一种姜黄素柔性脂质体霜膏的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种姜黄素柔性脂质体霜膏的制备方法，包括：制备姜黄素柔性脂质体、姜黄素柔性脂质体制成冻干粉、制备姜黄素柔性脂质体霜膏共三个步骤，本发明通过薄膜分散法制作姜黄素脂质体及柔性脂质体，并通过乳化法制作其乳膏，筛选出最佳处方，并进行稳定性评价和感官评价，提高姜黄素的利用度，并让乳膏更细腻润滑，在未来的药妆品使用中提供更多选择。
【专利说明】一种姜黄素柔性脂质体霜膏的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种姜黄素柔性脂质体霜膏的制备方法，属于化学领域。
【背景技术】
[0002] 1姜黄素的性质及作用
[0003] 姜黄素是一种从姜科植物等的根茎中提取得到的黄色色素。是一种相对分子质量 小的多酚类物质，通常认为它是姜黄中的最有效成分，其结构如图1所示。物理性质：橙黄 色粉末，味稍苦，熔点183°。不溶于水及乙醚，溶于乙醇、丙二醇，易溶于冰醋酸和碱溶液， 在碱性时呈红褐色，在中性、酸性是呈黄色。对还原剂稳定性较强，有着色性，但对光、热。铁 离子敏感。
[0004] 姜黄素具有抗炎、抗氧化、抗癌、抗菌、清除自由基以及对消化系统、心血管系统等 多方面药理作。本实验将其抗炎、抗氧化、抗菌作用应用到化妆品乳膏中。
[0005] 2脂质体 [0006] 2. 1脂质体概念
[0007] 也称微脂粒，是一种具有靶向给药功能的新型药物制剂，利用磷脂双分子层膜所 形成的囊泡包裹药物分子，在水中磷脂分子亲水头部插入水中，疏水尾部伸向空气，搅动后 形成双层分子的球形脂质体，直径25-1000nm不等。由于生物提质膜的基本结构也是磷脂 双分子层膜，因此脂质体与生物体细胞具有很好的生物相容性。应用于化妆品中使药物更 快的透膜吸收，增大药物利用度。
[0008] 2. I. 1主要特点
[0009] 靶向性和淋巴定向性：肝、脾网状内皮系统的被动靶向性。
[0010] 缓释作用：缓慢释放，延缓肾排泄和代谢，从而延长作用时间。
[0011] 降低药物毒性；提高稳定性。
[0012] 2. 1.2相关分类
[0013] 按照不同直径大小及内囊数目可以分为以下几种类型：直径小于IOOnm的小单层 脂质体（small unilamerllar vesicles, SUV);直径大于 IOOnm 的大单层脂质体（large unilamellar, LUV);多层同心的多层脂质体（multilamellar vesicles，MLV);非同心多囊 泡脂质体（multivescular liposomes, MVL)等。
[0014] 2. 2普通脂质体
[0015] 普通脂质体是指采用天然磷脂和胆固醇制备的、未经任何修饰的脂质体，集中在 内皮网状系统丰富的部位，同时会在炎症和肿瘤部位有所狙击，显现出被动靶向性。
[0016] 2. 3柔性脂质体
[0017] 2. 3. 1柔性脂质体概念
[0018] 又称传递体，或称变形脂质体或柔性纳米脂质体，是通过改变普通脂质体处方得 到的，即在普通脂质体的磷脂成分中少加或不加胆固醇，同事加入表面活性剂如聚氧乙烯 脱水山梨单油酸酯（吐温）、山梨醇酐单油酸酯（司盘）、胆酸钠、去氧胆酸钠等作为膜软化 齐IJ，使其脂膜具有高度的形变能力，为大、小分子物的经皮传递提供了很好的载体。将其应 用于化妆品中有着很好的前景。
[0019] 2. 3. 2柔性脂质体特点
