专利名称：口服有效的弹性蛋白酶抑制剂邻磺酰苯甲酰亚胺衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及可以用作弹性蛋白酶类型地酶抑制剂、例如人白细胞弹性蛋白酶抑制剂的通式(I)的口服有效的化合物；其盐、该化合物或其盐的溶剂化物、水合物；本发明还涉及含有这些化合物的药物制剂、通式(I)化合物的用途、通式(I)化合物的制备方法以及用于制备通式(I)化合物的通式(III)的新中间体。
从文献中可以了解到，有许多种类的化合物具有弹性蛋白酶、尤其是各种人白细胞弹性蛋白酶抑制活性。这些种类的化合物是，例如肽基三氟甲基-酮衍生物、7-二溴-头孢烷衍生物或苯并异噻唑酮衍生物。
在欧洲专利申请号626378和483928以及J.Med.Chem.38(23)4687-4692(1995)中公开了多种具有体外人白细胞弹性蛋白酶抑制作用的1，2-苯并异噻唑-(1H)-3-酮衍生物。这些化合物的典型例子是2-(3-氯-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基)-氧基甲基-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑(1H)-3-酮-1，1-二氧化物(EP-0626378A实施例4D.)和2-[9-(2-(1-吡咯烷基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基]-氧基甲基-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-(1H)-3-酮-1，1-二氧化物(EP-0626378A实施例9E)，但是，在上述文献以及现有技术的其它参考文献中均没有提到这些化合物的口服活性。
我们致力于寻找一种新的弹性蛋白酶抑制分子，其对弹性蛋白酶、特别是人白细胞弹性蛋白酶类型的酶显示很高的口服抑制活性，并显示良好的稳定性、在体外和体内的长效作用、高选择性、良好的吸收性和良好的药物化学、物理化学性质，这使得它们成为药物开发的良好的候选药物。
我们发现，在2-(4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基)氧基甲基-4-异丙基-6-取代的-1，2-苯并异噻唑-(1H)-3-酮1，1-二氧化物结构的情况下，如果在吡啶并[1，2-a]嘧啶部分的9位引入特定的取代基并在苯并异噻唑部分的6位引入甲氧基、乙氧基或2-吗啉代-乙氧基，我们可以获得具有非常明显的口服活性并且具有多种所需特性的新的酶抑制剂。
因此，本发明涉及通式(I)的化合物及其盐、溶剂化物，包括水合物，其中
R1表示甲基、乙基或2-吗啉代-乙基；
R2表示1-哌啶基、吗啉代或4-甲基-1-哌嗪基；n是2或3。
溶剂化物是指通式(I)化合物的溶剂化物或通式(I)化合物的盐的溶剂化物。
通式(I)化合物的成盐对象可以是任何可药用的有机或无机化合物，例如外消旋或旋光的有机化合物琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸以及无机化合物盐酸、氢溴酸、硝酸、磷酸或硫酸。
特别优选的代表性的通式(I)化合物含有甲氧基或2-吗啉代-乙基作为取代基R1，含有1-哌啶基、4-甲基-1-哌嗪基或吗啉代基团作为R2，并且n是2或3。
本发明的另一个目的是制备通式(I)化合物的方法，该方法包括，将通式(II)的化合物(其中R1的含义与以上给出的相同，X表示卤原子)与通式(III)的化合物(其中R2和n的含义与以上给出的相同)反应，如需要，将形成的通式(I)的化合物(其中R1、R2和n的含义与以上给出的相同)转化成它们的盐或者从它们的盐中释放出来。
通式(II)和通式(III)化合物的反应优选在有机溶剂例如二甲基甲酰胺中、在酸结合试剂的存在下、优选在有机或无机碱例如例如三乙胺的存在下在室温或高于室温的温度下进行。
卤原子可以是氟、氯、溴或碘原子。
通式(II)的已知化合物和通式(III)的新化合物可以通过已知方法从可以购买到的化合物制备。
通过将2-氨基-3-羟基吡啶(Biochem J.46，506-508页(1950))与1-(2-卤代-乙基)哌啶或1-(3-卤代-丙基)吗啉或2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙醇反应可以制得适宜的3-取代的吡啶。卤代衍生物与2-氨基-3-羟基吡啶的反应在水-有机溶剂混合物中、优选在相转移催化剂的存在下进行。取代的醇通过Mitsunobu-反应与2-氨基-3-羟基吡啶偶联(Organic Reactions/D.Hughes编/42卷，335-656页，John Wileyand Sons，New，York 1992)。
将形成的2-氨基-3-取代的-吡啶与丙二酸的活泼酯、例如它的二-2，4，6-三氯苯酯(Monatsch.Chem.89 S 143-153(1958))反应，反应优选在升高的温度下、选择性地在磷酰氯的存在下进行，得到2-羟基-9-取代的-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶，即通式(III)的新化合物(其中R2和n的含义与以上给出的相同)，这是本发明的另一个目的。
