专利名称：新型脂肪酸类似物的制作方法
技术领域：
本发明涉及新型脂肪酸类似物。进一步的说，本发明涉及脂肪酸类似物用于治疗和/或预防X综合征、肥胖症、高血压、脂肪肝、糖尿病、高血糖、血胰岛素增多和狭窄中的用途。同时，本发明还涉及制备所述新型脂肪酸类似物的操作方法。
背景技术：
EP 345,038描述了具有如下结构式的β-不可氧化的脂肪酸类似物的使用方法；烷基-X-CH2COOR其中的烷基是具有8到22个碳原子的饱和或不饱和的碳氢链，X代表O、S、SO或者SO2，R是氢或者C1-C4烷基，该方法用于治疗血脂过高的情况及用于降低哺乳动物血液中胆固醇和甘油三酯的浓度。
PCT/NO95/00195描述了烷基-S-CH2COOR和烷基-Se-CH2COOR抑制氧化修饰的LDL(低密度脂蛋白)。进一步的，该申请描述了硒-化合物用于治疗血脂过高的情况及用于降低胆固醇和甘油三酯浓度的用途。
PCT申请PCT/NO99/00135、PCT/NO99/00136和PCT/NO99/00149描述了具有结构式(I)的脂肪酸类似物CH3-[CH2]m-[Xi-CH2]n-COOR-其中n是从1到12的整数，及-其中m是0到23的整数，及-其中i是奇数，其表示与COOR相关的位置，及-其中Xi互相独立的选自包括O、S、SO、SO2、Se和CH2的基团，及-其中R代表氢或者C1-C4烷基，
-条件是至少一项Xi不是CH2，或者其盐、其前药或其配合物。
该结构式在3、5、7、9等位置含有一项或多项X基团(优选硒和硫)。
进一步的，上述PCT申请记载了多项医药学和营养学上的应用。
PCT/NO99/00135描述了脂肪酸类似物用于治疗和/或预防肥胖症、高血压、脂肪肝和被称为“代谢综合征”或“X综合征”的多相代谢综合征中的用途。进一步的，该申请描述了一种用于治疗或预防肥胖或超重情况的方法，及引起人类或非人类动物的体重减轻或减少脂类物质的方法。该申请同时还描述了可有效用于降低人类或非人类动物总体重或总脂类物质，或可有效抑制两者增长的营养型组合物；还描述了一种用于改变动物脂肪分布和含量的方法，用以提高肉类、或者牛奶和鸡蛋等农产品的质量。
PCT/NO99/00136描述了脂肪酸类似物用于治疗和/或预防糖尿病(I型和II型)的用途，及治疗或预防血糖过高、血胰岛素增多和对胰岛素灵敏性降低的方法。同时还公开了一种可有效预防人类或非人类血糖浓度增加的营养型组合物，其可作为降低人类或者非人类动物血糖浓度的手段。
PCT/NO99/00149描述了脂肪酸类似物用于治疗和/或预防原发性和/或继发性狭窄，和/或由程序性血管损伤，和/或平滑肌细胞病理性增殖，和/或血浆高半胱氨酸水平的增高引起的疾病中的用途。
由于在上述给出的脂肪酸类似物的碳链中取代的X-原子(最优选硫或硒)的存在，在线粒体中这些化合物将不能超过此位置发生β-氧化。因此，这些分子的降解必须从脂肪酸的甲基尾端开始，这是一项非常慢的过程。所述脂肪酸类似物的降解代谢包括ω-氧化和由过氧化物酶体催化的二羧酸缩链反应。内质网中的酶先ω-羟基化，进一步的，将己羟基化的脂肪酸氧化成二羧酸。
在过氧化物酶体中，所述酸的缩链反应通过β-氧化实现。在对大鼠的研究中显示，在给药24小时内，50％的类似物TTA在尿液中以短链磺酰氧基(sulfoxy)二羧酸的形式排泄出来。在相似的试验中，我们发现了在体内形成的一种TTA去饱和产物。这是由于能将双键插入到饱和脂肪酸9-位置的微粒体酶类Δ9-脱氢酶的存在所致。
预计所述去饱和产物具有相似的活性，和/或能介导饱和脂肪酸类似物的生物活性。脂肪酸类似物的生物活性也可能由于其降解代谢速度的减慢而增强。此效果可通过将双键和/或三键插入到脂肪酸近甲基端，和/或将烷基基团或卤素合并到分子结构的该部分而实现。所述分子结构，即本发明中相应的化合物，不能作为相关微粒体酶类的底物。
肥胖症及相关疾病肥胖症是一种现代社会广泛流行的慢性疾病，它不仅与社会性羞耻有关，更与寿命的降低和众多医学问题有关，包括，不良的心理发育、生殖疾病，如多囊卵巢疾病、皮肤病，如感染、静脉曲张、黑色棘皮症和湿疹，不耐运动、糖尿病、胰岛素抵抗、高血压、血胆固醇过多、胆石病、骨关节炎、整形损伤、血栓疾病、癌症及冠心病。
因此本发明的一个目的即是提供一种能有效的使肥胖对象恢复到正常、理想体重的疗法。
