专利名称：稳定脂质体的方法和含它们的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及的是稳定含在水性组合物中脂质体以对抗由阴离子表面活性剂造成的溶解的方法，该方法不是指已知的通过用一些表面活性剂做稳定剂溶解该脂质体的方法，本发明还涉及由此得到的稳定组合物及制备含该稳定的脂质体和阴离子表面活性剂的清洁剂组合物方法和该清洁剂组合物。
在专利和杂志文献中到处可见这里所用的术语“脂质体”，该术语“脂质体”是指衍生于两亲分子(在电荷上或是阴离子或是非离子)的双层泡。该脂质体可是单层的或多层的。因此，“脂质体”可包括衍生于天然磷脂的泡及来自合成的非离子两亲化合物(其有时称为“niosomes”)的那些化合物。
这些材料在化妆上的用途很快就在化妆品市场上得到了重视。最近有关脂质体的综合信息包括两篇文章，见1990年5月出版的Cosmetics and Tioletries，vol.105于P65ff，Suzuki等人的“Application of liposomes to Cosmetics”和于P89ff，Lautenschlager的“Liposomes in Dermatological Preparations Part Ⅰ”，1990年7月出版在Cosmetics and Toidetries上的一篇文章P63ff，由Lautenschlager发表的“Liposome Ⅰn Dermatological Preparation Ⅱ”(“Lautenschlager Ⅱ”)，以及1990年6月出版在Soap/Cosmetics/Chemical Specialties上，于P32ff，由Wendel等人发表的“Liposomal Cosmetics”，1979年出版在International Journal of Cosmetic Science，vol.1由Handazani-Vila等人发表的“Dispersions of lamellar phasesofnon-ionic lipids in cosmeticproducts”，P303ff，和1989，1月/2月，出版在Journal of the SocietyofCosmetic Chemists，Vol，40Strauss的“LiposomesFromtheoretical model to cosmetictool”。Strauss文章注意到脂质体可将水溶性化妆品包封在它们的有水的小室里。文章叙述加入了清洁剂和表面活性剂，但随后通过透析或凝胶过滤除去它们以形成脂质体(图2)，同时P56叙述了表面活性剂可被包封在脂质体中。脂质体制剂的其它例子见Weder等人的U.S.Pat.Nos.4，438，052，Fujiwara等人的4，536，324(非离子脂质体)，Popescu等人的4，708，861，Wallach等人的4，853，228(将带负荷的表面活性剂加到非离子脂质体中可转变成离子性质的脂质体)，和Kunitake等人发表在Bulletin of theChemicalSociety of Japan上的“SyntheticBilayer Membranes withAnionicHeadGroups”，Vol.51，No.6，P1877ff，1978(来自合成的阴离子表面活性剂的脂质体)。
对于化妆上的用途，含脂质体的配方一般呈涂液或软膏形式，因为这样可提供保留脂质体双层结构的媒介物。脂质体，尤其是衍生于磷脂如卵磷脂的那些脂肪质体，对能溶解形成脂质体颗粒的双层的其它化合物是敏感的。溶解会消除含脂质体的泡的存在，并且任何于脂质体水性内层中的化妆用材料如致湿剂会被释放到周围水性介质中。
肤用软膏或涂液通常留在皮肤或头发上并且不被冲掉。如果化妆产品如浴液和洗发香波中含有脂质体，这对于化妆品来讲是十分重要的。这样，这些产品既可清洗机体又可将有益性质的脂质体带到皮肤和头发上，即使在浴液或洗发香波正常被冲走情况下。虽然文献有时在这点上相互矛盾，但一般用于浴液和香波的阴离子型表面活性剂如十二烷基醚-2硫酸钠起着溶解脂质体泡作用。脂质体在这种表面活性剂存在下是不稳定的并且其具有的任何有益效果会被这种溶解降低或消除。
当脂质体被用来承载活性成份如增湿剂或维生素时，脂质体的稳定性就显得特别重要。例如，Wendel等人在其文章Supra，P36中谈到对于由天然磷脂衍生的脂质体，“一般不能配成脂质体液体肥皂或香波”。Wendel等人还谈到脂质体在带有两亲表面活性剂如乙醇或乙二醇的产品中是十分稳定的。Sundberg等人在U.S.Pat.No.4，752，572中谈到通过加临介胶囊浓度至少为0.1毫摩尔的表面活性剂来溶解脂质体，并且还谈到用于溶解脂质体的阴离子表面活性剂例子是胆酸钠和十二烷基硫酸钠。Lautenschlager在其文章Ⅱ的P66谈到“组配脂质体液体肥皂或香波是不可能的……”，而P70涉及到含脂质体及0.5%聚山梨酯和0.5%单油酸山梨聚糖酯的稳定水包油软膏，并将其作为带有非常低比例的乳化剂的稳定脂质体软膏的例子。
Oleniacz在U.S.Pat.No.3，957，971谈到含脂质体的悬浮液可留住致湿剂，其中脂质体包括卵磷酯，磷酸三十二烷基酯和胆固醇的三元混合物，致湿剂是焦谷氨酸钠或谷氨酸。与其它杂志报道相反，Oleniacz谈到这些脂质体可由含阴离子或两性表面活性剂的载体载运。实例15给出了一香波配方，其含有阴离子表面活性剂一十二烷基硫酸三乙醇铵，乙醇，另一表面活性剂一双(2-羟乙基)烷基胺氧化物，乙醇和含脂质体的水性组分(在组分中留有焦谷氨酸钠)。这表明当保持PH5-6且直到固体组分溶解时，室温下四种组分仅能混合在一起。与Oleniacz中实例13不同的是，这报道了在0.1%重量比体积的各种表面活性剂存在下的含致湿剂的脂质体稳定性，但没有指出在所得到的香波组合物中存在稳定的脂质体。实例15没有给出将组分混合在一起的具体次序。
在Nawroth等人的文章Physica B156 a d 157，P477ff，标题为“Neutron small Angle Scattering of Liposomes in the Presence of Detergents”中得出这样的结论，即少量清洁剂如胆汁盐(牛磺脱氧胆酸钠盐)可被加到卵磷脂为基质的脂质中而不会破坏它们的结构。这些脂质体可通过带电荷的清洁剂来稳定。非离子清洁剂不能协助稳定脂质体，而阴离子和阳离子清洁剂可以。在这项工作中，清洁剂是在脂质体形成期间被加入脂质体中的。
与本发明主题的脂质体不同的是，Miyake等人在U.S.Pat.No.4，885，159中谈到了一种护发品，是一通过聚合表面活性剂单体得到的聚合泡状物，该泡状物含季铵阳离子和作为对抗离子的可聚合阴离子。该产品作为护发润丝以保护头发被认为是有用的。除聚合的泡状物外，阴离子表面活性剂也可存在。
本发明的目的之一是提供一种稳定脂质体、尤其来自磷酯和非离子两亲化合物的那些脂质体的简单方法，以便对抗阴离子表面活性剂的溶解作用。通过加不会对脂质体双层进行特殊修饰的成份(不是常用的那些成份如甾醇)是必要的。
本发明另一目的是提供水性脂质体悬浮液，其还含有不引起脂质体明显溶解及断裂的表面活性剂，从而得到用于清洁目的浴液，香波，清洁剂等。这些组合物提供了将脂质体与机体，头皮和其它底物相接触的媒介。脂质体本身还可含有活性成份如可将脂质体输送到皮肤和头发上的致湿剂和维生素。
