专利名称：依赖细胞周期蛋白的激酶的n－[5－[[[5－烷基－2－噁唑基]甲基]硫代]－2－噻唑基 ...的制作方法
技术领域：
本发明涉及式I化合物和其对映体、非对映体、溶剂合物及药学上可接受的盐 其中R是烷基；R1是氢或烷基；X是NR2或CHNR2R3；R2和R3各自独立是氢、烷基、取代的烷基、环烷基或取代的环烷基；以及n是0、1、2或3。
式I化合物尤其可用作有效的、蛋白激酶抑制剂，可用于治疗增生性疾病，例如癌症、炎症和关节炎。它们还可用于治疗Alzheimer病、化疗诱发的脱发和心血管疾病。
本发明提供式I化合物、使用这些化合物的药用组合物以及使用这些化合物的方法。
以下列出用于说明本发明化合物的各种术语的定义。当在说明书全文中单独或作为一个较大基团的一部分使用这些术语(除非它们在具体事例中另有限定)时，这些定义适用于所述术语。
除非另外说明，术语“烷基”或“alk”指含有1到12个，优选1-6个，更优选1-4个碳原子的单价烷烃(烃)衍生的基团。烷基基团任选为取代的直链、支链或环状的饱和烃基。当取代时，在任何可利用的连接点，可以用最多四个取代基(如定义的R4)取代烷基基团。当说所述烷基基团被一个烷基基团取代时，可以与“支链烷基基团”互换使用。未取代的这些基团的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基、异己基、庚基、4，4-二甲基戊基、辛基、2，2，4-三甲基戊基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基等。取代基的实例可包括，但不限于一个或多个下列基团卤代基(如F、Cl、Br或I)、卤代烷基(如CCl3或CF3)、烷氧基、烷硫基、羟基、羧基、烷基羰基、烷氧羰基、烷基羰基氧基、氨基、氨基甲酰基、脲、脒基或硫羟基。
环烷基为含有3到15个碳原子，在碳原子之间没有更迭双键或共振双键的一类烷基。它可包含1-4个环。未取代的这些基团的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。取代基的实例包括一个或多个下列基团卤代基、烷基、烷氧基、烷基羟基、氨基、硝基、氰基、硫羟基和/或烷硫基。
本文所用的术语“烷氧基”或“烷硫基”表示分别通过氧键(-O-)或硫键(-S-)连接的如上所述的烷基基团。
本文所用的术语“烷氧羰基”表示通过羰基连接的烷氧基基团。烷氧羰基由下式表示-C(O)OR5，其中R5是直链或支链C1-6烷基。
术语“烷基羰基”指通过羰基连接的烷基。
本文所用的术语“烷基羰基氧基”指通过氧键连接的烷基羰基。
本文所用词组“本发明化合物”统指式I范围内的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂合物(包括水合物)。成盐、溶剂化和成水合物的方法在本领域是熟知的。本发明还包括本发明化合物的立体异构体混合物。立体异构体包括，但不限于对映体、非对映体和其中所述化合物具有一或多个手性中心的外消旋体。预计本发明化合物的所有立体异构体或者以混合物或者以纯或基本上纯的形式存在。本发明化合物的定义包括所有可能的立体异构体及其混合物。尤其包括具有特定活性的外消旋体形式和分离的光学异构体形式。所述外消旋体可通过物理方法，如非对映体衍生物的分级结晶、分离或结晶或者通过手性柱层析分离进行拆分。单一光学异构体可用外消旋体，通过常用方法，如与光学活性酸成盐，然后结晶获得。预计本发明化合物的所有构型异构体或者以混合物或者以纯或基本纯的形式存在。本发明化合物的定义特别包含顺式(Z)和反式(E)链烯异构体以及环烷基或杂环烷基环的顺式和反式异构体。
另外，本发明还包括药学上不适合但可用于其它方面(如分离或纯化式I化合物)的式I化合物的盐。
本文中通过化学结构和/或化学名称来定义本发明的化合物。当同时用化学结构和化学名称指定某一化合物，并且该化学结构和化学名称冲突时，该化合物结构对化合物本身具有决定性作用。
本文所用词组“药学上可接受的盐”包括，但不限于可在本发明化合物中存在的酸性或碱性基团的盐。这些药学上可接受的盐的实例包括，但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐及其混合物。还包括与其它有机或无机酸，如羟基甲磺酸、乙酸、苯磺酸、甲苯磺酸形成的盐，或者各种其它盐，如硝酸盐、磷酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、水杨酸盐等。另外，可与碱金属，如钠、钾和锂；碱土金属，如钙和镁；有机碱，如二环己基胺、三丁基胺和吡啶等；氨基酸，如精氨酸、赖氨酸等形成式I化合物的药学上可接受的盐。
本发明化合物的盐包含其溶剂合物、外消旋体及其所有的立体异构体形式，包括对映体和非对映体(例如，D-酒石酸盐和L-酒石酸盐)。
本文所用术语“溶剂合物”是指还包括通过非共价分子间力结合的化学计量或非化学计量量的一或多个溶剂分子的本发明化合物及其盐。优选的溶剂为挥发性、非毒性和/或痕量给予人时可接受的溶剂。当所述溶剂为水时，该溶剂合物称为“水合物”。
式I化合物可通过采用WO 99/65884和WO 99/24416中提出的方法制备，两专利均结合到本文中作为参考。或者，可用以下方案A中所示的通用方法制备式I化合物，该方案A说明式XIV化合物大类的合成方法。该原料化合物可以买到或者可通过本领域普通技术人员已知的方法制备。方案A中所用的术语如下R7、R8和R10独立是氢或烷基；R是烷基、芳基或杂芳基；R9是氢、烷基、芳基或杂芳基；R1和R11独立是氢、烷基、芳基、杂芳基、卤代基、羟基或烷氧基；R12是氢、烷基、环烷基、芳基、杂芳基、CONR13R14、COR15或COOR16；R13、R14、R15和R16独立是氢、烷基或芳基；r是0-5的整数；s是0-5的整数；L是适当的离去基团，如卤代基或磺酸根(R6SO2O-、CF3SO2O-等，其中R6是烷基、环烷基或芳基)；M是氢、Li、Na、K、Cs或季铵离子，如(R6)4N或包含环亚烷基四胺(如六亚甲基四胺)的季铵离子；Q是羟基、卤代基或酰氧基(R6COO-、R6OCOO-等)；Y是O、S、NH、N-烷基、N-芳基或N-酰基；Z是氢、烷基、芳基、O-烷基、O-芳基、S-烷基、S-芳基、NH2、N-烷基、N-芳基或N-酰基；和P是氮保护基(Boc、Cbz、R3Si等)。当官能团被称为“被保护”时，是指该基团是以一种在保护位置防止不适副反应的修饰形式存在。从本领域技术人员的水平考虑，并参考结合到本文中作为参考的标准教科书，如第3版(1999)的Greene，T.W.，Protective Groups inOrganic Synthesis，很容易从该说明书中识别出该方法中涉及的化合物的适当保护基。
本方法一般涉及α-卤代酮II(可以买到或者可通过熟知的方法容易地合成)与叠氮化物反应生成α-叠氮基酮III的反应。用还原剂还原III得到α-氨基酮IV。
另一种更为有利的选择是通过使α-卤代酮II与环亚烷基四铵(如六亚甲基四胺等)反应，然后将得到的、新的季铵盐III’水解，制备α-氨基酮IV。该反应提供收率很好(90％以上)的所要求的中间体化合物IV。
然后，在碱存在下，使α-氨基酮IV与α-卤代酰基卤V反应，或者使α-氨基酮IV与α-卤代酸偶合，生成对应的酰胺VI。随后，VI与脱水剂进行闭环反应，生成2-噁唑基烷基卤化物VII。当使用常规的脱水剂，如三卤氧磷(如POCl3)时，由于形成大量的盐酸和磷酸，产物分离困难。因此，本发明的该方法优选利用Burgess试剂，该试剂能得到较好的收率，并能容易、安全地从水中分离出产物。
接着将2-噁唑基烷基卤化物VII用含硫试剂VIII或VIII’处理，生成新的关键中间体化合物2-噁唑基烷基硫化物IX。IX与5-卤代-2-氨基噻唑X偶合，得到5-(2-噁唑基烷硫基)-2-氨基噻唑XI。XI与氮杂环烷酸衍生物XII偶合，得到噻唑基酰胺XIII，后者可脱保护(在P是保护基如Boc的情况下)生成5-(2-噁唑基烷硫基)-2-氮杂环烷酰基氨基噻唑XIV。方案A 如方案A中所示，5-(2-噁唑基烷硫基)-2-氮杂环烷酰基氨基噻唑及其类似物的制备过程包括下列转化步骤(a)包括在适当的溶剂或溶剂混合物中，使α-取代的酮II(如α-卤代酮)与叠氮化物反应生成α-叠氮基酮III；或者，更理想的是(a’)在适当的溶剂或溶剂混合物中，使α-取代的酮II(如α-卤代酮)与环亚烷基四铵(如六亚甲基四胺)反应，得到新的季铵盐III’。
该α-卤代酮包括α-卤代脂族和α-卤代芳族酮。优选的α-卤代酮为α-卤代频哪酮，最优选α-溴代频哪酮。磺酸根，如RSO2O-(其中R是烷基、芳基或杂芳基)、CF3SO2O-等可取代α-位的卤代基。该叠氮化物包括金属叠氮化物和季铵叠氮化物。优选金属叠氮化物，最优选叠氮化钠。适当的溶剂包括如烃、醚、酰胺(如二甲基甲酰胺)、酮等溶剂或其混合物，反应(a)和(a’)都优选酮溶剂，如丙酮。
步骤(b)包括在适当的溶剂或溶剂混合物中，使步骤(a)中得到的α-叠氮基酮III与还原剂反应得到α-氨基酮IV，或者，更理想的是(b’)在适当的溶剂或溶剂混合物中，使步骤(a’)中得到的季铵盐III’与酸反应得到α-氨基酮IV。
反应(b)中的还原剂包括在过渡金属催化剂如钯、三烷基或三芳基膦(如三苯膦)存在下的氢。优选过渡金属催化剂存在下的氢，最优选氢和活性碳-钯。反应(b)中的适当溶剂包括如烃、醚、醇等溶剂或其混合物，其中优选醇溶剂，如甲醇。或者，该还原反应可在酸性介质(如盐酸的乙醇溶液)存在下进行，得到可分离为酸式盐或游离胺形式的α-氨基酮酸盐。
反应(b’)中的酸包括但不限于质子酸，如HCl、HBr、HI、H2SO4、H3PO4等，其中优选HCl。反应(b’)中的适当溶剂包括如烃、醚、醇等溶剂或其混合物，其中优选醇溶剂，如乙醇。所述α-氨基酮产物可被分离为盐或游离碱形式。
步骤(c)包括在碱存在下，并在适当的溶剂或溶剂混合物中，使步骤(b)或(b’)中得到的α-氨基酮IV或其酸式盐与α-取代的酰基衍生物V(如α-卤代酰基卤)反应(酰化)，得到酰胺VI。