通式(II)的化合物(其中R1的含义与以上给出的相同，X表示卤原子，优选氯或溴原子)通过按照与欧洲专利申请号626378A1实施例1(b)或483928A1实施例5I所述类似的方法制备4-异丙基-6-甲氧基-或4-异丙基-6-乙氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物(J.Med.Chem.38(23)，4687-4692页(1995)，Synlett，1994年11月，933-934页))然后将其转化成适宜的2-氯甲基或2-溴甲基衍生物制得。
2，4-二氯-苯甲酰氧基-甲基衍生物按照欧洲专利申请号483928A1的实施例1A的方法制备。2，4-二氯-苯甲酰氧基-甲基衍生物还可以转化成2-卤代乙基衍生物。
EP-483928A1的实施例lAW中记载的2-(2，4-二氯-苯甲酰氧基-甲基)-4-异丙基-6-羟基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物的6-羟基可以转化成杂芳基烷氧基。
本发明的另一个目的是含有通式(I)化合物和/或其盐、溶剂化物、水合物的药物组合物，该药物组合物优选是用于口服给药的产品，但本发明也包括吸入或胃肠外的产品。以上药物产品可以是固体或液体，例如片剂、胶囊、溶液剂、混悬剂或乳剂。优选固体药物产品形式，特别是片剂和胶囊。以上药物产品优选采用制药工业常用的赋形剂和工艺来制备。
本发明通式(I)的化合物可用来治疗其形成与弹性蛋白酶的释放、高浓度和蛋白水解活性有关的疾病。例如炎性肠疾病(过敏性肠疾病、肠易激性综合征、节段性回肠炎、溃疡性结肠炎)、肺动脉高血压、幼儿支气管-肺发育异常、鼻炎、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、膀胱炎、囊性纤维变性、急性胰腺炎、肝炎、免疫复合物介导的III型免疫学炎症(红斑狼疮、Goodpasture综合征、慢性肝炎、牙槽炎)、皮炎、牛皮癣、酒渣鼻、结节性脉管炎、IV型免疫学炎症反应(例如在结核病、麻风、利什曼病、芽生菌病、血吸虫病的过程中)、肾小球性肾炎、痛风性关节炎、多发性硬化、哮喘性支气管炎、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、α-抗胰蛋白酶缺乏、慢性支气管炎、肺气肿(包括新生儿肺气肿)、由嗜中性粒细胞引起的肺炎、外科介入术、脓毒症、创伤、急性炎症、感染、DIC综合征、心肌梗塞、类风湿性关节炎和癌症。
由白细胞释放的白细胞蛋白水解酶例如弹性蛋白酶在由局部缺血事件后出现的再灌注所引起的各种组织损伤的发展中也起重要作用。
因此，本发明通式(I)的化合物可以在预防、治疗和恢复由局部缺血事件后出现的再灌注所引起的组织损伤中具有重要作用。
本发明的另一个目的是通式(I)的化合物在治疗上述疾病中的用途。
在本说明书中所引用的所有出版物、包括但不仅限于专利和专利申请，均引入本文作为参考。
本领域技术人员可以理解，通式(I)的化合物可以和其它与其没有配伍禁忌的治疗和/或预防剂和/或药物一起给药。
通过以下实施例说明通式(I)和(III)的化合物、其制备方法和生物学活性，但这些实施例并不限制权利要求的范围。
实施例实施例12-氨基-3-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)吡啶
将110.12g(1mol)2-氨基-3-羟基吡啶(Biochem J.46，506-508页(1950))溶于500ml 40％的氢氧化钠溶液。将该棕色的溶液用氩气净化然后在搅拌下向其中依次加入2g四丁基碘化铵的500ml二氯甲烷溶液和184.11g(1mol)1-(2-氯乙基)哌啶盐酸盐(Chem.Ber.38 S3136-3139(1905))。将该混合物室温搅拌5天，然后加入500ml二氯甲烷和200ml水，将两相充分混合然后分离。将水相用2×150ml二氯甲烷萃取，将合并的有机相用3×200ml水洗涤，用硫酸镁干燥然后蒸发。将红棕色的结晶状粗产物用丙酮结晶。产物144.71g(38％)2-氨基-3-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-吡啶(mp.105-106℃)NMR，δH(200MHz，DMSO-D6)1.37(2H，m，CH2(CH2CH2)2N)，1.48(4H，m，CH2(CH2CH2)2N)，2.42(4H，m，CH2(CH2CH2)2N)，2.64(2H，t，J5.8，NCH2CH2O)，4.01(2H，t，J5.8，NCH2CH2O)，5.63(2H，s，NH2)，6.47(1H，dd，J7.7，5.0，5-H)，7.03(1H，dd，J7.7，1.2，6-H)，7.51(1H，dd J5.0，1.2，4-H)。实施例22-羟基-9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶
