包括多羟基化脂肪醇的美容组合物以及其用途的制作方法

专利名称：包括多羟基化脂肪醇的美容组合物以及其用途的制作方法
技术领域：
本发明总体涉及美容(化妆品)领域，并且具体涉及用于预防或治疗对皮肤的环境损伤和UV引起的损伤的美容组合物以及方法。
背景技术：
人类皮肤细胞，特别是角质形成细胞、成纤维细胞和皮脂腺细胞的外观和物理性能随年龄变化。由于出现肉眼可见的临床变化的分子改变的积累而发生老化。包括紫外辐射(UV)、大气污染、伤口、感染、外伤、缺氧、吸烟和激素状况的因素在增加分子改变的积累速度以及因此加速的老化过程中具有重要作用。皮肤老化的主要细胞内诱因是氧化，导致损害细胞和破坏皮肤区域的自由基的产生。皮肤拥有复杂(精致)的抗氧化剂防御系统以应对紫外线(UV)引起的氧化应激。然而，广泛的暴露于UV辐射可以压倒导致氧化损伤并最终导致过早的皮肤老化的皮肤抗氧化剂能力。已经发现暴露于紫外线(UV)辐射引起几种介体如干扰素(IFN) γ和肿瘤坏死因子(TNF) α，其被认为是涉及急性皮肤炎症和亚急性慢性炎症，其积累的退化效果导致内在和外在老化。因此，随时间出现皮肤的皱纹、浅表面、以及机械性能和整个美学外观的降低。TNF-α被认为是涉及响应于慢性和急性太阳辐射的表皮损伤的最重要的组织因子之一。TNF-α通过各种细胞，包括巨噬细胞、自然杀伤细胞(NK)、T淋巴细胞和角质形成细胞来产生。证明了不同的刺激通过不同的细胞和调节机制来诱导TNF-α产生。当用UV 辐射来照射皮肤时，TNF- α通过残留的表皮T淋巴细胞(Hassan-Zahraee，M，mi，J, Gordon, J “ Rapid synthesis of IFN-gamma by T cells in skin may play a pivotal role in the human skin immune system"，Int. Immunol. 2002,10 :1599-1612)和角质形成细胞来产生。在mRNA水平上，UV辐射已经显示在4小时内上调培养的角质形成细胞中的肿瘤坏死因子α mRNA的水平20-40倍。最近的研究还指出TNF-α在暴露于UVB辐射后对细胞动力学和DNA修复具有显著的影响。UV可以直接引起DNA损伤，诸如环丁烷嘧啶二聚体(CPD)和6-4-光化产品的形成，其两者均可以通过核苷酸切除修复(NER)系统来修复(Moriwaki S，Takahashi Y 〃 Photoaging and DNA repair" , .T Dermatol Sci. 2008.Tun :50(3) 169-76 ；Bikov V.T, Sheehan JM, Hemminki K, YounR AR. “ In situ repair of cyclobutane pyrimidine dimers and 6-4 photoproducts in human skin exposed to solar simulating radiation" , T Invest Dermatol. 1999 Mar ； 112 (3) :3洸_31)。证明了 TNF-α 增加周期细胞的比例并增强凋亡的速度，这允许包含未修复的环丁烷嘧啶二聚体(CPD)的细胞进入细胞周期。这样，TNF-α在促进皮肤光老化的过程中起重要的作用。干扰素Y(IFN-Y)是在UV相关的皮肤重塑的开发中已经涉及的另一关键的细胞因子。IFN-Y由T淋巴细胞、树突细胞和天然杀伤细胞响应于各种刺激而分泌。先前已由Sien等人报道IFN-Y在暴露于UV辐射的表皮细胞中较小但显著和持续地产生 (Shen J, Bao S, Reeve VE “ Modulation of IL-10, IL-12, and IFN-gamma in the epidermis of hairless mice by UVA(320_400nm)and UVB(280-320nm)radiation. “ J Invest Dermatol 113 1059-1064,1999) 0色素斑的发展是皮肤光老化的最具代表性的症状之一。在许多类型的人类皮肤中形成的色素斑中，最经常观察到雀斑、黑斑病和太阳痣。 IFN-γ在色素斑的形成中的关键作用最近由iVoki H and Moro 0. “ Up-regulation of the IFN-gamma-stimulated genes in the development of delayed pigmented spots on the dorsal skin of Fl mice of HR-lxHR/De" J Invest Dermatol. 2005May ； 124(5) :1053-61 证实。使用小鼠背部皮肤的模型，Aoki H和Moro O证明了与非辐射的对照相比，在UV暴露的色素病变中分泌的IFN-Y具有超过4倍以上浓度的增加。已经假设了 IFN- γ的初始来源可能是由UV暴露激活的残留表皮T淋巴细胞。分泌的IFN-Y刺激角质形成细胞，并上调单核细胞化学攻击蛋白(MCP)-2、干扰素诱导的蛋白(IP)-IO、和由干扰素-γ引起的单核因子(MIG)的转录，并将更多的T淋巴细胞募集到损伤部位。浸润(渗透)的T淋巴细胞产生另外的趋化因子和细胞因子，包括另外的 IFN-Y。除了 T淋巴细胞活性外，由这些细胞和激活的角质形成细胞分泌的趋化因子和细胞因子还引起肥大细胞、单核细胞和巨噬细胞的浸润和激活。所有这些细胞涉及相互作用网络的形成，并且为黑素细胞激活提供合适的局部环境。此外，IFN-Y协同加强引起皮肤老化的核因子(NF)-kB的TNF-α诱导的活性。由于UV辐射引起T细胞增生和炎症引起的细胞浸润到损伤的皮肤中，其是发炎过程中的重要步骤，开发T细胞抑配方以延迟该过程并防止皮肤损伤。目前，许多T淋巴细胞抑配方、和TNF-α、以及IFN-Y表达抑配方是已知的，并且基于蛋白的TNF-α抑配方已证明了在各种炎症疾病中的效力并且已经批准用于临床应用。然而，所有这些化合物是有效的药物并且引起系统性潜在的严重不利效果并且无法用于美容配方中(Palladino MA, Bahjat FR, Theodorakis EA,Moldawer LL “ Anti-TNF-alpha therapies :the next generation"，Nat Rev Drug Discov. 2003 Sep ；2 (9) :736-46)。干扰素拮抗剂在用于治疗干扰素相关的炎性疾病中的应用的一个实例描述在美国专利号7，285, 5 中。干扰素拮抗剂在用于治疗由增加的T细胞激活表征的特定皮肤状况，例如UV损伤中的应用的一个实例描述在美国专利号7，323，171中。已经描述了对T细胞增殖和TNF- α以及IFN表达具有抑制作用的有限数目的天然化合物(Drug Discov Today. 2006 Aug ；11 (15-16) :725-32)。鳄梨果在全世界作为食品被广泛消耗，并且还用于各种医疗和美容用途。鳄梨的健康益处可能是由于这样的事实，即，它包含超过20种必要营养物以及各种潜在的生物学活性化合物。多羟基化的脂肪醇(PFA)的乙酰基衍生物存在于梨和存在于鳄梨果的种子中。 非乙酰化的多羟基化脂肪醇还在鳄梨果中以很小的量被检测到。多羟基化脂肪醇的乙酰基衍生物是一组具有相对类似结构的脂质。这些物质先前已经被发现相对于癌细胞系是 舌个生白勺(Oberlies NH, Rogers LL, Martin JM, and McLaughlin JL ‘‘ Cytotoxic and insecticidal constituents of the unripe fruit of Persea Americana. " J Nat Prod 1998 ;61 :781-5),并且已经证明是肝保护和抗毒性活性的(Kawagishi H，FukumotoY, Hatakeyama M, He P, Arimoto H, Matsuzawa T, et al. “ Liver injury suppressing compounds isolated from avocado. " J Agric Food Chem 2001 ；49 :2215-21)以及相对于上鞭毛体和锥鞭毛体是适度活性的(Abe F，Nagafuji S，Okawa Μ, Kinjo J, Akahane
