局部用组合物和使用所述组合物的方法

局部用组合物和使用所述组合物的方法
【专利摘要】本发明一般性涉及局部用组合物和使用所述组合物的方法。一种优选的局部用药物组合物包含与亲水组合物和疏水组合物混合的释放一氧化氮的活性药物成分，其中所述释放一氧化氮的活性药物成分包含具有二醇二氮烯官能团的释放一氧化氮的化合物。
【专利说明】局部用组合物和使用所述组合物的方法
[0001 ] 政府支持的声明 本发明在美国国防部颁发的合同号W81XWH-11-C-0029和国立卫生研究院授予的许可 号5R43AI096569下，在政府支持下进行。政府对本发明具有某些权利。 发明领域
[0002] 本发明一般性涉及局部用组合物和使用所述组合物的方法。
[0003] 背景 当局部递送时，水分敏感的活性药物成分(API)可代表挑战。虽然API可掺入到疏水局 部用组合物中，使得其具有合适的保存期限稳定性，如果水分为活化剂，该相同的稳定性可 降低递送药物的能力。
[0004] 通过提供局部用组合物和使用所述组合物的方法，本发明可解决本领域先前的缺 点。
[0005] 概述 本发明的第一方面包含一种局部用药物组合物，所述组合物包含与亲水组合物和疏水 组合物混合的释放一氧化氮的活性药物成分。
[0006] 本发明的第二方面包含一种组合物，该组合物包含:活性药物成分;疏水碱;两亲 化合物或乳化剂中的至少一种;缓冲剂;聚合物;多元醇;和水，其中将所述组合物缓冲至PH 为约3-约9。
[0007] 本发明的再一个方面包含一种包含自乳化混合物的用于局部给药的组合物。
[0008] 本发明的另一方面包含一种试剂盒，所述试剂盒包含:包含亲水组合物的第一组 合物;和包含活性药物成分的第二组合物。
[0009]本发明的一个另外的方面包含一种提高从含有二醇二氮烯鐘 (diazeniumdiolate)改性的大分子的疏水组合物释放一氧化氮的方法，所述方法包括:使 疏水组合物与PH为约4-约8的亲水组合物混合，以形成混合物;和将所述混合物施用于受试 者的皮肤。
[0010] 本发明的再一个方面包含一种提供局部抗菌组合物的方法，所述方法包括:使疏 水组合物与PH为约4-约8的亲水组合物混合，以形成混合物;和将所述混合物施用于受试者 的皮肤。
[0011] 本发明的另一方面包含一种提高伤口治愈率的方法，所述方法包括:局部施用pH 为约5-约8的混合物。
[0012 ]现在将更详细地描述本发明的前述和其它方面，包括本文描述的其它实施方案。
[0013] 附图简述 图1显示从含有Nitricil? NVM软膏（1.8% w/w NO)的不同的制剂NO释放的图。
[0014] 图2显示在治疗施用后在第4天和第7天合并的MR S A金黃色葱蔡球磨 at/_ret/s)ATCC BAA 1686细菌计数的图。
[0015]图3显示在治疗施用后在第4天和第7天合并的MRSA金黄色葱蔡球磨·ATCC BAA 1686细菌计数的图。
[0016]图4显示在治疗施用后在第4天和第7天游氏不动/f磨细菌计数的 图。
[0017]图5显示在治疗施用后在第4天和第7天金黄色葱蘇球磨6S. at/ret/d细菌计数的 图。
[0018] 图6显示在治疗施用后在第4天和第7天冷色娱丝摩母忆aMiCa/3d细菌计数的 图。
[0019] 图7显示对于三种混合物中的每一种经时累积一氧化氮(NO)释放的图。
[0020] 图8显示对于三种混合物中的每一种经时实时NO释放的图。
[0021]图9显示对于两种软膏中的每一种经时累积一氧化氮(NO)释放的图。
[0022] 图10显示对于两种软膏中的每一种经时实时NO释放的图。
[0023]图11说明用包围油滴的水包封API的油滴的实施例示意图。
[0024] 详细描述 现在下文将更充分地描述本发明。然而，本发明可以不同的形式体现并且不应看作是 局限于本文描述的实施方案。相反，提供这些实施方案使得本公开彻底和完整，并且为本领 域技术人员充分传达本发明的范围。
[0025] 在本文中，用于本发明描述的术语仅用于描述具体实施方案的目的，并且不旨在 限制本发明。除非上下文明确说明另外的情况，否则在本发明和所附权利要求书的描述中 使用的单数形式"一个"、"一种"和"该"同样将包括复数形式。
[0026] 除非另外限定，否则本文使用的所有术语(包括技术和科学术语)具有本发明所属 领域普通技术人员通常理解的相同的含义。进一步应理解的是，术语(例如在常用的字典中 限定的那些)应解释为具有与它们在本申请和相关技术的上下文中的含义一致的含义，并 且不应解释为理想化的或过度形式化的含义，除非本文明确这样定义。在本文中本发明的 描述中使用的术语仅为了描述具体实施方案的目的，并且不旨在限制本发明。本文提及的 所有出版物、专利申请、专利和其它参考文献通过引用而全文结合到本文中。在术语冲突的 情况下，以本说明书为准。
[0027] 另外本文使用的〃和/或〃指并且包括一种或多种关联列举的项目的任何和所有可 能的组合，以及当以备选(〃或〃)解释时缺乏这些组合。
[0028] 除非上下文另外指示，否则明确打算本文描述的本发明的各种特征可以任何组合 使用。此外，在本发明的一些实施方案中，本发明还考虑可排除或省略本文描述的任何特征 或特征的组合。为了说明，如果说明书陈述复合物包含组分A、B和C，明确打算可省略和放弃 A、B或C中的任一个或它们的组合。
[0029] 本文使用的过渡短语〃基本上由……组成〃（及语法变体)应解释为包括记载的材 料或步骤〃以及在材料上不影响要求保护的本发明的基本特性和新特性的那些〃。参见，? re "erz，537 F.2d 549,55卜52，190 U.S.P.Q. 461，463 (CCPA 1976)(原文中强调）；还 参见MPEP § 2111.03。因此，本文使用的术语〃基本上由……组成〃不应解释为与〃包含〃等 同。
[0030] 当提及可测量的值例如量或浓度等时，本文使用的术语"约"意味着包括指定值的 ± 10%、± 5%、± 1%、± 0.5%或甚至± 0.1%的变量以及指定值。例如，当X为可测量的值 时，〃约x〃意味着包括X以及X的± 1〇%、± 5%、± 1%、± 0.5%或甚至± 0.1%的变量。对于 可测量的值，本文提供的范围可包括其中的任何其它范围和/或单个值。
[0031] 根据本发明的一些实施方案，本文提供了局部用组合物。在一些实施方案中，本发 明的局部用组合物包含混合物。本文使用的〃混合物〃指至少两种不同组合物的组合。在一 些实施方案中，所述至少两种不同的组合物可混溶。在具体实施方案中，术语混合物指基本 上保持彼此独立直至邻近使用或施用的至少两种不同的组合物。在某些实施方案中，术语 混合物指基本上保持彼此独立直至分配的至少两种不同的组合物，例如药剂师分配的产 品。在一些实施方案中，存在于混合物中的一种或多种组合物可与存在于混合物中的一种 或多种其它组合物基本上保持独立。术语混合物不旨在指在制备组合物或产品时产生的组 合物，例如通过组合成分以产生组合物。通过将两种或更多种不同的组合物混合、共混、接 触、施用于相同的面积或区域、乳化等，可实现两种或更多种不同组合物（例如2种、3种、4 种、5种、6种、7种或更多种组合物）的组合，以形成混合物。可进行两种或更多种不同组合物 的组合，以引起化学反应。一种组合物可在一种或多种组分的量或浓度、一种或多种组分的 类型(例如，化学组成)和/或存在和/或不存在一种或多种组分方面与另一种组合物不同。
[0032] 本发明的混合物可包含至少一种调节存在于混合物中的另一组合物和/或组分的 性质的组合物。调节的性质可与在不存在混合物时组合物和/或组分的性质相比较。例如， 混合物可包含至少一种调节另一组合物（即，第二组合物）的PH和/或在另一组合物（即，第 二组合物）中的活性药物成分(API)的释放的组合物（即，第一组合物）。本文使用的释放API 指释放API本身和/或由API释放一种或多种活性剂(例如，当前药为API时，可释放药物的活 性形式）。例如，在其中API为释放一氧化氮的API的实施方案中，提及API释放可指从API释 放一氧化氮。混合物的pH可与当不与第一组合物混合时第二组合物的pH相比较。从混合物 释放API可与在不存在混合物时释放API (即，释放单个API组分和/或当第二组合物不与第 一组合物混合时从第二组合物释放API)相比较。
[0033] 本文使用的〃调节〃、〃调节〃、〃调节〃及其语法变体指与在不存在混合物下的性质 相比，本发明混合物的性质(例如，PH和/或释放API)提高或降低。本文使用的术语"提高"、〃 提高"、"提高的"、"提高"和类似的术语指示与在不存在混合物下的性质相比，性质（例如， pH 和 / 或释放 API)升高至少约 5%，10%，25%，50%，75%，100%，150%，200%，300%，400%，500% 或更 多。本文使用的术语"降低"、"降低"、"降低的"、"降低"和类似的术语指与在不存在混合物 下的性质相比，性质（例如，pH和/或释放API)降低至少约5%，10%，25%，35%，50%，75%，80%， 85%，90%，95%，97% 或更多。
[0034] 在一些实施方案中，混合物可包含至少两种组合物（即，第一组合物和第二组合 物）。第一组合物可调节第二组合物的pH和/或存在于第二组合物中的API的释放，或反之亦 然。本文描述包含两种组合物的混合物用于说明的目的，但是应理解的是混合物可包含多 于两种不同的组合物，例如但不限于2种、3种、4种、5种、6种、7种或更多种组合物。存在于混 合物中的一种或多种组合物可调节混合物中的另一组合物的性质。调节的性质可为相同的 性质或不同的性质。在一些实施方案中，混合物中的两种或更多种不同的组合物可共同调 节混合物中的另一组合物的性质。
[0035] 本发明的混合物可通过使第一组合物中的至少一种组分直接和/或间接暴露于第 二组合物中的至少一种组分而形成。例如，在局部施用于受试者之前、期间和/或之后，通过 混合和/或组合第一组合物和第二组合物，可形成混合物。混合物可包含单一相，即使其可 由至少两种不同的组合物制备。通过在受试者上施用一层或多层第二组合物，随后在受试 者上施用一层或多层第一组合物，可发生直接暴露第一组合物和第二组合物以形成混合物 的其它实例，或反之亦然。通过在受试者上施用第二组合物，随后通过基材(例如但不限于 布、绷带、纱布等)在受试者上施用第一组合物，可发生间接暴露，或反之亦然，以形成混合 物。
[0036] 在某些实施方案中，混合物可自乳化。在具体实施方案中，自乳化混合物包含包含 水的第一组合物和包含油、两亲试剂和/或乳化剂的第二组合物。实例乳化剂包括但不限于 磷脂酰胆碱；卵磷脂;表面活性剂，例如聚乙氧基化的化合物，包括吐温80、聚山梨醇酯20、 21、40、60、61、65、81、85、120和脱水山梨糖醇酯的其它聚氧乙烯加合物、脂肪酸、脂肪醇、羊 毛脂、羊毛脂醇、蓖麻油(天然或氢化的)或烷基苯;和它们的任何组合。