将88.5g(0.4mol)2-氨基-3-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)吡啶和550ml干燥的丙酮加热至回流温度，然后向其中每次少量地加入185.2g(0.4mol)丙二酸二-2，4，6-三氯苯酯。继续加热1.5小时，然后将混合物冷却并在冰箱中放置过夜。滤出析出的结晶，将母液浓缩得到第二批产物，将两批产物合并，用丙酮洗涤。将得到的粗产物通过色谱纯化。首先用二氯甲烷洗脱残余的2，4，6-三氯苯酚，然后用甲醇-二氯甲烷(1∶1)混合物洗脱标题化合物。将后者蒸发然后真空干燥。产物69.31g(60％)2-羟基-9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶。(mp.171-172℃)NMRδH(200MHz，DMSO-D6)1.39(2H，m，CH2(CH2CH2)2N)，1.50(4H，m，CH2(CH2CH2)2N)，2.50(4H，m，CH2(CH2CH2)2N)，2.83(2H，t，J5.9，NCH2CH2O)4.27(2H，t，J5.9，NCH2CH2O)，5.16(1H，s，3-H)7.13(1H，t，J7.3，7-H)，7.50(1H，d，J7.3，8-H)8.50(1H，d，J6.4，6-H)。实施例32-(9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基)-4-异丙基-6-甲氧基-1.2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物
将57.57g(0.2mol)2-羟基-9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶溶于400ml干燥的二甲基甲酰胺，然后在室温下向其中加入31ml三乙胺和69.66g(0.2mol)2-溴甲基-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物。将该悬浮液在氩气氛下室温搅拌6小时。将悬浮液倒入1200ml冰水中，滤出结晶然后用甲醇结晶。产物15.39g(17％)2-(9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基)-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮1，1-二氧化物(m.p.138-139℃)。元素分析NMRδH(200MHz，CDCl3)1.30(6H，d，J6.8，(CH3)2CH)，1.62(4H，m，CH2(CH2CH2)2N)，2.64(4H，m，CH2(CH2CH2)2N)，2.98(2H，t，J5.8NCH2CH2O)，3.96(3H，s，CH3O)4.23(1H，m，J6.8，(CH3)2CH)，4.32(2H，t，J5.8 NCH2CH2O)，5.90(1H，s，3’-H)，6.23(2H，s，NCH2O)，7.05(1H，t，J7.4，7’-H)，7.14(1H，dd，J7.7；1.3，8’-H)，7.19-7.21(2H，m，5-H，7-H)，8.72(1H，dd，J7.0，1.3，6’-H)。实施例42-(9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基)-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物盐酸盐
将1.5g(2.7mmol)2-(9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基)-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物溶于100ml乙醚并向其中加入2.5ml20％(m/v)氯化氢的乙醚溶液。将反应混合物室温搅拌1小时，滤出形成的结晶，用氢氧化钠在干燥器中干燥至恒重。产物1.55g(97％)2-(9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基)-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物盐酸盐(mp.115-120℃)。NMRδH(200MHz，CDCl3)1.26(6H，d，J6.8，(CH3)2CHO)，1.71(2H，m，CH2(CH2CH2)2N)，3.64(4H，m，CH2(CH2CH2)2N)，2.64(4H，m，CH2(CH2CH2)2N)，2.98(2H，t，J5.8 NCH2CH2O)，3.96(3H，s，CH3O)4.23(1H，m，6.8，(CH3)2CHO)，4.62(2H，t，J5.8 NCH2CH2O)，5.78(1H，s，3’-H)，6.10(2H，s，NCH2O)，7.31-7.40(2H，m，5-H，7’-H)，7.63(1H，d，7.0，8’-H)，7.79(1H，d，J2.3，7-H)，8.65(1H，d，J7.3，6’-H)，10.26(1H，s)。实施例52-(9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基)-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物-D-一酒石酸盐
将4.4g(8.0mmol)2-(9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基)-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物溶于热的甲醇(70ml)并向溶液中加入1.2g(8.0mmol)D-酒石酸。将反应混合物搅拌15分钟然后冷却至10℃；滤出形成的结晶，洗涤然后真空干燥。产物4.63g(82％)标题化合物(m.p.158℃)。实施例62-(9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基)-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物一富马酸盐