[0020] ①柔性脂质体膜具有高度变形性，能高效透过比自身小数倍的孔道；②柔性脂质 体透皮吸收的驱动力是渗透压；③柔性脂质体和水分子具有相同的透皮效率；④柔性脂质 体主要在角质细胞间的孔道转运；⑤柔性脂质体经过多次形变通过角质层；⑥柔性脂质体 透过皮肤后其组成不变；⑦柔性脂质体经皮转运没有种属间及部位差异。
[0021] 2. 3. 3柔性脂质体透皮机制
[0022] 主要动力主要来源于皮肤两侧的水分梯度。膜弹性形变而挤入角质层增宽的细胞 间隙，从而穿透皮肤。其路径为刚开始到达真皮，然后是更深的组织，当周边角质层水合梯 度与柔性脂质体变形作用，角质层吸收外部水分而发生水合，水合力使角质细胞间隙增宽， 变成20-30nm的孔道，在水和梯度而非药物浓度梯度的驱动下，使柔性脂质体粒子地区达 到饱和后，再经由淋巴系统进入血液，从而发挥药效。
[0023] 2. 4脂质体制备方法
[0024] 2. 4. 1薄膜分散法
[0025] 又称薄膜蒸发法，操作较为简单，适合脂溶性较好的药物的包封，但较难完全出去 有机残留，较为耗时，且形成的脂质体粒径分布范围也较宽，采用超声水合分散有利于降低 脂质体的粒径，且可提商水合的效率和样品的均一性。
[0026] 2. 4. 2逆向蒸发法
[0027] 基础在于"反胶束"的形成。适用于包封大多数水溶性物质，药物的包封率取决于 脂质的化学性质、脂质、有机溶剂、缓冲液的比值、脂质浓度。但此法药物需与有机溶剂接 触，不适于多肽、蛋白类药物，且值得的脂质体粒径较大。相对于有机溶剂残留问题，大多采 用超临界代替有机溶剂，称超临界逆向蒸发法。
[0028] 2· 4· 3pH 梯度法
[0029] 通过调节脂质体内外水相的pH值，形成一定的pH梯度差，弱酸或弱碱药物则顺pH 梯度以分子形式跨越磷脂膜最后以离子形式被包封在内水相中。影响包封率的最主要因素 为跨膜pH梯度，通常pH梯度越大，载入脂质体内的药物越多，包封率越高。
[0030] 2. 4. 4 注入法
[0031] 最常用乙醇注入法和乙醚注入法。乙醇注入法操作简便，但残留问题严重，而乙 醚注入法很好解决了此问题。采用注入法制备的脂质体通常粒径较大，不适于静脉注射给 药。优点在于脂质在乙醇或乙醚中的浓度不影响脂质体的大小，但不适用于对热敏感的药 物。
[0032] 2. 4. 5铵离子梯度法
[0033] 通过游离氨扩散到脂质体外，间接形成pH梯度，使药物积聚到脂质体内。铵盐的 种类较大影响脂质体的包封率，最为常用的铵盐为硫酸铵。同时，影响药物活性的因素还有 磷脂的种类、不同修饰材料以及PEG的相对分子质量。
[0034] 2. 4. 6表面活性剂去除法
[0035] 将脂质与表面活性剂一起在水溶液中搅拌，得到胶束，再通过透析法将表面活性 剂从胶束中去除。其中，表面活性剂的浓度应高于临界胶束浓度。此法优点是所制的脂质 体较为均匀，且方法较为温和，尤其适用于蛋白质、多肽类药物的载入。缺点为所制的脂质 体浓度较低，不利于疏水性药物的包封，同时还可能残留少量表面活性剂，较为费时。
[0036] 2. 4. 7 复乳法
[0037] 将少量的水相加入大量的含磷脂的有机相中形成W/0初乳，再制备成W/0/W乳液， 然后在一定温度下除去有机溶剂即得。该法制得的脂质体包封容积较大，粒径也较大。
[0038] 本文采用的是薄膜分散发。
[0039] 3药妆品
[0040] 药妆品概念：Kligman给药妆品所辖的定义是"介于药物和化妆品之间的制品。药 妆品的作用超过赋予皮肤以色泽但不及治疗的药物"。也可称为功能性化妆品或活性化妆 品。