H,Ogura Τ, et al. " Trypanocidal constituents in plants 5. Evaluation of some Mexican plants for their trypanocidalactivity and active constituents in the seeds ofPersea Americana " . Biol Pharm Bull 2005;28:1314-7)。此夕卜， 也已经证明这些化合物中的一些是抗真菌的((Dominguez F, Helms GL, Prusky D， Browse J, “ Antifungal compounds from idioblast cells isolated from avocado fruits " . Phytochemistry 2000 ;54 :183-9)和具有抗细菌性能(Neeman I.，Lishitz， A and Kashman, Y.1970. " New antibacterial agent isolated from avocado pear. “ Applied Microbiology, 19 :470-473)，以及显著的抑制乙酰基CoA羧化酶的能力 (Hashimura H, Ueda C, Kawabata J, Kasai T. “ Acetyl-CoA carboxylase inhibitors from avocado(Persea americana Mill. ) fruits" . Biosci Biotechnol Biochem 2001 ； 65 :1656-8)。鳄梨油的未皂化部分是脂肪物质的部分，所述脂肪物质在碱性溶液中的延长水解之后保持不溶于水，并且可以利用有机溶剂提取。鳄梨种子油的未皂化部分可用于多种美容和治疗应用中。例如，PCT申请WO 99/43298描述了包含来自鳄梨种子的未皂化脂质提取物的皮肤病学配方在用于改善萎缩纹和角质骨骼中的应用。通过在无机碱性溶液中皂化鳄梨油的甘油三酯分离过程中，发现多羟基化脂肪醇的乙酰基衍生物被水解成非乙酰化的多羟基化脂肪醇并且以该状态保留在未皂化部分中。非乙酰化的多羟基化脂肪醇还可以在鳄梨种子的皂化(水解的)提取物中检测到，其中它们的浓度可以包括可达10%的未皂化部分。存在于未皂化的鳄梨种子中的另一主要组的化合物是呋喃(图4)，其可以以可达30%的未皂化部分的浓度存在。这些呋喃化合物先前已证明具有生物活性性能。美国专利号6，582，688描述了一种用于未皂化物质的鳄梨分级的分离方法，其允许由呋喃脂质构成的部分在具有的非乙酰化的多羟基化脂肪醇(可达25%)的混合物中分离，以及这些基于呋喃的化合物在皮肤的美容处理和治疗炎性障碍中的应用。多羟基化脂肪醇(去乙酰化形式)和呋喃脂质的这些美容应用的存在是该配方的主要缺点。呋喃脂质是已知的赖氨酰氧化酶的潜在抑制剂((MJJerman, S. Mokady, and
I.Neeman " Partial I solation and Characterization of a New Natural Inhibitor of Lysyl Oxidase from Avocado Seed Oil" , J, Agric. Food Chem. 1990,38,2164-2168 ； Rosenblat G, Kagan H, Shah M,Spiteller G, Neeman I " Chemical Characterization of Lysyl Oxidase Inhibitor from Avocado Seed Oil" ， JAOCS 72，225-229(1995))，其是对于正常肤色和弹性很重要的酶。由于呋喃对赖氨酰氧化酶活性的抑制作用，因此包含呋喃的脂质在治疗涉及过量胶原和弹性蛋白沉积的疾病中，在用于抑制分子内和分子间交联的硬皮病相关的病症中，以及可能由于增强新形成的交联体的分离中可以用作抗纤维化药物。相反，在其它情况下，减少的赖氨酰氧化酶活性与提高的皮肤松驰和关节过度伸展性的风险有关(Song YL, Ford JW, Gordon D 〃 Shanley CJ Regulation of lysyl oxidase by
7interferon-gamma in rat aortic smooth muscle cells. " Arterioscler Thromb Vasc Biol. 20 (2000)，982-988)。使用实验动物模型，证明了体内减少的赖氨酰氧化酶活性与主动脉瘤发展的风险有关(Maki JkRasanen T, Tikkanen H, Sormunen R, M^ikikMIin K, Kivirikko KI, Soininen R. “ Inactivation of the lysyl oxidase gene Lox leads to aortic aneurysms, cardiovascular dysfunction, and prenatal death in mice. “ Circulation. 2002 Nov 5 ；106(19) :2503-9)。

发明内容
因此，需要一种用于预防和/或逆转由于暴露于环境污染和UV辐射而引起对受试者的皮肤损伤的方法和美容组合物，并且其会是有用的。因此本发明提供了用于预防或逆转由于环境污染和/或UV辐射而引起对受试者的皮肤的损伤的美容方法和组合物，该方法和组合物包括用于局部施加的分离的多羟基化脂肪醇或其衍生物，例如通过以减少对皮肤细胞的损伤和/或改善人类皮肤的美学外观其量有效的预防或逆转对皮肤的环境污染和/或UV辐射的有害影响。“美容”是指改善皮肤的视觉外观的任何组合物或方法，其包括但不限于增强的柔韧性、柔软性和弹性的外观；皱纹减少；和/或老化过程的减少的证据；或它们的组合。术语“皮肤的美学外观”是指皮肤的视觉外观。改善、预防、处理或逆转皮肤老化中的任一种是指改善、预防、处理或逆转老化对皮肤的一种或多种视觉影响中的任一种，包括但不限于角质层增厚、粗糙的织构、起皱、松弛、弹性的丧失、色素斑(包括但不限于雀斑、黑斑病和太阳痣)、脆弱皮肤、下垂皮肤、细纹、薄化皮肤、缺少光泽的皮肤、疲乏的皮肤、以及干燥的皮肤或杂色的色素沉着、或它们的组合。在UV引起的损伤的情况下，这样的损伤涉及UV辐射对皮肤的任何视觉作用，包括但不限于角质层增厚、粗糙的织构、起皱、松弛、弹性的丧失、或杂色的色素沉着、或它们的组合。因此，改善、预防、处理或逆转UV引起的损伤涉及改善、预防、处理或逆转UV引起的损伤的上述效果中的任一种，或它们的组合。除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。虽然类似于或等价于本文描述的那些方法和材料可以用于本发明的实践或测试中，但是在下面对合适的方法和材料进行描述。在冲突的情况下，将控制专利说明书，包括定义。另外，材料、方法和实施例仅是说明性的并且不用于限制。如本文使用的，“约”表示加或减指示值的大约10%。


这里参照附图仅通过举例的方式来描述本发明。现在通过对附图详细地具体参照，强调示出的细节是以举例方式的并仅用于本发明的优选实施方式的示例性讨论的目的，并且是为了提供被认为是本发明的原理和概念方面的最有用和易于理解的描述而给出的。在这方面，没有进行尝试以更详细地显示本发明的结构细节，其对本发明的基本理解是必需的，该描述附带使本领域技术人员显而易见本发明的几种形式如何可以在实践中实施的附图。在附图中图IA和图IB是来自鳄梨种子(A)和梨(B)的多羟基化脂肪醇的天然衍生物的气相色谱洗脱分布；图2示出了多羟基化脂肪醇的主要天然衍生物的结构；图3示出了来自鳄梨的天然多羟基化脂肪醇的主要脱乙酰化衍生物的化学结构；图4示出了来自鳄梨的代表性呋喃脂质的化学结构；图5是证明了天然多羟基化脂肪醇对原代人类T细胞和Jurkat细胞的增殖的抑制效应的条形图；图6是证明了多羟基化脂肪醇和脱乙酰化的多羟基化脂肪醇的天然衍生物对原代人类T细胞的生存力的影响的条形图；图7是证明了来自鳄梨的多羟基化脂肪醇的天然衍生物对由人类激活的CD3+T淋巴细胞的TNF-α和IFN-Y分泌的抑制效应的条形图；图8Α和图8Β是证明了多羟基化脂肪醇对在暴露于UVB辐射之后的HaCaT细胞 (A)和原代人类角质形成细胞(B)生存力的保护作用的条形图；图9是证明了多羟基化脂肪醇对12-0-四癸酰基佛波醇-13-乙酸酯(TPA)(还称作佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯，PMA)引起的线粒体效力丧失的影响的条形图；图10是证明了多羟基化脂肪醇对由原代人类角质形成细胞的TPA引起的IL-6分泌的影响的条形图；图11是示出了多羟基化脂肪醇对由原代人类角质形成细胞的UV引起的IL-6分泌的影响的条形图；图12是示出了多羟基化脂肪醇对由原代人类角质形成细胞的UVB引起的PGE2分泌的影响的条形图；图13是证明了多羟基化脂肪醇以及其与乌索酸和乙酰基水杨酸的混合物对由UV 辐照的原代人类角质形成细胞的引起的前列腺素(PGE2)分泌的抑制效应的表格；图14Α表征了在有或者没有PFA(示出为(多元醇))的情况下在UVB辐射的皮肤移植物中晒伤的细胞的照片；图14B是示出了多羟基化脂肪醇对在UVB辐射的皮肤移植物中晒伤的细胞的形成的保护作用的条形图；图15是示出了促进在原代人类角质形成细胞中UVB引起的环嘧啶dimmers (CPD) 去除作用的条形图；以及图16是示出了多羟基化脂肪醇对角质形成细胞(HaCaT细胞)和成纤维细胞(B) 影响的条形图。
