专利名称：一种萌芽大豆提取物及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种萌芽大豆提取物及其制备方法与应用。
背景技术：
大豆主要活性成分是大豆异黄酮、大皂皂苷、大豆卵磷脂、大豆蛋白、氨基酸以多种维生素等。特别是大豆异黄酮也叫植物雌性激素。它是一种天然的雌激素，对人体无任何副作用。用于化妆品中能防止皮肤胶原量的减少，保持皮肤弹性，预防皮肤黑色素的形成；起到净白肌肤、抗松弛、恢复肌肤弹性、解决因更年期雌性激素的减少所产生的问题，创造肌肤第二春。关于豆芽的最早记载见于《灵枢经》和《神农本草经》，在宋代以前，豆芽仅为药用，并未把它当作蔬菜食用。大量文献报道，大豆经发芽后，其活性成分得到进一步的改善，大豆异黄酮的结构成分发生了改变，异黄酮苷元含量明显提高，氨基酸、各种维生素的含量也大幅提高，这些活性成分的变化进一步奠定了其用于化妆品的功效性。
发明内容
本发明的目的是提供一种萌芽大豆提取物及其制备方法。本发明所提供的萌芽大豆提取物是按照包括下述步骤的方法制备得到的以粉碎后的萌芽大豆为原料，用质量浓度为60 % -80 %的乙醇水溶液进行提取，得到所述萌芽大豆提取物；所述萌芽大豆是由大豆萌发2-5天得到的。其中，所述乙醇水溶液优选质量浓度为75%的乙醇水溶液。所述萌芽大豆与所述乙醇水溶液的配比可为Ig (10-20)ml，优选为Ig 20ml, 所述萌芽大豆的质量以干重计；所述提取具体为超声提取；所述超声提取的温度可为 40-70°C，优选为55°C;时间为30-40分钟，优选为35分钟；超声频率可为60-100KHZ。所述粉碎后的萌芽大豆的粒度可为40-60目。本发明的方法还包括下述纯化的步骤提取结束后，离心、收集提取液，将所述提取液中的乙醇蒸发除去(至无乙醇味即可)，再将剩余物质用丙二醇等适用于化妆品中的有机溶剂溶解，收集溶液，灭菌，得到纯化后的萌芽大豆提取物。在纯化步骤中，所述离心的转速为4000-5000rpm，优选为4000rpm ；离心的时间为 10-30分钟，优选为20分钟；在纯化步骤中，所述丙二醇的加入量与所述剩余物质的配比为10_15ml Ig;所述灭菌的温度为80-100°C，时间为30-45min。本发明中所采用的原料萌芽大豆具体是按照下述方法得到的1)将大豆清洗干净，加水浸泡；2)将浸泡后的大豆在20°C -25°C下萌发2_5天，得到所述萌芽大豆。其中，步骤1)中，所述水与大豆的质量比可为(1.5-3) 1，优选2 1 ；所述浸泡的时间可为6-10h，优选8h，浸泡温度为室温即可；步骤幻中，大豆萌发的具体方法如下将浸泡后的大豆浙干水分并置于垫有湿润
3脱水棉的容器中，并用纱布覆盖，置于一定温度下培养萌发，萌发温度为20°C 25°C，优选温度为22°C ；每隔一定时间淋水一次，保持大豆湿润，每24h用清水清洗一次，防止豆芽发霉腐烂；发芽时间为2 5天，优选3天；发芽结束后将豆芽用清水清洗一次，取出，50°C低温烘干。本发明的再一个目的是提供上述萌芽大豆提取物的应用。本发明所提供的萌芽大豆提取物的应用是其在制备化妆品中的应用；尤其是制备具有延缓衰老功效化妆品中的应用。含有本发明萌芽大豆提取物的化妆品以及含有该萌芽大豆提取物的组合物也属于本发明的保护范围。本发明所提供的提取分离方法简便，所得产品纯度较高，产品质量有了很大的改进。