[0037] 在将混合物的至少两种组合物合并后，自乳化混合物可形成自发的乳液(例如，施 用最小的或不施用机械能）。在一些实施方案中，自乳化混合物可能不要求和/或需要热量 以形成自发的乳液。在一些实施方案中，自乳化混合物可经由化学反应在最少或没有机械 力和/或外力下自发乳化，以形成自发的乳液。例如，通过受试者和/或第三方，通过用他们 的手将混合物的至少两种组合物混合，可形成自乳化混合物。在一些实施方案中，最少的机 械力可提供足够的剪切来乳化混合物的至少两种组合物。在一些实施方案中，用于乳化混 合物的至少两种组合物的最少的机械力的剪切速率可在约I S^1-约5，000 S^1，例如像约10 s-L约200 s-S 约100 s-L约1000 s-S 约500 s-1-约3000 s-1 或约10 s-L约2500 s-1 范围。
[0038] 在形成乳液后，自乳化混合物可含有和/或为单一相。在一些实施方案中，自乳化 混合物可为粗乳液、微乳液或纳米乳液。在一些实施方案中，自乳化混合物可为不分离的或 连续的乳液和/或均质组合物。在一些实施方案中，自乳化混合物可在亲水组分中包封疏水 组分。如在图11中说明的，在一些实施方案中，自乳化混合物可含有油滴或疏水相，具有包 围液滴的水或亲水相，并且液滴可包封API。
[0039] 在一些实施方案中，在将疏水组合物和亲水组合物合并后，可形成自乳化混合物。 在一些实施方案中，亲水组合物可为水凝胶。在一些实施方案中，疏水组合物可决定组合物 是否为自乳化组合物。在一些实施方案中，疏水组合物可能不含具有亲水性质的组分，例如 像强亲水聚乙二醇（例如，PEG 400)。在一些实施方案中，疏水组合物不含亲水-亲脂平衡 (HLB)值大于15的组分。
[0040] 在一些实施方案中，混合物为连续的乳液（即，不分离的乳液）。在一些实施方案 中，混合物可保持为连续的乳液和/或可共同作为单一相保持至少1、2、3、4、5、6或更多天， 或1、2、3、4、5、6或更多周，或1、2、3、4、5、6或更多个月。在一些实施方案中，混合物可为连续 的乳液达足以将组合物施用于受试者的时间段。两份或更多份组合物的组合在1天内分离 成为两相或更多相的组合物不认为是自乳化混合物和/或连续的乳液。
[0041] 在一些实施方案中，自乳化混合物的液滴尺寸(例如，直径)可大于100 μπι。在一些 实施方案中，自乳化混合物可形成或产生液滴尺寸可为约100 μπι或更少的乳液，例如但不 限于约90 μηι，70 μηι，50 μηι，30 μπι或更少，或其中的任何范围和/或单个值。在一些实施方 案中，自乳化混合物可形成或产生液滴尺寸可大于I pm的乳液。在一些实施方案中，自乳化 混合物可形成或产生液滴尺寸可为约400 nm或更少的纳米乳液，例如但不限于约300 nm， 200 nm，100 nm，50 nm或更少，或其中的任何范围和/或单个值。在一些实施方案中，自乳化 混合物可包含基本上均匀尺寸的液滴。
[0042]混合物中的第一组合物可设置为调节存在于第二组合物中的APK例如但不限于 释放NO的API)的释放。在一些实施方案中，当形成包含第一组合物和第二组合物的混合物 时，存在于第一组合物中的水可接触第二组合物，以调节存在于第二组合物中的API (例如 但不限于释放NO的API)的释放。或者或此外，在一些实施方案中，混合物中的第一组合物可 调节混合物中的第二组合物的PH，从而调节存在于第二组合物中的API(例如但不限于释放 NO的API)的释放。在一些实施方案中，混合物中的第一组合物可设置为将水供应至混合物 中的第二组合物和/或设置为调节混合物中的第二组合物的pH。在一些实施方案中，本发明 的混合物可提高API (例如，释放NO的API)的溶解度和/或可提高API或API的活性组分(例 如，NO)的生物利用度。
[0043]本发明的发明人意外地发现可制备提供足够的NO释放的包含水（即，亲水相)和油 (即，疏水相）的乳液的混合物。本发明人进一步意外地发现，在将疏水组合物和亲水组合物 合并后，可制备具有单一相的混合物，并且这样的组合物可提供足够的NO释放。本发明人也 意外地发现本文描述的自乳化混合物。
[0044] 对于存在于混合物中的API，本发明的混合物可提供特定的释放模式。通过比较经 过一定的时间段释放的API的量或浓度和/或经过一定的时间段从混合物释放API的速率， 可确定API释放模式。在一些实施方案中，选择存在于混合物中的至少两种不同的组合物以 提供特定的API释放模式。对于特定的损伤、疾病、障碍或治疗适应症，可能需要API的释放 模式。在一些实施方案中，混合物可设置为提供存在于混合物中的API的特定的释放模式。
[0045] 在一些实施方案中，可选择存在于混合物中的至少两种不同的组合物以提供pH小 于约pH 11的混合物，例如但不限于约11，10,9，8,7，6,5，4,3或更少。在一些实施方案中，可 选择存在于混合物中的至少两种不同的组合物以提供PH大于约pH 4的混合物，例如但不限 于约4,5,6,7,8,9，10，11或更多。在某些实施方案中，混合物?!1可在约?!14-约?!111之间， 例如但不限于约pH 4-约pH 9,约pH 7-约pH 9,约pH 4-约pH 8,pH 7-约pH 10或约pH 5-约 pH 7。在一些实施方案中，存在于混合物中的至少一种组合物可保持混合物的pH在特定的 pH范围。混合物的pH可经时变化，并且这可引起API从混合物的释放速率经时变化。对于其 中pH经时变化的混合物，可在合并后约30分钟内测量混合物的pH，在一些实施方案中，在合 并后约10分钟内，在一些实施方案中，在合并后2分钟内。在一些实施方案中，可在合并后约 5分钟，30分钟，1小时，和/或24小时测量混合物的pH。
[0046] 本发明的混合物可提供从混合物立即释放API和/或从混合物持续释放API。本文 使用的立即释放指在混合4小时内释放50%或更多的API，而持续释放指在混合4小时内释放 小于50%的API。在一些实施方案中，与在不存在混合物下组合物中的API的释放和/或效力 相比，通过保持混合物的pH在特定的pH范围，本发明的混合物可提高释放的API的量和/或 存在于混合物中的至少一种组合物中的API的效力。在某些实施方案中，混合物的pH保持低 于pH 9。
[0047] 经过一定的时间段，存在于混合物中的API可从混合物基本上连续释放。本文使用 的〃基本上连续〃及其语法变体指从混合物释放API所有或部分时间，使得平均释放API赋予 受试者总体有益效果。因此，可存在一个或多个其中不释放API的短的、间歇的和/或规律的 时间段，但是保持API对受试者的总体有益效果。在一些实施方案中，混合物可提供经过一 定的时间段基本上连续的API释放模式并且经过该时间段提供治疗有效量的API。在一些实 施方案中，释放的API的量和/或API释放速率经过一定的时间段可变化。在某些实施方案 中，对于API，混合物可包含两种或更多种(例如，2、3、4、5或更多种)释放速率。
[0048] 混合物可提供经过一定的时间段基本上恒定的API释放模式。本文使用的〃基本上 恒定的"指可测量的值，例如API的量或API释放速率经过一定的时间段平均变化小于约 20%，15%，10%，5%，1%或更少。在一些实施方案中，对于一定的时间段，API释放速率可基本上 恒定，并且经过另一连续的或非连续的时间段而变化，反之亦然。
[0049] 在一些实施方案中，混合物可提供具有快速释放部分和基本上恒定的释放部分的 API释放模式。快速释放部分可包含从给药（即，t=0)到在给药后2小时或其中的任何范围 (例如但不限于在给药后0-1小时或0-30分钟)释放的API的量。基本上恒定的释放部分可包 含从紧接着快速释放部分之后到释放最终量的API的释放的API的量。API可从本发明的混 合物释放任何时间段。在一些实施方案中，API可从混合物释放至少约4小时，6小时，12小 时，24小时，2天，3天，4天，5天，6天，7天或更多或其中的任何范围和/或单个值。从混合物释 放的API可以对受试者总体提供有益效果和/或经过一定的时间段提供治疗有效量的API的 量释放。
[0050] 在一些实施方案中，与基本上恒定的释放部分相比，在快速释放部分期间，可释放 更大量或浓度的API，或反之亦然。在一些实施方案中，比起在基本上恒定的释放部分期间 释放的API的量，在快速释放部分期间从混合物释放的API的量可为约10%，20%，30%，40%， 50%，60%，70%，80%，90%，100%，150%，200%，300%，400%，500%或更多，或其中的任何范围和/或 单个值。在其它实施方案中，比起在快速释放部分期间释放的API的量，在基本上恒定的释 放部分期间从混合物释放的API的量可为约10%，20%，30%，40%，50%，60%，70%，80%，90%， 100%，150%，200%，300%，400%，500%或更多，或其中的任何范围和/或单个值。
[0051] 在具体实施方案中，混合物中的第一组合物可调节混合物中的第二组合物的PH， 使得当形成混合物和/或施用于受试者的皮肤时，混合物的pH小于约9,在其它实施方案中， 小于约8.5，在再其它实施方案中，小于约7，在又其它实施方案中，在约5-约8之间。在一些 实施方案中，混合物中的第一组合物可设置为保持和/或稳定混合物的PH在期望的pH范围， 例如但不限于约3-约11，约3-约9，约4-约7，或约5-约8的pH范围。
[0052] 本发明的混合物可适用于局部给药。混合物可包含单一相，即使其可由两种或更 多种不同的组合物制备或形成。混合物可被缓冲。在一些实施方案中，混合物可包含疏水组 合物和亲水组合物。在某些实施方案中，疏水组合物和/或亲水组合物可为单一试剂或化合 物（即，组分）。在其它实施方案中，疏水组合物和/或亲水组合物可包含具有两种或更多种 试剂或化合物的组合物。在一些实施方案中，混合物可包含水凝胶和软膏。水凝胶和软膏可 形成任选被缓冲的具有单一相的混合物。在一些实施方案中，混合物包含水凝胶和软膏，并 且混合物可为乳膏形式。在一些实施方案中，混合物可为自乳化混合物并且可包含水凝胶 和软膏。
[0053]在某些实施方案中，本发明的混合物包含亲水组合物。亲水组合物包含至少一种 亲水组分。亲水组合物可为溶液、悬浮液、洗剂、凝胶、乳膏、水凝胶等。在一些实施方案中， 亲水组合物为水凝胶形式。本文使用的"水凝胶"指包含凝胶基质和水的亲水凝胶。水可以 亲水组合物的约50%-约99%重量的量或其中的任何范围和/或单个值存在于亲水组合物中， 例如但不限于亲水组合物的约70%-约99%，或约80%-约85%重量。
[0054]亲水组合物可包含用于保持和/或稳定本发明混合物的pH的手段。用于保持和/或 稳定混合物的PH的手段可设置为控制混合物的pH在期望的pH范围内。用于保持和/或稳定 混合物的PH的实例手段包括但不限于缓冲液。可用于亲水组合物的缓冲液的实例包括但不 限于乙酸/乙酸盐缓冲液;盐酸/柠檬酸盐缓冲液;ci tro-磷酸盐缓冲液;磷酸盐缓冲液;柠 檬酸/柠檬酸盐缓冲液;乳酸缓冲液;酒石酸缓冲液;苹果酸缓冲液;甘氨酸/HCl缓冲液;盐 水缓冲液，例如磷酸盐缓冲的盐水(PBS )、Tr i S-缓冲的盐水(TBS )、Tr i s-HCl、NaCl、吐温缓 冲的盐水(TNT)、磷酸盐缓冲的盐水、Triton X-100 O3BT)和它们的混合物;卡可酸盐缓冲 液;巴比妥缓冲液;tris缓冲液;和它们的任何组合。
