一种仿细胞外基质滴眼液及其制备方法
【专利摘要】本发明属于医药技术领域，具体涉及一种仿细胞外基质滴眼液及其制备方法，具体的为，所述滴眼液其包括以下重量份组分：Lifitegrast 1?20份、硫酸类肝素0.1?5份、玻璃酸钠1?10份、生长因子0.01?0.1份、胶原蛋白0.1?1份和水200?500份。一旦角膜受到损伤，本发明制备的仿细胞外基质滴眼液能通过调节细胞外基质生物功能，修复角膜细胞通信通道，达到调节修复角膜的生理功能。
【专利说明】
-种仿细胞外基质滴眼液及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体设及一种仿细胞外基质滴眼液及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 细胞外基质（糾化日。日11111日1'111日付;[义(3,6〔1)是由动物细胞合成并分泌到胞外、分 布在细胞表面或细胞之间的大分子，主要是一些多糖和蛋白，或蛋白聚糖。运些物质构成复 杂的网架结构，支持并连接组织结构、调节组织的发生和细胞的生理活动。细胞外基质是动 物组织的一部分，不属于任何细胞。它决定结缔组织的特性，为细胞的生存及活动提供适宜 的场所，并通过信号转导系统影响细胞的形状、代谢、功能、迁移、增殖和分化。胞外基质不 仅静态的发挥支持、连接、保水、保护等物理作用，而且动态的对细胞产生全方位影响，例 如，为细胞提供支持和固定、提供组织间的分离方法、调节细胞间的沟通。此外细胞外间质 还吸收了多种细胞生长因子和蛋白酶。当生理条件变化时，激活蛋白酶而释放运些细胞因 子，而无需从头合成运些因子，从而迅速激活细胞功能。
[0003] 硫酸类肝素广泛存在于细胞膜、胞外基质和某些细胞器中，它们能够与各种细胞 因子相结合，调节它们在胞外基质中的产生和维持过程，控制它们的分布和寿命，如与趋化 因子IL-8相互作用将促进其活性;硫酸肝素蛋白多糖对典型的成纤维细胞生长因子信号是 一种有效的辅因子是目前公认的结论。肝素在1985年被发现其可W增强成纤维细胞生长因 子1的生物学活性。并在1991年首次证明它可直接提升成纤维细胞生长因子受体结合力和 活性。此外，硫酸类肝素还可W和胞外基质中的多种蛋白质相结合，控制它们的分布、转移 和信息传递，诱导修复细胞外基质通道。
[0004] 细胞生长因子是指具有促进细胞增殖分裂作用的细胞因子。细胞生长因子通常W 一定含量维持角膜组织内环境稳态。当角膜组织受损后，其分泌量发生变化，从而引起对角 膜层细胞增殖、分化、移行的促进或抑制作用。国内有报道认为当角膜损伤后局部生长因子 不能满足修复需要时给予适宜浓度的生长因子滴眼能通过刺激角膜上皮细胞及基质成纤 维细胞的增生，移动促进细胞外基质与胶原纤维增生使损伤加快修复。
[0005] 成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor，FGF)是目前已知的最大的生 长因子家族之一，对促进成纤维细胞的代谢和胶原蛋白的形成发挥着重要功能，能维持祖 细胞并介导祖细胞的生长、分化、存活和形态。成纤维细胞生长因子通过与特异的、高亲和 的细胞膜受体结合调节细胞生长和其他功能，W此重新激活细胞外基质信号通路介导代谢 功能、组织修复和再生。能促进与皮肤损伤有关细胞的迅速生长繁殖，并调节细胞间基质的 合成、分泌及分解;促进角膜上皮细胞的再生、修复，主要用来治疗角膜炎和各种角膜损伤。