按照实施例5所述的方法，但使用5.0g(9.0mmol)碱和1.05g(9.0mmol)富马酸，得到4.20g(69％)标题化合物(m.p.183℃)。实施例72-(9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基)-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物苯甲酸盐
按照实施例5所述的方法，但使用4.88g(8.76mmol)碱和1.07g(8.76mmol)苯甲酸，最后将产物用甲基叔丁基醚结晶得到4.00g(67％)标题化合物(m.p.114℃)。实施例82-(9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基)-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物一柠檬酸盐
按照实施例5所述的方法，但使用7.30g(13.11mmol)碱和2.52g(13.11mmol)柠檬酸，最后将产物用甲基叔丁基醚结晶得到10.80g(定量收率)标题化合物(m.p.152℃)。实施例92-(9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基)-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物-L-扁桃酸盐
按照实施例5所述的方法，但使用7.00g(12.58mmol)碱和1.91g(12.58mmol)L-扁桃酸，最后将产物用环己烷结晶得到7.60g(85％)标题产物(m.p.102℃)。实施例102-(9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基)-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物4-异丙基-6-甲氧基-邻磺酰苯甲酰亚胺盐
将55.7mg 2-(9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基)-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物溶于2ml甲醇并向溶液中加入25.5mg 4-异丙基-6-甲氧基-邻磺酰苯甲酰亚胺的2ml乙醇溶液。将反应混合物室温搅拌30分钟，滤出形成的结晶，用2×1ml冷甲醇洗涤然后在室温下真空干燥。产物45.6mg(60％)标题化合物(m.p.203-205℃)。实施例112-氨基-3-(3-吗啉代-丙氧基)吡啶
将1.68g(0.042mol)氢氧化钠溶于40ml甲醇并向其中加入4.62g(0.042mol)2-氨基-3-羟基吡啶。将该混合物搅拌20分钟，然后蒸发至干。将残余物加入40ml二甲亚砜中并在冰水冷却下向该混合物中缓慢加入6.91g(0.042mol)1-(3-氯丙基)吗啉。将该混合物室温搅拌18小时，倒入200ml冰水中并用3×30ml氯仿萃取。将合并的有机相用5×30ml水洗涤，用无水硫酸钠干燥然后蒸发。产物7.45g(74％)2-氨基-3-(3-吗啉代-丙氧基)吡啶(mp.79-81℃)NMR，δH(200MHz，CDCl3)2.07(2H，m，J6.2 CH2CH2CH2)，2.44-2.52(6H，m，CH2N(CH2CH2)2O)，3.72(4H，t，J4.6，N(CH2CH2)2O)，4.04(2H，t，J6.2，CH2CH2CH2O)，4.69(2H，s，NH2)，6.57(1H，dd，J7.7，5.0，5-H)，6.93(1H，dd，J7.7，1.2，6-H)，7.77(1H，ddJ5.0，1.2，4-H)。实施例122-羟基-9-(3-吗啉代-丙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶
按照实施例2所述的方法，由2-氨基-3-(3-吗啉代-丙氧基)吡啶制得2-羟基-9-(3-吗啉代-丙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶的结晶(mp.200-202℃)，收率63％。NMRδH(200MHz，DMSO-D6)1.97(2H，m，J4.6 CH2CH2CH2)，2.35-2.52(6H，m，CH2N(CH2CH2)2O)，3.56(4H，t，J6.4，N(CH2CH2)2O)，4.20(2H，t，J6.4，CH2CH2CH2O)，5.19(1H，s，3-H)7.18(1H，t，J7.3，7-H)，7.50(1H，dd，J7.7；0.9，8-H)8.51(1H，d，J7.0；0.9，6-H)。实施例132-(9-(3-吗啉代-丙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基)-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物