本发明还有一个目的是提供一种清洁剂组合物，其含有稳定脂质体和阴离子表面活性剂，该阴离子表面活性剂是已知能溶解脂质体那类的，如十二烷基硫酸钠和十二烷基醚硫酸钠，它们一般用于浴液和香波。使用这种稳定的脂质体优点是，当需要含脂质体的产品时，可使设计师采用验证的浴液和香波配方。
本发明的这些和其它目的是通过一种稳定含脂质体的水性组合物的方法来提供的，该方法可对抗阴离子表面活性剂的溶解作用，该方法特征在于将约占整个组合物重的0.1%-40%(重量)，优选2%-10%的至少一种表面活性剂，该表面活性剂选自磺基琥珀酸脂肪族烷基酯(其中脂肪族烷基含8-22个碳原子)，聚乙二醇醚脂肪族酰氨基硫酸盐(其中脂肪族酰基含8-22个碳原子)，脂肪族烷基胺氧化物(其中脂肪族烷基含7-26个碳原子)，磷酸脂肪族烷基酯(其中脂肪族烷基含8-22个碳原子)，N-酰基氨基酸盐或水解蛋白质的N-酰基衍生物盐，其重均分子量约为2，500道个顿(其中酰基部分衍生于每分子含8-22个碳原子的羧酸)，加到含脂质体的水性组分中，其中脂质体体积为整个组合物体积的约0.1-50%，优选5-30%，所加的表面活性剂量以对抗阴离子表面活性剂的溶解作用且稳定脂质体为准，其中脂质体与表面活性剂的比为不大于30份体积脂质体1份重表面活性剂。这里和权利要求书中的“表面活性剂”量是指该活性表面活性剂化合物的量不包括无活性的盐和市用表面活性剂中的水。脂质体最好包括磷酯或两亲非离子化合物。
本发明还涉及一种方法，其包括将占整个清洁剂组合物重约0.1-35%，优选5%-15%的至少一种已知溶解脂质体的阴离子表面活性剂加到含上述脂质体的水性组分中，从而形成含脂质体和该阴离子表面活性剂的水性清洁剂组合物。阴离子表面活性剂优先选自式R6(OCH2CH2)gQ的那些化合物，其中R选自含8-18个碳原子的烷基，苯基和6-24个碳原子的烷芳基，g为0-10，Q选自-C(O)OZ，-OSO3Z和-SO3Z，更优选的是十二烷基硫酸钠和十二烷基醚硫酸钠，其中g为1-10，优选1-4。
本发明还涉及由上面方法得到的组合物。
图1是将十二烷基醚-3磺基琥珀酸钠加到含染料且磷脂为基质的水性脂质体后照的可见光荧光光谱图。
图2是将阴离子表面活性剂-α烯烃磺酸盐(已知其能溶解脂质体)加到含染料且以磷脂为基质的水性脂质体后做的荧光光谱图。
图3是将二辛基磺基琥珀酸钠加到含染料且以磷脂为基质的水性脂质体后做的荧光光谱图。
图4是将可卡氨基(cocamido)丙胺氧化物加到含染料且以磷脂为基质的水性脂质体后做的荧光光谱图。
图5是将十二烷基醚-3磺基琥珀酸二钠加到含染料且以合成的非离子两亲化合物为基质的水性脂质体后做的荧光光谱图。
图6是将十六烷基醚-2磷酸钠加到含染料且以合成的非离子两亲化合物为基质的水性脂质体后做的荧光光谱图。
图7是将十二烷基醚-2硫酸钠加到含染料且以磷脂为基质的脂质体中后做的荧光光谱图，该脂质体用磺基琥珀酸双十二烷基酯稳定以形成清洁剂组合物。
图8是将十二烷基醚-2硫酸钠加到含染料的且以磷脂为基质的脂质体中后做的荧光光谱图，该脂质体用羊毛醚(laneth)-5磺基琥珀酸二钠稳定，从而形成清洁剂组合物。
图9是在将十二烷基醚-2硫酸钠加到含染料且以磷脂为基质的水性脂质体后做的荧光光谱图，该脂质体用十六烷基醚-2磷酸钠稳定以形成清洁剂组合物。
图10是在将已知能溶解脂质体的几种不同阴离子表面活性剂加到含染料且以合成的非离子两亲化合物为基质的水性脂质体中后做的荧光光谱图，该脂质体是用十二烷基醚-3磺基琥珀酸二钠稳定的。
图11是含染料的多层水性脂质体在缓冲水溶液中制备后8天的400倍可见光的显微照片。
图12是含染料且由表面活性剂处理的多层水性脂质体在缓冲水溶液中制备后8天的400倍可见光的显微照片。
图13是含染料且由表面活性剂处理过的多层水性脂质体在清洁剂溶液中制备后6天的400倍可见光的显微照片。
图14是含染料且由表面活性剂处理过的多层脂质体在清洁剂溶液中，制备后6天的400倍可见光的显微照片，所用清洁剂液含已知能溶解脂质体的阴离子表面活性剂。
用于制备脂质体及将各种成份加入其中的技术和材料对于本领域普通技术人员来讲是熟知的，具体可见前述的杂志文章和专利。本领域人员了解各种类型脂质体。用于描述它们的命名可能会引起混淆，因为脂质体既被描述为所存双层数目的函数也可描述为制备方法的函数。下面是经常所用命名法的例子泡的类型 术语 平均直径微米(μ)Small，Sonicated Unilamellar SUV 0.025-0.05Large Vortexed Multilamellar MIV 0.05-10Large Unilamillar LUV 0.1Reverse Phase Evaporation REV 0.5French Press FPV 0.05本发明涉及到稳定脂质体的方法，而制备它们的方式对本发明来讲不是关键的。
用于本发明的脂质体可以基于磷脂(其有时称为“卵磷脂”)。它们是油，硬脂，棕榈或其它脂肪酸与甘油磷酸和胆碱所成的酯。卵磷脂可由动和植物组织的及鸡蛋黄获得。用于形成脂质体的磷脂(包括括号中纯膜溶解的温度或“Tm”)具体实例是二油酰磷脂酰胆碱(-22℃)，二月桂酰磷脂酰胆碱(0℃)，二-十四酰磷脂酰胆碱(23℃)，二棕榈酰磷脂酰胆碱(41℃)，二硬脂酰磷脂酰胆碱(58℃)，二-十四酰磷脂酰乙醇胺(60℃)，二油酰磷脂酰甘油(-18℃)，二月桂酰磷脂酰甘油(4℃)，二-十四酰磷脂酰甘油(23℃)，二棕榈酰磷脂酰甘油(41℃)，二硬脂酰磷脂酰甘油(55℃)，和二棕榈酰磷脂酸(PH6∶67℃;PH9∶58℃)。
用于制备非离子脂质体的非离子两亲化合物的实例可是烷基聚甘油酯类，如聚硬脂酸甘油-6酯，聚甘油-3羟基月桂醚和聚甘油-2-羊毛脂醚.
脂质体材料的Tm对所截留活性成份(加在脂质体内部)泄漏到外部水相有影响。脂质体是凝胶态(Tm以下)泄漏最少，在液状结晶态(Tm以上)泄漏较多，在相转移的准确温度或熔融温度(温度于Tm)下是最泄漏的。一些文献报道表明REVs比MLVs更易泄漏，而另一些报道则与之相反。
正如本领域所已知的，化合物如甾醇(像胆固醇)可作为双层材料的一部分，用于形成脂质体。甾醇是起填充物作用并稳定脂质体膜从而降低泄漏。因此，修饰剂如甾醇可降低脂质体中的载留材料与有修饰剂悬浮其中的水性连续相的交换。虽然磷脂甾醇的摩尔比优选是70∶10-70∶35，最优选为70∶10-70∶20，但摩尔比为50∶50是最稳定的。加带电荷的化合物如磷酸二-十六烷基酯到双层材料以形成脂质体一般可防止泡状物崩解。发明人已发现由蛋卵磷脂，磷酸联十六烷基酯和胆固醇(摩尔比为7∶2∶2)制备的脂质体可用于形成适用于本发明的LUV和MIV脂质体，更优选的摩尔比是7∶2∶1-7∶2∶3.5。
按Schieren等人在Biochim et Biophys Acta，Vol.542，pp.137-153(1978)中所报道的方法可制备实例中所述的水性LUVs。按Kinsky在Methods in Enzymology，ⅩⅩⅫ，Biomembranes，Part B，pp501-503(1974)中所述的薄膜水合法可制备MIVs。制备脂质体的其它方法对本领域普通技术人员来讲是显而易见的。另外，其它水溶性活性成份如维生素，致湿剂，染料等，如果它们是油溶性的，则它们在制备时或加入到双层中时可保留在脂质体中，此点显见于先有技术中。水性脂质体悬浮液可含有为整个水性脂质体悬浮液体积的约0.1%-约50%(体积)，优选5%-30%的脂质体。