[0041] 药妆品是新发展起来的一类抗皮肤老化制品，中药是药妆品开发的最丰富资源之 一。现代药妆品常用的活性成分主要有：抗氧化剂、生长因子、肽类、抗炎剂、植物剂、多糖 类、增白剂等。本论文是将有抗氧化、抗炎作用的姜黄素制作成纳米脂质体颗粒应用于化 妆品中，增大化妆品活性的同时增加药物的药物活性。中药纳米颗粒应用于化妆品有着广 阔的发展前景。
【发明内容】
[0042] 本发明所要解决的技术问题是提供一种姜黄素柔性脂质体霜膏的制备方法，本发 明通过薄膜分散法制作姜黄素脂质体及柔性脂质体，并通过乳化法制作其乳膏，筛选出最 佳处方，并进行稳定性评价和感官评价，提高姜黄素的利用度，并让乳膏更细腻润滑，在未 来的药妆品使用中提供更多选择。
[0043] 本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种姜黄素柔性脂质体霜膏的制备方 法，包括：
[0044] 1)制备姜黄素柔性脂质体
[0045] 在爺形瓶中称取卵磷脂400mg和吐温80 80mg，称取胆固醇50mg,加入8ml氯仿与 甲醇的混合溶液溶解，得溶液1，称取姜黄素 2. 7mg，用2ml氯仿与甲醇的混合溶液溶解后， 得溶液2,将溶液1和溶液1混匀，在旋转蒸发仪上蒸干成膜，加入pH = 7. 0的磷酸缓冲溶 液10ml，水合20min，水浴超声5min，得到姜黄素柔性脂质体；
[0046] 2)姜黄素柔性脂质体制备成冻干粉
[0047] 向1)制备的姜黄素柔性脂质体中加入甘露醇，在_75°C预冻24h，放入冻干机24h， 得到冻干粉；
[0048] 3)制备姜黄素柔性脂质体霜膏
[0049] 分别称量液体石蜡2. 2ml，硬脂酸4. 5ml、橄榄油8. 9ml和氢化蓖麻油I. 4ml，在不 断搅拌下加热，直至各组分物质溶解混匀，形成透明液体，当温度达到80°C时，在不断搅拌 下，缓慢且均匀的加入三乙醇胺〇. 8ml、甘油I. 8ml、丙二醇13. 3ml和水66. 9ml，水浴加热 15min，使三乙醇胺与硬脂酸乳化反应充分，得到混匀液体，然后将混匀液体倒入已预热好 的组织捣碎机中进行搅匀，
[0050] 称取姜黄素柔性脂质体20mg，当上述混匀液体温度降为50°C时，加入姜黄素柔性 脂质体缓慢搅拌，搅匀后加入香精Img继续搅拌，直至形成均匀细腻的乳化体时，停止搅 拌，待其冷却至室温，得到姜黄素柔性脂质体霜膏。
[0051] 在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
[0052] 进一步，在1)中，所述氯仿与甲醇按体积比1:1混合。
[0053] 进一步，在2)中，所述姜黄素柔性脂质体与甘露醇的质量比为9:1。
[0054] 本发明的有益效果是：
[0055] 本发明将中药纳米脂质体应用到化妆品种，提高药效和化妆品抗氧化功能，进一 步改善化妆品作用，根据文献，目前还有姜黄素脂质体及柔性脂质体乳膏的研究报告，因 此，开发此产品有着更大的空间和发展前景。
【专利附图】
【附图说明】
[0056] 图1为本发明姜黄素最大吸收波长图；
[0057] 图2为本发明姜黄素脂质体图；
[0058] 图3为本发明姜黄素柔性脂质体霜膏制备流程图；
[0059] 图4为本发明所制备的姜黄素柔性脂质体霜膏图；
【具体实施方式】
[0060] 以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限 定本发明的范围。
[0061] 1实验仪器与试剂
[0062] I. 1 仪器
[0063] 万分之一电子天平AR1140 奥豪斯国际贸易有限公司 旋转蒸发仪RE-3000A 上海亚荣生化仪器厂
