一种用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂及其制备方法
【专利摘要】本发明属于疫苗的技术领域，具体的涉及一种用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂及其制备方法。该种用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂，包括以下原料：壳聚糖、β?环状糊精、海藻酸钠、棉子糖、乳酸、磷脂酸肌醇和丁基羟基茴香醚。该用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂针对宿主设计，通过研究探索对细胞具有保护作用的物质，进行合理协同组合，通过该冷冻干燥保护剂对宿主细胞保存的条件进行优化，为更好的保存病毒打下基础。
【专利说明】
-种用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明属于疫苗的技术领域，具体的设及一种用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护 剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 保护剂是为了保证冻干过程中能够顺利调节渗透压，降低对冻干对象的伤害而采 用的一种组合试剂。冷冻干燥技术由英国人Wollaston发明，随后该技术开始应用到菌种、 疫苗及其它生物制品的冻干保存，取得了较好效果。常见冷冻干燥保护剂种类很多，主要有 糖类、多元醇，氨基酸、无水溶剂等物质，现有技术主要集中在生物制品的耐热冻干保护剂 及制备工艺;鸡痘冻干苗耐热冻干保护剂及制备工艺等，运些均针对的是疫苗自身。
[0003] 然而病毒疫苗的特点为其繁殖过程中需要在宿主体内完成，同时病毒疫苗在宿主 体内的保存效果更加理想，因此不论是病毒疫苗的繁殖还是病毒疫苗的保存都离不开宿 主，尤其是需要在活体内保存的病毒疫苗，由此可见要提高疫苗的活性，就必须保证宿主拥 有良好的活性，即宿主的存活率将大大影响病毒的活性。目前现阶段均是针对疫苗本身而 言的，还没有针对宿主活性而设计的冷冻干燥保护剂。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于针对目前保护剂仅针对疫苗本身而无法保证宿主活性的缺陷 而提供一种用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂及其制备方法，该用于病毒疫苗宿主的冷 冻干燥保护剂针对宿主设计，通过研究探索对细胞具有保护作用的物质，进行合理协同组 合，通过该冷冻干燥保护剂对宿主细胞保存的条件进行优化，为更好的保存病毒打下基础。
[0005] 本发明的技术方案为:一种用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂，包括W下原料： 壳聚糖、β-环状糊精、海藻酸钢、棉子糖、乳酸、憐脂酸肌醇和下基径基茵香酸。
[0006] 所述用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂，由W下重量份的原料组成:2-5.5份壳 聚糖、1-3.4份β-环状糊精、0.8-2份海藻酸钢、1-4.7份棉子糖、1-2份乳酸、1.6-4份憐脂酸 肌醇和1-3份下基径基茵香酸。
[0007] 所述用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂，由W下重量份的原料组成:4.5-5.5份 壳聚糖、2.6-3.4份β-环状糊精、0.8-1.2份海藻酸钢、3.3-4.7份棉子糖、1-2份乳酸、1.7- 2.3份憐脂酸肌醇和1.7-2.3份下基径基茵香酸。在37°C情况下对该配比范围内的冷冻干燥 保护剂进行测试实验，实验结果验证:保护剂效果为宿主存活率达到99.2%。
[000引所述用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂，由W下重量份的原料组成:4.6-5.4份 壳聚糖、2.7-3.4份β-环状糊精、0.8-1.2份海藻酸钢、3.4-4.6份棉子糖、1.2-1.8份乳酸、 1.6-2.4份憐脂酸肌醇和1.8-2.2份下基径基茵香酸。在37°C情况下对该配比范围内的冷冻 干燥保护剂进行测试实验，实验结果验证:保护剂效果为宿主存活率达到99.6%。
[0009]所述用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂，由W下重量份的原料组成：5份壳聚 糖、3份β-环状糊精、1份海藻酸钢、4份棉子糖、1.5份乳酸、2份憐脂酸肌醇和2份下基径基茵 香酸。
[0010] 所述用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂，由w下重量份的原料组成：2份壳聚 糖、1份β-环状糊精、1份海藻酸钢、1份棉子糖、1份乳酸、2份憐脂酸肌醇和1份下基径基茵香 酸。
[0011] 所述用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂，由W下重量份的原料组成：3份壳聚 糖、1.5份β-环状糊精、1.5份海藻酸钢、2份棉子糖、1.5份乳酸、2份憐脂酸肌醇和2份下基径 基茵香酸。
[0012] 所述用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂，由W下重量份的原料组成：5份壳聚 糖、3份β-环状糊精、2份海藻酸钢、4份棉子糖、2份乳酸、4份憐脂酸肌醇和3份下基径基茵香 酸。
[0013] 本发明的有益效果为:本发明所述用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂，包括W 下原料:壳聚糖、β-环状糊精、海藻酸钢、棉子糖、乳酸、憐脂酸肌醇和下基径基茵香酸。其中 壳聚糖具有乳化稳定性，起到保湿作用，对细胞水分的保持有重要作用。β-环状糊精容易形 成稳定的水合物，起到固水的作用。海藻酸钢是一种高粘性的高分子化合物亲水性强，可W 与壳聚糖形成均一稳定的稳定剂，安全性高，可W食用，对细胞可W起到保护作用。棉子糖 在非晶体状态下，具有较强的吸湿和保湿能力。乳酸作为抑调节剂，可W与海藻酸钢形成稳 定抑环境，维持环境处于稳定的渗透压，有助于细胞的活性。憐脂酸肌醇为细胞膜的组成成 分，对细胞膜具有很强的保护作用。下基径基茵香酸:具有很强的抗氧化性，食品等方面广 泛应用，使用安全，来源充足。
