专利名称：化装料的制作方法
技术领域：
本发明涉及化装料，详细说是涉及含有具有皮肤细胞激活作用或美白作用的酵母成分的化装料。
背景技术：
一般认为，日晒或粉刺后出现的色素沉积，更年期女性频发的肝斑，伴随老化出现的老年性色斑等症状均是由于作为黑褐色色素的黑色素的生成而引起的。
黑色素是当皮肤受到紫外线等外界刺激时，存在于皮肤黑色素细胞中的酪氨酸酶活化，作为一种氨基酸的酪氨酸被氧化而生成的。因此，通过抑制与黑色素生成相关的酪氨酸酶的活性，可以期待使皮肤变白的美白效果，也可以将酪氨酸酶活性抑制成分与化装料配合使用。
但是，即使将酪氨酸酶活性抑制成分与化装料配合使用，许多化装料对B16黑素瘤培养细胞中的黑色素生成的抑制效果也不充分，实际用于皮肤上对色素的淡化效果并不充分。
这样为了使化装料确实发挥美白效果，仅有上述的酪氨酸酶活性抑制效果或黑色素生成抑制效果是不充分的，有必要使其发挥通过消除活性氧而抑制色素沉积的作用或通过激活表皮细胞而促进黑色素排泄的作用。
作为以往配合使用酵母的化装料，已知配合使用由Saccharomyces属酵母培养液得到的发酵液作为有效成分的具有美白效果的化装料。(参照特许文献1)。
另外，已知有活化皮肤表层内部表皮细胞自身的神经酰胺合成，改善皮肤屏障机能的神经酰胺合成促进剂(参照特许文献2)，和配合使用覆盆子酮D糖苷(β)等配糖体和酵母提取物或含有这些成分的菌培养物的美白化装料(参照特许文献3)。
特许文献1特开平7-10734号从报特许文献2特开平8-217658号公报特许文献3特开2000-109408号公报上述以往的美白化装料，虽然单独配合使用酵母提取物，或配合使用酵母提取物和配糖体，但是除了发挥前述的酪氨酸酶活性抑制作用或黑色素生成抑制作用外，为了确实得到基于更综合的作用的美白效果还有改良的余地。
发明内容
因此本发明的课题就是解决上述以往技术的问题点，制做通过酵母提取成分具有酪氨酸酶活性抑制作用和黑色素生成抑制作用，而且具有消除活性氧或细胞激活作用，具有综合的优良皮肤美白效果的化装料。
解决课题的手段发明者对通过分裂而增殖的酵母进行遗传学分析发现，这一酵母与出芽酵母相比是具有与人的细胞更接近的增殖形态的分裂细胞，判断其中含有以往酵母提取物中没有的具有较高有效成分的可能性较高，这一分裂酵母属于Schizosaccharomyces属，通过将其细胞提取液或孢子提取液对皮肤的效果与其他酵母相比较进行实际调查发现，只有这一属兼备上述各效果，由此完成了本发明。
即为解决前述课题，在本发明的化装料中，作为有效成分含有Schizosaccharomyces属酵母的水性溶剂提取物。
由后述实验结果可知，Schizosaccharomyces属酵母的水性溶剂提取物具有促进纤维芽细胞分裂而生成正常新细胞的所谓的细胞激活作用的同时还有黑色素生成抑制作用，它们协同作用的结果就形成了具有优良皮肤美白效果的化装料。
为了使化装料确实发挥这一优良作用，优选采用Schizosaccharomyces属酵母Schizosaccharomyces pombe的化装料。
另外，化装料中水性溶剂提取物作为有效成分的更好的含量为0.05～10重量％。
图1是表示涂布化装水的皮肤的黑色素量经时变化的图表。
图2是表示涂布化装水的皮肤的角质水分量经时变化的图表。
具体实施例方式
