专利名称：用于化妆品的带电荷柔性纳米脂质体及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种带电荷柔性纳米脂质体，更具体地，本发明涉及一种用于化妆品的带电荷柔性纳米脂质体及其制备方法。
背景技术：
随着技术、仪器和方法学的发展，人们对于人体自身的认识越来越深刻，对于皮肤生理病理的认识已经深入到基因和分子生物学水平，对于相关的生物医药及化妆品产业的发展产生了巨大的推动作用，越来越多的具有生物活性的动植物成分和/或生物高分子成分应用到化妆品行业，取得了巨大的社会和经济效益。但是，将这些具有生物活性的物质应用到化妆品中，面临着诸多难题，主要表现在以下二个方面1、这些生物活性物质的稳定性如何解决，这类物质的稳定性除了由其自身的结构和空间构象决定外，外界环境因素的影响也不容小视，例如表皮活性因子溶液，在外界环境中的活性持续时间仅有短短的数小时，在其被皮肤吸收发挥作用之前就基本失活了，根本不能发挥其应有的作用和效果；2、如何使这些高分子成分能够被人体皮肤吸收，通常来说，活性物分子量越小，越容易透过皮肤，一旦分子量大于600，活性物就很难被皮肤吸收了，而近年来应用的具有特定皮肤活性功能的物质大多数是肽类等高分子物质，其分子量少则数千，多则数十万，这就决定了它们很难透过皮肤从而被有效吸收。通常化妆品中活性成分的种类少则十余种，多则达到数十种，活性成分之间的理化反应限制了化妆品处方筛选的范围。为了解决这些问题，目前也采用了很多解决方法比如新的药物制剂技术越来越多地被应用到化妆品行业，目前，解决活性物稳定性和相容性主要采取加入稳定剂、冷冻干燥、制备成乳剂、用环糊精、微囊(球)、脂质体进行包裹等方法；而促进皮肤吸收则采用了以下一些方法将药物本身的颗粒制备成纳米级、加入Azone 等透皮促进剂、采用离子导入或电致孔、制备成具有促透性能的纳米级包裹体等。另外将脂质体制备工艺应用到化妆品中，大量的研究事实证明，将化妆品活性成分包裹到脂质体中，可以极大提高这些活性成分的稳定性，这些活性成分从脂质体中释放具有缓释性能，同时，由于脂质体膜成分与人体细胞生物膜的成分极其接近，因此这类制剂生物相容性好，安全性高。特别是二十世纪六十年代出现的柔性纳米脂质体，可以通过其自身的柔性和变形性，高效地穿透比自身直径小数倍的皮肤孔道从而达到良好的透皮吸收效果，柔性纳米脂质体不仅可以包裹小分子活性物，对于分子量高达IO6的生物大分子活性物质亦具有比较优良的皮肤透过性能，是化妆品制备中极具潜力的制备方法。另外，化妆品活性成分分别用脂质体包裹，可以有效避免这些成分可能存在的相互作用和理化反应。虽然普通脂质体能提高稳定性和使用的安全性，但其自身稳定性还是相对不高；而且不容易促进透皮吸收。所以市场上迫切需要一种应用在化妆品中的制剂，其不仅能提高化妆品的生物活性物质的稳定性，而且能促进透皮吸收，达到最佳的护肤养肤效果。
发明内容
本发明为了解决上述问题，提供一种透皮能力强且与皮肤结合更紧密的带电荷柔性纳米脂质体制剂。本发明的另一目的在于提供了一种用于化妆品的带电荷柔性纳米脂质体及其制备方法。本发明创新性地将带电荷的脂质成分嵌合到柔性纳米脂质体膜中，利用皮肤表面酸碱特性，使带电荷脂质体通过静电吸引与局部皮肤结合更加紧密，以利于活性成分更有效地延长在皮肤的作用时间，以利于充分发挥这些活性成分护肤养肤的作用效果。本发明的技术方案如下所述的带电荷柔性纳米脂质体包括下列重量份的组分 1-1000份中性磷脂、0. 5-500份带电荷磷脂、1-1000份胆固醇、0. 5-500份表面活性剂、