具体实施例方式多羟基化脂肪醇(PFA)对人类皮肤细胞具有显著的生物作用，并且可以影响皮肤的性能，证实它们在改善皮肤的美学外观和用于防止或改善皮肤老化效果方面是有用的。 本发明的各种实施方式包括或使用这些化合物。“多羟基化脂肪醇”是指任何这样的多羟基化脂肪醇，其可以在任何类型的果实或植物，优选鳄梨种子或鳄梨果实的肉中存在的物质中发现或者衍生自该物质。“衍生自”是指可以在任何类型的果实或植物，优选鳄梨种子或鳄梨果实的肉中存在的任何多羟基化脂肪醇的任何类型的来源，如本文中所描述的。此外，这些多羟基化脂肪醇优选还能够减少或防止由环境原因引起的皮肤细胞损伤；例如，它们可以减少和修复由UV辐射暴露引起的皮肤损伤并且可以被用于各种美容应用中。此外，在至少一些实施方式中，这些多羟基化脂肪醇能够防止或减少对由对皮肤细胞(角质形成细胞)的直接损伤和通过激活炎性细胞和产生促炎性介体引起的皮肤的有害影响，伴随通过UV或其它环境污染的皮肤损伤，用于各种美容应用以便改善皮肤的视觉外观。在背景技术中关于UV损伤和老化对皮肤的深组织的影响的上述描述还涉及在角质层中的生物效应，包括弹性、阻挡性能和渗透性等。本发明的发明人已经惊人地发现了多羟基化脂肪醇，例如分离自鳄梨和鳄梨种子的那些多羟基化脂肪醇，对人类皮肤具有显著的美容效果并且对皮肤细胞具有生物效果， 从而证实了它们用于改善皮肤老化的效果，以及改进其美学外观的有用性。此外，这些多羟基化脂肪醇优选还能够减少例如，由毒性化合物或由UV辐射暴露引起的皮肤细胞损伤。此外，多羟基化脂肪醇能够影响伴随UV辐射暴露和/或环境损伤的炎性细胞的增殖和活性，并且减少促炎性介体的产生，并且可以被用来减少用于美容应用的皮肤局部炎性反应。另外，在至少一些实施方式中，这些多羟基化脂肪醇显示出在临床研究中积极的皮肤反应，这使得可以用于各种美容应用。不受单一假定的限制，这样的皮肤的视觉外观的改善可以可选地通过PFA对皮肤细胞(更优选地包括皮肤的角质层和更深的组织)的生物作用和/或通过多羟基化脂肪醇作为神经鞘脂类化合物的功能而发生，因此提供了更天然相容的溶液。本发明的发明人例如利用气相色谱和HPLC方法分离并量化了在鳄梨种子和鳄梨果实中存在的活性成分。根据本发明的一些实施方式，提供了一种包括有效改善人类皮肤的美学外观的量的多羟基化脂肪醇或其衍生物的局部美容组合物。根据在本发明的优选实施方式中的进一步特征，多羟基化脂肪醇的衍生物基本上包括乙酰化的衍生物。根据一些实施方式，多羟基化脂肪醇或其衍生物分离自天然来源。可选且优选地，分离的天然多羟基化脂肪醇分离自果实或植物，诸如，例如鳄梨果实和鳄梨种子。根据在描述的优选实施方式中的另外的特征，天然多羟基化脂肪醇以基本纯的形式被分离。如本文中所使用的，“天然”包括来自提取物的所有物质，包括乙酰化形式，具有很小量的未乙酰化的成分。在水解之后，脂肪醇变成脱乙酰化的，在本文中没有被称作天然的。根据一些实施方式，多羟基化脂肪醇或其衍生物是合成产物。根据一些实施方式，多羟基化脂肪醇或其衍生物是合成产物。根据在描述的优选实施方式中的另外的特征，多羟基化脂肪醇以分离物质的约 80%至约95% w/w的浓度存在。
根据在描述的优选实施方式中的另外的特征，多羟基化脂肪醇以总组合物的约 0. 001%至约20% w/w的浓度存在。根据在描述的优选实施方式中的另外的特征，组合物没有或完全没有呋喃脂质。 “完全没有呋喃脂质”是指可达约5%的呋喃脂质可以存在于组合物中。“没有呋喃脂质”是指可达约20%，优选可达约15%，更优选可达约10%和最优选可达约7. 5%的呋喃脂质可以存在于组合物中。根据在描述的优选实施方式中的另外的特征，多羟基化脂肪醇或其衍生物基本上选自由1-乙酰氧基_2，4- 二羟基-16-十七碳烯、1-乙酰氧基_2，4- 二羟基-16-十七碳炔组成的组。本发明的发明人进一步提供了上面描述的组合物中的任一种在用于在人类皮肤和皮肤细胞中减少UV引起的老化的外部征兆中的应用。本发明的发明人进一步提供了上面描述的组合物中的任一种在用于预防性治疗对人类皮肤和皮肤细胞的UV损伤以改善皮肤的视觉外观中的应用。此外，在至少一些实施方式中，本发明的多羟基化脂肪醇混合物可以作为预防化合物在暴露于UV辐射之前和/或之后给予。本发明的发明人进一步提供了上面描述的组合物中的任一种在用于防止老化的外部征兆中的应用，包括色素斑(包括但不限于雀斑、黑斑病和太阳痣)、易脆皮肤、下垂皮肤、细纹、起皱、薄化皮肤、缺乏光泽的皮肤、疲乏的皮肤、以及干燥皮肤的外观。根据一些实施方式，老化的外部征兆是由于UV引起的过早老化引起的。本发明进一步提供了上面描述的组合物中的任一种在用于减少皮肤的发红或刺激中的应用。根据一些实施方式，本发明的组合物被用于减少皮肤上的发红或刺激，诸如由例如红斑痤疮或与红斑痤疮相关的毛细管扩张，和/或由于UV引起的和/或环境损伤引起的那些。环境损伤的实例是尿布疹，使得该组合物可选地被用于防止和/或减轻尿布疹。根据本发明的一些实施方式，提供了一种用于从果实或植物来源分离天然多羟基化脂肪醇和其衍生物的方法，该方法包括压碎果实或植物来源以获得冻干的粉末；利用非极性有机溶剂或极性溶剂提取该冻干的粉末以获得粗脂质提取物；利用非极性溶剂或极性溶剂富集粗脂质提取物以获得富集的粗脂质提取物；通过在低于室温的温度下结晶从富集的粗脂质提取物中分离多羟基化脂肪醇和其衍生物以获得晶体；过滤该结晶的多羟基化脂肪醇和其衍生物；向滤液中加入乙醇；过滤保留在乙醇中的不溶物质；蒸发；以及用非极性溶剂结晶。紫外线辐射对宽范围的生物系统是有害的。损伤的程度依赖于暴露的水平和持续时间以及暴露的生物体的易感性和耐性。由于暴露于UV的关键人类健康影响包括皮肤癌、 白内障和免疫抑制。另外，其它皮肤病学影响包括严重光变应性反应以及加速的皮肤老化。 由于UV辐射对皮肤的损伤减少了其免疫防御，阻碍了对感染病的耐性以及对皮肤瘤的耐性，并且降低了疫苗的效力。本发明的组合物优选能够防止和/或改善紫外线辐射对皮肤的负面影响。本发明的天然多羟基化脂肪醇混合物证明了由炎性介体的表达表征以及由激活的T细胞增殖表征的炎性反应的显著抑制。体内测试对由UV辐射损伤的细胞的活性化合物活性表明该化合物可以抑制UV引起的IL-6表达和PGE2表达。
11
另外，本发明的多羟基化脂肪醇的体外生物研究表明该活性化合物可以显著保护辐射的皮肤细胞的生存力，抑制UV引起的角质形成细胞死亡并抑制皮肤移植物中的晒伤细胞的形成，并且显著促进人类角质形成细胞中UVB引起的环嘧啶二聚体(CPD)的去除。多羟基化脂肪醇的保护机制仍在研究中。此外，已惊人地证明来自鳄梨种子的多羟基化脂肪醇的乙酰化衍生物与未乙酰化的多羟基化脂肪醇相比具有显著更小的毒性，其中未乙酰化的多羟基化脂肪醇分离自相同的来源并且在皂化过程中形成。体外毒性研究已经表明其中它们显示高生物活性的浓度(可达1 μ g/ml)的多羟基化脂肪醇对于角质形成细胞、成纤维细胞或T细胞没有毒性。这些结果以及另外的发现证明了多羟基化脂肪醇不仅存在于种子中而且还存在于鳄梨果实的可食用部分中，使得能够实现活性化合物的人类安全性分析。进行多羟基化脂肪醇的安全性测试以鉴定当与皮肤接触时本发明的化合物是否导致任何不期望的反应。Repeat Insult Patch Test被认为是用于预测在人类受试者中产生接触超敏感性的成分或产物的可能性的最可靠的研究。该方案对50名志愿者使用10个连续补片，没有一个显示不利的皮肤反应。因此，清楚的是，对于为美容应用提供来自鳄梨种子的活性成分是高度有益的，其没有或基本上没有这样的呋喃化合物从而避免化合物的可能的负面影响。类似地，代替它们的脱乙酰的衍生物，使用天然多羟基化脂肪醇是更加优选的，从而避免所述影响，其与化合物增加的细胞毒性有关。多羟基化脂肪醇的碱性水解导致主要是1，2，4_三羟基十七碳-16-烯和1，2， 4-三羟基十七碳-16-炔的形成。羟基化的多羟基化脂肪醇显著增加了化合物的毒性(图 6)。因此，代替从未皂化物中分离的脱乙酰化化合物，使用天然存在的乙酰化的多羟基化脂肪醇，或与其它鳄梨未皂化物组合是显著有利的，如在PCT申请W099/43298和美国专利号 6，582，688中所描述的。而且，在多羟基化脂肪醇的衍生物结构中至少一个乙酰基基团的存在增加了产物的稳定性并且保护活性分子免于氧化。美容配方根据本发明的至少一些实施方式，提供了用于局部施加的美容配方。根据一些实施方式，该组合物为用于传统皮肤外部制剂的任何形式，包括但不限于面部美容诸如洗液(护肤液)、乳液、霜剂、和美容涂敷剂；补妆美容诸如预补妆、粉底、颊着色、唇膏、唇霜、眼睑膏、眼线笔、睫毛膏、和遮光剂；体用美容；香味美容；皮肤清洁剂诸如补妆去除剂、面部清洁剂、和体用香波；气溶胶、粉饼、霜剂、软膏、乳剂、香精、泡沫、凝胶、 洗液、摩丝、糊剂、药膏(补片)、笔、浆液、溶液、小毛巾、面膜、体膜、喷雾剂、或棍。该美容组合物可以包括例如油/水乳液，诸如基于铝丙烯酰基-二甲基月桂酸酯 /VP共聚物的油/水乳液；凝胶配方，诸如基于聚甲基丙烯酸甘油酯/丙二醇的凝胶配方； 或非离子乳液，诸如基于乙氧基化的脂肪醇和山梨糖醇脂肪酸酯的非离子乳液。用于局部施加的优选的组合物是非离子水包油乳液。乳液组合物优选包括约30% 至约80% (w/w)油相，最优选约35%至约40% (w/w) 0水相优选在约19%至约70% (w/w) 并且更优选约59%至约65% (w/w)的范围内。多羟基化脂肪醇的浓度优选在约0.01%至约5% (w/w)并且更优选约0. 至约(w/w)的范围内。
