蕈青霉素脂质体粉针剂、其制备方法及应用
【专利摘要】本发明提供一种蕈青霉素脂质体粉针剂，其由以下方法制备：将0.1～10g蕈青霉素，鸡蛋卵磷脂，胆固醇，聚乙二醇?二硬脂酸磷脂酰乙醇胺加入乙醇中，溶解完全后形成乙醇溶液；将乙醇溶液水浴加热，搅拌下缓慢滴加至提前预热至同样温度的质量体积比为5％的葡萄糖溶液中形成混合溶液，持续搅拌至混合溶液体积的1/2，将溶液转移至茄形瓶中于60℃下蒸发至混合溶液体积的1/3后，补充提前预热至同样温度的质量体积比为5％的葡萄糖溶液至所需浓度得到蕈青霉素脂质体；向蕈青霉素脂质体加入赋形剂，冷冻干燥形成蕈青霉素脂质体粉针剂。本发明的蕈青霉素脂质体粉针剂具有高的包封率和稳定性，制备工艺简单，条件温和，时间短。
【专利说明】
蕈青霉素脂质体粉针剂、其制备方法及应用
技术领域
[0001] 本发明属于生物化学技术领域，具体涉及一种具有高包封率和稳定性的蕈青霉素 脂质体粉针剂、其制备方法及应用。
【背景技术】 [0002] 目前有文献报道大电导钙激活钾离子通道(MaxiK通道)广泛表达于多种 组织细胞的细胞膜上。它参与了细胞兴奋的电活动、神经递质的释放、激素的分泌，血管、气 管、子宫、胃肠道、及膀胱等多种平滑肌组织以及其它很多重要生理活动的调节。同时该通 道也在多种肿瘤中高表达，并且与肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移等诸多肿瘤细胞特性密切 相关。其特异性抑制剂蕈青霉素(Paxilline)被报道在动物实验中具有多种药理效果，如抑 制化疗引起的胶质瘤耐药、改善急性胰腺炎及治疗颅脑损伤。我们相信，随着进一步研究， Paxil line将会有更广泛的应用。但是目前为止，尚无 Paxil ine相关制剂报道，且在国内外 文献中由于Paxilline水溶性差多将其溶于DMS0等有机溶剂中进行给药，不利于其用于临 床。
[0003] 脂质体是脂质体系指由磷脂为膜材及附加剂组成的封闭囊泡，具有双分子层结 构。由于其结构类似生物膜，可包封水溶性和脂溶性药物，能够提高药物的稳定性、减少药 物用量、降低毒性，减轻变态反应和免疫反应;延缓药物释放，降低体内消除速度;改变药物 在体内的分布，并能靶向性释药等优点而得到广泛注意和深入研究。
【发明内容】
[0004] 作为各种广泛且细致的研究和实验的结果，本发明的发明人已经发现，采用乙醇 注入法制备蕈青霉素(Paxlline)脂质体并进行冻干为粉针剂，得到的Paxlline脂质体粉针 剂具有高的包封率和稳定性，制备方法反应条件温和，工艺操作简单，时间较短，有利于脂 质体药物的工业化生产，为Paxlline用于临床提供了一种新的可能性。基于这种发现，完成 了本发明。
[0005] 本发明的一个目的是解决至少上述问题或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。
[0006] 本发明还有一个目的是提供一种蕈青霉素脂质体粉针剂，其由以下方法制备：
[0007] 步骤一、将0.1~10g蕈青霉素，1~100g鸡蛋卵磷脂，0.2~20g胆固醇，0.01~5g聚 乙二醇-二硬脂酸磷脂酰乙醇胺加入Ι-lOOmL乙醇中，溶解完全后形成乙醇溶液；
[0008] 步骤二、将所述步骤一得到的乙醇溶液水浴加热，搅拌下缓慢滴加至提前预热至 与所述乙醇溶液同样温度的质量体积比为5%的葡萄糖溶液中形成混合溶液，持续搅拌至 所述混合溶液体积的1/2,将所得溶液转移至茄形瓶中于60°C下蒸发至所述混合溶液体积 的1/3后，补充添加提前预热至与所述乙醇溶液同样温度的质量体积比为5%的葡萄糖溶液 至所需浓度得到蕈青霉素脂质体；
[0009] 步骤三、向所述步骤二中得到的蕈青霉素脂质体加入赋形剂，使赋形剂的质量体 积浓度为2%~50%，所述蕈青霉素脂质体中蕈青霉素含量为0.01 g/mL~10g/mL，冷冻干燥 形成蕈青霉素脂质体粉针剂。
