一种果树专用的有机复合生物肥的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种果树专用的有机复合生物肥，其通过将粉碎的秸秆和牛粪作为固体有机物料，再添加5‰比例的具有特定腐熟功效的有机物料腐熟剂并加适量的水，与有机物料混合后，保持含水量为60％左右，自然室外温度下发酵5?10天腐熟形成初肥。再添加适当比例的各类营养元素与发酵物料混合均匀后，添加4‰比例的果树专用的促生长复合菌剂均匀混合后获得的生物肥料。本发明解决了单纯施用化肥、普通有机肥、农家肥以及纯微生物菌肥所存在的种种弊端，并充分结合了果树各个时期的生长特点及对养分的需求，注意调节其营养生长与生殖生长的矛盾，是一种尤其适用于果树生长、高效、优质的有机复合生物肥。在果树种植方面具有较好的应用前景。
【专利说明】
一种果树专用的有机复合生物肥的制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种有机复合生物肥及其制备方法，尤其适用于果树，属于农业生物 有机肥制备的技术领域。
【背景技术】
[0002] 目前我国化肥年使用量在一亿三千万吨左右，广大农民一直以来都是使用化肥， 然而长期使用化肥产生的弊端随之而来，土地板结、化学元素残留、环境污染等等一系列问 题浮出水面。化肥已经不能满足可持续发展的需要，更不能成为绿色农业的支柱，各国都在 寻找对策。生物有机肥就此而诞生，成为化肥的第二次革命。物料复合而生物有机肥是指特 定功能微生物与主要以动植物残体(如畜禽粪便、农作物秸杆等)为来源并经无害化处理、 腐熟的有机成的一类兼具微生物肥料和有机肥效应的肥料。
[0003] 而果树是指能提供可供食用的果实、种子的多年生植物及其砧木的总称。果树在 生长的各个时期所需的营养成分是存在一定差异的。生长前期需要大量的氮素，新梢生长、 花旗和幼果生长都需要大量的氮。但是这个时期需要的氮主要来源于树体的贮藏养分。因 此增加氮素的贮藏养分十分重要。进入6月下旬以后，氮素需求量减少。而从采收到休眠前， 是根系的再次生长高峰，也是氮素的重要的贮藏期，对氮素需求量又明显回升。对磷元素的 吸收，表现为生长初期迅速增加，花期达到吸收高峰，以后一直维持较高水平。树体对钾元 素的需求表现为前低、中高、后低，即花期需求量少，后期逐渐增加，到八月份果实膨大期达 到高峰，后期又逐渐下降。同时，钙、镁、硼、锌等营养元素都是果树生长过程中必须的营养 元素，都要进行适当的补充。因此，单纯施用化肥不能够满足果树生长的营养需求，需增施 生物有机肥为其持续补充养分。
[0004] 综上所述，生物有机菌肥是农业发展最有希望、最有前途的不可替代的产品。我公 司研发人员经过近几年的不懈努力，结合果树各个时期的生长特点，最终研制出一种适用 于果树的优质生物有机肥。本公司发明产品综合运用了微生物技术、化肥工业和农业技术 等最新成果，优先制备了一种高效的富含有机质、N · P · K营养元素和某些微量元素、植物 生长调节剂等物质有机结合起来，给特定工艺最终形成了以有机质为主体的营养合理、N· P · K比例适当的颗粒状营养源。该种肥料不仅具有高利用率、肥效期长的优点，而且具有改 良土壤、提高农作物品质，增强作物抗逆性，增加产量，减少污染，刺激作物生长发育等特 点，省时省工，具有良好的社会效益和经济效益。
【发明内容】
[0005] 本发明所述的果树专用的生物有机肥是指利用微生物技术，选配具有特定腐熟功 能的菌种制成菌剂，用此菌剂将固体有机物料发酵成初肥，再按适宜的比例添加各类营养 元素，再配以果树专用促生长复合菌剂所制成的肥料。本发明产品充分利用了具有腐熟功 能菌种的特性，将各类废弃的固体有机物料发酵腐熟成肥料，变废为宝，节省资源，大大减 少了环境污染;又添加果树专用的促生长菌剂，此促生长复合菌剂是经查阅大量的资料，进 行研究总结，根据实际要求选择几种针对果树有特殊功效的有益微生物，然后通过实际反 复实验，最后确定各微生物的最佳比例，保证果树各阶段的营养需求。通过各菌种之间的相 互作用，起到刺激植物生长、缓解土地板结、改良土壤生态环境、防病抗病等作用，从而达到 增产、高产的目的。本发明解决了单纯施用化肥、普通有机肥、农家肥以及纯微生物菌肥所 存在的种种弊端。
[0006] 本发明产品所选用腐熟菌剂，其采用枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis) CICC10088,米曲霉（Aspergillus niger)CICC2436,白腐菌（Phanerochaete chrysosporium)ACCC30414、里氏木霉（Trichoderma reesei )ACCC30449等具有特殊腐熟功 效的菌种，按适当的比例复合发酵而成的微生物菌剂。所选用各菌种均能够产生纤维素酶、 木质素酶、半纤维素酶、蜡质素酶、果胶酶等多种生物酶，通过中温菌和耐高温菌的协同作 用，快速将各类废弃的有机物料发酵腐熟成肥料，变废为宝，节省资源，大大减少了环境污 染。
