专利名称：微米薄纸在线虫永久玻片制作中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种微米薄纸在线虫永久玻片制作中盼应用，属标本制作技术 领域。
背景技术：
植物病原物玻片标本是植物病理学教学与科研中重要的实验材料。植物病 原物玻片标本分永久玻片和半永久玻片标本等7乂久玻片标本可永久保存，永久 使用。半7乂久玻片标本保存期短，使用年限3年左右。^线虫永久玻片标本制 作方法，在专著(植病研究方法)及教科书(实验指导书)中均有详细介绍。 长期以来,线虫永久玻片的制作一直采用制蜡环和放置支撑物的传统方法。tt 实际操作中，传统方法里的制蜡环，放置支撑物，控制目标视野范围三个步骤 难度高，又费时，往往某一小小的失误就会造成前功尽弃因此多年来线虫永久 玻片标本的制作成了许多研究者回避的问题。
经文献检索，未见与本发明相同的公开报ito
发明内容
本发明目的在于克服现有玻片标本制作方法之不足，根据目的标本的大 小，选择微米薄纸替代常规永久玻片制作中的制蜡环和放置支撑物，用于线虫 及其他病原物永久玻片的制作。
选择微米薄纸替代常规永久玻片制作中的制蜡环和支撑物，用于制作线虫 永久玻片的具体步骤如下
(l)皿载玻片与盖玻片；(2) ■ 28. 5微米厚的薄纸，用直径为15毫米圆形打孔器切取微米薄
纸片；
(3) 用直径5毫米的圆形打孔器在(2)薄纸正中打孔；
(4) 将固体石蜡置于培养皿中，放在恒温电热板上，在80'C-90'C温度下 加热至固体石蜡完全熔化，保持温度，使蜡液不凝固，不沸腾；
(5) 将打好孔的圆纸片浸于培养皿的蜡液中，充分浸透，并排其表面小
气泡；
(6) 用小镊子将充分浸透蜡液的圆纸片取出，迅速放于清洗干净的载玻 片正中位置；
(7) 将其上放有浸蜡圆纸片的载玻片放在恒温电热板上，在80'C-90'C温 度下加热，至圆纸片与载玻片完全紧密接触，两者间无气泡后取下，放于水平 台上，室温冷却；
(8〗向浸蜡圆纸片中间小圆中滴入2毫升浮载剂甘油，尽可能使其液滴 成圆形；
(9)将已脱水的线虫挑入(8)圆形液滴中，排列位置；
(10〗将(1)清洗干净的盖玻片盖于(8)浸蜡圆纟'氏片正上方，整体放于 恒温电热板上80'C-90'C加热，用挑针轻压盖玻片与载玻片紧密接触，至两者 间无气泡为止；
(ll)将(lO)中玻片取下放于水平台上室温冷却至蜡液凝固，封固盖玻 片，贴标签，制作完成。
本发明简化了常规线虫永久玻片制作中的复杂的制作程序，降低了制作难 度，大大提高了制片质量和成功率，为制作线虫永久玻片标本提供了一种操作 简便、^*低、效率髙的新方&
本发明不仅用于线虫永久玻片标本的制作，也可用于多种标本的制作。
具体实施例方式
本发明按照常规方法制备本发明不仅局限于实施例所限，也可选择微米 的薄纸替代常规永久玻片中的制蜡环和支撑物，用于多'种标本的制作
实施例1:
松材线虫永久玻片标本的制作步骤 (U清洗载玻片与盖玻片；
(2) OT 28. 5微米厚的薄纸,用直径为15亳米圆形打孔器切取微米薄纸
片；
(3;)用直径5毫米的圆形打孔器在(2)薄纸正中打孔； (4〗将固体石蜡置于培养皿中，放在恒温电热板上，在80。C-90'C温度下 加热至固体石蜡完全熔化，保持温度，使蜡液不凝固，不沸腾；
(5) 将打好孔的圆纸片浸于培养皿的蜡液中，充分浸透，并排其表面小
气泡；
(6) 用小镊子将充分浸透蜡液的圆纸片取出，迅速放于清洗干净的载玻 片正中位置；
(7) 将其上放有浸蜡圆纸片的载玻片放在恒温电热板上，在80'C-9(TC温 度下加热，至圆纸片与载玻片完全紧密接触，两者间无气泡后取下，放于水平 台上，室温冷却；
(8) 向浸蜡圆纸片中间小圆中滴入2毫升浮载剂甘油，尽可能使其液滴 成圆形；
(9) 将已脱水的松材线虫挑入(8)圆形液滴中，排列位置；
