专利名称：升高丙酮酸脱氢酶活性的取代的n－苯基2－羟基－2－甲基－3,3,3－三氟代丙酰胺衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及升高丙酮酸脱氢酶(PDH)活性的化合物，它们的制备方法、含有其作为活性成分的药用组合物，治疗与降低的PDH活性有关的疾病状态的方法，涉及它们作为药物的用途和涉及它们在制备用于升高温血动物如人的PDH活性的药物，特别是在温血动物如人中治疗糖尿病、外周血管疾病和心肌缺血的药物，尤其是制备用于在温血动物如人中治疗糖尿病的药物中的用途。
在组织中，腺苷三磷酸(ATP)提供合成复杂分子和肌肉收缩的能量。ATP由富含能量的底物，如葡萄糖或长链游离脂肪酸的裂解而生成。在氧化组织如肌肉中，大多数的ATP由进入柠檬酸循环的乙酰辅酶A生成，因此，乙酰辅酶A的供给是在氧化组织中ATP产生的至关重要的决定性因素。乙酰辅酶A或者通过脂肪酸的β-氧化而产生，或者经糖酵解途径的葡萄糖代谢而产生。在控制由葡萄糖形成乙酰辅酶A的速率中的重要的调节酶为PDH，其催化丙酮酸氧化为乙酰辅酶A和二氧化碳的同时催化烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)还原为NADH。
在诸如非-胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)和胰岛素-依赖型糖尿病(IDDM)的疾病状态中，脂质的氧化随着葡萄糖利用的减少而增加，这引起高血糖症。在IDDM和NIDDM两种疾病中，减少的葡萄糖利用与PDH活性的降低有关。此外，PDH活性降低的进一步的后果可以是，丙酮酸浓度的增加导致作为肝糖原异生作用的底物的乳酸的有效性增加。有理由期望增加PDH活性可增加葡萄糖的氧化率，并由此增加总葡萄糖的利用，除了减少肝葡萄糖的输出量外。另一个与糖尿病有关的致病因素为胰岛素分泌受损，已表明此种受损与胰β-细胞的PDH活性降低有关(啮齿动物中的糖尿病遗传模型，Zhou等(1996)Diabetes 45580-586)。
葡萄糖的氧化能够比脂肪酸的氧化，每摩尔氧产生更多的ATP分子。在其中能量需要超过能量供应的疾病，如心肌缺血、间歇性跛行、大脑局部缺血和再灌注，(Zaidan等，1998；J.Neurochem.70233-241)，通过提高PDH活性使底物利用的平衡朝有利于葡萄糖代谢的方向移动，可望改善维持ATP水平及由此而来的功能的能力。
也期望能够提高PDH活性的药物有益于治疗其中临床表现为循环乳酸过量的疾病如某些脓毒症的病例。
在动物中快速给予提高PDH活性的药物二氯代乙酸(DCA)，(Vary等.，1988；Circ.Shock，243-18)，已表明具有降低血糖的预期效果，(Stacpoole等，1978；N.Engl.J.Med.298526-530)，并作为用于心肌缺血(Bersin和Stacpoole，1997；American Heart Journal，134841-855)和乳酸血症的治疗手段，(Stacpoole等，1983；N.Engl.J.Med.309390-396)。
PDH为由几种亚基(包括三种酶活性E1、E2和E3，为实现丙酮酸向乙酰辅酶A的转化所必需)的多个拷贝组成的线粒体内多酶复合体(Patel和Roche 1990；FASEB J.，43224-3233)。E1催化从丙酮酸非-可逆地除去二氧化碳；E2形成乙酰辅酶A而E3使NAD还原为NADH。两种另外的酶活性与所述复合体有关能够在三个丝氨酸残基上磷酸化E1的特异性激酶和逆转磷酸化的不密切-相关的特异性磷酸酶。三个丝氨酸残基中的一个的磷酸化使E1无活性。PDH在其活性(去磷酸化)状态中的比例通过激酶和磷酸酶活性之间的平衡来确定。所述激酶的活性可通过代谢底物如NAD/NADH，辅酶A/乙酰辅酶A和二磷酸腺嘌呤(ADP)/ATP的相对浓度以及通过丙酮酸本身的有效性在体内调节。
欧洲专利公布号617010和524781描述了能松弛膀胱平滑肌并可用于治疗急迫性尿失禁的化合物。我们发现本发明的化合物在提高PDH活性上是非常好的，这种性质在EP 0617010和EP 524781中未公开。
本发明基于这一令人惊奇的发现，即某些化合物提高PDH活性，这种性质对治疗与葡萄糖利用紊乱有关的疾病状态如糖尿病、肥胖症，(Curto等，1997；Int.J.Obes.211137-1142)及乳酸血症有价值。另外，可期望该化合物具有用于其中富含能量的底物供应组织受到限制的疾病，如外周血管疾病(包括间歇性跛行)、心力衰竭和某些心肌疾病、肌无力、高脂血症和动脉粥样硬化(Stacpoole等，1978；N.Engl.J.Med.298526-530)。激活PDH的化合物也可用于治疗阿尔茨海默氏病(AD)(J Neural Transm(1998)105,855-870)。
由此，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯 其中n为1或2；R1为氯、氟、溴、甲基或甲氧基；R2选自下面三组中的一个基团i)卤代基、硝基、羟基、氨基或氰基；ii)-X1-R5，其中X1为直接的键、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-NR6、-CO-、-CONR6-、-NR6CO-、-NR6SO2-或NR6CONR7-；其中R6和R7独立为氢或由一个或更多个A任选取代的C1-4烷基；和R5选自由一个或更多个A任选取代的C1-6烷基、由一个或更多个A任选取代的C3-7环烷基、由一个或更多个A任选取代的C3-7环烷基C1-6烷基、由一个或更多个A任选取代的C2-6链烯基、由一个或更多个A任选取代的C2-6链炔基、由一个或更多个D任选取代的苯基、由一个或更多个D任选取代的苯基C1-6烷基、在环碳上由一个或更多个D任选取代的杂芳基环或在环碳上由一个或更多个D任选取代的(杂芳基环)C1-6烷基；其中所述杂芳基环为含有1-2个氮原子的碳连接的6元环或含有1-3个独立选自O、N和S的杂原子的碳连接的5元环；和其中如果所述5元杂芳基环含有-NH-部分，则该氮可由选自G的基团任选取代；iii)在环碳上由一个或更多个D任选取代的氮-连接的4-8元杂环基，且其中如果所述杂环基含有-NH-部分，则该氮可由选自G的基团任选取代；R3为由一个或更多个A任选取代的C1-6烷基、由一个或更多个A任选取代的C3-7环烷基、由一个或更多个D任选取代的苯基、在环碳上由一个或更多个D任选取代的、含有1-2个氮原子的碳连接的6元杂芳基环或在环碳上由一个或更多个D任选取代的、含有1-3个独立选自O、N和S的杂原子的碳连接的5元杂芳基环；和其中如果所述5元杂芳基环含有-NH-部分，则该氮可由选自G的基团任选取代；A选自羟基、氨基、卤代基、羧基、N-(C1-4烷基)氨基、N，N-二-(C1-4烷基)氨基、氨基甲酰基和C1-6烷氧基；D选自i)-Xa-Rc，其中Xa为直接的键、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-CO-、-NRdSO2-、-NRdCO-、-NRdCONRe-、-NRd-或-CONRd-；其中Rd和Re独立为氢或由一个或更多个羟基或C1-4烷氧基任选取代的C1-4烷基；Rc选自氢或由一个或更多个羟基或C1-4烷氧基任选取代的C1-6烷基；ii)在环碳上由一个或更多个选自羟基、卤代基、C1-4烷氧基、C1-4烷基或氰基的基团任选取代的4-8元Het，且其中如果所述4-8元Het含有-NH-部分，则该氮可由选自G的基团任选取代；iii)-Xa-C1-6烷基-Xb-Rc，其中Xa和Rc如此前所定义和Xb为-S-、-SO-或-SO2-；iv)氰基或卤代基；和v)-Xc-Rf，其中Xc为-C(O)-或-SO2-和Rf为在环碳上由一个或更多个选自羟基、卤代基、C1-4烷氧基、C1-4烷基或氰基的基团任选取代的氮连接的4-8元杂环基，且其中如果所述杂环基含有-NH-部分，则该氮可由选自G的基团任选取代；G选自由一个或更多个A任选取代的C1-6烷基、由一个或更多个A任选取代的C1-6链烷酰基、由一个或更多个A任选取代的C1-6烷基磺酰基、由一个或更多个A任选取代的C1-6烷氧基羰基、氨基甲酰基、由一个或更多个A任选取代的N-(C1-6烷基)氨基甲酰基、由一个或更多个A任选取代的N-(C1-6烷基)2氨基甲酰基和由一个或更多个A任选取代的苯甲酰基；和R4为氢或氟。
在本说明书中，术语“烷基”包括直链和支链烷基，但对于单个的烷基，如“丙基”专门单指直链的形式。例如，“C1-6烷基”包括C1-4烷基、C2-4烷基、丙基、异丙基和叔丁基。然而，对于单个的烷基，如“丙基”专门单指直链的形式而对于单个的支链烷基，如“异丙基”专门单指支链的形式。术语“卤代基”指氟、氯、溴和碘。
对于“含有1-2个氮原子的碳连接的6元杂芳基环”的合适的涵义包括吡啶基、嘧啶基、吡嗪基和哒嗪基。优选“含有1-2个氮原子的碳连接的6元杂芳基环”为吡啶基。在本发明的另一方面，优选“含有1-2个氮原子的碳连接的6元杂芳基环”为哒嗪基。
对于“含有1-3个杂原子的碳连接的5元杂芳基环”的合适的涵义包括吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、噁唑基、噁二唑基、咪唑基和三唑基。
“氮连接的4-8元杂环基”为含有4-8个原子的饱和的、部分饱和的或不饱和的单环，其中至少一个原子为氮原子，任选具有1-3个独立选自O、N和S的其它杂原子，其中-CH2-基团可由-C(O)-任选置换，环氮原子和/或硫原子可任选被氧化形成N-氧化物和/或S-氧化物。应该理解，在形成这种氮键时，该氮原子不是季胺化的，即形成中性化合物。“氮连接的4-8元杂环基”的合适的涵义包括吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、硫代吗啉基、吡咯啉基、高哌嗪基、吡咯基、吡唑基、吡唑啉基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、吡唑烷基和三唑基。对于“氮连接的4-8元杂环基”的其它合适的涵义包括氮杂环丁烷基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、硫代吗啉基、吡咯啉基、高哌嗪基、吡咯基、吡唑基、吡唑啉基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、吡唑烷基和三唑基。优选“氮连接的4-8元杂环基”为吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、硫代吗啉基、吡咯啉基或高哌嗪基。更优选“氮连接的4-8元杂环基”为氮杂环丁烷基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、硫代吗啉基、吡咯啉基或高哌嗪基。对于“氮连接的4-8元杂环基”的其它合适的涵义包括氮杂环丁烷基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、硫代吗啉基、1-氧硫代吗啉基(1-oxothiomorpholino)、1，1-二氧硫代吗啉基、吡咯啉基、高哌嗪基、吡咯基、吡唑基、吡唑啉基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、吡唑烷基和三唑基。优选“氮连接的4-8元杂环基”为吗啉基、1-氧硫代吗啉基、1，1-二氧硫代吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、硫代吗啉基、吡咯啉基或高哌嗪基。更优选“氮连接的4-8元杂环基”为氮杂环丁烷基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、硫代吗啉基、1-氧硫代吗啉基、1，1-二氧硫代吗啉基、吡咯啉基或高哌嗪基。尤其Rf作为“氮连接的4-8元杂环基”为氮杂环丁烷基、吗啉基或吡咯烷基。特别是当R2为“氮连接的4-8元杂环基”时，它为硫代吗啉基。在本发明的另一方面，特别是当R2为“氮连接的4-8元杂环基”时，它为硫代吗啉基、哌嗪基、1-氧硫代吗啉基、1，1-二氧硫代吗啉基或吗啉基。