制备完含脂质体的水性组合物之后，将至少一种下面的表面活性剂以占组合物总重的约0.1%-40%，优选约2%-10%的量加到所制备的组合物中。
可用脂肪族烷基磺基琥珀酸盐，其中脂肪族烷基含8-22个碳原子。这种表面活性剂的例子由下式表示
其中R1为含8-22个碳原子的烷基，R2为含4-16个碳原子的烷基，X为阳离子，如碱金属如钠或钾，硫酸酯，硫酸甲酯，硫酸乙酯，铵，含1-9个碳原子的胺，如甲胺，乙胺，二乙胺和三(正丙基)胺或含2-9个碳原子的烷醇胺，如单乙醇胺，二乙醇胺，三乙醇胺和三异丙醇胺，a为0-8，b为1-4。
这些磺基琥珀酸盐和式(a)的例子有月桂基磺基琥珀酸二钠，月桂醚-3磺基琥珀酸二钠，异癸基磺基琥珀酸二钠，癸醚-6磺基琥珀酸二钠，硬脂酰磺基琥珀酸二钠，十六烷酰磺基琥珀酸二钠，羊毛醚-5磺基琥珀酸二钠，月桂醚磺基琥珀酸二钠和月桂醚磺基琥珀酰二钾，其中乙氧基平均数为1-4。月桂醚-3磺基琥珀酸二钠和羊毛醚-5磺基琥珀酸二钠被认为是较好的。
式(b)的例子有磺基琥珀酸二辛基钠，磺基琥珀酸二棕榈基钠和磺基琥珀酸二月桂基钠。磺基琥珀酸二辛基钠被认为是较好的。
式(c)的例子有月桂酰氨基MEA磺基琥珀酸二钠，可卡酰氨基MIPA-磺基琥珀酸二钠，十四烷酰氨基MEA磺基琥珀酸二钠，油酰氨基(oleamido)MEA-磺基琥珀酸二钠，油酰氨基MIPA-磺基琥珀酸二钠，硬脂酰氨基MEA-磺基琥珀酸二钠，十一碳烯酰氨基MEA-磺基琥珀酸二钠和可卡酰氨基MIPA-磺基琥珀酸二钾。
式(d)的例子有月桂基磺基琥珀酰胺酸二钠，油基磺基琥珀酰胺酸二钠和二羧乙基硬脂酰基磺基琥珀酰胺酸四钠。
可使用脂肪族酰氨基聚乙二醇醚硫酸盐，其中脂肪族酰基含8-22个碳原子，该表面活性剂的例子由下式表示(e)R3C(O)NH(CH2CH2O)cSO3X其中R3为含8-18个碳原子的烷基，c为1-6。
式(e)的例子有TEA-PEA-3可卡酰胺(Cocamide)硫酸盐和钠-PEG-5硬脂酰胺硫酸盐。
可用脂肪族烷基胺氧化物，其中脂肪族烷基含7-26个碳原子。该表面活性剂如下式所示
(g)
;和其中R4为含1-4个碳原子的烷基或-CfH2fOH，R5为含7-26个碳原子的烷基，d为1-5，f为2或3。
式(f)的例子有可卡胺氧化物，月桂胺氧化物，十四烷胺氧化物，硬脂胺氧化物，月桂(二乙基)胺氧化物和二十二碳烷基(二甲基)胺氧化物。
式(g)的例子有可可-吗啉氧化物，N-月桂酰基-吗啉氧化物和N-硬脂酰基-吗啉氧化物。
式(h)的例子有可卡酰氨基丙基胺氧化物，月桂酰氨基丙胺氧化物，癸酰氨基丙基(二乙基)胺氧化物，癸酰氨基乙基(二甲基)胺氧化物，月桂酰氨基丙基(二乙基)胺氧化物和十八烷酰氨基丙基胺氧化物，及二十二烷酰氨基丙基(二甲基)胺氧化物。
可使用脂肪族烷基磷酸盐，其中脂肪族烷基含8-22个碳原子。该表面活性剂如下式表示(ⅰ)(R1(OCH2CH2)aO)eP(O)(OZ)(OH)2-e其中Z为H或X，e为1-2。
式(ⅰ)的例子有十六烷醚-2磷酸钠，DEA-油醚-1磷酸盐，DEA-油醚-3磷酸盐，月桂醚-8磷酸钠，二(油醚-2)磷酸钠，月桂醚-4磷酸钠，月桂基磷酸钾和癸醚-2磷酸钠。
可使用N-酰基氨基酸盐，优选天门冬氨酸或谷氨酸，或使用重均分子量约2，500的水解蛋白质的N-酰基衍生物盐，其中酰基来自每分子中含8-22个碳原子的羧酸。
这种盐的例子有月桂酰谷氨酸钠，N-可可酰基-L-谷氨酸单三乙醇胺，N-十六烷酰基-L-谷氨基钠，癸酰基谷氨酸钾，可可酰基谷氨酸钠，硬脂酰基谷氨酸钠，月桂酰基天门冬氨酸钾，硬脂酰基天门冬氨酸钠，月桂酰基天门冬氨酸钠，TEA-月桂酰基谷氨酸盐，月桂酰基谷氨酸盐，月桂酰-L-赖氨酸，N-月桂酰基-L-谷氨酸的辛基十二烷基二酯和辛酰天门冬氨酸钾。
这种水解蛋白质例子有钾可可水解的动物蛋白，TEA-可可-水解的动物蛋白，TEA-枞酰基水解的动物蛋白，TEA-月桂酰基胶原氨基酸和钾十一碳烯酰基水解的动物蛋白。
脂质体悬浮液的稳定性可简单地通过在室温，伴随搅拌下加一或多种上述表面活性剂到脂质体悬浮液中来完成，该脂质体悬浮液可选择性含截留的和/或加入活性成份如维生素，染料和致湿剂的膜(例如，亲脂材料可由质脂膜携带而不是由内部的水性脂质体)。虽然脂质体悬浮液的稳定性可很快产生，但添加完毕后，该组合物在室温下可搅拌几分数至数小时。
稳定的脂质体悬浮液可用作浴液、洗发香波或清洁剂组合物，如果有足够量的上述表面活性剂存在，则组合物具有洗洁性能。
其他成分可以被加入组合物，只要它们与存在的脂质体是相容的，正如所见的在稳定脂质体悬浮液中简单地加入所提出的成分。因而，诸如染料、增稠剂、防腐剂、遮光剂等之类的其他成分也可包括在按照本发明方法稳定的脂质体悬浮液中。
稳定脂质体悬浮液也可用作香波和浴液配方中的加入成分，该配方含能破坏组合物中存在的脂质体双层壁的整体性并能溶解它们以破坏它们的泡囊性质的阴离子表面活性剂。这些类型的阴离子表面活性剂通常归于在工业上能迅速得到的并广泛用于香波和浴液配方以及为其他目的的清洁剂的一类阴离子表面活性剂。
这种表面活性剂之例是如前所述及的式Rb(OCH2CH2)gQ的表面活性剂，包括十二烷基硫酸钠、十二烷基硫酸铵、十二烷基醚-2硫酸钠、可可基硫酸钠、硬脂酰硫酸钠、十四烷基醚-4硫酸钠等。在这些化合物中，有工业重要性的表面活性剂是十二烷基硫酸钠和十二烷基醚硫酸钠，其中的g具有1-10的平均值，优先选择1-4。
具有上式的其他阴离子表面活性剂包括线型烷基苯磺酸盐(其中的烷基是辛基、十二烷基、十四烷基、十六烷基或十八烷基)，如十二烷基苯磺酸钠。这类阴离子表面活性剂还有C8-C25烯烃磺酸盐如C14-C16烯烃磺酸钠和C16-C18烯烃磺酸钠;C10-C20石蜡烃磺酸盐如具有约10-20、最好是10-15个碳原子的那些石蜡烃磺酸盐，如用长链α-烯烃和亚硫酸氢盐(例如亚硫酸氢钠)反应制得的伯(初级)石蜡烃磺酸盐或有磺酸盐基沿石蜡烃链分布的石蜡烃磺酸盐，如用长链石蜡烃与二氧化硫和氧在紫外线作用下进行反应，然后用氢氧化钠或其他适合的碱中和以提供一阴离子作为抗衡离子而得到的产品;以及C8-C9烷基苯基ethoxamer硫酸盐，如nonaxynol-4硫酸钠、octuoxynol-2乙磺酸钠和monoxynol-4硫酸铵。
在本发明的方法中可采用一个或多个这些溶解阴离子表面活性剂，在制备好的稳定脂质体悬浮液中一种或多种阴离子表面活性剂的加入量为清洁剂组合物总重量的约0.1至35%，优先选择5至15%。将表面活性剂加入稳定脂质体悬浮液中是在搅拌下进行的，并且可在室温下一直搅拌直至生成均匀的清洁剂组合物。本方法最后得到可用于浴液、洗发香波或其他清洁剂组合物的清洁剂组合物。
本领域中一般技术人员均知道，最终的组合物产品应含足够量的脂质体以使机体或头发具有好的效果，如果这样的接触被认为是组合物的一种用途的话。
下面的实施例将对本发明各个方面进行说明而不脱离本发明的范围和精神。实施例中所有的份和百分数均以重量表示，除非另外指明。实施例中所用的方法和试验如下LUVs的生产使用上述Schieren等人方法的改进方法生产了两种不同类型的含5(6)-羧基荧光素作为染料标记物的脂质体。一种类型采用了蛋卵磷脂作为主要阴离子脂质化合物为蛋磷脂酰胆碱(得自冻蛋蛋黄)∶磷酸联十六烷基酯∶胆固醇的摩尔比为7∶2∶2(下称“LUV-EPCs)。另一类型的LUV采用主要量的非离子型两亲性化合物∶聚二硬脂酸甘油-6酯(6G-2-S，得自Capital City Products Co)∶磷酸联十六烷基酯∶胆固醇的摩尔比为7∶2∶2(下称LUV-PGDs)。