0.1-20份透明质酸、0. 5-250份化妆品活性成分、100-8000份的冷冻干燥保护剂。在本发明一较佳实施例中，本发明所述的带电荷柔性纳米脂质体包括下列重量份的组分100-120份中性磷脂、0. 5-100份带电荷磷脂、15-100份胆固醇、10-100份表面活性剂、0. 1-2份透明质酸、0. 5-250份化妆品活性成分、400-800份的冷冻干燥保护剂。在本发明一更佳实施例中，本发明所述的带电荷柔性纳米脂质体包括下列重量份的组分100-120份中性磷脂、0. 5-20份带电荷磷脂、15-20份胆固醇、10-20份表面活性剂、
1.5份透明质酸、20份化妆品活性成分、400-600份的冷冻干燥保护剂。其中，所述的中性磷脂选自大豆卵磷脂、氢化大豆磷脂、蛋黄卵磷脂、脑磷脂，以及二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、 二棕榈酰磷脂酰乙醇胺等天然或合成磷脂中的一种或几种；所述的带电荷磷脂选自磷脂酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、双鲸蜡磷脂酸肌醇等负电荷磷脂中的一种或几种，或者是选自硬脂酰胺、3β-[Ν-(Ν，，Ν，_ 二甲基乙胺)胺基甲酰基]胆固醇、N-[l-(2， 3-二油酰基)丙基]-N，N，N-三乙胺氯、2，3_ 二油酰氧-N-[2-(精氨酸基酰胺)乙基]-N， N- 二甲基-1-丙基-三氟乙酸胺、1，2- 二油酰氧丙基-N，N, N-三甲基溴化铵等合成正电荷脂质中的一种或几种；所述的表面活性剂是胆酸钠或去氧胆酸钠。本发明优选大豆卵磷脂、氢化大豆磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、磷脂酸、磷脂酰甘油、硬脂酰胺、3β-[Ν-(Ν’，N’ - 二甲基乙胺)胺基甲酰基]胆固醇中的一种或几种。其中的磷脂酸、磷脂酰甘油属于负电荷脂质成分，赋予柔性纳米脂质体膜带负电荷，以利于脂质体与碱性呈正电性的局部皮肤的结合与吸收；硬脂酰胺、3 β-[N-(N’，N’ - 二甲基乙胺)胺基甲酰基]胆固醇属于正电荷脂质成分，赋予柔性纳米脂质体膜带正电荷，以利于脂质体与酸性呈负电性的局部皮肤的结合与吸收。本发明胆固醇的使用，是为了调节脂质体膜的流动性和通透性，进而调整脂质体膜的稳定性。本发明使用的表面活性剂，可以使脂质体膜具有更大的弹性与变形性，从而促进脂质体的透皮吸收性能。优选胆酸钠或去氧胆酸钠。本发明的带电荷柔性纳米脂质体开可以包括常规用量的相当于脂质体总重量约 0. 2%抗氧化剂，以防止其在常温条件下贮存时被氧化。所述的氧化剂可选用但不限于维生素C、维生素E、丁基羟基茴香醚(BHA) ,2,6- 二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)、茶多酚、愈创树脂、芝麻酚、波尔定碱中的一种或多种。优选维生素E和丁基羟基茴香醚(BHA)组成的混合抗氧化剂。本发明的带电荷柔性纳米脂质体可以包括相当于脂质体总重量4-8倍的冷冻干燥保护剂。所述的冷冻干燥保护剂可选用但不限于蔗糖、甘露醇、葡萄糖、海藻糖。优选甘露醇。上述脂质成分与所包裹活性成分的重量比，对脂质体的稳定性、包封率及载药量有较大影响，适宜的脂质成分与所包裹活性成分的重量比在2 1至5 1之间；冻干保护剂与脂质体的重量比，对最终产品的载药量亦有较大影响，适宜的比例范围是冻干保护剂脂质体3 1-6 1。本发明提供了脂质体混悬液中，脂质体包裹的活性成分与游离的活性成分分离的透析方法，还可以采用超速离心法、柱层析法等分离脂质体与游离成分。本发明还提供了带电荷柔性纳米脂质体的制备方法改良的逆相蒸发-超声-均质-挤出-冻干法。