“氮连接的4-6元杂环基”为含有4-6个原子的饱和的、部分饱和的或不饱和的单环，其中至少一个原子为氮原子，任选具有1-3个独立选自O、N和S的其它杂原子，其中-CH2-基团可由-C(O)-任选置换，环氮原子和/或硫原子可任选被氧化形成N-氧化物和/或S-氧化物。应该理解，在形成这种氮键时，该氮原子不是季胺化的，即形成中性化合物。“氮连接的4-6元杂环基”的合适的涵义包括氮杂环丁烷基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、硫代吗啉基、吡咯啉基、吡咯基、吡唑基、吡唑啉基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、吡唑烷基和三唑基。优选“氮连接的4-6元杂环基”为氮杂环丁烷基、吗啉基或吡咯烷基。
“氮连接的5或6元杂环基”为含有5或6个原子的饱和的、部分饱和的或不饱和的单环，其中至少一个原子为氮原子，任选具有1-3个独立选自O、N和S的其它杂原子，其中-CH2-基团任选由-C(O)-置换，环氮原子和/或硫原子可任选被氧化以形成N-氧化物和/或S-氧化物。应该理解，在形成这种氮键时，该氮原子不是季胺化的，即形成中性化合物。“氮连接的5或6元杂环基”的合适的涵义包括吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、硫代吗啉基、吡咯啉基、吡咯基、吡唑基、吡唑啉基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、吡唑烷基和三唑基。优选“氮连接的5或6元杂环基”为吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、硫代吗啉基或吡咯啉基。
“氮连接的6元杂环基”为含有6个原子的饱和的、部分饱和的或不饱和的单环，其中至少一个原子为氮原子，任选具有1-3个独立选自O、N和S的其它杂原子，其中-CH2-基团可任选由-C(O)-置换，环氮原子和/或硫原子可任选被氧化以形成N-氧化物和/或S-氧化物。应该理解，在形成这种氮键时，该氮原子不是季胺化的，即形成中性化合物。“氮连接的6元杂环基”的合适的涵义包括吗啉基、哌啶基、哌嗪基、硫代吗啉基。
“4-8元Het”为含有4-8个原子，包括1-4个独立选自O、N和S的杂原子的饱和的、部分饱和的或不饱和的单环，其可以是碳或氮连接的，其中-CH2-基团可由-C(O)-任选置换，环氮原子和/或硫原子可任选被氧化以形成N-氧化物和/或S-氧化物。“4-8元Het”的合适的涵义为吗啉基、哌啶基、吡啶基、吡喃基、吡咯基、异噻唑基、噻吩基、噻二唑基、哌嗪基、噻唑烷基、吡咯烷基、硫代吗啉基、吡咯啉基、高哌嗪基、四氢吡喃基、咪唑基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、异噁唑基、4-吡啶酮、2-吡咯烷酮、4-噻唑烷酮、吡啶-N-氧化物和喹啉-N-氧化物。
“5或6元Het”为含有4-8个原子，包括1-4个独立选自O、N和S的杂原子的饱和的、部分饱和的或不饱和的单环，其可以是碳或氮连接的，其中-CH2-基团可由-C(O)-任选置换，环氮原子和/或硫原子可任选被氧化以形成N-氧化物和/或S-氧化物。“5或6元Het”的合适的涵义为吗啉基、哌啶基、吡啶基、吡喃基、吡咯基、异噻唑基、噻吩基、噻二唑基、哌嗪基、噻唑烷基、吡咯烷基、硫代吗啉基、吡咯啉基、四氢吡喃基、咪唑基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、异噁唑基、4-吡啶酮、2-吡咯烷酮、4-噻唑烷酮、吡啶-N-氧化物和喹啉-N-氧化物。
“C1-6烷氧基羰基”的实例包括甲氧基羰基、乙氧基羰基、正-和叔-丁氧基羰基。“C1-6烷氧基”的实例包括C1-4烷氧基、甲氧基、乙氧基和丙氧基。“C1-4烷基亚硫酰基”的实例包括甲基亚硫酰基和乙基亚硫酰基。“C1-6烷基磺酰基”的实例包括C1-4烷基磺酰基、甲磺酰基和乙磺酰基。“C1-6链烷酰基”的实例包括C1-4链烷酰基、丙酰基和乙酰基。“C3-7环烷基”的实例为环丙基和环己基。“C2-6链烯基”的实例为乙烯基、烯丙基和1-丙烯基。“C2-6链炔基”的实例为乙炔基、1-丙炔基和2-丙炔基。“N-(C1-6烷基)氨基甲酰基”的实例为甲基氨基羰基和乙基氨基羰基。“N-(C1-6烷基)2氨基甲酰基”的实例为二甲基氨基羰基和甲基乙基氨基羰基。“N-(C1-4烷基)氨基”的实例包括甲基氨基和乙基氨基。“N-(C1-4烷基)2氨基”的实例包括二-N-甲基氨基、二-(N-乙基)氨基和N-乙基-N-甲基氨基。“苯基C1-6烷基”的实例包括苯基C1-4烷基、苄基和苯基乙基。“C3-7环烷基C1-6烷基”的实例包括环丙基甲基、环戊基乙基和2-环己基丙基。“(杂芳基环)C1-6烷基”的实例包括吡啶基甲基、吡嗪基乙基和咪唑基丙基。
根据本发明的另一方面，提供式(I)的化合物(如上所述)或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯，其中
n为1或2；R1为氯、氟、溴、甲基或甲氧基；R2选自下面三组中的一个基团i)卤代基、硝基、羟基、氨基或氰基；ii)-X1-R5，其中X1为直接的键、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-NR6、-CO-、-CONR6、-NR6CO-、-NR6SO2-或NR6CONR7-；其中R6和R7独立为氢或由一个或更多个A任选取代的C1-4烷基；和R5选自由一个或更多个A任选取代的C1-6烷基、由一个或更多个A任选取代的C3-7环烷基、由一个或更多个A任选取代的C2-6链烯基、由一个或更多个A任选取代的C2-6链炔基、由一个或更多个D任选取代的苯基、在环碳上由一个或更多个D任选取代的、含有1-2个氮原子的碳连接的6元杂芳基环或者在环碳上由一个或更多个D任选取代的含有1-3个独立选自O、N和S的杂原子的碳连接的5元杂芳基环，且其中如果所述5元杂芳基环含有-NH-部分，则该氮可由选自G的基团任选取代；iii)在环碳上由一个或更多个D任选取代的氮-连接的4-8元杂环基，且其中如果所述杂环基含有-NH-部分，则该氮可由选自G的基团任选取代；R3为由一个或更多个A任选取代的C1-6烷基、由一个或更多个A任选取代的C3-7环烷基、由一个或更多个D任选取代的苯基、在环碳上由一个或更多个D任选取代的含有1-2个氮原子的碳连接的6元杂芳基环或在环碳上由一个或更多个D任选取代的、含有1-3个独立选自O、N和S的杂原子的碳连接的5元杂芳基环；和其中如果所述5元杂芳基环含有-NH-部分，则该氮可由选自G的基团任选取代；A选自羟基、氨基、卤代基、羧基和C1-6烷氧基；D选自i)-Xa-Rc，其中Xa为直接的键、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-CO-、-NRdSO2-、-NRdCO-、-NRdCONRe、-NRd-或-CONRd-；其中Rd和Re独立为氢或由一个或更多个羟基或C1-4烷氧基任选取代的C1-4烷基；Rc选自氢或由一个或更多个羟基或C1-4烷氧基任选取代的C1-6烷基；ii)在环碳上由一个或更多个选自羟基、卤代基、C1-4烷氧基、C1-4烷基或氰基的基团任选取代的4-8元Het，且其中如果所述4-8元Het含有-NH-部分，则该氮可由选自G的基团任选取代；iii)-Xa-C1-6烷基-Xb-Rc，其中Xa和Rc如此前所定义和Xb为-S-、-SO-或-SO2-；和iv)氰基或卤代基；G选自由一个或更多个A任选取代的C1-6烷基、由一个或更多个A任选取代的C1-6链烷酰基、由一个或更多个A任选取代的C1-6烷基磺酰基、由一个或更多个A任选取代的C1-6烷氧基羰基、氨基甲酰基、由一个或更多个A任选取代的N-(C1-6烷基)氨基甲酰基、由一个或更多个A任选取代的N-(C1-6烷基)2氨基甲酰基和由一个或更多个A任选取代的苯甲酰基；和R4为氢或氟。
根据本发明的另一方面，提供式(I)的化合物(如上所述)或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯，其中n为1或2；R1为氯、氟、溴、甲基或甲氧基；R2选自下面三组中的一个基团i)卤代基、硝基、羟基、氨基或氰基；ii)-X1-R5，其中X1为直接的键、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-NR6-、-CO-、-CONR6-、-NR6CO-、-NR6SO2-或NR6CONR7-；其中R6和R7独立为氢或由一个或更多个A任选取代的C1-4烷基；和R5选自由一个或更多个A任选取代的C1-6烷基、由一个或更多个A任选取代的C3-7环烷基、由一个或更多个A任选取代的C2-6链烯基、由一个或更多个A任选取代的C2-6链炔基、由一个或更多个D任选取代的苯基、在环碳上由一个或更多个D任选取代的含有1-2个氮原子的碳连接的6元杂芳基环或者在环碳上由一个或更多个D任选取代的含有1-3个独立选自O、N和S的杂原子的碳连接的5元杂芳基环，且其中如果所述5元杂芳基环含有-NH-部分，则该氮可由选自G的基团任选取代；iii)在环碳上由一个或更多个D任选取代的氮-连接的4-8元杂环基，且其中如果所述杂环基含有-NH-部分，则该氮可由选自G的基团任选取代；R3为由一个或更多个A任选取代的C1-6烷基、由一个或更多个A任选取代的C3-7环烷基、由一个或更多个D任选取代的苯基、在环碳上由一个或更多个D任选取代的含有1-2个氮原子的碳连接的6元杂芳基环或在环碳上由一个或更多个D任选取代的含有1-3个独立选自O、N和S的杂原子的碳连接的5元杂芳基环；和其中如果所述5元杂芳基环含有-NH-部分，则该氮可由选自G的基团任选取代；A选自羟基、氨基、卤代基、羧基、N-(C1-4烷基)氨基、N，N-二-(C1-4烷基)氨基和C1-6烷氧基；D选自i)-Xa-Rc，其中Xa为直接的键、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-CO-、-NRdSO2-、-NRdCO-、-NRdCONRe、-NRd-或-CONRd-；其中Rd和Re独立为氢或由一个或更多个羟基或C1-4烷氧基任选取代的C1-4烷基；Rc选自氢或由一个或更多个羟基或C1-4烷氧基任选取代的C1-6烷基；ii)在环碳上由一个或更多个选自羟基、卤代基、C1-4烷氧基、C1-4烷基或氰基的基团任选取代的4-8元Het，且其中如果所述4-8元Het含有-NH-部分，则氮可由选自G的基团任选取代；iii)-Xa-C1-6烷基-Xb-Rc，其中Xa和Rc如此前所定义和Xb为-S-、-SO-或-SO2-；iv)氰基或卤代基；和v)-Xc-Rf，其中Xc为-C(O)-或-SO2-和Rf为在环碳上由一个或更多个选自羟基、卤代基、C1-4烷氧基、C1-4烷基或氰基的基团任选取代的氮连接的4-8元杂环基，且其中如果所述杂环基含有-NH-部分，则该氮可由选自G的基团任选取代；