[0010] 优选的是，其中，在所述步骤一中，所述乙醇溶液中，蕈青霉素的浓度范围为0.01 ~10g/mL〇
[0011]优选的是，其中，在所述步骤二中，所述水浴加热的温度为30~80°C。
[0012]优选的是，其中，在所述步骤二中，提前预热至同样温度的5%的葡萄糖溶液的体 积为1~50mL。
[0013] 优选的是，其中，在所述步骤二中，缓慢滴加的方法包括:注射器滴加、分液漏斗滴 加、移液管滴加、滴管滴加或喷雾器滴加。
[0014] 优选的是，其中，在所述步骤三中，所述赋形剂为山梨醇、甘露醇、葡萄糖、蔗糖、海 藻糖或甘氨酸。
[0015] 优选的是，其中，在所述步骤二中，所述蒸发为减压旋转蒸发。
[0016] 本发明的目的还可以进一步由蕈青霉素脂质体粉针剂的应用来实现，蕈青霉素脂 质体粉针剂在大电导钙激活钾离子通道的抑制剂中的应用。
[0017] 优选的是，其中，所述蕈青霉素脂质体粉针剂在大电导钙激活钾离子通道的抑制 剂中的应用包括抑制化疗引起的胶质瘤耐药、改善急性胰腺炎及治疗颅脑损伤。
[0018] 本发明至少包括以下有益效果：
[0019] 1、蕈青霉素脂质体粉针剂具有高的包封率和高的稳定性；
[0020] 2、蕈青霉素脂质体粉针剂的制备方法具有反应条件温和，工艺操作简单，时间较 短，有利于脂质体药物的工业化生产的有益效果；
[0021] 3、蕈青霉素脂质体粉针剂可作为大电导钙激活钾离子通道(MaxiK通道），可抑制 化疗引起的胶质瘤耐药、改善急性胰腺炎及治疗颅脑损伤。
[0022] 本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本 发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
【附图说明】
[0023]图1为本发明实施例1制备的蕈青霉素脂质体粉针剂的粒度图；
[0024]图2为本发明实施例1制备的蕈青霉素脂质体粉针剂的zeta电位图；
[0025] 图3为本发明实施例1制备的蕈青霉素脂质体粉针剂的透射电镜图；
[0026] 图4为本发明实施例1制备的蕈青霉素脂质体粉针剂的药理实验结果图。
【具体实施方式】
[0027]下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文 字能够据以实施。
[0028]应当理解，本文所使用的诸如"具有"、"包含"以及"包括"术语并不配出一个或多 个其它元件或其组合的存在或添加。
[0029] 〈实例 1>
[0030] -种蕈青霉素脂质体粉针剂，其由以下方法制备：
[0031] 步骤一、将lg蕈青霉素，l〇g鸡蛋卵磷脂，2g胆固醇，0.2g聚乙二醇-二硬脂酸磷脂 酰乙醇胺加入10mL乙醇中，溶解完全后形成乙醇溶液，其中，蕈青霉素的浓度为0. lg/mL;
[0032] 步骤二、将所述步骤一得到的乙醇溶液水浴加热60°C，搅拌下缓慢滴加至提前预 热至与所述乙醇溶液同样温度的质量体积比为5%的葡萄糖溶液40mL中形成混合溶液，持 续搅拌至所述混合溶液体积的1/2，将所得溶液转移至茄形瓶中于60°C下蒸发至所述混合 溶液体积的1/3后，补充添加提前预热至与所述乙醇溶液同样温度的质量体积比为5%的葡 萄糖溶液至所需浓度得到蕈青霉素脂质体；
[0033] 步骤三、向所述步骤二中得到的蕈青霉素脂质体加入赋形剂，使赋形剂的质量体 积浓度为20%，所述蕈青霉素脂质体中蕈青霉素含量为0. lg/mL，冷冻干燥形成蕈青霉素脂 质体粉针剂。
[0034] 〈实例 2>
[0035] -种蕈青霉素脂质体粉针剂，其由以下方法制备：