将膜组分(蛋磷脂酰胆碱(59.61毫克)或聚二硬脂酸甘油-6酯∶磷酸联十六烷基酯(11.85毫克)∶胆固醇(7.14毫克)的摩尔比为7∶2∶2)溶于约25毫升的氯仿中，加入尽可能小量的甲醇(即足以使磷酸联十六烷基酯溶解的量，约2毫升)，于减压和45℃条件下干燥至少2小时，将得到的干膜再溶于35毫升石油醚(b.p.35-60℃)，将此溶液平分成两部分，各吸入气密注射器，每个注射器均放入注射器泵中，溶剂混合物以每分钟0.1至0.2毫升注入含4毫升截留溶液的两个水套容器中的一个，截留溶液是0.05摩尔的三(羟甲基)氨基甲烷(“TRIS”)水溶液，pH7.4，含0.01摩尔5(6)-羧基萤光素，使用前用氯化钠将溶液调至290mosm/kg(H2O)。截留溶液保持在溶剂沸点(60℃)或高于溶剂沸点的温度。注射完毕后，将脂质体悬浮液旋涡搅动1分钟，冷却至室温(约22℃)。用凝胶层析法将悬浮液通过SEPHADEX G25柱除去未被截留的染料。
MLVs的生产在实施例22-24中使用了含5(6)-羧基萤光素的脂质体，这些脂质体采用了二硬脂酰胆碱作为主要的阴离子脂质化合物，二硬脂酰磷脂酰胆碱(25毫克)∶磷酸联十六烷基酯(4.92毫克)∶胆固醇(2.97毫克)的重量比为7∶2∶2(下称LUV-PGDs)。MLV-DPCs是按下述的薄膜法生产的所用的制备方法在初阶段是与生产LUV-EPCs相同的，是将膜组分溶于氯仿，加入尽可能少量的甲醇，在45℃下干燥2小时，以生产干燥之薄膜。使用了特别的截留溶液以得到较好的显微照片在100毫升pH7.4的含0.01摩尔5(6)一羧基荧光素和0.05摩尔TRIS的缓冲水溶液中加入50克的葡萄糖、以每25毫克二硬脂酰磷脂酰胆碱3毫升的截留溶液加入蒸发瓶中。将蒸发瓶在水浴上加热至60℃，轻微旋动以搅动内容物。干薄膜水合后，出现乳状悬浮液，然后将内容物比较剧烈地搅拌15分钟。将所得到的脂质体悬浮液冷却至室温，不需进一步处理即可用于下述的实施例中。
荧光计光谱法如测定脂质体水悬浮液的稳定性，将Eastman Kodak公司的不与脂质体双层-5(6)-羧基荧光素结合的水溶性染料包囊在脂质体水液的内部作为标记物。测定脂质体悬浮液完整性的这一方法已在文献Biochem Biophys.Acta，Vol，649.pp133-137(1981)中的Ralston等人文章里讨论过。5(6)-羧基荧光素的激发和发射波长分别为492和520nm。
为取得示于图1和图2类型的荧光光谱图，脂质体悬浮液的荧光强度在520nm用与IBM个人电脑接口的Perkin-Elmer650 S荧光检测计测定，以产生覆盖任意时间周期的荧光光谱，直至观察不到荧光的进一步明显增强为止。一般的时间周期为150-180秒。由于5(6)-羧基荧光素的的pH依赖性很强，所以与脂质体悬浮液相接触的任何表面活性剂和缓冲剂都需调节至pH7.4。另外需将溶液的渗透性调至290mosm/kg(H2O)以阻止由于脂质体膜的渗透活性而使5(6)-羧基荧光素浓度发生改变。
脂质体悬浮液最大荧光强度的测定是引入一份(通常为25微升)含载留的染料的脂质体悬浮液至4毫升1%的十二烷基硫酸钠溶液来完全溶解脂质体样品进行的。对于非离子型的两亲性化合物为基质的脂质体是用Octoxynol-9来代替十二烷基硫酸钠的。测定最小荧光强度时是将一份同样体积脂质体悬浮液加入4毫升pH7.4的等渗缓冲溶液。在荧光光谱图上示出的50%荧光强度水平被计算作为脂质体悬浮液的最大和最小荧光强度值之间的荧光强度。
有特定表面活性剂存在的脂质体悬浮液的荧光光谱图是将一份25微升的欲测的含染料脂质体在室温(约22℃)下加到4毫升所希望的测试浓度的表面活性剂溶液中，然后立即将其转移至荧光计的比色杯中测得的。所有表面活性剂溶液均以氯化钠调至等渗，以0.05摩尔TRIS进行缓冲并用盐酸调至pH7.4。脂质体在室温下溶解非常迅速。如果荧光强度的平衡读数(一般在加入一份脂质体到表面活性剂溶液后在10-20秒钟内达到平衡，正常情况是60秒钟后)不超过50%所用脂质体是浮液荧光强度水平，则认为此脂质体悬浮液在表面活性剂存在下是稳定的。
光谱图代表荧光强度随时间的发展，在制备之初，每一含染料的脂质体悬浮液都具有固有荧光，这是其最小荧光强度。在将脂质体加入表面活性剂溶液后，即与脂质体膜互相作用而不溶解，几乎经常都可观察到荧光强度的稍微增加。此染料的迅速泄漏对于将脂质体制剂用于药物运输的配方设计师们是熟知的。此泄漏不被认为对脂质体溶解是预示性的，除非如上所述它超过了50%的荧光强度。这一水平确定为任意的最大值，超出此值时表面活性剂一脂质体的相互作用被认为是破坏性的。被测试的脂质体与表面活性剂的相容性是用一个或多个下列因素表明的在任何有用的表面活性剂浓度下，荧光不超过50%荧江强度;表面活性剂浓度增加，荧光强度水平下降;荧光随时间的发展可以忽略不计。图1中所示的荧光光谱展示了所有的这些因素。做此工作时，表面活性剂的添加一般使荧光强度降低至低于初始值。这一降低可能是表面活性剂以以下方式与脂质体膜相结合，使膜变得更紧密并且产生收缩，致使从脂质体内部消除了水分，因之增加了染料浓度，因为染料在较高浓度时的抑制，因此降低了荧光强度。
在下列所有的实施例中，所用的表面活性剂均为工业级，并且未经纯化。
实施例1-3实施例1和2说明磺基琥珀酸脂肪族烷基酯、十二烷基醚-3磺基琥珀酸二钠与LUV-EPCs的相容性，如图1所示，与实施例3相比较，其中阴离子表面活性剂-α-烯烃磺酸盐的溶解效果示于图2。
实施例1中的LUV-EPCs按上述方法制备，在各含0.125%、1.25%和5.0%的十二烷基醚-3横基琥珀酸二钠(西德CHEM-Y，G.m.b.H的SURFAGENE S30)的表面活性剂溶液(40%的活性表面活性剂含量)中加入相等份量，使用上述“荧光计光谱法”中的步骤，立即记录各溶液的荧光光谱，结果示于图1。其中在加入表面活性剂前所用的LUV-EPCs的最小荧光强度约为6.7，50%荧光强度约为8.7。(图1显示，在0.125%活性表面活性剂浓度时，荧光强度的平衡值在60秒钟后约为8.1，大约与1.25%活性表面活性剂浓度的值相同，在5.0%活性表面活性剂浓度时，40秒钟后荧光强度迅速达到约为7.1的平衡值。在所有情况中，各被测表面活性剂浓度的平衡值均低于LUV-EPCs在被测表面活性剂不存在下的50%荧光强度值。因此在十二烷醚-3磺基琥珀酸二钠存在下溶液是稳定的。
实施例2是按实施例1相同的方法进行的，使用相同的表面活性剂，但厂商不同十二烷醚-3磺基琥珀酸二钠的注册商标是REWOPOL SBFA30(西德Rtwo Chemische Werke G.m.b.H，活性表面活性剂含量为40%)。LUV-EPCs的50%荧光强度值约为8.7。测定的十二烷醚-3磺基琥珀酸二钠浓度和60秒钟后它们的平衡荧光强度(列于括号中)如下0.125%(7.8);1.25%(7.7);3.75%(7.1)和5.0%(6.7)。这基本上证实了实施例1的结果，即在此表面活性剂存在下LUV-EPCs是稳定的。