[0007] 本发明所选用果树专用的促生长复合菌剂，其含有大量的对果树生长发育有特殊 功效的有益微生物，其采用细黄链霉菌（Streptomyces microflavus)CGMCC4.891，胶质芽 抱杆菌（Bacillus mucilaginosus)CGMCC 1. 153,褐色球形固氮菌（Azotobacter chroococcum)CGMCC 1.142,巨大芽抱杆菌（Bacillus megaterium)ACCC 10010,枯草芽抱 杆菌(Baci 1 lus subti 1 is)ACCC 01183等菌种发酵液混合后作为混合菌剂，经再次发酵而 制备的微生物复合菌剂。本发明选取各菌种是经查阅大量的文献资料，进行研究总结，根据 实际要求选择几种针对果树生长发育有特殊功效的有益微生物，然后通过实际反复实验， 最后确定各微生物的最佳比例，从而保证果树各阶段的营养需求。
[0008] 具体的本发明所述果树专用的有机复合生物肥的制备方法，该方法包括如下步 骤：
[0009] ( - )有机物料腐熟剂的制备
[0010] 将菌种数量分别达到108个/mL以上的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis) CICC10088,米曲霉（Aspergillus niger)CICC2436,白腐菌（Phanerochaete chrysosporium)ACCC30414、里氏木霉（Trichoderma reesei)ACCC30449的菌种发酵液按 1.5~2.0:0.8~1.3:0.8~1.3:0.8~1.3的体积比混合均匀后，接种于盛有复合菌剂培养 基A的发酵罐中，接种量为复合菌剂培养基A总体积的5%，30°C下培养4~7天，使发酵液中 总菌数达到1〇 8个/mL，即得到有机物料腐熟剂；
[0011] 所述复合菌剂培养基A配方为：玉米面0.5~1.5g/L、玉米秸杆粉15~17g/L、麸皮 0 · 2~0 · 4g/L、_a 饼粉0 · 2~0 · 4g/L、Vogel ' s母液4mL/100mL，pH 值6 · 0~8 · 0;
[0012] 步骤(一)的具体制备过程为：
[0013] 1.菌种活化:将所述各菌种接于斜面培养基上;枯草芽孢杆菌28~32°C，pH为7.2 ~7.4,培养时间为1~3天;米曲霉培养温度25~28°C，pH为6.0~6.5,培养时间为4~7天； 白腐菌培养温度25~28°C，培养时间为4~7天；
[0014] 2.-级菌种培养:将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的50mL锥形瓶中，培养 基pH为6.0~8.0，锥形瓶放入摇床振荡培养，温度为30°C，振荡24~48h;采用血球计数板计 数，菌液中菌种数量分别达到1〇 8个/mL;
[0015] 3.二级发酵:将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的lOOOmL锥形瓶中，培养基 pH 6.0~8.0，放入摇床振荡，温度为30°C，振荡48~72h;从而获得菌种数量分别达到108 个/mL 以上的枯草芽抱杆菌(Bacillus subtil is )CICC10088,米曲霉(Aspergillus niger) CICC2436，白腐菌（Phanerochaete chrysosporium)ACCC30414、里氏木霉（Trichoderma reesei)ACCC30449〇
[0016]所述斜面培养基配方为：
[0017] 1.枯草芽孢杆菌采用的斜面培养基配方为:牛肉浸液1. 〇L，蛋白胨10g，NaC15.0g， 琼脂20.0-20.5g，pH7.2-7.4，牛肉浸液的制备：瘦牛肉洗净，切碎，称取550g浸泡于1375mL 水中，浸泡一夜，过滤，过滤分装后〇.6kgf/cm2 40min备用。
[0018] 2 .米曲霉采用的斜面培养基配方为：50Be麦芽汁琼脂，50Be麦芽汁1.0L，琼脂 15.0g，自然pH。
[0019] 3.白腐菌的斜面培养基配方为:PDA培养基，取去皮的马铃薯200克，切成小块，加 水1000毫升煮沸30分钟滤去马铃薯块，将滤液补足至1000毫升，加葡萄糖20克，琼脂15克， 溶化后分装，15镑灭菌30分钟；自然pH。
[0020] 4.里氏木霉的斜面培养基配方:同白腐菌。
[0021 ]所述液体培养基为斜面培养基不加琼脂即可。
[0022](二)混拌、发酵
[0023]将步骤(一）制备好的有机物料腐熟剂按发酵有机物料总质量的5%。比例混合，再 兑入适量的水，使总水分控制在60 %左右，在发酵池经过5-10天发酵，即制得初肥；
[0024] 所述发酵具体为:将混合搅拌均匀的发酵有机物料放进发酵设施，压实填满排去 空气，发酵池顶部覆盖一层塑料薄膜，上盖密封发酵、适时翻垛，翻堆时补充水分，将总水分 控制在60%左右，原料手握成团，指缝有水但不滴，而松手即散为好。