α-卤代酰基卤V包括α-烷基或芳基取代或未取代的α-卤代酰基卤，其中优选后者。最优选的α-卤代酰基卤是α-氯代乙酰氯。反应中所用的碱包括但不限于芳族和脂族有机胺，其中优选后者。最优选的碱为三乙胺。适当的溶剂包括如烃、卤代烃、醚、酯等非质子溶剂或其混合物，其中优选卤代烃溶剂，如二氯甲烷。或者，可用α-取代酸代替α-取代酰基衍生物，然后采用偶联剂，如水溶性二亚胺(如碳二亚胺)、卤代甲酸酯、亚硫酰卤等进行该反应。在任一反应中，磺酸根如RSO2O-(其中R是烷基、芳基或杂芳基)、CF3SO2O-等可取代α-卤代酰基卤或者举例说明的α-卤代酸反应物的α-位的卤代基。
步骤(d)涉及在适当的溶剂或溶剂混合物中，使步骤(c)中得到的酰胺VI与脱水剂反应，得到环化的2-噁唑基烷基衍生物VII，如2-噁唑基烷基卤化物。
较为有利的是利用氢氧化(甲氧羰基氨磺酰基)三乙铵(Burgess试剂)作为脱水剂来进行该反应。适当的溶剂包括烃、卤代烃、醚等或其混合物。最优选在四氢呋喃中利用Burgess试剂。适当的脱水剂还包括，但不限于其它碱、酸、酸酐等，如浓硫酸、多磷酸等。虽然不便于使用，所述脱水剂可以是三卤氧磷，如三溴氧磷或三氯氧磷，其可单独或与溶剂(如甲苯)一起使用。
步骤(e)涉及在适当的溶剂或溶剂混合物中，使步骤(d)中得到的2-噁唑基烷基衍生物VII与含硫试剂VIII或VIII’反应，生成新的关键中间体化合物2-噁唑基烷基硫化物IX。
含硫试剂包括N-取代或未取代的硫脲、硫代酸或盐(如硫代乙酸或其盐)、黄原酸或盐(如乙基黄原酸钾盐)。优选未取代的硫脲。适当的溶剂包括烃、卤代烃、醚、酯、酰胺、醇等或其混合物，其中优选醇溶剂，如甲醇或乙醇。
步骤(f)涉及在碱存在下，在适当的溶剂或溶剂混合物中，使步骤(e)中得到的2-噁唑基烷基硫化物IX与5-卤代-2-氨基噻唑X反应，生成5-(2-噁唑基烷硫基)-2-氨基噻唑XI。
5-卤代-2-氨基噻唑包括4-N-取代或未取代的5-卤代-2-氨基噻唑，其中优选5-溴代-2-氨基噻唑。适当的碱包括，但不限于金属氢氧化物、金属醇盐、金属碳酸盐和胺如氢氧化铵的水溶液。优选氢氧化钠。适当的溶剂包括如烃、卤代烃、醚、酯、酰胺、醇等溶剂或其混合物，其中优选卤代烃溶剂，如二氯甲烷。
步骤(g)涉及在偶联剂存在下，在适当的溶剂或溶剂混合物中，使步骤(f)中得到的5-(2-噁唑基烷硫基)-2-氨基噻唑XI与氮杂环烷酸衍生物XII反应，得到噻唑基酰胺XIII。
所述氮杂环烷酸衍生物包括N-保护的衍生物，如N-保护的异哌啶甲酸或N-保护的3-哌啶甲酸。优选的氮保护基为Boc、Cbz、硅衍生物等，其中最优选Boc。所述偶联剂包括，但不限于水溶性碳二亚胺、卤代甲酸酯等，优选碳二亚胺，如烷基碳化二亚胺。适当的溶剂包括如烃、卤代烃、醚、酯、酰胺等溶剂或其混合物，其中优选卤代烃溶剂，如二氯甲烷。
步骤(h)涉及在适当的溶剂或溶剂混合物中，使步骤(g)中得到的噻唑基酰胺XIII与脱保护剂反应，得到所需的5-(2-噁唑基烷硫基)-2-氮杂环烷酰基氨基噻唑XIV(其中R11是氢)。
依据保护基(P)的性质来选择脱保护剂。对于Boc保护基，优选的脱保护剂为酸，如盐酸或三氟乙酸，该脱保护反应的适当溶剂包括如烃、卤代烃、醚、酯、酰胺等溶剂或其混合物，其中优选卤代烃溶剂，如二氯甲烷。
以下方案1-5中说明式I化合物的更详细的合成法。原料化合物可以买到或者可根据本领域普通技术人员已知的方法制备。在下面方案1-5中使用以下术语L是适当的离去基团，如卤代基或磺酸根(如Br、Cl、I、R6SO2O-、CF3SO2O-，其中R6是烷基、环烷基、杂芳基或芳基)；M是氢、Li、Na、K、Cs或季铵离子，如(R6)4N或包含环亚烷基四胺(如六亚甲基四胺)的季铵离子；Q是羟基、卤代基或酰氧基(R6COO-、R6OCOO-等)；Y是O、S、NH、N-烷基、N-芳基或N-酰基；和
Z是氢、烷基、芳基、O-烷基、O-芳基、S-烷基、S-芳基、NH2、N-烷基、N-芳基或N-酰基。方案1给出式11化合物的合成法。
方案1 式11化合物的合成法 首先，步骤(a)涉及在适当的溶剂或溶剂混合物中，使适当的α-取代的酮2(如α-卤代酮)与叠氮化物反应，生成α-叠氮基酮3；或者，更理想的是(a’)在适当的溶剂或溶剂混合物中，使酮2与环亚烷基四铵(如六亚甲基四胺)反应，得到季铵盐3’。
适当的α-卤代酮2包括α-卤代脂族和α-卤代芳族酮。优选的α-卤代酮为α-卤代频哪酮，最优选α-溴代频哪酮。磺酸根如R6SO2O-(其中如上定义，R6是烷基、环烷基、杂芳基或芳基)、CF3SO2O-等可取代α-位的卤代基(如L)。该叠氮化物包括金属叠氮化物和季铵叠氮化物。优选金属叠氮化物，最优选叠氮化钠。适当的溶剂包括烃、醚、酰胺(如二甲基甲酰胺)、酮等溶剂或其混合物，反应(a)和(a’)都优选酮溶剂，如丙酮。
步骤(b)包含在适当的溶剂或溶剂混合物中，使步骤(a)中得到的α-叠氮基酮3与还原剂反应，得到α-氨基酮4，或者，更理想的是(b’)在适当的溶剂或溶剂混合物中，使步骤(a’)中得到的季铵盐3’与酸反应，得到α-氨基酮4。
反应(b)中的还原剂包括在过渡金属催化剂如钯、三烷基或三芳基膦(如三苯膦)存在下的氢。优选过渡金属催化剂存在下的氢，最优选氢和活性碳-钯。反应(b)中的适当溶剂包括烃、醚、醇等或其混合物，其中优选醇溶剂，如甲醇。或者，该还原反应可在酸性介质(如盐酸的乙醇溶液)存在下进行，得到可分离为酸式盐或游离胺形式的α-氨基酮酸盐。
反应(b’)中使用的适当酸包括，但不限于HCl、HBr、HI、H2SO4、H3PO4等，其中优选HCl。反应(b’)中的适当溶剂包括烃、醚、醇等或其混合物，其中优选醇溶剂，如乙醇。所述α-氨基酮产物可分离为酸式盐或游离碱形式。
步骤(c)包括在碱存在下，并在适当的溶剂或溶剂混合物中，使步骤(b)或(b’)中得到的α-氨基酮4或其酸式盐与α-取代的酰基衍生物5(如α-卤代酰基卤，即Q和L＝卤代基)反应(酰化)，得到酰胺6。
α-卤代酰基卤5包括烷基或芳基-α-卤代酰基卤(取代或未取代的)，其中优选后者。最优选的α-卤代酰基卤是α-氯代乙酰氯。反应中所用的碱包括，但不限于芳族和脂族有机胺，其中优选后者。最优选的碱为三乙胺。适当的溶剂包括非质子溶剂，如烃、卤代烃、醚、酯等或其混合物，其中优选卤代烃溶剂，如二氯甲烷。或者，可用α-取代酸(Q＝OH)代替α-取代酰基衍生物，然后采用偶联剂，如水溶性二亚胺(如碳二亚胺)、卤代甲酸酯、亚硫酰卤等进行该反应。在任一反应中，磺酸根，如R6SO2O-(其中R6是烷基、环烷基、芳基或杂芳基)、CF3SO2O-可取代化合物5的α-位(即基团L)的卤代基。
步骤(d)涉及在适当的溶剂或溶剂混合物中，使步骤(c)中得到的酰胺6与脱水剂反应，得到环化的2-噁唑基烷基衍生物7，如2-噁唑基烷基卤化物(即L为卤代基)。
较为有利的是利用氢氧化(甲氧羰基氨磺酰基)三乙铵(Burgess试剂)作为脱水剂进行该反应。适当的溶剂包括烃、卤代烃、醚等或其混合物。最优选在四氢呋喃中利用Burgess试剂。适当的脱水剂还包括，但不限于其它碱、酸、酸酐等，如浓硫酸、多磷酸等。虽然不便于使用，但所述脱水剂可以是三卤氧磷，如三溴氧磷或三氯氧磷，其可单独或与溶剂(如甲苯)一起使用。
步骤(e)包括在适当的溶剂或溶剂混合物中，使步骤(d)中得到的2-噁唑基烷基衍生物7与含硫试剂8或8’反应，生成2-噁唑基烷基硫化物9。
含硫试剂包括N-取代或未取代的硫脲、硫代酸或盐(如硫代乙酸或其盐)、黄原酸或盐(如乙基黄原酸钾盐)。优选未取代的硫脲。适当的溶剂包括烃、卤代烃、醚、酯、酰胺、醇等或其混合物，其中优选醇溶剂，如甲醇或乙醇。
步骤(f)说明在碱存在下，并在适当的溶剂或溶剂混合物中，使步骤(e)中得到的2-噁唑基烷基硫化物9与2-氨基噻唑10(优选L为卤代基)反应，生成5-(2-噁唑基烷硫基)-2-氨基噻唑11。
所述2-氨基噻唑10包括4-N-取代或未取代的5-卤代-2-氨基噻唑，其中优选5-溴代-2-氨基噻唑。适当的碱包括，但不限于金属氢氧化物、金属醇盐、金属碳酸盐和胺如氢氧化铵的水溶液。优选氢氧化钠。适当的溶剂包括烃、卤代烃、醚、酯、酰胺、醇等或其混合物，其中优选卤代烃溶剂，如二氯甲烷。
方案2给出了在偶联剂存在下，通过胺11与式12的羧酸反应，合成式I化合物的通用方法。适当的偶联剂包括，但不限于水溶性碳二亚胺、卤代甲酸酯等，优选碳二亚胺，如烷基碳二亚胺，例如1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与碱的混合物。
方案2 以下方案3说明其中X是NR2且R2是H的式I化合物的合成法。首先，在偶联剂存在下，使式11的胺与式13的N-保护的羧酸反应，形成式14的N-保护的化合物。然后将化合物14脱保护，得到式I化合物。适当的偶联剂包括，但不限于水溶性碳二亚胺、卤代甲酸酯等，优选碳二亚胺，如烷基碳二亚胺，例如1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和碱。
方案3 在以上方案中，P是氮保护基(如Boc、Cbz、R3Si等)。当官能团称为“被保护”时，是指该基团是以一种在保护位置防止不适副反应的修饰形式存在。从本领域技术人员的水平考虑，并参考结合到本文中作为参考的标准教科书，如第3版(1999)的Greene，T.W.，Protective Groups in Organic Synthesis，很容易从该说明书中识别出该方法中涉及的化合物的适当保护基。优选的氮保护基为Boc、Cbz、硅衍生物，其中最优选Boc。适当的溶剂包括烃、卤代烃、醚、酯、酰胺等或其混合物，其中优选卤代烃溶剂，如二氯甲烷。依据保护基(P)的性质选择脱保护剂。对于Boc保护基，优选的脱保护剂为酸，如盐酸或三氟乙酸，该脱保护反应的适当溶剂包括如烃、卤代烃、醚、酯、酰胺等溶剂或其混合物，其中优选卤代烃溶剂，如二氯甲烷。
以下方案4说明其中X是NR2且R2是2，3-二羟基丙基的式I化合物的合成法，其通过在还原剂(如三乙酰氧基硼氢化钠)和醇(如甲醇)存在下，使其中X是NR2且R2是H的式I化合物与甘油醛反应进行。
方案4 以下方案5说明其中X是NR2且R2是2-羟基乙基的式I化合物的合成法，其通过使其中X是NR2且R2是H的式I化合物与式15的2-(溴乙氧基)三烷基硅烷反应，生成中间体16，然后用酸(如氢氟酸)将中间体16脱保护进行。
方案5 优选的式I化合物是以下化合物，其中R是烷基；R1是氢；X是NR2或CHNR2R3；和R2和R3独立是氢、烷基、取代的烷基或环烷基；以及n是2。
本发明的第一组更优选的化合物是式Ia化合物和其对映体、非对映体、溶剂合物及药学上可接受的盐 其中R2是氢、烷基、取代的烷基或环烷基。