按照实施例3所述的方法，由2-羟基-9-(3-吗啉代-丙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶制得2-(9-(3-吗啉代丙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基)-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物的结晶(mp.76-80℃)。收率17.5％。元素分析NMRδH(200MHz，CDCl3)1.30(6H，d，J6.8，(CH3)2CHO)，2.18(2H，m，J6.8 CH2CH2CH2)，2.52(4H，t，J4.5，N(CH2CH2)2O)，2.67(2H，t，J7.1，NCH2CH2CH2O)，3.72(4H，t，J4.5，N(CH2CH2)2O)，3.96(3H，s，CH3O)4.22-4.28(3H，m，(CH3)2CH，NCH2CH2CH2O)，5.91(1H，s，3’-H)，6.26(2H，s，NCH2O)，7.08(1H，t，J7.4，7’-H)，7.14(1H，dd，J7.7，1.3，8’-H)，7.19(1H，s，5-H)，7.26(1H，s，7-H)，8.72(1H，dd，J7.0，1.3，6’-H)。实施例142-(9-(3-吗啉代-丙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基)-4-异丙基-6-(2-吗啉代-乙氧基)-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物
按照实施例3所述的方法，由2-羟基-9-(3-吗啉代-丙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶和2-溴甲基-4-异丙基-6-(2-吗啉代-乙氧基)-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物制得2-(9-(3吗啉代-丙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基)-4-异丙基-6-(2-吗啉代-乙氧基)-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物的结晶(mp.145-150℃)。收率13.4％。元素分析NMRδH(200MHz，CDCl3)1.30(6H，d，J6.8，(CH3)2CH)，2.18(2H，m，J6.8 CH2CH2CH2)，2.51-2.61(8H，m，2*N(CH2CH2)2O)2.69(2H，t，J7.1，NCH2CH2CH2O)，2.85(2H，t，J5.6，NCH2CH2O)，3.71-3.77(8H，m，2*N(CH2CH2)2O)，4.19-4.28(5H，m，(CH3)2CH，NCH2CH2O，NCH2CH2CH2O)，5.91(1H，s，3’-H)，6.26(2H，s，NCH2O)，7.09(1H，t，J6.5，7’-H)，7.14(1H，dd，J6.5，1.5，8’-H)，7.21(1H，s，5-H)，7.27(1H，s，7-H)，8.72(1H，dd，J6.5.1.5，6’-H)。实施例152-氨基-3-(2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙氧基)吡啶
氩气氛下，向50ml干燥的四氢呋喃中加入2.6g(0.02mol)2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙醇和6.4g三苯基膦。于0-5℃下向该混合物中加入2.2g(0.02mol)2-氨基-3-羟基吡啶，然后滴加4.2g偶氮二甲酸二乙酯。反应混合物先变为淡紫色，然后变为棕色，将该混合物室温搅拌4小时，然后蒸发。将残余物进行硅胶柱色谱，用二氯甲烷-甲醇19∶1混合物作为洗脱剂。合并含有纯净产物的馏份然后蒸发。产物1.2g(25％)红棕色油状的2-氨基-3-(2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙氧基)吡啶。NMRδH(200MHz，DMSO-D6)2.13(3H，s，CH3N)，2.37(4H，s，CH3N(CH2)2)，2.48(4H，m，(CH2)2NCH2)，2.68(2H，t，J5.8，NCH2CH2O)，4.02(2H，t，J5.8，NCH2CH2O)，5.60(2H，s，NH2)，6.47(1H，dd，J7.7，5.0，5-H)，7.02(1H，dd，J7.7；1.2，6-H)，7.50(1H，ddJ5.0；1.2，4-H)。实施例162-羟基-9-(2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶
按照实施例2所述的方法，由2-氨基-3-(2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙氧基)吡啶制得2-羟基-9-(2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶的结晶(mp.180-182℃)。收率34％。NMRδH(200MHz，DMSO-D6)2.16(3H，s，CH3N)，2.34(4H，s，CH3N(CH2)2)，2.50(4H，s，(CH2)2NCH2)，2.76(2H，t，J5.8，NCH2CH2O)，4.23(2H，t，J5.8，NCH2CH2O)，5.15(1H，s，3-H)7.09(1H，t，J7.4，7-H)，7.44(1H，d，J7.7 8-H)，8.48(1H，d，J6.9，6-H)。实施例172-(9-(2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基)-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物
