含有蛋白酶和淀粉酶的储存稳定的液体洗涤剂或清洗剂的制作方法
【专利摘要】本发明的目的在于改善含有蛋白酶和淀粉酶的液体洗涤剂或清洗剂的储存稳定性。通过使用蛋白酶实现上述目标，该蛋白酶包含在全长上与SEQ?ID?no.1所示的氨基酸序列至少70％相同的氨基酸序列，并且根据SEQ?ID?no.1的编号具有氨基酸取代R99E或R99D并同时具有至少两个选自S3T、V4I和V199I的其他氨基酸取代。
【专利说明】含有蛋白酶和淀粉酶的储存稳定的液体洗涤剂或清洗剂
[0001]本发明涉及液体洗涤剂和清洗剂的领域。本发明具体地涉及含有酶的液体洗涤剂和清洗剂，其含有与淀粉酶组合的特定蛋白酶；并且还建议了使用这类洗涤剂和清洗剂的方法。本发明还涉及特定的蛋白酶在含有淀粉酶的液体洗涤剂或清洗剂中的用途。
[0002]对于洗涤剂和清洗剂优选使用枯草杆菌蛋白酶类型的蛋白酶。现有技术中已知用于洗涤剂或清洗剂的蛋白酶最初来源于微生物，例如芽孢杆菌属、链霉菌属、腐质霉属或假单胞菌属；和/或利用本身已知的生物技术方法通过合适的微生物制备，例如通过芽孢杆菌属或丝状真菌的转基因表达宿主制备。
[0003]其他酶，特别是淀粉酶越来越多地特别是存在于现代的液体洗涤剂中。淀粉酶是催化糖苷键水解的酶，特别是在多糖诸如淀粉中。淀粉酶当中，水解直链淀粉中a (1-4)-糖苷键的α-淀粉酶经常被用于洗涤剂和清洗剂。在酶的EC分类即酶的数字分类系统内，α-淀粉酶具有EC编号(“国际酶学委员会编号”)3.2.1.1并且因此属于六个主要酶类中的第三个——水解酶类(EC3._)，然后还属于糖基化类(EC3.2._)，还属于糖苷酶类(EC3.2.1.-)，即能水解O-和/或S-糖基化合物的酶。通过α _淀粉酶分解淀粉产生糊精，然后从后者产生麦芽糖、葡萄糖和支化低聚糖。淀粉酶因此特别作用于待洗的衣物上含淀粉的污溃并且催化其水解。
[0004]国际专利申请W095/23221和W092/21760公开了适合用于洗涤剂或清洗剂的来自迟缓芽孢杆菌(bacillus lentus)DSM5483的碱性蛋白酶的变体，以及含有这样的蛋白酶的洗涤剂和清洗剂。此外，国际专利申请W02011/032988公开了同样含有来自迟缓芽孢杆菌DSM5483的碱性蛋白酶的变 体的洗涤剂和清洗剂。除其他位置外，公开在所述文献中的蛋白酶变体在按照来自迟缓芽孢杆菌DSM5483的碱性蛋白酶的编号系统的位置3、4、99和199中可被修饰，并且例如在指定位置中具有氨基酸3T、41、99D、99E或1991。此外还公开的是:该洗涤剂可含有其他酶，也包括淀粉酶。洗涤剂可以是固态或液体。但是，所述文献并未直接并清楚地公开含有与蛋白酶组合的淀粉酶的液体洗涤剂，其中该蛋白酶具有下文描述的这些修饰的组合。
[0005]含有蛋白酶和淀粉酶的液体洗涤剂和清洗剂的现有技术的缺点是它们储存稳定性不足，并因此在很短的时间后丧失相当程度的酶促活性，特别是水解淀粉的活性和/或水解蛋白质的活性。蛋白酶的存在往往导致淀粉水解活性的丧失，因为蛋白酶钝化淀粉酶。因此洗涤剂或清洗剂不再表现出最佳清洗性能。
[0006]本发明的目的是克服上述缺点，并提供含有蛋白酶和淀粉酶的液体洗涤剂或清洗剂，该液体洗涤剂或清洗剂具有合适的或改善的储存稳定性，特别是就它们的酶活性而言，并且优选地就它们的淀粉水解活性和/或蛋白水解活性而言。
[0007]因此，本发明提供液体洗涤剂或清洗剂，其包含
[0008](a)蛋白酶，所述蛋白酶包含在全长上与SEQ ID n0.1所示的氨基酸序列至少70%相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID n0.1的编号具有氨基酸取代R99E或R99D并同时具有选自S3T、V4I和V199I的至少两个其它氨基酸取代，以及
[0009](b)淀粉酶。[0010]令人惊讶地发现，含有这样的蛋白酶与淀粉酶的组合的液体洗涤剂或清洗剂在储存中有利地稳定。特别地，在储存后与仅在相应洗涤剂或清洗剂中所含的蛋白酶上不同于本发明的洗涤剂或清洗剂比较，其呈现提高的清洗性能，尤其是改进的水解淀粉的清洗性能和/或水解蛋白质的清洗性能，其中在储存开始时，用于比较的洗涤剂或清洗剂所含蛋白酶相对于活性酶具有相同的浓度。因此，为本发明的目的而提供的蛋白酶减弱了淀粉酶的失活，并且其自身的性能丧失也得以减少。但是，通过为本发明的目的而提供的蛋白酶减弱淀粉酶和/或蛋白酶的失活并不是因为蛋白酶性能和/或活性不足。