[0025] 在优选的技术方案中，步骤(二）的发酵时间是指:一般夏天4-5天，春秋6-7天，冬 季10天。
[0026] (三)深加工
[0027] 将初肥进行粉碎、烘干，按初肥质量百分比，具体添加如下营养元素：
[0028] 氮1 · 0-3 · 0 %、磷0 · 5-2 · 5%、钾 1 · 0-3 · 0% ;钙0 · 2-0 · 5 %、镁0 · 2-0 · 5 % ;硼0 · 0ΙΟ .04%、锌0.01-0.04%、铁 0.01-0.02%;腐植酸类肥料5.0~ 10.0%;
[0029] 优选情况下，添加营养元素的比例为：
[0030] a.大量元素(氮、磷、钾)的添加比例:氮2.0%、磷1.0%、钾2.0%;
[0031] b.中量元素的添加比例:钙0.5%、镁0.5%;
[0032] c.微量元素的添加比例：硼0.02%、锌0.02%、铁0.01 %;
[0033] d.腐殖酸铵的添加比例:5.0%。
[0034](四）果树专用促生长复合菌剂的制备
[0035] 将菌种数量分别达到108个/mL以上的细黄链霉菌（Streptomyces microflavus) CGMCC4 · 891，胶质芽抱杆菌（Bacillus mucilaginosus)CGMCC 1.153,褐色球形固氮菌 (Azotobacter chroococcum)CGMCC 1.142,巨大芽抱杆菌（Bacillus megaterium)ACCC 10010,枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ACCC 01183的菌种发酵液，按（10~20% ): (20 ~30% ): (10~20% ): (30~40% ): (5~10% )的比例混合均匀后作为混合菌剂，接种于盛 有复合菌剂培养基B的发酵罐中，接种量为复合菌剂培养基B总体积的5%，复合菌剂培养基 B的pH 6.5~7.5，30 °C下培养4~7天，使发酵液中总菌数达到6~10 X 108个/mL，即得到果 树专用微生物复合菌剂，pH为6.8，总有效活菌数为9 X 108个/mL;
[0036] 所述复合菌剂培养基B的配方为：玉米粉15~18g/100mL、豆栢粉5~8g/100mL、酵 母膏0.1 ~0.2g/100mL、KH2P〇4 0.2~2g/100mL、K2HP〇4 0.5~2g/100mL、MgS〇4.7H20 0.001 ~0 · 02g/100mL、NaCl 0 · 5~0 · 8g/100mL、（NH4)2S〇4 0 · 001 ~0 · Olg/lOOmL，其余为蒸馏水； [0037]所述步骤（四）的具体过程如下：
[0038] 1.接种:将所述各菌种(细黄链霉菌、胶质芽孢杆菌、褐色球形固氮菌、巨大芽孢杆 菌、枯草芽孢杆菌)分别接于斜面培养基上;细黄链霉菌培养温度为25~30°C，pH7.2~7.4， 培养时间3~5天;胶质芽孢杆菌(钾细菌)培养温度25~35 °C，pH为7.5~8.0,培养时间为5 天;地衣芽孢杆菌培养温度25~30 °C，pH为7.0~8.0，培养时间为5天;巨大芽孢杆菌为27~ 37°C，pH为6.5~7.5,培养时间为4天;枯草芽孢杆菌培养温度27~37°C，pH为6.5~7.5,培 养时间为4天；
[0039] 2.-级菌种培养:将所述步骤1制备的菌种分别按接种环一环的量接种于盛有相 应液体培养基的50mL锥形瓶中，培养基pH为6.5~7.5，锥形瓶放入摇床振荡，温度为30°C， 振荡24~48h;采用血球计数板计数，菌液中菌种数量分别达到10 8个/mL;
[0040] 3.二级发酵:将所述步骤2制备的菌种分别按5 %接种于盛有液体培养基的1000mL 锥形瓶中，培养基pH 6.5~7.5，放入摇床振荡，温度为30°C，振荡48~72h;使菌种数量分别 达到108个/mL以上，从而制得菌种数量分别达到10 8个/mL以上的细黄链霉菌(Streptomyces microflavus)CGMCC4.891、枯草芽抱杆菌(Bacillus subtil is )ACCC 01183、巨大芽抱杆菌 (Bacillus megaterium)ACCC 10010、褐色球形固氮菌（Azotobacter chroococcum)CGMCC 1.142、胶质芽抱杆菌(Bacillus mucilaginosus)CGMCC 1.153的菌种发酵液。
[0041] 所述果树微生物复合菌剂制备过程中用到的斜面培养基配方为：
[0042] 1.胶质芽孢杆菌采用的斜面培养基配方为:KH2P〇4 0.06g、MgS〇4 · 7H20 0.05g、
[0043] CaSCU · 5H2〇 0.004g、蛋白胨5g、玉米楽_(50%干重）2.5g、乳糖 15g、NaCl 4g、蒸馏 水 1000mL、琼脂25g、pH 7.1;