本发明另一目的是提供一种肥胖症的疗法，使得患者在延长期内能保持已减轻的体重。进一步的，降低或者抑制由于高脂肪饮食导致的正常的体重增加也是本发明的目的之一。
本发明的另一目的是为了预防肥胖症；且一旦当治疗开始，阻止或预防肥胖导致的或者肥胖继发性的疾病，如高血压和脂肪肝的发展。上述及其它的目的对于本领域技术人员来说是显而易见的。
此处所指的肥胖症可与任一原因有关，无论是遗传还是周围环境。导致肥胖症或者引起肥胖症的示例性的病症包括饮食过度和食欲过旺、多囊卵巢疾病、颅咽管瘤、Prader-Willi综合征、弗勒利希氏综合征、II型糖尿病、促生长素不足、正常变异性短身材、特纳氏综合征及其它新陈代谢活性降低的病理学状态。
本发明的另一目的是为了提供一种有效降血压的疗法。
进一步的，本发明的目的是为了提供一种能有效降低肝脏中三酰基甘油浓度的疗法。预计这样的疗法将能对脂肪肝病情的发展起抑制作用，该疗法也适合作为一种治疗manifested disease的方法。
本发明的化合物可激活β氧化反应，同时也降低了肝脏中甘油三酯的浓度。
术语“代谢综合征”用于描述多相代谢综合征，除此之外也可确定为血胰岛素过高、胰岛素抵抗、肥胖、不耐葡萄糖症、II型糖尿病、血脂异常或高血压。
正如上文所示，预计本发明能针对上述所有的情况产生积极的效果，即，通过调节糖和脂的体内平衡实现，因此预计本发明的化合物是调节如上定义的代谢综合征(有时也称作X综合征)的适宜试剂。
糖尿病糖尿病主要有两种类型。其一是I型糖尿病，其被认为是胰岛素依赖型糖尿病(IDDM)；其二是II型糖尿病，其被认为是非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)。大多数患有IDDM的病人具有常见的病理学图片；胰岛素-产生的胰腺β-细胞几乎完全消失从而引起高血糖。
已积累的重要证据显示几乎所有IDDM是在延长了数年的无症状期间，行进性β-细胞破坏的结果。可通过对循环胰岛细胞自身抗体和胰岛素自身抗体进行检测识别糖尿病前期。
我们需要一种既无毒性又无副作用，但能预防临床IDDM和NIDDM的化合物。
I型糖尿病严重的糖尿病，通常在病变成熟前突然发作，其特征是血中胰岛素水平降低、烦渴、多尿、食欲增加、体重下降和间歇性酮症酸中毒；也称作IDDM。
II型糖尿病常见但病症较轻的糖尿病，经常是递进性的发作，常发于成年人，特正是胰岛素水平从正常水平升到绝对高水平，该水平相对于血浆葡萄糖水平要低；也称作NIDDM。
I型和II型糖尿病根据病理学划分等级独立的划为原发性糖尿病。
继发性糖尿病包括由胰腺、胰腺外/分泌物或药物诱导的糖尿病。进一步的，某些类型糖尿病归入特例类型。这些特例包括脂肪缺乏性糖尿病、肌松弛性糖尿病和一种由胰岛素受体失调引起的糖尿病。
考虑糖尿病在社会上广泛流行，且与之相关的如上文所述严重的后果，任一可能用于治疗及预防此种疾病的治疗药物将对患者健康产生巨大的有利作用。在本领域中需要一种能降低糖尿病患者体内血糖浓度而无显著副作用的药物。
因此本发明的一个目的是提供一种能有效降低血糖且能治疗糖尿病病情的疗法。
本发明的另一个目的是提供一种能有效降低血液胰岛素浓度且能提高剩余胰岛素作用效果的疗法。
狭窄人们发现许多病理学情况与平滑肌细胞增生有关。上述病况包括再狭窄、动脉硬化、冠心病、血栓形成、心肌梗塞、中风、平滑肌肿瘤，如肠内及子宫内平滑肌瘤和平滑肌肉瘤、和子宫纤维样或纤维瘤。
人们每年要进行超过50万例的干预性血管内手术。当所述介入性手术数量在一段时间内继续增长的同时，每年有30-50％的手术导致了手术后再狭窄而失败，即，形成了继发性的狭窄。再狭窄的恢复，通常被引述为增加通过施用干预性血管内手术以治疗心血管疾病的成功率的重要因素，这些手术如血管成形术、旋切术和利用支架和激光技术的手术。
在球囊血管成形术中，如，经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)，在患者的腿部或臂部动脉作一切口，然后将一条长中空管(叫作引导管)插入到动脉中。将一粗引导金属线和压缩球囊导管插入到引导管中，在x射线造影术辅助下小心的将其向病人血管内推进。压缩球囊到达腔内狭窄位置的时即停止推进，在此位点处，医生给球囊充气一次或多次使其在大约60秒内达到约4-6个大气压的压力。充气后，爆破气囊，使血小板块破裂并舒张动脉壁肌纤维，该力量强于反冲完全的力量。虽然在该手术中没有除去任何血小板块，但是血小板块的破裂及动脉壁的舒张扩大了动脉腔，因此增加了血流量。
