抗pedf单克隆抗体在糖尿病男性勃起功能障碍疾病中的应用
【专利摘要】本发明属于生物技术药物应用技术领域，公开了抗PEDF单克隆抗体在糖尿病男性勃起功能障碍疾病的应用；通过研究发现抗PEDF单克隆抗体能够改善糖尿病男性海绵体内皮功能和减少内皮凋亡，增加海绵体密度，增加海绵体内NO的释放，改善糖尿病勃起功能，提供了抗PEDF单克隆抗体在制备治疗男性勃起功能障碍的药物中的应用，该抗PEDF单克隆抗体可用于治疗由糖尿病或/和代谢综合征引起的性功能障碍等疾病。
【专利说明】
抗PEDF单克隆抗体在糖尿病男性勃起功能障碍疾病中的应用
技术领域
[0001 ]本发明涉及生物技术药物应用技术领域，更具体地，涉及抗PEDF单克隆抗体治疗糖尿病男性勃起功能障碍疾病的应用。
【背景技术】
[0002]糖尿病男性勃起功能障碍(diabetic erectile dysfunct1n，DED)是糖尿病的常见并发症，也是男性勃起功能障碍的常见病因。有研究表明在糖尿病男性病人中有多50%的病人存在勃起功能障碍，严重影响病人生活质量。海绵窦内皮细胞分泌的NO是阴茎正常勃起最重要的神经介质，其由血管内皮细胞产生后，通过弥散方式进入血管平滑肌细胞(SMC)，激活鸟苷酸环化酶，cGMP含量增加，激活SMC细胞膜上K+、Ca2+通道使SMC舒张，阴茎动脉血流增加，大量血流注人海绵窦，牵拉白膜压迫静脉回流以达到勃起状态。糖尿病男性勃起功能障碍是由于阴茎海绵体内皮损伤引起的NO释放减少、NO利用率降低引起的。导致内皮损伤的因素众多，糖尿病、高血压、高胆固醇血症等多种疾病均可以引起内皮损伤，内皮损伤后可出现内皮功能障碍、血管收缩性改变、以及血管重构。因此，保护海绵体内皮功能是治疗糖尿病男性勃起功能障碍的重要靶点。
[0003]研究表明糖尿病病人的内皮损伤是引起勃起功能障碍(ErectiIeDysfunct1nED)的重要病理基础之一。高血糖是糖尿病性心血管病发展的一个独立危险因子，预防糖尿病并发症的关键是要控制血糖，严格控制血糖至接近正常水平，可以防止和延缓糖尿病血管并发症的发生和进展，提示高血糖可能导致血管内皮损伤。高浓度葡萄糖以剂量依赖性和时间依赖性方式诱导微血管内皮细胞发生凋亡和坏死，目前有关高糖调控的细胞因子研究主要局限在细胞生长因子，研究发现神经生长因子(nerve growth factor，NGF)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)具有保护高糖导致的内皮细胞凋亡作用。血管抑素angi o s tat in、内皮抑素endostat in、色素上皮衍生因子(pigmentepithelium-derived factor，PEDF)等抑制因子具有促进内皮细胞凋亡的作用。
[0004]色素上皮细胞衍生因子(pigmentepithelium-derived factor，PEDF)是内源性的强效血管增生抑制因子，PEDF抑制血管新生的基本细胞学基础是诱导血管内皮细胞凋亡。最近研究报道PEDF在I型、II型糖尿病和代谢综合症病人血中显著上调；糖尿病升高的PEDF可能诱导微血管内皮细胞凋亡，抑制糖尿病血管新生。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于克服现有技术中存在的不足，提供抗PEDF单克隆抗体在制备治疗糖尿病男性勃起功能障碍疾病的药物中的应用。
[0006]本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的:
抗PEDF单克隆抗体在制备治疗糖尿病男性勃起功能障碍的药物中的应用。
[0007]糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病，高血糖则是由于胰岛素分泌缺陷及其生物作用受损或者两者兼有引起，糖尿病时长期存在的高血糖导致各种组织的功能障碍，虽然能够治疗糖尿病的药物能够在一定程度上减轻糖尿病的并发症，但对于已存在的并发症，却不能治疗，本发明则在通过研究发现抗PEDF单克隆抗体能够改善糖尿病海绵体内皮功能和减少内皮凋亡，增加海绵体密度，增加海绵体内NO的释放，改善糖尿病勃起功能，因此，发明人发现了抗PEDF单克隆抗体的一个新的应用，即用于治疗男性勃起功能障碍。