实施例3是按与实施例1相同的方法进行的，荧光光谱是在α-烯烃磺酸盐阴离子表面活性剂C14-C16烯烃磺酸钠(为荷兰Akzo Chemicals BV的ELFAN OS46;活性表面活性剂含量为37%)的活性水平分别为0.125%，0.625%，1.25%和3.75%时记录的，在所有被测的表面活性剂水平中，此例中所用的阴离子溶解表面活性剂溶解了大量的脂质体，如图2所示，是由于这样的事实每一被测样品的平衡荧光强度介于约10.1至10.4的范围之间，比50%荧光强度水平8.7大得多。使用其它常用于香波和浴液(如十二烷基硫酸钠、平均每分子含0.5-8个氧化乙烯基的十二烷基醚硫酸钠和烷基含12个左右碳原子的线型苯磺酸烷基酯)的阴离子表面活性剂类型进行测试，相同类型的结果绘于图2中。
因此，在磺基琥珀酸脂肪族烷基酯-十二烷醚-3磺基琥珀酸钠存在下LUV-EPCs是稳定的，而阴离子α-烯烃磺酸盐表面活性剂溶解大量的同类型未处理的LUV-EPCs。
实施例4-9这些实施例证明了LUV-EPCs与各类表面活性剂的相容性。
实施例4的方法与实施例1相同，使用脂肪酸羟基酰胺磺基琥珀酸盐一月桂酰MEA磺基琥珀酸二钠(如Rewo Chemische Werke G.m.b.H的REWOPOL SBL 203，活性表面活性剂含量为40%)。LUV-EPCs的50%荧光强度值约为8.7。测定的活性月桂酰胺MEA磺基琥珀酸二钠的浓度和它们在60秒钟后的平衡荧光强度(列于括号内)如下0.125%(7.6)，1.25%(5.0)和5.0%(4.5)。此表面活性剂与LUV-EPCs相容。
实施例5的制备方法与实施例1相同，但使用二烷基磺基琥珀酸盐-二辛基磺基琥珀酸二钠(为英国Albrighr and Ltd Wilson ltd的EMPIMIN OT，活性表面活性剂含量为60%)。LUV-EPCs的50%荧光强度值约为8.2，如图3所示，测定的活性二辛基磺基琥珀酸二钠浓度和它们在60秒钟后的平衡荧光强度(列于括号内)如下0.092%(7.1);0.125(6.9);0.185%(6.8);0.462%(6.4);2.78%(5.6)和3.7%(6.0)，此表面活性剂是与LUV-EPCs相容的。
实施例6的制备按与实施例1相同的方法，但使用脂族酰氨基聚乙二醇醚硫酸盐-TEA-PEG-3可卡酰胺硫酸盐(为西德Hoechst AG的GEN APOL AMS，活性表面活性剂含量为40%)，LUV-EPCs的50%荧光强度值约8.7测定的活性TEA-PEG-3柯卡酰胺硫酸盐的浓度和它们在60秒钟后的平衡荧光强度(列于括号中)如下0.125%(8.2);0.625%(8.3);1.25%(8.0);3.75%(7.3)和5.0%(6.8)，此表面活性剂与LUV-EPCs是相容的。
实施例7按实施例1的方法制备，但使用脂族烷基胺氧化物-氧化可卡酰胺基丙胺(为Rewo Chemische Werke G.m.b.H的REWOMINOXID B 204，活性表面活性剂含量为40%)。LUV-EPCs的50%荧光强度值约为8.7(由图4可见)。测定的活性氧化可卡酰胺基丙胺浓度和它们在60秒钟后的平衡荧光强度(列于括号中)如下0.125(9.8);0.25%(8.8);0.625%(8.8);1.25(8.7);3.75%(8.0)和5.0%(7.6)。此表面活性剂在浓度达到1.25%左右时与LUV-EPCs相容，这是没有想到的。因此作为有效的稳定剂，此氧化胺的使用浓度必须在1.25%以上。
实施例8按实施例1的方法制备，但使用N-酰基氨基酸盐一月桂酰谷氨酸钠(为美国Ajinomoto Ltd的AMISOFT LS-11，Teaneck，NJ USA，活性表面活性剂含量为93%)。LUV-EPCs的50%荧光强度值约为8.7，测定的活性月桂酰谷氨酸钠的浓度和它们在60秒钟后的平衡荧光强度(列于括号中)如下0.125%(6.7);1.25%(6.3);3.75%(5.8)和5.0%(6.1)。此表面活性剂与LUV-EPCs相容。
实施例9按实施例1的方法制备，但使用水解蛋白质的N-酰基衍生物(即脂肪酸钾盐/蛋白质缩合物)一可可水解动物蛋白质钾盐(为Rewo Chemische Werke G.m.b.H的REWOTEIN CPK，活性表面活性剂含量为25%)。LUV-EPCs的50%荧光强度值约为8.7。测定的活性可可水解动物蛋白质钾盐的浓度和它们在60秒钟后的平衡荧光强度值(列于括号中)如下0.086%(7.4);0.43%(7.5);0.86%(7.1);2.59(6.8)和3.45%(6.6)。此表面活性剂是与LUV-EPCs相容。
实施例10-13这些实施例证明非离子型LUV-EPCs与各类表面活性剂的相容性。
实施例10按与实施例1相同的方法制备，使用同一表面活性剂-十二烷基醚-3磺基琥珀酸二钠(为SURFAGENE S30)，但以LUV-PGDs代替实施例1中的LUV-EPCs。LUV-PGDs的50%荧光强度值约为5.7(可在图5中见到)。测定的活性十二烷基醚磺基琥珀酸二钠浓度和它们在60秒钟后的平衡荧光强度(列于括号内)如下0.5%(4.6);2.5%(4.6)和5.0%(4.5)。此表面活性剂与LUV-PGDs相容。
实施例11的制备方法与实施例9相同，但以LUV-EPCs代替实施例9中的LUV-PGDs。LUV-PGDs的50%荧光强度值约为5.7。测定的活性脂肪酸钾盐/蛋白质缩合物表面活性剂浓度和它们在60秒钟后的平衡荧光强度(列于括号内)如下0.345%(3.6);1.725%(3.7)和3.45%(4.1)。此表面活性剂与LUV-PGDs相容。
实施例12的制备方法与实施例6相同，但以LUV-PGDs取代实施例6中的LUV-PGDs。LUV-PGDs的50%荧光强度值约为5.7。测定的活性TEA-PEG-3可卡酰胺硫酸盐的浓度和它们在60秒钟后的平衡荧光强度(列于括号中)如下0.5%(4.5)和5%(4.6)。此表面活性剂与LUV-PGDs相容。
实施例13的制备方法与实施例1相同，但以LUV-PGDs取代实施例1中的LUV-PGDs，所用的表面活性剂是脂族烷基磷酸酯-十六烷基醚(Ceteareth)-2磷酸钠(如英国Croda Chemicals Ltd的CRODAFOS CS2N，活性表面活性剂含量为99%)。LUV-PGDs的50%荧光强度值约为5.7。如图6所示测定的活性十六烷基醚-2磷酸钠表面活性剂浓度和它们在60秒钟后的平衡荧光强度(列于括号内)如下0.5%(4.0);2.5%(3.4)和5%(3.1)。此表面活性剂与LUV-EPCs相容。
实施例14-18在这一系列的关施例中，表明了含本发明的稳定脂质体悬浮液和典型溶解脂质体的阴离子表面活性剂-十二烷基醚硫酸钠的清洁剂组合物的制备以及有关这类组合物中脂质体稳定性的数据。
在实施例14中，将LUV-EPCs用不同量的十二烷基醚-3磺基琥珀酸钠(SUFAGENE S30)进行稳定，如实施例1中所述。按实施例1的方法制备稳定组合物的荧光光谱。LUV-EPCs的最小荧光强度为6.7，50%荧光强度值约为8.7，如图7所示。测定的活性十二烷基醚-3磺基琥珀酸二钠浓度和它们在60秒钟后的平衡荧光强度(列于括号内)如下0.125%(8.1);1.25%(8.1)和5%(7.1)。此表面活性剂与LUV-EPCs相容。