[0011]根据本发明的试剂在这方面较好地表现出关于蛋白酶敏感的污溃的清洗性能，其中该清洗性能保持良好，尤其有利。因此这样的试剂使得能够令人满意地或改善去除纺织品和/或坚硬表面例如盘子上的至少一种、优选多种蛋白酶敏感类型的污溃。在本发明选择进行的研制中，这样的关于至少一种蛋白酶敏感类型的污溃的清洗性能特别地还发生在低温下，例如 10°c -50°C、10°C -40°c或 20°C -40°C。
[0012]关于引言中提到的国际专利申请W095/23221、W092/21760和W02011/032988，本发明因此是特别有利的选择，这使得能得到具有良好性能并且储存稳定的液体洗涤剂，特别是关于该试剂在储存后的水解蛋白和/或水解淀粉的清洗性能和/或关于该试剂在储存后的蛋白水解活性和/或淀粉水解活性。 [0013]为了本发明的目的，清洗性能理解为洗涤剂或清洗剂部分地或完全地除去施加试剂时存在的污溃的能力。就待洗衣物污溃来说，这是关于纺织品上一种或多种类型污溃的较好的减轻性能。洗衣污溃的实例为棉布上的血-乳液/墨汁、棉布上的全蛋/色素、棉布上的巧克力-乳液/墨汁、聚酯/棉布上的花生油-色素/墨汁、棉布上的草或棉布上的可可。就洗碗剂来说，清洗性能描述了该洗碗剂除去盘子坚硬表面存在的污溃的能力。陶器污溃的实例为乳液、肉末、蛋黄、燕麦粥中的燕麦以及淀粉。为了本发明的目的，无论是包含蛋白酶与淀粉酶的洗涤剂或清洗剂或者由这样的试剂形成的洗涤液，还是该蛋白酶或者淀粉酶自身表现出相应的清洗性能。酶的清洗性能因此有助于试剂或者由该试剂形成的洗涤液的清洗性能。水解淀粉的清洗性能指的是关于淀粉酶敏感性污溃的清洗性能。水解蛋白的清洗性能指的是关于蛋白酶敏感性污溃的清洗性能。清洗性能以常规方式测定，优选地如下文进一步所述。
[0014]洗涤液理解为含有洗涤剂或清洗剂的工作溶液，该溶液作用于纺织品或织物或坚硬表面，并且因此与纺织品或织物或坚硬表面上存在的污溃接触。通常，当洗涤或清洗过程开始并且在例如洗碗机、洗衣机或另一适合的容器中用水稀释洗涤剂或清洗剂时产生洗涤液。
[0015]当根据本发明的洗涤剂或清洗剂在储存之后与对照组合物比较而呈现更强的清洗性能时，可具体地获得为本发明目的的储存稳定性，其中所述对照组合物不同于本发明的洗涤剂或清洗剂仅在于存在对照组合物的蛋白酶。因此，在储存开始时，要比较的两种试剂具有相同的淀粉酶量或浓度和/或初始的淀粉水解活性。此外，在储存开始时，以活性酶为准，蛋白酶以相同的浓度存在于两种试剂中，并且以相同的方式处理该两种试剂，特别是关于储存条件和酶活性的测定。储存优选地以递增方式持续至少24小时、48小时、72小时、5天、I星期、2星期、3星期或4星期。此外，储存优选地在20 V、30°C或40 V的温度下进行，更优选地在40°C。[0016]在这方面，酶活性可根据具体的酶类型而以常规方式被测定。用于测定活性的方法为所属酶【技术领域】的专业人员所熟知，并且由这样的专业人员按惯例使用。用于测定蛋白酶活性的方法例如被公开在Tenside[Surfactants],第7卷(1970), 125-132页。此外，蛋白水解活性可基于从底物SUC-L-Ala-L-Ala-Pro-L-Phe-对硝基苯胺(suc-AAPF-pNA)释放发色团对硝基苯胺(pNA)而被测定。蛋白酶裂解该底物并释出pNA。pNA的释放带来41Onm处吸光度的增加，其时间谱是酶活性的量度(参见Del Mar等，1979)。测量在25°C的温度、PH8.6和410nm的波长下进行。测量时间为5min，测量间隔为20s_60s。蛋白酶活性优选以PU(蛋白酶单位)表示。
[0017]淀粉酶活性以常规方式测定。优选地按以下所示测定淀粉酶活性。淀粉酶将淀粉转化为葡萄糖。在特定的反应条件(tris-马来酸盐缓冲液pH6.5,50°C, 15min)下，用0.67%淀粉(可溶解，使用Zulkowsky法进行预处理(用甘油在190°C下处理))将使待测样品温育。通过添加二硝基水杨酸并加热至100°C，在碱性条件下所述酸被葡萄糖及其他还原糖还原形成橘红色染料，在反应结束后使用分光光度计在540nm处测定该染料。此处，对应于该颜色的释放的糖的量为酶活性的量度(参见Sumner等，J.Biol.Chem.，1921，47&1924, 62)。