由于大豆中所含的异黄酮具有活跃细胞代谢，防止皮肤胶原量的减少，保持皮肤弹性， 预防皮肤黑色素的形成，阻隔斑点的形成及退化暗晦肤色等功效，能全面缓解女性更年期出现的肌肤问题，让失调的肌肤回复均衡状态。大豆中所含的皂苷、多种维生素等活性成分还具有抗氧化，清除自由基、预防皮炎、抵抗日光损害等功能，通过萌芽的方法，进一步提高了活性成分的含量和改善了活性成分的质量。所得到的提取物经试验验证具有较强的自由基清除能力以及较高的酪氨酸酶活性抑制能力。因此萌芽大豆提取物可以作为延缓皮肤衰老的功效添加剂，在制备化妆品中，尤其是制备具有延缓皮肤衰老功效的化妆品，具有广泛应用。
图1为本发明提供的制备萌芽大豆提取物的生产工艺流程图；图2为大豆萌芽前后大豆异黄酮和大豆皂苷含量比较的柱形图；图3为大豆萌芽前后烟酸、维生素B6、游离生物素和维生素C含量比较的柱形图；图4为萌芽大豆提取物清除DPPH自由基能力测定；图5为萌芽大豆提取物抑制酪氨酸酶活性的测定。
具体实施例方式下面通过具体实施例对本发明的方法进行说明，但本发明并不局限与此。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。实施例1、制备萌芽大豆提取物萌芽大豆提取物的生产工艺流程图如图1所示，具体制备过程如下1)制备萌芽大豆取一定质量的大豆，清洗干净，加大豆质量2倍的去离子水，室温下浸泡他；浸泡结束后，将大豆浙干水分并置于垫有湿润脱水棉的容器中，并用纱布覆盖，置于22°C下培养萌发；每隔一定时间淋水一次，保持大豆湿润，每24h用清水清洗一次，防止豆芽发霉腐烂； 发芽3天后将豆芽用清水清洗一次，取出。2)提取将50g豆芽(以干重计)粉碎至40-60目，按料液比Ig 20ml加入提取液(IOOOmL
4质量浓度为75%的乙醇水溶液)；在55°C下以100KHZ的超声频率超声提取35min (加盖保鲜膜，减少蒸发)；自然冷却至室温后，4000r/min的转速下离心20分钟，取上清液；对上清液进行真空滤饼抽滤，收集滤液；旋转蒸发除去滤液中的乙醇，按质量体积(m ν)= Ig 15ml加入丙二醇，使旋蒸后剩余的物质充分搅拌溶解，过滤除去不溶物得澄清溶液。 将澄清溶液在90°C高温灭菌30min后，得到萌芽大豆提取物溶液。实施例2、制备萌芽大豆提取物萌芽大豆提取物的生产工艺流程图如图1所示，具体制备过程如下1)制备萌芽大豆取一定质量的大豆，清洗干净，加大豆质量1. 5倍的去离子水，室温下浸泡他；浸泡结束后，将大豆浙干水分并置于垫有湿润脱水棉的容器中，并用纱布覆盖，置于22°C下培养萌发；每隔一定时间淋水一次，保持大豆湿润，每24h用清水清洗一次，防止豆芽发霉腐烂；发芽2天后将豆芽用清水清洗一次，取出。2)提取将50g豆芽(以干重计)粉碎至40-60目，按料液比Ig IOml加入提取液(IOOOmL 质量浓度为60%的乙醇水溶液)；在40°C下以60KHZ的超声频率超声提取30min(加盖保鲜膜，减少蒸发)；自然冷却至室温后，4000r/min的转速下离心20分钟，取上清液；对上清液进行真空滤饼抽滤，收集滤液；旋转蒸发除去滤液中的乙醇，按质量体积(m ν)= Ig 15ml加入丙二醇，使旋蒸后剩余的物质充分搅拌溶解，过滤除去不溶物得澄清溶液。 将澄清溶液在90°C高温灭菌30min后，得到萌芽大豆提取物溶液。