然后，将用5%的活性十二烷基醚-3磺基琥珀酸二钠表面活性剂稳定的上述脂质体悬浮液4毫升加入1毫升含5%活性十二烷基醚-2硫酸钠的溶液，得到含稳定的脂质体的清洁剂组合物，制备后立即做荧光计光谱，得到的平衡荧光强度为6.8。然后将同一清洁组合物室温(22℃)放置48小时，发现其平衡荧光强度降至5.0，如图7所示。此荧光强度降至LUV-EPCs的最低值以下被认为可能是由于十二烷基醚-3磺基琥珀酸二钠稳定作用，接着再加过量的十二烷基醚-2硫酸钠形式的电解质使脂质体产生电荷，引起体系的自由体积全面降低所致。不希望有的结果是，用十二烷基醚-3磺基琥珀酸二钠稳定了脂质体，因而它们在十二烷基醚-2硫酸钠存在下是稳定的，而此十二烷基醚-2硫酸钠是被指望用以溶解脂质体并释放含于其中的染料的。
在实施例15中，LUV-EPCs的稳定是用不同量的十二烷基醚-5磺基琥珀酸二钠(如Rewo Chemische Werke G.m.b.H的REWOPOL S BFA50，活性表面活性剂含量为40%)，如实施例14所述。稳定组合物荧光计光谱的制备如实施例14。LUV-EPCs的50%荧光强度值纺为8.7。测定的活性十二烷基醚-5磺基琥珀酸二钠表面活性剂浓度和它们在60秒钟后的平衡荧光强度(列于括号内)如下0.125%(8.0);1.25%(7.2);3.75%(7.7)和5%(7.4)。此表面活性剂与LUV-EPCs相容。
然后，将4毫升用5%活性十二烷基醚-5磺基琥珀酸二钠表面活性剂稳定的脂质体悬浮液加入1毫升含5%活性十二烷基醚-2硫酸钠的溶液，制得含稳定脂质体的清洁剂组合物，制备后立即做荧光计光谱，得到的平衡荧光强度为7.3。然后将同一组合物室温(22℃)放置48小时，发现其平衡荧光强度降至低于1。
在实施例16中，LUV-EPCs的稳定是用不同量的羊毛醚-5磺基琥珀酸二钠(如Rewo Chemische Werke G.m.b.H的REWOLAN，活性表面活性剂浓度为50%)，如实施例14所述。稳定组合物荧光计光谱的制备如实施例14。LUV-EPCs的50%荧光强度值纺为8.7，如图8所示。测定的活性羊毛醚-5磺基琥珀酸二钠表面活性剂浓度和它们在60秒钟后的平衡荧光强度(列于括号内)如下0.125%(7.4);1.25%(6.3);3.75%(4.4)和5%(4.3)。此表面活性剂与LUV-EPCs相容。
然后，将4毫升用5%活性羊毛醚-5磺基琥珀酸二钠表面活性剂稳定的脂质体悬浮液加入1毫升含5%活性十二烷基醚-2硫酸钠的溶液中，得到含稳定脂质体的清洁剂组合物。制备后将立即做荧光计光谱，得到的平衡荧光强度为3.9。然后将同一清洁剂组合物室温(22℃)放置48小时，发现其平衡荧光强度降至约2.1。
在实施例17中，LUV-EPCs的稳定是使用不同量的TEA-PEG-3可卡酰胺硫酸盐(为西德Hoechst AG的GENAPOL AMS，活性表面活性剂含量为40%)，如实施例6所述。稳定组合物的荧光计光谱的制备如实施例6。LUV-EPCs的50%荧光强度值约为8.7。测定的活性TEA-PEG-3可卡酰胺硫酸盐表面活性剂浓度和它们在60秒钟后的平衡荧光强度(列于括号内)如下0.125%(8.2);0.625%(8.3);1.25%(8.0);3.75%(7.3)和5%(6.9)。这证实了见于实施例6的结果。
然后，将4毫升用5%活性TEA-PEG-3可卡酰胺硫酸盐表面活性剂稳定的脂质体悬浮液加入1毫升含5%活性十二烷基醚-2硫酸钠的溶液，得到含稳定脂质体的清洁剂组合物。制备后立即做荧光计光谱，得到的平衡荧光强度为6.9。然后将同一清洁剂组合物室温(22℃)放置72小时，发现平衡荧光强度降至约3.4。
在实施例18中，LUV-EPCs的稳定是用不同量的脂族烷基磷酸盐-十六烷基醚-2磷酸钠(为Croda Chemicals Ltd的CRODAFOS CS2N，活性表面活性剂含量为99%)，如实施例13所述。但本例用LUV-EPCs。按实施例13制备稳定组合物的荧光计光谱。LUV-EPCs的50%荧光强度值约为8.7，如图9所示。测定的活性十六烷基醚-2磷酸钠表面活性剂浓度和它们在60秒钟后的平衡荧光强度(列于括号内)如下0.125%(8.9);0.625%(8.2);1.25%(8.1);3.75%(7.3)和5%(6.8)。此表面活性剂在浓度达约0.125%时是与LUV-EPCs不相容的，但出乎意料，在较高浓度时它们与LUV-EPCs是相容的。因此，作为有效的稳定剂，此表面活性剂必须以超过0.125%的浓度使用。
然后，将4毫升用5%活性十六烷基醚-2磷酸钠表面活性剂稳定的脂质体悬浮液加入1毫升含5%活性十二烷基醚-2硫酸钠的溶液中，得到含稳定脂质体的清洁剂组合物。制备后立即做荧光计光谱，得到平衡荧光强度为6.7，将同一清洁剂组合物室温(22℃)放置48小时，发现其平衡荧光强度降至约6.5
实施例19-21在这些实施例中，说明了含有用5%十二烷基醚-3磺基琥珀酸二钠稳定的LUV-PGDs和通常可溶解脂质体的三种不同的阴离子表面活性剂的清洁剂组合物以及稳定的LUV-PGDs在这样的阴离子表面活性剂存在下的稳定性。
实施例19-21使用的稳定的脂质体悬浮液是按照实施例10中所述的相同步骤，用5%十二烷基醚-3磺基琥珀酸二钠(SURFAGENES30)稳定的脂质体悬浮液制成的。在将LUV-PGDs加到5%十二烷基醚-3磺基琥珀酸二钠溶液中之后，在制备下列组合物之前，使LUV-PGDs在室温下稳定30分钟。
将上述稳定的脂质体悬浮液以1∶1的体积比加到5%十二烷基醚-2硫酸钠的缓冲、等渗水溶液中制备实施例19的清洁剂组合物并制备该组合物的荧光光谱。如图10所示，LUV-PGDs的50%荧光强度约为5.7，而实施例19的清洁剂组合物的平衡荧光强度为4.4，这表明稳定的LUV-PGDs在十二烷基醚-2硫酸钠存在下是稳定的。
按照与实施例19相同的方法制备实施例20的清洁剂组合物，但所用的阴离子表面活性剂是对比实例3中所用的α烯烃磺酸酯，即ELFAN OS 46(AKZO Chemicals BV产品)。实施例20的清洁剂组合物的平衡荧光强度为4.8(如图10所示)，这表明稳定的LUV-PGDs在α烯烃磺酸酯存在下是稳定的。
按照与实施例19相同的方法制备实施例21的清洁组合物，但所用阴离子表面活性剂是线性烷基苯磺酸，即得自英格兰Albright & Wilson Ltd.商品名为NANSATS60的TEA-十二烷基苯磺酸盐，表面活性剂有效含量为60%。如图10所示，实施例21的清洁剂组合物的平衡荧光强度为5.4，这表明稳定的LUV-PGDs在TEA-十二烷基苯磺酸盐存在下是稳定的。
实施例22-25这些实施例显示了包括含染料的稳定脂质体悬浮液(MLV-DPCs)的洗面清洁组合物。实施例24还包括阴离子表面活性剂，即十二烷基醚-2硫酸钠，其已知可溶解脂质体，从而显示MLV-DPCs在清洁组合物中的稳定性。
图11是用稳定量(1.25%)的SURFAGENE S30处理后的MLV-DPCs，即将1ml5%含水SURFAGENE S30加到3ml MLV-DPCs(以下简称“处理过的MLV-DPCs”)后，MLV-DPCs的功率放大倍数为400(400X)的可见光显微照片。图11中的亮点代表含有被截留染料的脂质体泡。本文所包括的显微照片是在超过1分钟的一段时间内定时曝光以捕获足以在彩色胶片上重合的光而成像，由于在曝光期间脂质体的运动，故观察到一些模糊不清的斑点。