其中所述的改良的逆相蒸发亦可采用常规的脂质体制备方法，包括薄膜分散法、注入法、加热法、 乳化法等。本发明采用改良的逆相蒸发-超声-均质-挤出-冻干法制备带电荷柔性纳米脂质体，具体步骤如下1)将磷脂、胆固醇、脂溶活性成分等脂溶性成分在35°C水浴条件下溶解于挥发性有机溶剂中；2)将透明质酸、表面活性剂、水溶活性成分等水溶性成分在35°C水浴条件下溶解于磷酸缓冲溶液(pH = 7. 0)中；3)将步骤1)和2、超声混合，使之形成稳定的乳浊液，静置30分钟不分层；4)将步骤幻所得的乳浊液旋转蒸发，直至形成脂质体混悬液；5)将步骤4)所得脂质体混悬液超声破碎30次(超声5秒、停5秒为1次)后， 5000PSI-10000PSI均质3次，最后通过挤出仪过IOOnm滤膜3次；6)将步骤幻得到的溶液，采用透析法分离脂质体包裹的活性成分和游离在磷酸缓冲液中的活性成分；7)在步骤6)得到的透析袋中的脂质体混悬液中，加入5-8倍量的冻干保护剂， 于-40°C预冻12小时以上，再置于冷冻干燥机冻干，得到白色流动性良好的冻干带电荷柔性纳米脂质体粉末。本发明的有益效果在于本发明制备的带电荷柔性纳米脂质体粒径在50-200nm 之间，表面电荷绝对值在50mV以上，使所包裹的活性成分具有更好的稳定性。同时，在柔性纳米脂质体膜成分中引入带电荷脂质成分，除了使脂质体具有良好的皮肤透过性外，脂质体与细胞生物膜之间具有更强的粘附性，有利于局部充分发挥活性成分的作用功效和作用效率，减少活性成分的使用量，进而利于节约资源。而本发明采用的改良的逆相蒸发-超声-均质-挤出-冻干法，使产品具有较高的包封率和载药量；整个工艺过程均由机械手段完成，使产品工艺和质量具有较好的稳定性和重现性；本发明最终的产品为流动性良好的粉末，便于使用、运输和贮存。
图1为阳离子积雪苷柔性纳米脂质体电镜图；其中A为刚制备的脂质体原液；B为冻干后重新悬浮的脂质体；C未加冻干保护剂的冻干脂质体；D为加冻干保护剂的冻干脂质体；图2为不同样品累积释放结果；图3为实验样品M小时累积透皮吸收量；图4为实验样品M小时累积透皮吸收百分率(％ )。
具体实施例方式实施例1将IOOmg大豆卵磷脂、16mg硬脂酰胺、15mg胆固醇水浴超声溶于氯仿中，将25mg 积雪苷、0. ^iig维生素E与BHA混可抗氧化剂溶于少量乙醇中，再与氯仿液混合；将12mg胆酸钠、1. 7mg透明质酸溶于pH7. 0的磷酸缓冲液中；将前述的磷酸缓冲液与氯仿溶液在水浴中超声成均勻乳浊液，静置30分钟后，旋转蒸发得脂质体混悬液；将脂质体混悬液用探针式超声细胞破碎仪超声30个循环(每循环超声5秒，间歇5秒)后，用AVESTIN高压均质机均质3次，再通过AVESTIN挤出仪过IOOnm的微孔滤膜10次，挤出的脂质体混悬液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小时；取透析袋中的脂质体混悬液，加入4倍脂质质量的甘露醇，于_40°C预冻12小时后，放置于冷冻干燥机冷冻干燥成粉末状。所得到的阳离子积雪苷柔性纳米脂质体的粒径和kta电位经ktasizeHNano ZS-90, Malvern)纳米粒度及电位分析仪测定其粒径和kta电位分别为61. 72士 11. 29nm, 69. 1 士 5. 99mV ；采用透析法分离测得产品的包封率为四.7%。实施例2将120mg氢化大豆卵磷脂、20mg硬脂酰胺、18mg胆固醇水浴超声溶于氯仿中，将 0. 25mg维生素E与BHA混可抗氧化剂溶于少量乙醇中，再与氯仿液混合；将2000UI表皮活性因子(EGF)、15mg胆酸钠、1. 7mg透明质酸溶于pH7. 