油相优选由天然植物油、多不饱和脂肪酸、维生素A、E和F、抗坏血酸棕榈酸酯、抗氧化剂和其它合适的成分、或它们的混合物中的至少一种构成。天然植物油优选限于荷荷芭油、麦芽油、鳄梨油、豆油、麻油、米糠油、或任何其它合适的天然植物油。霜剂组合物的水相优选由水、天然植物提取物、湿润剂、非离子乳化剂、以及其它合适的成分的混合物构成。优选在将面部和身体皮肤暴露于毒素、病原体、UV辐射的不利环境、负面环境因子和污染物之前，霜剂配方可以可选地通过局部施加到面部皮肤、颈、头皮、眼睛周围和身体皮肤来给予。亲脂性天然油组合物优选包括多羟基化脂肪醇、天然植物油、多羟基化脂肪酸、 维生素A、E和F、抗氧化剂、渗透增强剂和其它合适的成分。多羟基化脂肪醇优选以在约 0.01%至约5% (w/w)并且更优选约0. 至约(w/w)的范围内的浓度存在。天然植物油的浓度优选为约20%至约80% (w/w)并且最优选约65%至75% (w/w) 0天然植物油优选由麦芽油、麻油、豆油、鳄梨油、橄榄油和米糠油中的一种或多种构成。脂肪酸优选是亚油酸、亚麻酸、Ω-3、γ亚麻酸和花生四烯酸-Ω-6或它们的混合物中的一种或多种。渗透增强剂优选以约0.5%至约2.0% (w/w)的浓度并且最优选2% (w/w)的浓度存在。优选的渗透增强剂包括但不限于丙二醇二壬酸酯和乙氧基二甘醇。丙二醇二壬酸酯优选以约1.60% (w/w)的浓度存在而乙氧基二甘醇优选以约0.4% (w/w)的浓度存在。 另外的合适的成分可选地以在约19%至约80% (w/w)的范围内存在。亲脂性天然油配方可以可选地通过局部施加到面部皮肤、颈、唇、头皮、眼睛周围和身体皮肤上，优选每日两次来给予。施加特别优选在将面部和身体皮肤暴露于毒素、病原体、UV辐射的不利环境、负面环境因子和污染物之前。可选地，该组合物进一步包括美容用载体。合适的载体的实例包括水；植物油，诸如荷荷芭油、鳄梨油或玉米油；矿物油；酯类诸如棕榈酸辛酯，豆蔻酸异丙酯和棕榈酸异丙酯；醚类诸如二癸基醚、二乙二醇单乙基醚和二甲基异山梨醇；醇类诸如乙醇和异丙醇；脂肪醇类诸如鲸蜡醇、鲸蜡硬脂醇、硬脂醇和联苯醇；异链烷烃诸如异辛烷和十六烷；硅酮油诸如环甲硅油、二甲硅油、二甲硅油交聚物、聚硅氧烷和它们的衍生物，优选有机改性的衍生物；烃油诸如矿物油、矿脂(凡士林)、异二十烷和聚异丁烯；多元醇诸如丙二醇、甘油、丁二醇、戊二醇、1，3_ 丁二醇、和己二醇；蜡诸如峰蜡和植物蜡；或它们的任何组合或混合物。该载体可以可选地进一步包括抗氧化剂，诸如例如绿茶提取物、生姜提取物和葡萄种子提取物、或它们的混合物。该组合物可以进一步可选地包括一种或多种美容用赋形剂，包括但不限于水溶性着色剂(诸如FD&C Blue#l)；油溶性着色剂(诸如D&C Green#6)；螯合剂(诸如EDTA 二钠)；乳液稳定剂(诸如卡波罗)；防腐剂(诸如羟苯甲酸甲酯)；香味剂(诸如松萜)； 调味剂(诸如山梨糖醇)；湿润剂(诸如聚乙二醇、丙二醇、甘油、1，3_ 丁二醇、己二醇、木糖醇、山梨糖醇、麦芽糖醇、硫酸软骨素、透明质酸、硫酸粘多糖、卡诺酸、Atelocollagen、 12-羟基硬脂酸胆固醇酯、月桂酸钠、胆汁盐、二吡咯烷酮碳酸盐、短链可溶性胶原、二甘油 (环氧乙烷)环氧丙烷加成物、栗子红的提取物、malifoils的提取物(千叶蓍(Achillea millefolium))、和草木犀的提取物)；增白剂(诸如胎盘提取物、谷胱甘肽、爬行虎耳草的提取物(虎耳草(Saxifrage stolonifera)))、防水剂(诸如PVP/二十碳烯(Eicosene) 共聚物)；水溶性成膜剂(诸如羟丙基甲基纤维素)；油可溶性成膜剂(诸如氢化的C-9树脂)；阳离子聚合物(诸如聚季铵盐(P0Iyquatemium)IO)；阴离子聚合物(诸如黄原胶)； 润肤剂，诸如二甲硅油、聚硅氧烷和环甲硅油；润滑剂；保湿液；皮肤渗透增强剂；表面活性剂；增稠剂；粘度调节剂；等等。分离的天然多羟基化脂肪醇或其衍生物的有效量和组合物的施加持续时间将随着待减少或防止的老化的特定征兆、个体的年龄和身体状况、年龄的征兆的程度、采用的特定载体、以及如在本领域技术人员的知识和经验内的因素而变化。施加的持续时间可以是例如每天一次或者每天两次，持续至少一周、两周或更多周。根据在所描述的优选实施方式中的另外的特征，本发明的组合物进一步包括选自由油可溶性维生素、抗氧化剂和多酚的抗氧化剂提取物、天然植物提取物和天然种子油，诸如例如基于绿茶的多酚、表没食子儿茶精(EGC)、表儿茶素3-没食子酸盐(ECG)、表儿茶素没食子酸盐(EG)、水飞蓟素、葡萄提取物、白藜芦醇二裂银杏(ginkgo biloba)提取物、多酚、迷迭香酸、乌索酸、辅酶QlO (C0QlO)、谷胱甘肽、维生素C、维生素A、番茄红素、类葫萝卜素、黄酮类化合物/多酚维生素E、芦荟(Alovera)提取物、以及石榴种子油中的一种或多种组成的组中的另外的化合物。另外的化合物可以包括例如麻醉剂；抗变应性药剂；抗微生物药；天然或合成 COX(环加氧酶)抑制剂诸如乙酰基水杨酸或乌索酸；抗菌药；螯合剂；着色剂；脱色剂；润肤剂，诸如二甲硅油、聚硅酮和环甲硅油；去角质磨砂膏(exfollients)，诸如视黄醛和视黄酸；香味剂；乳化剂；湿润剂；驱虫剂；润滑剂；保湿液；防腐剂；皮肤渗透增强剂；稳定剂；遮光剂；表面活性剂；增稠剂；粘度调节剂；防腐剂；抗氧化剂和维生素。然而，应当注意，任何这样的一种或多种另外的化合物被包括用于其对皮肤的视觉外观的美容效果。根据一些实施方式，本发明的组合物可选地进一步包括合成和天然化合物，其选自包括但不限于油可溶性维生素组、抗氧化剂或包含多酚的抗氧化剂提取物，诸如基于绿茶的多酚、表没食子儿茶精(EGC)、表儿茶素3-没食子酸盐(ECG)和表儿茶素没食子酸盐 (EG)、水飞蓟素、葡萄提取物、白藜芦醇、天然植物提取物如二裂银杏提取物、真芦荟提取物和天然种子油如石榴种子油。合适的维生素的实例包括维生素A、B族的维生素、维生素C、维生素E、以及它们的衍生物。有用的衍生物包括视黄醛、视黄醛、视黄酸、和其它相关的具有视黄醛或类视黄醛活性的化合物、抗坏血酸磷酸镁、抗坏血酸磷酸钠、生育酚抗坏血酸磷酸盐、和抗坏血酸生育酚马来酸盐。能够显示或防止氧化过程的抗氧化剂的实例包括诸如基于绿茶的多酚的化合物、 辅酶QlO (C0QlO)、谷胱甘肽、维生素C、维生素A、番茄红素、类葫萝卜素、黄酮类化合物/多酚和维生素E以及酶诸如过氧化氢酶和过氧化物酶。其它特别有用的另外的成分是遮光剂。优选的遮光剂是那些具有宽范围的UVB和 UVA保护的遮光剂，诸如氰双苯丙烯酸辛酯(octocrylene)、阿伏苯宗(Parsol 1 78 9)、甲氧基肉桂酸辛酯、homosylate、二苯甲酮、樟脑衍生物、氧化锌、以及二氧化钛。其它特别有用的另外的成分是剥落剂，诸如α含氧酸、β含氧酸、氧杂酸、氧杂二酸、以及它们的衍生物诸如酯类、酸酐以及它们的盐。多羟基化脂肪醇和衍生物本发明因此提供了包括改善人类皮肤的美学外观的量的天然分离的多羟基化脂肪醇或其衍生物、或它们的合成形式的局部美容组合物。根据优选的实施方式，多羟基化脂肪醇或其衍生物优选包括C13至C25碳的骨架， 优选具有至少一个不饱和碳键。优选地，如果存在至少一个不饱和的碳键，则其存在于骨架的最后两个碳之间，无论是作为双键或三键。可选且更优选地，羟基基团存在于Cl、C2或C4 处。根据优选的实施方式，多羟基化脂肪醇的衍生物优选包括已经被酰化(酯化)或氧化或者已经经历不饱和碳键与一个或多个其它分子的反应的多羟基化脂肪醇，例如用于不饱和碳键的氢化。如本文中所使用的术语“多羟基化脂肪醇的天然衍生物”是指任何类型的存在于果实或植物提取物中且没有经历水解的多羟基化脂肪醇的衍生物。如上面指出的，大部分成分被乙酰化，同时少量成分被去乙酰化。如本文中使用的术语“乙酰化的多羟基化脂肪醇”是指包含至少一个乙酰基代替羟基中的氢原子的所有类型的多羟基化脂肪醇。乙酰基可以可选地处于C1、C2或C4处，但是优选处于Cl或C4处。根据一些实施方式，多羟基化脂肪醇是天然多羟基化脂肪醇，其分离自基本纯的形式，诸如，例如95%纯、90%纯、85%纯或80%纯。根据本发明的一些实施方式，分离的天然多羟基化脂肪醇或其衍生物、或合成等价物包括但不限于1-乙酰氧基-2，4- 二羟基-16-十七碳烯或1，2- 二羟基-4-乙酰氧基-16-十七碳烯、1-乙酰氧基-2，4- 二羟基-16-十七碳炔或1，2- 二羟基-4-乙酰氧基-16-十七碳炔或它们的组合。分离自鳄梨种子和果实的天然乙酰化的多羟基化脂肪醇的洗脱分布在图IA和图 IB中示出。分离自鳄梨种子和梨的天然乙酰化的脂肪酸的主要衍生物的结构在图2中示