G选自由一个或更多个A任选取代的C1-6烷基、由一个或更多个A任选取代的C1-6链烷酰基、由一个或更多个A任选取代的C1-6烷基磺酰基、由一个或更多个A任选取代的C1-6烷氧基羰基、氨基甲酰基、由一个或更多个A任选取代的N-(C1-6烷基)氨基甲酰基、由一个或更多个A任选取代的N-(C1-6烷基)2氨基甲酰基和由一个或更多个A任选取代的苯甲酰基；和R4为氢或氟。
R1、R2、R3和R4的优选的涵义如下。当适宜时，这样的涵义可以在此前或此后限定的任何定义、权利要求或实施方案中采用。
在本发明的一个方面，n优选为1。
在本发明的另一方面，n优选为2。
R1优选为氯、氟或溴。
R1更优选为氯或氟。
R1尤其为氯。
在本发明的另一方面，R1优选为甲基、氯、氟或溴。
在本发明的另一方面，R1更优选为甲基、氯或氟。
在本发明的另一方面，R1尤其为甲基或氯。其中R2选自组i)优选组i)为卤代基或羟基。
更优选组i)为卤代基。
特别优选组i)为氯或氟。
更特别优选组i)为氯。在本发明的另一方面，其中R2选自组i)优选组i)为硝基、卤代基、氨基或羟基。
更优选组i)为硝基、氨基或卤代基。
特别优选组i)为硝基、溴、碘、氨基、氯或氟。其中R2选自组ii)优选在组ii)中，X1为-S-、-SO-、-SO2-、-NR6-或-NR6CO-；优选R6为氢；优选R5选自由一个或更多个A任选取代的C1-6烷基、由一个或更多个D任选取代的苯基或在环碳上由一个或更多个D任选取代的含有1-2个氮原子的碳连接的6元杂芳基环。
更优选在组ii)中，X1为-S-、-SO-、-SO2-或-NR6CO-；更优选R6为氢；更优选R5选自由一个或更多个A任选取代的C1-4烷基、由一个或更多个D任选取代的苯基或在环碳上由一个或更多个D任选取代的碳连接的吡啶基。
特别优选在组ii)中，X1为-S-或-NR6CO-；特别优选R6为氢；特别优选R5选自由一个或更多个A任选取代的甲基、由一个或更多个A任选取代的乙基、由一个或更多个D任选取代的苯基或在环碳上由一个或更多个D任选取代的碳连接的吡啶基。在本发明的另一方面，其中R2选自组ii)优选在组ii)中，X1为-S-、-SO-、-SO2-、-NR6-或-NR6CO-；优选R6为氢；优选R5选自由一个或更多个A任选取代的C1-6烷基或由一个或更多个D任选取代的苯基。
更优选在组ii)中，X1为-S-、-SO-、-SO2-或-NR6CO-；更优选R6为氢；更优选R5选自由一个或更多个A任选取代的C1-4烷基或由一个或更多个D任选取代的苯基。
特别优选在组ii)中，X1为-S-或-NR6CO-；特别优选R6为氢；特别优选R5选自由一个或更多个A任选取代的甲基、由一个或更多个A任选取代的乙基或由一个或更多个D任选取代的苯基。在本发明的另一方面，其中R2选自组ii)优选在组ii)中，X1为-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-NR6-或-NR6CO-；优选R6为氢；优选R5选自由一个或更多个A任选取代的C1-6烷基、由一个或更多个D任选取代的苯基或由一个或更多个D任选取代的苯基C1-6烷基。
更优选在组ii)中，X1为-O-、-S-、-SO-、-SO2-或-NR6CO-；更优选R6为氢；更优选R5选自由一个或更多个A任选取代的C1-4烷基、由一个或更多个D任选取代的苯基或由一个或更多个D任选取代的苯基C1-4烷基。其中R2选自组iii)优选组iii)为在环碳上由一个或更多个D任选取代的氮-连接的5或6元杂环基，且其中如果所述杂环基含有-NH-部分，则该氮可由选自G的基团任选取代；更优选组iii)为在环碳上由一个或更多个D任选取代的氮-连接的6元杂环基，且其中如果所述杂环基含有-NH-部分，则该氮可由选自G的基团任选取代；特别优选组iii)为在环碳上由一个或更多个D任选取代的吗啉基、在环碳上由一个或更多个D任选取代的哌啶-1-基或在环碳上由一个或更多个D任选取代的并在-NH-部分上由选自G的基团任选取代的哌嗪-1-基。在本发明的另一方面，其中R2选自组iii)特别优选组iii)为在环碳上由一个或更多个D任选取代的吗啉基、在环碳上由一个或更多个D任选取代的硫代吗啉基、在环碳上由一个或更多个D任选取代的哌啶-1-基或在环碳上由一个或更多个D任选取代的并在-NH-部分上由选自G的基团任选取代的哌嗪-1-基。
更特别优选组iii)为硫代吗啉基。在本发明的另一方面，其中R2选自组iii)特别优选组iii)为在-NH-部分上由选自G的基团任选取代的吗啉基、硫代吗啉基、1-氧硫代吗啉基、1，1-二氧硫代吗啉基或哌嗪-1-基。
优选A为羟基、氨基、卤代基、羧基和甲氧基。
更优选A为羟基。
在本发明的另一方面，优选A为羟基、氨基、二甲基氨基、卤代基、羧基和甲氧基。
在本发明的另一方面，更优选A为羟基、甲氧基和二甲基氨基。
在本发明的另一方面，优选A为羟基、氨基、二甲基氨基、卤代基、羧基、甲氧基和氨基甲酰基。其中D选自组i)优选Xa在组i)中为-S-、-SO-、-SO2-、-NRd-、-NRdCONRe-或-CONRd-；优选Rd为氢或由一个或更多个羟基任选取代的C1-4烷基；和优选Rc选自氢或由一个或更多个羟基任选取代的C1-6烷基。
更优选Xa在组i)中为-S-、-SO-、-SO2-、-NRd-或-CONRd-；更优选Rd为氢、由羟基任选取代的甲基或乙基；更优选Rc选自氢或由一个或更多个羟基任选取代的C1-4烷基。
更优选Xa在组i)中为-SO-、-SO2-、-NRd-或-CONRd-；更优选Rd为氢、由羟基任选取代的甲基或乙基；更优选Rc选自氢、由羟基任选取代的甲基或乙基。在本发明的另一方面，其中D选自组i)优选Xa在组i)中为-SO-、-SO2-、-NRd-或-CONRd-；更优选Rd为氢、由羟基任选取代的甲基或乙基；更优选Rc选自氢、由羟基任选取代的甲基、乙基或丁基。其中D选自ii)优选组ii)为在环碳上由一个或更多个选自羟基、卤代基、C1-4烷氧基、C1-4烷基或氰基的基团任选取代的5或6元Het，且其中如果所述5或6元Het含有-NH-部分，则氮可由选自G的基团任选取代。
更优选组ii)为在环碳上由一个或更多个选自羟基、卤代基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基或氰基的基团任选取代的5或6元Het，且其中如果所述5或6元Het含有-NH-部分，则该氮可由选自G的基团任选取代。
特别优选组ii)为在-NH-部分上由选自G的基团任选取代的吗啉代、吗啉基、哌啶基或哌嗪基。其中D选自组iii)优选组iii)为-Xa-C2-4烷基-Xb-Rc，其中Xa和Rc如此前所定义和Xb优选为-SO-或-SO2-。其中D选自组iv)优选组iv)为氰基、氟或氯；更优选组iv)为氟或氯；在本发明的另一方面，其中D选自组iv)优选组iv)为氟。
其中D选自基团v)优选Xc为-C(O)-和Rf为由羟基任选取代的氮连接的4-6元杂环基。
更优选Xc为-C(O)-和Rf为由羟基任选取代的氮杂环丁烷基、吗啉基或吡咯烷基。
特别优选Xc为-C(O)-和Rf为氮杂环丁烷基、吗啉基或3-羟基吡咯烷基。
优选G为由一个或更多个A任选取代的C1-6链烷酰基或由一个或更多个A任选取代的C1-6烷基。
更优选G为由一个或更多个A任选取代的C1-4链烷酰基或由一个或更多个A任选取代的C1-4烷基。
特别优选G为由一个或更多个A取代的乙酰基或C2-4烷基。
更特别优选G为乙酰基。
优选R2为氯、氟、甲硫基、乙酰基氨基、羟基、C1-4烷基亚硫酰基(任选由羟基取代)、C1-4烷基磺酰基(任选由羟基取代)、苯基磺酰基[任选由卤代基、氨基、N-(C1-4烷基)2氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-(C1-4烷基)氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-(C1-4烷基)氨基(任选由羟基取代)、N-(C1-4烷基)2氨基(任选由羟基取代)、C1-4烷基亚硫酰基(任选由羟基取代)、C1-4烷基磺酰基(任选由羟基取代)、4-乙酰基哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基、4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基、4-(3-羟基丙基)哌嗪-1-基或4-(2-羟基丙基)哌嗪-1-基取代]、吡啶基磺酰基[任选由卤代基、氨基、N-(C1-4烷基)2氨基(任选由羟基取代)、N-(C1-4烷基)2氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-(C1-4烷基)氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-(C1-4烷基)氨基(任选由羟基取代)、C1-4烷基亚硫酰基(任选由羟基取代)、C1-4烷基磺酰基(任选由羟基取代)、4-乙酰基哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基、4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基、4-(3-羟基丙基)哌嗪-1-基或4-(2-羟基丙基)哌嗪-1-基取代]、N-(C1-4烷基)氨基(任选由羟基取代)、吗啉基、4-乙酰基哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基、4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基、4-(3-羟基丙基)哌嗪-1-基或4-(2-羟基丙基)哌嗪-1-基。
更优选R2为氯、氟、甲硫基、乙酰基氨基、羟基、甲基亚硫酰基、乙基亚硫酰基(任选由羟基取代)、甲磺酰基、乙基磺酰基(任选由羟基取代)、苯基磺酰基[任选由卤代基、氨基、N，N-二甲基氨基甲酰基、N，N-二乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)、甲基氨基、乙基氨基(任选由羟基取代)、N，N-二甲基氨基、N，N-二乙基氨基(任选由羟基取代)、N-甲基-N-乙基氨基(任选由羟基取代)、甲基亚硫酰基、乙基亚硫酰基(任选由羟基取代)、甲磺酰基、乙基磺酰基(任选由羟基取代)、4-乙酰基哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基、4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基、4-(3-羟基丙基)哌嗪-1-基或4-(2-羟基丙基)哌嗪-1-基取代]、吡啶基磺酰基[任选由卤代基、氨基、N，N-二甲基氨基甲酰基、N，N-二乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N，N-二甲基氨基、N，N-二乙基氨基(任选由羟基取代)、N-甲基-N-乙基氨基(任选由羟基取代)、甲基亚硫酰基、乙基亚硫酰基(任选由羟基取代)、甲基氨基、乙基氨基(任选由羟基取代)、甲磺酰基、乙基磺酰基(任选由羟基取代)、4-乙酰基哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基、4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基、4-(3-羟基丙基)哌嗪-1-基或4-(2-羟基丙基)哌嗪-1-基取代]、甲基氨基、乙基氨基(任选由羟基取代)、吗啉基、4-乙酰基哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基、4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基、4-(3-羟基丙基)哌嗪-1-基或4-(2-羟基丙基)哌嗪-1-基。