上述手术中伴随的再狭窄，其特征为血小板聚集及粘联、平滑肌细胞增生、血管腔缩小、血管舒张受限及血压升高。有报道称在上述手术2-3天内动脉内膜层平滑肌细胞进入了生长循环期，并在术后数天内激增(内膜增生)。
据报道能抑制平滑肌细胞体外增生的药物在体内使用时会产生令人不适的药理学副作用。肝素就是所述化合物的一个例子，其被报道能抑制体外平滑肌增生，但是当用于体内时，其可能具有抑制血凝固的副作用。
从上文可以清楚的看到，在使用抑制药物有效的治疗平滑肌细胞松动和增生的疗法中，仍然存在着许多需要解决的问题。发展新的组合物或方法用于抑制狭窄、再狭窄或由血管平滑肌细胞增生和松动后引起的相关疾病，如在血管手术时出现的外伤损伤，是大有好处的。
可以预计，按本发明所提出的化合物将在上述疾病的治疗中产生有效的效果。
发明详述本发明涉及一种具有以下分子式(I)的新型脂肪酸类似物，或者是其盐、前药或配合物R1-[Xi-CH2]n-COOR2(I)-其中R1是；-具有一个或多个双键和/或一个或多个三键的C6-C24烯烃，和/或-C6-C24炔烃，和/或-C6-C24烷基，其在一个或多个位置被一个或多个选自含氟化物、氯化物、羟基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基、C2-C5酰氧基或C1-C4烷基的化合物取代，且-其中R2代表氢或C1-C4烷基，且-其中n是1-12的整数，且-其中的i是奇数，指示与COOR2相关的位置，且-其中的Xi各自独立的选自含O、S、SO、SO2、Se和CH2的组合，且
-条件是至少一个Xi不是CH2，且-条件是如果R是炔烃，那么碳-碳三键的位置是在(ω-1)碳和(ω-2)碳之间，或者在(ω-2)碳和(ω-3)碳之间，或者在(ω-3)碳和(ω-4)碳之间，本发明的另一方面涉及一种新型的脂肪酸类似物，其中R部分含有碳-碳双键。与脂肪酸类似物相关的一项优选的实施方案中，碳-碳双键在9号位，且为顺势构型。
本发明与涉及式(I)化合物的最优选实施方案中，硫或硒置于3号位。
进一步的，本发明还涉及制备式(I)化合物的方法，其中化合物以实施例1中描述的方法制备。
本发明还涉及式(I)化合物作为药学和/或营养学试剂的使用方法。预计该化合物将具有与上述背景技术的化合物基本相同的生物学活性，因此本发明涉及式(I)化合物在如参考出版物所指示的应用中的使用方法。
由此，本发明涉及式(I)化合物用于制备治疗和/或预防选自包括X综合征、肥胖症、高血压、脂肪肝、糖尿病、血糖过高、血胰岛素增多和狭窄的疾病的药学制剂的用途。
进一步的，本发明涉及式(I)化合物作如下应用时的用途；-降低哺乳动物血中胆固醇和甘油三酯浓度-抑制低密度脂蛋白的氧化修饰。
本发明还涉及一种式(I)化合物的营养学组合物，其能有效的降低或预防人类或非人类动物总体重或总体脂类物质的增加，还涉及一种当人类或非人类哺乳动物需要时能产生体重下降或脂类物质减少的方法。
图1表示合成化合物(Z)3-硫杂-十七基-9-烯-酸的制备方案。
图2表示合成3-硫杂-15-十七炔的制备方案。
本发明化合物的给药作为一种药学制剂，本发明化合物可以任一适当的技术向动物体直接给药，这些技术包括非肠道、鼻内、口服或通过皮肤吸收。它们也可局部或全身给药。可根据，如，动物体的病史来确定每一试剂的特殊的给药路径。
人们通过参考以下实施例能更充分的理解本发明。然而这些实施例不能理解为对本发明范围的限定。
试验部分方法以下所描述的方法作为背景技术化合物的测试体系使用，这些方法也用于测试本发明化合物的生物学效果。
Zucker肥胖(fa/fa)大鼠研究中所使用的Zucker肥胖(fa/fa)大鼠由最初从HarrietG.Bird实验室(Stow，MA，美国)提供的一对大鼠在U465 INSERM动物设备中培育而来。除非有其它的规定，这些动物在恒定的昼夜循环(早700至晚700之间给予光照)、21±1℃环境下饲养，动物们可自由的获取食物和水。每只笼子中放置3只大鼠，并记录每日大鼠增加的体重。
Wistar大鼠从AnLab有限公司(Prague，Czech Repubic)购得体重280-358的雄性Wistar Charles River大鼠，并置于21±1℃温度及光照控制(早700至晚700之间给予光照)的房间内的金属网箱中。动物们可自由的进食和饮水。每只笼子中放置3只大鼠，并记录每日大鼠增加的体重和食物的摄取量。
