专利名称：一种分离纯化丹参酮的方法
技术领域：
本发明涉及的是应用高速逆流色谱(HSCCC)法从丹参的粗提物中制备高纯度的四种丹参酮类化合物丹参酮IIA、二氢丹参酮I、隐丹参酮和丹参酮I的一种分离纯化丹参酮的方法。
丹参(Salivia miltiorrhiza Bunge)是我困一种常用中药，在临床具有多方面的疗效，如镇痛、止痒，对治疗神经衰弱性失眠、晚期血吸虫病引起的肝硬变和脾肿大、浮肿、妇科疾病和黄疸型传染性肝炎的缩肝方面具有一定疗效。近年来的药理研究证明，丹参还具有改善冠状循环、抑制血栓性疾病和抗炎消肿的功效，已有成药上市。丹参酮是丹参脂溶性成分中的有效成分，主要含有丹参酮IIA(tanshinone IIA)、二氢丹参酮I(dihydrotanshnone I)、隐丹参酮(cryptotanshinone)和丹参酮I(tanshninoeI)。传统的丹参酮提取采用柱色谱法，柱色谱法需使用固体填料，在分离过程中易产生不可逆吸附，具有样品易损失、易污染、低效、速度慢和分离步骤烦琐等缺点。高速逆流色谱技术不同于传统的柱色谱需使用固体填料，而是应用两相互不混溶的溶剂系统在支撑管内高速行星运动的方式下进行天然产物的分离纯化，因而没有不可逆吸附，具有样品无损失、无污染、高效、快速和大制备量分离的优点。所以，在国内外已被广泛应用于生物、医药、环保和农业等领域中活性物质的分离纯化。
本发明的目的是应用高速逆流色谱(HSCCC)法从丹参的粗提物中制备高纯度的四种丹参酮类化合物丹参酮IIA、二氢丹参酮I、隐丹参酮和丹参酮I。
该发明方法有如下特点采用分析型或半制备型高速逆流色谱仪，可选用的溶剂体系由四个组分组成，a组分为乙酸乙酯，乙酸丙酯，乙酸异丙酯，乙酸正丁酯等酯类；b组分为正己烷，环己烷，乙醚和石油醚等；c组分为甲醇，乙醇，丙酮等；d组分为水。优选乙酸乙酯-石油醚-甲醇-水体系。体积比依次在1-4∶2-5∶2-3∶1-2范围内配置。一次分离可以得到隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA。根据检测器紫外谱图接收目标成分，隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA依次时间(小时)为3.0-3.9、4.0-4.8、8.0-9.5紫外吸收值依次为0.4-1.5、0.4-1.3、0.4-1.1，增加原配比中水的体积比，可以提高隐丹参酮与丹参酮I的分离度，并且改善二氢丹参酮I与杂质的分离情况，但是丹参酮IIA的出峰时间将延长，造成分离时间过长，所以体系中各种溶剂体积比的选择主要以隐丹参酮与丹参酮I的完全分离为基准，收集二氢丹参酮I与杂质的部分，时间(小时)为1.7-2.8，紫外吸收值为0.5-1.2，进行第二次分离，时间(小时)为2.5-3.0，紫外吸收值为0.3-0.9。室温对分离度有一定的影响，以上分离条件适合室温在18-30℃时使用。当室温降低时，可增加水的体积比，以提高分离度。反之亦然。本发明应用高速逆流色谱(HSCCC)法从丹参的粗提物中制备高纯度的四种丹参酮类化合物丹参酮IIA、二氢丹参酮I、隐丹参酮和丹参酮I，纯度可达98％以上。此方法适用于从由各种工艺条件制备的丹参酮粗品中分离制备以上几种丹参酮单体。适用于用各种型号的逆流色谱仪分离制备丹参酮单体，如用分析型高速逆流色谱仪的小量制备及半制备型高速逆流色谱仪的较大量制备。高速逆流色谱(HSCCC)法是一种高效快速分离纯化丹参酮的方法。
下面结合附图对本发明作进一步说明。
