专利名称：一种用芽孢杆菌降解原油的方法
技术领域：
本发明涉及原油降解，具体涉及一种用芽孢杆菌降解原油的方法。
背景技术：
随着国际经贸的发展，原油的需求和运输量越来越大，同时原油的泄漏和污染事件 也越来越多，原油污染给环境和生态造成具大的伤害，清除原油污染要花费较大的成本 和较长的时间，尤其是海洋中清除原油污染困难重重。各国科学家积极研究用各种方法 (化学法、生物法)等清除原油污染，化学法会造成二次污染，目前受普遍关注和经济 的方法为用微生物降解原油，如中国专利申请号200710060178.5，名称为一种利用 微生物对易凝高粘原油降解后进行管道输送的方法，就公开了用假单胞菌、芽孢 杆菌和棒杆菌按比例配成的原油降解菌液，由原油降解菌液、营养液和重质原油 混合，在35 75'C温度条件下，3 600rpm搅拌速度下，搅拌降解70 220小时 来降低重质原油的粘度。中国专利申请号200810026548.8，名称为一种修复水体 石油污染的方法，就公开了用节杆菌、邻单胞菌、假单胞菌、芽孢杆菌和黄单胞 菌的其中两种按比例配的2ml原油降解菌液和0~2ml表面活性剂一起来降解质 量浓度为lg/L的原油。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种操作方便，成本较低，降解效率较好的用芽 孢杆菌降解原油的方法。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为 一种用芽孢杆菌降解原油的方 法，按80 150ml原油培养液接种0.8 1.5ml芽孢杆菌菌液的比例配制降解液， 将降解液在30 37'C温度，150 200r/min的摇动条件下，降解10 30天，所述 芽孢杆菌菌液的浓度为107 109个/ 11，所述原油培养液的质量浓度为0.5 5%。
按100ml原油培养液接种lml芽孢杆菌菌液的比例配制降解液，这一比例芽 孢杆菌对原油的降解20天左右就可以完成。
降解时间为20天， 一般经过20天原油基本达到了降解。
所述芽孢杆菌菌液的浓度为107 108个/1111。
所述芽孢杆菌菌液为地衣芽孢杆菌(wle-5) 液，wle-5对原油有较好的降 解效果。所述芽孢杆菌菌液为枯草芽孢杆菌(wle-8)菌液，wle-8对原油的降解效果 也较好。
也可以用短小芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌等菌液，若用辐照等条件处理后的芽 孢杆菌对原油有更好的降解效果。
与现有技术相比，本发明的优点在于一种用芽孢杆菌降解原油的方法，按80 150ml原油培养液接种0.8 1.5ml芽孢杆菌菌液的比例配制降解液，将降解液在 30 37'C温度，150 200r/min的摇动条件下，降解10 30天，芽孢杆菌菌液的浓 度为107 109个/1111，原油培养液的质量浓度为0.5 5%;本发明是利用单一种类的 芽孢杆菌，省去了目前要由两种及以上菌种配制降解菌液的麻烦，操作更加方便， 本发明也不需要另外配制营养液，也不用附加表面活性剂，降解成本可以更低，本发明 对原油降解的效果较好，20天左右基本可以将原油完全降解。因此本发明是一种操作方 便，成本较低，降解效率较好的用芽孢杆菌降解原油的方法。
图1为空白对照例、有菌对照例、实施例1、实施例2和实施例3的近红外光谱图 对照图；其中a为空白对照例、b为有菌对照例、c实施例l、 d实施例2、 e实施例3;
图2为空白对照例和实施例1的中红外光谱图对照图；其中a为空白对照例、b 为实施例l。
具体实施例方式
以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。 空白对照例
将质量浓度(是指原油质量含量)为2%左右的100ml原油培养液在30 37°C 温度，180r/min的摇动条件下，降解10天，用红外光谱仪检测降解10天的降解 液，得到近红外光谱图如图1中所示的a，中红外光谱图如图2中所示的a。
有菌对照例
将浓度为107 108个/1111的lml地衣芽孢杆菌菌液接种到质量浓度为2M左右 的100ml原油培养液中配成降解液，将降解液在30 37'C温度，180r/min的摇动 条件下，降解5天，用红外光谱仪检测有菌降解5天的降解液，得到近红外光谱 图如图1中所示的b。
实施例1
将浓度为107 108个/1111的lml地衣芽孢杆菌菌液接种到质量浓度为2%左右 的100ml原油培养液中配成降解液，将降解液在30 37'C温度，180r/min的摇动 条件下，降解10天，用红外光谱仪检测降解IO天的降解液，得到近红外光谱图 如图l中所示的c，中红外光谱图如图2中所示的b。
4实施例2