特别优选R2为氯、氟、甲硫基、乙酰基氨基或羟基。
在本发明的另一个方面，优选R2为氯、氟、溴、碘、硝基、氨基、甲硫基、乙酰基氨基、羟基、C1-4烷硫基(sulphanyl)(任选由羟基取代)、C1-4烷基亚硫酰基(任选由羟基取代)、C1-4烷基磺酰基(任选由羟基取代)、N-(C1-4烷基)氨基(任选由羟基、甲氧基或二甲基氨基取代)、苯基磺酰基[任选由卤代基、氨基、N-(C1-4烷基)2氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-(C1-4烷基)氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-(C1-4烷基)氨基(任选由羟基取代)、N-(C1-4烷基)2氨基(任选由羟基取代)、C1-4烷基亚硫酰基(任选由羟基取代)、C1-4烷基磺酰基(任选由羟基取代)、4-乙酰基哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基、4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基、4-(3-羟基丙基)哌嗪-1-基或4-(2-羟基丙基)哌嗪-1-基取代]、吡啶基磺酰基[任选由卤代基、氨基、N-(C1-4烷基)2氨基(任选由羟基取代)、N-(C1-4烷基)2氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-(C1-4烷基)氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-(C1-4烷基)氨基(任选由羟基取代)、C1-4烷基亚硫酰基(任选由羟基取代)、C1-4烷基磺酰基(任选由羟基取代)、4-乙酰基哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基、4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基、4-(3-羟基丙基)哌嗪-1-基或4-(2-羟基丙基)哌嗪-1-基取代]、N-(C1-4烷基)氨基(任选由羟基取代)、吗啉基、4-乙酰基哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基、4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基、4-(3-羟基丙基)哌嗪-1-基或4-(2-羟基丙基)哌嗪-1-基取代]、硫代吗啉基、苯硫基(任选由N-(C1-4烷基)2氨基甲酰基取代)或苯基亚硫酰基(任选由N-(C1-4烷基)2氨基甲酰基取代)。
在本发明的另一方面，优选R2为氯、氟、溴、碘、硝基、羟基、氨基、甲硫基、乙酰基氨基、C1-4烷硫基(任选由羟基取代)、C1-4烷基亚硫酰基、C1-4烷基磺酰基、N-(C1-4烷基)氨基(任选由羟基、甲氧基或二甲基氨基取代)、硫代吗啉基、苯硫基(任选由N-(C1-4烷基)2氨基甲酰基取代)或苯基亚硫酰基(任选由N-(C1-4烷基)2氨基甲酰基取代)。
在本发明的另一方面，更优选R2为氯、氟、溴、碘、硝基、氨基、甲基硫代(methylthio)、乙酰基氨基、羟基、甲硫基(methylsulphanyl)、乙硫基(任选由羟基取代)、甲基亚硫酰基、乙基亚硫酰基(任选由羟基取代)、甲磺酰基、乙基磺酰基(任选由羟基取代)、甲基氨基、乙基氨基(任选由羟基、甲氧基或二甲基氨基取代)、苯基磺酰基[任选由卤代基、氨基、N，N-二甲基氨基甲酰基、N，N-二乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)、甲基氨基、乙基氨基(任选由羟基取代)、N，N-二甲基氨基、N，N-二乙基氨基(任选由羟基取代)、N-甲基-N-乙基氨基(任选由羟基取代)、甲基亚硫酰基、乙基亚硫酰基(任选由羟基取代)、甲磺酰基、乙基磺酰基(任选由羟基取代)、4-乙酰基哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基、4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基、4-(3-羟基丙基)哌嗪-1-基或4-(2-羟基丙基)哌嗪-1-基取代]、吡啶基磺酰基[任选由卤代基、氨基、N，N-二甲基氨基甲酰基、N，N-二乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N，N-二甲基氨基、N，N-二乙基氨基(任选由羟基取代)、N-甲基-N-乙基氨基(任选由羟基取代)、甲基亚硫酰基、乙基亚硫酰基(任选由羟基取代)、甲基氨基、乙基氨基(任选由羟基取代)、甲磺酰基、乙基磺酰基(任选由羟基取代)、4-乙酰基哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基、4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基、4-(3-羟基丙基)哌嗪-1-基或4-(2-羟基丙基)哌嗪-1-基取代]、甲基氨基、乙基氨基(任选由羟基取代)、吗啉基、4-乙酰基哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基、4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基、4-(3-羟基丙基)哌嗪-1-基或4-(2-羟基丙基)哌嗪-1-基、硫代吗啉基或苯硫基[任选由N，N-二甲基氨基甲酰基、N，N-二乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)取代]。
在本发明的另一方面，特别优选R2为氟、氯、溴、碘、硝基、氨基、羟基、甲基硫代、乙基亚硫酰基、甲磺酰基、2-羟基乙基氨基、2-甲氧基乙基氨基、2-二甲基氨基乙基氨基、2，3-二羟基丙基氨基、2-羟基乙硫基、乙酰氨基、4-N，N-二甲基氨基甲酰基苯硫基、4-N，N-二甲基氨基甲酰基苯基亚硫酰基或硫代吗啉基。
在本发明的另一方面，优选R2为氯、氟、溴、碘、硝基、氨基、甲氧基、乙酰基氨基、羟基、C1-4烷硫基(任选由羟基取代)、C1-4烷基亚硫酰基、C1-4烷基磺酰基、N-(C1-4烷基)氨基(任选由羟基、甲氧基、二甲基氨基或氨基甲酰基取代)、吗啉基、4-乙酰基哌嗪-1-基、硫代吗啉基、1-氧硫代吗啉基、1，1-二氧硫代吗啉基、苄基氨基、苯氧基、苯硫基(任选由N-(C1-4烷基)2氨基甲酰基取代)或苯基亚硫酰基(任选由N-(C1-4烷基)2氨基甲酰基取代)。
在本发明的另一方面，更优选R2为氯、氟、溴、碘、硝基、氨基、甲氧基、乙酰基氨基、羟基、甲基硫代、2-羟基乙基硫代、甲基亚硫酰基、甲磺酰基、2-羟基乙基氨基、2-甲氧基乙基氨基、氨基甲酰基甲基氨基、2-二甲基氨基乙基氨基、2，3-二羟基丙基氨基、吗啉基、4-乙酰基哌嗪-1-基、硫代吗啉基、1-氧硫代吗啉基、1，1-二氧硫代吗啉基、苄基氨基、苯氧基、4-(N，N-二甲基氨基甲酰基)苯硫基或4-(N，N-二甲基氨基甲酰基)苯基亚硫酰基。
在本发明的另一方面，特别优选R2为甲基硫代、吗啉基、4-乙酰基哌嗪-1-基、1-氧硫代吗啉基或1，1-二氧硫代吗啉基。
在本发明的另一方面，更优选R2为氨基、2-羟基乙基氨基或2-甲氧基乙基氨基。
在本发明的另一方面，更优选R2为氟或氯。
优选R3为由一个或更多个A任选取代的C1-6烷基、由一个或更多个D任选取代的苯基或在环碳上由一个或更多个D任选取代的碳连接的含1-2个氮原子的6元杂芳基环。
更优选R3为由一个或更多个A任选取代的C1-4烷基、由一个或更多个D任选取代的苯基或在环碳上由一个或更多个D任选取代的碳连接的吡啶基。
特别优选R3为由一个或更多个A任选取代的甲基、由一个或更多个A任选取代的乙基、由一个或更多个D任选取代的苯基或在环碳上由一个或更多个D任选取代的碳连接的吡啶基。
特别优选R3为甲基、由A任选取代的乙基、由一个或更多个D任选取代的苯基或在环碳上由一个或更多个D任选取代的碳连接的吡啶基。
因此，在本发明的另一方面，优选R3为由一个或更多个羟基任选取代的C1-4烷基、苯基[任选由卤代基、氨基、N-(C1-4烷基)2氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-(C1-4烷基)氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-(C1-4烷基)氨基(任选由羟基取代)、N-(C1-4烷基)2氨基(任选由羟基取代)、C1-4烷基亚硫酰基(任选由羟基取代)、C1-4烷基磺酰基(任选由羟基取代)、4-乙酰基哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基、4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基、4-(3-羟基丙基)哌嗪-1-基或4-(2-羟基丙基)哌嗪-1-基取代]或碳连接的吡啶基[任选由卤代基、氨基、N-(C1-4烷基)2氨基(任选由羟基取代)、N-(C1-4烷基)2氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-(C1-4烷基)氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-(C1-4烷基)氨基(任选由羟基取代)、C1-4烷基亚硫酰基(任选由羟基取代)、C1-4烷基磺酰基(任选由羟基取代)、4-乙酰基哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基、4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基、4-(3-羟基丙基)哌嗪-1-基或4-(2-羟基丙基)哌嗪-1-基取代]。
特别优选R3为甲基、由羟基任选取代的乙基、苯基[任选由卤代基、氨基、N，N-二甲基氨基甲酰基、N，N-二乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)、甲基氨基、乙基氨基(任选由羟基取代)、N，N-二甲基氨基、N，N-二乙基氨基(任选由羟基取代)、N-甲基-N-乙基氨基(任选由羟基取代)、甲基亚硫酰基、乙基亚硫酰基(任选由羟基取代)、甲磺酰基、乙基磺酰基(任选由羟基取代)、4-乙酰基哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基、4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基、4-(3-羟基丙基)哌嗪-1-基或4-(2-羟基丙基)哌嗪-1-基取代]或碳连接的吡啶基[任选由卤代基、氨基、N，N-二甲基氨基甲酰基、N，N-二乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)、甲基氨基、乙基氨基(任选由羟基取代)、N，N-二甲基氨基、N，N-二乙基氨基(任选由羟基取代)、N-甲基-N-乙基氨基(任选由羟基取代)、甲基亚硫酰基、乙基亚硫酰基(任选由羟基取代)、甲磺酰基、乙基磺酰基(任选由羟基取代)、4-乙酰基哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基、4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基、4-(3-羟基丙基)哌嗪-1-基或4-(2-羟基丙基)哌嗪-1-基取代]。