[0006] 玻璃酸钢又名透明质酸钢(Sodium Hyalu;ronate,HA-化)是唯一不发生硫酸化的 氨基聚糖。透明质酸作为机体结缔组织细胞外基质成分之一，具有良好的生物相容性、无抗 原性、可吸收降解等特性，是一种理想的天然生物材料。玻璃酸钢广泛存在于人体内，在眼 玻璃体、房水、皮肤、关节滑液、厮带等处均有分布。玻璃酸钢高度亲水，可形成水膜覆盖于 眼表面上，与蛋白类分子结合，通过调节细胞外基质活性促进角膜上皮细胞的连接和伸展， 从而促进结膜创伤、角膜上皮细胞的修复，高浓度的玻璃酸钢效果更显著。另外玻璃酸钢对 眼具有保湿和润滑作用。
[0007]角膜是一种无血管的透明组织，由上皮层、基质层和内皮层组成。角膜损伤的诱因 有化学、机械、激光等，其病理机制除了直接损伤作用外，免疫系统的参与也起着非常重要 的作用，免疫炎性细胞和免疫分子相互作用，形成复杂的免疫炎症网络，介导角膜损伤的病 理变化。近年来由于角膜外伤的增多，加之广谱抗生素、皮质类固醇在临床上的广泛应用及 角膜接触镜的使用增多，导致角膜炎的发病率也呈逐年上升趋势，目前常见的治疗方法为 使用抗生素类滴眼液，包括氯霉素滴眼液、红霉素滴眼液及W左氧氣沙星为代表的第4代哇 诺酬类滴眼，但是滥用抗生素滴眼液的后果非常严重，首先使病原菌耐药性增加，临床疗效 降低，造成疾病久治不愈，其次是抗生素本身及其辅助成分一定程度上会影响眼睛的正常 生理环境，干扰角膜上皮的正常代谢，甚至加重原有的病情，不能长期使用。因此需要开发 一种生物安全性高、效果明显、使用方便的滴眼液。
【发明内容】
[000引本发明主要提供了一种仿细胞外基质滴眼液及其制备方法，一旦角膜受到损伤， 能通过调节细胞外基质生物功能，修复角膜细胞通信通道，达到调节修复角膜的生理功能。 [0009]其技术方案如下：一种仿细胞外基质滴眼液，其包括W下重量份组分： Lifitegrast 1-20份、硫酸类肝素0.1-5份、玻璃酸钢1-10份、生长因子0.01-0.1份、胶原蛋 白0.1-1份和水200-500份。
[0010] -种仿细胞外基质滴眼液，其包括W下重量份组分:Lifitegrast 5-10份、硫酸类 肝素1-3份、玻璃酸钢4-7份、生长因子0.5-0.07份、胶原蛋白0.4-0.6份和水300-400份。
[0011] 优选的，所述滴眼液的抑为5.5-7.5，采用憐酸盐缓冲液和/或棚酸缓冲液调节，采 用憐酸盐缓冲液和棚酸缓冲液调节时，憐酸盐缓冲液和棚酸缓冲液W任意比例混溶。
[0012] 优选的，所述滴眼液的渗透压为280-350m0sm/L，采用氯化钢和/或氯化钟调节，氯 化钢的质量浓度为0.3-0.8%，氯化钟的质量浓度为0.1-0.3%，采用氯化钢和氯化钟调节 时，氯化钢和氯化钟W任意比例混溶。
[0013] 优选的，硫酸类肝素提取自天然成分或采用细菌发酵法制得，硫酸类肝素的浓度 为0.5-50mg/ml。
[0014] 优选的，生长因子浓度为lOOO-lOOOOIU/ml，生长因子选自表皮生长因子、成纤维 细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和胎盘生长因子中的一种或几种。
[0015] 优选的，生长因子浓度为2000-6000IU/ml，生长因子采用表皮生长因子:成纤维细 胞生长因子:碱性成纤维细胞生长因子:胎盘生长因子按照1:2.5:1.6:3的重量比配置而 成。
