专利名称：建立糖尿病视网膜脉络膜病变动物模型的方法
技术领域：
本发明涉及一种动物模型的建立方法，特别是，一种建立糖尿病视网膜脉络膜病变动物模型的方法。
背景技术：
目前，糖尿病性视网膜病变(Diabetic retinopathy，DR)是糖尿病微血管并发症中最严重的病变之一，可导致双眼不可逆性盲，也是目前四大致盲眼病之一。随着吲哚青绿脉络膜造影(ICGA)和眼底荧光造影(FFA)的开展，人们发现糖尿病视网膜病变发生的同时脉络膜也有相应的改变，由此提出糖尿病的视网膜脉络膜病变可能是同时存在的。20世纪80年代早期Saracco JB等提出了糖尿病脉络膜病变的概念(Diabetic choroidopathy，DC)。但迄今为止，糖尿病脉络膜新生血管的发生机制及影响因素的研究甚少。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种建立糖尿病视网膜脉络膜病变动物模型的方法，及脉络膜病变的具体成模时间。
为实现上述目的，本发明由以下步骤组成先配制链脲佐菌素溶液，然后将该溶液注射到大鼠腹腔内，建立糖尿病大鼠模型；最后将该模型喂养60天即得。
具体地说，本发明采用以下步骤将链脲佐菌素(Streptoztocin，STZ)溶于0.05mol/L柠檬酸缓冲液(pH4.5)，配置成浓度1.25wt％的STZ溶液，按40～60mg/kg体重的注射量向封闭群雄性wistar大鼠一次性腹腔内注射STZ溶液，注射后24-48h检测定性尿糖和血糖，血糖浓度不低于16.65mmol/L并且尿糖达3+--4+，即建立糖尿病大鼠模型；再将该模型喂养60天后即得糖尿病大鼠视网膜脉络膜病变模型。
本发明具有制作方便简单，成本相对便宜，重复性好的优点，模型成功可靠。所得的动物模型可用于对视网膜脉络膜病变的科学研究，筛选治疗视网膜脉络膜病变的药物。
图1为模型大鼠视网膜毛细血管的电镜图。
图2为模型大鼠视网膜毛细血管的另一电镜图。
图3为模型大鼠脉络膜血管的电镜图。
图4为模型大鼠脉络膜血管的另一电镜图。
图5为模型大鼠视网膜脉络膜免疫组织化学染色图。
图6为60天模型大鼠视网膜脉络膜免疫组织化学染色图。
具体实施例方式
实施例1将链脲佐菌素(Streptoztocin，STZ)溶于0.05mol/L柠檬酸缓冲液(pH4.5)，配置成浓度1.25wt％的STZ溶液，按50mg/kg体重的注射量向封闭群雄性wistar大鼠一次性腹腔内注射STZ溶液，注射后25h检测定性尿糖和血糖，血糖浓度达16.65mmol/L并且尿糖达3+--4+，即建立糖尿病大鼠模型；再将该模型喂养60天即得糖尿病大鼠视网膜脉络膜病变模型。
本动物模型眼球制备电子显微镜标本的制作方法立即取被处死大鼠视网膜放入3％戊二醛固定液，固定、脱水、环氧树脂EPoN812浸透包埋、制备超薄切片，常规醋酸双氧油和枸橼酸钠铅染色。在PhilipsEM208s透射电子显微镜下下观察全层视网膜，脉络膜超微结构的改变。
如图1所示，是模型大鼠视网膜毛细血管电镜图。其管腔大，内皮细胞、周细胞，基底膜完整，电子密度均匀(×5000)。
如图2所示，糖尿病大鼠两月视网膜毛细血管，内皮细胞及周细胞核变形，基底膜增厚显著，电子密度增加，内皮细胞向管腔突出严重，管腔变形、狭窄，几近闭塞，即出现了典型的新生血管改变(×12000)。
如图3所示，是模型大鼠脉络膜血管电镜图。其管腔均匀，内皮细胞、周细胞基底膜完整(×5000)。
如图4所示，糖尿病大鼠三月脉络膜毛细血管，内皮细胞及周细胞核变形，内皮细胞向管腔突出严重，管腔变形、狭窄，甚至几近闭塞(×10000)。
实施例2将链脲佐菌素(Streptoztocin，STZ)溶于0.05mol/L柠檬酸缓冲液(pH4.5)，配置成浓度1.25wt％的STZ溶液，按40mg/kg体重的注射量向封闭群雄性wistar大鼠一次性腹腔内注射STZ溶液，注射后36h检测定性尿糖和血糖，血糖浓度达16.85mmol/L并且尿糖达3+--4+，即建立糖尿病大鼠模型；再将该模型喂养60天即得糖尿病大鼠视网膜脉络膜病变模型。
本动物模型眼球制备石蜡切片的制作方法立即取被处死大鼠眼球，固定于Verhoeff氏液中，48h后常规石蜡包埋。连续6μm切片用于HE染色及免疫组织化学染色。
如图5所示，模型大鼠视网膜脉络膜免疫组织化学染色图(×400)，结构完整清晰。
如图6所示，60天模型大鼠视网膜脉络膜免疫组织化学染色图(×400)，脉络膜病变清晰可见。
实施例3将链脲佐菌素(Streptoztocin，STZ)溶于0.05mol/L柠檬酸缓冲液(pH4.5)，配置成浓度1.25wt％的STZ溶液，按60mg/kg体重的注射量向封闭群雄性wistar大鼠一次性腹腔内注射STZ溶液，注射后48h检测定性尿糖和血糖，血糖浓度达17.05mmol/L并且尿糖达3+--4+，即建立糖尿病大鼠模型；再将该模型喂养60天即得糖尿病大鼠视网膜脉络膜病变模型。
以上对本发明所提供的建立糖尿病视网膜脉络膜病变动物模型的方法进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式
及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。
权利要求
1.一种建立糖尿病视网膜脉络膜病变动物模型的方法，其特征在于先配制链脲佐菌素溶液，然后将该溶液注射到大鼠腹腔内，建立糖尿病大鼠模型；将该模型喂养至60天后，建立脉络膜病变模型。
2.根据权利要求1所述的建立糖尿病视网膜脉络膜病变动物模型的方法，其特征在于将链脲佐菌素溶于0.05mol/L柠檬酸缓冲液，配置成浓度1.25wt％的链脲佐菌素溶液，按40～60mg/kg体重的注射量向封闭群雄性wistar大鼠一次性腹腔内注射链脲佐菌素溶液，注射后24-48h检测定性尿糖和血糖，血糖浓度不低于16.65mmol/L并且尿糖达3+--4+，即建立糖尿病大鼠模型；再将该模型喂养60天后即得糖尿病大鼠视网膜脉络膜病变模型。
全文摘要
本发明公开了一种建立糖尿病视网膜脉络膜病变动物模型的方法。先配制链脲佐菌素溶液，然后将该溶液注射到大鼠腹腔内，建立糖尿病大鼠模型；最后将该模型喂养60天即得。本发明具有制作方便简单，成本相对便宜，重复性好的优点，模型成功可靠。本发明首次通过视网膜、脉络膜超微结构改变及免疫组织化学方法的检测，证实大鼠糖尿病视网膜脉络膜病变模型已成功建立。所得的动物模型可用于对视网膜脉络膜病变的科学研究，筛选治疗视网膜脉络膜病变的药物。
文档编号G09B23/36GK1804945SQ200610001660
公开日2006年7月19日 申请日期2006年1月20日 优先权日2006年1月20日
发明者周希瑗, 李琳, 乔刚 申请人:周希瑗