本发明使用的酵母属于子囊菌类单细胞真核微生物，属于象动物细胞进行均等的二分裂的Schizosaccharomyces属酵母(以下称为分裂酵母)，作为代表可列举出Schizosaccharomyces pombe。Schizo表示分裂的意思。Schizosaccharomyces pombe自古被应用于食品领域中，1890年代由东非的pombe中分离出来而被广泛认识，分裂酵母广泛应用于葡萄汁，椰子酒，甘蔗，果汁，面包，啤酒酿造等领域中，可以很容易得到市售品，而且其安全性也被公众确认。
分裂酵母在营养源丰富时通过体细胞分裂过程进行增殖，如果营养缺乏则在性外激素的存在下接合后形成孢子进行有性生殖。
培养这样的分裂酵母所用的培养基，可以是通常使用的酵母用培养基，如想分别得到酵母细胞或孢子，优选使用合成培养基，另外孢子形成培养基中不加氮源。培养条件，例如温度或时间，一般适用进行酵母培养的条件。
分裂酵母的细胞及孢子的具体提取方法如下即，回收培养后的菌体，用蒸馏水等充分洗涤后以培养液的1/10量蒸馏水混悬。然后加入2.5mg/ml浓度的细胞壁分解酶，37℃反应4天。另外，关于培养时间(天数)，例如可以培养基的温度等为指标，以其达到稳定期为目标。
然后使酶失活，进行离心分离等操作后过滤(利用酵母的自我消化时，加入相当于洗涤后湿菌体10～100倍量的蒸馏水，35～45℃下，搅拌24～72小时使其自我消化，然后进行冷冻干燥或减压浓缩。)。在其中加入相当于湿菌体10～100倍量的水，乙醇，丁二醇，丙二醇，甘油等水性溶剂中的一种或几种的混合溶剂，进行离心分离等操作后过滤。
利用酶分解法的情况中，加入相当于洗涤后的湿菌体10～100倍量的蒸馏水，再按相对于每1kg酵母菌体20～50万单位的程度加入蛋白水解酶，在保持酶活性的温度下使其反应1昼夜。
使酶失活后，添加适量的水性溶剂，或不添加，进行离心分离等分离操作后过滤。利用酸分解法的情况中，加入相当于洗涤后湿菌体10倍量的1～5％盐酸，在40～60℃反应3～8小时，经常搅拌进行水解反应。然后用碱中和，再用同样方法处理。另外，中和后最好用透析处理等方法脱盐。
本发明中分裂酵母提取物作为有效成分的配合量，通过在化装料处方中配合使用0.05～10重量％(优选2～5重量％)，可以充分发挥本发明所预期的效果，即皮肤美白效果，活性氧消去效果，细胞激活效果。
另外，本发明中的分裂酵母水性溶剂提取物可以作为化装品或浴用剂与常用的基剂，药剂等共同组方，制成任意形态的化装品。
例如作为可与分裂酵母的水性溶剂提取物配合的适当的油分，代表例为动植物油，矿物油，此外还可列举出酯油，蜡油，高级醇，脂肪酸类，硅油，磷脂等油或油脂。
另外，作为表面活性剂，可列举出阴离子表面活性剂，阳离子表面活性剂，两性表面活性剂，非离子表面活性剂等。另外根据需要并用对氨基安息香酸，邻氨基苯甲酸衍生物，苯并三唑衍生物，四唑衍生物，咪唑啉衍生物，嘧啶衍生物，二氧六环衍生物，莰烷衍生物，呋喃衍生物，吡喃衍生物，核酸衍生物，尿囊素衍生物，烟酸衍生物，紫草素，维生素B6衍生物等紫外线吸收剂，抗坏血酸及其盐，硬脂酸酯，维生素E及其酯衍生物，去甲二氢愈创木酸，丁羟甲苯(BHT)，丁羟茴醚(BHA)，对羟基茴香醚，没食子酸丙酯等抗氧化剂，羟乙基纤维素，甲基纤维素，乙基纤维素，羧甲基纤维素，羧乙基纤维素，阿拉伯胶，聚乙二醇，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯甲基丙烯酸酯，聚丙烯酸盐，羧乙烯聚合物，角叉菜胶，果胶，海藻酸及其盐，酪蛋白，明胶等增粘剂，甘油，丙二醇，1，3-丁二醇，透明质酸及其盐，聚乙二醇，硫酸软骨素及其盐，水溶性几丁质或脱乙酰几丁质衍生物，乳酸钠等保湿剂，低级醇，多价醇，水溶性高分子，pH调节剂，螯合剂，防腐剂，防霉剂，香料，着色料，清凉剂，稳定化剂，源于动植物的提取物，动植物蛋白质及其分解物，源于动植物的提取物，动植物多糖类及其分解物，源于动植物的提取物，动植物糖蛋白及其分解物，血流促进剂，消炎抗炎剂，细胞激活剂，维生素类，氨基酸及其盐，核质溶解剂，收敛剂，创伤治愈剂，增泡剂，消臭脱臭剂等，可制成前述的各种化装品。