[0014] 综上所述，本发明所述用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂针对宿主设计，通过 研究探索对细胞具有保护作用的物质，进行合理协同组合，通过该冷冻干燥保护剂对宿主 细胞保存的条件进行优化，为更好的保存病毒打下基础。同时所采用的原料价格相对低廉、 充足，易于准确配伍组合，受外界环境影响小等特点，提高冻干疫苗的稳定性的用途。
【具体实施方式】
[0015] 下面通过实施例对本发明进行详细的说明。
[0016] 实施例1
[0017] 所述用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂，由W下重量份的原料组成：2份壳聚 糖、1份β-环状糊精、1份海藻酸钢、1份棉子糖、1份乳酸、2份憐脂酸肌醇和1份下基径基茵香 酸。
[001引实施例2
[0019] 所述用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂，由W下重量份的原料组成：3份壳聚 糖、1.5份β-环状糊精、1.5份海藻酸钢、2份棉子糖、1.5份乳酸、2份憐脂酸肌醇和2份下基径 基茵香酸。
[0020] 实施例3
[0021] 所述用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂，由W下重量份的原料组成：5份壳聚 糖、3份β-环状糊精、2份海藻酸钢、4份棉子糖、2份乳酸、4份憐脂酸肌醇和3份下基径基茵香 酸。
[0022] 实施例4
[0023] 所述用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂，由W下重量份的原料组成：5份壳聚 糖、3份β-环状糊精、1份海藻酸钢、4份棉子糖、1.5份乳酸、2份憐脂酸肌醇和2份下基径基茵 香酸。
[0024] 下面对上述4个实施例基于正交试验方法进行组合优化测试。
[002引一、试样情况见表1:
[0026] 表1:屯种原料的浓度与比例
[0027]
[0028] 二、试验具体方法：
[0029] W存活率为观测值，测定方法：用ImL无菌吸管吸取0.5mL已充分混匀的菌悬液，精 确地放4.5mL至10-1的试管中，此即为10倍稀释，依次类推完成稀释过程，然后选择合适的 稀释度，取〇.2mL稀释后的菌悬液涂布在Ξ个平行的直径为9mL平皿(含有再生固体培养基） 中，经过24-48小时，计算cfu数目，根据稀释度，通过Ξ平皿平均数，计算出每个平皿的存活 率。在37°C情况下，35天，测定病毒宿主的存活率。
[0030] Ξ、试验结果见表2:
[0031] 表2:优化试验结果直观分析表
[0032]
[0034] 根据表2进行极差分析得知:最佳组合如表3
[0035] 表3:最佳组合
[0036]
[0037]同时对上述冷干产品在W下条件作进一步验证:25°C，60d进行试验，结果表明低 溫下，宿主的活率更高，保存活性更好，为病毒的活性保持，打下良好的基础。
【主权项】
1. 一种用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂，其特征在于，包括以下原料:壳聚糖、β-环状糊精、海藻酸钠、棉子糖、乳酸、磷脂酸肌醇和丁基羟基茴香醚。2. 根据权利要求1所述用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂，其特征在于，由以下重量 份的有效原料组成:2-5.5份壳聚糖、1-3.4份β-环状糊精、0.8-2份海藻酸钠、1-4.7份棉子 糖、1-2份乳酸、1.6-4份磷脂酸肌醇和1-3份丁基羟基茴香醚。3. 根据权利要求2所述用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂，其特征在于，由以下重量 份的有效原料组成:4.5-5.5份壳聚糖、2.6-3.4份β-环状糊精、0.8-1.2份海藻酸钠、3.3-4.7份棉子糖、1-2份乳酸、1.7-2.3份磷脂酸肌醇和1.7-2.3份丁基羟基茴香醚。4. 根据权利要求2所述用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂，其特征在于，由以下重量 份的有效原料组成:4.6-5.4份壳聚糖、2.7-3.4份β-环状糊精、0.8-1.2份海藻酸钠、3.4-4.6份棉子糖、1.2-1.8份乳酸、1.6-2.4份磷脂酸肌醇和1.8-2.2份丁基羟基茴香醚。5. 根据权利要求2所述用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂，其特征在于，由以下重量 份的有效原料组成:5份壳聚糖、3份β-环状糊精、1份海藻酸钠、4份棉子糖、1.5份乳酸、2份 磷脂酸肌醇和2份丁基羟基茴香醚。6. 根据权利要求2所述用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂，其特征在于，由以下重量 份的有效原料组成:2份壳聚糖、1份β-环状糊精、1份海藻酸钠、1份棉子糖、1份乳酸、2份磷 脂酸肌醇和1份丁基羟基茴香醚。7. 根据权利要求2所述用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂，其特征在于，由以下重量 份的有效原料组成：3份壳聚糖、1.5份β-环状糊精、1.5份海藻酸钠、2份棉子糖、1.5份乳 酸、2份磷脂酸肌醇和2份丁基羟基茴香醚。8. 根据权利要求2所述用于病毒疫苗宿主的冷冻干燥保护剂，其特征在于，由以下重量 份的有效原料组成:5份壳聚糖、3份β-环状糊精、2份海藻酸钠、4份棉子糖、2份乳酸、4份磷 脂酸肌醇和3份丁基羟基茴香醚。
【文档编号】A61K47/10GK105999285SQ201610309200
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月11日
【发明人】吴忆春, 赵春海, 苗立忠
【申请人】吴忆春, 赵春海, 苗立忠