出ο化合物的识别通过使用GC/MS和LC/MS分析来进行。化合物的化学结构的说明是基于质谱中的特征峰(m/e)和化合物的钠加成物[M+Na]+的分子峰的类似性，其先前针对相应的多羟基化脂肪醇被描述。图3示出了通过在碱性溶液中皂化乙酰化的多羟基化脂肪醇而获得的去乙酰化的多羟基化脂肪醇的代表性结构。图4说明了来自鳄梨种子的代表性呋喃脂质的结构，从而示出了与本发明的多羟基化脂肪醇的优选实施方式在结构上的不同。根据一些实施方式，提供了一种用于从鳄梨种子的粗提取物中具体分离多羟基化脂肪醇的天然衍生物的部分的方法。该方法可选且优选包括从鳄梨果实分离鳄梨种子、压碎以及冻干鳄梨种子的步骤。利用非极性(有机)溶剂(例如，己烷、石油醚)或极性溶剂(乙醇、甲醇)来提取冻干的粉末，以获得粗脂质提取物。粗脂质提取物通过使用非极性溶剂(己烷、石油醚)或极性溶剂(乙醇、甲醇)来_集。期望的化合物优选通过冷却结晶的方法，即，在低于室温的温度下结晶，接着过滤来从富集的粗提取物中分离。
将过滤的化合物溶解在乙醇中，并且不溶的、高度非极性的化合物通过过滤来分
1 O蒸发乙醇并且获得的化合物利用非极性溶剂，诸如例如己烷或石油醚进行再结
曰
曰曰ο惊人地，发现了在非极性溶剂中从冷却的鳄梨提取物中再结晶的化合物富含乙酰化的多羟基化脂肪醇，并且不包括含呋喃的脂质，或包含仅微量的这些化合物。与使用分子蒸馏的背景技术方法，诸如在授权的美国专利号6，582，688中所描述的方法相比，多羟基化脂肪醇的天然衍生物的该分离方法显著使这些活性化合物的浓度增加至少约4倍，其导致在具有含呋喃的脂质的混合物中可达25%多羟基化脂肪醇的浓度。通过该方法分离的多羟基化脂肪醇的天然衍生物可以包括可达按重量计95%的干粉末。本发明的组合物可以可选地包括按重量计约0. 01%至约90%的天然多羟基化脂肪醇或它们的特定合成等价物。本发明进一步提供了一种用于从包括鳄梨果实和/或鳄梨种子的果实或植物来源中分离天然多羟基化脂肪醇和其衍生物的方法，所述天然多羟基化脂肪醇和其衍生物能保护免于环境损伤、UVB光损伤、和线粒体潜力的TPA引起的损失，并且是T淋巴细胞增殖、 TNF-α和IFN-Y表达的抑制剂。多羟基化脂肪醇抑制T淋巴细胞增殖、TNF- α和IFN- γ表达的能力已经被体外证明，如图5和图7中所示出的。在通过在无机碱性溶液中皂化鳄梨油进行的甘油三酯分离的工艺过程中，多羟基化脂肪醇的乙酰基衍生物发现被水解成未乙酰化的多羟基化脂肪醇并且以该状态保留在未皂化部分中。通过在去乙酰化的脂肪醇存在的情况下检查T细胞生存力，本发明的发明人已经证明了多羟基化脂肪醇的去乙酰化显著增加了分离的化合物的毒性(图6)。在一些实施方式中，本发明还可选地包括去乙酰化的脂肪醇，例如利用水解制备的，使得本文针对天然多羟基化脂肪醇描述的用途还可以归因于这样的去乙酰化醇。本发明的多羟基化脂肪醇的组合物可以用于保护皮肤和皮肤细胞免于由于暴露于污染物引起的损伤以及防止皮肤老化。污染物的实例包括但不限于大气因素、化学污染物、和生物污染物。影响皮肤的大气因素的实例包括但不限于来自太阳、臭氧、酸雨、和极端温度的辐射诸如UV辐射。化学和生物污染物包括来自汽车、工业、自由基、清洁材料、美容的污染物。受试者暴露于污染物可以导致异常皮肤状况的发展，诸如皮肤老化、皮肤刺激、和低皮肤湿度。本发明的多羟基化脂肪醇的混合物可以在暴露于上述污染物中的任一种之前和之后作为预防化合物来给予。剂量给药依赖于受试者对多羟基化脂肪醇的反应性。多羟基化脂肪醇组合物的量为约0. 01 μ g/ml至约10 μ g/ml是有效的。包含多羟基化脂肪醇的配方优选包含约0. 01% 至约5%的多羟基化脂肪醇并且更优选约0. 至约1%。然而，更高或更低的剂量也是可能的。剂量给药的剂量频率将依赖于受试者的反应性。本领域的普通技术人员可以容易地确定最佳剂量、剂量给药的方法和重复速率。实施例
16
现在，参考以下实施例，其与上面描述一起以非限制方式说明本发明。I 多羟基化脂肪醇的分离实施例1从鳄梨种子和它们的加碱水解中分离天然的多羟基化脂肪醇鳄梨种子分离自鳄梨，接着冷冻和冻干。因此利用己烷在Soxhlet设备中提取 IOkg冻干和粉碎的种子14小时。以40-60°C的温度间隔、在约30毫巴的压力下，在旋转蒸发器中蒸发有机溶剂。提取的化合物用2体积的己烷或石油醚(作为非极性溶剂的非限制性实例)溶解，然后放入具有在2-8°C范围内的温度的冷室中约12小时，用于冷却结晶工艺。结晶的化合物通过用Worthman滤纸过滤而分离自溶剂。该工艺产生30g的类晶化合物。根据GC/MS和HPLC/MS-ECI分析的洗脱分布和化学结构在图IA和图2中示出。没有检测到呋喃脂质。通过在室温下在甲醇中的2%氢氧化钠中的天然PFA的加碱水解M小时来获得去乙酰化的PFA。在反应结束时，通过5%盐酸来中和溶液并且通过二乙醚来提取去乙酰化的多羟基化脂肪醇。在减压下除去溶剂。开发了气相色谱法用于定量需要的多羟基化脂肪醇。利用装配有火焰离子检测仪的Perkin Elmer的气相色谱仪来进行分析。通过冷却结晶从鳄梨种子中分离的多羟基化脂肪醇的混合物被用作标准。实施例2从鳄梨中分离多羟基化脂肪醇为了从鳄梨果实的可食用部分中分离多羟基化脂肪醇，将200g鳄梨(Hagalil或 Ettinger)在60°C下在400ml的热乙醇中在1小时内提取两次，接着在4°C下进行丙酮提取过夜。收集所有提取物并且使溶剂蒸发。将干燥的提取物再溶解在35ml己烷中。鳄梨己烷提取物冷冻)过夜，并且通过过滤来分离沉淀的多羟基化脂肪醇，并通过GC柱来分析样品。该过程产生100-140mg的类晶化合物。通过GC的洗脱分布和根据GC/MS分子的化学结构在图IB和图2中示出。实施例3多羟基化脂肪醇对T细胞和Jurkat细胞增殖和T细胞生存力的影响人类T细胞纯化自健康人供体的外周血。将全血用RosetteS印tmAT细胞富集鸡尾酒(StemCell Technologies, Vancouver, BC, Canada)温育(20min，22°C )。残留的未沉淀细胞然后加载到淋巴细胞分离液(Lymphocyte Separation Medium) (ICN Biomedicals ； Belgium)上，通过密度离心分离，并且用PBS冲洗。获得的纯化细胞(> 95%⑶3+T细胞) 在包含抗生素和10%热灭活的FCS的RPMI中进行培养。T细胞的增殖在存在PFA的情况下， 在促有丝分裂的抗⑶3细胞活化后通过2，3- 二-[2-甲氧基-4-硝基-5-磺苯基]-2H-四唑-5-甲酰苯胺(carboxanilide) (XTT)测定来评估。为了研究多羟基化脂肪醇对T细胞生存力的影响，⑶3T细胞与试剂一起温育72小时，然后通过XTT测定来确定T细胞生存力。通过加入抗⑶3的⑶3+T细胞的激活刺激T细胞增殖。然而，该增殖被用PFA预处理细胞抑制。在用10 μ g/ml的浓度的PFA处理的抗⑶3激活的T细胞中观察到约40% 的生长抑制。Jurkat细胞更易感于PFA，在类似情况下获得大于80 %的细胞增殖的抑制。
1该结果在图5中示出。生存力测定揭示与未处理的细胞相比，在给予PFA 72小时后，T细胞的稍微减少的数目(图6)。在10 μ g/ml的PFA浓度下，活细胞的数目减少约10 %，其并不认为40 %的 T细胞抑制增殖。10 μ g/ml的浓度的去乙酰化的PFA显著降低T细胞增殖(约20%抑制) (图 6)。实施例4来自鳄梨种子的多羟基化脂肪醇的天然衍生物通过T淋巴细胞对TNF-α和 IFN-Y产生的抑制效果进行了以下实验，以便证实来自鳄梨种子的多羟基化脂肪醇的天然衍生物通过激活的T淋巴细胞对TNF- α和IFN- γ产生的抑制效果。T细胞QxlO6个细胞/ml)在M孔板中在基于包含10%热灭活的FCS的RPMI的培养基中用指定浓度的试剂激活(lhr，37°C)。洗涤细胞，并且以相同的浓度在有和没有来自鳄梨种子的多羟基化脂肪醇的情况下，在4°C下在预涂布的M孔板Qy g/ml ；非组织等级板)中对抗-⑶3mAb进行再次平板培养M小时。收集上清夜，并且通过使用ELISA商业试剂盒(OptiEIA kits ；BD Wiarmingen)，根据制造商的说明来确定细胞因子含量(TNF-α、 IFN- γ)ο用PFA预处理细胞导致通过T细胞的TNF- α和IFN- γ分泌的显著的剂量依赖抑制。1 μ g/ml浓度的PFA预处理，通过T细胞的TNF- α和IFN- γ分泌为低于对照细胞中的 25%和30%。在10 μ g/ml浓度的PFA存在的情况下，细胞因子表达的抑制显著更高，这相应地实现了约50%和70%。结果在图7中示出。实施例5在暴露于UVB辐射后多羟基化脂肪醇对角质形成细胞生存力的影响在5%的C02中在DMEM(Biological Industries,Beit Haemek，Israel)中在37°C 下生长HaCaT，一种人类永久化角质形成细胞系，所述DMEM补充有10%胎儿牛血清、L-谷氨酰胺2mM和抗生素(100U青霉素/ml和IOOmg链霉素/ml)。