按照实施例3所述的方法，由2-羟基-9-(2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶制得2-(9-(2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基)-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物的结晶(mp.103-106℃)。收率19％。元素分析NMRδH(400MHz，DMSO-D6)1.25(6H，d，J6.8，(CH3)2CH)，2.12(3H，s，CH3N)，2.33(4H，s，CH3N(CH2)2)，2.61(4H，s，(CH2)2NCH2)，2.84(2H，t，J5.2，NCHCH2O)，3.98(3H，s，CH3O)4.11(1H，m，J6.8，(CH3)2CH)，4.29(2H，t，J5.2，NCH2CH2O)5.76(1H，s，3’-H)，6.11(2H，s，NCH2O)，7.30(1H，t，7.4，7’-H)，7.38(1H，d，J1.8，5-H)，7.53(1H，d，J7.6，8’-H)，7.79(1H，d，J1.8，7-H)，8.58(1H，d，J6.9，6’-H)。实施例182-((2，4-二氯-苯甲酰基)氧基甲基)-4-异丙基-6-(2-吗啉代-乙氧基)-1，2-苯并异噻唑-3-(2H)-酮-1，1-二氧化物
氩气氛下，向0.13g(1.0mmol)2-吗啉代-乙醇、0.44g(1.0mmol)2-((2，4-二氯-苯甲酰基)氧基甲基)-4-异丙基-6-羟基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物(EP-483928A1，实施例1A)和0.22g(1.2mmol)偶氮二甲酸二乙酯的10ml干燥四氢呋喃溶液中于0-5℃下缓慢加入0.33g三苯基膦。将该溶液室温搅拌20小时，然后真空蒸发。将得到的油用无水乙醇研磨得到白色结晶状物质。滤出结晶，用无水乙醇洗涤然后真空干燥。产物40mg(72％)2-((2，4-二氯-苯甲酰基)氧基甲基)-4-异丙基-6-(2-吗啉代-乙氧基)-1，2-苯并异噻唑-3-(2H)-酮-1，1-二氧化物(mp.134-136℃)。NMRδH(200MHz，DMSO-D6)1.25(6H，d，6.9，(CH3)2CH)，2.48(4H，m，O(CH2CH2)2N)，2.73(2H，t，J5.5，NCH2CH2O)，3.56(4H，m，O(CH2)2N)，4.05(1H，m，J6.9，(CH3)2CH)，4.35(2H，t，J5.5，NCH2CH2O)，6.04(2H，s，NCH2O)，7.38(1H，d，J2.0，7-H)，7.58-7.61(3H，m，3’-H，4’-H，5’-H)，7.85(1H，d，J2.0，5-H)。实施例192-(溴甲基)-4-异丙基-6-(2-吗啉代-乙氧基)-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物
室温下，向1.2g(2mmol)2-((2，4-二氯-苯甲酰基)氧基甲基)-4-异丙基-6-(2-吗啉代-乙氧基)-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物、5ml冰乙酸、0.5ml乙酸酐的混合物中加入6.0ml 36v/w％溴化氢的乙酸溶液，将反应混合物于80℃搅拌4小时然后蒸发。将残余物用乙醚研磨得到白色结晶状物质。滤出结晶，用乙醚洗涤然后真空干燥。产物0.75g(80％)2-(溴甲基)-4-异丙基-6-(2-吗啉代-乙氧基)-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物(mp.192-194℃)NMRδH(200MHz，CDCl3)1.31(6H，d，6.8，(CH3)2CH)，3.60(4H，m，O(CH2CH2)2N)，3.60(2H，t，J5.5，NCH2CH2O)，4.22(4H，m，O(CH2CH2)2N)，4.22(1H，m，J6.8，(CH3)2CH)，4.88(2H，t，J5.5，NCH2CH2O，5.49(2H，s，NCH2O)，7.26(1H，d，J2.0，7-H)，7.38(1H，d，J2.0，5-H)。专利申请EP-0626378，实施例9E中记载的2-(9-(2-(1-吡咯烷基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基)-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物的合成，用于比较生物学实验
将0.27g(1.0mmol)2-羟基-9-(2-(1-吡咯烷基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶(记载于专利申请EP 0626378中，通过以上描述的方法制备)在室温下溶于5ml干燥的二甲基甲酰胺中，向溶液中加入0.29ml三乙胺和0.32g(0.9mmol)2-溴甲基-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物。将该悬浮液用氩气净化，室温搅拌60小时，然后倒入200ml冰水中。滤出析出的结晶，用乙醇结晶，用己烷洗涤然后干燥。将粗产物进行硅胶柱色谱，用二氯甲烷-甲醇(98∶2)混合物作为洗脱剂。合并纯净的馏份并蒸发，将结晶干燥。