[0055] 缓冲液可以约5 mmol-约2 mol或其中的任何范围和/或单个值的浓度存在于亲水 组合物中，例如但不限于约10 mmol-约I mol，约100 mmol-约750 mmol，或约200 mmol-约 500 mmol。在一些实施方案中， 缓冲液可以亲水组合物的约〇. 1%-约20%重量或其中的任何范围和/或单个值的量存在 于亲水组合物，例如但不限于亲水组合物的约0.1%-约10%，约1%-约15%，或约1%-约5%重量。
[0056] 在一些实施方案中，亲水组合物可包含磷酸盐缓冲液。实例磷酸盐缓冲液可包括 至少一种磷酸盐，例如但不限于磷酸钠(例如，磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸三钠和磷酸铝 钠）、磷酸钾(例如，磷酸二氢钾和磷酸氢二钾）、磷酸铷、磷酸铯和磷酸铵，和/或至少一种磷 酸，例如但不限于焦磷酸、三磷酸和正磷酸。亲水组合物的总磷酸盐浓度可为约5 mmol-约1 mol的磷酸盐或其中的任何范围和/或单个值，例如但不限于约10 mmol-约750 mmol，约150 mmol-约500 mmol，或约200 mmol-约400 mmol。在某些实施方案中，亲水组合物可具有以亲 水组合物的约1%-约20%重量的量存在的磷酸盐缓冲液，例如但不限于亲水组合物的约1%-约15%重量，约5%-约15%重量，约5%-约10%重量，或约4%-约8%重量。
[0057]在某些实施方案中，亲水组合物可包含缓冲剂。实例缓冲剂包括但不限于柠檬酸、 乙酸、乳酸、硼酸、琥珀酸、苹果酸、氢氧化钠、氢氧化钾，和它们的任何组合。缓冲剂可以亲 水组合物的约0.01%-约5%重量或其中的任何范围和/或单个值的量存在于本发明的亲水组 合物中，例如但不限于亲水组合物的约〇. 〇5%_约3%，约1 %-约4%，或约1.5%-约3.5%重量。 [0058]因此，在某些实施方案中，本发明的混合物可包含亲水组合物，例如但不限于任选 被缓冲的水凝胶。亲水组合物可为PH依赖性的。亲水组合物可设置为具有至少约4-约8或其 中的任何范围和/或单个值的缓冲能力，例如但不限于约4-约7,约5-约6,约5-约8,或约6-约8。亲水组合物可设置为保持和/或稳定混合物的pH在约0.5或更多pH单位内，例如像亲水 组合物的PH的约1、2或3个pH单位。当形成混合物和/或在混合物的施用部位(例如，受试者 的皮肤和/或伤口床)时，可保持和/或稳定混合物的pH。例如，当与另外的组合物形成包含 PH为约5的亲水组合物的混合物并且施用于受试者的皮肤时，亲水组合物可设置为保持和/ 或稳定混合物的pH在亲水组合物的pH的约0.5 pH单位内（即，亲水组合物可保持混合物的 pH在约4.5-5.5的pH范围）。在一些实施方案中，亲水组合物可设置为保持和/或稳定混合物 的pH在约pH 3-约pH 6,约pH 3-约pH 5,约pH 3-约pH 4,约pH 4-约pH 8,约pH 4-约pH 7， 约pH 4-约pH 6,约pH 5-约pH 7,约pH 5-约pH 6,约pH 6-约pH 7的pH范围，或其中的任何 其它范围。混合物可因此为施用部位(例如，伤口床)提供特定的pH，其可提高或降低在不存 在混合物下施用部位的pH。
[0059] 本发明的亲水组合物可具有任何合适的pH，例如约1或更多的pH (例如，约2，3，4， 5,6,7,8,9,10,11，12,13,或14)。在一些实施方案中，亲水组合物可设置为具有在约3-约8 或其中的任何范围和/或单个值范围的pH，例如约3-约4或约4-约6。在某些实施方案中，亲 水组合物可设置为具有约5的pH。在一些实施方案中，亲水组合物可被缓冲。
[0060] 亲水组合物可包含天然和/或合成的聚合物。实例聚合物包括但不限于多糖，例如 壳聚糖和甲壳质；带电荷的纤维素及其药学上可接受的盐;丙烯酸类例如聚丙烯酸类聚合 物，例如聚丙烯酸、聚丙烯酸酯聚合物、交联的聚丙烯酸酯聚合物、交联的聚丙烯酸、以商标 CARB0P0L?市售可得自Lubrizol of Wickliffe，0hio的聚丙烯酸聚合物，和它们的混合物； 和它们的任何组合。在一些实施方案中，亲水组合物包含带电荷的纤维素或其药学上可接 受的盐。实例带电荷的纤维素或其药学上可接受的盐包括但不限于离子纤维素、羧甲基纤 维素及其盐、羟乙基羧甲基纤维素、羟丙基羧甲基纤维素、磺基乙基纤维素、羟乙基磺基乙 基纤维素、羟丙基磺基乙基纤维素、羟乙基纤维素乙氧基化物、羟丙基甲基纤维素、甲基纤 维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟乙基甲基纤维素、角叉菜聚糖、壳聚糖、黄原胶、藻酸 钠、丙二醇藻酸酯、藻酸及其盐，和它们的任何组合。在一些实施方案中，亲水组合物可包含 季铵化的羟乙基纤维素乙氧基化物。在一些实施方案中，亲水组合物可包含壳聚糖。
[0061] 聚合物(例如但不限于带电荷的纤维素或其药学上可接受的盐)可以亲水组合物 的约0.1%-约15%重量或其中的任何范围和/或单个值的量存在于亲水组合物中，例如但不 限于亲水组合物的约0.3%-约10%，约1%-约10%，或约1%-约5%重量。在某些实施方案中，聚合 物（例如但不限于带电荷的纤维素或其药学上可接受的盐）可以亲水组合物的约0.1%， 0 · 3%，0 · 5%，1 %，2%，3%，4%，5%，6%，7%，8%，9%，10%，11 %，12%，13%，14%，或 15%重量或其中的任 何范围和/或单个值的量存在于亲水组合物中。
[0062] 亲水组合物可包含多元醇。实例多元醇包括但不限于甘油、二醇类、丙二醇、己二 醇、聚乙二醇、聚丙二醇、二缩三乙二醇、新戊二醇、三乙醇胺、二乙醇胺、乙醇胺、丁二醇、聚 乙二醇、η-甲基二乙醇胺、异丙醇胺、山梨糖醇、阿拉伯糖醇、赤藻糖醇、HSH、异麦芽糖、拉克 替醇、麦芽糖醇、甘露糖醇、木糖醇、苏糖醇、核醣醇、半乳糖醇、岩藻糖醇、艾杜糖醇、肌醇、 庚七醇，和它们的任何组合。在一些实施方案中，亲水组合物可包含二醇，例如己二醇。多元 醇可以亲水组合物的约1%-约30%重量或其中的任何范围和/或单个值的量存在于亲水组合 物中，例如但不限于亲水组合物的约1 %_约25%，约5%-约15%，约10%-约30%，或约15%-约25% 重量。在某些实施方案中，多元醇可以亲水组合物的约1%，2%，3%，4%，5%，6%，7%，8%，9%，10%， 11%，12%，13%，14%，15%，16%，17%，18%，19%，20%，21%，22%，23%，24%，25%，26%，27%，28%，29%， 或30%重量或其中的任何范围和/或单个值的量存在于亲水组合物中。
[0063]亲水组合物可包含防腐剂。防腐剂可以组合物的约0.01%_约2%重量或其中的任何 范围和/或单个值的量存在于亲水组合物中，例如但不限于亲水组合物的约0.05%-约1%，或 约0.1%-约1%重量。在某些实施方案中，防腐剂以亲水组合物的约0.01%，0.02%，0.03%， 0·04%，0·05%，0·06%，0·07%，0·08%，0·09%，0·1%，0·2%，0·3%，0·4%，0·5%，0·6%，0·7%，0·8%， 0 · 9%，1%，1 · 1%，1 · 2%，1 · 3%，1 · 4%，1 · 5%，1 · 6%，1 · 7%，1 · 8%，1 · 9%，或 2% 重量或其中的任何范围 和/或单个值的量存在于亲水组合物中。可存在于本发明的亲水组合物中的实例防腐剂包 括但不限于山梨酸、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、甲基氯异噻唑啉酮、羟 甲基异噻唑啉酮、重氮烷基脲、氯丁醇、三氯生、苄索氯铵、对羟基苯甲酸酯、氯己定、二葡糖 酸盐、十六烷基三甲基溴化铵、醇、苯扎氯铵、硼酸、溴硝丙二醇、对羟基苯甲酸丁酯、丁烯、 乙酸钙、氯化钙、乳酸钙、二氧化碳、阳离子和膨润土、溴棕三甲铵、西吡氯铵、氯己定、氯丁 醇、氯甲酚、氯二甲酚、柠檬酸一水合物、甲酚、二甲基醚、对羟基苯甲酸乙酯、甘油、海克替 啶、咪唑烷基脲、异丙醇、乳酸、单硫代甘油、喷替酸、苯酚、苯氧基乙醇、苯基乙醇、苯基乙酸 汞、苯基硼酸汞、苯基硝酸汞、苯甲酸钾、偏亚硫酸氢钾、山梨酸钾、丙酸、没食子酸丙酯、丙 二醇、乙酸钠、苯甲酸钠、硼酸钠、乳酸钠、亚硫酸钠、丙酸钠、偏亚硫酸氢钠、木糖醇、二氧化 硫、二氧化碳，和它们的任何组合。
[0064] 亲水组合物可包含中和剂。中和剂可以足以提供亲水组合物的pH为约3-约8或其 中的任何范围和/或单个值的量存在于亲水组合物中，例如但不限于约4-约7或约6-约7。在 一些实施方案中，中和剂调节亲水组合物的pH。在本发明的某些实施方案中，中和剂可以足 以使亲水组合物具有约3,3.5,4,4.5,5,5.5,6,6.5,7,7.5，或8或其中的任何范围和/或单 个值的PH的量存在于本发明的亲水组合物中。可存在于亲水组合物中的实例中和剂包括但 不限于碱，例如氢氧化钠、氢氧化钾，和它们的混合物;酸，例如盐酸、柠檬酸、乙酸，和它们 的混合物;碳酸钠;三乙醇胺(trolamine);氨丁三醇;氨基甲基丙醇;三异丙醇胺;氨基甲基 丙醇；四羟丙基乙二胺;EDTA四钠 ;suttocide A;和它们的任何组合。
[0065] 根据一些实施方案，亲水组合物可为抗菌的。亲水组合物可为在美容上优雅的。本 文使用的〃在美容上优雅的〃指有吸引力施用于皮肤的组合物，所述皮肤可包括粘膜。在一 些实施方案中，对于皮肤和/或粘膜，组合物可为在美容上优雅的。本发明的在美容上优雅 的组合物可具有一种或多种以下性质:合适的稠度或粘度用于局部施用(例如，容易在皮肤 上铺展并且不流动），合适的质地用于局部施用（例如，不是砂粒质的光滑或柔软的组合 物），能吸收和/或渗透皮肤，无粘着性或不发粘，不留下残余物，使皮肤感觉良好，和在施用 后不使皮肤感到油性或干燥。在一些实施方案中，亲水组合物的粘度可为约5,000 cP (厘 泊)-约100，〇〇〇 cP或其中的任何范围和/或单个值，例如但不限于约10,000 cP-约50,000 cPj々20,000 cP4々40,000 cPj々30,000 cP4々50,000 cPj々50,000 cP4々100,000 cP， 或约30,000 cP-约75,000 cP。
[0066] 本发明的亲水组合物(例如但不限于水凝胶)可适用于具有一种或多种(例如但不 限于2、3、4或更多种)不同组合物的本发明的混合物。当在本发明的混合物中时，本发明的 亲水组合物(例如但不限于水凝胶)可用作药物递送系统和/或药物释放系统。例如，当形成 和/或给予包含亲水组合物和第二组合物的混合物时，亲水组合物可设置为调节第二组合 物中的活性药物成分(API)的释放。或者或此外，当形成和/或给予包含亲水组合物和第二 组合物的混合物时，亲水组合物可设置为调节第二组合物的pH。在一些实施方案中，当形成 和/或给予包含亲水组合物和第二组合物的混合物时，亲水组合物可设置为调节包含释放 一氧化氮(NO)的API的第二组合物的pH和/或从释放NO的API释放NO的速率。在某些实施方 案中，第二组合物可为疏水组合物，例如但不限于软膏。在一些实施方案中，亲水组合物可 设置为调节其中存在亲水组合物的混合物的pH在期望的pH范围内。