该细胞系来自N. Fusenig, Heidelberg, Germany的实验室。仅早期继代移种(< 50)被用于实验。原代正常人类表皮角质形成细胞通过M. Chaouat M. Sc. (Laboratory of Experimental Surgery,Hadassah Hospital, Jerusalem, Israel)提供。该细胞分离自在美容整形手术过程中切除的皮肤。简单地，确实进行薄裂开的厚度皮肤活检并且在4-8°C下胰蛋白酶化过夜。表皮层与真皮层分开，并且单个细胞被分离且在规定的角质形成细胞培养基中培养。角质形成细胞然后被再分配到包含致死辐照的3T3的烧瓶中。在37°C、8-10% CO2下温育该烧瓶。在达到亚汇合后，在没有3T3饲养层的情况下，将细胞再分配至新的烧瓶。通过MTT测定来测量HaCaT细胞存活力。该细胞在96孔微滴定板中以1 X IO5个细胞/孔进行温育。在UVB辐射之前，用PFA预处理细胞60分钟。在除去培养基之后，用 PBS充分冲洗培养基，用PBS填充，并且用UVB 30mJ/cm2辐射。在细胞辐射后，将PBS盐水改变成包含相应的PFA浓度的生长培养基并且温育细胞多于M小时。在温育时间结束时，向每个孔中加入100 μ 1的MTT(5mg/ml)。在37°C下温育4小时后，以IOOOrpm离心板50’。除去上清夜并且将沉淀溶解在100 μ 1的异丙醇中。在MOnm处分光光度地测量所得的溶液的0. D。利用包含荧光染料的Dead/Live 试剂盒(Molecular Probes, Eugene, OR, U. S. Α.) 来测量原代人角质形成细胞的生存力。角质形成细胞在8孔微米载板(组织培养物处理的， IBIDI)上生长达亚汇合状态。在UVB辐射之前，用PFA预处理细胞60分钟。在除去培养基之后，用PBS充分洗涤培养基，用PBS填充，并且用UVB 20mJ/cm2辐射。在细胞辐射后， PBS盐水改变成包含相应的PFA浓度的生长培养基，并且细胞温育多于M小时。通过使用共聚焦显微镜来计算细胞数目。在图8中示出了细胞生存力。细胞数目表示为与计算的初始细胞相比，在每一样品中活细胞的百分数。在没有UV处理的对照细胞的生存力任意给出为100%。如图8(A)中所示，与对照相比，暴露于UVB辐射的HaCaT细胞呈现出23%的细胞生存力。然而，当用PFA预处理细胞时，细胞生存力显著增加。在这些情况下，在用0.2ug/ ml和lug/ml PFA预处理后，细胞存活率相应地从23%增加至34%和43%。类似地，对于HaCaT细胞的行为，用PFA预处理显著增加了 UVB暴露的原代人角质形成细胞的生存力，如在图8(B)中所示出的。在这些情况下，用PFA预处理的UV辐射的原代人角质形成细胞的生存力从50% (对于未处理的细胞)增加至高达90%。PFA并不显示在洲。-〗〗。 之间的波长中的UVB筛的任何性能(数据未示出)。实施例6多羟基化脂肪醇对线粒体效力(Δ Vm)的TPA引起的损失的影响检查了多羟基化脂肪醇对UVB或PMA引起的线粒体跨膜效力的损失的影响。HaCaT 细胞在8孔微米载板(组织培养基处理的，IBIDLMunchen,Germany)上生长48小时，然后用多羟基化脂肪醇预处理40分钟。通过另外给予25ng/ml的浓度的12_0_四癸酰基佛波醇-13-乙酸酯(TPA)(还称为佛波醇12-肉豆蔻酸盐13-乙酸酯(PMA)来处理PFA处理的细胞90分钟。用PBS冲洗该细胞并且用效力敏感染料TMRM来染色。线粒体内TMRM的荧光通过共聚焦显微镜来测量，并且跨膜效力(Δ Vm)以荧光的任意单位来表达。多羟基化脂肪醇对线粒体效力的TPA引起的损失的影响在图9中示出。 用0. 2 μ g/ml-1 μ g/ml浓度范围的多羟基化脂肪醇预处理细胞显著防止HaCaT细胞的线粒体效力的损失。实施例7来自鳄梨种子的多羟基化脂肪醇对在原代人角质形成细胞中UV和TPA引起的 IL-6分泌的影响为了研究对IL-6的TPA引起的分泌的影响，在生长培养基中用多羟基化脂肪醇处理在M孔板中的处于亚汇合状态的原代角质形成细胞60分钟。在结束时，将生长培养基另外补充有lng/ml的TPA，并且在37°C，5% CO2下温育细胞8小时。在生长培养基中通过 ELISA 方法使用商业试剂盒(Human IL-6 Quantikine HS ELISA Kit, R&D system, MN, U. S. A.)，根据制造商的说明来量化IL-6。为了研究UV辐射的影响，在生长培养基中用多羟基化脂肪醇处理在M孔板中的处于亚汇合状态的原代人角质形成细胞60分钟。在除去培养基后，用PBS充分洗涤培养物， 用Icm的PBS层填充，并且用UVB(30mJ/cm2)辐照。在细胞辐照后，将PBS盐水改变成包含相应浓度的多羟基化脂肪醇的生长培养基，并且在37°C，5% CO2下温育细胞8小时。通过
19ELISA方法，通过使用相同的试剂盒，根据制造商的说明在细胞生长培养基中量化IL-6。结果在图10和图11中示出。如可以看到的，TPA和UVB辐射导致IL-6在原代人角质形成细胞中增加的分泌。用PFA预处理细胞显著抑制了 IL-6的另外的分泌40-50%。 PMA处理的细胞与UVB暴露的细胞之间的作为PFA对IL-6的抑制效果的差异在lug/ml并且在UVB辐照的细胞中更高的浓度处已经不明显。实施例8来自鳄梨种子的多羟基化脂肪醇对在原代人角质形成细胞中UVB引起的PGE2分泌的影响在生长培养基中用PFA处理在M孔板中的处于亚汇合状态的原代人角质形成细胞60分钟。在除去培养基后，用PBS充分洗涤培养物，用Icm的PBS层填充，并且用 UVB(30mJ/cm2)辐照。在辐照细胞后，将PBS盐水改变成包含相应浓度的多羟基化脂肪醇的生长培养基，并且在37°C，5% CO2下温育细胞8小时。通过ELISA方法，通过使用商业试剂盒(Prostaglandin E2 Parameter Assay Kit, R&D system，· MN，U. S. A.)，根据制造商的说明来量化PGE2。图12表明在原代人角质形成细胞中PGE2的UVB辐照引起的分泌。用多羟基化脂肪醇预处理细胞抑制了 PGE2的另外的分泌。图12所示的结果表明多羟基化脂肪醇对在 UVB暴露的角质形成细胞中前列腺素E2合成的抑制作用。实施例9多羟基化脂肪醇以及其具有乌索酸或乙酰基水杨酸的混合物对UV辐照的原代人角质形成细胞中PGE2分泌的抑制作用在基于DMEM的生长培养基中用多羟基化脂肪醇或乌索酸或乙酰基水杨酸的乙醇溶液，或者用多羟基化脂肪醇和乌索酸或乙酰基水杨酸的混合物处理在M孔板中的处于亚汇合状态的原代人角质形成细胞60分钟。在除去培养基后，用PBS充分洗涤培养物，用 Icm的PBS层填充，并且用UVB(30mJ/cm2)辐照。在辐照细胞后，将PBS盐水改变成包含测试化合物或它们的混合物的生长培养基，并且在37°C，5% CO2下温育细胞8小时。通过ELISA方法，通过使用相同的试剂盒，根据制造商的说明在培养基中量化 PGE2。结果示出在图13中。如图13所示，在多羟基化脂肪醇和COX抑制剂诸如乙酰基水杨酸或乌索酸的生物活性之间存在协同效应。与仅任何单一成分的PGE2分泌抑制活性相比，多羟基化脂肪醇与 COX抑制剂的混合物发现能以更高的水平降低通过原代人角质形成细胞的PGE2分泌。实施例10在器官培养模型中多羟基化脂肪醇防止皮肤组织UV损伤的能力在2小时外科手术中获得人类皮肤组织样品(under approval no. 0273-08-HM0 of the Institutional Review Board Committee ofHadassah Hospital, Jerusalem, Israel)。基本上如 Hasson 禾口 coworkers (Hasson, Ε. , Slovatizky, Y. , Shimoni, Y. , Falk, H. , Panet, A.&Mitrani, Ε. "Solid tissues can be manipulated ex vivo and used as vehicles for gene therapy". J Gene Med. 7 :926-935,2005)描述的，来进行器官培养。 简单地说，在DMEM中冲洗皮肤组织样品，并且用超薄切片机(tissue sectioner, Sorvall model TC-2 ；Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA)切成薄切片(300 μ m)并且在 37°C，5% CO2 下在包含 10% FCS、庆大霉素(15. 2μ g/ml)、禾口 Ciproxin(ciprofloxacin, 19 μ g/ ml)的DMEM中温育。在UV辐照之前，用多羟基化脂肪醇处理每一样品60分钟。