静脉内糖耐量试验雄性Zucker(fa/fa)大鼠(5星期大)在禁食5小时后经腹腔注射戊巴比妥钠(50mg/kg)实施麻醉。大鼠用葡萄糖(0.55g/kg)注射隐静脉，在葡萄糖注射后0、5、10、15、20和30分钟时间点时在尾静脉收集血样，置于肝素试管中。血样置于冰中，离心，在进行分析前一直将血浆储存于-20℃的环境中。
高血糖胰岛素钳夹试验在分开进食(见上文)21天之后，通过注射盐酸塞拉嗪(RometarSPOFA，Prague，捷克共和国；10mg/ml)和盐酸氯胺酮(NarkamonSPOFA，Prague，捷克共和国；75mg/ml)给大鼠实施麻醉，之后给予慢性颈动脉和颈静脉插管，如Koopmans等(Koopmans，S.J.等编撰Biochim Biophys Acta，1115，2130-2138页，1992年)所描述的那样。术后让插管大鼠恢复两天，之后按照Kraegen等(Kraegen，E.W.等编撰Am J Physiol，248，E353-E362页，1983年)所描述的那样，实施钳夹试验。这样，在插管术后的第三天，给已清醒了的大鼠连续注射剂量为6.4mU/kg/分钟的猪胰岛素(Actrapid，Novo Nordisk，丹麦)，使其血浆胰岛素水平到达生理学水平的上限。通过变速的注射30％w/v葡萄糖溶液(Leciva，Prague，捷克共和国)，使动脉血浆葡萄糖浓度束缚(“钳夹”)在禁食状态的最低水平处。从注射葡萄糖开始，每隔15分钟，取血样用于测定血浆葡萄糖和胰岛素浓度。90分钟之后，大鼠停止变速给药，并立即去头部处死。收集血液后分离出血浆，解剖分离肝脏和附睾的脂肪垫并称重。
血浆指标的测定使用酶方法测定葡萄糖(GLU，Boehringer Mannheim，德国)，游离脂肪酸(NEFA，C ACS-ACOD kit；Wako化学公司，Dalton，美国)及b-羟丁酯(310-A kit；Sigma Diagnostics Inc.，圣路易斯，美国的浓度。使用大鼠胰岛素作为标准品并通过放射免疫测定法(CIS bioInternational，Gif sur Yvette，法国)测定Zucker大鼠的胰岛素浓度。Wistar Charles River大鼠中的血浆葡萄糖浓度在贝克曼葡萄糖分析仪(Fullerton，CA，美国)的辅助下测得。使用从Linco研究公司(St.Charles，MO，美国)获得的放射免疫测定(RIA)装置测定血浆胰岛素水平。磷脂体用法国bioMérieux，Marcy-l｀Etoíle的酶方法测定，三酰甘油用美国Technicon公司的号码为SA4-0324L90的方法测定，且胆固醇可用美国Technicon公司号码为SA4-0305L90的方法测定。
后核及线粒体碎片的制备和酶活力的测定将从单个年老的Zucker大鼠中刚分离下来的肝脏均匀的置于冰冷的蔗糖缓冲液(0.25M蔗糖，10mM HEPES(pH7.4)和2mM EDTA)中。使用预先准备的，按照DeDuve等(De Duve，C.等，生物化学杂志，60，604-617页1955年)方法改进的差示离心法制备后核及线粒体碎片，然后按照先前(Garras，A.等，Biochim.Biophys.Acta，1255，154-160页，1995年)描述的方法进行提纯生产。可溶于酸的产物在后核及线粒体碎片中，如先前描述的方法(Willumsen，N.等，J.Lipid Res.，34，13-22页，1993年)，使用[1-14C]-十六酰-辅酶A和[1-14C]-十六酰-L-肉毒碱(Radiochemical中心，Amersham，英格兰)作为底物进行测定。肉毒碱十六酰转移酶-I和肉毒碱十六酰转移酶-II的活力，基本上如Bremer(Bremer，J.，Biochim.Biophys.Acta，665，628-631页，1981年)所述，在后核及线粒体碎片中测定，3-羟基-3-甲基戊二酰-辅酶A和酶，按照Clinkenbeard等(Clinkenbeard，K.D.等，生物化学杂志，250，3108-3116页，1975年)的描述，在线粒体碎片中测定。
