一种防治猪链球菌病的中草药组合物及其应用
【专利摘要】本发明属于兽药领域，具体的涉及一种中草药组合物作为兽药在防治猪链球菌病中的应用，由牛至、荔枝草、青藤、夏至草、斑种草按质量比为1?4:1?4:1?4:1?4:1?4制备而成。本发明提出一种中草药复方作为兽药防治猪链球菌病的应用，能有效提高动物免疫球蛋白水平，降低发病率，抗炎，促进动物的生长发育，全面增强动物免疫功能和防御疾病的能力，克服了疫苗、化药、抗生素的毒副作用与食品安全隐患，研发前景乐观，临床应用广阔。
【专利说明】
-种防治猪链球菌病的中草药组合物及其应用
技术领域
[0001] 本发明属于兽药领域，具体的设及一种中草药组合物作为兽药在防治猪链球菌病 中的应用。
【背景技术】
[0002] 目前我国养猪生产面临着日趋严峻的疫病威胁，发病情况复杂多变，生产风险与 日俱增，控制成本显著提高，经济损失无法估量。猪链球菌病是由多种致病性猪链球菌感染 引起的一种人畜共患病。猪链球菌是猪的一种常见和重要病原体，也是人类动物源性脑膜 炎的常见病因，可引起脑膜炎、败血症、屯、内膜炎、关节炎和肺炎，主要表现为发热和严重的 毒血症状。该病首先在猪群中暴发流行，随后屠宰者及与处理病、死猪有关者等发病，特别 是现代集约型养猪更易流行该病。发病时间相对集中在6~8月的高溫季节。人感染猪链球 菌的病例早在1968年荷兰和丹麦即有报道，随后瑞典、法国、英国、比利时、意大利、德国、新 西兰、加拿大及我国等也有病例报道。目前全球已报告有450余例猪链球菌感染病例，主要 在北欧和南亚一些养殖和食用猪肉的国家和地区。1998年，我国江苏南通地区发生的猪链 球菌疫情，25例患病，其中16例表现为中毒性休克综合征（13例死亡），9例表现为脑膜炎（1 例死亡）。据卫生部通报，2005年6月~8月，四川省累计报告人感染猪链球菌病例204例，其 中死亡38例，治愈出院166例。病例分布在资阳、内江、成都等12个市，37个县，131个乡镇， 195个村。其实在广大的农村，每年都有散发病例，由于诊断水平不够、或鉴定不出病原菌， 治疗不及时死亡的病例时有发生。
[0003] 猪链球菌是一种革兰阳性球菌，呈链状排列，无鞭毛，不运动，不形成芽胞，但有芙 膜。为兼性厌氧菌，但在无氧时溶血明显，培养最适溫度为37°C。菌落细小，直径1~2mm，透 明、发亮、光滑、圆形、边缘整齐，在液体培养中呈链状。到目前为止，共有35个血清型（1~ 34,1/2型），最常见的致病血清型为2型。猪链球菌常污染环境，可在粪、灰尘及水中存活较 长时间。该菌在60°C水中可存活10分钟，50°C为2小时。在4°C的动物尸体中可存活6周;0°C 时灰尘中的细菌可存活1个月，粪中则为3个月；25°C时在灰尘和粪中则只能存活24小时及8 天。苍蛹携带猪链球菌2型至少长达5天，污染食物可长达4天。猪链球菌的主要毒力因子包 括芙膜多糖、溶菌酶释放蛋白、细胞外因子W及溶血素等。其中溶菌酶释放蛋白及细胞外蛋 白因子是猪链球菌2型的两种重要毒力因子。
[0004] 猪是主要传染源，尤其是病猪和带菌猪是本病的主要传染源，其次是羊、马、鹿、 鸟、家禽(如鸭、鸡)等。猪体内猪链球菌的带菌率约为20-40%，在正常情况下不引起疾病。 猪链球菌的自然感染部位是猪的上呼吸道(特别是扁桃体和鼻腔）、生殖道、消化道。主要是 通过开放性伤口传播。