[0067]本发明的混合物可具有任何合适的pH。在一些实施方案中，混合物的pH可为约1， 2,3,4,5,6,7,8,9，10，11，12，13，或14。在一些实施方案中，混合物可设置为具有在约?!12-约pH 9范围的pH，例如约pH 4-约pH 9,约pH 3-约pH 6,约pH 3-约pH 5,约pH 3-约pH 4,约 pH 4-约pH 8,约pH 4-约pH 7,约pH 4-约pH 6,约pH 5-约pH 7,约pH 5-约pH 6,约pH 6-约 pH 7,或约pH 5-约pH 8,或其中的任何其它范围。在某些实施方案中，将本发明的混合物缓 冲至合适的pH。
[0068] 本发明的混合物可包含活性药物成分(API)。任何合适的API或API的组合可包括 在本发明的混合物中。API的实例包括但不限于抗菌剂、抗痤疮剂、抗炎剂、止痛剂、麻醉剂、 抗组胺剂、杀菌剂、免疫抑制剂、止血剂、血管扩张剂、伤口愈合剂、抗生物膜剂，和它们的任 何组合。实例API包括但不限于在国际申请号PCT/US2013/028223中描述的那些，其通过引 用而全文结合到本文中。在一些实施方案中，混合物和/或API不含酸化的亚硝酸盐。本文使 用的〃酸化的亚硝酸盐〃指这样的释放一氧化氮的组合物，其中一氧化氮释放的主要机理是 在酸存在下，亚硝酸盐还原为三氧化二氮，三氧化二氮可分解为一氧化氮和一氧化二氮。
[0069] 抗菌剂的实例包括但不限于青霉素类和相关的药物、碳青霉烯类、头孢菌素类和 相关的药物、红霉素、氨基糖苷、杆菌肽、短杆菌肽、莫匹罗星、氯霉素、甲砜霉素、夫西地酸 钠、林肯霉素、克林霉素、大环内酯、新生霉素、多粘菌素、利福霉素、大观霉素、四环素类、万 古霉素、替考拉宁、链正菌素、抗叶酸剂包括磺胺类药物、甲氧苄啶及其组合和乙胺嘧啶、合 成的抗菌剂包括硝基呋喃类药、扁桃酸乌洛托品和马尿酸乌洛托品、硝基咪唑类、喹诺酮 类、氟喹诺酮类、异烟肼、乙胺丁醇、吡嗪酰胺、对氨基水杨酸(PAS)、环丝氨酸、卷曲霉素、乙 硫异烟胺、丙硫异烟胺、氨硫脲、紫霉素、eveminomycin、糖肽、苷氨酰环素、酮内酯类、_唑 烷酮;亚胺培南（imipenen)、阿米卡星、奈替米星、磷霉素、庆大霉素、头孢曲松、齐拉星、利 奈唑胺、共杀素、氨曲南和甲硝唑、依匹普林、山费培南钠、比阿培南、蒽环类抗生素、头孢瑞 南、头孢噻利、山费培南西酯、头孢匹罗、Mersacidin、Rifalazil、Ko san、来那培南、 Veneprim、硫培南、利替培南酯（ritipenam acoxyl)、Cyclothialidine、micacocidin A、卡 芦莫南、头孢唑兰和头孢他美匹伏酯。
[0070] 局部抗痤疮剂的实例包括但不限于阿达帕林、壬二酸、过氧化苯甲酰、克林霉素和 磷酸克林霉素、多西环素、红霉素、角质层分离药，例如水杨酸和视黄酸(Retin-A' '）、诺孕 酯、有机过氧化物、类视黄素，例如异维A酸和维A酸、磺胺醋酰钠和他扎罗汀。具体的抗痤疮 剂包括阿达帕林、壬二酸、过氧化苯甲酰、克林霉素(例如，磷酸克林霉素）、多西环素(例如， 海克多西环素）、红霉素、异维A酸、诺孕酯、磺胺醋酰钠、他扎罗汀、阿维A酯和acetretin。 [0071 ]抗组胺剂的实例包括但不限于盐酸苯海拉明、水杨酸苯海拉明、苯海拉明、盐酸氯 苯那敏、马来酸氯苯那敏、盐酸异西喷地、盐酸曲吡那敏、盐酸异丙嗪、盐酸甲地嗪等。局部 麻醉剂的实例包括盐酸地布卡因、地布卡因、盐酸利多卡因、利多卡因、苯佐卡因、盐酸对丁 基(p-buthyl)氨基苯甲酸2_(二-乙基氨基）乙基酯、盐酸普鲁卡因、丁卡因、盐酸丁卡因、盐 酸氯普鲁卡因、盐酸氧普鲁卡因、甲哌卡因、盐酸可卡因、盐酸哌罗卡因、达克罗宁和盐酸达 克罗宁。
[0072]杀菌剂的实例包括但不限于醇、季铵化合物、硼酸、氯己定和氯己定衍生物、碘、酚 类屬烯、杀菌剂、消毒剂包括硫柳汞、苯酚、百里酚、苯扎氯铵、节索氯铵、氯己定、聚维酮 碘、西吡氯铵、丁香酚和三甲基溴化铵。
[0073]抗炎剂的实例包括但不限于非留族抗炎剂(NSAID);丙酸衍生物，例如布洛芬和萘 普生；乙酸衍生物，例如消炎痛;烯醇酸衍生物，例如美洛昔康、对乙酰氨基酚;水杨酸甲酯； 单乙二醇水杨酸酯;阿司匹林；甲芬那酸;氟芬那酸;消炎痛;双氯芬酸;阿氯芬酸;双氯芬酸 钠;布洛芬;酮洛芬;萘普生;普拉洛芬;非诺洛芬;舒林酸;芬氯酸;环氯Φ酸;氟比洛芬;芬 替酸;丁苯羟酸;吡罗昔康;保泰松;羟布宗;氯非宗;喷他佐辛；甲嘧啶唑;噻拉米特盐酸盐； 类固醇，例如氯倍他索丙酸盐、倍他米松二丙酸盐（bethamethasone dipropionate)、 halbetasol proprionate、双醋二氟拉松、醋酸氟轻松、哈西奈德、安西奈德、去轻米松、曲 安奈德、莫米松、丙酸氟替卡松、倍他米松二丙酸盐、曲安奈德、氟替卡松丙酸盐、地奈德、氟 轻松、戊酸氢化可的松、泼尼卡酯、曲安奈德、氟轻松、氢化可的松和本领域已知的其它物 质、泼尼松龙(predoni so lone )、地塞米松、氟轻松、醋酸氢化可的松、醋酸泼尼松龙、甲基泼 尼松龙、醋酸地塞米松、倍他米松、戊酸倍他米松、氟米松、氟米龙、丙酸倍氯米松、醋酸氟轻 松、局部皮质留类，并且可为较低效力皮质留类中的一种，例如氢化可的松、氢化可的松-21-单酯(例如，氢化可的松-21-乙酸酯、氢化可的松-21-丁酸酯、氢化可的松-21-丙酸酯、 氢化可的松-21-戊酸酯等）、氢化可的松-17,21-二酯(例如，氢化可的松-17,21-二乙酸酯、 氢化可的松-17-乙酸酯-21-丁酸酯、氢化可的松-17，21_二丁酸酯等）、阿氯米松、地塞米 松、氟甲松、泼尼松龙或甲基泼尼松龙，或者可为较高效力皮质类固醇，例如氯倍他索丙酸 盐、苯甲酸倍他米松、倍他米松二丙酸盐、二乙酸二氟拉松、醋酸氟轻松、莫米松、曲安奈德。 [0074]止痛剂的实例包括但不限于阿芬太尼、苯佐卡因、丁丙诺啡、布托啡诺、氨苯丁酯、 辣椒素、可乐定、可待因、地布卡因、脑啡肽、芬太尼、氢可酮、氢吗啡酮、消炎痛、利多卡因、 左啡诺、哌替啶、美沙酮、吗啡、尼可吗啡、阿片、奥布卡因、羟考酮、羟吗啡酮、喷他佐辛、丙 吗卡因、丙美卡因、右丙氧芬、丙美卡因、舒芬太尼、丁卡因和曲马多。
[0075]麻醉剂的实例包括但不限于醇，例如苯酚;苯甲酸苄酯;炉甘石;氯二甲酚;达克罗 宁;氯胺酮;薄荷脑;丙吗卡因；间苯二酚;troclosan;普鲁卡因药物，例如苯佐卡因、布比卡 因、氯普鲁卡因；辛可卡因；可卡因；地昔卡因；二胺卡因；地布卡因；依替卡因；海克卡因；左 布比卡因；利多卡因；甲哌卡因；羟乙卡因；丙胺卡因；普鲁卡因；丙美卡因；丙氧卡因；吡咯 卡因；利索卡因；罗多卡因；罗哌卡因；丁卡因；和衍生物，例如药学上可接受的盐和酯，包括 布比卡因 HCl、氯普鲁卡因 HC1、二胺卡因环已磺酸盐、地布卡因 HCl、达克罗宁HCl、依替卡因 HCl、左布比卡因 HCl、利多卡因 HCl、甲哌卡因 HCl、丙吗卡因 HCl、丙胺卡因 HCl、普鲁卡因 HCl、丙美卡因 HCl、丙氧卡因 HCl、罗哌卡因 HCl和丁卡因 HCl。
[0076]止血剂的实例包括但不限于凝血酶、维生素 KU硫酸鱼精蛋白、氨基己酸、氨甲环 酸、卡巴克络、卡络横钠 （carbaxochrome sodium sulfanate)、芦丁和澄皮苷。
[0077] API可存在于用于形成本发明混合物的任一种组合物中。在某些实施方案中，用于 形成混合物的至少一种组合物包含释放一氧化氮(NO)的API。在一些实施方案中，至少用于 形成混合物的组合物不含API，例如但不限于释放NO的API。在一些实施方案中，用于形成混 合物的组合物可包含至少一种API，但是组合物不含释放NO的API。在某些实施方案中，混合 物包含亲水组合物，并且亲水组合物不含释放NO的API。
[0078] 在某些实施方案中，本发明的混合物可包含至少一种API，例如但不限于释放一氧 化氮的活性药物成分。在一些实施方案中，本发明的混合物包含释放一氧化氮的活性药物 成分，其量为一氧化氮的约〇.〇1%_约5% w/w或其中的任何范围和/或单个值，例如一氧化氮 的约 0.1 %-约 3%，约 0.1 %-约 1.5%，或约 1 %-约 5% w/w。
[0079]本文使用的"释放一氧化氮的活性药物成分"和"释放NO的API"指为受试者的皮肤 提供一氧化氮(但不是气态一氧化氮）的化合物或其它组合物。在一些实施方案中，释放NO 的API包括释放一氧化氮的化合物，下文中称为〃释放NO的化合物〃。释放NO的化合物包括至 少一种NO供体，其为在某些条件下可释放一氧化氮的官能团。在一些实施方案中，当与本发 明的组合物接触时，释放NO的化合物的至少一种NO供体释放NO。在某些实施方案中，本发明 的组合物调节从释放NO的化合物释放的NO的量和/或从释放NO的化合物释放NO的速率。在 一些实施方案中，本发明的组合物提高从释放NO的化合物释放的NO的量和/或从释放NO的 化合物释放NO的速率。
[0080] 可使用任何合适的释放NO的化合物。在一些实施方案中，释放NO的化合物包括包 括NO供体基团的小分子化合物。本文使用的〃小分子化合物〃定义为分子量小于500道尔顿 的化合物，并且包括有机和/或无机小分子化合物。在一些实施方案中，释放NO的化合物包 括包括NO供体基团的大分子。"大分子"在本文中定义为分子量为500道尔顿或更大的任何 化合物。可使用任何合适的大分子，包括交联的或非交联的聚合物、树状大分子、金属化合 物、有机金属化合物、基于无机物的化合物和其它大分子支架。在一些实施方案中，大分子 的标称直径在约0.1 nm-约100 μπι范围，并且可包含两种或更多种大分子的聚集体，从而大 分子结构被NO供体基团进一步改性。
[0081] 在一些实施方案中，释放NO的化合物包括二醇二氮烯If官能团作为NO供体。二醇 二氮烯儀官能团可在某些条件下（例如当暴露于水时)产生一氧化氮。作为另一实例，在一 些实施方案中，释放NO的化合物包括亚硝基硫醇官能团作为NO供体。NO供体可在某些条件 下(例如当暴露于光时)产生一氧化氮。其它NO供体基团的实例包括亚硝胺、羟基亚硝胺、羟 基胺和羟基脲。NO供体和/或释放NO的化合物的任何合适的组合也可用于本文描述的第二 组合物。此外，NO供体可通过共价和/或非共价相互作用掺入到小分子或大分子中或之上。 [0082] 释放NO的大分子可为释放NO的颗粒形式，例如在美国申请公布号2009/0214618和 美国专利号8,282,967中描述的那些，它们所公开的内容通过引用而全文结合到本文中。释 放NO的化合物的其它非限制性实例包括如在美国专利公布号2006/0269620或2010/ 0331968中描述的释放NO的沸石；如在美国专利申请公布号2010/0239512或2011/0052650 中描述的释放NO的金属有机框架(M0F);如在国际公布号W0/2013/029009中描述的释放NO 的多供体化合物；如在美国公布号2009/0214618中描述的释放NO的树状大分子或金属结 构；如在美国公布号2011/0086234中描述的释放一氧化氮的涂层;和如在美国公布号2010/ 0098733中描述的化合物。在该段落中的每一个参考文献所公开的内容通过引用而全文结 合到本文中。此外，释放NO的大分子可如在国际公布号W0/2012/100174中描述的来制备，其 所公开的内容通过引用而全文结合到本文中。