RNA分析RNA提取(Chomczynski，P.等，Anal.Biochem，162，156-159页，1987年)，Northern blot分析、RNA在尼龙纤维上涂缝、和固相化RNA杂交均依照之前记载的方法(Vaagenes，H.等，Biochem.Pharmacol.，56，1571-1582页，1998年)进行。以下互补DNA片段作为探测物使用CPT-I(Esser，V.等，生物化学杂志，268，5817-5822,1993年)、CPT-II(Woeltje，K.F.等，生物化学杂志，265，10720-10725，1990年)、3-羟基-3-甲基戊二酰-辅酶A合酶(Ayte，J.等，Proc.Natl.Acad.Sci.美国，87，3874-3878，1990年)及激素敏感性脂酶(Holm，C.等，Biochim.Biophys.Acta，1006，193-197，1989年)。RNA表达的相对水平估计为用于与28S核糖体RNA的独立水平的杂交的放射性探测物的量。
结论实施例1新型脂肪酸化合物的合成A)含碳-碳双键的非-β-可氧化的脂肪酸类似物。
参考硫杂-十七碳-9-烯酸的合成，可代表性的说明合成本发明化合物的操作。
(Z)HO(O)C-CH2-S-(CH2)5-CH＝CH-C7H15表示顺势构型。
1.1-溴-5-羟基-戊烷的制备戊-1，5-二醇、HO-(CH2)5-OH溶于苯中，与HBr反应，回流24小时。所得混合产物用色谱法提纯，先用85∶15的乙烷-二乙基醚混合物洗脱，以除去二溴化物，之后用70∶30的混合物洗脱。1-溴-5-羟基-戊烷的产率是80％。
1H-核磁共振1，81(-CH2-CH2OH)，1，44(-CH2-)，3，35(-CH2-Br)，3，55(-CH2-OH)，3，32(-OH)，1，51(-CH2-CH2Br)。
13C-核磁共振31，43-32，30(C2，C4)，24，24(C3)，33，64(C5)，62，11(C1)。
2. 5-(四氢吡喃基氧基)-1-溴戊烷的制备上述化合物在0℃下与3，4-二氢-2H-吡喃在CH2Cl2中反应。滴2滴浓HCL作为催化剂。除去溶剂后，反应产物用色谱法提纯，用95∶5己烷-二乙基醚洗脱。5-(四氢吡喃基氧基)-1-溴戊烷的产率是77％。
1H-NMR1，45-1，63(-CH2-)，1，83(-CH2-CH2O-)，3，38(-CH2-Br)，3，27-3，79(-CH2-O-)，4，52(-O-CH-O)。
13C-NMR24，9-32，92(C2-C4)，33，61(C5)，62，26(C6)，98，83(C1在THP中)。
3. 7-(四氢吡喃基氧基)-1-庚炔的制备步骤2所得产物在0℃下与锂-乙炔化物的EDA络合物在干燥二甲亚砜中、并在氩气环境下反应。4小时之后，在反应产物室温下用水水解，所得有机产物用二乙基醚提取。除去醚之后，所剩残留物用色谱法提纯，用97∶3的己烷-二乙基醚洗脱，所得7-(四氢吡喃基氧基)-1-庚炔产率为62％。
1H-NMR1，45-1，66(-CH2-)，3，45-3，82(-CH2-O)，2，16(-CH2-C≡)，1，90(HC≡C-)，4，53(-O-CH-O-)。
13C-NMR18，27-30，66(C3-C6)，62，21(C7)，68，14(C1)，84，40(C2)。
4. 1-(四氢吡喃基氧基)-十四碳-6-炔的制备1.6M丁基锂的己烷和THF溶液在0℃下的氩气环境中加入步骤3的产物，加入1-溴庚烷和N，N-二甲基亚丙基脲的混合物。水解之后，进行提取和色谱分离，1-(四氢吡喃基氧基)-十四碳-6-炔分离得到的产率是69％。
1H-NMR；0，85(CH3-)，1，22-1，57(-CH2-)，2，10(-CH2-C≡)，3，30-3，84(-CH2O-)，4，55(-O-CH-O-)。
13C-NMR；14，02(C14)，22，60-31，73(C2-C13)，18，69-18，71(C5og C8)，62，23(C1)，79，91-80，32(C6og C7)。
5. 1(四氢吡喃基氧基)-十四碳-6-烯的制备从步骤4中获得的取代的十四碳-6-炔在林德拉催化剂乙醇溶液存在的情况下用氢还原。还原反应持续4小时。1(四氢吡喃基氧基)-十四碳-6-烯对于进行步骤6的反应而言已纯化充分，无需进一步的提纯操作，在色谱分离后其分离得到的产率为89％。