[0016] Lifitegrast的化学名为N-[ [2-(6-苯并巧喃甲酯基）-5,7-二氯-1，2,3,4，-四氨 异哇嘟-6-基]甲酯基]-3-甲横酷基-L-苯基丙氨酸，分子式：C2姐24C12N207S，CAS号： 1025967-78-5，结构式如下式（I)所示：
[0017]
[001引 Lifitegrast属于淋己细胞功能相关抗原-ULFA-1)括抗剂。LFA-1是存在于白细 胞表面的一种蛋白。在干眼症中，ICAM-1在角膜和结膜组织中过量表达。LFA-l^CAM-l相互 作用促进免疫突触的形成，导致T细胞激活并迁移至目标组织。Lifitegrast作用于LFA-1， 括抗LFA-1与ICAM-1的相互作用，从而避免T细胞的产生、迁移，从而达到治疗干眼的效果。
[0019] 优选的，玻璃酸钢采用鸡冠提取或发酵法制得，玻璃酸钢分子量为40-150wDa。
[0020] -种仿细胞外基质滴眼液的制备方法，包括W下步骤：
[0021] (1)先称取配方量的氯化钢和/或氯化钟，加入40-60%体积的注射用水中，揽拌使 完全溶解，用0.2μπι的滤膜过滤除菌，收集滤液；
[0022] (2)称取配方量的玻璃酸钢加入滤液中，适宜溫度下揽拌，直至玻璃酸钢完全溶 解；
[0023] (3)称取配方量的Lifitegrast至剩余的注射用水中，揽拌并溶解；
[0024] (4)将步骤(2)与步骤(3)中的溶液混合，加入配方量的硫酸类肝素和生长因子，加 憐酸盐缓冲液和/或棚酸缓冲液调节pH，用0.2WI1的滤膜过滤除菌，无菌条件下灌装即可。
[00巧]优选的，步骤(2)中揽拌时间为3-化，转速100-20化pm，溫度15-30 Γ。
[0026] 采用上述仿细胞外基质滴眼液及其制备方法，本发明具有W下优点：
[0027] 本发明中的仿细胞外基质滴眼液，其组分是眼膜细胞外基质固有成分，一旦角膜 受到损伤，能通过调节细胞外基质生物功能，修复角膜细胞通信通道，达到调节修复角膜的 生理功能。目前做的Lifitegrast、硫酸类肝素、生长因子、胶原蛋白及玻璃酸钢量效关系研 究中，结果显示，五种药物联合治疗顽固性角膜上皮损伤、各种原因的角膜上皮病变、角膜 炎可起到高效用药效果。
[0028] 本发明的滴眼液模拟角膜细胞外基质组成，不仅能各自发挥疗效，由于协同作用， 能使药物长时间停留于眼角膜损伤表面，延长药物作用时间，大大增强对眼角膜的修复、保 护作用，提高疗效，安全性高，制备方法简单，不含防腐剂，能长期使用，大大满足目前临床 对此类滴眼液的需求。
【附图说明】
[0029] 图1为药效学实验1中早期角膜上皮愈合与晚期角膜愈合率比较示意图；
[0030] 图2为药效学实验1中上皮破损率比较示意图。
【具体实施方式】
[0031] -、具体实施例
[0032] 实施例1
[0033] 1.滴眼液配方
[0034] 一种仿细胞外基质滴眼液，其包括W下重量份组分:Lifitegrast 8份、0.5mg/ml 的硫酸类肝素2份、150wDa的玻璃酸钢6份、10000 lU/ml的生长因子0.06份、胶原蛋白0.5份 和注射用水300份。
[0035] 所述滴眼液的抑为7.5，采用棚酸缓冲液调节。
[0036] 所述滴眼液的渗透压为300m0sm/L，采用氯化钢和氯化钟调节，氯化钢的质量浓度 为0.5%，氯化钟的质量浓度为0.1%。
[0037] 硫酸类肝素提取自天然成分或采用细菌发酵法制得;玻璃酸钢采用鸡冠提取或发 酵法制得。
[0038] 生长因子采用表皮生长因子:成纤维细胞生长因子:碱性成纤维细胞生长因子:胎 盘生长因子按照1:2.5:1.6:3的重量比配置而成。