图1为本发明的紫外吸收值图，A峰为二氢丹参酮I，B峰为隐丹参酮I，C峰为丹参酮I，E峰为丹参酮IIA。图2为本发明的紫外吸收值图，II峰为二氢丹参酮I和杂质的混合液。图3为本发明的紫外吸收值图，A峰为二氢丹参酮I。
实施例1采用分析型高速逆流色谱仪，选用乙酸乙酯-石油醚-甲醇-水体系分离丹参酮IIA、二氢隐丹参酮I、隐丹参酮和丹参酮I。首先以2∶3∶2.5∶1.7体积比将上述溶剂体系配置于分液漏斗中，摇均后静置分层。待平衡一段时间后，将上相和下相分开，取上相为固定相，下相为流动相。取5mg丹参酮粗提物溶解于1ml上相和1ml下相的混合物中待用。采用北京市新技术应用研究所研制开发的GS10A2分析型高速逆流色谱仪，并配有柱塞泵、进样阀、紫外检测器和记录仪。多层缠绕聚四氟乙烯的柱容量约为40ml。先用固定相充满整个柱子；调整主机转速到1700rpm，以1.0毫升/分的流速将流动相泵入柱内；待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样；然后根据检测器紫外谱图接收目标成分，检测波长为254nm。(见图1)A峰为二氢丹参酮I，B峰为隐丹参酮，C峰为丹参酮I，E峰为丹参酮IIA。纯度都在98％以上。
实施例2采用半制备型高速逆流色谱仪，选用乙酸丙酯-乙醚-乙醇-水体系分离制备丹参酮IIA、隐丹参酮和丹参酮I。首先以1∶4∶2∶2体积比将上述溶剂体系配置于分液漏斗中，摇均后静置分层。待平衡一段时间后，将上相和下相分开，取上相为固定相，下相为流动相。取100mg丹参酮粗提物溶解于10ml上相和10ml下相的混合物中待用。采用北京市新技术应用研究所研制开发的GS10A2型半制备高速逆流色谱仪，并配有柱塞泵、进样阀、紫外检测器和记录仪。起多层缠绕聚四氟乙烯的柱容量约为240ml。先用固定相充满整个柱子；调整主机转速到800rpm，以2.0ml/min的流速将流动相泵入柱内；待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样；然后根据检测器紫外谱图接收目标成分(见图2)。旋转蒸发后，冷冻干燥。得到丹参酮IIA和隐丹参酮各约10mg，丹参酮I约5mg。纯度都在97％以上。
实施例3采用半制备型高速逆流色谱仪，溶剂选用乙酸异丙酯-正己烷-丙酮-水，体积比依次为4∶2∶3∶1。分离制备二氢丹参酮T和杂质的混合液，检测器紫外谱图接收目标成分见图2。采用乙酸正丁酯-环己烷-甲醇-水，体积比依次为2∶3∶2.5∶1.8分离二氢丹参酮I和杂质的混合液，上样量为20mg，其他同实施例2。检测器紫外谱图接收目标成分见图3。
权利要求
1.一种分离纯化丹参酮的方法，其特征在于它是采用逆流色谱法从丹参粗提物中分离制备出高纯度丹参酮，其溶剂组可由a、b、c、d四个组分构成，它们分别是a组分为乙酸乙酯，乙酸丙酯，乙酸异丙酯，乙酸正丁酯等酯类；b组分为正己烷，环己烷，乙醚和石油醚等；c组分为甲醇，乙醇，丙酮等；d组分为水，体积比依次为1-4、2-5、2-3、1-2。
全文摘要
本发明涉及的是一种应用高速逆流色谱法从丹参的粗提物中制备四种高纯度丹参酮类化合物丹参酮IIA、二氢丹参酮I、隐丹参酮和丹参酮I的一种分离纯化丹参酮的方法，分离纯度可达98％以上，此方法适用于从由各种工艺条件制备的丹参酮粗品中分离制备以上几种丹参酮单体，适用于用各种型号的逆流色谱仪分离制备丹参酮单体，如用分析型高速逆流色谱仪的小量制备及半制备型高速逆流色谱仪的较大量制备，本方法是一种高效快速分离纯化丹参酮的方法。
文档编号C07J73/00GK1394870SQ0112011
公开日2003年2月5日 申请日期2001年7月5日 优先权日2001年7月5日
发明者田桂连, 张天佑 申请人:北京天纯维通生物技术有限公司