产物67mg(5％)2-(9-(2-(1-吡咯烷基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基)-4-(1-异丙基)-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物(mp.84-90℃)元素分析NMRδH(200MHz，CDCl3)1.30(6H，d，6.8，(CH3)2CH)，1.93(4H，m，(CH2CH2)2N)，2.97(4H，m，(CH2CH2)2N)，3.28(2H，t，J5.8，NCH2CH2O)，3.96(3H，s，CH3O)4.21(1H，m，J6.8，(CH3)2CH)，4.45(2H，t，J5.8，NCH2CH2O)，5.90(1H，s，3’-H)，6.23(2H，s，NCH2O)，7.06(1H，t，J7.4，7’-H)，7.14-7.27(3H，m，5-H，7-H，8’-H)，8.72(1H，dd，J7.0，1.3，6’-H)。
该产物与专利申请EP 0626378，实施例9E中记载的产物相同。
通过以下实验结果证实，通式(I)的化合物在口服给药时有很强的弹性蛋白酶抑制活性对人白细胞弹性蛋白酶引起的急性肺损伤的抑制作用，用小鼠测定方法描述
向体重为22-26克的约6-8周龄的雄性NMRI小鼠口服给药0.1％(w/v)所研究的通式(I)化合物或已知的对比化合物在羧甲基纤维素中的溶液。60分钟后，向小鼠气管内给药溶于25.0μL无菌生理盐水中的12.5国际单位人白细胞弹性蛋白酶。
3小时后，用超剂量的尿烷使动物安乐死并向肺内注射1ml生理盐水进行洗涤。
用开孔缝线夹将气管在开口处暴露并做一个小的切口以插入聚乙烯插管，用手术线将其固定。向插管内插入一个与1.00ml注射器相连的18号×1英寸的针头，并从导气管中抽出0.5ml空气。然后向导气管中滴注1ml。然后对胸部进行短时间轻柔地按摩。从插管内取出注射器并将支气管肺泡灌洗(BAL)液引流到10.0ml的量筒内以测定当动物处于仰卧位时可以从肺回收的灌洗液的总体积。将上述的滴注过程重复3次。然后向收集的支气管肺泡灌洗液中加入Triton X100(最终浓度，0.2％v/v)以确保细胞破裂并通过分光光度法于540nm下测定血红蛋白含量。
根据如下公式在出血反应的基础上测定弹性蛋白酶抑制化合物的有效性
％抑制＝[(VE-DE)/(VE-VS)]×100，其中VE＝预先仅用载体口服给药但用弹性蛋白酶进行气管内处理的组BAL液的平均吸光度；DE＝预先用可能的抑制剂化合物口服给药并用弹性蛋白酶进行气管内处理的动物的各BAL液的吸光度；VS＝预先用载体口服给药并用生理盐水进行气管内处理的组BAL液的平均吸光度。
使用专利申请EP-0626378A1的实施例9E中记载的结构最为相近的已知化合物作为对比化合物。在以上参考实施例中描述了它的合成。
在下表1中简要描述了实验结果。
通过上述方法测得，对于新的2-(9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基)-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物，对小鼠的口服ED50值为2.6mg/bw kg。
对于已知的对比化合物(EP-0626378A1，实施例9E)，通过上述方法测得的对小鼠的口服ED50值为23mg/bw kg。
可以看出，本发明的通式(I)化合物显示很强的口服活性，而结构相近的已知化合物的口服活性则很弱。
图1显示了通式(I)，图2显示了通式(II)，图3显示了通式(III)。
权利要求
1.通式(I)的化合物、其盐、溶剂化物和水合物
-其中
R1是甲基、乙基或2-吗啉代-乙基；
R2是1-哌啶基、吗啉代或4-甲基-哌嗪基；
n是2或3。
2.权利要求1所述的通式(I)的化合物、其盐、溶剂化物和水合物
-其中
R1是甲基；
R2和n如权利要求1中所定义。
3.权利要求1所述的通式(I)的化合物、其盐、溶剂化物和水合物
-其中
R2是1-哌啶基；
R1和n如权利要求1中所定义。
4. 2-[9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基]-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物及其盐、溶剂化物和水合物。
5. 2-[9-(3-吗啉代-丙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基]-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物及其盐、溶剂化物和水合物。
6. 2-[9-(2-(4-甲基-1-哌嗪基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基]-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物及其盐、溶剂化物和水合物。
7. 2-[9-(3-吗啉代-丙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基]-4-异丙基-6-(2-吗啉代-乙氧基)-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，2-二氧化物及其盐、溶剂化物和水合物。
8. 2-[9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基]-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物盐酸盐。