本发明的第二组更优选的化合物是式Ib化合物和其对映体、非对映体、溶剂合物及药学上可接受的盐 其中R2是氢、烷基、取代的烷基或环烷基。
本发明的第三组更优选的化合物是式Ic化合物和其对映体、非对映体、溶剂合物及药学上可接受的盐 其中R2和R3各独立是氢、烷基、取代的烷基或环烷基。
在另一实施方案中，式I化合物包括，但不限于下表1中所列的化合物和其对映体、非对映体、溶剂合物及药学上可接受的盐。
表1本发明化合物
以上化合物的优选盐为盐酸盐、氢溴酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐或其混合物。
本发明还包括基于本发明化合物药理性质的方法。本发明化合物具有药理学性质；尤其是，式I化合物是蛋白激酶抑制剂，蛋白激酶如依赖细胞周期蛋白的激酶(cdks)，例如cdc2(cdk1)、cdk2、cdk3、cdk4、cdk5、cdk6、cdk7和cdk8。因此，本发明包含本发明化合物在治疗、预防和/或控制癌症、炎症或炎性疾病、关节炎、Alzheimer病和心血管疾病中的用途。在更具体的实施方案中，本发明还包括本发明化合物在治疗、预防和/或控制增生性疾病或其症状中的用途。本发明还包括本发明化合物在治疗或预防局部和全身性真菌感染中的用途。
更详细地讲，式I化合物用于治疗各种癌症，包括(但不限于)-癌，包括膀胱癌、乳癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌和皮肤癌；-淋巴系的血细胞生成肿瘤，包括急性淋巴细胞性白血病、B-细胞淋巴瘤和Burkett淋巴瘤；-骨髓系的血细胞生成肿瘤，包括急性和慢性骨髓性白血病和前髓细胞白血病；-源于间充质的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；以及-其它肿瘤，包括黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、成神经细胞瘤和神经胶质瘤。
不受任何理论所限，由于cdks在调节细胞增生中的关键作用，通常抑制剂可以象可逆的细胞抑制剂一样发挥作用，所述细胞抑制剂可用于治疗以异常的细胞增生为特征的任何疾病过程，如神经纤维瘤病、动脉粥样硬化、肺纤维化、关节炎、牛皮癣、肾小球性肾炎、血管形成术或血管手术后的再狭窄、肥大性瘢痕形成、炎症性肠病、移植排斥、血管生成和内毒素休克。
本发明还包括本发明化合物在治疗Alzheimer病中的用途，因为最近的发现提示cdk5与tau蛋白的磷酸化有关(J.Biochem，117，741-749(1995))。
本发明还包括本发明化合物作为其它蛋白激酶，如蛋白激酶C、her2、raf1、MEK1、MAP激酶、EGF受体、PDGF受体、IGF受体、PI3激酶、wee1激酶、Src、Ab1、VEGF和lck的抑制剂的用途，因此，可有效地治疗与其它蛋白激酶有关的疾病。
本发明还包括本发明化合物诱发或抑制编程性细胞死亡，即一种临界于正常发育和稳态的生理性细胞死亡过程的用途。编程性细胞死亡途径的改变可引发多种人体疾病。式I化合物作为编程性细胞死亡的调节剂，可用于治疗多种在编程性细胞死亡中发生畸变(abberation)的人体疾病，包括癌症(尤其是，但不限于滤泡淋巴瘤、p53突变癌、乳腺、前列腺和卵巢的激素依赖性肿瘤以及癌前期损害(如家族性腺瘤性息肉)、病毒感染(包括，但不限于疱疹病毒、痘病毒、Epstein-Barr病毒、Sindbis病毒和腺病毒)、自身免疫性疾病(包括，但不限于系统性狼疮、红斑性狼疮、免疫介导的肾小球性肾炎、类风湿性关节炎、牛皮癣、炎症性肠病、自身免疫性糖尿病)、神经退化性疾病(包括，但不限于Alzheimer病、与AIDS有关的痴呆、Parkinson病、肌萎缩性侧索硬化、色素性视网膜炎、脊柱肌肉萎缩和小脑退化)、AIDS、骨髓发育不良综合征、再生障碍性贫血、与心肌梗塞有关的局部缺血损伤、中风和再灌注损伤、心率失常、动脉粥样硬化、毒素诱发的或酒精诱发的肝病、血液病(包括，但不限于慢性贫血和再生障碍性贫血)、肌与骨骼系统的退化性疾病(包括，但不限于骨质疏松和关节炎)、对阿司匹林过敏的鼻窦炎(rhinosinusitis)、胰囊性纤维变性、多发性硬化、肾病和癌症疼痛。
在另一实施方案中，本发明包括抑制细胞中cdk的方法。更详细地讲，本发明包括通过给予需要这种抑制的哺乳动物一或多种本发明化合物来治疗或预防与cdk调节有关的疾病的方法。
本发明包括哺乳动物，尤其是人的治疗。
另外，本发明化合物可用于治疗化疗诱发的脱发、化疗诱发的血小板减少、化疗诱发的白细胞减少或mucocitis。在治疗化疗诱发的脱发中，优选以如凝胶、溶液、分散液或糊剂的药物形式，局部使用本发明化合物。
本发明化合物可与已知的抗癌疗法(如放射性疗法)或与细胞抑制剂和细胞毒性剂联合应用(之前、期间、之后，包括循环用药)，这些细胞抑制剂和细胞毒性剂包括，但不限于微管稳定剂、微管破裂剂、烷化剂、抗代谢物、epidophyllotoxin、抗肿瘤酶、拓扑异构酶抑制剂、丙卡巴肼、米托蒽醌、铂配位络合物、生物反应调节物、生长抑制剂、激素/抗激素治疗剂、造血生长因子等。
可与本发明的式I化合物联合使用的抗癌剂的类别包括，但不限于anthracycline类药物、长春花类药物、丝裂霉素类、博来霉素类、细胞毒性核苷类、taxane类、epothilone类，discodermolide、蝶啶类药物、diynenes、芳族酶(aromatase)抑制剂和鬼臼毒素。这些类别的具体成员包括，例如紫杉醇、docetaxel、7-O-甲硫基甲基紫杉醇(美国专利5,646,176中公开)、3’-叔丁基-3’-N-叔丁氧羰基-4-脱乙酰基-3’-脱苯基-3’-N-脱苯甲酰基-4-O-甲氧羰基-紫杉醇(2000年2月3日提交的USSN 60/179,965中公开，将其结合到本发明中作为参考)、C-4甲基碳酸酯紫杉醇(WO 94/14787中公开)、epothilone A、epothilone B、epothilone C、epothilone D、desoxyepothilone A、desoxyepothilone B、[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮杂-17-氧杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(WO 99/02514中公开)、[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-3-[2-[2-(氨基甲基)-4-噻唑基]-1-甲基乙烯基]-7，11-二羟基-8，8，10，12，16-五甲基-4，17-二氧杂双环[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(2000年2月17日提交的USSN 09/506,481中公开，将其结合到本发明中作为参考)、多柔比星、去甲柔红霉素、柔红霉素、氨蝶呤、甲氨蝶呤、甲蝶呤、二氯甲氨蝶呤、丝裂霉素C、泊非霉素、5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、吉西他滨、阿糖胞苷、鬼臼毒素或鬼臼毒素衍生物，如依托泊苷、磷酸依托泊苷或替尼泊苷、美法仑、长春碱、长春新碱、异长春碱、长春地辛、环氧长春碱等。可与本发明的化合物联合使用的其它有用的抗癌剂包括，但不限于雌莫司汀、顺铂、卡铂、环磷酰胺、博来霉素、他莫昔芬、异环磷酰胺、美法仑、六甲基蜜胺、塞替派、阿糖胞苷、idatrexate、三甲曲沙、达卡巴嗪、L-天冬酰胺酶、喜树碱、CPT-11、托泊替堪、ara-C、比卡鲁胺、氟他胺、亮丙瑞林、吡啶并苯并吲哚衍生物、干扰素、白介素等。另外，本发明化合物可与如U.S.6,011,029中所述的那些法尼基蛋白转移酶抑制剂；抗血管生成剂(如制管张素和endostatin)；激酶抑制剂(如her2特异性抗体)；以及p53反式激活调节剂联合使用。
当配制为固定剂量时，这种混合制剂应用以下所述剂量范围的本发明化合物以及其它批准剂量范围内的药学活性剂。当不适于制成混合制剂时，可以以任何次序顺次应用式I化合物及已知的抗癌剂或细胞毒性剂。
本发明还提供包含本发明化合物以及药学上可接受的载体的药用组合物。应注意的是，在本发明的药用组合物的内容中，本发明化合物或式I化合物指游离碱、对映体、非对映体、溶剂合物及药学上可接受的盐。这些药学上可接受的盐的实例包括，但不限于盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、三氟乙酸盐和盐酸盐的混合物、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐。还包括与其它有机和无机酸如羟基甲磺酸、乙酸、苯磺酸、甲苯磺酸形成的盐，以及各种其它盐，如硝酸盐、磷酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、水杨酸盐等。这些盐包括外消旋体形式以及对映体和非对映体(如D-酒石酸盐和L-酒石酸盐)。另外，可与碱金属，如钠、钾和锂；碱土金属，如钙和镁；有机碱，如二环己基胺、三丁基胺和吡啶等；氨基酸，如精氨酸、赖氨酸等形成式I化合物的药学上可接受的盐。
本发明的药用组合物还包括一或多种药学上可接受的其它载体、赋形剂或稀释剂，包括但不限于如明矾、稳定剂、抗菌剂、缓冲剂、着色剂、矫味剂等的组分。本发明的化合物和组合物可以口服或非肠道给药，包括静脉内、肌内、腹膜内、皮下、直肠和局部途径给药。
对于口服应用，可以以例如片剂或胶囊剂形式或者以溶液剂或悬浮剂形式给予本发明的化合物和组合物。对于口服应用的片剂，常用的载体包括乳糖和玉米淀粉，一般可加入润滑剂如硬脂酸镁。当以胶囊形式口服给药时，有用的载体包括乳糖和玉米淀粉。当用水溶性混悬剂口服给药时，一般加入乳化剂和/或悬浮剂。另外，可向口服组合物中加入甜味剂和/或矫味剂。对于肌内、腹膜内、皮下和静脉内给药，通常采用所述活性组分的无菌溶液，并应适当地调节和缓冲所述溶液的pH。对于静脉内给药，为使所述制剂等渗，应控制溶质的总浓度。