[0083] 在一些实施方案中，经过相同的时间段，与从用于形成混合物的至少一种组合物 释放的NO的量相比，本发明的混合物可提高从混合物释放的NO的量。例如，当形成包含亲水 组合物和疏水组合物的混合物例如但不限于如本文描述的软膏时，与从单独的疏水组合物 (即，在不存在亲水组合物或混合物下)释放的NO的量相比，从混合物释放的NO的量可提高。 在某些实施方案中，经过相同的时间段，与从用于形成混合物的至少一种组合物释放的NO 的量相比，本发明的混合物可提高释放的NO的量达至少约10%，20%，30%，40%，50%，60%，70%， 80%，90，100%，150%，200%，300%，400%或更多，或其中的任何范围和/或单个值。经过相同的 时间段，比起从用于形成混合物的至少一种组合物释放的NO的量，本发明的混合物可释放 约1.5-约100倍多NO或其中的任何范围和/或单个值，例如但不限于约2-约10倍多NO或约5- 约50倍多NO。
[0084] 根据一些实施方案，混合物包含用于稳定和/或保持混合物的pH的手段。用于稳定 和/或保持混合物的pH的实例手段包括但不限于缓冲液，例如本文描述的那些。在一些实施 方案中，混合物可包含释放一氧化氮的活性药物成分，其量为一氧化氮的约〇. 〇1%_约5% w/ w，并且pH为约4-约9。本发明的混合物可为在美容上优雅的和/或抗菌的。在一些实施方案 中，本发明的混合物自乳化。
[0085] 在一些实施方案中，本发明的混合物可包含如本文描述的亲水组合物和疏水组合 物。疏水组合物可为液体、溶液、软膏等。疏水组合物包含至少一种疏水组分，例如但不限于 疏水碱。实例疏水组合物包括在国际申请号PCT/US2010/046173和PCT/US2013/028223中描 述的那些，它们通过引用而全文结合到本文中。在一些实施方案中，疏水组合物为软膏。
[0086] 在某些实施方案中，本发明的混合物可包含聚合物，例如但不限于带电荷的纤维 素或其药学上可接受的盐；多元醇;疏水碱;API;和任选两亲化合物或乳化剂。在一些实施 方案中，API可包含释放NO的化合物。混合物还可包含缓冲液，例如但不限于磷酸盐缓冲液， 并且缓冲至约4-约9的pH或其中的任何范围和/或单个值。
[0087] 至少一种疏水碱可存在于本发明的混合物中。在一些实施方案中，疏水碱可存在 于可用于形成本发明混合物的疏水组合物中。本文使用的〃疏水碱〃指天然和/或合成的脂 肪、蜡、油等。任何合适的疏水碱可用于本发明的混合物。在某些实施方案中，混合物包含两 种或更多种疏水碱，例如但不限于2、3、4、5或更多种疏水碱。在某些实施方案中，除了具有 疏水性质以外，疏水碱还可具有亲水性质，因此可为两亲碱。实例疏水碱包括但不限于支化 和非支化的烃、支化和非支化的烃蜡、凡士林、烃凝胶、液体石蜡、白矿脂、矿脂、微晶蜡、 311(161；[113錯、巴西棕榈錯、羊毛脂(羊毛錯）、羊毛錯醇、西班牙草錯、软木錯、81131'1111^錯、米 糠錯、甘鹿錯、衆果錯、小冠巴西棕錯、大豆錯、西蒙得木油、尾脂(uropygial grease)、地 蜡、石蜡、微蜡、植物油、动物油、巴西棕榈蜡、蜂蜡、可可脂、硬脂肪、矿物油、植物油、鳄梨 油、琉璃苣油(borage oi 1 )、低芥酸菜籽油、蓖麻油、甘菊油、椰油、玉米油、棉籽油、油菜籽 油、月见草油、红花油、葵花油、大豆油、甜杏仁、棕榈油、棕榈仁油、牛蒡籽油、芝麻油、琉璃 苣籽油、油菜油茶油、油鲱油(brevoortia oil)、牛脚油(bubulum oil)、岩玫瑰精油 (cistus ladaniferus oi 1 )、油棕油、杏仁油、松树油、橄榄油、花生油、小麦胚芽油、葡萄籽 油、蓟油、猪油、牛脂、棕榈油精、雾冰草脂、牛油树脂、可可脂、烛果油、盐脂、卵磷脂、野漆树 蜡羊毛脂、部分氢化的植物油、疏水聚合物，和它们的任何组合。
[0088] 在一些实施方案中，疏水碱可包含疏水聚合物。任何合适的疏水聚合物可用于本 发明的混合物。实例疏水聚合物包括但不限于烃聚合物和/或共聚物、芳族聚氨酯、硅酮橡 胶、聚硅氧烷、聚己内酯、聚碳酸酯、聚氯乙烯、聚乙烯、聚乙二醇（6-4000)、聚-L-丙交酯、 聚-DL-乙交酯、聚醚醚酮(PEEK)、聚酰胺、聚酰亚胺和聚乙酸乙烯酯。在某些实施方案中，疏 水碱可为两亲碱，例如但不限于聚乙二醇(6-4000)。在本发明的具体实施方案中，本发明的 混合物包含一种或多种烃聚合物和/或共聚物。在某些实施方案中，本发明的混合物可包含 一种或多种烃聚合物和/或共聚物，例如但不限于以商标Versagel e市售可得自Calumet Specialty Products Partners of Indianapolis，IN的那些和/或以商品名Crodabase SQ 市售可得自Croda International Plc of East Yorkshire，United Kingdom的那些。
[0089] 在一些实施方案中，混合物可包含至少一种疏水碱，所述疏水碱包含一种或多种 植物和/或矿物油。任何合适的油可用于本发明的混合物。实例矿物油包括但不限于轻质矿 物油、白色矿物油、链烷油、环烷油、芳族油，和它们的任何组合。
[0090] -种或多种疏水碱可存在于用于形成本发明混合物的疏水组合物中。一种或多种 疏水碱可以疏水组合物的约2%_约99%重量或其中的任何范围和/或单个值的浓度存在于疏 水组合物中，例如但不限于疏水组合物的约2%-约20%重量，约35%-约99%重量，约35%-约90% 重量，约25%-约50%重量，约40%-约80%重量，约65%-约95%重量，约70%-约80%重量，或约50%-约70%重量。在某些实施方案中，一种或多种疏水碱可以疏水组合物的约50%-约70%重量的 浓度存在于用于形成混合物的疏水组合物中。
[0091] 本文使用的"两亲化合物"指包含亲水性质和疏水性质的化合物。两亲化合物可包 含两种或更多种化合物，其中每一种可提供亲水性质和/或疏水性质。在一些实施方案中， 两亲化合物可包含一种具有亲水性质和疏水性质的化合物。在本发明的具体实施方案中， 两亲化合物可吸收水分，基本上不吸收蒸汽水分。两亲化合物可具有12-20的亲水-亲脂平 衡(HLB)值或其中的任何范围和/或单个值，例如但不限于15-20或18-20。在本发明的某些 实施方案中，两亲化合物的HLB值可为19。
[0092] 实例两亲化合物包括但不限于脂肪酸酯。一种或多种脂肪酸酯可存在于本发明的 混合物中，例如2、3、4或更多种脂肪酸酯。实例脂肪酸酯包括但不限于C 6-C22烷基和/或烯基 脂肪酸酯，例如月桂酸甲酯、月桂酸乙酯、肉豆蔻酸乙酯、棕榈酸乙酯、亚油酸乙酯、异丁酸 丙酯、月桂酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、肉豆蔻酸油醇酯、硬脂酸油醇酯和油 酸油醇酯;醚-酯，例如乙氧基化的脂肪醇的脂肪酸酯;多元醇酯，例如乙二醇单-和二-脂肪 酸酯、一缩二乙二醇单-和二-脂肪酸酯；聚乙二醇(6-2000)脂肪酸单-和/或二酯，例如PEG-6_月桂酸酯、PEG-6-硬脂酸酯、PEG-8-二月桂酸酯、PEG-8-二硬脂酸酯等;聚乙二醇甘油脂 肪酸酯，例如PEG-20-甘油基月桂酸酯、PEG-20-甘油基硬脂酸酯和PEG-20-甘油基油酸酯； 丙二醇单-和二-脂肪酸酯；聚丙二醇2000单油酸酯;聚丙二醇2000单硬脂酸酯；乙氧基化的 丙二醇单硬脂酸酯;甘油基单-和二-脂肪酸酯；聚甘油脂肪酸酯，例如聚甘油基-10月桂酸 酯等；乙氧基化的甘油基单硬脂酸酯；1，3-丁二醇单硬脂酸酯；1，3-丁二醇二硬脂酸酯；聚 氧乙烯多元醇脂肪酸酯;脱水山梨糖醇脂肪酸酯，包括脱水山梨糖醇三油酸酯和脱水山梨 糖醇单月桂酸酯；聚乙二醇脱水山梨糖醇脂肪酸酯，例如PEG-6脱水山梨糖醇单油酸酯；聚 氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯，包括聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单月桂酸酯;蔗糖脂肪酸 酯，例如蔗糖单棕榈酸酯和蔗糖单硬脂酸酯;蜡酯，例如蜂蜡、鲸蜡、肉豆蔻酸肉豆蔻基酯、 硬脂酸硬脂基酯和山嵛酸花生酯；聚乙二醇烷基醚，例如PEG-10油烯基醚或PEG-9鲸蜡基 醚;聚乙二醇烷基酚，例如PEG-10-100壬基酚;聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物，例如泊洛沙 姆188;固醇酯，例如胆固醇脂肪酸酯，和它们的任何组合。
[0093]在某些实施方案中，脂肪酸酯可包含聚乙二醇(PEG)甘油酯。PEG甘油酯的聚乙二 醇部分可提供两亲化合物的亲水性质，并且可包括但不限于PEG 5-1000或其中的任何范围 和/或单个值，和它们的任何组合。PEG甘油酯的甘油酯部分可提供两亲化合物的疏水性质， 并且可包括但不限于天然和/或氢化的油，例如但不限于蓖麻油、氢化蓖麻油、维生素 A、维 生素 D、维生素 E、维生素 K、植物油(例如，玉米油、橄榄油、花生油、棕榈仁油、杏仁油、扁桃仁 油等），和它们的任何组合。实例聚乙二醇(PEG)甘油酯包括但不限于PEG-20蓖麻油、PEG-20 氢化蓖麻油、PEG-20玉米甘油酯、PEG-20杏仁甘油酯；PEG-23三油酸酯、PEG-40棕榈仁油、 PEG-8辛酸/癸酸甘油酯、PEG-6辛酸/癸酸甘油酯、月桂酰基聚乙二醇-32甘油酯、硬脂酰基 聚乙二醇甘油酯、生育酚PEG-1000 琥珀酸酯，和它们的任何组合。在一些实施方案中，脂肪 酸酯可包含PEG 5-30 (即，PEG 5、6、7、8、9、10等)和辛酸/癸酸甘油酯。在具体实施方案中， 混合物可包含PEG-5-辛酸/癸酸甘油酯、PEG-6-辛酸/癸酸甘油酯、PEG-7-辛酸/癸酸甘油酯 和/或PEG-8-辛酸/癸酸甘油酯。在某些实施方案中，混合物可包含一种或多种脂肪酸酯，例 如但不限于以商标SOFTIGEN?市售可得自德国Sasol of Hamburg的那些。
[0094] 两亲化合物可以疏水组合物的约1%-约30%重量或其中的任何范围和/或单个值的 浓度存在于用于形成本发明混合物的疏水组合物中，例如但不限于疏水组合物的约2%_约 20%重量，约1%-约10%重量，约1%-约5%重量，或约5%-约15%重量。在某些实施方案中，两亲化 合物以疏水组合物的约10%重量的浓度存在于用于形成本发明混合物的疏水组合物中。
[0095] 本发明的混合物还可包含一种或多种赋形剂。在一些实施方案中，一种或多种赋 形剂可存在于可用于形成本发明混合物的疏水组合物中。用于药物组合物的赋形剂为本领 域公知的，并且实例可在Handbook of Pharmaceutical Excipients (药物赋形剂手册） (Rowe，R.C.等人，APhA Publi cat ions;第5版，2005)中找到。赋形剂的类别可包括但不限于 润肤剂、湿润剂、助溶剂、PH调节剂、防水剂、消泡剂、表面活性剂、增溶剂、乳化剂、润湿剂、 渗透增强剂、抗氧化剂、和/或溶剂。赋形剂可以任何合适的浓度存在于本发明的混合物中。 在一些实施方案中，赋形剂可以疏水组合物的约1%-约20%重量或其中的任何范围和/或单 个值的浓度存在于用于形成本发明混合物的疏水组合物中，例如但不限于疏水组合物的约 1 %-约15%重量，约1 %-约10%重量，或约5%-约10%重量。