本发明的化装料可作为化装品、医药用外用品而预防和改善色素沉积，或以激活皮肤细胞为目的应用，其形态可列举出面霜，软膏，乳液，美容液，化装水，面膜，浴用剂，化装用化装料等，其剂型没有特别限制。
实施例及比较例(分裂酵母的培养例1)分别配制如下组成的培养基1，2，向培养基1中加入1白金耳分裂酵母，30℃培养3天。该培养液离心分离回收菌体，将菌体全量混悬于同量的培养基2中，培养5天。该培养液离心分离，回收菌体以蒸馏水充分洗涤。
(培养基1)葡萄糖 30g酵母提取物 5g(培养基2)葡萄糖 10g磷酸二氢钾 0.25g硫酸镁 0.5g氯化钙 0.1g硼酸 0.5mg硫酸铜 40μg碘化钾 0.1mg氯化铁 0.2mg硫酸锰 0.4mg钼酸 0.16mg硫酸锌 0.4mg生物素 1μg泛酸钙 1mg烟酸 10mg肌醇 10mg(分裂酵母的培养例2)配制前述相同的培养基1，加入分裂酵母(1白金耳)，30℃培养10天。培养液离心分离回收菌体，以蒸馏水充分洗涤。
(分裂酵母提取物的提取例1)前述培养例1所得分裂酵母(0.1～1.0kg)混悬于培养用量1/10的蒸馏水中。向混悬液中加入终浓度为2.5mg/ml的酶(LYSING ENZYMES，LotNo.69H1557，SIGMA)30℃酶处理4天。酶处理后将混悬液超声波处理，使全量为100ml。溶液在90℃下加热处理1小时使酶失活，用滤过助剂，滤纸，膜滤器进行过滤。
(分裂酵母提取物的提取例2)培养例2所得分裂酵母(0.1～1.0kg)混悬于培养用量1/10的蒸馏水中。向混悬液中加入终浓度为2.5mg/ml的酶(LYSING ENZYMES，LotNo.69H1557，SIGMA)30℃酶处理4天。酶处理后将混悬液超声波处理，使全量为100ml。溶液在90℃下加热处理1小时使酶失活，用滤过助剂，滤纸，膜滤器进行过滤。
(出芽酵母提取物)市售以出芽酵母Saccharomyces cerevisiae为提取原料的甲公司制酵母提取物作为比较提取例1，乙公司制酵母提取物作为比较提取例2。
前述提取例1或2的分裂酵母提取物及市售出芽酵母提取物比较提取例1，2作为试样，进行黑素瘤细胞的黑色素合成抑制作用的比较实验。
作为实验方法，将B16小鼠黑素瘤细胞在含有10％FBS的MEM培养基中37℃，5％CO2条件下培养，以此作为实验用样品。详细说，将1T×5个B16黑素瘤细胞植入60mm塑料培养皿中，培养24小时。然后更换新鲜培养基，分别向培养基中添加终浓度为2％的实验样品。添加后3天，将细胞用胰蛋白酶处理回收，以1N NaOH，10％DMSO的溶液加热溶解，测定475nm处的吸光度。另外，将未处理细胞的黑色素合成率作为100％计算出样品添加时的黑色素合成率。黑色素合成抑制率是由未处理的黑色素合成率(100％)中减去添加样品时的黑色素合成率。其结果作为黑色素生成抑制率(％)如表1所示。
表1
表1的结果显示，提取例1或提取例2所得分裂酵母提取物具有黑色素生成抑制作用，可以期待防止皱纹，雀斑等的效果，其效果与作为比较提取例1，2的市售出芽酵母提取物相比要高。
前述提取例1或提取例2的分裂酵母提取物及市售出芽酵母提取物比较提取例1，2作为试样，进行细胞激活作用(细胞增殖)的比较实验。