更特别优选R3为甲基、由羟基任选取代的乙基或苯基(任选由卤代基取代)。
特别优选R3为乙基或4-氟代苯基。
因此，在本发明的另一方面，优选R3为C1-4烷基(任选由一个或更多个羟基取代)、苯基[任选由卤代基、氨基、N-(C1-4烷基)2氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-(C1-4烷基)氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-(C1-4烷基)氨基(任选由羟基取代)、N-(C1-4烷基)2氨基(任选由羟基取代)、C1-4烷基亚硫酰基(任选由羟基取代)、C1-4烷基磺酰基(任选由羟基取代)、4-乙酰基哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基、4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基、4-(3-羟基丙基)哌嗪-1-基、4-(2-羟基丙基)哌嗪-1-基、氮杂环丁烷基羰基、吗啉基羰基或吡咯烷基羰基(任选由羟基取代)取代]或碳连接的吡啶基[任选由卤代基、氨基、N-(C1-4烷基)2氨基(任选由羟基取代)、N-(C1-4烷基)2氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-(C1-4烷基)氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-(C1-4烷基)氨基(任选由羟基取代)、C1-4烷基亚硫酰基(任选由羟基取代)、C1-4烷基磺酰基(任选由羟基取代)、4-乙酰基哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基、4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基、4-(3-羟基丙基)哌嗪-1-基或4-(2-羟基丙基)哌嗪-1-基取代]。
因此，在本发明的另一方面，优选R3为C1-4烷基(任选由一个或更多个羟基取代)、苯基[任选由卤代基、N-(C1-4烷基)2氨基甲酰基、N-(C1-4烷基)氨基甲酰基、N-(C1-4烷基)氨基(任选由羟基取代)、C1-4烷基磺酰基、氮杂环丁烷基羰基、吗啉基羰基或吡咯烷基羰基(任选由羟基取代)取代]或碳连接的吡啶基[任选由氨基取代]。
特别优选R3为甲基、乙基(优选由羟基取代)、丁基(优选由羟基取代)、苯基[任选由卤代基、氨基、N，N-二甲基氨基甲酰基、N，N-二乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)、甲基氨基、乙基氨基(任选由羟基取代)、N，N-二甲基氨基、N，N-二乙基氨基(任选由羟基取代)、N-甲基-N-乙基氨基(任选由羟基取代)、甲基亚硫酰基、乙基亚硫酰基(任选由羟基取代)、甲磺酰基、乙基磺酰基(任选由羟基取代)、4-乙酰基哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基、4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基、4-(3-羟基丙基)哌嗪-1-基、4-(2-羟基丙基)哌嗪-1-基、氮杂环丁烷基羰基、吗啉基羰基或吡咯烷基羰基(任选由羟基取代)取代]或碳连接的吡啶基[任选由卤代基、氨基、N，N-二甲基氨基甲酰基、N，N-二乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基(任选由羟基取代)、甲基氨基、乙基氨基(任选由羟基取代)、N，N-二甲基氨基、N，N-二乙基氨基(任选由羟基取代)、N-甲基-N-乙基氨基(任选由羟基取代)、甲基亚硫酰基、乙基亚硫酰基(任选由羟基取代)、甲磺酰基、乙基磺酰基(任选由羟基取代)、4-乙酰基哌嗪-1-基、4-甲基哌嗪-1-基、4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基、4-(3-羟基丙基)哌嗪-1-基或4-(2-羟基丙基)哌嗪-1-基取代]。
更特别优选R3为甲基、乙基、2-羟基乙基、2-羟基丁基、4-氟代苯基、4-甲磺酰基苯基、4-(2-羟基乙基氨基)苯基、4-(N-甲基氨基甲酰基)苯基、4-(N-乙基氨基甲酰基)苯基、4-(N，N-二甲基氨基甲酰基)苯基、4-(N-甲基-N-乙基氨基甲酰基)苯基、4-(氮杂环丁烷基羰基)苯基、4-(吗啉基羰基)苯基、4-(3-羟基吡咯烷基羰基)苯基或6-氨基吡啶-2-基。
在本发明的另一方面，特别优选R3为甲基、乙基(任选由羟基取代)、异丙基、丁基(任选由羟基取代)、苯基[任选由卤代基、N，N-二甲基氨基甲酰基、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基、乙基氨基(任选由羟基取代)、甲磺酰基、氮杂环丁烷基羰基、吗啉基羰基或吡咯烷基羰基(任选由羟基取代)取代]或碳连接的吡啶基[任选由氨基取代]。
在本发明的另一方面，更特别优选R3为甲基、乙基、2-羟基乙基、异丙基、2-羟基丁基、4-氟代苯基、4-(2-羟基乙基氨基)苯基、4-甲磺酰基苯基、4-(N，N-二甲基氨基甲酰基)苯基、4-(N-乙基氨基甲酰基)苯基、4-(N-甲基-N-乙基氨基甲酰基)苯基、4-(N-甲基氨基甲酰基)苯基、4-(氮杂环丁烷基羰基)苯基、4-(吗啉基羰基)苯基、4-(3-羟基吡咯烷基羰基)苯基或2-氨基吡啶-6-基。
在本发明的另一方面，更特别优选R3为甲基、乙基或异丙基。
在本发明的另一方面，更特别优选R3为4-(N-甲基氨基甲酰基)苯基或4-(N，N-二甲基氨基甲酰基)苯基。
在本发明的另一方面，尤其特别优选R3为4-(N，N-二甲基氨基甲酰基)苯基。
在本发明的一个方面，优选R4为氢。
在本发明的另一方面，优选R4为氟。
在-C(OH)(Me)(CF3)手性中心，R-构型一般为优选的立体化学。
因此，在本发明的另一方面，提供式(I)的化合物(如上所述)或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯，其中n为1或2；R1为甲基、氯或氟；R2为氯、氟、溴、碘、硝基、氨基、甲氧基、乙酰基氨基、羟基、C1-4烷硫基(任选由羟基取代)、C1-4烷基亚硫酰基、C1-4烷基磺酰基、N-(C1-4烷基)氨基(任选由羟基、甲氧基、二甲基氨基或氨基甲酰基取代)、吗啉基、4-乙酰基哌嗪-1-基、硫代吗啉基、1-氧硫代吗啉基、1，1-二氧硫代吗啉基、苄基氨基、苯氧基、苯硫基(任选由N-(C1-4烷基)2氨基甲酰基取代)或苯基亚硫酰基(任选由N-(C1-4烷基)2氨基甲酰基取代)；R3为甲基、乙基(任选由羟基取代)、异丙基、丁基(任选由羟基取代)、苯基[任选由卤代基、N，N-二甲基氨基甲酰基、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基、乙基氨基(任选由羟基取代)、甲磺酰基、氮杂环丁烷基羰基、吗啉基羰基或吡咯烷基羰基(任选由羟基取代)取代]或碳连接的吡啶基[任选由氨基取代]；和R4为氢。
因此，在本发明的另一方面，提供式(I)的化合物(如上所述)或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯，其中n为2；R1为氯；R2为甲基硫代、吗啉基、4-乙酰基哌嗪-1-基、1-氧硫代吗啉基或1，1-二氧硫代吗啉基；R3为甲基、乙基或异丙基；R4为氢。
本发明的优选化合物为实施例中的任何一个化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯。
本发明的更优选的化合物为实施例7、8、22、23、24、28、48、64、69、70、74、75的化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯。
在本发明的另一方面，本发明的更优选的化合物为实施例32、35和61的化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯。
在本发明的另一方面，本发明的更优选的化合物为实施例17、18和58的化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯。
本发明的优选方面为涉及所述化合物或其药学上可接受的盐的方面。
应该理解，在本发明内，式(I)化合物或其盐可以显示互变异构现象而在本说明书中的结构式图只能表示可能的互变异构形式中的一种。应该理解，本发明包括任何升高PDH活性的互变异构形式，并不仅仅限于结构式图中所采用的任何一种互变异构形式。本说明书中的结构式图只能表示可能的互变异构形式中的一种，但应该理解，本说明书包括所示化合物的所有可能的互变异构形式，而不仅仅是在此可能用图显示的这些形式。
本领域技术人员应该理解，某些式(I)化合物含有一种或更多种不对称取代的碳和/或硫原子，因此，可以以对映体纯的形式、非对映异构体的混合物或作为外消旋体的形式存在。某些化合物可以显示出多晶现象。应该理解，本发明包括任何外消旋的、旋光性的、对映体纯的、非对映异构体混合物、多晶性的或立体异构体形式或其混合物，它们具有用于升高PDH活性的特性，如何制备旋光性的形式(例如，通过重结晶技术拆分外消旋体，经旋光性原料合成，经手性合成，经酶拆分，(如WO 9738124)，通过生物转化，或采用手性固定相经层析分离)和如何通过下文描述的标准试验测定PDH活性升高的效果是本领域众所周知的。
还应该理解，某些式(I)化合物及其盐可以以溶剂化物及非溶剂化物的形式，例如，水合物的形式存在。应该理解，本发明包括所有这些升高PDH活性的溶剂化物的形式。
式(I)化合物或其盐，及本发明的其它化合物(如下文定义)可通过已知用于制备化学上有关的化合物的任何方法制备。此类方法包括，例如，在欧洲专利申请公布号0524781、0617010、0625516和在GB2278054、WO 9323358和WO9738124中说明的那些方法。
本发明的另一方面提供制备式(I)化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯的方法，该方法(其中除非另外指明，各种基团如对式(I)化合物所定义)包括(a)使保护的式(II)化合物去保护 其中Pg为醇保护基团；(b)氧化式(III)化合物 (c)使式(IV)化合物 与式(V)的酸偶合 其中X是OH；(d)使式(IV)的苯胺与式(V)的活化的酸衍生物偶合；其后，如果需要i)将式(I)化合物转化为另一种式(I)化合物；ii)除去任何保护基团；或iii)形成药学上可接受的盐或体内可水解的酯。
Pg的适宜的涵义为苄基、甲硅烷基(例如三烷基甲硅烷基或烷基二苯基甲硅烷基)或乙酰基保护基团。
其中式(V)是一种活化的酸衍生物，X的适宜的涵义包括卤代基(例如氯或溴)、酸酐、芳氧基(如4-硝基苯氧基或五氟苯氧基)或咪唑-1-基。
上述反应的具体条件如下方法a)用于式(II)的醇去保护的合适的试剂的实例为1)当Pg为苄基时i)在钯/碳催化剂存在下的氢，即氢解；或ii)溴化氢或碘化氢；2)当Pg为甲硅烷基保护基团时i)氟化四丁基铵；或ii)氢氟酸水溶液；3)当Pg为乙酰基时i)碱如氢氧化锂的温和的水溶液；或ii)氨或胺如二甲胺。
该反应可在合适的溶剂如乙醇、甲醇、乙腈或DMSO中进行并可在-40至100℃的温度范围内方便地进行。
根据下面的流程可制备式(II)化合物 流程1E为羧基保护基团。E的适宜的涵义包括C1-6烷基，如甲基和乙基。