[0064] 超声仪SK250 HP 上海科导超声以有限公司 紫外分光光度计UV-9000 日本岛津公司 循环水时多用真空泵SHB-B95 郑州长城科工贸有限公司 低速离心机LD5-2A 北京医用离心机厂 冷冻千燥机 SIM International group 高速组织捣碎机DS-I 上海标本模型厂 电热恒温水浴锅 龙口先科仪器公司 生物显微镜XSP-BM-2CA 烟台大学药学院提供 微孔滤膜过滤器 上海医药工业研究院 0. 8μιη有机系滤膜 上海市新亚净化器件厂
[0065] 1. 2试剂及配制
[0066] 姜黄素 分析纯 上海展云化工有限公司 卵磷脂 化学纯 烟大药学院提供 胆固醇 化学纯 烟大药学院提供 吐温80 天津市博迪化工有限公司 无水乙醇 分析纯 氯仿 分析纯 烟台大学药学院提供 曱醇 分析纯 北京化工厂 液体石蜡 化学纯 益林化工厂 硬脂酸 化学纯 烟台大学药学院提供 原生橄榄油 烟台大学药学院提供 丙三醇 分析纯 济南天桥精细化学品公司 1，2-丙二醇 分析纯 天津市天大化工实验厂 三乙醇胺 分析纯 上海森尼精细化工有限公司 十二酸氢水磷二钠 分析纯 国药集团化学试剂有限公司 二水磷酸二氢钠 分析纯 天津市副晨化学试剂厂
[0067] 香精 广州百花香料股份有限公司
[0068] 1.2.1试剂的配制
[0069] 磷酸盐缓冲液（pH = 7. 0)的配制：取十二酸氢水磷二钠 I. 09g，二水磷酸二氢钠 0.23g于IOOml容量瓶中，用去离子水溶解，摇匀，定容即得。
[0070] 2实验方法的建立
[0071] 2. 1脂质体中姜黄素含量测定方法
[0072] 由姜黄素的结构式可知其分子内存在共轭结构，所以本实验采用紫外分光光度法 检测含量。
[0073] 2. 2检测波长的确定
[0074] 以甲醇溶液作为空白对照，姜黄素甲醇溶液作为待测液进行700_200nm全波长扫 描，得到姜黄素的紫外吸收曲线，如图1所示，姜黄素在423nm处具有最大波长，且甲醇在 423nm处无紫外吸收，对姜黄素测定不造成干扰，故选423nm为姜黄素的最大波长。
[0075] 2. 3包封率的检测
[0076] 在考察姜黄素脂质体的制备工艺时，选用姜黄素脂质体的包封率为评价指标，其 中，包封率越高，制备工艺越好。
[0077] 2. 3. 1包封率的概念
[0078] 包封率（ER)是指脂质体中包进去的药量与投入总药量之比，ER越高，表示脂质体 中所包药量越多，游离药物越少，制备工艺越好，反之则越差。包封率是衡量脂质体内在性 质的重要指标之一。
[0079] 2. 3. 2包封率计算公式
[0080] 包封率=(A2V(A1) · 100%
[0081] A1 :投入总药量
[0082] A2:脂质体中包入的药量
[0083] 3脂质体的制备与评价
[0084] 3. 1姜黄素脂质体的制备与评价
[0085] 3. I. 1姜黄素脂质体的制备
[0086] 磷脂和胆固醇质量比为3:1，称取磷脂150g，胆固醇50g于茄形瓶中，量取IOml氯 仿溶解，称取姜黄素〇. OOlOg于西林瓶中，量取2ml无水乙醇溶解，加入到磷脂胆固醇氯仿 溶液中摇匀，于旋转蒸发仪上35°C旋转蒸发，于瓶壁均匀成膜。加入IOml磷酸盐缓冲溶液 充分水合20min，于超声仪中超声5min，得到姜黄素脂质体，如图2所示。
[0087] 3. 1. 2姜黄素脂质体包封率的测定
[0088] 精密量取姜黄素脂质体0. 2ml，加入5ml去离子水稀释，精密量取5ml甲醇破乳，超 声2min，过0. 8 μ m滤膜，取续滤液于西林瓶中，进行紫外测定，测得A1 = 0. 6674。