[0008]优选地，所述抗PEDF单克隆抗体的制备方法是用PEDF蛋白免疫BALB/C小鼠，再用免疫鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，经筛选克隆获得分泌抗PEDF单克隆抗体的杂交瘤株，得到所需单克隆抗体。
[0009]优选地，所述糖尿病男性勃起功能障碍男性勃起功能障碍是由PEDF升高的糖尿病和/或代谢综合征引起的。
[0010]与现有技术相比，本发明具有以下有益效果:
本发明通过研究发现抗PEDF单克隆抗体能够改善糖尿病海绵体内皮功能和减少内皮凋亡，增加海绵体密度，增加海绵体内NO的释放，改善糖尿病男性勃起功能，提供了抗PEDF单克隆抗体在制备治疗男性勃起功能障碍的药物中的应用，该抗PEDF单克隆抗体可用于治疗由糖尿病或/和代谢综合征引起的性功能障碍等疾病。
【附图说明】
[0011 ] 图1为注射PEDF蛋白后外周血PEDF水平检测(ELISA)。
[0012]图2为注射PEDF蛋白及对照蛋白BSA后的勃起功能情况。
[0013]图3为注射PEDF蛋白及对照蛋白BSA后的勃起功能统计。
[0014]图4为糖尿病ED组及糖尿病ED注射IgG组和糖尿病ED注射PEDF抗体组勃起功能情况。
[0015]图5为糖尿病ED组及糖尿病ED注射IgG组和糖尿病ED注射PEDF抗体组勃起功能情况统计；图中control为正常对照组，DM+IgG为糖尿病ED注射IgG组，DM+PEDF-antibody为糖尿病ED注射PEDF抗体组。
[0016]图6为注射PEDF蛋白及对照蛋白BSA后海绵体组织内的内皮凋亡情况和海绵体内皮密度。
[0017]图7为PEDF蛋白及对照蛋白BSA后海绵体组织内的内皮凋亡情况和海绵体内皮密度统计。
[0018]图8为注射PEDF蛋白及对照蛋白BSA后海绵体组织内的内皮eNOS磷酸化水平。
[0019]图9为注射PEDF蛋白及对照蛋白BSA后海绵体组织内的内皮eNOS磷酸化水平统计。
[0020]图10糖尿病ED组及糖尿病ED注射IgG组和糖尿病ED注射PEDF抗体组海绵体组织内皮凋亡情况和海绵体内皮密度。
[0021 ]图11糖尿病ED组及糖尿病ED注射IgG组和糖尿病ED注射PEDF抗体组海绵体组织内皮凋亡情况和海绵体内皮密度统计。
[0022]图12糖尿病ED组及糖尿病ED注射IgG组和糖尿病ED注射PEDF抗体组海绵体组织内皮eNOS磷酸化水平。
[0023]图13糖尿病ED组及糖尿病ED注射IgG组和糖尿病ED注射PEDF抗体组海绵体组织内皮eNOS磷酸化水平统计。
【具体实施方式】
[0024]以下结合实施例来进一步解释本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。以下实施例中的方法、设备、材料，如果未特别说明，均为本领域常规的方法、设备和材料。
[0025]本发明实施例中所用的抗PEDF单克隆抗体的制备方法参考申请号为201210245123.2 的专利。
[0026]实施例1 PEDF单克隆抗体的应用一、糖尿病动物模型的建立
取60只8周SD大鼠(中山大学动物中心提供)，分为正常组和糖尿病组，每组30只，糖尿病组腹腔注射链脲霉素(Strept0Z0t0cin，STZ)(剂量为50mg/kg)，后经空腹血糖、胰岛素耐量(insulin tolerance test，ITT)、葡萄糖耐量(glucose tolerance test，GTT)实验检测确定糖尿病模型建模成功。
[0027]二、糖尿病勃起功能障碍动物模型的建立