[0005] 猪链球菌病的发生与猪的免疫状态、环境因素、致病菌株的毒力有关。引起脑膜 炎、败血症W及关节炎综合征的猪链球菌则需要增加细菌侵袭力的毒力因子，包括芙膜多 糖(CPS)、溶菌酶释放蛋白（MRP)、细胞外因子化F)W及溶血素(SLY)。猪链球菌2型无芙膜突 变株和不明血清型(NT)猪链球菌表现出很强的黏附力和侵袭力。研究表明，猪链球菌2型能 诱导人单核细胞产生肿瘤坏死因子a(TNFa)、^-l、化-6、化-8^及单核细胞趋化蛋白1 (MCP-1)，运些细胞因子能引起全身性炎性反应。猪链球菌2型的芙膜脂多糖与细菌的粘附 和侵袭有关，具有芙膜的菌株能抵抗吞隧，因此芙膜脂多糖在致病机理中起重要作用，导致 机体对猪链球菌吞隧作用下降。
[0006] 当细菌从扁桃体进入血液，被单核细胞吞隧后，通过脉络膜丛到脑脊液内，激发单 核细胞或巨隧细胞产生细胞因子和毒素，从而导致血液和脑脊液内的炎性细胞浸润。猪链 球菌性肺炎的发病机理可能由于细菌通过呼吸道，大量定居繁殖，产生毒素和各种蛋白酶、 溶血毒素等引起细胞溶解，导致上皮细胞屏障的破坏，引起肺部感染，同时有利于病原体侵 入血流和在全身播散。此外，细胞因子、毒素作用引起细菌性脑膜炎患者血脑屏障(BBB)通 透性增加，导致脑水肿发生，使烦内压力增高和脑血流阻断。猪链球菌从伤口直接感染后， 细菌在机体内大量繁殖，产生毒素引起血源性感染，导致败血症及多脏器功能衰竭，此种情 况与普通细菌所致败血症类似。
[0007] 病理变化主要累及全身多个器官。败血症时全身脏器往往会出现充血或出血现 象。部分表现为脑膜炎的病猪可见脑脊膜、淋己结及肺发生充血。脑膜炎最典型的组织病理 学特征是中性粒细胞的弥漫性浸润，脑脊膜和脉络丛的纤维蛋白渗出、水肿和炎性细胞浸 润。肺脏常呈实质性病变，包括纤维素出血性和间质纤维素性肺炎、纤维素性或化脈性支气 管肺炎，肺泡出血，小叶间肺气肿W及纤维素化脈性胸膜炎。屯、脏损害包括纤维蛋白性化脈 性屯、包炎、机械性屯、瓣膜屯、内膜炎、出血性屯、肌炎。组织病理学变化为屯、肌发生点状或片状 弥漫性出血或坏死、纤维蛋白化脈性液化。屯、包液中常含有嗜酸性粒细胞、少量中性粒细 胞、单核细胞及大量的纤维蛋白。
[0008] 猪链球菌对大多数的抗菌药物敏感，但不同地区的菌株敏感性有差异。目前抗菌 效果好的药物主要有青霉素 G、氨节青霉素、氯霉素、第Ξ、四代头抱菌素如头抱嚷目亏、头抱 曲松钢、头抱他定及新一代氣哇诺酬类抗生素。
[0009] 应用中药调节机体免疫功能和防治传染病在我国已有数千年的历史，并W确切的 疗效和较低的毒副残留及抗药性而广受欢迎。我国拥有丰富的中草药资源，应加速对其的 研究与开发，打造具有中国特色的品牌。对解决长期困扰畜牧业发展的抗生素残留问题，发 展绿色畜牧业，满足人们对食品安全的需求，增强我国畜产品在国际市场的竞争力，具有重 要的经济意义和社会效益。
[0010] 牛至又名止频草、±香蕾、小叶薄荷，为唇形科牛至属多年生草本植物。主要分布 于地中海地区至中亚、北非、北美及我国大部分地区，生于海拔500-3600m的山坡、路旁、灌 丛、草地、林下。牛至味辛、性凉、无毒，全草可入药，具有清热解表、理气化湿倒尿消肿之功 效。临床用于预防流感治疗黄痘、中暑、发热、呕吐、急性胃肠炎、腹痛等症，其散寒解表功用 胜于薄荷。美国农业部的"植物化学和植物物种学"背景资料表明，牛至含有30多种抗菌化 合物，是一种潜在的天然抗生素和生长促进剂。
[0011] 慕枝草是一年生或二年生直立草本植物，高15-90cm，多分枝，主根肥厚，向下直 伸，有多数须根。具有清热、解毒、凉血和利尿作用。用于咽喉肿痛、支气管炎、肾炎水肿、痴 月中;外治乳腺炎、持疮肿痛、出血。慕枝草入药用选取冬季或是春季嫩草，药效更好。