式(IIa)化合物为可市售获得的化合物，或者它们是文献中已知的，或者它们可通过本领域已知的标准方法制备。式(IV)化合物的合成描述如下。方法b)合适的氧化剂包括高锰酸钾、OXONE、高碘酸钠、过氧化氢叔丁基(如在甲苯中溶液)、过酸(如3-氯过苯甲酸)、过氧化氢、TPAP(过钌酸四丙基铵)或氧。该反应可在合适的溶剂如乙醚、DCM、甲醇、乙醇、水、乙酸或这些溶剂的两种或两种以上的混合物中进行。该反应可在-40至100℃的温度范围内方便地进行。
根据下面的流程可制备式(III)化合物 流程2具有本专业知识的读者将能理解，流程2中的步骤1和2的顺序可以颠倒。 流程3其中M为碱金属。M的合适的涵义包括锂、钠或钾。X为离去基团，X的适宜的涵义包括卤代基、甲磺酰基和对甲苯磺酰基。 流程4X为离去基团，X的适宜的涵义包括卤代基、甲磺酰基和对甲苯磺酰基。
式(IIIa)和式(IIId)化合物为可市售获得的化合物，或者它们是文献中已知的，或者它们可通过本领域已知的标准方法制备。方法c)该反应可在合适的偶合剂存在下进行。本领域已知的标准肽偶合剂可以用作合适的偶合剂，例如，如在上面用于(IId)和(IV)的偶合所描述的那些条件，或者例如二环己基碳二亚胺，任选在催化剂如二甲基氨基吡啶或4-吡咯烷基吡啶的存在下，任选在碱如三乙胺、吡啶或2，6-二烷基-吡啶(如2，6-二甲基吡啶或2，6-二叔丁基吡啶)或2，6-二苯基吡啶的存在下进行。合适的溶剂包括DMA、DCM、苯、THF和DMF。该偶合反应可在-40至40℃的温度范围内方便地进行。
式(IV)化合物为可市售获得的化合物，或者它们是文献中已知的，或者它们可通过本领域已知的标准方法制备，例如，它们可通过在标准氧化条件下，例如，使用过氧化氢或间-氯过苯甲酸(随后去保护)氧化式(IIIf)化合物(用合适的保护基团保护的苯胺)制备，或者它们可根据下面的流程制备 流程5式(IVa)和式(V)化合物为可市售获得的化合物，或者它们是文献中已知的，或者它们可通过本领域已知的标准方法制备。
如果需要式(V)的拆分的酸，它可通过制备旋光性形式的任何已知方法(例如通过手性盐的重结晶{如WO 9738124}、通过酶拆分或通过使用手性固定相层析分离)制备。例如，如果需要(R)-(+)拆分的酸，它可通过国际专利申请公布号WO 9738124中流程2的用于制备(S)-(-)酸的方法制备，即采用欧洲专利申请公布号EP 0524781中所述的、也是用于制备(S)-(-)酸的典型拆分方法制备，但除了使用(1S，2R)-降麻黄碱替代(S)-(-)-1-苯基乙胺外。通过在Tetrahedron Asymmetry，1999，10，679中所述的酶拆分方法也可制备该手性酸。方法d)这种偶合可任选在碱如三乙胺、吡啶、2，6-二烷基-吡啶(如2，6-二甲基吡啶或2，6-二叔丁基吡啶)或2，6-二苯基吡啶的存在下实现。合适的溶剂包括DMA、DCM、苯、THF和DMF。该偶合反应可在-40至40℃的温度范围内方便地进行。
如果不能由市售获得，则对于例如上述方法必需的原料可以通过选自标准有机化学技术、类似于合成已知、结构类似的化合物的技术、或类似于上述方法的技术或实施例中描述的方法制备。
例如，应该理解，本发明化合物的某些任选的芳族取代基可通过标准芳族取代反应引入或通过在上述方法之前或之后立即进行常规官能团修饰或相互转换而生成，例如包括在本发明的方法中的那些方法。这样的反应和修饰包括，例如，借助芳族取代反应的取代基的引入、取代基的还原、取代基的烷基化和取代基的氧化。用于此类方法的试剂和反应条件是化学领域熟知的。芳族取代反应的具体实例包括用浓硝酸引入硝基，用例如酰卤和Lewis酸(如三氯化铝)在FriedelCrafts条件下引入酰基；用烷基卤和Lewis酸(如三氯化铝)在FriedelCrafts条件下引入烷基；及引入卤代基。修饰的具体实例包括通过例如用镍催化剂的催化氢化或用铁在盐酸存在下(伴随加热)处理进行硝基还原为氨基的反应；在乙酸(伴随加热)或3-氯过苯甲酸中使用例如过氧化氢将烷基硫代氧化为烷基亚硫酰基或烷基磺酰基。官能团相互转换的具体实例为例如在卤化亚铜存在下，通过如重氮化作用将苯胺转化为卤代苯。
应注意到用于如上所述的合成方法的许多原料为可市售获得的和/或是科学文献中所广泛报道的，或者可采用科学文献中报道的方法从市售可获得的化合物制备。
还应该理解，在此提及的某些反应中，保护化合物中的任何敏感基团可能是必须的/需要的。必须或需要保护的实例和合适的保护方法是本领域技术人员已知的。因此，如果反应剂包括诸如氨基、羧基或羟基的基团，在此提及的某些反应中，保护这些基团可能是必需的。
对于氨基或烷基氨基的合适的保护基团为例如酰基，例如，链烷酰基如乙酰基、烷氧基羰基(如甲氧基羰基、乙氧基羰基或叔丁氧基羰基)、芳基甲氧基羰基如苄氧基羰基，或芳酰基如苯甲酰基。对于上述保护基团的去保护条件必须随保护基团的选择而变化。因此，例如，酰基如链烷酰基或烷氧基羰基或芳酰基可以，例如，通过用合适的碱如碱金属氢氧化物如氢氧化锂或氢氧化钠水解脱去。或者，酰基如叔丁氧基羰基可以通过用合适的酸，例如，盐酸、硫酸或磷酸或TFA处理脱去，芳基甲氧基羰基如苄氧基羰基可以，例如，通过在催化剂如披钯碳存在下氢化或通过用Lewis酸如三(三氟乙酸)硼处理脱去。对于伯氨基的合适的替代保护基团为，例如，邻苯二甲酰基，其可通过用烷基胺，例如，二甲基氨基丙胺或用肼处理脱去。
对于羟基的合适的保护基团为，例如，酰基如链烷酰基(如乙酰基、芳酰基如苯甲酰基)或芳基甲基如苄基。对于以上保护基团的去保护条件将必须随着保护基团的选择而变化。因此，例如，酰基如链烷酰基或芳酰基可以，例如，通过用合适的碱如碱金属氢氧化物如氢氧化锂或氢氧化钠水解脱去。或者，芳基甲基如苄基可以，例如，经催化剂如披钯碳存在下的氢化脱去。
对于羧基的适合的保护基团为，例如，酯化基团，例如甲基或乙基，它们可以例如通过用碱如氢氧化钠水解脱去或例如叔丁基，它可以例如通过用酸例如有机酸如TFA处理脱去，或例如苄基，它可以通过经催化剂如披钯碳的氢化脱去。
采用化学领域熟知的常规技术，可以在所述合成的任何方便的阶段除去保护基团。
在式(I)化合物具有足够的碱性或酸性以形成稳定的酸或碱的盐的情况下，给予作为盐的化合物可能是适宜的，而药学上可接受的盐可通过常规方法如以下描述的那些方法制备。合适的药学上可接受的盐的实例为与酸形成的有机酸加成盐，所述酸形成生理学上可接受的阴离子，例如，对甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、α-酮基戊二酸盐和α-甘油磷酸盐。也可以形成合适的无机盐如硫酸盐、硝酸盐和盐酸盐。
采用本领域熟知的标准方法，例如，通过使具有足够碱性的式(I)化合物(或其酯)与提供生理学上可接受的阴离子的合适的酸反应，可以获得药学上可接受的盐。通过在含水介质中用1当量碱金属或碱土金属的氢氧化物或醇盐(如乙醇盐或甲醇盐)处理式(I)化合物(和在某些情况下处理酯)，接着采用常规纯化技术，也可能由本发明的大多数化合物制备相应的碱金属(如钠、钾或锂)或碱土金属(如钙)盐。
可以以前药的形式给予式(I)化合物，前药在人体或动物体内可被裂解而产生式(I)化合物。前药的实例包括式(I)化合物的体内可水解的酯。
含有羧基或羟基的式(I)化合物的体内可水解的酯为，例如，在人体或动物体内可被水解而产生母体酸或醇的药学上可接受的酯。
对于含有羧基的式(I)化合物的适合体内可水解的酯包括C1-6烷氧基甲酯如甲氧基甲基、C1-6链烷酰氧基甲酯如新戊酰氧基甲基、2-苯并[c]呋喃酮基酯、C3-8环烷氧基羰基氧基C1-6烷基酯如1-环己基羰基氧基乙基酯；1，3-二氧杂环戊烯(dioxolen)-2-酮基甲酯如5-甲基-1，3-二氧杂环戊烯-2-酮基甲基酯；和C1-6烷氧基羰基氧基乙酯如1-甲氧基羰基氧基乙基酯，并可在本发明化合物的任何羧基上形成。
含有羟基的式(I)化合物的适合体内可水解的酯包括无机酯如磷酸酯和α-酰氧基烷基醚。α-酰氧基烷基醚的实例包括如乙酰氧基甲氧基和2，2-二甲基丙酰氧基甲氧基。对于羟基来说，其它形成体内可水解的酯的基团包括链烷酰基、苯甲酰基、苯基乙酰基和取代的苯甲酰基和苯基乙酰基、烷氧基羰基(得到烷基碳酸酯)、二烷基氨基甲酰基和N-(二烷基氨基乙基)-N-烷基氨基甲酰基(得到氨基甲酸酯)、二烷基氨基乙酰基和羧基乙酰基。对于苯甲酰基的取代基的实例包括吗啉基和哌嗪基，并通过亚甲基连接其环氮原子于苯甲酰基环的3-或4-位上。
式(I)化合物的体内可裂解的前药也包括含有羧基的式(I)化合物的体内可水解的酰胺，例如，N-C1-6烷基或N-二-C1-6烷基酰胺如N-甲基、N-乙基、N-丙基、N-二甲基、N-乙基-N-甲基或N-二乙基酰胺。
升高PDH活性的化合物的鉴定为本发明的主题。例如，采用下面提出的一种或多种方法可以评价这些特性(a)体外PDH活性的升高这种测定法测定试验化合物升高PDH活性的能力。通过聚合酶链反应(PCR)和随后的克隆可以获得编码PDH激酶的cDNA。这可表达于合适的表达系统中，以获得具有PDH激酶活性的多肽。例如，发现通过在大肠杆菌(E.Coli)中表达重组蛋白所获得的大鼠PDH激酶II(rPDHKII)显示PDH激酶活性。
在rPDHKII(Genbank登记号U10357)的情况下，通过PCR从大鼠肝cDNA分离编码该蛋白的1.3kb片段并克隆到载体(例如pQE32-Quiagen Ltd.)中。将重组构件转化入大肠杆菌(例如M15pRep4-QuiagenLtd.)中。鉴定重组克隆，分离质粒DNA并进行DNA序列分析。选择具有期望的核酸序列的一个克隆用于表达工作。在细菌系统中用于装配重组DNA分子和表达重组蛋白的方法的细节可见标准教科书如Sambrook等，1989，分子克隆-实验室手册，第二版，Cold SpringHarbour Laboratory Press。用于该测定中的其它已知的PDH激酶可以被克隆并以类似的方法表达。
为表达rPDHKII的活性，用含有rPDHKII cDNA的pQE32载体转化大肠杆菌株M15pRep4细胞。该载体将6-His标记物(tag)结合到蛋白质N-末端上。使大肠杆菌生长至0.6(600nM)的光密度，并通过加入10μM异丙基硫代-β-半乳糖苷酶诱导蛋白质表达。使细胞于18℃生长18小时并离心收获。通过均化使再悬浮的细胞浆溶解，经以24000xg离心1小时除去不溶性物质。用经20mM三(羟甲基)氨基甲烷-氯化氢、20mM咪唑、0.5M氯化钠(pH 8.0)洗涤的镍螯合的次氮基三乙酸树脂(Ni-NTAQuiagen Ltd.)基质(Quiagen)从上清液中除去6-His标记的蛋白，然后用含有20mM三(羟甲基)氨基甲烷-氯化氢、200mM咪唑、0.15M氯化钠(pH 8.0)的缓冲液洗脱结合的蛋白。合并含6-His蛋白的洗脱部分，并以在10％甘油中的等分液于-80℃贮存。
对测定中的每批新的贮备酶(stock enzyme)进行滴定，以确定在该测定条件下产生PDH约90％抑制的浓度。对代表性的批，贮备酶稀释至7.5μg/ml。
为测定新化合物的活性，用10％DMSO稀释化合物并取10μl转移至96-孔测定板的各孔中。对照孔含有20μl 10％DMSO以代替化合物。在PDH激酶的存在下，将含有50mM磷酸钾缓冲液(pH 7.0)、10mM乙二醇-双(β-氨基乙醚)-N，N-四乙酸(EGTA)、1mM苄脒、1mM苯甲基磺酰氟(PMSF)、0.3mM对甲苯磺酰基-L-赖氨酸氯代甲基酮(TLCK)、2mM二硫苏糖醇(DTT)、重组rPDHKII和化合物的40μl缓冲液于室温下温育45分钟。为测定PDH反应的最大速率，第二系列的对照孔含有10％DMSO以代替化合物，并省略rPDHKII。然后通过加入在总体积50μl中的5μM ATP、2mM氯化镁和0.04U/ml PDH(猪心PDH，SigmaP7032)诱发PDG激酶活性，将测定板于室温下温育另外45分钟。再通过加入底物(在总体积80μl中的2.5mM辅酶A、2.5mM硫胺素焦磷酸素(辅羧酶)、2.5mM丙酮酸钠、6mM NAD)测定PDH的残留活性，然后将测定板于室温下温育90分钟。使用板读出分光仪，经测量340nm处的光密度，确立还原的NAD(NADH)的产生。用来自12种浓度的化合物的结果，以常规方法测定试验化合物的ED50。(b)分离的原代细胞的体外PDH活性的升高这种测定法测定化合物在大鼠原代肝细胞中刺激丙酮酸氧化的能力。
