30-40天。7.—种如权利要求1至6任意一项所述的一种胸腺法新缓释微球制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: I)将L-聚乳酸溶解于有机溶剂，并加入一定量的稳定剂，得到聚乳酸浓度为(1%-40%)(W/V，g/ml)的油相，其中有机溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯中的一种或其任意组合物;稳定剂为包含但不仅限于普朗罗尼F-127(Pluronic F127)，其质量分数为0.01%_1.2%; 2 )将胸腺法新、保护剂溶、致孔剂溶于水，得胸腺法新为1%_60%( W/V)的内水相，其中保护剂为人血清白蛋白、明胶、海藻酸糖或甘露醇中的一种或其中任意组合物，质量百分数为0.01%-5.0%;致孔剂包含但不仅限于碳酸氢铵，质量百分含量为:0.01%-1.0%； 3)将上述油相与内水相混合，用细胞破碎仪超声乳化一定时间，超声乳化时间一般为(0.5-2 )min (功率200W、超声I s，间隔I s )形成均匀、稳定的W/0乳液； 4)将新配制的质量分数为1.5%-30%的海藻酸钠或壳聚糖水溶液作为水相(W)加入上述乳液中，用细胞破碎仪超声乳化一定时间，乳化时间为(0.5-2)min(功率200W、超声Is，间隔I s )形成均匀、稳定的W/0/W乳液； 5)将上述步骤4)中制得的W/0/W乳液立即装入注射器中，通过高压微胶囊成型装置，注射到新配制的5%-10%的氯化钙水溶液中，因海藻酸钠与氯化钙相遇反应生成海藻酸钙而形成微球； 6)高压微胶囊成型装置注射液与接收液接触混合发生反应，磁力搅拌50-80min，用漏斗过滤掉溶液中的白色絮状物，7000rpm离心5min，即可收集胸腺法新-聚乳酸微球，冷冻干燥以除去H20、二氯甲烷、NH3及C02，可得到干燥的胸腺法新多孔缓释微球。8.根据权利要求7所述的一种胸腺法新缓释微球制剂的制备方法，高压微胶囊成型装置的工艺参数为:电压25KV;推进速度:(81-100)111111/11、236针头，接收距离(41-60)111111。9.根据权利要求7所述的一种胸腺法新缓释微球制剂的制备方法的步骤6)中，磁力搅拌时间优选为(61_70)min，以65min为最佳。10.权利要求1-9任意一项所述制备方法制备的胸腺法新缓释微球制剂。
【文档编号】A61K38/22GK105935353SQ201610387160
【公开日】2016年9月14日
【申请日】2016年6月2日
【发明人】王蕾
【申请人】烟台海安药物研发有限公司