[0096] 在一些实施方案中，混合物还可包含助溶剂。助溶剂可以疏水组合物的约1%-约 30%重量或其中的任何范围和/或单个值的浓度存在于用于形成本发明混合物的疏水组合 物中，例如但不限于疏水组合物的约2%-约20%重量，约5%-约25%重量，或约5%-约15%重量。 在本发明的某些实施方案中，助溶剂可以疏水组合物的约1〇%_约15%重量的浓度存在于用 于形成本发明混合物的疏水组合物中。
[0097]实例助溶剂包括但不限于脂肪酸酯、丙二醇、甘油、聚乙二醇、硅酮例如环二甲基 硅酮，和它们的任何组合。在一些实施方案中，助溶剂可包含天然油。在某些实施方案中，助 溶剂包含辛酸和/或癸酸脂肪酸酯，例如辛酸和/或癸酸甘油三酯。实例助溶剂包括但不限 于以商标MIGLY0L?市售可得自德国Sasol of Hamburg的那些。
[0098] 混合物可包含湿润剂。可使用任何合适的湿润剂或湿润剂的组合。湿润剂可以疏 水组合物的约1%-约25%重量或其中的任何范围和/或单个值的浓度存在于用于形成本发明 混合物的疏水组合物中，例如但不限于疏水组合物的约2%-约20%重量，约5%-约10%重量，或 约5%-约15%重量。在某些实施方案中，湿润剂可以疏水组合物的约10%-约15%重量的浓度存 在于用于形成本发明混合物的疏水组合物中。
[0099] 实例湿润剂包括但不限于多元醇，例如二醇类，例如一缩二乙二醇单乙基醚和甲 氧基聚乙二醇;甘油，例如丙二醇、甘油、异丙醇、乙醇、乙二醇、聚乙二醇、乙氧基二甘醇或 它们的混合物;糖多元醇，例如山梨糖醇、木糖醇和麦芽糖醇；多元醇，例如聚葡聚糖;二甲 基异山梨醇;皂树皮;尿素;和它们的任何组合。在本发明的具体实施方案中，湿润剂包含烷 二醇，例如己二醇、丁二醇、戊二醇，和它们的任何组合。
[0100]混合物可包含乳化剂。可使用任何合适的乳化剂或乳化剂的组合。乳化剂可以疏 水组合物的约2%-约97%重量或其中的任何范围和/或单个值的浓度存在于用于形成本发明 混合物的疏水组合物中，例如但不限于疏水组合物的约2%-约20%重量，约5%-约15%重量，约 10%-约30%重量，约25%-约99%重量，或约25%-约70%重量。在某些实施方案中，乳化剂可以疏 水组合物的约1 〇%_约50%重量的浓度存在于用于形成本发明混合物的疏水组合物中。
[0101] 实例乳化剂包括但不限于磷脂酰胆碱;卵磷脂;表面活性剂，例如聚乙氧基化的化 合物包括吐温80聚山梨醇酯20、21、40、60、61、65、81、85、120和脱水山梨糖醇酯的其它聚氧 乙烯加合物、脂肪酸、脂肪醇、羊毛脂、羊毛脂醇、蓖麻油(天然或氢化的)或烷基苯;脂肪醇， 例如鲸蜡醇、硬脂醇、山嵛醇、肉豆蔻醇和十六/十八醇；脂肪酸酯，例如以商标MIGLYOl/市 售可得自德国Sasol of Hamburg的那些;和它们的任何组合。
[0102] 根据一些实施方案，用于形成本发明混合物的疏水组合物可包含至少一种为疏水 组合物的约55%-约99%重量量的疏水碱和API (例如但不限于释放一氧化氮的API)。在某些 实施方案中，至少一种疏水碱可以疏水组合物的约70%-约80%重量的量存在于疏水组合物 中。在一些实施方案中，两亲碱可以疏水组合物的约15%-约45%重量的量存在于疏水组合物 中。疏水组合物可任选包含疏水组合物的约2%-约30%重量量的助溶剂、疏水组合物的约5%-约10%重量量的湿润剂、疏水组合物的约5%-约25%重量量的乳化剂和/或疏水组合物的约 1 %-约10%重量量的两亲化合物。
[0103] 在一些实施方案中，本发明的混合物可包含与可包含至少一种疏水碱的疏水组合 物混合的亲水组合物，所述亲水组合物可包含水、聚合物例如但不限于带电荷的纤维素或 其药学上可接受的盐和多元醇。亲水组合物可被缓冲和/或可为水凝胶形式。疏水组合物可 为软膏形式。在一些实施方案中，本发明的混合物可包含与疏水组合物混合的缓冲的水凝 胶，所述疏水组合物包含至少一种疏水碱和API API可包含释放NO的API。疏水组合物还可 包含两亲化合物、助溶剂、湿润剂和它们的任何组合中的一种或多种。在某些实施方案中， 混合物可通过混合而形成。在一些实施方案中，混合物自乳化。混合物可包含单一相。
[0104] 根据本发明的实施方案，可提供试剂盒。在一些实施方案中，试剂盒可包含第一组 合物和第二组合物。第一组合物可包含亲水组合物。第二组合物可包含API，例如但不限于 释放NO的API。在一些实施方案中，第二组合物可包含至少一种疏水碱。在具体实施方案中， 第二组合物包含如本文描述的软膏和/或例如在国际申请号PCT/US2010/046173和PCT/ US2013/028223中描述的那些，它们通过引用而全文结合到本文中。
[0105] 在一些实施方案中，试剂盒可包含单独储存的第一组合物和第二组合物。在一些 实施方案中，在施用于受试者之前，本发明的试剂盒可包含用于与第一组合物和第二组合 物形成混合物的手段，例如但不限于通过将组合物混合、合并、接触等。试剂盒可设置为在 分配和/或施用于受试者之后混合两种组合物。在一些实施方案中，与在混合物中不存在一 种或多种组合物下API的性能和/或活性相比，试剂盒可设置为提供具有提高的API性能和/ 或活性的混合物。
[0106] 在使用中，可用第一组合物和第二组合物形成混合物，随后施用于受试者的皮肤， 在一些实施方案中，所述皮肤包括粘膜。例如，可将混合物局部给予受试者的手、手指、脚、 脚趾、胳膊、腿、躯干、肛门、生殖器、脸、粘膜(包括体腔）、指甲等中的一个或多个。在其它实 施方案中，可将试剂盒中的至少一种组合物施用于受试者的皮肤，随后可将试剂盒中的至 少一种不同的组合物施用于受试者的相同的皮肤。
[0107]在一些实施方案中，混合物包含包含亲水组合物的第一组合物和包含疏水组合物 的第二组合物。亲水组合物与疏水组合物的比率可为约5:1或更少，在其它实施方案中，约 4:1或更少，约3:1或更少，约2:1或更少，或约1:1。在某些实施方案中，该比率为约3:1。在其 它实施方案中，该比率为约1:1。混合物可以这样的比率施用于受试者。在某些实施方案中， 本发明的试剂盒包含用于分配和/或递送适量以实现期望的比率的第一组合物和第二组合 物的手段。在一些实施方案中，可调节和/或改变混合物中的第一组合物与第二组合物的比 率，以实现期望的API释放模式。
[0108]比起如果组合物在试剂盒中共同储存和/或混合，提供当施用于受试者的皮肤时 混合的亲水组合物和疏水组合物可允许本发明的试剂盒较长的保存期限。例如，在疏水组 合物中配制和荷载API可提供具有长保存期限的稳定的产品。因此，例如，可调节疏水组合 物的PH和/或水含量，以降低或最小化APK例如水活化的API)的释放，以提供在室温下稳定 的组合物。亲水组合物可随后与疏水组合物合并，以调节合并的PH和/或提供水来活化API。 疏水组合物可以不同的比率与亲水组合物合并，以提供混合物期望的释放、pH和/或剂量。 这样的方法可允许单一制备过程用于生产更复杂和昂贵的疏水组合物，随后生产由与疏水 组合物混合的亲水组合物的组成和/或量限定的具体产品。
[0109] 本文使用的术语"保存期限"指在推荐的储存条件下储存，在不敞开的包装中，产 品（例如，本发明的组合物和/或试剂盒)保持能释放治疗有效量的API(例如但不限于一氧 化氮）的时间长度。保存期限可例如通过在指定的时间段后，产品的"截止使用"或"最佳截 止使用"日期、产品的制备商终止日期和/或实际产品特性来证明。因此，除非另外陈述，否 则本文使用的术语"保存期限"应解释为包括产品的"实际"保存期限和产品的"预期的"保 存期限二者。本领域技术人员将认识到，比起当组合物在使用中（例如，当包含释放NO的API 的组合物与另一组合物混合时)释放一氧化氮的速率，在包装和/或储存条件下，在组合物 中释放一氧化氮的速率可不同（即，更快或更慢）。在某些实施方案中，与当包含API的组合 物包装和/或储存时释放一氧化氮的速率相比，当组合物在使用中时从本发明的组合物释 放一氧化氮的速率可更快速。
[0110] 在一些实施方案中，产品的保存期限为产品保持能释放当包装时产品可释放的一 氧化氮初始量的至少50%的时间。在其它实施方案中，产品的保存期限为产品保持能释放当 包装时产品可释放的一氧化氮初始量的至少70%，至少80%，至少90%，至少95%，或至少98%的 时间。在一些实施方案中，产品的保存期限为经过期望的时间段产品保持能释放治疗有效 量的一氧化氮的时间。在一些实施方案中，推荐的储存条件为室温。在一些实施方案中，推 荐的储存条件为冷冻的储存条件。在具体实施方案中，冷冻的储存条件为在1°C到12°C之间 或其中的任何范围和/或单个值。
[0111] 其它实施方案可提供在打开包装后可用寿命为至少约7天的本发明的包装的组合 物。在其它实施方案中，可用寿命为至少约30天，至少约60天或至少约90天。在再其它实施 方案中，包装的组合物的可用寿命为至少约60天到至少约730天。本文使用的术语"可用寿 命"指当按照推荐的施用和当在推荐的储存条件下储存时，产品保持能从敞开的包装释放 治疗有效量的一氧化氮的时间长度。可用寿命可例如由制备商推荐的时间来证明，以在打 开后处置产品或在打开后测量产品特性。
[0112] 因此，除非另外陈述，否则本文使用的术语"可用寿命"应解释为包括产品的"实 际"可用寿命或产品的"预期的"可用寿命二者。在一些实施方案中，产品的可用寿命为产品 保持能释放当包装打开时产品可释放的一氧化氮初始量的至少50%的时间。在其它实施方 案中，产品的可用寿命为产品保持能释放当包装打开时产品可释放的一氧化氮初始量的至 少70%，至少80%，至少90%，至少95%，或至少98%的时间。在一些实施方案中，在打开后推荐的 储存条件为室温。在具体实施方案中，在打开后推荐的储存条件为冷冻的条件。
[0113] 根据本公开，本领域技术人员应理解，亲水组合物(例如本文描述的那些)可提供 用于调节药物组合物的PH的手段以及用于活化药物组合物的API的手段。在一些实施方案 中，当用于与水凝胶形成混合物时，水凝胶(例如本文描述的那些)可提供用于保持和/或稳 定疏水组合物的PH的手段。用于保持和/或稳定混合物的pH的手段可设置为活化和/或引发 API的释放。在具体实施方案中，本发明的水凝胶可提供用于保持和/或稳定包含二醇二氮 烯纖改性的共缩合的聚硅氧烷大分子的混合物的PH的手段。在一些实施方案中，pH可保持 和/或稳定在约5-约8的pH范围内。在其它实施方案中，本发明的水凝胶可提供用于从包含 二醇二氮烯裤I改性的共缩合的聚硅氧烷大分子的药物组合物释放一氧化氮的手段。
[0114] 根据一些实施方案，本发明的方法包括给予受试者的皮肤(包括粘膜)本发明的组 合物。例如，可将组合物给予受试者的手、手指、脚、脚趾、胳膊、腿、躯干、肛门、生殖器、脸、 粘膜(包括体腔）、指甲等中的一个或多个。在某些实施方案中，可局部给予组合物。在一些 实施方案中，可将本发明的亲水组合物局部给予受试者的皮肤。在某些实施方案中，可将包 含疏水组合物和亲水组合物的混合物局部给予受试者的皮肤。混合物可包含至少一种API， 例如但不限于释放NO的API。
[0115] 本发明的方法可包括在给予步骤之前和/或期间形成混合物。通过将亲水组合物 (例如但不限于水凝胶）和疏水组分(例如，但不限于软膏）混合、共混、接触、施用于相同的 面积或区域、乳化等，可制备混合物。