[0044] 2.褐色球形固氮菌采用的斜面培养基配方为：：KH2P〇4 0.2g、K2HP〇4 0.8g、MgS〇4 · 7H200.2g、CaS〇4 · 2H20 0.1g、Na2Mo〇4 · 2H20微量、酵母膏0.5g、甘露醇20g、FeCl3微量、琼脂 15g、蒸馏水 1000mL、pH 7.2;
[0045] 3.巨大芽孢杆菌采用的斜面培养基配方为：牛肉膏3g、蛋白胨5g、琼脂15g、NaCl 5g、蒸馈水 1000mL、pH 7.0;
[0046] 4.枯草芽孢杆菌采用的斜面培养基配方为:牛肉膏10g、蛋白胨10g、NaCl 5g、葡萄 糖 10g，琼脂 15g，蒸馏水 1000mL，pH 7.0;
[0047] 5 .细黄链霉菌采用的斜面培养基配方为：高氏合成一号琼脂：可溶性淀粉20g， KN〇3l.Og，K2HP〇4〇.5g，MgS〇4 · 7H20 0.5g，NaCl 0.5g，FeS〇4 · 7H200.01g，琼脂 15.0g，蒸馏 水1.0L，pH7.2-7.4。
[0048] 所述液体培养基配方为斜面培养基不加琼脂制得。
[0049](五）按步骤(三)深加工所获得的发酵物料总质量的3~5%。比例添加步骤（四）获 得的果树专用的促生长复合菌剂获得终产品，将物料混合均匀后，经造粒机造粒或成粉，检 测合格后，包装入库。
[0050] 对于上述技术方案，在优选的情况下，步骤(一)所述复合菌剂培养基A配方为：玉 米面0 · 5g/L、玉米猜杆粉 15g/L、麸皮0 · 25g/L、豆饼粉0 · 25g/L、Vogel ' s母液4mL/100mL，pH 7.0〇
[0051] 对于上述技术方案，在优选的情况下，步骤（一）所述枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)CICC10088，米曲霉（Aspergi llus niger )CICC2436，白腐菌（Phanerochaete chrysosporium)ACCC30414、里氏木霉(Trichoderma reesei)ACCC30449的菌种发酵液按2: 1:1:1的比例混合均匀。
[0052]对于上述技术方案，在优选的情况下，步骤(二)所述发酵有机物料为粉碎的玉米 秸杆与动物粪便按1. 〇~2.0:0.4~1.4质量比混合，所述动物粪便通常为鸡粪或牛粪。 [0053]对于上述技术方案，在优选的情况下，步骤(三)所述复合菌剂培养基B的配方为： 玉米粉 16g/100mL、豆栢粉7g/100mL、酵母膏0 · lg/100mL、KH2P〇4 lg/100mL、K2HP〇4 lg/ 100mL、MgS〇4.7H20 0.01g/100mL、NaCl 0.6g/100mL、（NH4)2S〇4 0.01g/100mL，其余为蒸馏 水。
[0054]本发明的技术方案是经过近几年的不懈努力，结合果树各个时期的生长特点及对 养分的需求，注意调节其营养生长与生殖生长的矛盾，最终研制出一种高效优质的生物有 机肥。其综合运用了微生物技术、化肥工业和农业技术等最新成果，优先制备了一种高效的 富含有机质、N · P · K营养元素和某些微量元素、植物生长调节剂等物质有机结合起来，由 特定工艺最终形成了以有机质为主体的营养合理、N ·P · K比例适当的颗粒状营养源。该种 肥料不仅具有高利用率、肥效期长的优点，而且具有改良土壤、提高果实品质，增强果树抗 逆性，增加产量，减少污染，刺激果树生长发育等特点，省时省工，具有良好的社会效益和经 济效益。
[0055]有益效果
[0056]本发明所述的果树专用的生物有机肥是选用具有特定腐熟功能的菌种制成菌剂， 用此菌剂将有机固体物料发酵腐熟成初肥，再按适宜的比例添加大量元素、中量元素、微量 元素及其他特殊物质，再配以功效相应的促进果树生长的菌剂所制成的肥料。腐熟剂中含 有大量的枯草芽孢杆菌、米曲霉、里氏木霉、白腐菌、嗜热脂肪地芽孢杆菌，能够产生纤维素 酶、木质素酶、半纤维素酶、蜡质素酶、果胶酶等多种生物酶，通过中温菌和耐高温菌的协同 作用，快速将各类废弃的固体有机物料发酵腐熟成肥料，变废为宝，节省资源，大大减少了 环境污染;又添加各类营养元素及果树专用的促生长复合菌剂，通过对果树有特殊功效的 有益微生物枯草芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、产朊假丝酵母、地衣芽孢杆菌、大 豆根瘤菌、植物乳杆菌各菌种之间的相互作用，起到刺激植物生长、缓解土地板结、改良土 壤生态环境、增加土壤的腐殖质及有益微生物菌群、防病抗病等作用，从而达到增产、高产 的目的。
【具体实施方式】
[0057]本发明的下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发 明，但不以任何方式限制本发明。实施例中所用的生物材料均可以由商业途径获得。
[0058]实施例一:果树专用有机复合生物肥的制备