0的磷酸缓冲液中；将前述的磷酸缓冲液与氯仿溶液在水浴中超声成均勻乳浊液，静置30分钟后，旋转蒸发得脂质体混悬液； 将脂质体混悬液用探针式超声细胞破碎仪超声30个循环(每循环超声5秒，间歇5秒)后， 用AVESTIN高压均质机均质3次，再通过AVESTIN挤出仪过IOOnm的微孔滤膜10次，挤出的脂质体混悬液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小时；取透析袋中的脂质体混悬液，加入5倍脂质质量的海藻糖，于_40°C预冻12小时后，放置于冷冻干燥机冷冻干燥成粉末状。所得到的阳离子EGF柔性纳米脂质体的粒径和kta电位经ktasizer(Nano ZS-90, Malvern)纳米粒度及电位分析仪测定其粒径和kta电位分别为178. 2士21. 91nm、 65. 0 士 6. 04mV ；采用透析法分离测得产品的包封率为31. 7%。实施例3将IOmg 二棕榈酰磷脂酰胆碱、2mg硬脂酰胺、2mg胆固醇水浴超声溶于氯仿中，将
0.20mg维生素C与BHA混可抗氧化剂溶于少量乙醇中，再与氯仿液混合；将5mg紫草素、
1.6mg胆酸钠、1. 7mg透明质酸溶于pH7. 0的磷酸缓冲液中；将前述的磷酸缓冲液与氯仿溶液在水浴中超声成均勻乳浊液，静置30分钟后，旋转蒸发得脂质体混悬液；将脂质体混悬液用探针式超声细胞破碎仪超声30个循环(每循环超声5秒，间歇5秒)后，用AVESTIN 高压均质机均质3次，再通过AVESTIN挤出仪过IOOnm的微孔滤膜10次，挤出的脂质体混悬液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小时；取透析袋中的脂质体混悬液，加入5倍脂质质量的乳糖，于-40°C预冻12小时后，放置于冷冻干燥机冷冻干燥成粉末状。所得到的阳离子紫草素柔性纳米脂质体的粒径和kta电位经ktasizeHNano ZS-90, Malvern)纳米粒度及电位分析仪测定其粒径和kta电位分别为81. 55士31. 20nm、 63. 7 士 5. 4ImV ；采用透析法分离测得产品的包封率为30. 1%。实施例4将500mg氢化大豆卵磷脂、80mg硬脂酰胺、75mg胆固醇水浴超声溶于氯仿中，将 1. Smg维生素E与茶多酚混可抗氧化剂溶于少量乙醇中，再与氯仿液混合；将5mg尿囊素、 75mg去氧胆酸钠、8. 5mg透明质酸溶于35°C pH7. 0的磷酸缓冲液中；将前述的磷酸缓冲液与氯仿溶液在水浴中超声成均勻乳浊液，静置30分钟后，旋转蒸发得脂质体混悬液；将脂质体混悬液用探针式超声细胞破碎仪超声30个循环(每循环超声5秒，间歇5秒)后，用 AVESTIN高压均质机均质3次，再通过AVESTIN挤出仪过IOOnm的微孔滤膜10次，挤出的脂质体混悬液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小时；取透析袋中的脂质体混悬液，加入5倍脂质质量的甘露醇，于_40°C预冻12小时后，放置于冷冻干燥机冷冻干燥成粉末状。所得到的阳离子尿囊素柔性纳米脂质体的粒径和kta电位经ktasizeHNano ZS-90, Malvern)纳米粒度及电位分析仪测定其粒径和kta电位分别为88. 38士 14. 92nm、 51. 5 士 4. 26mV ；采用透析法分离测得产品的包封率为34. 1%。实施例5将500mg氢化大豆卵磷脂、50mg 3 β -[N-(N'，N’ -二甲基乙胺)胺基甲酰基]胆固醇、75mg胆固醇水浴超声溶于氯仿中，将200mg辅酶Q10、l. 8mg维生素E与BHA混可抗氧化剂溶于少量乙醇中，再与氯仿液混合；将75mg胆酸钠、8. 