之后，除去培养基， 用PBS充分洗涤培养物，用Icm的PBS层填充，并且用UVB(90mJ/cm2)辐照。在细胞辐照后，将PBS盐水改变成包含相应浓度的测试化合物的DMEM培养基。M小时后，将皮肤样品固定在包含4%多聚甲醛的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中30分钟，冲洗，并且包埋在 TissueTek (Sakura, Japan)中。通过使用^ungCM_3000低温恒温器制备8 μ m厚的冷冻切片来进行组织分析。用苏木精/曙红(H&E)根据常规的组织方法来完成染色。晒伤的细胞来自角质形成细胞。苏木精-曙红染色显示收缩的染色质、嗜曙红细胞质、和固缩核。结果在图14A和图14B中示出。用1 μ g/ml多元醇预处理皮肤移植物显著降低了处理和UV暴露的皮肤培养物的内的晒伤和凋亡细胞的数量。实施例11PFA促进人角质形成细胞中UVB引起的CPD的去除的能力在生长培养基中用多羟基化脂肪醇处理在9cm培养皿中的处于亚汇合状态的原代人角质形成细胞60分钟。在除去培养基后，用PBS充分洗涤培养物，用Icm的PBS层填充，并且用UVB(20mJ/cm2)辐照。在细胞辐照后，将PBS盐水改变成基于DMEM的包含相应浓度的多羟基化脂肪醇的生长培养基，并且在37°C，5% CO2下温育细胞M小时，接着使用 Wizard Genomic DNA Purification Kit (Promega,Madison, Wise. , USA). [12]进行 DNA 提取。在对照样品中，在辐照之后立即提取DNA。简单地说，将5 μ g/孔变性的DNA以一式三份施加到聚-L-赖氨酸(Sigma)中，预涂布ELISA板，用PBS洗涤5次并且用PBS中的 2% FCS截留。作为一抗，使用了 1 1，000稀释在PBS中的2% FCS中的抗胸腺嘧啶二聚体 H3 克隆 4F6 (Aff iteck，Oslo，Norway)。作为二抗，使用了 1 50，000 稀释的生物素-SP-结合的山羊抗小鼠Ig，接着1 10，000稀释的过氧化物酶结合的链酶生物素(Jackson)。过氧化物酶反应在0. 02% H202存在的情况下，利用0. 4mg/ml OPD (ο-苯胺)(Sigma)来进行， 并且在492nm处通过分光光谱来测量色强度。数据在图15中示出。1 μ g/ml浓度的多羟基化脂肪醇处理导致在辐照后M小时细胞中CPD浓度的显著降低。实施例12多羟基化脂肪醇对角质形成细胞和成纤维细胞生存力的影响与在实施例5中描述的一样生长HaCaT细胞。通过MTT测定来测量HaCaT细胞生存力。在96孔微滴定板中以IX IO5个细胞/孔来温育细胞。在过夜培养后，将100μ 1的多羟基化脂肪醇补充培养基加入到细胞中，并温育4 小时或M小时。向每个孔中加入100μ 1的MTT(5mg/ml)。在37°C下温育4小时后，以 IOOOrpm离心板50'。除去上清夜并且将沉淀溶解在100 μ 1的异丙醇中。在540nm处分光广度地测量所得溶液的0. D。正常人真皮成纤维细胞由 M. Chaouat M. Sc. (Laboratory of Experimental Surgery, Hadassah Hospital, Jerusalem, Israel)提供。成纤维细胞获自经历乳腺整形手术的健康供体。在 5%的 CO2 中在 DMEM(Biological Industries,Beit Haemek, Israel)中在37°C下在9cm培养皿中培养细胞，所述DMEM补充有10%胎儿牛血清、L-谷氨酰胺2mM 和抗生素(100U青霉素/ml和IOOmg链霉素/ml)。在第4代与第8代之间进行实验。通过MTT测定在M孔板上测量成纤维细胞生存力。用高达10 μ g/ml浓度的PFA 的短期HaCaT细胞处理Gh)并不显示PFA对细胞增殖的影响。相反，用高于1 μ g/ml浓度的PFA的长期细胞处理(Mh)表明细胞生存力的剂量依赖性降低。更小的PFA浓度对于 HaCaT细胞仍然是非毒性的(图16A)。在高达20 μ g/ml的浓度处没有检测到PFA对成纤维细胞生存力的影响(图16B)。实施例13用于美容用途的基于包含来自鳄梨种子的多羟基化脂肪醇的非离子性水包油乳液的霜剂组合物的制备非离子性水包油乳液构成组合物的20% -40%的油相(w/w)。该油相包含麦芽油、 聚不饱和脂肪酸、维生素A、E和F、抗坏血酸基棕榈酸盐和抗氧化剂。水相是60% -80% (w/ w)并且包含水、植物提取物。湿润剂和非离子性乳化剂的混合物。鳄梨衍生的多羟基化脂肪醇的浓度为0. 01 % -1 % (w/w)。霜剂通过将水相加入到油相中的反相乳化过程来制备。多羟基化脂肪醇预溶解到油相中，并且非离子性乳化剂预溶解到水相中。将两种相预加热至75°C。通过高速均化器产生乳化20-40分钟，通过低速行星混合器持续另外的60-120分钟。实施例14用于美容用途的包含来自鳄梨种子的多羟基化脂肪醇的亲脂性天然油组合物的制备亲脂性天然油组合物包括多羟基化脂肪醇、荷荷芭油、γ亚麻酸、promigranate 油、鳄梨油、维生素A、E和F、抗氧化剂和丙二醇以及二壬酸酯乙氧基二甘醇。多羟基化脂肪醇以浓度0.05% -0.1% (w/w)存在。天然植物油的浓度为70% (40% -80% ) (w/w)。聚丙二醇二壬酸酯以约1. 60% (2% -7% ) (w/w)的浓度存在，而乙氧基二甘醇以约0.4% (0. 05%-1%) (w/w)的浓度存在。另外的成分以27. 95% (10%-50%) (w/w)的浓度存在。实施例15临床毒性研究-重复损伤斑贴试验(Itepeat Insult Patch Test) (RIPT)多羟基化脂肪醇的毒性测试使用RIPT (重复损伤斑贴试验，R印eat Insult Patch Test)方法来进行。在RIPT中，将少量的活性化合物施加至每一个体受试者的皮肤，并且监视其效果。在某一时间间隔，对皮肤进行观察，评分，并再次测试。临床工作通过HELA Skin Research Center，一个专门评价用于美容、药物、食物补充剂、原料、医疗装置、和纺织工业的产品的独立国际组织的测试公司进行。该研究的目的是用来确定在重复给予人类受试者的皮肤的条件下用多羟基化脂肪醇处理的皮肤的刺激和/或敏感潜力。受试者被告知包括可能的不利反应的测试特性。 书面通知的同意文件在诱导之前由所有参与者签字。仅能够阅读、理解和随访指示的受试者要求参与。在测试开始前，每个受试者完成医疗史表格。受试者并不呈现任何身体和皮肤病学状况，这将排除测试材料的施加。重复损伤斑贴试验(Itepeat Insult) (RIPT)利用50名人类受试者以两个阶段
22进行。第一阶段是诱导期。每个测试补片施加的测试材料的量为5% w/w的每种物质的大约0. 2mL或0. 2g。将测试材料放置在2cm方形Parke-David Readi-Bandage (闭合物 (occlusive))上或2cm方形的固定至kanpor带(kanpor tape)或等价的覆盖物上的 Webril无纺布纤维织物。将补片施加至肩胛骨与腰之间的受试者的背部。在每次施加后 M小时，除去受试者的补片。在每次去除后，M小时休息期。在每次重新施加之前，通过有经验和持有证明书的HELA工作人员来评价部位。重复该程序直到进行9次施加测试材料。根据以下得分来评价皮肤反应0)没有可见的反应？)可疑的反应昏晕、最小限度的红斑、没有渗透1)弱阳性反应昏晕、渗透、离散的丘疹2)强阳性反应昏晕、渗透、丘疹、离散的泡囊3)额外的阳性反应强烈的昏晕、渗透、聚结的泡囊、球形反应。IR)刺激反应不连续的昏晕，没有渗透/有疤滤泡的昏晕/出血的和滤泡的脓疱。NT)未测试。如果受试者在诱导期发展了 2级或更高的阳性反应，则将补片施加至新鲜的邻近部位用于接着的应用。如果在第二部位或使用处出现2个或更多的反应，则对于剩余的诱导期不进行反应性测试材料的另外的施加。第二阶段是激发阶段。在施加最后的诱导补片10-21天后，将激发补片施加至先前未补片(原始)部位，邻近最初诱导补片部位。在施加M-48小时后，对激发部位进行评分。询问受试者以报告任何延迟反应的情况，其可能发生在最终激发补片读取之后。结果对50名志愿者进行测试7名男性和43名女性。受试者的年龄相对平均地分布在15至65岁之间。在施加测试材料过程中或之后在50名志愿者中的任一个中均没有发现皮肤反应。因此该材料可以被认为对皮肤是非刺激和非毒性的。可以理解，本发明的一些特征(为了清楚起见，其在单独的实施方式的上下文中描述)也可以在单个实施方式中组合提供。相反，为了简单起见，在单个实施方式的上下文中描述的本发明的不同特性也可以在本发明的任何其它描述的实施方式中单独地或以任何合适的子组合或作为适当地提供。在不同实施方式的上下文中描述的一些特征并不认为是这些实施方式的必要特征，除非在没有这些要素的情况下该实施方式不起作用。虽然已经结合其具体实施方式