[0059]本发明果树专用的有机复合生物肥产品是指利用微生物技术，选配具有特定腐熟 功能的菌种制成菌剂，用此菌剂将有机固体物料发酵腐熟成初肥，再配以各种营养元素及 果树专用的促生长复合菌剂所制成的生物肥料。其【具体实施方式】如下：
[0060] (一)有机物料腐熟剂的制备
[0061] 米用枯草芽抱杆菌（Baci 1 lus subti 1 is)CICC10088，米曲霉（Aspergi 1 lus niger)CICC2436，白腐菌（Phanerochaete chrysospor ium) ACCC30414、里氏木霉 (Trichoderma reesei)ACCC30449等具有高效腐熟作用的菌种按适当的比例复合发酵而成 的腐熟菌剂。
[0062] 1.菌种活化:将所述各菌种接于斜面培养基上;枯草芽孢杆菌28~32°C，pH为7.2 ~7.4,培养时间为1~3天;米曲霉培养温度25~28°C，pH为6.0~6.5,培养时间为4~7天； 白腐菌培养温度25~28°C，培养时间为4~7天；
[0063] 2.-级菌种培养:将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的50mL锥形瓶中，培养 基pH为6.0~8.0，锥形瓶放入摇床振荡培养，温度为30°C，振荡24~48h;采用血球计数板计 数，菌液中菌种数量分别达到1〇8个/mL;
[0064] 3.二级发酵:将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的1000mL锥形瓶中，培养基 pH 6.0~8.0，放入摇床振荡，温度为30°C，振荡48~72h;使菌种数量分别达到108个/mL以 上，将各菌种按所述菌种的质量百分比混合；
[0065] 4.三级发酵：分别将枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)CICC10088,米曲霉 (Aspergillus niger )CICC2436，白腐菌（Phanerochaete chry sospor ium) ACCC30414、、里 氏木霉(Trichoderma reesei)ACCC30449的菌种发酵液按2:1:1:1的比例混合均勾后，接种 于盛有复合菌剂培养基的发酵罐中，复合菌剂培养基pH 6.0~8.0，接种量为5%，30°C下培 养4~7天，使发酵液中菌数达到108个/mL，即得到有机物料腐熟剂。
[0066]所述斜面培养基配方为：
[0067] 1.枯草芽孢杆菌采用的斜面培养基配方为:普通琼脂：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10g， NaC15.0g，琼脂20.0-20.5g，pH7.2-7.4，牛肉浸液的制备:瘦牛肉洗净，切碎，称取550g浸泡 于1375mL水中，浸泡一夜，过滤，过滤分装后0.6kgf/cm240min备用。
[0068] 2 .米曲霉采用的斜面培养基配方为：δΜθ麦芽汁琼脂，δΜθ麦芽汁1.0L，琼脂 15.0g，自然pH。
[0069] 3.白腐菌的斜面培养基配方为:PDA培养基，取去皮的马铃薯200克，切成小块，加 水1000毫升煮沸30分钟滤去马铃薯块，将滤液补足至1000毫升，加葡萄糖20克，琼脂15克， 溶化后分装，15镑灭菌30分钟。自然pH。
[0070] 4.里氏木霉的斜面培养基配方为：同白腐菌配方。
[0071 ]所述液体培养基为斜面培养基不加琼脂即可。
[0072]所述复合菌剂培养基配方为：玉米面0.5g/L、玉米秸杆粉15g/L、麸皮0.25g/L、豆 饼粉0·25g/L、4mL/100mL Vogel's母液，pH值7·0。
[0073](二)混拌、发酵
[0074]准备500kg粉碎的玉米秸杆与200kg牛粪作为发酵的原始有机物料，将制备好的有 机物料腐熟剂按发酵有机物料总质量的5%。兑入适量的水中，与有机物料均匀混拌，原料手 握成团，指缝有水但不滴，而松手即散为好(总水分在60%左右）。将混合搅拌均匀的发酵有 机物料放进发酵设施，压实填满排去空气，发酵池顶部覆盖一层塑料薄膜，上盖密封发酵、 适时翻垛，翻堆时补充水分，将总水分控制在60%左右。经过10天发酵，即制得初肥。
[0075](三)各类营养元素的添加
[0076] 物料发酵完成后，按肥剂型要求进行粉碎、烘干，而后添加各类营养元素，包括大 量元素(氮、磷、钾）、中量元素(钙、镁）、微量元素(硼、锌、铁），腐殖酸类肥料为腐殖酸铵，按 发酵物料质量计算，具体添加比例如下：
[0077] a.大量元素(氮、磷、钾)的添加比例:氮2.0%、磷1.0%、钾2.0
[0078] b.中量元素的添加比例丐0.5%、镁0.5%;
[0079] c.微量元素的添加比例:硼0.02%、锌0.02%、铁0.01 % ;
[0080] d.腐殖酸铵的添加比例：5.0%。
[0081 ](四）果树专用促生长复合菌剂制备及添加