实施例22的清洁组合物是通过将1.67份(体积)处理过的MLV-DPCs边搅拌边加到12.5份SURFAGENE S30(十二烷基醚-3磺基琥珀酸二钠)中，然后加入20份
(TEA-PEG-3可卡酰胺硫酸盐)而制得的。该清洁组合物在室温下老化8天，如图11所述，拍摄如图12所示的400X可见光显微照片。图12清楚地显示了含染料泡的存在，因此脂质体在该组合物中，在这段时间内是稳定的。
在实施例22-24中，不再向制剂中加水并使用含有蔗糖的MLV-DPCs(如前所述)以获得高粘度的组合物，这样可在照片上更好地显示脂质体的存在，这是因为要获得放大400倍的显微照片需要较长的曝光时间。实施例22-24的制剂也可用不含蔗糖的MLVs制备。每种这样的制剂当用去离子水稀释至100ml体积时显示出脂质体。然而，脂质体在这样的含水清洁组合物中趋于移动从而在一种程度上随着定时曝光使400倍放大率的显微照片呈现模糊不清。
按照与实施例22相同的方法(加料顺序如下)制备实施例23的清洁组合物，配方为(a)1.67份(体积)处理过的MLV-DPCs，(b)10份SURFAGENE S30(十二烷基醚-3磺基琥珀酸二钠)，(c)17.5份
(TEA-PEG-3可卡酰胺硫酸盐)，和(d)3份EMPILAN CDE(得自Albright & Wilson Ltd.的可卡酰胺DEA，有效含量为100%)。图13是在室温下6天后实施例23的400X可见光显微照片，显示出与图12相同结果并证实泡状物存在于实施例23中。
按照与实施例22相同的方法制备实例24的清洁组合物(加料按所列顺序)但加料配方如下(a)1.67份(体积)处理过的MLV-DPCs，(b)22.5份SURFAGENE S30(十二烷基醚-3磺基琥珀酸二钠)，(c)11.11份以28%有效含量溶液形式加入的十二烷基醚-2硫酸钠，和(d)6.67份REWOTEIN CPT(TEA-COCO-水解动物蛋白，得自Rewo Chemische Werke G.m.b.H，有效含量为25%)。图14是在室温下6天后实施例24的400X可见光显微照片，显示出图12相同结果。虽然图14由于所用的曝光时间而稍微模糊不清，但它证实了泡状物存在于实施例24中，尽管有阴离子溶解表面活性剂存在。
实施例25在这个对比实例中，试验了被推荐用于温和洗发剂的商品表面活性剂混合物对MLV-DPCs的作用。在1990年3月8日公开的Wallach的专利合作条约国际公开号WO90/01921(1990年7月17日授权的4，942，038号美国专利是母申请)中，使用少片层类脂泡包封湿润剂以加到洗发剂或护发膏中。Wallach的实施例2和3讲授了基于第10份商品表面活性剂混合物(得自Miramol，Inc.of Dayton，NJ，商品名为“MS-1)有1份两性表面活性剂(Cocamidopropyl hydroxysultaine的洗发剂，制造商报道MS-1由19.4%PEG-80脱水山梨醇月桂酸盐，17.2%十三烷基酸硫酸钠(70%)，5.0%PEG-150二硬脂酸盐，5.2%Cocamidopropyl hydrozysultaine，10.6%lauramphodiacetate，2.0%十二烷基醚-3羧酸钠，0.1%Quaternium15，和40.5%水组成。十三烷基醚硫酸钠是一种已知可溶解脂质体的阴离子表面活性剂。Wallach讲授了含湿润剂的少片层泡状物在洗发剂中仍是稳定的。
在该实施例中，于室温下将20μl含有染料的MLV-DPCs加到2ml MS-1表面活性剂混合物中。溶液立即变成亮黄色并且荧光强度急剧增加。这表明脂质体已被溶解，从而释放出包被在MLV-DPCs中的染料。在放大400倍的显微镜下观察证实了基本上无脂质体存在。
实施例26在这个实施例中，利用放射性同位素示踪法检测了按本发明的方法处理并用于洗面清洁液的脂质体对皮肤的实质性作用。
将25mg二棕榈酰磷脂酰胆碱和3mg胆甾醇在氯仿中混合制得脂质体水悬液。将示踪量的氘化(H3)二棕榈酰磷脂酰胆碱和C14-胆甾醇加到氯仿溶液中，然后蒸发混合物到干。在含有干燥混合物的烧瓶中轻轻回荡3ml等渗含水TRIS缓冲溶液(pH7.4)生成脂质体。据信是通过轻轻回荡而生成的大脂质体在最小量冷却条件下，用探测近程声电定位器以脉冲方式进行15分钟声处理。预计应产生SUVs，但由于脂质体悬浮液的放射性和泡状物尺寸小不能证实这一点。将1ml含水SURFAGENE S30加到3ml含有示踪物的脂质体悬浮液中处理该悬浮液以得到“脂质体悬浮液A”。
实验使用两种熔液，一种是通过在室温下，将1ml脂质体悬浮液A与1ml缓冲液混合而制成的“对照组合物”。
另一种溶液(试验组合物)是通过在室温下，将1ml脂质体悬浮液A与1ml组成如下的表面活性剂溶液混合而制成的(a)25份SURFAGENE S30，(b)13.33份REWOTEINRCPK和(c)足够获得100份(体积)表面活性剂溶液的去离子水。
将1ml对照组合物施用于30cm2的死人皮肤上并摩擦1分钟。将1ml试验组合物施用于死人皮肤的没的30cm2区域并摩擦1分钟。从每一区域的皮肤上除去溶液并在组合物施用于皮肤后6，16和32分钟时于皮肤上打下25mm直径的圆形。将每片25mm圆形皮肤用水连续漂洗三次，每次15秒钟(即共漂洗45秒钟)。移去6mm直径的皮肤圆片用于切片并在60℃下将余者溶于1ml SOLUENE350(溶解组织用的碱性溶液，得自Packard Instrument Company of Dowmers Grove，IL)2小时。用得自Packard的INSTA-GEL作为闪烁剂并用乙酸控制样品的化学发光，用闪烁计数器测定溶解组织的放射性。由于难于进行6mm皮肤圆片的活组织检查，故认为得自6mm皮肤圆片的数据(目的在于测定脂质体悬浮液的穿透度)是非决定性的。
对由25mm圆形皮肤制得的溶液进行闪烁计数，得到下列数据
基于脂质体存在于每种组合物中这一假设，以上数据表明随着时间的流逝，结合到皮肤中的放射性量增加。对于对照组合物的32分钟点，H3/C14比值变化大表明脂质体结构的破坏，因为若氘化(H3)二棕榈酰磷脂酰胆碱和C14-胆甾醇仍彼此缔合，即脂质体仍是稳定的，则比值应保持相对恒定。试验组合物的H3/C14比值基本上保持不变，并有迹象表明尽管存在试验组合物有表面活性剂并被漂洗掉这一事实，但脂质体还是被释放皮肤中。
实施例27在这个实施例中，制备了Oleniacz的3，957，971号美国专利实施例15的洗发香波以测定洗发香波是否有脂质体存在。Oleniacz讲授了载有湿润剂的含脂质体香波，除含有已知可溶解脂质体的阴离子表面活性剂十二烷基硫酸三乙醇铵之外还含有氧胺化表面活性剂。Oleniacz的实施例15讲授了“在室温下仅仅将四种组分混合起来，维持pH在5～6之间，直到固体组分已溶解即可制得洗发香波……”因此，与本发明不同，Oleniacz未意识到若想要用一种表面活性剂稳定脂质体，混合的顺序可能是很关键的，他也没认识到某些表面活性剂可以本发明人所发现的方式稳定脂质体悬浮液。
按照oleniacz专利实施例1的描述，由蛋卵磷脂，磷酸三十二烷基酯和胆甾醇以7∶2∶1的摩尔比溶于氯仿和最少量甲醇中的混合物制得脂质体。将膜组分干燥成薄膜。用0.135摩尔含水焦谷氨酸钠和0.01摩尔含水5(6)-羧基荧光素的溶液水化薄膜以得到0.145摩尔浓度的添加剂，由此生成脂质体。加入添加剂有助于通过上述方法显现任何脂质体的存在和完整性。制备后，将脂质体悬浮液置于5℃冰箱中过夜。所得脂质体悬浮液的pH约为7.0，未尝试将其调至pH5-6，因为在较低pH值时，脂质体不太稳定且染料不易溶解。