[0036] 步骤一、将0 . lg蕈青霉素，lg鸡蛋卵磷脂，0.2g胆固醇，0.0 lg聚乙二醇-二硬脂酸 磷脂酰乙醇胺加入10mL乙醇中，溶解完全后形成乙醇溶液，其中，蕈青霉素的浓度为O.Olg/ mL；
[0037] 步骤二、将所述步骤一得到的乙醇溶液水浴加热30°C，搅拌下缓慢滴加至提前预 热至与所述乙醇溶液同样温度的质量体积比为5%的葡萄糖溶液lmL中形成混合溶液，持续 搅拌至所述混合溶液体积的1/2,将所得溶液转移至茄形瓶中于60°C下蒸发至所述混合溶 液体积的1/3后，补充添加提前预热至与所述乙醇溶液同样温度的质量体积比为5%的葡萄 糖溶液至所需浓度得到蕈青霉素脂质体；
[0038] 步骤三、向所述步骤二中得到的蕈青霉素脂质体加入赋形剂，使赋形剂的质量体 积浓度为2 %，所述蕈青霉素脂质体中蕈青霉素含量为0.01g/mL，冷冻干燥形成蕈青霉素脂 质体粉针剂。〈实例3>
[0039] -种蕈青霉素脂质体粉针剂，其由以下方法制备：
[0040] 步骤一、将l〇g蕈青霉素，l〇〇g鸡蛋卵磷脂，20g胆固醇，5g聚乙二醇-二硬脂酸磷脂 酰乙醇胺加入l〇〇mL乙醇中，溶解完全后形成乙醇溶液，其中，蕈青霉素的浓度为0. lg/mL;
[0041] 步骤二、将所述步骤一得到的乙醇溶液水浴加热30°C，搅拌下缓慢滴加至提前预 热至与所述乙醇溶液同样温度的质量体积比为5%的葡萄糖溶液lmL中形成混合溶液，持续 搅拌至所述混合溶液体积的1/2,将所得溶液转移至茄形瓶中于60°C下蒸发至所述混合溶 液体积的1/3后，补充添加提前预热至与所述乙醇溶液同样温度的质量体积比为5%的葡萄 糖溶液至所需浓度得到蕈青霉素脂质体；
[0042]步骤三、向所述步骤二中得到的蕈青霉素脂质体加入赋形剂，使赋形剂的质量体 积浓度为50%，所述蕈青霉素脂质体中蕈青霉素含量为10g/mL，冷冻干燥形成蕈青霉素脂 质体粉针剂。
[0043] 〈实例 4>
[0044] 1、实施例1中制备的蕈青霉素脂质体粉针剂的包封率实验：
[0045] 以超滤法测定包封率。取制备的蕈青霉素脂质体粉针剂lmL于超滤管中，4000转/ 分钟，离心40分钟，HPLC测定下层清液游离药物蕈青霉素的浓度，该浓度设定为C1。同时，取 上述蕈青霉素脂质体粉针剂，测定其总浓度为C2，则计算包封率为：
[0046] 包封率=(C2_C1)/C2X100%
[0047] 2、实施例1中制备的蕈青霉素脂质体粉针剂的稳定性实验：
[0048]取制备好的蕈青霉素脂质体粉针剂于4°C~8°C下静置，测定0、1、6以及12个月时， 蕈青霉素脂质体粉针剂的外观，粒度以及包封率，得到如下数据：
[0049] 表1蕈青霉素(Paxilline)脂质体粉针剂在低温4°C_8°C下稳定性数据
[0050]
[0051 ]如表1所不，实施例1中制备的覃青霉素脂质体粉针剂具有尚的包封率和尚的稳定 性。
[0052] 3、实施例1中制备的蕈青霉素脂质体粉针剂的粒径及形貌测试实验
[0053] 取制备好的脂质体粉针剂混悬液O.lmL，超纯水稀释至lmL，涡旋混合器上混合均 匀，加入测量池，通过粒度仪测定脂质体的粒度，通过透射电镜测定脂质体粉针剂的投射电 镜图，测定温度为25°C。
[0054] 如图1所示，利用动态光散射原理(DLS)检测了脂质体粒度分布在100-200nm，如图 3所示，通过透射电镜图显示该脂质体粉针剂为粒度lOOnm左右囊泡结构，与粒度仪测定结 果相符，通过脂质体粉针剂粒度及形貌的检测，说明该脂质体粉针剂符合临床静脉给药的 条件，为进一步应用于临床提供可能性。
[0055] 4、实施例1中制备的蕈青霉素脂质体粉针剂的Zeta电位测定实验
[0056] 取制备好的脂质体粉针剂混悬液O.lmL，超纯水稀释至lmL，涡旋混合器上混合均 匀，加入Zeta电位样品池中，测定温度为25°C，分散相为水相。