[0018]关于本发明目的的酶存在的稳定性更优选地如上所述使用在40°C的温度下储存四个星期的含有蛋白酶和淀粉酶的液体洗涤剂或清洗剂来测定，其中通过从底物suc-AAPF-pNA释放 的对硝基苯胺(pNA)发色团测定蛋白水解活性，并且如上所述测定淀粉水解活性。
[0019]存在于根据本发明的洗涤剂或清洗剂的蛋白酶包含在全长上与SEQ ID n0.1所示的氨基酸序列至少70%相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID n0.1的编号具有氨基酸取代R99E或R99D并同时具有 选自S3T、V4I和V199I的至少两个其它氨基酸取代。
[0020]在本发明的另外的实施方案中，该蛋白酶包含在全长上与SEQ ID n0.1所示的氨基酸序列至少 71 %、72%、73%、74%、75%、76%、77、78、79%、80%、81 %,8283%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,90.5%,91%,91.5%,92%,92.5%,93%,93.5%,94%,94.5%,95%,95.5%,96%,96.5%,97%,97.5%,98%,98.5%^P 98.8%相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID n0.1的编号具有氨基酸取代R99E并同时具有选自S3T、V4I和V199I的至少两个其它氨基酸取代。
[0021]在本发明的另外实施方案中，该蛋白酶包含在全长上与SEQ ID n0.1所示的氨基酸序列至少 71%,72%,73%,74%,75%,76%,77,78,79%,80%,81%,82%,83%,84%,85 %,86 %,87 %,88 %,89 %,90 %,90.5 %,91 %,91.5 %,92 %,92.5 %,93 %,93.594%,94.5%,95%,95.5%,96%,96.5%,97%,97.5%,98%,98.5%和 98.8%相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID n0.1的编号具有氨基酸取代R99D并同时具有选自S3T、V4I和V199I的至少两个其它氨基酸取代。
[0022]SEQ ID n0.1为来自迟缓芽孢杆菌DSM5483的成熟碱性蛋白酶的序列，其公开在国际专利申请W092/21760中，并且明确引用该公开。
[0023]根据本发明更优选的蛋白酶为:
[0024]蛋白酶，该蛋白酶包含在全长上与SEQ ID n0.1所示的氨基酸序列至少71 %、72%,73%,74%,75%,76%,77%,78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,90.5%,91%,91.5%,92%,92.5%,93%,93.5%,94%,94.5%,95%,95.5%,96%,96.5%,97%,97.5%,98%,98.5%和 98.8%相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID n0.1的编号具有氨基酸取代R99E并同时具有氨基酸取代S3T和V4I，特别是根据SEQ ID n0.1具有氨基酸取代S3T、V4I和R99E的蛋白酶。
[0025]蛋白酶，该蛋白酶包含在全长上与SEQ ID n0.1所示的氨基酸序列至少71 %、72%,73%,74%,75%,76%,77%,78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,90.5%,91 %,91.5%,92%,92.5%,93%,93.5%,94%,94.5%,95%,95.5%,96%,96.5%,97%,97.5%、98%、98.5%和 98.8%相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID n0.1的编号具有氨基酸取代R99E并同时具有氨基酸取代S3T和V199I，特别是根据SEQ ID n0.1具有氨基酸取代S3T、R99E和V199I的蛋白酶。