次日，将脂质体悬浮液置于透析膜中5小时，在此期间将800ml0.145摩尔的氯化钠水溶液加在透析袋周围，更换4次。需要该步骤除去染料，尽管Oleniacz的实施例5阐述了不用透析脂质体悬浮液。最后，虽然未截留的染料没有完全除去，但终止透析过程，按Oleniacz的实施例1操作，同时仍尽可能多地从外水相中除去染料。脂质体悬浮液在50ml焦谷氨酸钠水溶液中含有0.0602g脂质体材料的固体组分(0.12%重量/体积)。
Oleniacz所述的显微镜方法是交叉偏振光。用这个方法，在400倍放大率时，在从透析袋中移出的悬浮液中清楚地观察到脂质体。交叉偏振光只能显示具有有序分子结构的物体，例如片状双层结构。脂质体在暗背景衬托下以亮圆点出现。作为对照，在加入脂质体悬浮液之前拍摄下述制剂的400X显微照片，因为通常见于乳液的其它类型的分子结构易于看上去与脂质体完全相同。
由于Oleniacz未规定加料的具体顺序，所以用不同的加料顺序制备了两种制剂。第一种加料顺序(“洗发香波1”)是按实施例15所示的顺序加入以下成分20%的SIPON
LT-6(40%活性十二烷基硫酸三乙醇铵，加拿大Alcolac，Ltd of Quebec.产品);20%的95%乙醇;5%的
C/12(50%活性双(2-羟乙基)可卡胺氧化物，AKZO，Chemical Division of Chicago，IL);和55%如上制得的脂质体水悬液。“洗发香波2”是通过将SIPONRLT-6加到AROMOXRC/12中并将乙醇单独加到脂质体悬浮液中而制成的。然后将表面活性剂加到乙醇/脂质体悬浮液中。
本发明的清洁剂组合物(“清洁剂1”)是通过将45%含有25%SURFAGENE S30和13.33%REWOTEIE CPK的水溶液加到55%如上制得的脂质体悬浮液中而制成的。
在400X放大率下用交叉偏振可见光显微镜对上述组合物的观察，结果是在脂质体悬浮液和清洁剂1中脂质体的结构都很多且清晰可见。对洗发香波1和2的观察，结果每个制剂仅显示出很少的亮点，这可能是制剂中有或没有脂质体，但每种制剂中的亮点数比在脂质体悬浮液和清洁剂1中所看到的少得多。在加入乙醇后，但没有其它表面活性剂，对脂质体悬浮液的显微照片观察结果是存在很小的亮点，这可能代表的是结晶物。在加入脂质体悬浮液之前分别对洗发香波1和2组分以及清洁剂1水溶液进行显微镜观察作为对照。未观察到用脂质体悬浮液所见类型的亮点。因为液晶物在交叉偏振光下可能呈现为亮点且不含脂质体的乳液也可能含有可能被误认为存在脂质体这样的物质，所以对照物是必不可少的。
权利要求
1.一种稳定悬浮于含水组合物中的脂质体以抵抗阴离子表面活性剂的溶解作用的方法，其特征在于将约占组合物总重量0.1%-40%(重量)的至少一种表面活性剂加到含有约占组合物总体积0.1%-50%(体积)的脂质体的含水组合物中，所述至少一种表面活性剂选自磺基琥珀酸脂肪族烷基酯，其中脂肪族烷基含有8-22个碳原子；脂肪族酰氨基聚乙二醇醚硫酸盐，其中脂肪族酰基含有8-22个碳原子；脂肪族烷基胺氧化物，其中脂肪族烷基含有7-26个碳原子；脂肪族烷基磷酸酯，其中脂肪族烷基含有8-22个碳原子；和N-酰基氨基酯盐或重均分子量约为2，500道尔顿的水解蛋白N-酰基衍生物的盐，其中酰基部分衍生于每分子具有8-22个碳原子的羧酸，该表面活性剂的存在量应能稳定脂质体以抵抗阴离子表面活性剂的溶解作用。
2.权利要求1所述的方法，其中表面活性剂选自下列表面活性剂至少一种(j)N-酰基氨基酸盐或重均分子量约为2，500道尔顿的水解蛋白N-酰基衍生物的盐，其中酰基部分衍生于每分子具有8-22个碳原子的羧酸其中R1是具有8-22个碳原子的烷基，R2是具有4-16个碳原子的烷基，R3是具有8-18个碳原子的烷基，R4是具有1-4个碳原子的烷基或-CfH2fOH，R5是具有7-26个碳原子的烷基，x是阴离子，Z是-H或X，a是0-8，b是1-4，c是1-6，d是1-5，e是1-2之间的平均值，f是2或3。
3.权利要求1所述的方法，其中脂质体是由至少一种磷脂或非离子两亲化合物形成的。
4.一种制备含有脂质体和可溶解脂质体的阴离子表面活性剂的清洁剂组合物的方法，该方法包括以下步骤(Ⅰ)制备一种稳定的脂质体水悬液，其特特在于将约占稳定的脂质体水悬液总重量0.1%-4%(重量)的至少一种表面活性剂加到含有约占含水脂质体组合物总体积0.1%-50%(体积)的脂质体的水悬液中，所述至少一种表面活性剂选自磺基琥珀酸脂肪族烷基酯，其中脂肪族烷基含有8-22个碳原子;脂肪族酰氨基聚乙二醇醚硫酸盐，其中脂肪族酰基含有8-22个碳原子;脂肪族烷基胺氧化物，其中脂肪族烷基含有7-26个碳原子;脂肪族烷基磷酸酯，其中脂肪族烷基含有8-22个碳原子;和N-酰基氨基酸盐或重均分子量约为2，500道尔顿的水解蛋白N-酰基衍生物的盐，其中酰基部分衍生于每分子具有8-22个碳原子的羧酸，脂质体与表面活性剂之比为不大于30份(体积)的脂质体比1份(体积)表面活性剂;和(Ⅱ)将约占洗涤剂组合物总重量0.1-35%的至少一种已知可溶解脂质体的阴离子表面活性剂加到步骤(Ⅰ)的稳定的脂质体水悬液中以形成含有脂质体的含水清洁剂组合物。
5.权利要求4所述的方法，其中步骤(Ⅰ)的表面活性剂是选自下列表面活性剂的至少一种(g)
(j)N-酰基氨基酸盐或重均分子量约为2，500道尔顿的水解蛋白N-酰基衍生物的盐，其中酰基部分衍生于每分子具有8-22个碳原子的羧酸，其中R1是具有8-22个碳原子的烷基，R2是具有4-16个碳原子的烷基，R3是具有8-18个碳原子的烷基，R4是具有1-4个碳原子的烷基或-CfH2fOH，R5是具有7-26个碳原子的烷基，x是阴离子，Z是-H或X，a是0-8，b是1-4，c是1-6，d是1-5，e是1-2之间的平均值，f是2或3。
6.权利要求4所述的方法，其中在步骤(Ⅱ)中所加的阴离子表面活性剂选自至少一种通式为R6(OCH2CH2)gQ的阴离子表面活性剂，其中R6选自8-18个碳原子的烷基，苯基，和6-24个碳原子的烷芳基，g是0-10之间的平均值，Q选自-C(O)OZ，-OSO3Z和-SO3Z。
7.一种按权利要求1的方法所制成的稳定的含水脂质体组合物。
8.一种按权利要求3的方法制成的含有脂质体的稳定的清洁组合物。
9.权利要求1所述的方法，其中表面活性剂的用量约为2%-10%。
10.权利要求3所述的方法，其中在步骤(Ⅰ)中所用表面活性剂的用量约为0.1-35%，在步骤(Ⅱ)中所用表面活性剂有用量约为5%-15%(重量)。
全文摘要
本发明涉及使含水组合物中所含脂质体稳定以抵抗阴离子表面活性剂的溶解作用的方法而不是已知破坏和溶解这样的脂质体的方法，其特征在于使用某些表面活性剂作为稳定剂，本发明还涉及由此得到的稳定的组合物以及制备含有这种稳定的脂质体和阴离子表面活性剂的清洁剂组合物的方法和组合物本身，这些组合物可用作浴液和香波。
文档编号A61Q5/02GK1059658SQ9110868
公开日1992年3月25日 申请日期1991年9月6日 优先权日1990年9月6日
发明者杰拉尔德·L·哈特, 安加姆·F·阿莫德, 厄休拉·K·查拉夫 申请人:S.C.约翰逊和逊公司