实施例3、制备萌芽大豆提取物萌芽大豆提取物的生产工艺流程图如图1所示，具体制备过程如下1)制备萌芽大豆取一定质量的大豆，清洗干净，加大豆质量3倍的去离子水，室温下浸泡他；浸泡结束后，将大豆浙干水分并置于垫有湿润脱水棉的容器中，并用纱布覆盖，置于25°C下培养萌发；每隔一定时间淋水一次，保持大豆湿润，每24h用清水清洗一次，防止豆芽发霉腐烂； 发芽5天后将豆芽用清水清洗一次，取出。2)提取将50g豆芽(以干重计)粉碎至40-60目，按料液比Ig 20ml加入提取液(IOOOmL 质量浓度为80%的乙醇水溶液)；在70°C下以80KHZ的超声频率超声提取40min(加盖保鲜膜，减少蒸发)；自然冷却至室温后，4000r/min的转速下离心20分钟，取上清液；对上清液进行真空滤饼抽滤，收集滤液；旋转蒸发除去滤液中的乙醇，按质量体积(m ν)= Ig 15ml加入丙二醇，使旋蒸后剩余的物质充分搅拌溶解，过滤除去不溶物得澄清溶液。 将澄清溶液在90°C高温灭菌30min后，得到萌芽大豆提取物溶液。实施例4、萌芽大豆提取物的功能测定试验将实施例1、2、3中制备得到的萌芽大豆提取物分别依次进行如下实验。下述试验中所用的萌芽大豆提取物溶液，是将实施例1、2、3制备得到的萌芽大豆提取物溶液记为质量浓度为100%的提取物溶液，其它浓度的提取物溶液是将该溶液进行相应稀释得到的。1、大豆萌发前后活性成分成分含量的比较
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将实施例1制备得到的萌芽大豆于50°C低温烘干，得干燥的萌芽大豆。测定干豆与干燥的萌芽大豆中活性成分的含量。大豆异黄酮的测定参照如下文献提供的方法进行1)鞠兴荣，袁建，汪海峰，三波长紫外分光光度法测定大豆异黄酮含量的研究，食品科学，2001年第22期46-48 ；2)申海进，汪海峰，袁健等，大豆发芽期异黄酮含量变化的研究及其促进剂的影响，中国粮油学报， 2006 年第 6 期75-78。大豆皂苷含量的测定参照如下文献提供的方法进行阮洪生，陈志宝，朱丹等，豆粕中大豆皂苷提取工艺的研究，食品科技，2008年15卷第3期15-17。豆芽中维生素C含量的测定参照如下文献提供的方法进行郭红转，路占国，王彩艳，豆芽生长过程中维生素C的消长规律研究，食品研究与开发，2006年第27卷第二期。烟酸的测定、维生素B6的测定、游离生物素的测定分别采用GB/T 5009. 89-2003、 GB/T 5009. 154-2003、GB/T 5413. 19-197 的方法进行。实施例1得到的萌芽大豆的实验结果见图2和图3。由图可知，与未发芽大豆相比，大豆发芽3天后大豆异黄酮、维生素C、烟酸、游离生物素的含量得到明显提高，尤其是维生素C在干大豆并不存在，大豆皂苷和维生素B6的含量在大豆发芽前后没有明显变化。 说明本发明所采用的萌发3天的大豆，其中所含的活性成分含量较高。实施例2和3中得到的萌芽大豆的结果与上述结果无显著差异。2、清除DPPH自由基能力测定DPPH清除率测定方法按照如下文献提供的方法进行郑大贵，叶青，叶红德，余衍文，DPPH法评价Vc、异Vc及其衍生物的抗氧化性能，食品工业科技，2008年第04期 113-115。1，1-二苯基-2-三硝基苯胼(DPPH·)是一种稳定的有机自由基，在可见光区最大吸收峰为517nm，在乙醇溶液中，每个DPPH分子在溶液中可生成一个稳定的含氮自由基，具有典型紫色，当它与提供1个电子的自由基清除剂作用时，生成无色产物，使溶液的典型紫色变浅。其褪色程度与配对电子数成化学计量关系。因而可用分光光度法进行定量分析，来检测自由基清除情况，从而评价样品的抗氧化能力。