本发明化合物给予人时的日剂量一般由主治医生确定，其剂量一般根据患者的年龄、体重、给药途径和个体反应以及患者症状的严重程度而变化。给予人的本发明式I化合物的量优选每日每kg体重约0.001-100mg，更优选约0.01-50mg，最优选约0.1-20mg。
cdc2/细胞周期蛋白B1激酶测定通过监测结合到组蛋白H1中的32P测定cdc2/细胞周期蛋白B1激酶的活性。该反应物由50ng表达GST-cdc2的杆状病毒、75ng表达GST-细胞周期蛋白B1的杆状病毒、1μg组蛋白HI(BoehringerMannheim)、0.2μCi32Pγ-ATP和25μMATP的激酶缓冲液(50mM Tris，pH8.0，10mM MgCl2，1mM EGTA，0.5mM DTT)组成。在30℃孵育该反应物30分钟，然后通过加入使终浓度为15％的冷三氯乙酸(TCA)终止孵育，在冰上孵育20分钟。用一个Packard Filtermate Universal收获器将该反应物收集到GF/C单滤板(unifilter plates)(Packard)上，并在一个Packard Topcount 96孔液体闪烁计数器上对滤物计数(Marshak，D.R.，Vanderberg，M.T.，Bae，Y.S.，Yu，I.J.，J.of CellularBiochemistry，45，391-400(1991)，通过引用合并到本文中)。
cdk2/细胞周期蛋白E激酶测定通过监测结合到成视网膜细胞瘤蛋白中的32P测定cdk2/细胞周期蛋白E激酶的活性。该反应物由2.5ng表达GST-cdk2/细胞周期蛋白E的杆状病毒、500ng细菌产生的GST-成视网膜细胞瘤蛋白(aa776-928)、0.2μCi32Pγ-ATP和25μMATP的激酶缓冲液(50mM Hepes，pH8.0，10mM MgCl2，5mM EGTA，2mM DTT)组成。在30℃孵育该反应物30分钟，然后通过加入使终浓度为15％的冷三氯乙酸(TCA)终止孵育并在冰上孵育20分钟。用一个Packard Filtermate Universal收获器将该反应物收集到GF/C单滤板(Packard)上，并在一个PackardTopCount 96孔液体闪烁计数器上对滤物计数。
cdk4/细胞周期蛋白D1激酶活性通过监测结合到成视网膜细胞瘤蛋白中的32P测定cdk4/细胞周期蛋白D1激酶的活性。该反应物由165ng表达GST-cdk4的杆状病毒、282ng细菌表达为S-标记的细胞周期蛋白D1、500ng细菌产生的GST-成视网膜细胞瘤蛋白(aa 776-928)、0.2μCi32Pγ-ATP和25μMATP的激酶缓冲液(50mM Hepes，pH8.0，10mM MgCl2，5mM EGTA，2mM DTT)组成。在30℃孵育该反应物1小时，然后通过加入使终浓度为15％的冷三氯乙酸(TCA)终止孵育并在冰上孵育20分钟。用一个Packard Filtermate Universal收获器将该反应物收集到GF/C单滤板(Packard)上，并在一个Packard TopCount 96孔液体闪烁计数器上对滤物计数(Coleman，K.G.，Wautlet，B.S.，Morissey，D，Mulheron，J.G.，Sedman，S.，Brinkley，P.，Price，S.，Wedster，K.R.(1997).Identification ofCDK4 Sequences involved in cyclin D，and p16 binding.J.Biol.Chem.272，3018869-18874，通过引用结合到本文中)。
为更易于了解本发明，主要用以下实施例说明本发明的具体化合物。本发明的范围并不受这些实施例的限定，但本发明的范围包含权利要求中定义的所有主题。实施例15-[5-(叔丁基)-2-噁唑基甲基硫代]-2-(氮杂环烷酰基)氨基-噻唑盐酸盐的制备 A.α-叠氮基-频哪酮的制备 在1.785L丙酮中，将α-溴代-频哪酮(199.07g，1.1115mol，1eq)与叠氮化钠(93.9g，1.4444mol，1.3eq)混合。室温下，将反应液搅拌27.5小时。将得到的淤浆过滤，用丙酮(3×150mL)洗涤。将滤液真空浓缩得到154.3g(98.4％)标题化合物。HPLC83.85％，2.57分钟(Phenomenex Inc.，Torrance，CA，5μm C18柱4.6×50mm，用含0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，4mL/分钟，在220nm监测)。B.溴化α-六亚甲基四氨基-频哪酮的制备
在2L丙酮中，将α-溴代-频哪酮(179g，1mol，1eq)与六亚甲基四胺(154.21g，1.1mol，1.1eq)混合，然后在室温、通N2下，将反应液搅拌26小时。将得到的淤浆过滤，滤饼用乙醚(3×50mL)洗涤，在50℃下真空干燥过夜，得到330g(100％)含有7％六亚甲基四胺的标题化合物。HPLC R.T.＝0.17分钟(Phenomenex Inc.，5μm C18柱4.6×50mm，用含0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，4mL/分钟，在220nm监测)。C.α-氨基-频哪酮盐酸盐的制备 在4.2L甲醇中，将α-叠氮基-频哪酮(128.5g，0.911mol)与77.1mL浓HCl和15.42g 10％的Pd/C混合。在氢气下，将反应混合液搅拌1.5小时。过滤除去催化剂。蒸馏溶剂，得到湿固体。与异丙醇(2×500mL)共沸除去残留水。加入叔丁基甲基醚(300mL)，将得到的淤浆搅拌，过滤，用叔丁基甲基醚(3×100mL)洗涤，干燥得到131.0g(95.5％)标题化合物。D.α-氨基-频哪酮盐酸盐的制备 在2L乙醇中，将溴化α-六亚甲基四氨基-频哪酮(400g，1.254mol，1eq)与12N HCl水溶液(439mL，5.26mol，4.2eq)混合。在75℃下，将反应液搅拌1小时，然后冷却至室温，将得到的淤浆过滤，真空浓缩滤液，加入异丙醇。再将该溶液过滤。再加入1.2L乙醚使所需的物质从溶液中沉淀出来。过滤产物，用乙醚(2×300mL)洗涤，在50℃下真空干燥过夜，得到184.1g(97％)标题化合物。E.α-N-(2-氯乙酰氨基)-频哪酮的制备 在-5℃、通N2下，将部分D的标题化合物(130.96g，0.8637mol，1eq)溶解于3.025L CH2Cl2中。加入三乙胺(301mL，2.16mol，2.5eq)，接着加入氯代乙酰氯(75.7mL，0.450mol，1.1eq)的175mL CH2Cl2溶液。在-5℃至-10℃下，将得到的淤浆搅拌2小时。加入水(1.575L)，接着加入175mL浓HCl。将有机相第二次用1.75L 10％的HCl水溶液洗涤，然后用500mL水洗涤。有机相经Na2SO4干燥，真空浓缩得到155.26g(93.8％)标题化合物。HPLC R.T.＝2.27分钟(Phenomenex Inc.，5μm C18柱4.6×50mm，用含0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，4mL/分钟，在220nm监测)。F.5-(叔丁基)-2-噁唑基甲基氯的制备 在通N2下，将部分E的标题化合物(180.13g，0.9398mol，1eq)与三氯氧磷(262mL，2.8109mol，3eq)混合。在105℃下，将反应物加热1小时，然后将混合物冷却至室温，用1.3kg冰猝灭。将水相用乙酸乙酯(1L，然后2×500mL)萃取。将有机萃取液用饱和NaHCO3水溶液(4×1L)洗涤，再用乙酸乙酯反萃取数次。合并有机相，顺次用饱和NaHCO3水溶液(500mL)和饱和NaCl水溶液(300mL)洗涤，经MgSO4干燥，真空浓缩得到棕色油状物。在100℃、高真空下将该粗产物蒸馏，得到155.92g(96％)标题化合物。HPLC R.T.＝3.62分钟(Phenomenex Inc.，5μm C18柱4.6×50mm，用含0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，4mL/分钟，在220nm监测)。
或者，将部分E的标题化合物(10.0g，52.17mmol，1eq)的50mL四氢呋喃(THF)溶液与氢氧化(甲氧羰基氨磺酰基)-三乙铵(Burgess试剂，105.70mmol，2.03eq，由9.2mL氯磺酰基异氰酸酯、4.4mL甲醇和14.8mL三乙胺在100mL THF中就地产生)混合。将反应液加热至45℃下1.5小时。冷却至室温后，将反应液用水(50mL)猝灭。分离有机层，用饱和NaHCO3(2×50mL)和水(50mL)洗涤，经MgSO4干燥，通过小硅胶塞过滤。除去溶剂得到油状物，将其溶于15mL庚烷和90mL叔丁基甲醚的混合物中，然后用0.2N HCl(2×25mL)、饱和盐水(25mL)洗涤，干燥(MgSO4)。过滤并除去溶剂得到10.9g标题化合物。G.5-(叔丁基)-2-噁唑基甲基硫脲鎓盐酸盐的制备 在通N2下，将部分F的标题化合物(1.77g，10.2mmol，1.02eq)与硫脲(0.76g，9.98mmol，1eq)在10mL纯乙醇中混合。将反应液在回流下加热1.5小时。将混合物冷却至室温并真空浓缩。将得到的粗产物用叔丁基甲基醚研磨，得到2.32g(93％)标题化合物。HPLC R.T.＝2.05分钟(Phenomenex Inc.，5μm C18柱4.6×50mm，用含0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，4mL/分钟，在220nm监测)；1H NMR(d6-DMSO)δ9.48(s，3H)，6.85(s，1H)，4.73(s，2H)，1.24(s，9H)。H.5-[5-(叔丁基)-2-噁唑基甲基硫代]-2-氨基噻唑的制备 将部分G的标题化合物(1.25g，5mmol，1eq)加入到NaOH(3.0g，75mmol，15eq)、水(10mL)、甲苯(10mL)和硫酸四丁基铵(50mg，0.086mmol，0.017eq)的混合液中。加入5-溴-2-氨基噻唑氢溴酸盐(1.70g，5mmol，1eq)，在室温下将反应物搅拌14.5小时。将该混合液用水稀释并用乙酸乙酯萃取2次，将有机萃取液用水(4×10mL)萃取，经MgSO4干燥，真空浓缩得到1.1g(82％)标题化合物。