[0026]蛋白酶，该蛋白酶包含在全长上与SEQ ID n0.1所示的氨基酸序列至少71 %、72%,73%,74%,75%,76%,77%,78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,90.5%,91 %,91.5%,92%,92.5%,93%,93.5%,94%,94.5%,95%,95.5%,96%,96.5%,97%,97.5%,98%,98.5%和 98.8%相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID n0.1的编号具有氨基酸取代R99E并同时具有氨基酸取代V4I和V199I，特别是根据SEQ ID n0.1具有氨基酸取代V41、R99E和V199I的蛋白酶。
[0027]蛋白酶，该蛋白酶包含在全长上与SEQ ID n0.1所示的氨基酸序列至少71 %、72%,73%,74%,75%,76%,77%,78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,90.5%,91 %,91.5%,92%,92.5%,93%,93.5%,94%,94.5%,95%,95.5%,96%,96.5%,97%,97.5%,98%,98.5%和 98.8%相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID n0.1的编号具有氨基酸取代R99D并同时具有氨基酸取代S3T和V4I，特别是根据SEQ ID n0.1具有 氨基酸取代S3T、V4I和R99D的蛋白酶。
[0028]蛋白酶，该蛋白酶包含在全长上与SEQ ID n0.1所示的氨基酸序列至少71 %、72%,73%,74%,75%,76%,77%,78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,90.5%,91 %,91.5%,92%,92.5%,93%,93.5%,94%,94.5%,95%,95.5%,96%,96.5%,97%,97.5%、98%、98.5%和 98.8%相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID n0.1的编号具有氨基酸取代R99D并同时具有氨基酸取代S3T和V199I，特别是根据SEQ ID n0.1具有氨基酸取代S3T、R99D和V199I的蛋白酶。
[0029]蛋白酶，该蛋白酶包含在全长上与SEQ ID n0.1所示的氨基酸序列至少71 %、72%,73%,74%,75%,76%,77%,78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,90.5%,91 %,91.5%,92%,92.5%,93%,93.5%,94%,94.5%,95%,95.5%,96%,96.5%,97%,97.5%、98%、98.5%和 98.8%相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID n0.1的编号具有氨基酸取代R99D并同时具有氨基酸取代V4I和V199I，特别是根据SEQ ID n0.1具有氨基酸取代V41、R99D和V199I的蛋白酶。
[0030]根据本发明的蛋白酶的另一个更优选实施方案的不同之处在于:它们具有氨基酸取代R99E或R99D并同时具有三个其他氨基酸取代S3T、V4I和1991。在这方面特别优选以下蛋白酶:
[0031]蛋白酶，该蛋白酶包含在全长上与SEQ ID n0.1所示的氨基酸序列至少71%、72%,73%,74%,75%,76%,77,78,79%,80%,81%,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,90.5%,91 %,91.5%,92%,92.5%,93%,93.5%,94%,94.5%,95%,
95.5%,96%,96.5%,97%,97.5%,98%98.5 %相同的氨基酸序列，并且根据 SEQ IDn0.1的编号具有氨基酸取代R99E并同时具有氨基酸取代S3T、V4I和V199I，特别是根据SEQ ID n0.1具有氨基酸取代S3T、V41、R99E和V199I的蛋白酶。这样的蛋白酶示出在SEQID n0.2。