[0082] 米用细黄链霉菌（Streptomyces microf lavus) CGMCC4 · 891，胶质芽抱杆菌 (Bacillus mucilaginosus)CGMCC 1.153,褐色球形固氮菌（Azotobacter chroococcum) CGMCC 1.142，巨大芽抱杆菌(Bacillus megaterium)ACCC 10010,枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis)ACCC 01183等具有特殊功效的菌种发酵液混合后作为混合菌剂，经再次发酵而 制备的微生物复合菌剂。
[0083] 所述的果树微生物复合菌剂制备步骤如下：
[0084] 1.接种:将所述各菌种(细黄链霉菌、胶质芽孢杆菌、褐色球形固氮菌、巨大芽孢杆 菌、枯草芽孢杆菌)分别接于斜面培养基上;细黄链霉菌培养温度为25~30°C，pH7.2~7.4， 培养时间3~5天;胶质芽孢杆菌(钾细菌)培养温度25~35 °C，pH为7.5~8.0,培养时间为5 天;褐色球形固氮菌培养温度25~30 °C，pH为7.0~8.0，培养时间为5天;巨大芽孢杆菌为27 ~37 °C，pH为6.5~7.5,培养时间为4天;枯草芽孢杆菌培养温度27~37 °C，pH为6.5~7.5， 培养时间为4天；
[0085] 2.-级菌种培养:将所述步骤1制备的菌种分别按接种环一环的量接种于盛有相 应液体培养基的50mL锥形瓶中，培养基pH为6.5~7.5，锥形瓶放入摇床振荡，温度为30°C， 振荡24~48h;采用血球计数板计数，菌液中菌种数量分别达到10 8个/mL;
[0086] 3.二级发酵:将所述步骤2制备的菌种分别按5 %接种于盛有液体培养基的1000mL 锥形瓶中，培养基pH 6.5~7.5，放入摇床振荡，温度为30°C，振荡48~72h;使菌种数量分别 达到108个/mL以上，从而制得细黄链霉菌发酵液、胶质芽孢杆菌(钾细菌)发酵液、褐色球形 固氮菌发酵液、巨大芽孢杆菌发酵液和枯草芽孢杆菌发酵液。
[0087] 将各菌种按质量百分比混合后进行再次发酵:细黄链霉菌发酵液15%，胶质芽孢 杆菌(钾细菌)发酵液25%、巨大芽孢杆菌发酵液30%、褐色球形固氮菌发酵液20%、枯草芽 孢杆菌发酵液10 %。
[0088] 4.三级发酵:将所述步骤3制备的混合后的菌液接种于盛有复合菌剂培养基的发 酵罐中，复合菌剂培养基pH 6.5~7.5,接种量为复合菌剂培养基总质量的5%，30°C下培养 4~7天，使发酵液中菌数达到6~10 X108个/mL，即得到果树专用微生物复合菌剂，pH为 5.0，菌数含量均达到109个/mL。
[0089]所述斜面培养基配方为：
[0090] 1.胶质芽孢杆菌采用的斜面培养基配方为:KH2P〇4 0.06g、MgS〇4 · 7H20 0.05g、
[0091] CaSCU · 5H2〇 0.004g、蛋白胨5g、玉米楽_(50%干重）2.5g、乳糖 15g、NaCl 4g、蒸馏 水lOOOmL、琼脂25g、pH 7.1;
[0092] 2.褐色球形固氮菌采用的斜面培养基配方为：：KH2P〇4 0.2g、K2HP〇4 0.8g、MgS〇4· 7H20 0.2g、CaS〇4 · 2H20 0.1g、Na2Mo〇4 · 2H20微量、酵母膏0.5g、甘露醇20g、FeCl3微量、琼 脂 15g、蒸馏水 1000mL、pH 7.2;
[0093] 3.巨大芽孢杆菌采用的斜面培养基配方为：牛肉膏3g、蛋白胨5g、琼脂15g、NaCl 5g、蒸馈水 1000mL、pH 7.0;
[0094] 4.枯草芽孢杆菌采用的斜面培养基配方为:牛肉膏10g、蛋白胨10g、NaCl 5g、葡萄 糖 10g，琼脂 15g，蒸馏水 1000mL，pH 7.0;
[0095] 5 .细黄链霉菌采用的斜面培养基配方为：高氏合成一号琼脂：可溶性淀粉20g， KN〇3l.Og，K2HP〇4〇.5g，MgS〇4 · 7H20 0.5g，NaCl 0.5g，FeS〇4 · 7H200.01g，琼脂 15.0g，蒸馏 水1.0L，pH7.2-7.4。
[0096] 所述液体培养基配方为斜面培养基不加琼脂制得。
[0097]所述复合菌剂培养基配方为:玉米粉2~20g/100mL、豆栢粉1~10g/100mL、酵母膏 0.05~0.2g/100mL、KH2P〇4 0.2~2g/100mL、K2HP〇4 0.5~2g/100mL、MgS〇4.7H20 0.001 ~ 0·02g/100mL、NaCl 0·5~0·8g/100mL、（NH4)2S〇4 0·001 ~0·01g/100mL，其余为蒸馏水。 [0098]按发酵物料总质量的4%。比例添加果树专用的促生长复合菌剂，再次混合均匀。 [0099](五)造粒或成粉，检测、包装、入库
[0100] 将物料混合均匀后，经造粒机造粒或成粉，检测合格后，包装入库。