HPLC 86.3％，2.75分钟(Phenomenex Inc.，5μm C18柱4.6×50mm，用含0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，4mL/分钟，在220nm监测)；1H NMR(CDCl3)δ6.97(s，1H)，6.59(s，1H)，5.40(br s，2H)，3.89(s，2H)，1.27(s，9H)。I.5-[5-(叔丁基)-2-噁唑基甲基硫代]-2-[(N-叔丁氧羰基)-氮杂环烷酰基]氨基噻唑的制备 将部分H的标题化合物(9.6g，35.6mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(36mL)和CH2Cl2(100mL)中，向其中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(13.8g，72mmol，2eq)、N-叔丁氧羰基-氮杂环烷酸(12.6g，55mmol，1.5eq)和4-(二甲氨基)吡啶(2g，16mmol，0.45eq)。当在室温下搅拌3.5小时后，该澄清反应混合物变混浊。加入水(300mL)和乙酸乙酯(200mL)，过滤除去得到的沉淀。将滤液用乙酸乙酯萃取，有机萃取液经MgSO4干燥，真空浓缩得到黄色固体。将其与由过滤得到的沉淀合并。将所述固体在乙醇、丙酮和水的混合液中沸腾20分钟，过滤，用乙醇/水混合液洗涤，干燥得到16.6g(97％)标题化合物。J.5-[5-(叔丁基)-2-噁唑基甲基硫代]-2-(氮杂环烷酰基)氨基-噻唑盐酸盐的制备 将部分I的标题化合物(16.6g)溶解于150mL的CH2Cl2中，滴加入三氟乙酸(30mL)，室温下将混合液搅拌2小时。将该反应液真空浓缩，用水(300mL)稀释，在冰中冷却，用氢氧化钠使呈碱性，将得到的固体过滤，用乙醇、水和甲醇重结晶，得到11.2g(83％)标题化合物，为黄色固体。通过向7g该物质的甲醇溶液中加入18mL 1N HCl水溶液，可得到白色固体的盐酸盐。MS381[M+H]+；HPLC100％，3.12分钟(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用含0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，4mL/分钟，在220nm监测)。实施例2(±)-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-3-哌啶甲酰胺的制备 A.(±)-N-叔丁氧羰基-3-哌啶甲酸 将3-哌啶甲酸(1.3g，10mmol，1eq)与10mL二噁烷、2mL乙腈、10mL水和10mL 1N NaOH水溶液(1eq)混合。加入二碳酸二叔丁酯(3.3g，15mmol，1.5eq)，室温下将反应混合液搅拌过夜。将反应混合液真空浓缩以除去有机溶剂，加入10％柠檬酸水溶液。将该混合液用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。有机萃取液经Na2SO4干燥，通过硅胶过滤，真空浓缩。将粗产物用乙酸乙酯和己烷重结晶，得到2.2g(96％)(±)-N-叔丁氧羰基-3-哌啶甲酸，为白色固体。B.(±)-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-(N-叔丁氧羰基)-3-哌啶甲酰胺 将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(383mg，2mmol，2eq)加入到2-氨基-5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]噻唑(270mg，1mmol，1eq)、N-叔丁氧羰基-3-哌啶甲酸(344mg，1.5mmol，1.5eq)、4-(二甲氨基)吡啶(61mg，0.5mmol，0.5eq)、N，N-二甲基甲酰胺(1mL)和CH2Cl2(6ml)的混合液中。室温下将反应混合液搅拌1.3小时。加入三乙胺(0.28mL，2mmol，2eq)，将反应混合液搅拌1小时。再加入N-叔丁氧羰基-3-哌啶甲酸(340mg)、三乙胺(0.28mL)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(380mg)。1小时后，未发现进一步变化。再加入4-(二甲氨基)吡啶、N，N-二甲基甲酰胺、三乙胺和原料酸，室温下将反应物搅拌过夜。将得到的黑色溶液用饱和NaHCO3水溶液稀释，用CH2Cl2萃取。将有机萃取液干燥，真空浓缩，经硅胶快速层析纯化，用50-100％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱，得到397mg(83％)的(±)-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-(N-叔丁氧羰基)-3-哌啶甲酰胺，为黄色玻璃状固体。C.(±)-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-3-哌啶甲酰胺 将(±)-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-(N-叔丁氧羰基)-3-哌啶甲酰胺(355mg，0.74mmol，1eq)溶解于3mL的CH2Cl2中。加入三氟乙酸(3mL)，室温下将混合液搅拌20分钟。将该反应混合液真空浓缩，用饱和NaHCO3水溶液中和。将得到的混合液用乙酸乙酯萃取。有机萃取液经Na2SO4干燥，真空浓缩，用乙酸乙酯重结晶，得到142mg(50％)的(±)-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-3-哌啶甲酰胺，为白色固体。MS381[M+H]+；HPLC100％，3.15分钟(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用含0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，4mL/分钟，在220nm监测)。实施例3(±)-1-(2，3-二羟基丙基)-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基1-4-哌啶甲酰胺的制备 将N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺(66mg，0.17mmol，1eq)与甘油醛(69mg，0.77mmol，4.5eq)、三乙酰氧基硼氢化钠(163mg，0.77mmol，4.5eq)和1，2-二氯乙烷(4mL)混合。室温下将得到的混悬液搅拌4小时。加入甲醇(1mL)，室温下将反应混合液搅拌过夜，真空浓缩，经制备HPLC纯化，得到69mg(59％)的(±)-1-(2，3-二羟基丙基)-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺，为白色固体。MS455[M+H]+；HPLC100％，3.06分钟(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用含0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，4mL/分钟，在220nm监测)。实施例4N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代1-2-噻唑基]-1-(1-甲基乙基)-4-哌啶甲酰胺的制备 A.1-(1-甲基乙基)-4-哌啶甲酸乙酯 将异哌啶甲酸乙酯(3.2g，20mmol，1eq)与丙酮(5.8g，100mmol，5eq)、三乙酰氧基硼氢化钠(10.5g，50mmol，2.5eq)和1，2-二氯乙烷(200mL)混合。室温下将反应混合液搅拌72小时。加入饱和NaHCO3水溶液，然后将该混合液用CH2Cl2萃取。将有机萃取液干燥，通过硅胶垫过滤，真空浓缩，得到3.72g(93％)的1-(1-甲基乙基)-4-哌啶甲酸乙酯，为无色液体。B.1-(1-甲基乙基)-4-哌啶甲酸 在70mL水和44mL乙醇的混合液中，将1-(1-甲基乙基)-4-哌啶甲酸乙酯(3.6g，18mmol，1eq)与氢氧化钡八水合物(10.4g，33mmol，1.8eq)混合。将混合液在60℃下加热1.3小时。将反应混合液真空浓缩，用70mL水稀释。分次加入碳酸铵(6.9g，87mmol，4.8eq)，室温下将反应混合液搅拌过夜。将混合液通过硅藻土过滤，浓缩，冷冻干燥得到3.1g(100％)的1-(1-甲基乙基)-4-哌啶甲酸，为白色固体。C.N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-1-(1-甲基乙基)-4-哌啶甲酰胺 将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.0g，5.2mmol，2eq)加入到2-氨基-5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]噻唑(0.7g，2.6mmol，1eq)、1-(1-甲基乙基)-4-哌啶甲酸(0.78g，3.9mmol，1.5eq)、4-(二甲氨基)吡啶(0.16g，1.3mmol，0.5eq)、N，N-二甲基甲酰胺(2.6mL)和CH2Cl2(7.8ml)的混合液中。室温下将反应混合液搅拌1小时，用30ml水稀释，用乙酸乙酯(2×70mL)萃取。有机萃取液经Na2SO4干燥，真空浓缩，经硅胶快速层析纯化，用5-10％三乙胺的乙酸乙酯溶液梯度洗脱。将产物用乙醇和水重结晶，得到0.93g(85％)的N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-1-(1-甲基乙基)-4-哌啶甲酰胺，为黄色固体。MS423[M+H]+；HPLC100％，3.15分钟(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用含0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，4mL/分钟，在220nm监测)。