5mg透明质酸溶于35°C pH7. 0 的磷酸缓冲液中；将前述的磷酸缓冲液与氯仿溶液在水浴中超声成均勻乳浊液，静置30分钟后，旋转蒸发得脂质体混悬液；将脂质体混悬液用探针式超声细胞破碎仪超声30个循环 (每循环超声5秒，间歇5秒)后，用AVESTIN高压均质机均质3次，再通过AVESTIN挤出仪过IOOnm的微孔滤膜10次，挤出的脂质体混悬液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小时；取透析袋中的脂质体混悬液，加入6倍脂质质量的甘露醇，于_40°C预冻12小时后，放置于冷冻干燥机冷冻干燥成粉末状。所得到的阳离子辅酶QlO柔性纳米脂质体的粒径和kta电位经ktasizer (Nano ZS-90, Malvern)纳米粒度及电位分析仪测定其粒径和kta电位分别为106. 8士85. 51nm、 60. 3 士 5. 49mV ；采用透析法分离测得产品的包封率为31. 8%。实施例6将12mg氢化大豆卵磷脂、1. 5mg磷脂酰甘油、1. 5mg胆固醇水浴超声溶于氯仿中， 将1. 25mg神经酰胺2、0. 025mg维生素E与BHA混可抗氧化剂溶于少量乙醇中，再与氯仿液混合；将1. 5mg去氧胆酸钠、0. 17mg透明质酸溶于pH7. 0的磷酸缓冲液中；将前述的磷酸缓冲液与氯仿溶液在水浴中超声成均勻乳浊液，静置30分钟后，旋转蒸发得脂质体混悬液； 将脂质体混悬液用探针式超声细胞破碎仪超声30个循环(每循环超声5秒，间歇5秒)后，用AVESTIN高压均质机均质3次，再通过AVESTIN挤出仪过IOOnm的微孔滤膜10次，挤出的脂质体混悬液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小时；取透析袋中的脂质体混悬液，加入5倍脂质质量的甘露醇，于_40°C预冻12小时后，放置于冷冻干燥机冷冻干燥成粉末状。所得到的阴离子神经酰胺2柔性纳米脂质体的粒径和^ta电位经 Zetasizer (Nano ZS-90, Malvern)纳米粒度及电位分析仪测定其粒径和kta电位分别为 139. 7士23. Inm, -52. 1 士5. 95mV ；采用透析法分离测得产品的包封率为28. 3%0实施例7将120mg氢化大豆卵磷脂、20mg硬脂酰胺、18mg胆固醇水浴超声溶于氯仿中，将 30mg水飞蓟素、0. 20mg维生素E与BHT混可抗氧化剂溶于少量乙醇中，再与氯仿液混合；将 15mg去氧胆酸钠、1. 7mg透明质酸溶于pH7. 0的磷酸缓冲液中；将前述的磷酸缓冲液与氯仿溶液在水浴中超声成均勻乳浊液，静置30分钟后，旋转蒸发得脂质体混悬液；将脂质体混悬液用探针式超声细胞破碎仪超声30个循环(每循环超声5秒，间歇5秒)后，用AVESTIN 高压均质机均质3次，再通过AVESTIN挤出仪过IOOnm的微孔滤膜10次，挤出的脂质体混悬液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小时；取透析袋中的脂质体混悬液，加入3倍脂质质量的蔗糖，于-40°C预冻12小时后，放置于冷冻干燥机冷冻干燥成粉末状。所得到的阳离子水飞蓟素柔性纳米脂质体的粒径和kta电位经ktasizer (Nano ZS-90, Malvern)纳米粒度及电位分析仪测定其粒径和kta电位分别为117. 2士 19. 21nm、 57. 4 士 7. 25mV ；采用透析法分离测得产品的包封率为32. 9%。实施例8将IOOmg大豆卵磷脂、16mg硬脂酰胺、IOmg胆固醇水浴超声溶于氯仿中，将0. 