[0057] 如图2所示，通过测定电子云的内外电位差Zeta电位，数据显示，Zeta电位在-20 ~-30mv左右，说明该脂质体符合临床静脉给药的条件，为进一步应用于临床提供可能性。
[0058] 5、实施例1中制备的蕈青霉素脂质体粉针剂的药理实验
[0059] 如图4所示，通过对蕈青霉素游离药物与蕈青霉素脂质体粉针剂对改善人胶质瘤 细胞替莫唑胺耐药进行实验研究，通过实验结果可以看出，蕈青霉素脂质体粉针剂与蕈青 霉素游离药物相比可以有效降低人胶质瘤细胞耐药指数，说明本发明在体外可有效提高蕈 青霉素药理活性，可以改善耐药，增强化疗效果。
[0060] 综上所述，本发明提供的蕈青霉素脂质体粉针剂具有高的包封率和高的稳定性； 蕈青霉素脂质体粉针剂的制备方法具有反应条件温和，工艺操作简单，时间较短，有利于脂 质体药物的工业化生产的有益效果;蕈青霉素脂质体粉针剂可作为大电导钙激活钾离子通 道(MaxiK通道），可抑制化疗引起的胶质瘤耐药、改善急性胰腺炎及治疗颅脑损伤。
[0061] 尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列 运用。它完全可以被适用于各种适合本发明的领域。对于熟悉本领域的人员而言，可容易地 实现另外的修改。因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限 于特定的细节和这里示出与描述的图例。
【主权项】
1. 一种蕈青霉素脂质体粉针剂，其由以下方法制备： 步骤一、将0.1~l〇g蕈青霉素，1~l〇〇g鸡蛋卵磷脂，0.2~20g胆固醇，0.01~5g聚乙二 醇-二硬脂酸磷脂酰乙醇胺加入Ι-lOOmL乙醇中，溶解完全后形成乙醇溶液； 步骤二、将所述步骤一得到的乙醇溶液水浴加热，搅拌下缓慢滴加至提前预热至与所 述乙醇溶液同样温度的质量体积比为5%的葡萄糖溶液中形成混合溶液，持续搅拌至所述 混合溶液体积的1/2,将所得溶液转移至茄形瓶中于60°C下蒸发至所述混合溶液体积的1/3 后，补充添加提前预热至与所述乙醇溶液同样温度的质量体积比为5%的葡萄糖溶液至所 需浓度得到蕈青霉素脂质体； 步骤三、向所述步骤二中得到的蕈青霉素脂质体加入赋形剂，使赋形剂的质量体积浓 度为2%~50%，所述蕈青霉素脂质体中蕈青霉素含量为0.01g/mL~10g/mL，冷冻干燥形成 蕈青霉素脂质体粉针剂。2. 如权利要求1所述的蕈青霉素脂质体粉针剂，其中，在所述步骤一中，所述乙醇溶液 中，蕈青霉素的浓度范围为0.01~10g/mL。3. 如权利要求1所述的蕈青霉素脂质体粉针剂，其中，在所述步骤二中，所述水浴加热 的温度为30~80 °C。4. 如权利要求1所述的蕈青霉素脂质体粉针剂，其中，在所述步骤二中，提前预热至同 样温度的5 %的葡萄糖溶液的体积为1 -50mL。5. 如权利要求1所述的蕈青霉素脂质体粉针剂，其中，在所述步骤二中，缓慢滴加的方 法包括:注射器滴加、分液漏斗滴加、移液管滴加、滴管滴加或喷雾器滴加。6. 如权利要求1所述的蕈青霉素脂质体粉针剂，其中，在所述步骤三中，所述赋形剂为 山梨醇、甘露醇、葡萄糖、蔗糖、海藻糖或甘氨酸。7. 如权利要求1所述的蕈青霉素脂质体粉针剂，其中，在所述步骤二中，所述蒸发为减 压旋转蒸发。8. 如权利要求1~7任意一项所述的蕈青霉素脂质体粉针剂是作为大电导钙激活钾离 子通道抑制剂的一种制剂的应用。9. 如权利要求8所述的蕈青霉素脂质体粉针剂作为大电导钙激活钾离子通道抑制剂的 一种制剂的应用包括抑制化疗引起的胶质瘤耐药、改善急性胰腺炎及治疗颅脑损伤。
【文档编号】A61K9/19GK106038493SQ201610375944
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月30日
【发明人】肖雯婧, 罗辑, 任建东, 马婕, 吴娟, 侯君
【申请人】肖雯婧, 罗辑