将浓度为107 108个/1111的lml地衣芽孢杆菌菌液接种到质量浓度为2。/。左右 的100ml原油培养液中配成降解液，将降解液在30 37'C温度，180r/min的摇动 条件下，降解15天，用红外光谱仪检测降解15天的降解液，得到近红外光谱图 如图l中所示的d。
实施例3
将浓度为107 108个/1111的lml地衣芽孢杆菌菌液接种到质量浓度为2%左右 的lOOml原油培养液中配成降解液，将降解液在30 37'C温度，180r/min的摇动 条件下，降解20天，用红外光谱仪检测降解20天的降解液，得到近红外光谱图 如图l中所示的e。
实施例4
将浓度为107 108个/1111的lml枯草芽孢杆菌菌液接种到质量浓度为1%左右 的100ml原油培养液中配成降解液，将降解液在30 37'C温度，180r/min的摇动 条件下，降解15天。
实施例5
将浓度为l(^ 10S个/ml的lml枯草芽孢杆菌菌液接种到质量浓度为3%左右 的100ml原油培养液中配成降解液，将降解液在30 37'C温度，180r/min的摇动 条件下，降解20天。
实施例6
将浓度为10S l(^个/ml的lml枯草芽孢杆菌菌液接种到质量浓度为5%左右 的100ml原油培养液中配成降解液，将降解液在30 37'C温度，180r/min的摇动 条件下，降解30天。
近红外的4000 cnf1 4500 cm"谱区为原油指纹区；原油在中红外区有许多 谱带归属，中红外原油特征谱峰主要有3簇，第一簇峰(2700cm" 3000cm") 谱带归属为芳烃化合物环的C-H键；第二簇峰U300cm" 1700cnT1)是原油的 C-O所在；第三簇峰(600cm-1 ~700cm-1)的谱带为链烯烃和碳数^7的值链烷 烃亚甲基。
从图1可以看出空白对照例的特征吸收峰明显，有菌对照例的特征吸收峰虽有 縮小，但吸收峰较大，实施例1和实施例2的特征吸收峰较小，尤其小峰已消失， 说明原油链状垸烃中直链和支链烷烃C-H键断裂，原油被降解；实施例3几乎检 测不到任何原油特征吸收峰信号；说明降解时间至少以10天以上为好，以后就 让其自然条件下降解，降解15天消除了大部分原油的污染，降解20天基本消除 了原油的污染。
从图2可以看出实施例1与空白对照例的中红外光谱有显著的不同第三簇峰基本都消失，说明原油的烯烃末端甲基和亚甲基被氧化；第二簇峰信号减弱， 但未完全消失，说明原油的C-O键依旧存在；第一簇峰的肩峰(2960cnT1)消失， 主峰不明显(2920cnT1)。
上述实施例中wle-5和wle-8的接种量与原油培养液比可以为0.8ml: 80ml 或0.8ml: 150ml或1.5ml: 80ml或1.5ml: 150ml等。原油培养液的质量浓度可 以为4%或0.5%等。
上述实施例中地衣芽孢杆菌菌液的浓度也可以为108 109个/1111。
权利要求
1、一种用芽孢杆菌降解原油的方法，其特征在于按80～150ml原油培养液接种0.8～1.5ml芽孢杆菌菌液的比例配制降解液，将降解液在30～37℃温度，150～200r/min的摇动条件下，降解10～30天，所述芽孢杆菌菌液的浓度为107～109个/ml，所述原油培养液的质量浓度为0.5～5％。
2、 如权利要求l所述的一种用芽孢杆菌降解原油的方法，其特征在于按100ml 原油培养液接种lml芽孢杆菌菌液的比例配制降解液。
3、 如权利要求l所述的一种用芽孢杆菌降解原油的方法，其特征在于降解时间 为20天。
4、 如权利要求l所述的一种用芽孢杆菌降解原油的方法，其特征在于所述芽孢 杆菌菌液的浓度为107 108个/1111。
5、 如权利要求1所述的一种用芽孢杆菌降解原油的方法，其特征在于所述芽 孢杆菌菌液为地衣芽孢杆菌菌液。
6、 如权利要求1所述的一种用芽孢杆菌降解原油的方法，其特征在于所述芽 孢杆菌菌液为枯草芽孢杆菌菌液。
全文摘要
本发明分开了一种用芽孢杆菌降解原油的方法，按80～150ml原油培养液接种0.8～1.5ml芽孢杆菌菌液的比例配制降解液，将降解液在30～37℃温度，150～200r/min的摇动条件下，降解10～30天，芽孢杆菌菌液的浓度为10<sup>7</sup>～10<sup>9</sup>个/ml，原油培养液的质量浓度为0.5～5％；本发明是利用单一种类的芽孢杆菌，省去了目前要由两种及以上菌种配制降解菌液的麻烦，操作更加方便，本发明也不需要另外配制营养液，也不用附加表面活性剂，降解成本可以更低，本发明对原油降解的效果较好，20天左右基本可以将原油完全降解。因此本发明是一种操作方便，成本较低，降解效率较好的用芽孢杆菌降解原油的方法。
文档编号A62D3/02GK101607120SQ20091010078
公开日2009年12月23日 申请日期2009年7月22日 优先权日2009年7月22日
发明者晔 李, 李妍妍, 苏秀榕 申请人:宁波大学