通过Seglen(方法ods Cell Biol.(1976)13，29-33)所述的两步胶原酶消化法分离肝细胞，并铺于6-孔培养板(Falcon Primaria)中，每孔含有在Dulbecco’s改良Eagles培养基(DMEM，Gibco BRL)(含10％胎牛血清(FCS)、10％青霉酸/链酶素(Gibco BRL)和10％非-必需氨基酸(NEAA，Gibco BRL))中的600000活细胞。于37℃、5％二氧化碳下温育4小时后，用含有除10nM地塞米松和10nM胰岛素外，还含有如上的NEAA和青霉酸/链酶素的极限必需培养基(MEM，Gibco BRL)替换该培养基。
第二天，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤细胞，用含有在0.1％DMSO中的所需浓度的待测化合物的1mlHEPES-缓冲的Krebs溶液(25mMHEPES、0.15M氯化钠、25mM碳酸氢钠、5mM氯化钾、2mM氯化钙、1mM硫酸镁、1mM磷酸二氢钾)替换培养基。对照孔仅含有0.1％DMSO，用10μM已知的活性化合物处理，测定最大应答。于37℃、5％二氧化碳下，经40分钟的预温育后，用丙酮酸钠脉冲调节细胞至0.5mM的终浓度(含1-14C丙酮酸钠(Amersham产品CFA85)0.18Ci/mmol)12分钟。然后除去培养基并转移至一试管中，用含保留(suspended)中心孔的塞子立即密封该试管。用50％苯基乙胺饱和在中心孔中的吸附剂，通过加入0.2μl 60％(w/v)高氯酸(PCA)释放培养基中的二氧化碳。经液体闪烁计数测定吸附剂中捕获的释放的14CO2。用来自7种浓度的化合物的结果，以常规方法测定试验化合物的ED50。(c)体内PDH活性的升高化合物在大鼠相关组织中增加PDH活性的能力可采用下文所述的试验测定。典型地，PDH以其活性的、非磷酸化形式的比例的增加可在单次给予活性化合物后，在肌肉、心、肝和脂肪组织中检测到。在重复给予该化合物后，可以期望这将导致血葡萄糖的降低。例如，以150mg/kg腹腔内单次给予DCA，一种已知通过抑制PDH激酶激活PDH的化合物(Whitehouse，Cooper and Randle(1974)Biochem.J.141，761-774)，可增加为它的活性形式的PDH的比例(Vary等(1988)Circ.Shock 24，3-18)，在重复给药后引起血浆葡萄糖的明显降低(Evans andStacpoole(1982)Biochem.Phamacol.31，1295-1300)。
用单剂量或多剂量的在合适的溶媒中的所关注的化合物经口管饲处理各组大鼠(体重范围140-180g)。对照组的大鼠仅用溶媒处理。在预定的时间，在最后给予化合物后，最终麻醉动物，取出组织并用液氮冷冻。为测定PDH活性，在液氮中碎裂肌肉样品，然后在4体积的缓冲液(含有40mM磷酸钾(pH 7.0)、5mM EDTA、2mM DTT、1％Triton X-100、10mM丙酮酸钠、10μM苯基甲磺酰氯(PMSF)以及亮抑酶肽、胃酶抑制剂A和抑酶肽各2μg/ml)中，在Polytron匀浆器中经1个30秒钟的裂解均化。在测定前离心提取物。通过Siess和Wieland(Eur.J.Biochem(1972)26，96)的方法，用从猪心制备的PDH磷酸酶处理一部分提取物20μl提取物、40μl磷酸酶(1∶20稀释液)，以终体积125μl(含有25mM氯化镁、1mM氯化钙)。将未处理的样品的活性与如此制备的去磷酸化提取物的活性比较。通过Stansbie等(Biochem.J.(1976)154，225)的方法测定PDH活性。在20μg/ml对-(对-氨基-苯基偶氮)苯磺酸(AABS)和50mU/ml芳基胺转移酶(AAT)的存在下，在含有100mM三(羟甲基)氨基甲烷、0.5mM EDTA、50mM氟化钠、5mM 2-巯基乙醇和1mM氯化镁(pH 7.8)的缓冲液中，将50μl提取物与0.75mM NAD、0.2mM辅酶A、1.5mM硫胺素焦磷酸(TPP)和1.5mM丙酮酸钠一起温育。通过Tabor等(J.Biol.Chem.(1953)204，127)的方法，从鸽肝制备AAT。通过AABS的还原率测定乙酰辅酶A的形成率，而AABS的还原率则是通过在460nm处的光密度的降低来指示的。
通过基本类似的方法制备肝样品，但在提取缓冲液中不包括丙酮酸钠，并加入到磷酸酶温育物中，以达到5mM的终浓度。
用活性化合物处理动物，引起组织中的PDH复合物活性增加。这可通过活性PDH的量的增加指明(通过未处理提取物活性作为用磷酸酶处理后相同提取物中总PDH活性的百分比确定)。
根据本发明的另一方面，提供一种药用组合物，它包含如前定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯，以及药学上可接受的赋形剂或载体。
所述组合物可以为适用于口服给药的形式，例如，作为片剂或胶囊，对于胃肠外注射(包括静脉、皮下、肌内、血管内或输注)而言，例如，作为无菌溶液、悬浮液或乳液，对于局部给药而言，例如，作为软膏剂或乳膏剂，或者对于直肠给药而言，例如，作为栓剂。一般来说，可以以常规方法，采用常规赋形剂制备以上的组合物。
本发明的组合物以单位剂型提供更为有利。所述化合物正常应以每平方米动物体表面积5-5000mg，即大约0.1-100mg/kg范围内的单位剂量给予温血动物。设计单位剂量的范围在例如1-100mg/kg，优选1-50mg/kg，这通常可提供治疗上的有效剂量。单位剂量形式如片剂或胶囊将通常含有，例如，1-250mg的活性成分。
根据本发明的另一方面，提供一种如前定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯，其用于通过疗法治疗人或动物体的方法中。
我们发现本发明的化合物升高PDH活性，因而具有降低血葡萄糖的重要作用。
本发明的另一个特征是用作药物的式(I)化合物及其药学上可接受的盐或体内可水解的酯。
正是式(I)化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯可方便地用作在温血动物如人体中产生升高PDH活性的药物。
特别是式(I)化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯可用作在温血动物如人体中治疗糖尿病的药物。
在本发明的另一方面，特别是式(I)化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯可用作在温血动物如人体中治疗糖尿病、外周血管疾病和心肌缺血的药物。
因此，根据本发明的另一方面，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯在制备用于在温血动物如人体中产生升高PDH活性的药物中的用途。
因此，根据本发明的另一方面，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯在制备用于在温血动物如人体中治疗糖尿病的药物中的用途。
因此，根据本发明的另一方面，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯在制备用于在温血动物如人体中治疗糖尿病、外周血管疾病和心肌缺血的药物中的用途。
根据本发明的另一个特征，提供用于在需要此种治疗的温血动物如人体中产生升高PDH活性的方法，该方法包括给予所述动物有效量的如前定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯。
根据本发明的另一个特征，提供在需要此种治疗的温血动物如人体中治疗糖尿病的方法，该方法包括给予所述动物有效量的如前定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯。
根据本发明的另一个特征，提供在需要此种治疗的温血动物如人体中治疗糖尿病、外周血管疾病和心肌缺血的方法，该方法包括给予所述动物有效量的如前定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯。
如上所述，用于疗效性或预防性治疗具体的疾病状态所需的剂量大小将必须根据所治疗的宿主、给药途径和待治疗疾病的严重性而变化。优选使用1-50mg/kg范围内的日剂量。然而，日剂量将必须根据所治疗的宿主、给药的具体途径和待治疗疾病的严重性而变化。因此，最适剂量可由治疗任何具体病人的医师决定。
在此描述的PDH活性的升高可以作为单一疗法应用，或者除本发明的主题外，还可以包括一种或多种其它物质和/或治疗。这样的联合治疗可以通过同时、顺序或分开给予治疗的单一成分而实现。例如，在治疗糖尿病时，化学治疗可包括下列主要的几类治疗i)胰岛素；ii)设计为刺激胰岛素分泌的胰岛素促分泌剂(如格列本脲、甲苯磺丁脲、其它磺酰脲类)；iii)口服降血糖药如对二甲双胍、噻唑烷二酮；iv)设计为减少肠对葡萄糖的吸收的药物(如阿卡波糖)；v)设计为治疗慢性高血糖并发症的药物；vi)用于治疗乳酸血症的其它药物；vii)脂肪酸氧化抑制剂；viii)降脂药；ix)用于治疗冠心病和外周血管疾病的药物如阿司匹林、己酮可可碱、西洛他唑；和/或x)硫胺素。
如上所述，本发明定义的化合物因为其升高PDH活性的能力非常重要。因此，本发明的此类化合物可以用于以下疾病状态，包括糖尿病、外周血管疾病(包括间歇性跛行)、心力衰竭和某些心肌疾病、心肌缺血、大脑局部缺血和再灌注、肌无力、高脂血症、阿尔茨海默氏病和/或动脉粥样硬化，尤其外周血管疾病和心肌缺血。
式(I)化合物及其药学上可接受的盐除了用作治疗药物外，它们还可用作在实验室动物如猫、狗、兔、猴、大鼠和小鼠中，用于评价升高PDH活性的体外和体内试验系统的开发和标准化工作(作为研究新治疗剂的一部分)的药理学工具。