对I型糖尿病大鼠进行筛选，以正常大鼠作为对照:STZ注射8周后筛选，动物称重后分别放入试验铁笼中，将房间灯光调暗，保持室内安静。适应环境10分钟后，将APO按lOOyg/kg比例皮下注射于大鼠颈部皮肤松软处。观察30分钟，记录勃起次数。大鼠阴茎勃起的标准为:龟头露出充血，包皮后退，阴茎膨大增长为勃起。未见勃起者为糖尿病勃起功能障碍大
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[0028]三、抗PEDF单克隆抗体的治疗效果
将正常的SD大鼠随机分成为3组:对照组，BSA组和PEDF组。BSA组和PEDF组大鼠分别每天注射一次BSA和抗PEDF单克隆抗体(2.5 mg/kg)，三天后大鼠眼眶取血检测血中PEDF水平，结果显示和注射BSA相比，PEDF组的大鼠血中PEDF含量明显升高30%以上(见图1)。腹腔注射30天后，采用BL-420E+生物机能实验系统测定大鼠海绵体内压(Intracavernouspressure，ICP)、颈动脉压(arterial blood pressure，ABP)以及ICP/平均动脉压(meanarterial blood pressure，MAP)比值的计算，用于评价勃起功能。结果显示注射PEDF组的ICP/MAP比值明显比注射BSA组低，表明PEDF升高可以降低勃起功能(见图2?3 )。
[0029]同样将糖尿病勃起功能障碍(ED)大鼠随机分成2组，糖尿病ED注射IgG组和糖尿病ED注射PEDF抗体组。糖尿病ED老鼠，分别每天注射一次IgG和抗PEDF单克隆抗体(0.34mg/kg)，连续腹腔注射15天后采用BL-420E+生物机能实验系统测定大鼠海绵体内压(ICP)、颈动脉压(arterial blood pressure，ABP)以及ICP/平均动脉压(mean arterial bloodpressure，MAP)比值的计算，用于评价勃起功能，结果表明抗PEDF单克隆抗体可以使糖尿病勃起功能障碍(ED )大鼠ICP/MAP比值明显比I gG组高，为抗PEDF单克隆抗体用于治疗PEDF升高的糖尿病及代谢综合症等引起的勃起功能障碍药物提供了依据(见图4?5)。
[0030]海绵窦内皮细胞分泌的NO是阴茎正常勃起最重要的神经介质，其由血管内皮细胞产生后，通过弥散方式进入血管平滑肌细胞，阴茎动脉血流增加，大量血流注入海绵窦，牵拉白膜压迫静脉回流以达到勃起状态。取上面动物实验大鼠的海绵体组织进行固定，冰冻切片。通过免疫荧光化学方法检测海绵体组织内的内皮密度、内皮凋亡情况和eNOS磷酸化水平，结果显示和BSA组相比PEDF蛋白注射组海绵体组织内的内皮凋亡增加、内皮密度(见图6?7)和eNOS磷酸化水平降低(见图8?9)。和糖尿病勃起功能障碍(ED)大鼠注射IgG组相比，抗PEDF单克隆抗体注射组海绵体组织内的内皮凋亡减少、内皮密度(见图10?11)和eNOS磷酸化水平提高(见图12?13 )。为PEDF单克隆抗体用于治疗PEDF升高的糖尿病及代谢综合症等引起的勃起功能障碍药物提供了依据。
【主权项】
1.抗PEDF单克隆抗体在制备治疗糖尿病男性勃起功能障碍的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗PEDF单克隆抗体的制备方法是用PEDF蛋白免疫BALB/C小鼠，再用免疫鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，经筛选克隆获得分泌抗PEDF单克隆抗体的杂交瘤株，得到所需单克隆抗体。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述糖尿病男性勃起功能障碍是由PEDF升高的糖尿病和/或代谢综合征引起的。
【文档编号】A61K39/395GK105935444SQ201610359837
【公开日】2016年9月14日
【申请日】2016年5月27日
【发明人】高国全, 杨霞, 周倜, 齐炜炜, 车迪
【申请人】中山大学