实施例51-环丙基-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺的制备 A.1-环丙基-4-哌啶甲酸 将异哌啶甲酸乙酯(1.57g，10mmol，1eq)与((1-乙氧基环丙基)氧基)三甲基硅烷(8.7g，50mmol，5eq)的100mL甲醇溶液混合。加入乙酸(5.7mL，100mmol，10eq)和分子筛。室温下30分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(2.5g，40mmol，4eq)，将反应混合液在65℃下加热过夜。将该反应混合液冷却，加入Na2CO3(20g)。室温下将该混合液搅拌2小时，通过硅藻土过滤。将该硅藻土用甲醇洗涤。合并滤液，真空浓缩，用水稀释，用乙酸乙酯萃取。将有机萃取液干燥，通过硅胶垫过滤，真空浓缩得到2.4g无色液体。在38mL水和24mL乙醇的混合液中，将产物与氢氧化钡八水合物(5.7g，18mmol，1.8eq)合并。将混合液在60℃下加热1小时。将反应混合液真空浓缩，用38mL水稀释。分次加入碳酸铵(3.8g)，室温下将反应液搅拌2小时。将混合物通过硅藻土过滤，用水洗涤。将滤液用乙酸乙酯洗涤。浓缩水相，得到1.56g(92％)的1-环丙基-4-哌啶甲酸，为吸湿性白色固体。B.1-环丙基-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺 将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.0g，5.2mmol，2eq)加入到2-氨基-5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]噻唑(0.7g，2.6mmol，1eq)、1-环丙基-4-哌啶甲酸(0.77g，3.9mmol，1.5eq)、4-(二甲氨基)吡啶(0.16g，1.3mmol，0.5eq)、N，N-二甲基甲酰胺(2.6mL)和CH2Cl2(7.8ml)的混合液中。室温下将反应混合液搅拌1小时，用水(30ml)稀释，用乙酸乙酯(2×70mL)萃取。合并的有机萃取液经无水硫酸钠干燥，真空浓缩，经硅胶快速层析纯化，用0-10％三乙胺的乙酸乙酯溶液梯度洗脱。将产物用乙酸乙酯和己烷结晶，得到0.7g(65％)的1-环丙基-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺，为白色晶体。MS421[M+H]+；HPLC100％，3.13分钟(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用含0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，4mL/分钟，在220nm监测)。实施例6N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-1-(2-羟乙基)-4-哌啶甲酰胺的制备 A.N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-1-(2-二甲基叔丁基甲硅烷基氧基乙基)-4-哌啶甲酰胺 将N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺(1.4g，3.68mmol，1eq)溶解于30ml的N，N-二甲基甲酰胺和100ml的四氢呋喃中。加入2-(溴乙氧基)-叔丁基二甲基硅烷(0.79mL，3.68mmol，1eq)和NaHCO3，在50℃下将反应混合物搅拌23小时。再加入2-(溴乙氧基)-叔丁基二甲基硅烷(0.9mL)，在50℃下将反应混合物搅拌22小时，冷却，真空浓缩，用水(25mL)稀释。将得到的含水混合物用乙酸乙酯(50mL)萃取。有机萃取液经Na2SO4干燥，真空浓缩，经硅胶快速层析纯化，用0-5％三乙胺的乙酸乙酯溶液梯度洗脱，得到1.7g(84％)的N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-1-(2-二甲基-叔丁基甲硅烷基氧基乙基)-4-哌啶甲酰胺，为黄色固体。MS539[M+H]+；HPLC98％，4.01分钟(YMC S5ODS柱4.6×50mm，用含0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，4mL/分钟，在220nm监测)。B.N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-1-(2-羟乙基)-4-哌啶甲酰胺
将N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-1-(2-二甲基-叔丁基甲硅烷基氧基乙基)-4-哌啶甲酰胺(1.45g，2.7mmol，1eq)溶解于100ml的乙腈中，与HF水溶液(48％水溶液，2.5mL)混合。室温下将反应混合液搅拌4小时。再加入2.5ml HF水溶液，将反应混合液搅拌过夜。加入乙酸乙酯(100mL)和饱和NaHCO3水溶液(50mL)。再加入固体NaHCO3，使混合液呈碱性。将混合液用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。有机萃取液经Na2SO4干燥，通过硅胶垫过滤，真空浓缩。将得到的白色固体用乙醇和水结晶，得到1.6g(59％)的N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-1-(2-羟乙基)-4-哌啶甲酰胺，为白色固体。MS425[M+H]+；HPLC100％，3.05分钟(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用含0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，4mL/分钟，在220nm监测)。实施例7(R)-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-3-哌啶甲酰胺盐酸盐的制备 A.(R)-和(S)-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-(N-叔丁氧羰基)-3-哌啶甲酰胺 将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(3.8g，20mmol，2eq)加入到2-氨基-5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]噻唑(2.7g，10mmol，1eq)、N-叔丁氧羰基-3-哌啶甲酸(3.4g，1.5mmol，1.5eq)、N，N-二甲基甲酰胺(10mL)和CH2Cl2(30ml)的混合液中。室温下将反应混合液搅拌4小时。真空浓缩得到的黑色溶液，用水(90ml)稀释，用乙酸乙酯(100mL，然后2×75mL)萃取。有机萃取液经Na2CO3干燥，真空浓缩，经硅胶快速层析纯化，用50-100％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱，得到3.8g(79％)的黄色固体。经手性HPLC(Chiral Pak AD 5×50cm20μ洗脱液10％(0.1％三乙胺的异丙醇溶液)己烷溶液；45mL/分钟，在254nm检测，装载300mg的5ml异丙醇溶液)分离对映体，得到两种光学纯异构体1.65g R异构体和1.65g S异构体。B.(R)-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-3-哌啶甲酰胺盐酸盐 将部分A的(R)异构体(1.65g，3.43mmol，1eq)溶解于10ml的CH2Cl2中。加入三氟乙酸(6mL)，室温下将该混合液搅拌数小时。将反应混合液真空浓缩，用饱和NaHCO3水溶液中和。将得到的混合液与乙酸乙酯搅拌1小时。有机萃取液经Na2SO4干燥，真空浓缩得到黄色固体。将该固体溶解于甲醇中，加入1eq的1N HCl水溶液。将得到的溶液冷冻干燥，得到1g(77％)的(R)-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-3-哌啶甲酰胺盐酸盐，为黄色固体。MS381[M+H]+；HPLC100％，3.14分钟(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用含0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，4mL/分钟，在220nm监测)。实施例8(S)-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-3-哌啶甲酰胺盐酸盐的制备 将实施例7部分A的(S)异构体(1.65g，3.43mmol，1eq)溶解于10ml的CH2Cl2中。加入三氟乙酸(6mL)，室温下将该混合液搅拌数小时。将反应液真空浓缩，用饱和NaHCO3水溶液中和。将得到的混合液与乙酸乙酯搅拌1小时。有机萃取液经Na2SO4干燥，真空浓缩得到黄色固体。将该固体溶解于甲醇中，加入1eq的1N HCl水溶液。将得到的溶液冷冻干燥，得到0.918g(70％)的(S)-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-3-哌啶甲酰胺盐酸盐，为黄色固体。MS381[M+H]+；HPLC100％，3.15分钟(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用含0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，4mL/分钟，在220nm监测)。