[0012] 青藤，秋末冬初采割，扎把或切长段，晒干。具有桂风湿，通经络，利小便之功效。用 于风湿搏痛，关节肿胀，麻搏痊痒。
[0013] 夏至草，现代药理学研究证实其在改善血液和淋己微循环障碍，屯、肌保护、抗炎、 抗氧化等方面具有确切的药理作用。研究发现，从夏至草中分离得到的半日花烧型二祗类 化合物如夏至草素具有多种生物活性，如松弛血管，屯、脏保护和解疫镇痛等。运些生物活性 与夏至草传统的活血化疲、消炎功效相一致。
[0014] 斑种草，药用部位为斑种草的全草。全草(始膜草）：微苦，凉。解毒消肿，利湿止痒。 用于持疮，肛口肿痛，湿疹。
[0015] 然而，本发明通过大量实验发现牛至、慕枝草、青藤、夏至草、斑种草联用具有防治 猪链球菌病和提高机体免疫功能的作用，现有技术中没有公开过该中药复方具有防治猪链 球菌病和提高机体免疫功能的作用。
【发明内容】
[0016] 为解决上述现有技术存在的问题，本发明提出一种中草药复方作为兽药防治猪链 球菌病。能有效提高动物免疫球蛋白水平，降低发病率，抗炎，促进动物的生长发育，全面增 强动物免疫功能和防御疾病的能力，克服了疫苗、化药、抗生素的毒副作用与食品安全隐 患，研发前景乐观，临床应用广阔。
[0017] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案是:一种防治猪链球菌病的中草药组合 物，由牛至、慕枝草、青藤、夏至草、斑种草按质量比为1-4:1-4:1-4:1-4:1-4制备而成。
[001引进一步的：由牛至、慕枝草、青藤、夏至草、斑种草按质量比为2:2:2:1:1制备而成。
[0019] 本发明还提供一种防治猪链球菌病的中草药组合物在防治猪链球菌病中应用。
[0020] 进一步的，所述中草药组合物与基础日粮重量比为1:100。
[0021] 本发明的有益技术效果是:本发明提出一种中草药复方作为兽药防治猪链球菌病 的应用，能有效提高动物免疫球蛋白水平，降低发病率，抗炎，促进动物的生长发育，全面增 强动物免疫功能和防御疾病的能力，克服了疫苗、化药、抗生素的毒副作用与食品安全隐 患，研发前景乐观，临床应用广阔。
【具体实施方式】
[0022] 下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述， 显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的 实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都 属于本发明保护的范围。
[0023] 实施例1
[0024] -种防治猪链球菌病的中草药组合物及其应用
[0025] 基础饲粮由南京禾嘉吉升农牧发展有限公司提供，基础饲粮组成及营养水平见表 1。同仁堂药店购得的中药牛至、慕枝草、青藤、夏至草、斑种草按质量比2:2:2:1:1制成散剂 后，再按质量比1:100与基础饲粮混合均匀，进行仔猪体内试验。
[00%]表1基础饲粮组成及营养水平(风干基础）
[0027]
[0028] 40头健康普通级"杜X大X长"Ξ元杂交断奶仔猪，60日龄，购自南京农业大学江 浦试验猪场。适应环境后随机分为4组，每组10头，公母各半。空白组和链球菌组饲喂不添加 中药复方的基础日粮、预防组和药物对照组饲喂添加中药复方1%的基础日粮1周后，饲喂 不添加中药复方的基础日粮。于试验的第二周第Id链球菌组和预防组Wl07CFU/mL的链球 菌SS2-1株攻毒，每头耳缘静脉注射l.OmL 1次，然后隔离饲养1周。试验总周期2周。