1H-NMR0，90(CH3-)，1，27-1，61(-CH2-)，3，39-3，89(-CH2-O)，2，04(-CH2-C＝)，4，59(-O-CH-O-)，5，37(-HC＝CH-)。
13C-NMR14，07(C14)，22，65-31，85(C2-C13)，62，27(C1)，27，13，27，19(C5和C8)，129，60-130，04(C6和C7)。
6. 1-溴十四碳-6-烯的制备步骤5的产物在0℃、PH3P存在的条件下用CBr4的二氯甲烷溶液溴化。反应混合物搅拌过夜。1-溴十四碳-6-烯的产率可定量。
1H-NMR0，87(CH3-)，1，27-1，52(-CH2-)，2，01(-CH2-C＝)，3，39(-CH2-Br)，1，45(-CH2-CH2-Br)，1，85(-CH2-CH2C＝)，5，34(-HC＝CH-)。
13C-NMR14，00(C14)，22，60-32，68(C2-C13)，26，97，27，24(C5和C8)，33，75(C1)，129，15-130，32(C6和C7)。
7. (Z)硫杂-十七碳-9-烯酸的制备步骤6所得的溴癸烯甲醇液在氩气环境中，在30分钟内加入到3当量的KOH和1.5当量的HS-CH2-C(O)OH甲醇液。室温下搅拌4小时，再回流12小时，之后水解，并用二乙基醚提取，之后酸化到pH1-2，所得产物，也即标题化合物，以粘性油的形式分离，产率为60％。
产物进行下述分析检验；红外光谱法(IR)，600MHz 1H及13C核磁共振(NMR)、质谱(MS)、气象色谱(GC)、甲酯GC-MS联用。NMR结果再下文中给出。所有给出的数据为百万分之一(ppm)。检验中未检测到痕量的E-化合物。
1H-NMR0.86(CH3-)，1.16-1.60(-CH2-)，1.99(-CH2-C＝)，2.64(-CH2-S-)，3.22(-S-CH2-C(O)OH)，5.33(HC＝CH)。
13C-NMR176.63(C1)，33.34(C2)，32.69(C4)，22.63-31.83(C5-C7，C12-C16)，129.32及130.24(C9，C10)，26.98及27.19(C8，C11)，14.08(C17)。
B)含碳-碳三键的非-β-可氧化的脂肪酸类似物参考3-硫杂-15-十七炔的合成，可代表性的说明合成本发明化合物的操作，如图1所示。
1. 11-溴-1(四氢-2-吡喃基氧基)十一烷基的制备吡啶甲苯4-磺酸酯(1.0g，4.0mmol)和11溴-1-十一醇(10.0g，400mmol)在室温下溶于干燥CH2CH2(200ml)中，然后加入3，4-二氢-2H-吡喃(5.0g，60mmol)。反应混合物搅拌过夜。反应粗产品在硅胶上用快速色谱法(flash chromatography)用CH2Cl2洗脱。11-溴-1(四氢-2-吡喃基氧基)十一烷基的产量是10.7g(80％)。
2. 14-(四氢-2-吡喃酰基)-2-十四炔的制备将丙炔气体通入到甲基锂的二乙基醚溶液(0.8M，60ml，51.2mmol)中，气体通入的速度应当能保证其中的醚回流。当反应不再发热时，则可认为反应已经结束(白色浆液)。将11-溴-1(四氢-2-吡喃基氧基)十一烷基(反应2的产物)(13.0g，38.8mmol)在20分钟内逐滴滴入上述溶液中。搅拌反应过夜之后，仔细的逐滴滴入50ml水。所得混合物用二乙基醚稀释，之后用水洗涤(5次)，干燥(用MgSO4)并蒸发溶剂。所得粗产品用快速色谱法提纯，使用CH2Cl2作为洗脱剂。14-(四氢-2-吡喃酰基)-2-十四炔的产量为8.5g(74％)。
3. 12-十四炔-1-醇的制备吡啶甲苯4-磺酸酯(0.3g，1.2mmol)和炔烃(第3步产物)溶于乙醇中(25ml)，加热至50℃过夜。蒸发溶剂后，分成水相和CH2Cl2两相。水相用水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发掉溶剂。粗产物用快速色谱法提纯，使用CH2Cl2作为洗脱剂。12-十四炔-1-醇的产量为1.5g(78％)。
4. 14-溴-2-十四炔的制备12-十四炔-1-醇(5.0，23.8mmol)溶于己烷(50ml)中，加入10滴吡啶。向混合物中加入PBr3。将混合物加热至60℃，持续3小时，冷却后，逐滴滴入水份。混合物用水洗涤后，干燥(MgSO4)，蒸发掉溶剂。粗产品用快速色谱法纯化，使用己烷为洗脱剂，至己烷中含有2.5％EtOAc时结束。14-溴-2-十四炔的产量为2.2g(34％)。