描述了本发明，但显然的是，对本领域技术人员来说，许多替换、更改和变形将是显而易见的。因此，旨在包含落在所附权利要求的精神和宽范围内的所有这样的替换、更改和变形。本申请中的所有参考文献的引用或识别不应当解释为承认这样的参考文献作为现有技术可用来获得本发明。就使用节标题来说，它们不应解释为必要的限制。
权利要求
1.一种局部美容组合物，包括有效改善人类皮肤的美学外观的量的多羟基化脂肪醇或其衍生物；以及美容用载体。
2.一种用于改善在暴露于紫外线辐射后的人类皮肤的美学外观的方法，所述方法包括将包括美容有效量的多羟基化脂肪醇或其衍生物以及美容用载体的组合物施加至所述皮肤。
3.根据权利要求1或2所述的组合物或方法，其中，所述多羟基化脂肪醇或其衍生物包括C13至C25碳的骨架。
4.根据权利要求3所述的组合物或方法，其中，所述多羟基化脂肪醇或其衍生物包括至少一个不饱和碳键。
5.根据权利要求4所述的组合物或方法，其中，所述至少一个不饱和碳键存在于所述骨架的至少两个碳之间。
6.根据权利要求3-5中任一项所述的组合物或方法，其中，所述骨架进一步包括在Cl、 C2或C4中的一个或多个处存在的羟基。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的组合物或方法，其中，所述多羟基化脂肪醇分离自天然多羟基化脂肪醇。
8.根据权利要求7所述的组合物或方法，其中，所述分离的天然多羟基化脂肪醇分离自果实或植物来源。
9.根据权利要求8所述的组合物或方法，其中，所述果实或植物来源选自由鳄梨果实和鳄梨种子组成的组。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的组合物或方法，其中，所述天然多羟基化脂肪醇的衍生物基本包括乙酰化的衍生物。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的组合物或方法，其中，所述多羟基化脂肪醇或其衍生物以基本纯的形式分离。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的组合物或方法，其中，所述多羟基化脂肪醇或其衍生物由合成的方法制备。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的组合物或方法，其中，所述多羟基化脂肪醇或其衍生物以所分离物质的约80%至约95% w/w的纯度存在。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的组合物或方法，其中，所述多羟基化脂肪醇以总组合物的约0. 001%至约20% w/w的浓度存在。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的组合物或方法，其中，所述多羟基化脂肪醇以总组合物的约0. 01%至约5% w/w的浓度存在。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的组合物或方法，其中，所述总组合物基本不含有呋喃脂质体。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的组合物或方法，其中，所述多羟基化脂肪醇或其衍生物或其组合选自由1-乙酰氧基_2，4- 二羟基-16-十七碳烯或1，2- 二羟基-4-乙酰氧基-16-十七碳烯、1-乙酰氧基_2，4- 二羟基-16-十七碳炔或1，2- 二羟基-4-乙酰氧基-16-十七碳炔组成的组。
18.根据权利要求1-17中任-项所述的组合物或方法，其中，所述组合物进一步包括选自由油可溶性维生素、抗氧化剂和多酚的抗氧化剂提取物、天然植物提取物和天然种子油组成的组中的另外的化合物。
19.根据权利要求18所述的组合物或方法，其中，所述另外的化合物选自由基于绿茶的多酚、表没食子儿茶精(EGC)、表儿茶素3-没食子酸酯/盐(ECG)、表儿茶素没食子酸酯/ 盐(EG)、水飞蓟素、葡萄提取物、白藜芦醇二裂银杏提取物、多酚、辅酶QlO (C0QlO)、谷胱甘肽、维生素C、维生素A、番茄红素、类葫萝卜素、黄酮类化合物/多酚维生素E、芦荟提取物、 以及石榴种子油组成的组。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的组合物或方法，其中，所述组合物包括选自由麻醉剂；抗变应性药剂；抗微生物药；抗真菌剂；抗菌药；螯合剂；着色剂；脱色剂；润肤剂； 去角质磨砂膏；香味剂；乳化剂；湿润剂；驱虫剂；润滑剂；保湿液；防腐剂；皮肤渗透增强剂；稳定剂；遮光剂；表面活性剂；增稠剂；粘度调节剂；以及维生素组成的组中的另外的化合物。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的组合物或方法，其中，所述组合物以选自由气溶胶、粉饼、霜剂、软膏、乳剂、香精、泡沫、凝胶、洗液、摩丝、糊剂、补片、笔、浆液、溶液、小毛巾、面膜、体膜、喷雾剂和棍组成的组中的形式
22.根据权利要求21所述的组合物或方法，其中，所述乳剂是水包油乳剂。
23.根据权利要求22所述的组合物或方法，其中，所述水包油乳剂包括约30%至约 80% w/w的油相。
24.根据权利要求23所述的组合物或方法，其中，所述油相选自由天然植物油、多不饱和脂肪酸、维生素A、E和F、抗坏血酸基棕榈酸酯、抗氧化剂和其它合适的成分、或它们的混合物组成的组。
25.根据权利要求M所述的组合物或方法，其中，所述天然植物油选自由荷荷芭油、麦芽油、鳄梨油、豆油、麻油、米糠油、或它们的组合组成的组。
26.根据权利要求22-25中任一项所述的组合物或方法，其中，所述多羟基化脂肪醇以总组合物的约0.01%至约5% (w/w)的浓度存在。
27.根据权利要求沈所述的组合物或方法，其中，所述多羟基化脂肪醇以总组合物的约0. 05%至约(w/w)的浓度存在。
28.根据权利要求1-27中任一项所述的组合物或方法在用于降低对人类皮肤的UV损伤的外部征兆中的应用。
29.根据权利要求1-27中任一项所述的组合物或方法在用于防止对人类皮肤的UV损伤中的应用。
30.根据权利要求1-27中任一项所述的组合物或方法在用于降低在人类皮肤中UV引起的老化的外部征兆中的应用。
31.根据权利要求1-27中任一项所述的组合物或方法在用于防止在人类皮肤中UV引起的老化的外部征兆中的应用。
32.根据权利要求30或31中任一项所述的应用，其中所述老化的外部征兆包括色素斑的外观。
33.根据权利要求32所述的应用，其中所述色素斑选自由雀斑、黑斑病和太阳痣组成的组。
34.根据权利要求30-33中任一项所述的应用，其中所述UV引起的老化的外部征兆选自由脆弱皮肤、下垂皮肤、细纹、起皱、薄化皮肤、缺少光泽的皮肤、疲乏的皮肤、以及干燥的皮肤组成的组。
35.根据权利要求1-27中任一项所述的组合物或方法在用于降低皮肤的发红或刺激中的应用。
36.根据权利要求1-27中任一项所述的组合物或方法在用于防止或降低尿布疹中的应用。
37.根据权利要求1-27中任一项所述的组合物或方法在用于降低对人类皮肤的环境损伤的外部征兆中的应用。
38.根据权利要求1-27中任一项所述的组合物或方法在用于降低对人体皮肤的一种或多种可视的老化影响中的应用。
39.根据权利要求1-27中任一项所述的组合物或方法在用于改善对人体皮肤的一种或多种老化影响中的应用。
40.根据权利要求1-27中任一项所述的组合物或方法在用于防止对人体皮肤的一种或多种老化影响中的应用。
41.根据权利要求1-27中任一项所述的组合物或方法在用于防止对人类皮肤的环境损伤的外部征兆中的应用。
42.一种用于从果实或植物来源中分离天然多羟基化脂肪醇及其衍生物的方法，所述方法包括压碎所述果实或植物来源以获得冻干的粉末；利用非极性有机溶剂或极性溶剂提取所述冻干的粉末以获得粗脂质提取物； 利用非极性溶剂或极性溶剂富集所述粗脂质提取物以获得富集的粗脂质提取物； 通过在低于室温的温度下结晶而从所述富集的粗脂质提取物中分离所述多羟基化脂肪醇和其衍生物以获得晶体；过滤所述结晶的多羟基化脂肪醇和其衍生物； 向所述滤液中加入乙醇； 过滤保留在所述乙醇中的不可溶物质； 蒸发；以及用非极性溶剂重结晶。
43.根据权利要求42所述的组合物或方法，其中，所述果实或植物来源选自由鳄梨果实和鳄梨种子组成的组。
全文摘要
用于防止或逆转由于环境污染和/或UV辐射对受试者的皮肤引起的损伤的美容方法和组合物，该方法和组合物包括用于局部施加的分离的聚羟基化的脂肪醇或其衍生物，例如通过减少对皮肤细胞的损伤和/或改善人类皮肤的美学外观其量有效的预防或逆转对皮肤的环境污染和/或UV辐射的有害影响。
文档编号A61Q19/08GK102387838SQ200980135029
公开日2012年3月21日 申请日期2009年9月8日 优先权日2008年9月8日
发明者塞·梅雷特茨基, 根纳迪·罗森布拉特, 约瑟夫·塞加尔 申请人:多元醇生物技术有限公司