(10〗将(1)清洗干净的盖玻片盖于(8)浸蜡圆纸片正上方，整体放于 恒温电热板上80'C-90'C加热，用挑针轻压盖玻片与载玻片紧密接触，至两者 间无气泡为止；
(ii;)将(io)中玻片取下放于水平台上室温冷却至蜡液凝固，封固盖玻片，贴标签，制作完成。
实施例2:
根结线虫2龄幼虫永久玻片标本的制作步骤
(1) 清洗载玻片与盖玻片；
(2) 选用28.5微米厚的薄纸，用直径为15毫米圆形打孔器切取微米薄
纸片；
(3) 用直径5毫米的圆形打孔器在(2)薄纸正中打孔； (4i)将固体石蜡置于培养皿中，放在恒温电热板上，在80'C-90'C温度下
加热至固体石蜡完全熔化，保持温度，使蜡液不凝固，不沸腾；
(5) 将打好孔的圆纸片浸于培养皿的蜡液中，充分浸透，并排其表面小
气泡；
(6) 用小镊子将充分浸透蜡液的圆纸片取出，迅速放于清洗干净的载玻 片正中位置；
(7) 将其上放有浸蜡圆纸片的载玻片放在恒温电热板上，在80'C-9(TC温 度下加热，至圆纸片与载玻片完全紧密接触，两者间无气泡后取下，放于水平 台上，室温冷却；
(8) 向浸蜡圆纸片中间小圆中滴入2毫升浮载剂甘油，尽可能使其液滴 成圆形；
(9) 将已脱水的根结线虫挑入(8)圆形液滴中，排列位置；
(10) 将(1)清洗干净的盖玻片盖于(8)浸蜡圆纸片正上方，整体放于 恒温电热板上80'C-90'C加热，用挑针轻压盖玻片与载玻片紧密接触，至两者 间无气泡为止；
(ii;j将(io)中玻片取下放于水平台上室温冷却至蜡液凝固，封固盖玻片， !te^示签，制作完成。 实施例3:瓜果腐霉有性世代永久标本的制作步骤
(1) m载玻片与盖玻片；
(2) ■ 50微米厚的薄纸，用直径为15毫米圆形打孔器切取微米薄纸
片；
(3) 用直径5亳米的圆形打孔器在(2)薄纸正中打孔；
(4) 将固体石蜡置于培养皿中，放在恒温电热板上，在8(TC-90'C温度下 加热至固体石蜡完全熔化，保持温度，使蜡液不凝固，不沸腾；
(5) W好孔的圆纸片浸于培养皿的蜡液中，充分浸透，并排其表面小
气泡；
(6) 用小镊子将充分浸透蜡液的圆纸片取出，迅速放于清洗干净的载玻 片正中位置；
(7) 将其上放有浸蜡圆纸片的载玻片放在恒温电热板上，在8(TC-90'C温 度下加热，至圆纸片与载玻片完全紧密接触，两者间无气泡后取下，放于水平 台上，室温冷却；
(8) 向浸蜡圆纸片中间小圆中滴入2毫升浮载剂甘油，尽可能使其液滴 成圆形；
(9) 将已脱水的菌丝及卵孢子移入(8)圆形液滴中，排列位置；
(10〗将(1)清洗干净的盖玻片盖于(8)浸蜡圆纸片正上方，整体放于 恒温电热板上80'C-90'C加热，用挑针轻压盖玻片与载玻片紧密接触，至两者 间无气泡为止；
(11〗将(10)中玻片取下放于水平台上室温冷却至蜡液凝固，封固盖玻片， 贴标签，制作完成。
权利要求
1、微米薄纸在线虫永久玻片制作中的应用，其特征在于根据标本目的物的大小，选择微米薄纸替代常规永久玻片制作中的制蜡环和放置支撑物，用于线虫永久玻片的制作。
全文摘要
本发明涉及一种微米薄纸在线虫永久玻片制作中的应用，属标本制作技术领域。本发明根据标本目的物的大小，选择微米薄纸替代常规永久玻片制作中的制蜡环和放置支撑物，用于线虫永久玻片的制作。本发明简化了常规线虫永久玻片制作中的复杂制作程序，降低了制作难度，提高了制片质量和成功率，为制作线虫永久玻片标本提供了一种操作简便、成本低、效率高的新方法。本发明不仅用于线虫永久玻片标本的制作，也可用于多种标本的制作。
文档编号G09B23/36GK101305709SQ20081005852
公开日2008年11月19日 申请日期2008年6月13日 优先权日2008年6月13日
发明者喻盛甫, 姚茹瑜, 潘銮银, 扬 王, 陈志星, 马黎明 申请人:云南农业大学