考察激活作用的对象细胞，使用正常人皮肤纤维芽细胞NB1RGB在含有5％FBS的MEM培养基中培养的细胞。另外培养要完全在37℃，5％CO2条件下进行。详细说明，首先将0.5×104个正常人纤维芽细胞接种于采用含有5％FBS的MEM培养基的96孔微型板中，培养24小时。将培养液交换为加入实验试样的含有5％FBS的MEM培养基的培养基中培养9天。将培养液交换到含有50μg/ml中性红和5％FBS的MEM培养基中培养2小时，弃去培养液后以1％CaCl2，1％福尔马林液洗涤微型板一次。向其中添加1％醋酸，50％乙醇水溶液，提取含在细胞的中性红，以微型板读出器测定其在570nm处的吸收波长，结果如表2所示。
表2
由表2的结果可知，分裂酵母提取物具有促进细胞增殖作用，即细胞激活作用，由这一作用可期待促进皮肤角化细胞，纤维芽细胞的增殖，改善皮肤状态的效果。另外，可以确认与比较提取例1，2的出芽酵母提取物相比，其效果要高。
按表3所示配合比例，分别制造配合使用分裂酵母提取物(提取例1)的实施例1的化装水，作为比较例1，2，配合使用比较提取例1，2的化装水。另外，比较例3是不含酵母提取物的空白品，各实施例及比较例中配合适量的防腐剂和pH调节剂。
以上样品用于受试小组成员(成人男女各10人)的皮肤(面部)，每日早晚两次，使用2个月，2个月后调查功能结果。调查项目有如表4所示的5个项目，分5个等级进行评价，其平均值如表3所示。
表3
表4
用使用表3所示组成的实施例1的分裂酵母提取物、比较例1、2、3的化装水，进行美白效果实验(皮肤黑色素量测定实验)。即每天2次涂布于受试小组成员(成人男女各10人)的皮肤(面部)，使用3个月，用CK社制美白效果试验机(MEXAMETERMX18)测定黑色素量，结果如图1所示。
由图1的结果可知，配合使用实施例1的分裂酵母所得的提取物的化装水，由第70天到3个月的期间，明显地比以往的化装水显示优良的黑色素量的减少效果。
以使用表3所示组成的实施例1的分裂酵母提取物、比较例1、2、3的化装水涂布皮肤，用CK社制水分量测定试验机(SKICOS301)测定其角质水分量的经时变化(到涂布后540分钟)，结果如图2所示。
图2结果表明，配合使用由实施例1的分裂酵母所得提取物的化装水，在涂布后120分钟明确开始显示比以往化装水优良的角质水分保持量。
应用本发明的分裂酵母提取物的化装料如以上说明的，是作为有效成分含有Schizosaccharomyces属酵母的水性溶剂提取物的化装料，具有优良的黑色素生成抑制作用，即具有美白作用，另外还发挥显著的细胞激活作用。这样的效果与以往的含有出芽酵母或其提取物的化装料的效果相比是有利的。
权利要求
1.一种化装料，作为有效成分含有Schizosaccharomyces属酵母的水性溶剂提取物。
2.根据权利要求1所述的化装料，其中，Schizosaccharomyces属酵母是Schizosaccharomyces pombe。
3.根据权利要求1或2所述的化装料，其中，作为有效成分的含量为0.05～10重量％。
全文摘要
本发明提供一种化装料，具有基于酵母提取成分的酪氨酸酶活性抑制作用和黑色素生成抑制作用，而且具有清除活性氧或细胞激活活性，具有综合的优良皮肤美白效果。作为有效成分含有Scbizosaccharomyces pombe等Schizosacchar omyces属酵母的水性溶剂提取物，含量为0.05～10重量％的。
文档编号A61Q19/02GK1572292SQ200410048510
公开日2005年2月2日 申请日期2004年6月7日 优先权日2003年6月9日
发明者田中克昌, 永井勉 申请人:日本科玛株式会社