[0039] 2.滴眼液制备方法
[0040] (1)先称取配方量的氯化钢和氯化钟，加入40%体积的注射用水中，揽拌使完全溶 解，用0.2WI1的滤膜过滤除菌，收集滤液；
[0041 ] (2)称取配方量的玻璃酸钢加入滤液中，20°C下揽拌4h，转速20化pm，直至玻璃酸 钢完全溶解；
[0042] (3)称取配方量的Lifitegrast至剩余的注射用水中，揽拌并溶解；
[0043] (4)将步骤(2)与步骤(3)中的溶液混合，加入配方量的硫酸类肝素和生长因子，加 棚酸缓冲液调节pH，用0.2WI1的滤膜过滤除菌，无菌条件下灌装即可。
[0044] 实施例2
[0045] 1.滴眼液配方
[0046] 一种仿细胞外基质滴眼液，其包括W下重量份组分:Lifitegrast 5份、30mg/ml的 硫酸类肝素0.1份、40w化的玻璃酸钢4份、4000IU/ml的生长因子0.1份、胶原蛋白0.1份和注 射用水200份。
[0047] 所述滴眼液的抑为5.5,采用憐酸盐缓冲液调节。
[004引所述滴眼液的渗透压为350m0sm/L，采用氯化钢调节，氯化钢的质量浓度为0.3%。
[0049] 硫酸类肝素提取自天然成分或采用细菌发酵法制得;玻璃酸钢采用鸡冠提取或发 酵法制得。
[0050] 生长因子采用表皮生长因子:成纤维细胞生长因子:碱性成纤维按照1:3:1的重量 比配置而成。
[0051] 2.滴眼液制备方法
[0052] (1)先称取配方量的氯化钢，加入60%体积的注射用水中，揽拌使完全溶解，用0.2 μπι的滤膜过滤除菌，收集滤液；
[0053] (2)称取配方量的玻璃酸钢加入滤液中，30°C下揽拌化，转速10化pm，直至玻璃酸 钢完全溶解；
[0054] (3)称取配方量的Lifitegrast至剩余的注射用水中，揽拌并溶解；
[0055] (4)将步骤(2)与步骤(3)中的溶液混合，加入配方量的硫酸类肝素和生长因子，加 憐酸盐缓冲液调节pH，用0.2WI1的滤膜过滤除菌，无菌条件下灌装即可。
[0056] 实施例3 [0化7] 1.滴眼液配方
[0化引一种仿细胞外基质滴眼液，其包括W下重量份组分:Lif itegrast 10份、30mg/ml 的硫酸类肝素3份、lOOwDa的玻璃酸钢1份、5000IU/ml的生长因子0.01份、胶原蛋白1份和注 射用水500份。
[0059] 所述滴眼液的抑为6,采用憐酸盐缓冲液和棚酸缓冲液调节。
[0060] 所述滴眼液的渗透压为280m0sm/L，采用氯化钟调节，氯化钟的质量浓度为0.1%。 [0061 ]硫酸类肝素提取自天然成分或采用细菌发酵法制得;玻璃酸钢采用鸡冠提取或发 酵法制得。
[0062]生长因子采用表皮生长因子:碱性成纤维细胞生长因子:胎盘生长因子按照1:4:3 的重量比配置而成。
[00创 2.滴眼液制备方法
[0064] (1)先称取配方量的氯化钟，加入60%体积的注射用水中，揽拌使完全溶解，用0.2 μπι的滤膜过滤除菌，收集滤液；
[0065] (2)称取配方量的玻璃酸钢加入滤液中，15 °C下揽拌化，转速15化pm，直至玻璃酸 钢完全溶解；
[0066] (3)称取配方量的Lifitegrast至剩余的注射用水中，揽拌并溶解；
[0067] (4)将步骤(2)与步骤(3)中的溶液混合，加入配方量的硫酸类肝素和生长因子，加 憐酸盐缓冲液和棚酸缓冲液调节pH，用0.2WI1的滤膜过滤除菌，无菌条件下灌装即可。