[0101] 实施例二:果树专用有机复合生物肥在苹果树上的应用效果
[0102] 1.试验目的
[0103] 果树专用有机复合生物肥是大连三科生物工程有限公司最新研制的针对果树生 长有特殊功效的生物肥料，为明确其对苹果树生长发育的影响，2015年4-9月份我公司针对 苹果树进行了田间小区试验。
[0104] 2.试验条件:试验地点为大连市瓦房店永宁镇，地块具有代表性。地势平坦，肥力 中等，大面积种植苹果树。
[0105] 3.试验材料与方法
[0106] 供试品种:红富士
[0107] 试验方法:试验设置为两组，采用随机排列，分别三次重复，每个试验小区面积667 平方米。
[0108] 所述的两组处理：
[0109] ①对照组，常规施肥;②试验组，严格按照有机复合生物肥产品使用说明施用。
[0110] 经实际调查，2015年果树生育期自然条件较好，无特殊恶劣天气，有利于苹果树的 生长。
[0111] 4.调查记录方法在苹果成熟期采集调查百果重、亩产量，并在土壤0-20cm处取样， 检测土壤中有机质含量、微生物数量(亿/g)及pH变化。
[0112] 5.试验结果及分析
[0113] 5.1施用果树专用有机复合生物肥对苹果树产量的影响
[0114] 表1施用果树专用有机复合生物肥对苹果树产量的影响数据
[0116] 从表1可以看出，试验组苹果百果重比对照组高3. lkg，亩产量也显著高于对照组， 增产率达到24.9%，表明施用果树专用有机复合生物肥能显著提高苹果的产量。
[0117] 5.2施用果树专用有机复合生物肥对苹果树地土壤理化性质的影响
[0118] 表2施用果树专用有机复合生物肥对土壤有机质含量、微生物数量及pH的影响数 据
[0120]从表2数据可以看出，试验组土壤的有机质含量及微生物数量都显著高于对照组， 分别高0.8%、8.8亿/g，土壤的pH也提高了0.6，表明施用果树专用有机复合生物肥能够改 良土壤，提高土壤的有机质及微生物含量，改善土壤的酸碱度，使得土壤环境更适宜苹果树 的生长
[0121]实施例三:果树专用有机复合生物肥在樱桃树上的应用效果
[0122] 1.试验目的
[0123] 果树专用有机复合生物肥是大连三科生物工程有限公司最新研制的针对果树生 长有特殊功效的生物肥料，为明确其对樱桃树生长发育的影响，2015年4-9月份我公司针对 樱桃树进行了田间小区试验。
[0124] 2.试验条件:试验地点为大连市旅顺口区，地块具有代表性。地势平坦，肥力中等， 大面积种植樱桃树。
[0125] 3.试验材料与方法
[0126] 供试品种:红灯笼樱桃
[0127] 试验方法:试验设置为两组，采用随机排列，分别三次重复，每个试验小区面积667 平方米。
[0128] 所述的两组处理：
[0129] ①对照组，常规施肥;②试验组，严格按照有机复合生物肥产品使用说明施用。
[0130] 经实际调查，2015年果树生育期自然条件较好，无特殊恶劣天气，有利于樱桃树的 生长
[0131] 4.调查记录方法在樱桃成熟期采集调查单株产量、亩产量，并在每个试验小区随 机取20个樱桃分析其总酸、总糖及Vc含量。总酸、总糖含量用滴定法测定，Vc含量采取钼蓝 比色法测定。
[0132] 5.试验结果及分析
[0133] 5.1施用果树专用有机复合生物肥对樱桃树产量的影响
[0134] 表1施用果树有机复合生物肥对樱桃树产量的影响数据
[0136] 从表1数据可以看到，试验组每棵树产量比对照组高7.4kg，亩产量比对照组高 325.6kg，增产率达到16.7%，表明施用果树专用有机复合生物肥能显著提高樱桃树的产 量。
[0137] 5.2施用果树专用有机复合生物肥对樱桃品质的影响
[0138] 表2施用果树专用有机复合生物肥对樱桃总糖、总酸及Vc含量的影响数据
[0140]^从表2数据可以观察到，试验组的樱桃总糖含量显著高于对照组，总酸低于对照 组，Vc含量也显著增加，增加了9.794。表明施用果树专用有机复合生物肥能显著提高樱桃 果实的品质，增加樱桃的口感。
[0141] 结论
[0142] 通过对苹果树和樱桃树的试验结果发现，施用果树专用有机复合生物肥能够显著 提高苹果树及樱桃树的产量及品质，显著提高了经济效益。并且施用果树专用有机复合生 物肥还能够改良土壤，增加土壤有机质含量及酸碱度，使其更有利于果树的生长。因此，果 树专用有机复合生物肥可在各类果树生产种植中扩大示范面积，并进行大面积推广使用。
【主权项】