[0032]蛋白酶，该蛋白酶包含在全长上与SEQ ID n0.1所示的氨基酸序列至少71 %、72 %、73 %、74 %、75 %、76 %、77 %、78、79 %、80 %、81 % ,82 % ,83 % ,84 % ,85 % ,86 %,87%,88%,89%,90%,90.5%,91 %,91.5%,92%,92.5%,93%,93.5%,94%,94.5%,95%,95.5%,96%,96.5%,97%,97.5%、98%和 98.5%相同的氨基酸序列，并且根据 SEQID n0.1的编号具有氨基酸取代R99D并同时具有氨基酸取代S3T、V4I和V199I，特别是根据SEQ ID n0.1具有氨基酸取代S3T、V41、R99D和V199I的蛋白酶。这样的蛋白酶示出在SEQ ID n0.3。
[0033]进一步更优选的蛋白酶为如上所述的在根据SEQ ID n0.1编号中还具有在位置211处的氨基酸亮氨酸(L)的蛋白酶。
[0034]为本发明的目的 而通过比对所用的蛋白酶的氨基酸序列与如SEQ ID n0.1所示的来自迟缓芽孢杆菌的蛋白酶的氨基酸序列来定义氨基酸位置。因为现有技术中来自迟缓芽孢杆菌的蛋白酶构成用于描述蛋白酶和氨基酸变化的重要参考分子，在氨基酸位置比对方面参考来自迟缓芽孢杆菌的蛋白酶的编号(SEQ ID n0.1)是有利的。而且，该编号基于成熟蛋白。如果在与根据SEQ ID n0.1的来自迟缓芽孢杆菌的蛋白酶比较要使用的蛋白酶的氨基酸序列包含更大量的氨基酸残基，这样的比对特别应当使用。基于来自迟缓芽孢杆菌的蛋白酶的氨基酸序列中的指定位置，本发明所用的蛋白酶中的氨基酸位置是在比对中精确分配至这些位置的氨基酸位置。
[0035]除位置99之外，特别有利的位置应相应为在与SEQ ID n0.1的比对中并因此在根据SEQ ID n0.1编号中的位置3、4、199和211。所述的位置由来自迟缓芽孢杆菌的蛋白酶的野生型分子中的以下氨基酸残基占据:S3、V4、V199和L211。根据存在的来自SEQ IDn0.1的序列偏差的数目，因此产生SEQ ID n0.1中的本发明所用的蛋白酶可以表现的不同最大相同性值，关于所有其它氨基酸其甚至应当匹配SEQ ID n0.1。在每种单独情况下对于所建议的序列修饰的每种可能的组合应该考虑这个因素，而且还取决于蛋白酶的氨基酸序列的长度。例如，具有1、2、3、4、5、6、7、8或9个序列修饰，对于长度为269个氨基酸的氨基酸序列，最大相同性量分别为98.88%,98.51%,98.14%,97.77%,97.40%,97.03%或
96.65 %，或者对于长度为275个氨基酸的氨基酸序列，分别为98.91 %、98.55 %、98.18 %、
97.82%,97.45%,97.09%或 96.73%。
[0036]根据本发明已经发现，通过添加这样的蛋白酶至含有淀粉酶的液体洗涤剂或清洗剂，得到尤其储存稳定的液体洗涤剂，特别是关于其在储存之后的剩余清洗性能，特别是在如下递增的优选的储存期之后:24h、48h、72h、5天、I星期、2星期、3星期或4星期。
[0037]根据本发明的洗涤剂或清洗剂中含有的蛋白酶表现出蛋白水解活性，即其能够水解多肽或蛋白的肽键。因此其为催化肽键水解并且由此能裂解肽或蛋白的酶。特别是枯草杆菌酶，并且优选枯草杆菌蛋白酶。
[0038]淀粉酶为如引言中描述的酶。淀粉酶通过同义词可以被称为例如1，4-a -D-葡聚糖葡聚糖水解酶或糖原酶。能够根据本发明配制的淀粉酶优选地为α-淀粉酶。酶是否为用于本发明目的的α-淀粉酶是通过它对淀粉的直链淀粉中的a (1-4)-糖苷键的水解能力来判定的。
[0039]根据本发明能够配制的淀粉酶的实例为来自地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、来自解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)或来自嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)的α -淀粉酶，及其强化以用于洗漆剂或清