实施例9顺式-4-氨基-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]环己基甲酰胺盐酸盐和反式-4-氨基-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]环己基甲酰胺盐酸盐的制备 A.4-(叔丁氧羰基氨基)环己烷甲酸 室温下，向2.86g(20mmol)4-氨基环己烷甲酸在40mL 0.5M的NaOH水溶液、20mL的二噁烷和4mL的乙腈中的溶液中加入总量为6.5g(30mmol)的tBOC酸酐。20小时后，加入100mL乙酸乙酯和100mL10％的柠檬酸水溶液。分离形成的水层，用三份50mL的乙酸乙酯萃取。合并有机相，干燥(硫酸钠)，真空浓缩得到6.0g(125％)的粗品4-(叔丁氧羰基氨基)环己烷甲酸，为无色油状物，其放置后固化。B.4-(叔丁氧羰基氨基)-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]环己基甲酰胺 室温下，向5g粗品4-(叔丁氧羰基氨基)环己烷甲酸和3.50g(13mmol)2-氨基-5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]噻唑在13mLN，N-二甲基甲酰胺和36mL CH2Cl2中的溶液中加入5.0g(26mmol)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。将反应混合液搅拌过夜，用100ml水稀释。分离水层，用两份150mL的乙酸乙酯萃取。将合并的有机相干燥(硫酸钠)，通过硅胶垫过滤。真空浓缩滤液，得到橙色固体。将粗产物重结晶(95％乙醇)，得到4-(叔丁氧羰基氨基)-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]环己基甲酰胺，为黄色固体。并将母液真空浓缩，得到另外的4-(叔丁氧羰基氨基)-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]环己基甲酰胺，为棕色固体。C顺式-4-氨基-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]环己基甲酰胺盐酸盐和反式-4-氨基-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]环己基甲酰胺盐酸盐 室温下，向4-(叔丁氧羰基氨基)-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]环己基甲酰胺(源自部分B母液)在15mL二氯甲烷中的悬浮液中加入5ml三氟乙酸。将反应混合液搅拌2小时，然后真空浓缩以除去挥发物。将残留物用水稀释，用NaOH水溶液碱化，然后将得到的水溶液用乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取液干燥(硫酸钠)，得到粗品顺式/反式产物。该粗产物经快速层析纯化(Merck硅胶，25×3cm，1∶9异丙胺/乙酸乙酯，然后1∶2∶7甲醇/异丙胺/乙酸乙酯)，得到0.74g为黄色固体的顺式异构体和0.50g为棕色固体的反式异构体。将该顺式异构体溶解于甲醇中，然后加入0.34mL 5N HCl水溶液。将该溶液真空浓缩，用乙醚洗涤，用水稀释，冷冻干燥得到0.80g为黄色固体的顺式-4-氨基-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]环己基甲酰胺盐酸盐。MS395[M+H]+；HPLC-HI98％，3.17分钟(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用含0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，4mL/分钟，在220nm监测)。将该反式异构体溶解于甲醇中，然后加入0.24mL 5N HCl水溶液。将该溶液真空浓缩，用乙醚洗涤，用水稀释，冷冻干燥得到0.54g为橙色固体的反式-4-氨基-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]环己基甲酰胺盐酸盐。MS395[M+H]+；HPLC-HI96％，3.22分钟(YMC S5 ODS柱4.6×50mm，用含0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液洗脱4分钟，4mL/分钟，在220nm监测)。实施例10N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺一盐酸盐 向冰浴冷却的40mL无水乙醇溶液中滴加入乙酰氯(0.28mL，3.9mmol)。用30分钟将反应混合液温热至室温，然后在搅拌下，一次性加入N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺(1.50g，3.94mmol，1eq)，得到稠淤浆。加入水(约4mL)至均相，真空浓缩得到粗品浅黄色固体。将该粗产物重结晶(EtOH水溶液)，得到标题化合物(70％)，为白色固体，mp 256-258℃。C17H24N4O2S2·HCl的分析计算值C，48.96；H，6.04；N，13.43；S，15.38；Cl，8.50。实测值C，48.69；H，5.99；N，13.24；S，15.27；Cl，8.31。实施例11N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺一氢溴酸盐 向1M HBr的EtOH(0.5mL)溶液中加入N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺(190mg，0.5mmol，1eq)，然后冷却至-40℃过夜。用瓷漏斗收集形成的固体沉淀，用无水乙醇洗涤，然后在100℃下真空干燥，得到标题化合物(72％)，为细白色粉末，mp 235-237℃。C17H24N4O2S2·HBr的分析计算值C，44.24；H，5.46；N，12.14；S，13.89；Br，17.31。实测值C，44.16；H，5.40；N，12.12；S，13.91；Br，17.70。实施例12N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺0.5-L-酒石酸盐 向N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺(1.75g，4.6mmol)的无水EtOH(70mL)的温热溶液中加入L-酒石酸(345mg，2.3mmol，0.5eq)的无水EtOH(5ml)溶液。数分钟后开始形成沉淀。室温下将该混合液放置4小时，然后用瓷漏斗收集固体沉淀，用无水乙醇洗涤，在85℃下真空干燥24小时，得到标题化合物(94％)，为浅黄色晶体，mp 234-236℃。C17H24N4O2S2·0.5-L-酒石酸的分析计算值C，50.09；H，5.97；N，12.29；S，14.07。实测值C，49.85；H，5.90；N，12.12；S，13.75。实施例13N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺0.5-D-酒石酸盐 向N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺(1.00g，2.63mmol)的无水EtOH(40mL)的温热溶液中加入D-酒石酸(198mg，1.32mmol，0.5eq)的无水EtOH(4ml)溶液。数分钟后开始形成沉淀。室温下将该混合液放置18小时，然后用瓷漏斗收集固体沉淀，用无水乙醇洗涤，在65℃下真空干燥6小时，得到标题化合物(73％)，为白色固体，mp 232-233℃。C17H24N4O2S2·0.5-D-酒石酸的分析计算值C，50.09；H，5.97；N，12.29；S，14.07。实测值C，49.75；H，5.81；N，12.04；S，13.37。实施例14N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺0.5-富马酸盐 向N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺(1.75g，4.6mmol)的无水EtOH(100mL)的温热溶液中加入富马酸(276mg，2.3mmol，0.5eq)的无水EtOH(5ml)溶液。10分钟后开始形成沉淀。室温下将该混合液放置2小时，然后在5℃下放置16小时。用瓷漏斗收集形成的固体沉淀，用无水乙醇洗涤，在65℃下真空干燥24小时，得到标题化合物(84％)，为白色固体，mp 206-207℃。C17H24N4O2S2·0.5富马酸的分析计算值C，52.04；H，5.98；N，12.77；S，14.62。实测值C，51.74；H，5.76；N，12.57；S，14.19。重结晶(95％EtOH水溶液)得到包含1摩尔EtOH(83％)的标题化合物，为大的无色晶体，mp 212-214℃。C17H24N4O2S2·0.5富马酸·EtOH的分析计算值C，52.05；H，6.66；N，11.56；S，13.23。实测值C，52.03；H，6.06；N，11.50；S，12.99。实施例15N-[5-[[[5-1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺0.5-琥珀酸盐 向N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺(50mg，0.13mmol)的无水EtOH(2mL)的温热溶液中加入琥珀酸(7.7mg，0.065mmol，0.5eq)的无水EtOH(0.25ml)溶液。10分钟后开始形成沉淀。室温下将该混合液放置1小时，然后用瓷漏斗收集沉淀，用无水乙醇洗涤，在100℃下真空干燥24小时，得到标题化合物(70％)，为白色固体，mp 190-192℃。C17H24N4O2S2·0.5琥珀酸·0.46H2O的分析计算值C，50.96；H，6.28；N，12.51；S，14.32。实测值C，50.96；H，6.20；N，12.49；S，14.23。