[0116] 在一些实施方案中，本发明的方法包括向受试者的皮肤递送治疗有效量的一氧化 氮。本文使用的术语"治疗有效量"指在受试者中发挥治疗可用的响应的APK例如但不限于 一氧化氮)的量。本领域技术人员将理解治疗效果不需要完全或治愈，只要向受试者提供一 些益处即可。
[0117] 本发明在兽医和医疗应用二者中发现用途。适用于使用本发明的方法实施方案治 疗的受试者包括但不限于鸟类和哺乳动物受试者。本发明的哺乳动物包括但不限于犬科动 物、猫科动物、牛科动物、公山羊、马科动物、绵羊、猪、啮齿动物（例如大鼠和小鼠）、 lagomorphs、灵长类动物(例如，猿和人）、非人灵长类动物（例如，猴子、狒狒、黑猩猩、大猩 猩)等和子宫内的哺乳动物。需要根据本发明治疗的任何哺乳动物受试者是适合的。两种性 别和在发育的任何阶段（即，新生儿、婴儿、少年、青少年、成人)的人受试者可根据本发明治 疗。在本发明的一些实施方案中，受试者为哺乳动物，在某些实施方案中，受试者为人。人受 试者包括所有年龄的男性和女性二者，包括胎儿、新生儿、婴儿、少年、青少年、成人和老年 受试者以及妊娠受试者。在本发明的具体实施方案中，受试者为人青少年和/或成人。
[0118] 根据本发明说明性鸟类包括鸡、鸭、火鸡、鹅、鹌鹑、野鸡、平胸类鸟(例如，鸵鸟)和 驯养鸟(例如，鹦鹉和金丝雀)和鸟卵。
[0119] 本发明的方法还可在动物受试者上实施，特别是哺乳动物受试者，例如小鼠、大 鼠、狗、猫、家畜和马用于兽医目的，和/或用于药物筛选和药物开发目的。
[0120] 在本发明的具体实施方案中，受试者〃需要〃本发明的方法，例如，受试者已诊断患 有可使用本发明的方法治疗的疾病或障碍、处于其风险和/或认为具有该疾病或障碍。在一 些实施方案中，受试者具有皮肤障碍，例如但不限于痤疮、特应性皮炎和/或银肩病。在其它 实施方案中，受试者具有伤口例如但不限于褥疮、烧伤、慢性静脉腿溃疡和/或糖尿病脚溃 疡。在本发明的一些实施方案中，受试者具有炎性皮肤病症或障碍。在本发明的一些实施方 案中，受试者具有感染，例如病毒、细菌或真菌感染，并且在具体实施方案中，具有皮肤症状 的感染。在一些实施方案中，受试者具有美容病症，例如疤痕、鱼尾纹等。在再其它实施方案 中，受试者具有皮肤癌。
[0121] 本文使用的"治疗"、"治疗"或"治疗"(及其语法变体)指赋予受试者益处的任何类 型的治疗，并且可意味着受试者病症的严重性降低、至少部分改进或改善和/或实现至少一 种临床症状的一些减轻、缓解或降低和/或存在延迟疾病或障碍的进展。在具体实施方案 中，与在不存在本发明的方法下皮肤障碍的严重性相比，可在受试者中降低皮肤障碍的严 重性。在其它实施方案中，本发明的方法可改进伤口愈合和/或防止感染。
[0122] 本发明的组合物可局部施用于受试者皮肤的任何部分。然而，在一些实施方案中， 受试者的脸用本文描述的方法治疗。此外，在一些实施方案中，受试者的躯干用本文描述的 方法治疗。在某些实施方案中，将本发明的组合物施用于存在于受试者的伤口。
[0123] 根据一些实施方案，可提供提高从含有二醇二氮烯:纖改性的大分子的疏水组合物 释放一氧化氮的方法。所述方法可包括形成混合物;和将所述混合物施用于受试者的皮肤。 混合物可包含至少一种亲水组合物和至少一种包含二醇二氮烯纖改性的大分子的疏水组 合物。在一些实施方案中，亲水组合物的pH可为约4-约6。形成步骤或混合步骤可在受试者 的皮肤上进行或可在将混合物施用于受试者的皮肤之前进行。
[0124] 经过相同的时间段，与在不存在本发明的方法下释放的NO的量相比，本发明的方 法可提高释放的一氧化氮的量达至少约10%，20%，30%，40%，50%，60%，70%，80%，90，100%， 150%，200%，300%，400%或更多，或其中的任何范围和/或单个值。经过相同的时间段，比起在 不存在本发明的方法下释放的NO的量，本发明的方法可提供NO释放提高达约1.5-约100倍， 或其中的任何范围和/或单个值，例如，但不限于约2-约10倍或约5-约50倍。
[0125] 在其它实施方案中，可提供一种提供局部抗菌组合物的方法。所述方法可包括形 成混合物；和将所述混合物施用于受试者的皮肤。混合物可包含至少一种亲水组合物和至 少一种疏水组合物，所述疏水组合物包含二醇二氮烯參I改性的大分子。在一些实施方案中， 亲水组合物的PH可为约4-约6。形成步骤或混合步骤可在受试者的皮肤上进行或可在将混 合物施用于受试者的皮肤之前进行。与在不存在本发明的方法下病原体的生长相比，本发 明的方法可抑制病原体的生长，例如达约5%，10%，20%，30%，40%，50%，60%，70%，80%，90， 100%，150%，200%或更多。
[0126] 还可提供提高伤口治愈率的方法。所述方法可包括将本发明的混合物局部施用于 伤口。混合物可包含至少一种亲水组合物和至少一种疏水组合物，所述疏水组合物包含二 醇二氮烯纖改性的大分子。在一些实施方案中，亲水组合物的PH可为约4-约6。混合物可为 抗菌的和/或可设置为将伤口缓冲至PH低于7。在一些实施方案中，与在不存在本发明的方 法下由类似的伤口的治愈率相比，本发明的方法可提高伤口治愈率达至少约5%，10%，20%， 30%，40%，50%，60%，70%，80%，90，100%，150%，200%或更多。在一些实施方案中，本发明的方法 可提高组织氧可用性和/或降低细菌终产物的组织毒性。
[0127] 本发明的组合物、试剂盒和/或方法可最小化和/或预防至少一种API(例如但不限 于释放NO的API)的降解。在一些实施方案中，本发明的组合物可设置为提供NO释放至多种 具有不同水分含量的治疗部位的可重复的速率和/或模式。在某些实施方案中，本发明的组 合物可设置为提供独立于存在于治疗部位的水分含量的NO释放速率。
[0128] 在以下非限制性实施例中更详细地解释本发明。 实施例
[0129] 实施例1 实施比较从与不同的亲水相组合的软膏释放一氧化氮的体外测试。将软膏与湿氮气 (即，净的）、水以1:2比率(软膏:水)组合，或与水凝胶以1:1比率组合。软膏和水凝胶的制剂 在表1中提供。
[0130]表1:软膏和水凝胶制剂。
[0131] 一氧化氮释放的体外测试显示在加入亲水相之前和之后有显著的差异，甚至在具 有充分水分含量的载气中。亲水相促进从疏水相(尤其是在较低Nitricil TM NVNl载荷下） 一氧化氮释放的能力显著高于单独的水。虽然不希望束缚于任何具体的理论，但是结果表 明使用润肤和增溶能力的赋形剂，提供质子接近疏水相中的药物物质的效率显著提高(表 2) 〇
[0132] 表2:从与不同的亲水相组合的1% Nitricil ? NVNl软膏的一氧化氮释放。
[0133]结果证明水凝胶在促进从具有较低NitriciI ? NVNl载荷的疏水软膏的一氧化氮 释放中工作良好。然而，当药物产品的效力提高时，释放动力学不跟随载荷容量(即，一氧化 氮释放不随着药物物质的百分数成比例地提高）。由于超过10%重量的较高药物物质载荷， 缓慢释放变得更显著。虽然不希望束缚于任何具体的理论，但是相信对于较高载荷药物产 品，最终制剂的pH太尚而不能有效释放。
[0134] 实施例2 本发明人发现，为了保持从不同载荷的药物产品受控释放一氧化氮，需要保持关键试 剂、质子的浓度。这意味着跨过不同的效力，包含亲水相(例如，水凝胶)和疏水相(例如，软 膏）的组合物的最终PH需要保持在指定的范围内。为了实现这一点，可设计在最高靶药物产 品效力下，组合物的亲水相比疏水相具有更大的缓冲能力。
[0135] 为了具有大的缓冲能力和最终制剂在pH 5-8的期望的范围，对于水凝胶，选择一 碱价磷酸作为缓冲液。对于[Η2ΡΟ4Γ离子，pKa为7 · 2。根据Henderson-Hasselbalch方程(方 程1)，在同等浓度的酸和碱下溶液的PH将在作为药物产品的最优中性条件(pH=7.2)，给予 它大的缓冲能力。
[0136] 方程I Henderson-Hasselbalch方程。
[0137] 制备具有400 mmol的一碱价磷酸（即，磷酸盐缓冲的水凝胶)并且pH值为4.8(+/_ 〇. 1)的水凝胶(表3)。随后将水凝胶与具有0.9%重量的一氧化氮载荷的Nitricil? NVM软 膏混合，以测定一氧化氮释放结果。表3提供软膏和水凝胶的制剂。
[0138] 表3:软膏和水凝胶制剂。
[0139] 当磷酸盐缓冲的水凝胶与软膏混合时，pH提高，但是与在实施例1中描述的不具有 磷酸盐的水凝胶制剂相比，pH提高至少得多的程度。表4提供在三种不同的NO载荷下，合并 的软膏/磷酸盐缓冲的水凝胶的体外一氧化氮释放结果。将合并的软膏/磷酸盐缓冲的水凝 胶与软膏的两种单独组合相比较，其中两种非缓冲的水凝胶制剂之一在不同的pH值下。非 缓冲的水凝胶制剂具有在表1中描述的组成，并且PH分别为4和6。结果清楚地显示磷酸盐缓 冲的水凝胶可稳定最终制剂PH在期望的范围，并且跨越所有三种载荷，促进高水平的一氧 化氮释放。
[0140] 表4:对于NitriciI ? NVM软膏混合物，体外一氧化氮释放和pH数据。
[0141] 实施例3 实施在不存在和具有不同的水分来源（即，亲水相)下，从具有1.8% NO载荷的Nitricil TM NVM软膏的一氧化氮释放的比较。软膏制剂在表3中提供。将两种不同的水分来源与软 膏合并。第一来源为PH 6的中性水凝胶并且具有如在实施例1，表1中描述的制剂，而第二来 源为具有如在实施例2,表3中描述的制剂的磷酸盐缓冲的水凝胶。图1显示从单独的软膏的 NO释放和从软膏/亲水相混合物的NO释放，结果示于表5。
[0142] 表5:对于含有Nitricil? NVM软膏（1.8% w/w NO)的不同制剂，NO释放参数。
[0143] 实施例4 具有不同NO载荷的三种Nitricil? NVN4软膏制剂各自以1:1比率与磷酸盐缓冲的水 凝胶合并，以形成混合物。软膏和水凝胶的制剂在表6中提供。
[0144] 表6:软膏和水凝胶制剂。
[0145] 媒介物软膏不含药物产品Nitricil? NVN4,但是含有Nitricil? NVM软膏制剂 中的所有其它组分。莫匹罗星用作阳性对照。随后在猪动物模型中测试这些制剂（即，测试 制品）针对MRSA金黄色葱蘇球磨的效力。在治疗施用后，在第4天和第7天进行ATCC BAA 1686细菌计数。
[0146] 将三只指定的不含病原体的猪(Looper农场，NC)麻醉，用微型角膜刀在脊柱旁和 胸廓区域制备51个矩形伤口（10 mmX7 mmXO.5 mm深）。伤口用15 mm无伤口的皮肤间隔， 并且单个清创。8个伤口随机分配给每一个治疗组(6)和基线。将由TSA板制备的金黄色葱蔡 球磨菌株BAA-1686的新鲜培养物在37 °C下生长过夜。将来自过夜培养物的金黄色葱蘇球磨 再悬浮于4.51111盐水中，直至得到相应于10 1()0?1]/1111的溶液。实施系列稀释，以实现产生 IO6 CFU/ml的初始接种物浓度。通过用无菌刮刀擦洗10秒，在每一个伤口中接种25 μL接种 物悬浮液。所有伤口用聚氨酯膜敷料(TEGADERM TM )单个覆盖。在治疗前，允许细菌生物膜形 成48小时。治疗组用约200 mg测试制品治疗，并且用无菌刮刀铺展开，以覆盖伤口和周围无 伤口的区域，并用膜敷料覆盖。在评价时，对于每个治疗组，将4个伤口在I ml中和溶液中恢 复，并且系列稀释。在计数存活的菌落之前，随后将系列稀释液在Oxaci 11 in Resistance Screening Agar (ORSA)上平板接种，并且在37°C下孵育24小时。在治疗后MRSA BAA-1686 细菌计数在图2和3中提供。