25mg 维生素E与BHA混可抗氧化剂溶于少量乙醇中，再与氯仿液混合；将20mg胶原蛋白、15mg去氧胆酸钠、1. 7mg透明质酸溶于pH7. 0的磷酸缓冲液中；将前述的磷酸缓冲液与氯仿溶液在水浴中超声成均勻乳浊液，静置30分钟后，旋转蒸发得脂质体混悬液；将脂质体混悬液用探针式超声细胞破碎仪超声30个循环(每循环超声5秒，间歇5秒)后，用AVESTIN高压均质机均质3次，再通过AVESTIN挤出仪过IOOnm的微孔滤膜10次，挤出的脂质体混悬液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小时；取透析袋中的脂质体混悬液，加入4 倍脂质质量的甘露醇，于-40°C预冻12小时后，放置于冷冻干燥机冷冻干燥成粉末状。所得到的阳离子胶原蛋白柔性纳米脂质体的粒径和kta电位经ktasizer (Nano ZS-90, Malvern)纳米粒度及电位分析仪测定其粒径和Zeta电位分别为158. 7士 10. 68nm、 55. 0 士 5. 58mV。实施例9将120mg大豆卵磷脂、16mg硬脂酰胺、IOmg胆固醇水浴超声溶于氯仿中，将0. 25mg 维生素E与BHA混可抗氧化剂溶于少量乙醇中，再与氯仿液混合；将25mg五肽、15mg去氧胆酸钠、1. 7mg透明质酸溶于pH7. 0的磷酸缓冲液中；将前述的磷酸缓冲液与氯仿溶液在水浴中超声成均勻乳浊液，静置30分钟后，旋转蒸发得脂质体混悬液；将脂质体混悬液用探针式超声细胞破碎仪超声30个循环(每循环超声5秒，间歇5秒)后，用AVESTIN高压均质机均质3次，再通过AVESTIN挤出仪过IOOnm的微孔滤膜10次，挤出的脂质体混悬液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小时；取透析袋中的脂质体混悬液，加入4倍脂质质量的甘露醇，于-40°C预冻12小时后，放置于冷冻干燥机冷冻干燥成粉末状。所得到的阳离子五肽柔性纳米脂质体的粒径和kta电位经 Zetasizer (NanoZS-90, Malvern)纳米粒度及电位分析仪测定其粒径和kta电位分别为 93. 3 士 22. 71nm、62. 7 士 6. 16mV。上述实施例中，中性磷脂由日油株式会社提供，硬脂酰胺为美国Sigma-Aldrich Chemie GmbH产品，磷脂酰甘油由美国Avanti Polar Lipids Inc.生产，磷脂酸由上海作舟化工科技有限公司提供，胆固醇、去氧胆酸钠以及胆酸钠由天津市大茂化学试剂厂生产，透明质酸由山东福瑞达生物医药有限公司生产，甘露醇由上海实验试剂有限公司生产，BHA由上海QIGANG Pd生产，维生素E为美国Sigma产品，磷酸缓冲液根据中国药典自配，其余试剂均为市售产品，除有机溶剂外均符合食品或药用标准。效果实施例1形态学将阳离子积雪苷柔性纳米脂质体混悬液，磷钨酸负染，透射电镜下观察形态；将冻干阳离子积雪苷柔性纳米脂质体用磷酸缓冲液重新混悬，磷钨酸负染，透射电镜下观察形态；在扫描电镜下观察未加冻干保护剂和加入冻干保护剂的阳离子积雪苷柔性纳米脂质体见图1。效果实施例2稳定性取3批阳离子EGF柔性纳米脂质体及冻干阳离子EGF柔性纳米脂质体粉末，分别置于室温、4°C条件下，于Om和: 测定其包封率、pH、粒径和kta电位，并观察外观，以确定其稳定性。见表1。表1脂质体混悬液及冻干脂质体分别放置3个月后其稳定性结果
贮存时间(月)
脂质体混悬液
冻干脂质体
0
3***
3**