洗剂的进一步开发品。来自地衣芽孢杆菌的酶可从Novozymes以名称Termamyl?以及从Danisco/Genencor以名称Purastar ? ST.下获得。此类α -淀粉酶的进一步开发产品可从 Novozymes 以商品名 DuramyI? 和 Termamyl?ultra? 从 Danisco/Genencor 以名称 Purastar? OxAm,以及从 Daiwa Seiko Inc.，Tokyo, Japan 以 Keistase? 下获得。来自解淀粉芽孢杆菌的α -淀粉酶由Novozymes经销，名为BAN?,来自嗜热脂肪芽孢杆菌的α -淀粉酶的变体同样由Novozymes经销，名为B SG?和Novamyl?<>为了此目
的，还应进一步特别注意来自芽孢杆菌A7-7(DSM12368)的α -淀粉酶和来自粘琼脂芽孢杆菌(Bacillus agaradherens) (DSM9948)的环糊精葡糖基转移酶(CGTase)。同样可以
使用所有指定分子的融合产物。此外，可得自于Novozymes在商品名Fungamyl?下的来自黑曲霉(Aspergillus niger)和米曲霉(A.0ryzae)的α-淀粉酶的进一步开发品也是适合的。可以有利地使用的其他商业产品为，例如Amylase-LT(Φ和Stainzyme?或Stainzyme ultra?或Stainzyme plld;,后者同样来自Novozymes□根据本发明，也
可以使用通过点突变获得的这些酶的变体。更优选的淀粉酶公开在国际公开的专利申请W000/60060、W003/002711、W003/054177 和 W007/079938 中，因此明确地参考这些公开，或者因此明确地将这些公开内容包括在本专利申请中。
[0040]根据SEQ ID n0.4的α -淀粉酶ΑΑ560的α -淀粉酶变体特别适合用于根据本发明的试剂。以下变体是特别有利的:
[0041 ] (a) α-淀粉酶变体，相对于根据SEQ ID n0.4的α -淀粉酶ΑΑ560，其在α -淀粉酶ΑΑ560的编号中具有1、2、3、4、5或6个以下序列修饰:R118K、D183* (缺失)、G184* (缺失)、N195F、R320K、R458K。该α -淀粉酶变体更优选地具有所有6个指定的序列修饰。
[0042](b) α -淀粉酶变体，相对于根据SEQ ID n0.4的α -淀粉酶AA560，其具有以下序列修饰(在α -淀粉酶ΑΑ560的编号中):
[0043](1)M9L/M202I,
[0044](2)M9L/M202I/M323T,
[0045](3) M9L/M202I/M323T/M382Y,
[0046](4)M9L/M202I/Y295F/A339S,
[0047](5)M9L/M202 I/Y295F,
[0048](6)M9L/M202I/A339S,
[0049](7)M9L/M202I/Y295F/A339S,
[0050](8)M9L/M202I/Y295F/A339S/E345R,
【权利要求】
1.一种液体洗涤剂或清洗剂，其包含: (a)蛋白酶,所述蛋白酶包含其全长上与SEQID n0.1所示的氨基酸序列至少70%相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID n0.1编号具有氨基酸取代R99E或R99D并同时具有至少两个选自S3T、V4I和V199I的其他氨基酸取代，以及 (b)淀粉酶。
2.如权利要求1所述的洗涤剂或清洗剂，其特征在于:所述蛋白酶包含其全长上与SEQ ID n0.1 所示的氨基酸序列至少 71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80 %,81 %,82 %,83 %,84 %,85 %,86 %,87 %,88 %,89 %,90 %,90.5 %,91 %,91.592%,92.5%,93%,93.5%,94%,94.5%,95%,95.5%,96%,96.5%,97%,97.5%,98%和98.5%相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID n0.1编号具有氨基酸取代R99E并同时具有氨基酸取代S3T、V4I和V199I，特别是具有根据SEQ ID n0.2的氨基酸序列的蛋白酶。