5. 3-硫杂-15-十七炔的制备KOH(2.76g，49.0mmol)溶于甲醇(30ml)中，向其中逐滴加入巯基乙酸(2.04g，22.1mmol)的甲醇(25ml)溶液。10分钟后，小心的逐滴加入14-溴2-十四炔(5.5g，20.1mmol)，之后将混合物加热到50℃过夜。所得混合物冷却到0℃后，加入30ml HCl(pH＝1)。沉淀过滤后用水洗涤(2次)。将固态产品溶于氯仿(100ml)中，之后再用水洗涤一次，干燥(MgSO4)后，蒸发掉溶剂。3-硫杂-15-十七炔的产量为4.4g(77％)。
1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ1.26(10H，急速m)，1.3-1.4(4H，m)，1.46(2H，quint，J＝7.0Hz，≡CCH2CH2-)，1.60(2H，quint，J＝7.0Hz，-CH2CH2S-)，1.77(3H，t，J＝2.6Hz，CH3C≡)，2.10(2H，tq，J＝2.6，7.0Hz，＝CCH2-)，2.65(2Ht，]＝7.3Hz，-CH2-S-)，3.25(2H，s，-SCH2COOH)，10.40(1H，宽峰-COOH)。
13C NMR(75MHz，CDCl3)δ3.35(CH3C≡)，18.61(≡CCH2-)，28.50，28.78，28.78，28.97，29.04，29.04，29.34，29.38，29.40，32.70(-CH2CH2S-)，33.3*(-SCH2CO)，75.20(MeC≡C-)，79.31(MeC≡C-)，176.42(CO)。
C)某一位置或多个位置被取代的非-β-可氧化的脂肪酸类似物脂肪酸链上的一个或多个的H可以被选自以下的一个或多个化合物取代，包括氟化物、氯化物、氢氧基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基、C2-C5酰氧基或C1-C4烷基。举例来说，取代基可以在上述1-4步反应中，通过选择其它的底物，合入式(I)化合物中。
最后，上述步骤(C)中制备的化合物可通过常用的氢化反应转换成饱和化合物，这样所得的化合物的R1基团是在一个或多个位置被取代的完全饱和的碳链(即，烷基)。
实施例2TTA毒性研究按照PCT/NO99/00135所描述的方法进行毒性研究和诱变活性的测试。
实施例3本发明新型化合物生物学活性的测定可以按照前文试验章节所描述的方法进行，也可以如文中所引出版物记载的方法进行。
权利要求
1.通式(I)的新型脂肪酸类似物或其盐、前药或配合物R1-[Xi-CH2]n-COOR2(I)-其中R1是；-含一个或多个双键和/或三键的C6-C24烯烃，和/或-C6-C24炔烃，和/或-在一个或多个位置上被选自如下的化合物取代的C6-C24烷基，取代物包括氟化物、氯化物、氢氧基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基、C2-C5酰氧基或C1-C4烷基，-其中R2表示氢或C1-C4烷基，及-其中n是1到12的整数，及-其中i是奇数，其表示与COOR2相关的位置，及-其中Xi各自独立的选自O、S、SO、SO2、硒和CH2，及-条件是至少一个Xi不是CH2，及-条件是如果R1是炔烃，那么碳-碳三键的位置在(ω-1)碳与(ω-2)碳之间，或在(ω-2)碳和(ω-3)碳之间，或者在(ω-3)碳和(ω-4)碳之间。
2.权利要求1的新型脂肪酸类似物，其中R部分含有一碳-碳三键。
3.权利要求1的新型脂肪酸类似物，其中R部分含有一碳-碳双键。
4.权利要求5的新型脂肪酸类似物，其中所述碳-碳双键在9号位。
5.权利要求6的新型脂肪酸类似物，其中碳-碳双键具有顺势构型。
6.权利要求1-5中任一项的新型脂肪酸类似物，其中Xi＝3是硫。
7.权利要求1-5中任一项的新型脂肪酸类似物，其中Xi＝3是硒。
8.制备式(I)化合物的方法，其中化合物以实施例1所述方法制备。