[006引实施例4
[0069] 1.滴眼液配方
[0070] 一种仿细胞外基质滴眼液，其包括W下重量份组分:Lifitegrast 20份、50mg/ml 的硫酸类肝素0.1份、40w化的玻璃酸钢10份、lOOOOIU/ml的生长因子0.07份、胶原蛋白0.6 份和注射用水200份。
[0071] 所述滴眼液的抑为7.0,采用憐酸盐缓冲液和棚酸缓冲液调节。
[0072] 所述滴眼液的渗透压为300m0sm/L，采用氯化钢和氯化钟调节，氯化钢的质量浓度 为0.8%，氯化钟的质量浓度为0.2%。
[0073] 硫酸类肝素提取自天然成分或采用细菌发酵法制得;玻璃酸钢采用鸡冠提取或发 酵法制得。
[0074] 生长因子采用表皮生长因子:成纤维细胞生长因子:碱性成纤维细胞生长因子:胎 盘生长因子按照1:2.5:1.6:3的重量比配置而成。
[00对 2.滴眼液制备方法
[0076] (1)先称取配方量的氯化钢和氯化钟，加入40%体积的注射用水中，揽拌使完全溶 解，用0.2WI1的滤膜过滤除菌，收集滤液；
[0077] (2)称取配方量的玻璃酸钢加入滤液中，25°C下揽拌地，转速l(K)rpm，直至玻璃酸 钢完全溶解；
[0078] (3)称取配方量的Lifitegrast至剩余的注射用水中，揽拌并溶解；
[0079] (4)将步骤(2)与步骤(3)中的溶液混合，加入配方量的硫酸类肝素和生长因子，加 憐酸盐缓冲液和棚酸缓冲液调节pH，用0.2WI1的滤膜过滤除菌，无菌条件下灌装即可。
[0080] 对比例1
[0081 ]制备100ml滴眼液:将透明质酸钢Ig完全溶解于40ml注射用水中，备用；另取50ml 注射用水，加入5g甘露醇、ο. 9g氯化钢，完全溶解后加入l(K)yg人碱性成纤维细胞生长因子， 再加入事先准备好的透明质酸钢溶液，混合均匀后，加注射用水定容至所需体积并同时加 入氨氧化钢溶液使抑为7.0，用0.2-0.5皿的微孔滤膜过滤除菌，滤液分装至滴眼液塑料瓶 中，即制成滴眼液成品。
[0082] 二、动物耐受试验
[0083] 目的:考察本发明的滴眼液对兔眼的刺激性。
[0084] 样品：实验组:实施例1制备的滴眼液样品；对照组:0.9%生理盐水。
[0085] 动物:健康家兔5只。
[0086] 操作：将每只动物眼睫毛剪去，每只动物左侧眼结膜囊内均滴实验组的滴眼液 (0.1ml/眼），右侧眼结膜囊内滴对照组的0.9%生理盐水。每次给药时压迫鼻泪管，并使眼 被动闭合5-lOs。每日5次，连续给药4周于试验开始后每周观察并记录至试验结束。
[0087] 结果:测定记录各组动物滴眼药后lOmin内的巧眼次数，经统计学处理t检验。结果 见表1。
[0088] 表1兔巧眼次数测定结果(n = 5)
[0089]
[0090] 表中结果表明，实验组滴眼液组与对照组比较无显著性差异(P〉0.05)，说明实验 组滴眼液对兔眼无刺激性。
[0091] Ξ、药效学实验1
[0092] 目的:考察滴眼液对碱烧伤兔眼修复作用
[0093] 样品：实验组:按照本实施例1制备的滴眼液样品；对照组:对比例1制备的滴眼液 样品；
[0094] 动物:新西兰兔。
[009引操作:取新西兰兔，眼表采用3.5 %利多卡因麻醉，将直径8mm的滤纸原片置0.5N的 NaO田容液中浸湿，置角膜正中1分钟后取下，立即用无菌生理盐水冲洗。
[0096] 取造模成功的兔6只，伤后6小时即刻右眼滴实验组的滴眼液样品，左眼滴对照的 样品，5次/日，共2周。