[0089] 将姜黄素脂质体过0. 8 μ m滤膜后，精密量取0. 2ml，加入5ml去离子水稀释，精密 量取5ml甲醇破乳，超声2min，过0. 8 μ m滤膜，取续滤液于西林瓶中，进行紫外测定，测得A2 =0. 5213,通过公式求得包封率78%。
[0090] 3. 2柔性脂质体的单因素考察
[0091] 本发明采用薄膜分散法制备姜黄素柔性脂质体，以卵磷脂400mg为定量，以吐温 80为表面活性剂，以包封率为主要指标考察了卵磷脂与胆固醇比、氯仿与甲醇比、载药量、 卵磷脂与吐温80的比等因素的影响。
[0092] 3. 2. 1卵磷脂与胆固醇的用量比对包封率的影响
[0093] 在三个茄形瓶中称取相同量的卵磷脂400mg和吐温80 80mg，分别称取卵磷脂与 胆固醇按照重量比为16:1,8:1,5 :1的胆固醇，加入总量为8ml的氯仿：甲醇体积比为1:1 的溶液溶解，称取姜黄素2. 7mg，用2ml上述溶液（氯仿：甲醇体积比为1:1的溶液）溶 解后，两溶液混匀，在旋转蒸发仪上蒸干成膜，加入pH = 7. 0的磷酸缓冲溶液IOml水合 20min，水浴超声5min。用3. 1.2测定包封率。由表1可知，卵磷脂：胆固醇质量比=8:1 时，包封率最高。
[0094] 表1不同卵磷脂与胆固醇质量比下姜黄素柔性脂质体包封率
[0095]
【权利要求】
1. 一种姜黄素柔性脂质体霜膏的制备方法，其特征在于，包括： 1) 制备姜黄素柔性脂质体 在爺形瓶中称取卵磷脂400mg和吐温80 80mg，称取胆固醇50mg,加入8ml氯仿与甲 醇的混合溶液溶解，得溶液1，称取姜黄素2. 7mg，用2ml氯仿与甲醇的混合溶液溶解后，得 溶液2,将溶液1和溶液1混匀，在旋转蒸发仪上蒸干成膜，加入pH = 7. 0的磷酸缓冲溶液 10ml，水合20min，水浴超声5min，得到姜黄素柔性脂质体； 2) 姜黄素柔性脂质体制备成冻干粉 向1)制备的姜黄素柔性脂质体中加入甘露醇，在_75°C预冻24h，放入冻干机24h，得到 冻干粉； 3) 制备姜黄素柔性脂质体霜膏 分别称量液体石蜡2. 2ml，硬脂酸4. 5ml、橄榄油8. 9ml和氢化蓖麻油1. 4ml，在不断搅 拌下加热，直至各组分物质溶解混匀，形成透明液体，当温度达到80°C时，在不断搅拌下，缓 慢且均勻的加入三乙醇胺0. 8ml、甘油1. 8ml、丙二醇13. 3ml和水66. 9ml，水浴加热15min， 使三乙醇胺与硬脂酸乳化反应充分，得到混匀液体，然后将混匀液体倒入已预热好的组织 捣碎机中进行搅匀， 称取姜黄素柔性脂质体20mg，当上述混匀液体温度降为50°C时，加入姜黄素柔性脂质 体缓慢搅拌，搅匀后加入香精lmg继续搅拌，直至形成均匀细腻的乳化体时，停止搅拌，待 其冷却至室温，得到姜黄素柔性脂质体霜膏。
2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在1)中，所述氯仿与甲醇按体积比 1:1混合。
3. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在2)中，所述姜黄素柔性脂质体与甘 露醇的质量比为9:1。
【文档编号】A61Q19/08GK104434551SQ201410620720
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年11月6日 优先权日:2014年11月6日
【发明者】陈大全 申请人:烟台大学