现在，本发明将由以下非限制性实施例加以说明，其中，除非另外说明，否则(i)温度以摄氏度(℃)给出；操作在室温或环境温度下，即在18-25℃的温度范围内且在惰性气体如氩气的气氛下进行；(ii)有机溶液经无水硫酸镁干燥；在减压(600-4000帕斯卡；4.5-30mmHg)及最高可达60℃的浴温下，使用旋转蒸发器蒸发溶剂；(iii)层析意指硅胶快速层析；薄层层析(TLC)在硅胶板上进行；其中涉及的硅胶Mega Bond Elut柱，这指含有10g或20g或50g的40微米粒径的硅胶，所述硅胶包含在60ml一次性注射器中并由多孔板支持，其得自Varian，Harbor City，Califomia，USA，商品名为“Mega Bond ElutSI”；“Mega Bond Elut”为商标；其中Biotage柱意指含KP-SILTM硅胶(60，粒径32-63mM)的柱，由Biotage，Dyax公司的分公司.，1500Avon Street Extended，Charlottesville，VA 22902，USA供应；(iv)其中Chem Elut柱意指用于吸附亲水性物质的“亲水基质”提取柱，即含有特别级的热碱处理的、高纯度的、惰性硅藻土(预先缓冲至pH 4.5或9.0，加入相-分离过滤材料)的聚丙烯管，按照生产商的指示使用，得自Varian，Harbor City，California，USA，商品名为“Extube，ChemElut”；“Extube”为Intemational Sorbent Technology Limited的注册商标；(v)其中ISOLUTE柱指吸附碱性或酸性物质的“离子交换”提取柱，即含有特别级的离子交换吸附剂、高纯度的、表面至pH约7，加入相-分离过滤材料的聚丙烯管，按照生产商的指示使用，得自Varian，Harbor City，Caiifornia，USA，商品名为“Extube，Chem Elut，ISOLUTE”；“Extube”为Intemational Sorbent Technology Limited的注册商标；(vi)一般来说，反应过程通过TLC跟踪，反应时间仅为说明的目的而给出；(vii)终产物具有满意的质子核磁共振(NMR)谱和/或质谱数据；(viii)得率仅为说明的目的而给出，并不是必须经复杂的过程才能获得的；如果需要更多的材料，可重复制备；(ix)NMR数据在给出时，为主要鉴定质子以相对于作为内标的四甲基硅烷(TMS)的每百万分之几(ppm)的δ值的形式，其采用全氘化的二甲亚砜(DMSO-δ6)作为溶剂(除非另外指明)于300MHz测定，其它溶剂(在文中指明)包括氘化氯仿-CDCl3；偶合常数(J)以Hz为单位给出；当进行这种归属时，Ar指芳族质子；(x)化学符号具有其通常的意义；采用SI单位和符号；(xi)减压给出为以帕斯卡(Pa)表示的绝对压力；升压用表压以巴为单位给出；(xii)溶剂比例用体积体积(v/v)术语给出；(xiii)质谱(MS)采用直接暴露探针，以化学离子化(CI)模式，用70电子伏的电子能量进行；其中所指的离子化通过电子撞击(EI)、快速原子轰击(FAB)或电喷雾(ESP)完成；值用m/z给出；一般来说，只有指示母体质量的离子被报告，除非另外指明，所给出的值为(M-H)-；(xiv)Oxone为E.I.du Pont de Nemours & Co.，Inc.的商标，且指过氧化一硫酸钾；(xv)使用下列缩写ether 乙醚；DMF N，N-二甲基甲酰胺；DMA N，N-二甲基乙酰胺；
TFA 三氟乙酸；NMP N-甲基吡咯烷-2-酮；SM原料；DMSO 二甲亚砜；EtOAc 乙酸乙酯；MeOH 甲醇；EtOH 乙醇；DCM 二氯甲烷；THF 四氢呋喃；和(xvi)其中在名称开始处给出的(R)或(S)立体化学，除非另外指明，应该理解所指出的立体化学指如式(I)中所述的-NH-C(O)-C*(Me)(CF3)(OH)中心。
权利要求
1.一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯， 其中n为1或2；R1为氯、氟、溴、甲基或甲氧基；R2选自下面三组中的一个基团i)卤代基、硝基、羟基、氨基或氰基；ii)-X1-R5，其中X1为直接的键、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-NR6、-CO-、-CONR6、-NR6CO-、-NR6SO2-或NR6CONR7-；其中R6和R7独立为氢或由一个或更多个A任选取代的C1-4烷基；和R5选自由一个或更多个A任选取代的C1-6烷基、由一个或更多个A任选取代的C3-7环烷基、由一个或更多个A任选取代的C3-7环烷基C1-6烷基、由一个或更多个A任选取代的C2-6链烯基、由一个或更多个A任选取代的C2-6链炔基、由一个或更多个D任选取代的苯基、由一个或更多个D任选取代的苯基C1-6烷基、在环碳上由一个或更多个D任选取代的杂芳基环或在环碳上由一个或更多个D任选取代的(杂芳基环)C1-6烷基；其中所述杂芳基环为合有1-2个氮原子的碳连接的6元环或含有1-3个独立选自O、N和S的杂原子的碳连接的5元环；和其中如果所述5元杂芳基环含有-NH-部分，则该氮可由选自G的基团任选取代；iii)在环碳上由一个或更多个D任选取代的氮-连接的4-8元杂环基，且其中如果所述杂环基含有-NH-部分，则该氮可由选自G的基团任选取代；R3为由一个或更多个A任选取代的C1-6烷基、由一个或更多个A任选取代的C3-7环烷基、由一个或更多个D任选取代的苯基、在环碳上由一个或更多个D任选取代的、含有1-2个氮原子的碳连接的6元杂芳基环或在环碳上由一个或更多个D任选取代的、含有1-3个独立选自O、N和S的杂原子的碳连接的5元杂芳基环；和其中如果所述5元杂芳基环含有-NH-部分，则该氮可由选自G的基团任选取代；A选自羟基、氨基、卤代基、羧基、N-(C1-4烷基)氨基、N，N-二-(C1-4烷基)氨基、氨基甲酰基和C1-6烷氧基；D选自i)-Xa-Rc，其中Xa为直接的键、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-CO-、-NRdSO2-、-NRdCO-、-NRdCONRe-、-NRd-或-CONRd-；其中Rd和Re独立为氢或由一个或更多个羟基或C1-4烷氧基任选取代的C1-4烷基；Rc选自氢或由一个或更多个羟基或C1-4烷氧基任选取代的C1-6烷基；ii)在环碳上由一个或更多个选自羟基、卤代基、C1-4烷氧基、C1-4烷基或氰基的基团任选取代的4-8元Het，且其中如果所述4-8元Het含有-NH-部分，则该氮可由选自G的基团任选取代；iii)-Xa-C1-6烷基-Xb-Rc，其中Xa和Rc如此前所定义和Xb为-S-、-SO-或-SO2-；iv)氰基或卤代基；和V)-Xc-Rf，其中Xc为-C(O)-或-SO2-和Rf为在环碳上由一个或更多个选自羟基、卤代基、C1-4烷氧基、C1-4烷基或氰基的基团任选取代的氮连接的4-8元杂环基，且其中如果所述杂环基含有-NH-部分，则该氮可由选自G的基团任选取代；G选自由一个或更多个A任选取代的C1-6烷基、由一个或更多个A任选取代的C1-6链烷酰基、由一个或更多个A任选取代的C1-6烷基磺酰基、由一个或更多个A任选取代的C1-6烷氧基羰基、氨基甲酰基、由一个或更多个A任选取代的N-(C1-6烷基)氨基甲酰基、由一个或更多个A任选取代的N-(C1-6烷基)2氨基甲酰基和由一个或更多个A任选取代的苯甲酰基；和R4为氢或氟。
2.一种权利要求1的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯，其中n为2。
3.一种权利要求1或2中任一项的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯，其中R1为甲基、氯或氟。
4.一种权利要求1-3中任一项的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯，其中R2为氯、氟、溴、碘、硝基、氨基、甲氧基、乙酰基氨基、羟基、C1-4烷硫基(任选由羟基取代)、C1-4烷基亚硫酰基、C1-4烷基磺酰基、N-(C1-4烷基)氨基(任选由羟基、甲氧基、二甲基氨基或氨基甲酰基取代)、吗啉基、4-乙酰基哌嗪-1-基、硫代吗啉基、1-氧硫代吗啉基、1，1-二氧硫代吗啉基、苄基氨基、苯氧基、苯基硫基(任选由N-(C1-4烷基)2氨基甲酰基取代)或苯基亚硫酰基(任选由N-(C1- 4烷基)2氨基甲酰基取代)。
5.一种权利要求1-4中任一项的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯，其中R3为甲基、乙基(任选由羟基取代)、异丙基、丁基(任选由羟基取代)、苯基[任选由卤代基、N，N-二甲基氨基甲酰基、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基、乙基氨基(任选由羟基取代)、甲磺酰基、氮杂环丁烷基羰基、吗啉基羰基或吡咯烷基羰基(任选由羟基取代)取代]或碳连接的吡啶基[任选由氨基取代]。
6.一种权利要求1-5中任一项的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯，其中R4为氢。
7.一种式(I)的化合物，它选自(R)-N-[2-氯-3-(1-氧硫代吗啉基)-4-(乙基磺酰基)苯基]-2-羟基-2-甲基-3，3，3-三氟丙酰胺；(R)-N-[2-氯-3-(1-氧硫代吗啉基)-4-(异丙基磺酰基)苯基]-2-羟基-2-甲基-3，3，3-三氟丙酰胺；(R)-N-[2-氯-3-(1，1-二氧硫代吗啉基)-4-(甲磺酰基)苯基]-2-羟基-2-甲基-3，3，3-三氟丙酰胺；(R)-N-[2-氯-3-(1，1-二氧硫代吗啉基)-4-(乙磺酰基)苯基]-2-羟基-2-甲基-3，3，3-三氟丙酰胺；(R)-N-[2-氯-3-(1，1-二氧硫代吗啉基)-4-(异丙基磺酰基)苯基]-2-羟基-2-甲基-3，3，3-三氟丙酰胺；(R)-N-(2-氯-4-乙基磺酰基-3-甲硫基苯基)-2-羟基-2-甲基-3，3，3-三氟丙酰胺；(R)-N-(4-甲磺酰基-3-甲硫基-2-氯代苯基)-2-羟基-2-甲基-3，3，3-三氟丙酰胺；(R)-N-[2-氯-3-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-4-(乙磺酰基)苯基]-2-羟基-2-甲基-3，3，3-三氟丙酰胺；(R)-N-{2-氯-3-[1-(4-乙酰基)哌嗪基]-4-(甲磺酰基)苯基}-2-羟基-2-甲基-3，3，3-三氟丙酰胺；(R)-N-[2-氯-3-吗啉基-4-(甲磺酰基)苯基]-2-羟基-2-甲基-3，3，3-三氟丙酰胺；(R)-N-[2-氯-3-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-4-(异丙基磺酰基)苯基]-2-羟基-2-甲基-3，3，3-三氟丙酰胺；和(R)-N-[2-氯-3-吗啉基-4-(异丙基磺酰基)苯基]-2-羟基-2-甲基-3，3，3-三氟丙酰胺；或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯。
8.一种制备权利要求1的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯的方法，该方法(其中变化的基团除非另外说明，如对式(I)化合物所定义)包括(a)使保护的式(II)化合物去保护 其中Pg为醇保护基团；(b)氧化式(III)化合物 (c)使式(IV)化合物 与式(V)的酸偶合 其中X是OH；(d)使式(IV)的苯胺与式(V)的活化的酸衍生物偶合；其后如果需要i)将式(I)化合物转化为另一种式(I)化合物；ii)除去任何保护基团；或iii)形成药学上可接受的盐或体内可水解的酯。
9.一种药用组合物，它包含权利要求1-7中任一项的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯，以及药学上可接受的稀释剂或载体。
10.一种用于通过疗法治疗人或动物体的方法中的权利要求1-7中任一项的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯。
11.一种权利要求1-7中任一项的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯在制备用于在温血动物如人中治疗糖尿病、外周血管疾病和心肌缺血的药物中的用途。
全文摘要
描述了一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或体内可水解的酯,其中:n为1或2;R
文档编号C07D205/04GK1387509SQ0081524
公开日2002年12月25日 申请日期2000年8月30日 优先权日1999年9月4日
发明者R·J·布特林, J·E·佩斯, M·H·布洛克, T·诺瓦克, J·N·布罗斯 申请人:阿斯特拉曾尼卡有限公司