[0097] 评价：角膜上皮愈合率及破损率计算:相机配近摄接圈，固定焦距，于伤后化、2化、 24h、3化、4化在角膜巧光着色区拍摄，冲洗后绘出巧光着色区，SPSS软件测出各时点面积 值，经线性回归计算上皮愈合率(mm2A)。于伤后3-15天每天观察角膜2次，凡巧光着色为阳 性，上皮破损率=(治疗眼或对照眼阳性数/治疗眼或对照眼总数）X 100%。
[009引结果；
[0099] (1)早期角膜上皮愈合与晚期角膜愈合观察
[0100] 早期(伤后6小时）角膜愈合十分缓慢，伤后6~48小时，角膜愈合趋于一条直线，见 附图1。实验组角膜平均愈合率1.42 ± 0.027iWVh，对照组角膜平均愈合率0.89 ± 0.047mm2/ 11，前者明显较后者快(口<0.01)。
[0101] (2)上皮破损率
[0102] 结果见附图2。实验组上皮破损率明显低于对照组，于烧伤后第6天角膜上皮痊愈， 对照组于第10天角膜上皮痊愈。
[0103] 实验结果可见，实施例1滴眼液治疗碱烧伤角膜上皮效果明显优于对比例1滴眼 液，对临床应用有指导意义。
[0104] 四、药效学实验2
[0105] 目的:考察制剂对兔腺病毒性角膜炎治疗作用。
[0106] 样品：实验组:按照本实施例2制备的滴眼液样品、对照组1:阿昔洛韦滴眼液(修正 药业）；对照组2:对比例1制备的滴眼液样品；
[0107] 动物:新西兰兔24只（雌雄各半）。
[0108] 操作:实验动物检查双眼均无异常后，双眼用0.4%盐酸奥布卡因滴眼液进行表面 麻醉，后将小鼠置于裂隙灯显微镜下，用4.5号无菌针头交叉划伤右眼角膜上皮层多次，呈 1mm大小"井"形划痕，然后给结膜囊内滴入50μ1含有15TCID/0.1ml的腺病毒3型病毒液，连 续感染3d。腺病毒感染5d后出现病毒性角膜炎典型病变（角膜出现点状、地图状、树枝状病 灶，虹膜充血，畏光流泪症状）。
[0109] 造模成功后，随机分为治疗组(实施例2制备的复合滴眼液）、对照组1(阿昔洛韦滴 眼液）、对照组2(对比例1制备的滴眼液）。出现典型病变Id后，开始结膜囊给药，2滴/次，4 次/天，连续给药lOd。于用药后第3、6、10天，W2%巧光素钢染色，裂隙灯下观察角膜病变范 围。10天后处死各组白兔，取其角膜，常规处理后，肥染色，光镜观察。
[0110] 评价:角膜病变程度判定标准依据化ilienhaus等上皮表面缺损面积W0至4计分， 结果见表2所示。
[0111] 表2角膜上皮病变程度分级
[0112]
[0113] 结果；
[0114] (1)于用药后第3、6、10天观察各组兔眼角膜情况，^393313.0统计软件进行统计 分析，计量数据WX±s表示，组间差异采用多因方差分析，结果见表3所示。与阴性对照组比 较，治疗组於〇. 02，阳性对照组於0.05，差异有统计学意义。
[0115] 表3兔腺病毒性角膜炎病变评分(g± S)
[0116]
[0117]由结果可见，本发明的滴眼液治疗兔腺病毒性角膜炎效果比对照组1、对照组2的 药物明显，说明Lifitegrast、类硫酸肝素、FGF、胶原蛋白和玻璃酸钢联合使用能大大提高 对角膜炎的治疗效果。
[011引 （2)角膜病理观察
[0119] 对照组1和对照组2可见角膜修复，但细胞层次和细胞间连接的病理损害仍存在， 实验组可见上皮修复完整，新生的鱗状上皮排列整齐，未见脱落或水泡。可见Lifitegrast、 类硫酸肝素、FGF、胶原蛋白和玻璃酸钢联合使用能有效抑制角膜病毒向周围邻近细胞扩 散，缩小病灶范围，有利于上皮细胞的迁移和增殖来修复伤口，又防止病菌的感染。