其能力用清除率来表示，清除率越大， 则表明其抗氧化能力越强。实验方法取一定质量的提取液用丙二醇进行梯度稀释，稀释后提取液浓度分别为 0g/100ml、lg/100ml、2g/100ml、3g/100ml、4g/100ml、5g/100ml、6g/100ml。取等体积的待测液与2X 10_4mOl/L的DPPH溶液加入同一试管中混勻(各取鈿1)，30min后用95%乙醇作参比，在517nm下测其吸光度A3 ；同时测定2 X lO^mol/L的DPPH溶液与等体积95%乙醇混合后的吸光度A1以及测定待测液与等体积95%乙醇混合液的吸光度A2。DPPH 清除率=[I-(A3-A2) /A1] X 100%(A3-A2)消除了料液自身颜色造成的误差，其与A1的比值就是未被清除的自由基所显现出来的颜色深浅程度，用1减去该比值即得到料液对DPPH的清除率。所用的对比物-未发芽大豆提取物按照实施例1中的提取方法进行制备，只需将萌芽大豆替换为未发芽大豆。实施例1制备得到的萌芽大豆提取物的实验结果见图4。由图可知，自由基清除率随提取液浓度的加大而升高，当提取液浓度在4g/100ml时对自由基的清除率非常高，比未
6发芽大豆提取物的自由基清除效果明显。说明本发明提供的萌芽大豆提取物具有较强的自由基清除能力，具有一定的抗衰老功效。实施例2和3制备得到的萌芽大豆提取物的结果与上述结果无显著差异。3、抑制酪氨酸酶活性的测定黑色素的形成在于皮肤黑色素细胞组织中的酪氨酸在酪氨酸酶等酶的作用下经多巴、多巴醌、多巴色素、二羟基吲哚等中间体逐步转化为真黑色素；进而，黑色素细胞组织将黑色素转移到角蛋白细胞中，并随着角质层周期换新而脱落，人体肤色的差异主要取决于真黑色素和褐黑素的含量及分布，但当真黑色素过速增长和分布不均时，就会造成局部皮肤过黑或色素沉着。参与黑色素合成主要有三种酶酪氨酸酶，多巴色素互变酶 (Dopachrom tautomerase)和二羟基吲哚羧酸(DHICA)氧化酶。酪氨酸酶属氧化还原酶，是黑色素合成的主要限速酶，其活性大小决定黑色素形成的数量，目前市场上销售的许多美白、祛斑产品都是以抑制酪氨酸酶活性达到美白作用，故对酪氨酸酶抑制作用的强弱是评价增白化妆品的主要指标。L-酪氨酸酶与其底物L-酪氨酸可以发生催化反应。当在实验体系中添加了有 L-酪氨酸酶活性抑制作用的试剂后，对催化反应可以产生抑制作用，通过测定添加试剂前后于475nm处的吸光光度，来评价试剂对L-酪氨酸酶活性的抑制率。实验方法(I)C2管配好摇勻后，在37°C水浴锅中水浴加热lOmin，波长475nm下调零。(2) C1管溶液配好摇勻，37°C水浴IOmin后，加酪氨酸酶1ml，继续水浴10分钟，测
Sc1吸光度值。(3)按(1) (2)同样方法，以T2调零测定T1吸光度值。(4)计算样品对酪氨酸酶的活性抑制率T )。公式)= (C1-T1)ZC1XlOO^表1试剂配比表
单位(mL)C1C2T1T2L-酪氨酸2222样品0022PBS4523酪氨酸酶1010总体积7777注=C1和T1均加入ImL酪氨酸酶，酶活为100U/mL。实施例1得到的萌芽大豆提取物的实验结果见图5。由图可知，萌芽大豆提取液对酪氨酸酶活性的抑制效果随起浓度的升高而加大，当提取液浓度为6g/100ml时抑制率达到60%以上，抑制效果明显。说明本发明提供的萌芽大豆提取物具有较高的酪氨酸酶活性
7抑制能力，可用于制备化妆品，尤其是用来制备具有延缓衰老和美白功效的化妆品。实施例 2和3得到的萌芽大豆提取物的结果与上述结果无显著差异。