[0029] 试验最后Id仔猪清晨检测体溫。结果发现，链球菌组的体溫为41.3°C，预防组的体 溫为39.0°C，两者差异显著，空白组的体溫为38.2°C，药物对照组的体溫为38.6°C。该中药 方剂能降低体溫，运意味着动物精神状态良好，饮食欲正常，炎症症状改善，有利于促进家 畜生长发育。
[0030] 试验最后Id仔猪清晨空腹前腔静脉采血，全自动生化分析仪检测机体中IgG、IgM、 白蛋白（ALB)、球蛋白（GL0)和尿素(UREA)的水平。结果发现，链球菌组的IgG水平为2.03mg/ mL，预防组的IgG水平为4.16mg/mL，两者差异极显著，空白组的IgG水平为3.82mg/mL，药物 对照组的IgG水平为4.50mg/mL。链球菌组的IgM水平为1.36mg/mL，预防组的IgM水平为 2.1 Omg/mL，两者差异极显著，空白组的I gM水平为2.01 mg/mL，药物对照组的I gM水平为 1.83mg/mL。实验表明，该中药方剂能大幅上调仔猪血清中IgG的水平，从而提高防病抗病能 力。同时还能显著提高IgM水平，影响机体免疫反应，产生杀菌抑菌作用，加快初次免疫应答 反应速度。
[0031] 链球菌组的血清ALB含量为30.66g/L，预防组的ALB含量为44.17g/L，两者差异极 显著，空白组的ALB含量为42.53g/L，药物对照组的ALB含量为49.25g/L。链球菌组的血清 GL0含量为26.27g/L，预防组的化0含量为34.41g/L，两者差异极显著，空白组的化0含量为 29.92g/L，药物对照组的化ο含量为35.13g/L。白蛋白作为一种胆存蛋白质，可随时修补组 织和提供能量。该中药方剂能显著上调ALB水平，增加机体肝脏代谢功能，减少肝肾菌毒损 伤。同时还能显著提高GLO水平，增强机体免疫功能，促进健康。
[0032] 链球菌组的血清尿素水平为5.91mmol/L，预防组的尿素水平为4.46mmol/L，两者 差异极显著，空白组的尿素水平为3.70mmol/L，药物对照组的尿素水平为3.08mmol/L。该中 药方剂能降低机体的尿素水平，运意味着蛋白质沉积增加，氨基酸平衡理想加快了新陈代 谢的速度，促进生长发育。
[0033] 试验最后Id仔猪清晨空腹前腔静脉采血，血液分析仪测定机体白细胞(WBC)、红细 胞(RBC)和血红蛋白化GB)含量。结果发现，链球菌组的WBC数目为9.0 10 Vl，预防组的WBC 数目为10.2 10^^两者差异极显著，空白组的胖8(：数目为8.7 10^^药物对照组的胖8(：数目 为9.6 lO^L。链球菌组的RBC含量为3.92 l〇u/L，预防组的RBC含量为4.56 l〇u/L，两者差 异极显著，空白组的RBC含量为4.63 1〇i2/L，药物对照组的RBC含量为4.81 l〇u/L。链球菌 组的血清HGB含量为103g/L，预防组的HGB含量为122g/L，两者差异极显著，空白组的HGB含 量为127g/L，药物对照组的服B含量为135g/L。实验表明，该中药方剂能显著上调机体WBC数 目，增强机体杀菌防御功能，抑制链球菌在体内的繁殖与移动。该中药方剂还能显著上调红 细胞数量，提高血红蛋白含量，改善机体贫血状态，增强动物体质。
[0034] 实施例2
[0035] -种中草药复方治疗猪链球菌病的应用
[0036] 同仁堂药店购得的中药牛至、慕枝草、青藤、夏至草、斑种草按质量比2:2:2:1:1制 成散剂后，加10倍蒸馈水于圆底烧瓶中，浸泡化后加热回流化，趁热用纱布过滤。药渣再分 另IJ加8倍水和6倍水加热回流比。合并3次滤液，减压浓缩成生药浓度为Ig/mL的药液，进行仔 猪体内试验。