9.式(I)化合物和其盐、前药或组合物在制备治疗和/或预防选自X综合征、肥胖、高血压、脂肪肝、糖尿病、高血糖、血胰岛素增多和狭窄的药物组合物中的应用R1-[Xi-CH2]n-COOR2(I)-其中R1是；-含一个或多个双键和/或三键的C6-C24烯烃，和/或-C6-C24炔烃，和/或-在一个或多个位置上被选自如下的化合物取代的C6-C24烷基，取代物包括氟化物、氯化物、氢氧基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基、C2-C5酰氧基或C1-C4烷基，-其中R2表示氢或C1-C4烷基，及-其中n是1到12的整数，及-其中i是奇数，其表示与COOR2相关的位置，及-其中Xi各自独立的选自O、S、SO、SO2、硒和CH2，及-条件是至少一个Xi不是CH2，及-条件是如果R1是炔烃，那么碳-碳三键的位置在(ω-1)碳与(ω-2)碳之间，或在(ω-2)碳和(ω-3)碳之间，或者在(ω-3)碳和(ω-4)碳之间。
10.式(I)化合物或其盐、前药、组合物在制备用于以下情况的药物组合物中的用途；-降低哺乳动物血中胆固醇和甘油三酯浓度-抑制低密度脂蛋白的氧化修饰R1-[Xi-CH2]n-COOR2(I)-其中R1是；-含一个或多个双键和/或三键的C6-C24烯烃，和/或-C6-C24炔烃，和/或-在一个或多个位置上被选自如下的化合物取代的C6-C24烷基，取代物包括氟化物、氯化物、氢氧基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基、C2-C5酰氧基或C1-C4烷基，-其中R2表示氢或C1-C4烷基，及-其中n是1到12的整数，及-其中i是奇数，其表示与COOR2相关的位置，及-其中Xi各自独立的选自O、S、SO、SO2、硒和CH2，及-条件是至少一个Xi不是CH2，及-条件是如果R1是炔烃，那么碳-碳三键的位置在(ω-1)碳与(ω-2)碳之间，或在(ω-2)碳和(ω-3)碳之间，或者在(ω-3)碳和(ω-4)碳之间。
11.一种能有效的减轻、或者预防人类或者非人类总体重或总体脂类物质升高的营养组合物，含有式(I)新型脂肪酸类似物或者其盐、前药或其组合物。R1-[Xi-CH2]n-COOR2(I)-其中R1是；-含一个或多个双键和/或三键的C6-C24烯烃，和/或-C6-C24炔烃，和/或-在一个或多个位置上被选自如下的化合物取代的C6-C24烷基，取代物包括氟化物、氯化物、氢氧基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基、C2-C5酰氧基或C1-C4烷基，-其中R2表示氢或C1-C4烷基，及-其中n是1到12的整数，及-其中i是奇数，其表示与COOR2相关的位置，及-其中Xi各自独立的选自O、S、SO、SO2、硒和CH2，及-条件是至少一个Xi不是CH2，及-条件是如果R1是炔烃，那么碳-碳三键的位置在(ω-1)碳与(ω-2)碳之间，或在(ω-2)碳和(ω-3)碳之间，或者在(ω-3)碳和(ω-4)碳之间。
12.一种能使人类或非人类在其需要时降低体重或减少脂类物质的方法，包括向其给予有效量的含通式(I)的脂肪酸类似物或其盐、前药或其组合物的组合物R1-[Xi-CH2]n-COOR2(I)-其中R1是；-含一个或多个双键和/或三键的C6-C24烯烃，和/或-C6-C24炔烃，和/或-在一个或多个位置上被选自如下的化合物取代的C6-C24烷基，取代物包括氟化物、氯化物、氢氧基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基、C2-C5酰氧基或C1-C4烷基，-其中R2表示氢或C1-C4烷基，及-其中n是1到12的整数，及-其中I是奇数，其表示与COOR2相关的位置，及-其中Xi各自独立的选自O、S、SO、SO2、硒和CH2，及-条件是至少一个Xi不是CH2，及-条件是如果R1是炔烃，那么碳-碳三键的位置在(ω-1)碳与(ω-2)碳之间，或在(ω-2)碳和(ω-3)碳之间，或者在(ω-3)碳和(ω-4)碳之间。
全文摘要
本发明涉及一种可用于治疗和/或预防X综合征、肥胖、高血压、脂肪肝、糖尿病、高血糖、血胰岛素增多和狭窄的具有通式(I)的新型脂肪酸类似物和其盐、前药或者配合物R
文档编号C07C323/52GK1419532SQ01807111
公开日2003年5月21日 申请日期2001年3月2日 优先权日2000年3月3日
发明者R·伯杰, L·K·西德尼斯, J·桑斯塔德 申请人:蒂亚梅迪卡有限公司