3.如权利要求1所述的洗涤剂或清洗剂，其特征在于:所述蛋白酶包含其全长上与SEQ ID n0.1 所示的氨基酸序列至少 71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78、79%、80 %,81 %,82 %,83 %,84 %,85 %,86 %,87 %,88 %,89 %,90 %,90.5 %,91 %,91.592%,92.5%,93%,93.5%,94%,94.5%,95%,95.5%,96%,96.5%,97%,97.5%,98%和98.5%相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID n0.1编号具有氨基酸取代R99D并同时具有氨基酸取代S3T、V4I和V199I，特别是具有根据SEQ ID n0.3的氨基酸序列的蛋白酶。
4.如权利要求1至3中任一项所述的洗涤剂或清洗剂，其特征在于所述淀粉酶为根据SEQ ID n0.4的α -淀粉酶ΑΑ560的α -淀粉酶变体，具有根据α -淀粉酶ΑΑ560编号的一个、两个、三个、四个、五个或六个的以下序列修饰:R118K、D183*(缺失)、G184*(缺失)、N195F、R320K、R458K。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的洗涤剂或清洗剂，其特征在于:相对于活性蛋白，所述淀粉酶存在的量为I X 10_8-5重量％，和/或相对于活性蛋白，所述蛋白酶存在的量为 1Χ10-8-5 重量％。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的洗涤剂或清洗剂，其特征在于其还包含选自下列的组分: 1.阴离子和/或多阴离子物质，和/或 ?.阳离子和/或多阳离子物质，和/或 ii1.包含羟基和/或多羟基的物质。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的洗涤剂或清洗剂，其特征在于:其包含至少一种其他成分，特别是选自膦酸盐/酯、表面活性剂、助洗剂、非水溶剂、酸、水溶性盐、增稠剂及上述物质的组合的成分。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的洗涤剂或清洗剂，其特征在于:其含有至少一种其他酶，特别是蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、半纤维素酶、甘露聚糖酶、鞣酸酶、木聚糖酶、黄原胶酶、木葡聚糖酶、β -葡糖苷酶、果胶酶、卡拉胶酶、过水解酶、氧化酶、氧化还原酶或脂肪酶、以及上述酶的混合物。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的洗涤剂或清洗剂，其特征在于其为自动洗碗剂。
10.权利要求1至9中任一项所述的洗涤剂或清洗剂用于从纺织品或坚硬表面去除蛋白酶敏感性污溃的用途。
11.一种用于清洗纺织品或坚硬表面的方法，其特征在于:在至少一个方法步骤中使用权利要求1至9中任一项所述的洗涤剂或清洗剂。
12.如权利要求11所述的方法，其特征在于:所述淀粉酶在洗涤液中存在的浓度为I X 10-10-0.2重量％，和/或所述蛋白酶在所述洗涤液中存在的浓度为1X10_1c1-0.2重量％。
13.如权利要求11或12所述的方法，其特征在于，其在10°C_60°C、优选在20°C _50°C、并且更优选在30°C -50°C的温度下进行。
14.蛋白酶在包含淀粉酶的液体洗涤剂或清洗剂中提供蛋白水解活性的用途，其中所述蛋白酶包含在其全长上与SEQ ID n0.1所示的氨基酸序列至少70%相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID n0.1的编号具有氨基酸取代R99E或R99D并同时具有至少两个选自S3T、V4I和V199I的其他氨基酸取代。
【文档编号】C11D3/386GK103987845SQ201280060968
【公开日】2014年8月13日 申请日期:2012年12月10日 优先权日:2011年12月15日
【发明者】N·穆斯曼, T·艾廷, T·巴斯蒂格凯特, K·本达, H·赫尔穆特 申请人:汉高股份有限及两合公司