[0037] 40头健康普通级"杜X大X长"Ξ元杂交断奶仔猪，60日龄，购自南京农业大学江 浦试验猪场。适应环境后随机分为4组，每组10头，公母各半。链球菌组和治疗组W107C即/ mL的链球菌SS2-1株攻毒，每头耳缘静脉注射l.OmL 1次，然后隔离饲养1周。于试验的第二 周第Id治疗组和药物对照组颈部肌肉注射该中药复方液每天1次，每次2.OmL，持续1周。空 白组和链球菌组不颈部肌肉注射该中药复方液。试验总周期2周。
[0038] 试验最后Id仔猪清晨空腹前腔静脉采血，外周血稀释涂T皿板计数W评估外周血 中的活菌数，酶联免疫吸附法检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果发现，链球菌组 的细菌量为6.2CFU/mL/( logiQ)，治疗组的细菌量为3.9CFU/mL/( logiQ)，两者差异极显著， 空白组和药物对照组的细菌量均未检测到。链球菌组的血清SOD含量为8.13ng/mL，治疗组 的SOD含量为10.04ng/mL，两者差异极显著，空白组的SOD含量为9.90ng/mL，药物对照组的 SOD含量为10.88ng/mL。实验表明，该中药方剂能显著降低机体内的细菌含量，抑制菌血症 的产生，具有明显的特异性抗链球菌作用。SOD水平可反应出机体细胞受自由基攻击的严重 程度和机体清除自由基的能力，该中药复方可W减少过氧化作用的发生，通过抑制肌肉的 脂质氧化，参与调控禍体品质和肉质风味。
[0039] 试验最后Id仔猪清晨空腹前腔静脉采血，酶联免疫吸附法检测血清中TNFa、IL-l β、化-6、比-8的水平。结果发现，链球菌组的TWa水平为43.41pg/mL，治疗组的TN化水平为 30.64pg/mL，两者差异极显著，空白组的TNFa水平为29.21pg/mL，药物对照组的TNFa水平为 26.89pg/mL。链球菌组的比-1β水平为66.5^)g/mL，治疗组的比-1β水平为46.77pg/mL，两者 差异极显著，空白组的IL-Ιβ水平为47.29pg/mL，药物对照组的IL-Ιβ水平为45.16pg/mL。 TNF-a在炎症和细胞调亡过程中起至关重要的作用，还可W引起发热、低血压、乳酸酸中毒 和不可逆性休克。比-1β参与机体的炎症反应和免疫防御、造血功能调节及包括几乎所有器 官系统在内的自体平衡机制。实验表明，该中药复方可W大幅下调动物的TNF-a和IL-Ιβ水 平，从而起到降低体溫，改善呼吸，保护内脏结构完整与功能正常，预防休克等功效。
[0040] 链球菌组的化-6水平为74.05pg/mL，治疗组的化-6水平为47.17pg/mL，两者差异 极显著，空白组的IL-6水平为41.38pg/mL，药物对照组的IL-6水平为50.2化g/mL。链球菌组 的化-8水平为101.76pg/mL，治疗组的化-8水平为63.64pg/mL，两者差异极显著，空白组的 IL-8水平为54.08pg/mL，药物对照组的IL-8水平为56.15pg/mL。IL-6不仅激活中性粒细胞， 还能延迟吞隧细胞对衰老和丧失功能的中性粒细胞的吞隧，从而加剧了炎症介质的产生。 比-8能与感染过程中多形核中性粒细胞(polymo;rphonuclear leucoc}fte，PMN)表面特异性 受体结合，导致细胞变形反应、脱颗粒反应、呼吸爆发，释放溶酶体和超氧阴离子，从而促进 炎症反应。实验表明，该中药复方可W大幅下调动物的IL-6水平，从而改善机体微循环功能 素乱，毛细血管破裂渗漏和组织损伤。该中药复方可W大幅下调动物的IL-8水平，从而降低 机体菌血症导致的SIRS和MODS综合症，最终降低病死率。