[0147] 虽然不希望束缚于任何具体的理论，数据表明Nitricil TM大分子针对生物膜-嵌 入的金黄色葱蔡球磨呈现稳健的抗菌活性。与传统的抗生素不同，Nitricil TM NVM有效降 低生物膜群落。Nitricil TM大分子可为用于治疗慢性金黄色#蔡球磨感染的有效的疗法， 并且使用部分厚度伤口模型，可为有效的体内抗菌剂。
[0148] 实施例5 遵循表7和8制备软霄制剂，表7和8列举了相应的软霄制剂的每一种组分的重量百分 数。遵循表9制备缓冲的水凝胶制剂，表9列举了相应的缓冲的水凝胶制剂的每一种组分的 重量百分数和每一种缓冲的水凝胶制剂的pH。
[0149] 表7:实施例软膏制剂的组成。
[0151]表9:实例缓冲的水凝胶制剂的组成。
[0152] 实施例6 对于每一种微生物，将三只指定的不含病原体的猪(Looper农场，NC)麻醉，用微型角膜 刀在脊柱旁和胸廓区域制备51个矩形伤口（10 mmX7 mmXO.5 mm深）。伤口用15 mm无伤口 的皮肤间隔，并且单个清创。8个伤口随机分配给每一个治疗组和基线。在产生烧伤/伤口 后，通过在每一个伤口中用特氟龙刮刀擦（1〇 6 CFU/ml)接种物约30秒，25μ1游氏不动/f磨 Aat/ffia/j/jii )(AB 09-001*)、耐甲氧西林的金黄色葱蔡球磨(MRSA USA300)和冷色蘇丝摩母rCa/3c/ic/a a办icafid (CA 09-024*)用于接种每一个伤口。所有伤 口用聚氨酯膜敷料(TEGADERMTM )单个覆盖。在治疗前，允许细菌生物膜形成48小时。
[0153]治疗组用约200 mg测试制品治疗，并且用无菌刮刀铺展开，以覆盖伤口和周围无 伤口的区域，并用膜敷料覆盖。测试制品包括具有在实施例4的表6中描述的不同NO载荷的 三种Nitricil? NVN4软膏制剂，它们各自与在实施例4的表6中描述的磷酸盐缓冲的水凝 胶组合。媒介物软膏不含药物产品Nitricil? NVN4,但是含有Nitricil TM NVN4软膏制剂 中的所有其它组分。磺胺嘧啶银用作阳性对照。
[0154] 在评价时，对于每个治疗组，将4个伤口在I ml中和溶液中恢复，并且系列稀释。在 计数存活的菌落之前，随后将系列稀释液在选择性培养基上平板接种，并且在37°C下孵育 24小时。将菌落计数，计算每ml的菌落形成单位(CFU/ml)、Log CFU/ml、平均Log CFU/ml和 标准偏差。变量的单向分析(ANOVA)用于统计分析。p值小于0.05认为是显著的。图4显示游 氏不动/f磨的结果，图5显示金黄色葱蘇球磨的结果，图6显示冷色/皮丝摩母的结果。
[0155] 虽然不希望束缚于任何具体的理论，数据表明Nitricil TM大分子为针对生物膜-嵌入的游氏不动/f磨、金黄色葱蘇球磨和冷色娱丝摩母有效的抗菌剂。因此，Nitricil TM大 分子可为用于治疗慢性游氏不动/f磨、金黄色#蔡球磨和冷色娱遂摩母感染的有效的疗 法，并且使用部分厚度伤口模型，可为有效的体内抗菌剂。
[0156] 实施例7 比较从三种不同的混合物一氧化氮的释放。混合物由在表10中提供的具有不同浓度的 Nitricil? NVN4的软膏制剂T0-007b和在实施例4的表6中提供的水凝胶制剂Phogel48形 成。软膏制剂具有3.2% Nitricil ? NVN4 (0.3% NO含量）、6.4% Nitricil ? NVM (0.9% NO含量)或12.8% Nitricil? NVM (1.8% NO含量），并且以1:1比率与水凝胶组合。
[0157] 表10:软膏制剂。
[0158] 对于不同的混合物，实时NO释放和累积NO在表11中提供。对于混合物，经时累积NO 释放在图7中提供，对于混合物，经时NO释放的实时浓度在图8中提供。
[0159] 表11:混合物NO释放性质。
[0160] 实施例8 比较一氧化氮自两种不同的软膏的释放。软膏制剂为TO-OO7b，如在表12中提供的，含 有 12.8% Nitricil ? NVN4 (1.8% NO含量）或2% Nitricil ? NVNl (0.3% NO含量）。对于 不同的软膏，实时NO释放和累积NO在表13中提供。对于混合物，经时累积NO释放在图9中提 供，对于混合物，经时NO释放的实时浓度在图10中提供。
[0161] 表12:软膏制剂。
[0162」表13:软霄NO释放性质。
【主权项】
1. 一种局部用药物组合物，所述组合物包含与亲水组合物和疏水组合物混合的释放一 氧化氮的活性药物成分，其中所述释放一氧化氮的活性药物成分包含具有二醇二氮締輸官 能团的释放一氧化氮的化合物。2. 权利要求1的局部用药物组合物，其中所述亲水组合物包含溶液、悬浮液、洗剂、凝 胶、乳膏或水凝胶。3. 权利要求1或2中任一项的局部用药物组合物，其中所述亲水组合物包含水凝胶。4. 权利要求1-3中任一项的局部用药物组合物，其中所述亲水组合物的pH为约3-约8。5. 权利要求1-4中任一项的局部用药物组合物，其中所述亲水组合物包含缓冲液，任选 憐酸盐缓冲液。6. 权利要求1-5中任一项的局部用药物组合物，其中所述亲水组合物包含聚合物，任选 纤维素或其药学上可接受的盐、壳聚糖、丙締酸聚合物或它们的任何组合。7. 权利要求1-6中任一项的局部用药物组合物，其中所述亲水组合物包含多元醇。8. 权利要求1-7中任一项的局部用药物组合物，其中所述局部用药物组合物为抗菌的。9. 权利要求1-8中任一项的局部用药物组合物，其中所述局部用药物组合物为在美容 上优雅的。10. 权利要求1-9中任一项的局部用药物组合物，其中所述局部用药物组合物自乳化。11. 权利要求1-10中任一项的局部用药物组合物，其中所述组合物的粘度为约5000 〇口-约100,000 〇口。12. 权利要求1-11中任一项的局部用药物组合物，其中所述疏水组合物包含释放一氧 化氮的活性药物成分。13. 权利要求1-12中任一项的局部用药物组合物，其中所述局部用药物组合物为连续 的。14. 权利要求1-13中任一项的局部用药物组合物，其中所述释放一氧化氮的化合物包 含释放NO的共缩合的二氧化娃颗粒。15. 权利要求1-14中任一项的局部用药物组合物，其中所述局部用药物组合物的抑为 约3-约9。16. -种组合物，所述组合包含： 活性药物成分； 疏水碱； 两亲化合物或乳化剂中的至少一种； 缓冲液； 聚合物； 多元醇;和 水， 其中所述组合物被缓冲至pH为约3-约9。17. 权利要求16的组合物，其中所述活性药物成分、疏水碱和两亲化合物或乳化剂中的 至少一种存在于与缓冲液、聚合物、多元醇和水混合的组合物中。18. 权利要求16或17中任一项的组合物，其中所述混合物通过混合形成。19. 权利要求16-18中任一项的组合物，其中所述活性药物成分包含释放一氧化氮的活 性药物成分。20. 权利要求19的组合物，其中所述释放一氧化氮的活性药物成分包含具有二醇二氮 締纖官能团的释放一氧化氮的化合物。21. 权利要求20的组合物，其中所述释放一氧化氮的化合物包含释放NO的共缩合的二 氧化娃颗粒。22. 权利要求16-21中任一项的组合物，其中所述组合物的pH为约4-约8。23. 权利要求16-22中任一项的组合物，其中所述组合物为在美容上优雅的和/或自乳 化。24. 权利要求16-23中任一项的组合物，其中所述组合物包含第一组合物和第二组合物 的混合物，并且其中所述第一组合物包含： 活性药物成分，其W第一组合物的约0.1%-约30%重量的浓度存在于第一组合物中； 疏水碱，其W第一组合物的约50%-约70%重量的浓度存在于第一组合物中； 两亲化合物，其W第一组合物的约2%-约10%重量的浓度存在于第一组合物中； 并且其中所述第二组合物包含： 缓冲液，其W第二组合物的约4%-约8%重量的浓度存在于第二组合物中； 聚合物，其W第二组合物的约2%-约5%重量的浓度存在于第二组合物中； 多元醇，其W第二组合物的约15%-约20%重量的浓度存在于第二组合物中；和 第二组合物的余量为水。25. 权利要求24的组合物，其中所述第一组合物和第二组合物^2:1、1:1、1:2、1:3或1: 4的比率存在于所述组合物中。26. 用于局部给药的组合物，所述组合物包含自乳化混合物。27. 权利要求26的组合物，其中所述组合物被缓冲至pH为约4-约9。28. 权利要求26或27中任一项的组合物，其中所述混合物包含疏水组分和亲水组分。29. 权利要求26-28中任一项的组合物，其中所述组合物包含活性药物成分。30. 权利要求26-29中任一项的组合物，其中所述活性药物成分W约0.01%-约10% w/w 的一氧化氮的量包含释放一氧化氮的活性药物成分。31. 权利要求26-30中任一项的组合物，其中所述组合物包含用于保持和/或稳定所述 组合物的抑的手段。32. 权利要求26-31中任一项的组合物，其中所述组合物W约0.01%-约10% w/w的一氧 化氮的量包含释放一氧化氮的活性药物成分，并且抑为约4-约9。33. 权利要求26-32中任一项的组合物，其中所述组合物为在美容上优雅的。34. 权利要求26-33中任一项的组合物，其中所述组合物为抗菌的。35. -种试剂盒，所述试剂盒包含： 包含亲水组合物的第一组合物;和 包含活性药物成分的第二组合物。36. 权利要求35的试剂盒，其中所述亲水组合物的pH为约4-约8。37. 权利要求35或36中任一项的试剂盒，其中所述亲水组合物为水凝胶，任选缓冲的水 凝胶。38. 权利要求35-37中任一项的试剂盒，其中所述亲水组合物包含： 憐酸盐缓冲液； 纤维素或其药学上可接受的盐； 多元醇;和 水。39. 权利要求35-38中任一项的试剂盒，其中所述第二组合物进一步包含： 疏水碱;和 两亲化合物。40. 权利要求35-39中任一项的试剂盒，其中所述第一组合物和第二组合物单独储存。41. 一种在疏水组合物中稳定储存二醇二氮締纖改性的大分子和由所述二醇二氮締纖 改性的大分子释放一氧化氮的方法，所述方法包括： 使所述疏水组合物与亲水组合物混合，W形成混合物，其中所述疏水组合物包含二醇 二氮締鑛改性的大分子，并且所述亲水组合物的pH为约4-约8。42. -种提供局部抗菌组合物的方法，所述方法包括： 使疏水组合物与pH为约4-约8的亲水组合物混合，W形成混合物。43. 权利要求41或42中任一项的方法，其中所述混合步骤在受试者的皮肤上进行。44. 权利要求41或42中任一项的方法，其中在将合并的组合物施用于受试者的皮肤之 前，进行所述混合步骤。45. 权利要求41或42中任一项的方法，其中所述亲水组合物包含水凝胶，任选缓冲的水 凝胶。46. -种提高受试者伤口治愈率的方法，所述方法包括： 局部施用pH为约5-约8的混合物。47. 权利要求46的方法，其中所述混合物为抗菌的。48. 权利要求46或47中任一项的方法，其中所述混合物将伤口缓冲至pH低于7。
【文档编号】A61K47/48GK105979969SQ201480055370
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2014年8月8日
【发明人】R.多西, J.包
【申请人】诺万公司