包封率(％或mg*)31.729.380.1340.130室温pH7.037.166.98**7.03贮粒径(nm)178.284.7467.5465.41存电位(mV)60.561.7-46.38-44.52条包封率(％)31.730.790.1340.132件A eppH7.037.056.986.874。粒径(nm)178.275.0467.5463.79电位(mV)60.565.3-46.38-48.77 *脂质体混悬液包封率单位为%，冻干脂质体载药量单位为mg/每mg冻干粉；** 冻干脂质体的PH、粒径和电位是将其用PBS溶液重新悬浮后测定；***表示与0月相比无显著性差异(P > 0. 05)
效果实施例3体外释放特性 分别取阳离子积雪苷柔性纳米脂质体混悬液5ml (含积雪苷约78. 2 μ g)和积雪苷溶液5ml (含积雪苷约80. Oyg)，分别置于透析袋中；积雪苷脂质体乳膏IOOmg (含积雪苷约78. 3μ g)置于滤纸筒中。按中国药典规定的桨法测定其释放特征，接收液PBS体积50ml， 释放温度保持37. O0C，磁力搅拌速度为50rpm。在事先确定的时间点吸取0. 5ml SBF接收液并随即补充相同体积的SBF溶液。采用前述的HPLC方法检测释放出的药物量。每个样
10本平行实验3次。结果见图2。效果实施例4体外透皮吸收分别配制积雪苷阳离子柔性脂质体(样品A)、积雪苷柔性脂质体(样品B)、积雪苷一般阳性脂质体(样品C)及积雪苷溶液(样品D)，并分别加入到同配方的空白膏体中， 使每g膏体含积雪苷约0. 25mg ；去用于透皮吸收的商品化猪皮，根据Franz扩散池的口径 (0. 66cm2)，裁剪成适宜大小，使猪皮表面(角质层)朝上，安装于扩散池上，各涂抹膏体Ig ； 接收液为PBS溶液，温度37°C，接收液体积2. 5ml，在规定的时间点将所有接收液取出，同时补充新的接收液；按前面的方法检测接收液积雪苷含量，计算积雪苷累积透皮吸收量和百分率；最后一个时间点取样后，将猪皮正反面用蒸馏水冲洗，猪皮浸泡于50mlPBS液中M小时，测定浸泡液积雪苷含量，以确定积雪苷在猪皮中的滞留量。结果见图3、图4和表2。表4不同样品在猪皮中的滞留量(n = 3)
权利要求
1.一种用于化妆品的带电荷柔性纳米脂质体，其特征在于所述的带电荷柔性纳米脂质体包括下列重量份的组分1-1000份中性磷脂、0. 5-500份带电荷磷脂、1-1000份胆固醇、0. 5-500份表面活性剂、0. 1-20份透明质酸、0. 5-250份化妆品活性成分、100-8000份的冷冻干燥保护剂。
2.根据权利要求1所述的用于化妆品的带电荷柔性纳米脂质体，其特征在于所述的带电荷柔性纳米脂质体包括下列重量份的组分100-120份中性磷脂、0. 5-100份带电荷磷脂、15-100份胆固醇、10-100份表面活性剂、0. 1-2份透明质酸、0. 5-250份化妆品活性成分、400-800份的冷冻干燥保护剂。
3.根据权利要求1所述的用于化妆品的带电荷柔性纳米脂质体，其特征在于所述的带电荷柔性纳米脂质体包括下列重量份的组分100-120份中性磷脂、0. 5-20份带电荷磷脂、15-20份胆固醇、10-20份表面活性剂、1. 5份透明质酸、20份化妆品活性成分、400-600 份的冷冻干燥保护剂。
4.根据权利要求1-3任一所述的用于化妆品的带电荷柔性纳米脂质体，其特征在于 化妆品活性成分选自胶原蛋白、水飞蓟素、神经酰胺、辅酶Q10、尿囊素、紫草素、UI表皮活性因子或积雪苷一种或者多种。
5.根据权利要求1-3任一所述的用于化妆品的带电荷柔性纳米脂质体，其特征在于 其还包括占脂质体总重量0. 1-0. 5%的复核抗氧化剂，其中所述的复核抗氧化剂选自维生素C、维生素E、丁基羟基茴香醚、2，6_二叔丁基-4-甲基苯酚、茶多酚、愈创树脂、芝麻酚、波尔定碱中的一种或多种。