[0041] 试验最后Id仔猪清晨空腹前腔静脉采血，酶联免疫吸附法检测血清中IL-4和IL- 10的水平。结果发现，链球菌组的化-4含量为81.39pg/mL，治疗组的IL-4含量为118.07pg/ mL，两者差异极显著，空白组的IL-4含量为78.1化g/mL，药物对照组的IL-4含量为SO.Olpg/ mL。链球菌组的血清比-10含量为125.20pg/mL，治疗组的比-10含量为162.34pg/mL，两者差 异极显著谊白组的比-10含量为130.91pg/mL，药物对照组的化-10含量为122.38pg/mL。体 内、体外均证实比-4可W抑制化-1、化-6和TNF分泌，并促进化-Ira产生。化-10是一种抗炎 性因子，发挥下调炎症反应，括抗炎性介质的作用。实验表明，该中药方剂能显著上调机体 血清中IL-4和IL-10水平，证明该中药复方具有明显的抗炎作用，阻抑炎症通路，下调炎症 因子，有效治疗链球菌引起的菌血症和败血症。
[0042] 实施例3
[0043] -种防治猪链球菌病的中草药组合物，其特征在于：由牛至、慕枝草、青藤、夏至 草、斑种草按质量比为1:4:1:4:1制备而成。
[0044] 中草药组合物与基础日粮重量比为1:100。
[0045] 实施例4
[0046] -种防治猪链球菌病的中草药组合物，其特征在于：由牛至、慕枝草、青藤、夏至 草、斑种草按质量比为4:1:4:1:4制备而成。
[0047] 中草药组合物与基础日粮重量比为1:100。
[004引本技术领域技术人员可W理解，除非另外定义，运里使用的所有术语(包括技术术 语和科学术语)具有与本发明所属领域中的普通技术人员的一般理解相同的意义。还应该 理解的是，诸如通用字典中定义的那些术语应该被理解为具有与现有技术的上下文中的意 义一致的意义，并且除非像运里一样定义，不会用理想化或过于正式的含义来解释。
[0049]最后所应说明的是：W上实施例仅用W说明而非限制本发明的技术方案，尽管参 照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应该理解:依然可W对本 发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换，其均 应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
【主权项】
1. 一种防治猪链球菌病的中草药组合物，其特征在于：由牛至、荔枝草、青藤、夏至草、 斑种草按质量比为1-4:1-4:1-4:1-4:1-4制备而成。2. 根据权利要求1所述防治猪链球菌病的中草药组合物，其特征在于：由牛至、荔枝草、 青藤、夏至草、斑种草按质量比为2:2:2:1:1制备而成。3. 根据权利要求1或2所述防治猪链球菌病的中草药组合物在防治猪链球菌病中应用。4. 根据权利要求3所述防治猪链球菌病的中草药组合物在防治猪链球菌病中应用，其 特征在于，所述中草药组合物与基础日粮重量比为1:100。
【文档编号】A61P37/04GK105998234SQ201610425146
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年6月15日
【发明人】胡屹屹, 茅爱华, 何孔旺, 温立斌, 倪艳秀, 祝昊丹, 周俊明
【申请人】江苏省农业科学院