[0120] 对本领域的技术人员来说，可根据W上描述的技术方案W及构思，做出其它各种 相应的改变W及形变，而所有的运些改变W及形变都应该属于本发明权利要求的保护范围 之内。
【主权项】
1. 一种仿细胞外基质滴眼液，其包括以下重量份组分:Lifitegrast 1-20份、硫酸类肝 素0.1-5份、玻璃酸钠1-10份、生长因子0.01-0.1份、胶原蛋白0.1-1份和注射用水200-500 份。2. 根据权利要求1所述的仿细胞外基质滴眼液，其包括以下重量份组分:Lifitegrast 5-10份、硫酸类肝素1-3份、玻璃酸钠4-7份、生长因子0.05-0.07份、胶原蛋白0.4-0.6份和 注射用水300-400份。3. 根据权利要求1所述的仿细胞外基质滴眼液，其特征在于：所述滴眼液的pH为5.5-7.5，采用磷酸盐缓冲液和/或硼酸缓冲液调节，采用磷酸盐缓冲液和硼酸缓冲液调节时，磷 酸盐缓冲液和硼酸缓冲液以任意比例混溶。4. 根据权利要求3所述的仿细胞外基质滴眼液，其特征在于：所述滴眼液的渗透压为 280-350m0sm/L，采用氯化钠和/或氯化钾调节，氯化钠的质量浓度为0.3-0.8%，氯化钾的 质量浓度为〇. 1-0.3%，采用氯化钠和氯化钾调节时，氯化钠和氯化钾以任意比例混溶。5. 根据权利要求1所述的仿细胞外基质滴眼液，其特征在于:硫酸类肝素提取自天然成 分或采用细菌发酵法制得，硫酸类肝素的浓度为0.5-50mg/ml。6. 根据权利要求1所述的仿细胞外基质滴眼液，其特征在于：生长因子浓度为1000-10000IU/ml，生长因子选自表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子 和胎盘生长因子中的一种或几种。7. 根据权利要求6所述的仿细胞外基质滴眼液，其特征在于：生长因子浓度为2000-6000IU/ml，生长因子采用表皮生长因子:成纤维细胞生长因子:碱性成纤维细胞生长因子： 胎盘生长因子按照1:2.5:1.6:3的重量比配置而成。8. 根据权利要求1所述的仿细胞外基质滴眼液，其特征在于:玻璃酸钠采用鸡冠提取或 发酵法制得，玻璃酸钠分子量为40-150w Da。9. 一种如权利要求4所述的仿细胞外基质滴眼液的制备方法，其特征在于:包括以下步 骤： (1) 先称取配方量的氯化钠和/或氯化钾，加入40-60%体积的注射用水中，搅拌使完全 溶解，用0.2μπι的滤膜过滤除菌，收集滤液； (2) 称取配方量的玻璃酸钠加入滤液中，适宜温度下搅拌，直至玻璃酸钠完全溶解； (3) 称取配方量的Lif i tegrast至剩余的注射用水中，搅拌并溶解； (4) 将步骤(2)与步骤(3)中的溶液混合，加入配方量的硫酸类肝素和生长因子，加磷酸 盐缓冲液和/或硼酸缓冲液调节PH，用0.2μπι的滤膜过滤除菌，无菌条件下灌装即可。10. 根据权利要求9所述的仿细胞外基质滴眼液的制备方法，其特征在于:步骤(2)中搅 拌时间为3_6h，转速100-200rpm，温度15-30 °C。
【文档编号】A61P27/02GK105999235SQ201610566636
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年7月19日
【发明人】周晓惠, 张军东, 陈晚华, 廉云飞, 吴剑英
【申请人】上海建华精细生物制品有限公司