6.根据权利要求1-3任一所述的用于化妆品的带电荷柔性纳米脂质体，其特征在于 所述复核抗氧化剂为维生素E与丁基羟基茴香醚，其比例为10 1到10 5。
7.根据权利要求1-3任一所述的用于化妆品的带电荷柔性纳米脂质体，其特征在于 所述的带电荷柔性纳米脂质体的粒径范围为50-200nm。
8.根据权利要求1-3任一所述的用于化妆品的带电荷柔性纳米脂质体，其特征在于 所述的带电荷柔性纳米脂质体的kta-电位范围为(-70)-70mV。
9.根据权利要求1-3任一所述的用于化妆品的带电荷柔性纳米脂质体，其特征在于 所述的中性磷脂选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、脑磷脂，以及二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺等天然或合成磷脂中的一种或几种；所述的带电荷磷脂选自磷脂酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、 磷脂酰丝氨酸、双鲸蜡磷脂酸肌醇等负电荷磷脂中的一种或几种，或者是选自硬脂酰胺、 3β-[Ν-(Ν，，Ν，- 二甲基乙胺)胺基甲酰基]胆固醇、N-[l-(2，3-二油酰基)丙基]-Ν，Ν， N-三乙胺氯、2，3- 二油酰氧-N-[2-(精氨酸基酰胺)乙基]-N，N- 二甲基-1-丙基-三氟乙酸胺、1，2_ 二油酰氧丙基-N，N, N-三甲基溴化铵合成正电荷脂质中的一种或几种；所述的表面活性剂是胆酸钠或去氧胆酸钠；所述的冷冻干燥保护剂选用蔗糖、甘露醇、葡萄糖、 海藻糖中的一种或几种。
10.一种如权利要求1-3任一所述的用于化妆品的带电荷柔性纳米脂质体的制备方法，所述包括如下步骤1)将磷脂、胆固醇、脂溶活性成分在35°c水浴条件下溶解于挥发性有机溶剂中；2)将透明质酸、表面活性剂、水溶活性成分等水溶性成分在35°C水浴条件下溶解于磷酸缓冲溶液(pH = 7. 0)中；3)将步骤1)和2、超声混合，使之形成稳定的乳浊液，静置30分钟不分层；4)将步骤幻所得的乳浊液旋转蒸发，直至形成脂质体混悬液；5)将步骤4)所得脂质体混悬液超声破碎30次后，5000PSI-10000PSI均质3次，最后通过挤出仪过IOOnm滤膜3次；6)将步骤幻得到的溶液，采用透析法分离脂质体包裹的活性成分和游离在磷酸缓冲液中的活性成分；7)在步骤6)得到的透析袋中的脂质体混悬液中，加入5-8倍量的冻干保护剂， 于-40°C预冻12小时以上，再置于冷冻干燥机冻干，得到白色流动性良好的冻干带电荷柔性纳米脂质体粉末。
全文摘要
本发明涉及一种用于化妆品的带电荷柔性纳米脂质体及其制备方法。本发明的用于化妆品的带电荷柔性纳米脂质体包括下列重量份的组分1-1000份中性磷脂、0.5-500份带电荷磷脂、1-1000份胆固醇、0.5-500份表面活性剂、0.1-20份透明质酸、0.5-250份化妆品活性成分、100-8000份的冷冻干燥保护剂。本发明的化妆品活性成分带电荷柔性纳米脂质体，可以显著提高化妆品活性成分的稳定性，促进活性成分的透皮吸收并提高其作用效率，还能提高活性成分在皮肤表面和皮肤深层的滞留和作用时间；粉末状态的化妆品活性成分带电荷柔性纳米脂质体还利于使用、运输和贮存。本发明的带电荷柔性纳米脂质体的制备方法均可采用机械化方法，产品工艺和质量的稳定性好、重现性高。
文档编号A61Q19/00GK102397168SQ20111037513
公开日2012年4月4日 申请日期2011年11月23日 优先权日2011年11月23日
发明者江妍 申请人:苏州瑞纳生化技术有限公司