9. 2-[9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基]-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物酒石酸盐。
10. 2-[9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基]-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物富马酸盐。
11. 2-[9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基]-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物苯甲酸盐。
12. 2-[9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基]-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物柠檬酸盐。
13. 2-[9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基]-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物扁桃酸盐。
14. 2-(9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶-2-基-氧基甲基)-4-异丙基-6-甲氧基-1，2-苯并异噻唑-3(2H)-酮-1，1-二氧化物-4-异丙基-6-甲氧基-邻磺酰苯甲酰亚胺盐。
15.药物组合物，其特征在于，该组合物含有一种或多种通式(I)的化合物和/或其盐以及一种或多种制药工业使用的辅料，其中R1、R2和n的含义如权利要求1所定义。
16.权利要求15所述的药物组合物，其特征在于，该组合物含有一种或多种权利要求4-14所述的化合物和一种或多种制药工业使用的辅料。
17.用于治疗由于升高的弹性蛋白酶浓度所引起的综合征的药物组合物，其特征在于，该组合物含有一种或多种通式(I)的化合物和/或其盐以及一种或多种制药工业使用的辅料，其中R1、R2和n的含义如权利要求1所定义。
18.权利要求17所述的用于治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、肺动脉高血压、哮喘、类风湿性关节炎、炎性肠疾病和癌症的药物组合物，其特征在于，该组合物含有一种或多种通式(I)的化合物和/或其盐、溶剂化物，包括水合物，以及一种或多种制药工业使用的辅料，其中R1、R2和n的含义如权利要求1所定义。
19.权利要求17所述的药物组合物，其特征在于，该组合物含有一种或多种权利要求4-14所述的化合物作为通式(I)的化合物。
20.通式(I)的化合物用于治疗由于升高的弹性蛋白酶浓度所引起的综合征的用途，其中R1、R2和n的含义如权利要求1所定义。
21.权利要求20所述的通式(I)化合物的用途，其中R1、R2和n的含义如权利要求1所定义，用于治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、肺动脉高血压、哮喘、类风湿性关节炎、炎性肠疾病和癌症。
22.制备通式(I)化合物及其盐的方法，其中R1、R2和n的含义如权利要求1所定义，其特征在于，将通式(II)的化合物(其中R1的含义与权利要求1给出的相同，X是卤原子，优选氯原子或溴原子)与通式(III)的化合物(其中R2和n的含义与权利要求1给出的相同)反应，如需要，将形成的通式(I)的化合物(其中R1、R2和n的含义如上所述)转化成它的盐或者从它的盐中释放出来。
23.权利要求22的所述方法，其特征在于，在反应过程中使用用于和酸结合的化合物。
24.权利要求22所述的方法，其特征在于，反应在含有有机溶剂的介质中进行。
25.权利要求23所述的方法，其特征在于，使用有机胺、优选三乙胺作为用于和酸结合的化合物。
26.权利要求24所述的方法，其特征在于，使用二甲基甲酰胺作为有机溶剂。
27.通式(III)的化合物及其盐，其中R2是1-哌啶基、吗啉代或4-甲基-哌嗪基，n是2或3。
28. 2-羟基-9-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶。
29. 2-羟基-9-(3-吗啉代-丙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶。
30. 2-羟基-9-(2-(4-甲基-1-哌嗪基)-乙氧基)-4-氧代-4H-吡啶并[1，2-a]嘧啶。
31.通式III的化合物或其盐用于制备通式(I)化合物的用途，其中R2和n的含义与权利要求27中的相同。
全文摘要
通式(I)的口服有效的化合物及其盐、溶剂化物和水合物，其中R1是甲基、乙基或2－吗啉代－乙基，R2是1－哌啶基、吗啉代或4－甲基－哌嗪基，n是2或3。
文档编号C07D471/04GK1411458SQ0081730
公开日2003年4月16日 申请日期2000年12月14日 优先权日1999年12月17日
发明者P·阿兰伊, S·巴托里, S·德斯拉, I·赫迈兹, Z·卡普, F·勒瓦, E·米库斯, M·帕斯卡尔, L·T·纳吉, B·斯莫诺特, K·厄班萨伯, M·瓦加, L·瓦斯瓦林德布里茨 申请人:萨诺费合成实验室