1. 一种果树专用的有机复合生物肥，其特征在于，所述有机复合生物肥的制备方法包 括： (一) 有机物料腐熟剂的制备 将菌种数量分别达到1〇8个/mL以上的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CICC10088， 米曲霉（Aspergi 1 lus niger )CICC2436，白腐菌（Phanerochaete chrysosporium) ACCC30414、里氏木霉（Trichoderma reesei )ACCC30449的菌种发酵液按1 · 5~2 · 0:0 · 8~ 1.3:0.8~1.3:0.8~1.3的比例混合均匀后，接种于盛有复合菌剂培养基A的发酵罐中，接 种量为复合菌剂培养基A总体积的5%，30°C下培养4~7天，使发酵液中总菌数达到10 8个/ mL，即得到有机物料腐熟剂； 所述复合菌剂培养基A配方为：玉米面0.5~1.5g/L、玉米猜杆粉15~17g/L、麸皮0.2~ 0 · 4g/L、_a饼粉0 · 2~0 · 4g/L、4mL/100mL Vogel ' s母液，pH值6 · 0~8 · 0; (二) 混拌、发酵 将步骤(一）制备好的有机物料腐熟剂按发酵有机物料总质量的5%。比例混合，再兑入 适量的水，使总水分控制在60 %左右，在发酵池经过5-10天发酵，即制得初肥； (三) 深加工 将初肥进行粉碎、烘干，按初肥质量百分比，具体添加如下营养元素： 氮1.0-3.0%、磷0.5-2.5%、钾1.0-3.0% ;钙0.2-0.5%、镁0.2-0.5% ;硼0·0ΙΟ .04%、锌0.01-0.04%、铁 0.01-0.02%;腐植酸类肥料5.0~ 10.0%; (四） 果树专用促生长复合菌剂的制备 将菌种数量分别达到108个/1111^以上的细黄链霉菌（31^6。1：〇1115^68 111；[(31'〇；1^13￥118) CGMCC4 · 891，胶质芽抱杆菌（Bacillus mucilaginosus)CGMCC 1.153,褐色球形固氮菌 (Azotobacter chroococcum)CGMCC 1.142,巨大芽抱杆菌（Bacillus megaterium)ACCC 10010,枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ACCC 01183的菌种发酵液，按（10~20% ): (20 ~30% ): (10~20% ): (30~40% ): (5~10% )的比例混合均匀后作为混合菌剂，接种于盛 有复合菌剂培养基B的发酵罐中，接种量为复合菌剂培养基B总体积的5%，复合菌剂培养基 B的pH 6.5~7.5，30 °C下培养4~7天，使发酵液中总菌数达到6~10 X 108个/mL，即得到果 树专用微生物复合菌剂，pH为6.8，总有效活菌数为9 X 108个/mL; 所述复合菌剂培养基B的配方为：玉米粉15~18g/100mL、豆栢粉5~8g/100mL、酵母膏 0.1 ~0.2g/100mL、KH2P〇4 0.2~2g/100mL、K2HP〇4 0.5~2g/100mL、MgS〇4.7H20 0.001 ~ 0 · 02g/100mL、NaCl 0 · 5~0 · 8g/100mL、（NH4)2S〇4 0 · 001 ~0 · 01g/100mL，其余为蒸馏水； (五） 按步骤(三)深加工所获得的发酵物料总质量的3~5%。比例添加步骤（四）获得的 果树专用的促生长复合菌剂获得终产品。2. 根据权利要求1所述的果树专用的生物有机肥的制备方法，其特征在于，步骤(一)所 述复合菌剂培养基A配方为:玉米面0.5g/L、玉米秸杆粉15g/L、麸皮0.25g/L、豆饼粉0.25g/ L、4mL/100mL Vogel's母液，pH 7.0。3. 根据权利要求1所述的果树专用的生物有机肥的制备方法，其特征在于，步骤(一)所 述枯草芽抱杆菌（Bacillus subtil is )CICC10088，米曲霉(Aspergi 1 lus niger )CICC2436， 白腐菌（Phanerochaete chrysosporium)ACCC30414的菌种发酵液按2:1:1:1的比例混合均 匀。4. 根据权利要求1所述的果树专用的生物有机肥的制备方法，其特征在于，步骤(二)所 述发酵有机物料为粉碎的玉米秸杆与动物粪便按1. 〇~2.0:0.4~1.4质量比混合。5. 根据权利要求1所述的果树专用的生物有机肥的制备方法，其特征在于，步骤(三)所 述营养元素为氮2.0%、磷1.0%、钾2.0% ;钙0.5%、镁0.5% ;硼0.02%、锌0.02%、铁 0.01 % ;腐植酸类肥料5.0 %，腐植酸类肥料为腐植酸铵或者腐植酸钾。6. 根据权利要求1所述的果树专用的生物有机肥的制备方法，其特征在于，步骤(三)所 述复合菌剂培养基B的配方为：玉米粉16g/100mL、豆栢粉7g/100mL、酵母膏0. lg/100mL、 KH2PO4 lg/100mL、K2HP〇4 lg/100mL、MgS〇4.7H20 0.01g/100mL、NaCl 0.6g/100mL、（NH4) 2S〇4 0.01g/100mL，其余为蒸馏水。
【文档编号】C12R1/645GK106045677SQ201610371039
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月30日
【发明人】崔昌娜, 崔国臣
【申请人】大连三科生物工程有限公司