权利要求
1.一种制备萌芽大豆提取物的方法，包括下述步骤以粉碎后的萌芽大豆为原料，用质量浓度为60-80%的乙醇水溶液进行提取，得到所述萌芽大豆提取物；其中，所述萌芽大豆是由大豆萌发2-5天得到的。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述萌芽大豆与所述乙醇水溶液的配比为Ig 10-20ml，优选为Ig 20ml，所述萌芽大豆的质量以干重计；所述提取为超声提取； 所述超声提取的温度为40-70°C，时间为30-40分钟，超声频率为60-100KHZ ；所述粉碎后的萌芽大豆的粒度为40-60目。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述方法还包括下述纯化的步骤提取结束后，离心、收集提取液，将所述提取液中的乙醇蒸发除去，再将剩余物质用丙二醇溶解，收集溶液，灭菌，得到纯化后的萌芽大豆提取物。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述离心的转速为4000-5000rpm，优选为 4000r/min ；离心的时间为10-30分钟，优选为20分钟；所述丙二醇的加入量与所述剩余物质的配比为10_15ml lg；所述灭菌的温度为80-90°C，时间为30-45min。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于所述萌芽大豆是按照下述方法得到的1)将大豆清洗干净，加水浸泡；2)将浸泡后的大豆在20°C-25°C下萌发2-5天，得到所述萌芽大豆。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于步骤1)中，所述水与大豆的质量比为 (1.5-3) 1，优选2 1 ；所述浸泡的时间为6-10h，优选他，浸泡温度为室温；步骤2)中， 所述萌发的温度为22°C，时间为3天。
7.权利要求1-6中任一项所述方法制备得到的萌芽大豆提取物。
8.权利要求7所述的萌芽大豆提取物在制备化妆品中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于所述化妆品为具有延缓衰老和美白功效的化妆品。
10.一种具有延缓衰老和美白功效的化妆品，其特征在于所述化妆品含有权利要求8 所述的萌芽大豆提取物。
全文摘要
本发明公开了一种萌芽大豆提取物及其制备方法与应用。该萌芽大豆提取物是按照包括下述步骤的方法制备得到的以粉碎后的萌芽大豆为原料，用质量浓度为75％的乙醇水溶液进行提取，得到所述萌芽大豆提取物；其中，所述萌芽大豆是由大豆萌发2-5天得到的。本发明所提供的提取分离方法简便，所得产品纯度较高，产品质量有了很大的改进。大豆经萌芽后，其活性成分的含量和质量都有所提高。以萌芽大豆为原料进行提取，所得到的提取物经验证具有较强的自由基清除能力以及较高的酪氨酸酶活性抑制能力。因此该萌芽大豆提取物可以作为延缓皮肤衰老的功效添加剂，在制备化妆品中，尤其是制备具有延缓皮肤衰老功效的化妆品，具有广泛应用。
文档编号A61Q19/08GK102397172SQ20101027541
公开日2012年4月4日 申请日期2010年9月7日 优先权日2010年9月7日
发明者何聪芬, 彭立伟, 王领, 董银卯, 赵华 申请人:北京工商大学