实施例16N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代1-2-噻唑基1-4-哌啶甲酰胺0.5-硫酸盐 向N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺(50mg，0.13mmol)的无水EtOH(2mL)的温热溶液中加入1M硫酸水溶液(0.065mL，0.065mmol，0.5eq)。几乎立即形成沉淀。将该混合液冷却至5℃2小时，然后用瓷漏斗收集沉淀，用无水乙醇洗涤，在100℃下真空干燥24小时，得到标题化合物(79％)，为白色固体，mp 256-258℃。C17H24N4O2S2·0.5H2SO4·0.68H2O的分析计算值C，46.22；H，6.01；N，12.68；S，18.14。实测值C，46.21；H，5.95；N，12.71；S，18.23。实施例17N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺0.5-柠檬酸盐 向N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺(50mg，0.13mmol)的无水EtOH(2mL)的温热溶液中加入柠檬酸溶液(8.3mg，0.043mmol，0.33eq)。将该溶液冷却至5℃18小时，然后用瓷漏斗收集沉淀，用无水乙醇洗涤，在100℃下真空干燥24小时，得到标题化合物(68％)，为白色固体，mp 214-216℃。C17H24N4O2S2·0.5柠檬酸·0.10H2O的分析计算值C，50.21；H，5.94；N，11.71；S，13.40。实测值C，50.21；H，6.01；N，11.83；S，13.44。实施例18N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺甲磺酸盐 向N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺(100mg，0.26mmol)的异丙醇(0.75mL)淤浆中加入甲磺酸(0.017mL，0.26mmol，1eq)。将该淤浆加热至70℃以得到澄清溶液，然后加入甲基叔丁基醚(1.5mL)。15分钟内形成沉淀。在55℃下，将得到的混合液搅拌2小时，然后在室温下搅拌14小时。过滤收集形成的沉淀，在50℃下真空干燥14小时，得到标题化合物(85％)，为无色粉末，mp 105℃。C17H24N4O2S2·MSA·H2O的分析计算值C，43.70；H，6.11；N，11.32；S，19.44。实测值C，43.53；H，6.14；N，11.15；S，19.15。实施例19N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺0.5-D，L-苹果酸盐
在70℃下，向N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺(100mg，0.26mmol)的异丙醇(0.80mL)溶液中慢慢加入D，L-苹果酸(35mmg，0.13mmol，0.5eq)的异丙醇(0.3mL)溶液。立即形成沉淀。在55℃下将得到的混合物搅拌2小时，然后在室温下搅拌14小时。过滤收集沉淀，在50℃下真空干燥14小时，得到标题化合物(75％)，为无色粉末，mp 216℃。C17H24N4O2S20.5-C4H6O5H2O的分析计算值C，50.98；H，6.08；N，12.51；S，14.32。实测值C，50.55；H，6.17；N，12.29；S，14.05。
权利要求
1.一种式I的化合物和其对映体、非对映体、溶剂合物及药学上可接受的盐 其中R是烷基；R1是氢或烷基；X是NR2或CHNR2R3；R2和R3各自独立是氢、烷基、取代的烷基、环烷基或取代的环烷基；以及n是0、1、2或3。
2.权利要求1的化合物，其中R是烷基；R1是氢；X是NR2或CHNR2R3；R2和R3各自独立是氢、烷基、取代的烷基或环烷基；以及n是2。
3.式Ia的权利要求1的化合物和其对映体、非对映体、溶剂合物及药学上可接受的盐 其中R2是氢、烷基、取代的烷基或环烷基。
4.式Ib的权利要求1的化合物和其对映体、非对映体、溶剂合物及药学上可接受的盐 其中R2是氢、烷基、取代的烷基或环烷基。
5.式Ic的权利要求1的化合物和其对映体、非对映体、溶剂合物及药学上可接受的盐 其中R2和R3各自独立是氢、烷基、取代的烷基或环烷基。
6.选自下列化合物的权利要求1的化合物和其对映体、非对映体、溶剂合物及药学上可接受的盐N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺；(±)-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-3-哌啶甲酰胺；(±)-1-(2，3-二羟基丙基)-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺；N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-1-(1-甲基乙基)-4-哌啶甲酰胺；1-环丙基-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺；N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-1-(2-羟乙基)-4-哌啶甲酰胺；(R)-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-3-哌啶甲酰胺；(S)-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-3-哌啶甲酰胺；顺式-4-氨基-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]环己基甲酰胺；和反式-4-氨基-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]环己基甲酰胺。
7.N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺和其对映体、非对映体、溶剂合物及药学上可接受的盐。
8.(±)-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-3-哌啶甲酰胺和其对映体、非对映体、溶剂合物及药学上可接受的盐。
9.(R)-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-3-哌啶甲酰胺及其药学上可接受的盐。
10.(S)-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-3-哌啶甲酰胺及其药学上可接受的盐。
11.顺式-4-氨基-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]环己基甲酰胺和其对映体、非对映体、溶剂合物及药学上可接受的盐。
12.反式-4-氨基-N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]环己基甲酰胺和其对映体、非对映体、溶剂合物及药学上可接受的盐。
13.一种药用组合物，它包含权利要求1的化合物以及药学上可接受的载体。
14.一种药用组合物，它包含配制为固定剂量的权利要求1的化合物以及药学上可接受的载体和抗癌剂。
15.一种药用组合物，它包含配制为固定剂量的权利要求1的化合物以及药学上可接受的载体和p53反式激活调节剂。
16.一种调节编程性细胞死亡的方法，该方法包括给予需要这种调节的哺乳动物有效调节编程性细胞死亡的量的权利要求1的化合物。
17.一种抑制蛋白激酶的方法，该方法包括给予需要这种抑制的哺乳动物有效抑制蛋白激酶的量的权利要求1的化合物。
18.一种抑制依赖细胞周期蛋白的激酶的方法，该方法包括给予需要这种抑制的哺乳动物有效抑制依赖细胞周期蛋白的激酶的量的权利要求1的化合物。
19.一种抑制cdc2(cdk1)的方法，该方法包括给予需要这种抑制的哺乳动物有效抑制cdc2的量的权利要求1的化合物。
20.一种抑制cdk2的方法，该方法包括给予需要这种抑制的哺乳动物有效抑制cdk2的量的权利要求1的化合物。
21.一种抑制cdk3的方法，该方法包括给予需要这种抑制的哺乳动物有效抑制cdk3的量的权利要求1的化合物。
22.一种抑制cdk4的方法，该方法包括给予需要这种抑制的哺乳动物有效抑制cdk4的量的权利要求1的化合物。
23.一种抑制cdk5的方法，该方法包括给予需要这种抑制的哺乳动物有效抑制cdk5的量的权利要求1的化合物。
24.一种抑制cdk6的方法，该方法包括给予需要这种抑制的哺乳动物有效抑制cdk6的量的权利要求1的化合物。
25.一种抑制cdk7的方法，该方法包括给予需要这种抑制的哺乳动物有效抑制cdk7的量的权利要求1的化合物。
26.一种抑制cdk8的方法，该方法包括给予需要这种抑制的哺乳动物有效抑制cdk8的量的权利要求1的化合物。
27.一种治疗增生性疾病的方法，该方法包括给予需要这种治疗的哺乳动物治疗有效量的权利要求13的组合物。
28.一种治疗癌症的方法，该方法包括给予需要这种治疗的哺乳动物治疗有效量的权利要求13的组合物。
29.一种治疗炎症、炎症性肠病或移植排斥的方法，该方法包括给予需要这种治疗的哺乳动物治疗有效量的权利要求13的组合物。
30.一种治疗关节炎的方法，该方法包括给予需要这种治疗的哺乳动物治疗有效量的权利要求13的组合物。
31.一种治疗增生性疾病的方法，该方法包括给予需要这种治疗的哺乳动物治疗有效量的权利要求14的组合物。
32.一种治疗癌症的方法，该方法包括给予需要这种治疗的哺乳动物治疗有效量的权利要求14的组合物。
33.一种治疗增生性疾病的方法，该方法包括给予需要这种治疗的哺乳动物治疗有效量的权利要求15的组合物。
34.一种治疗癌症的方法，该方法包括给予需要这种治疗的哺乳动物治疗有效量的权利要求15的组合物。
35.一种治疗与依赖细胞周期蛋白的激酶相关的疾病的方法，该方法包括给予需要这种治疗的患者有效量的至少一种权利要求1的化合物。
36.一种治疗化疗诱发的脱发、化疗诱发的血小板减少、化疗诱发的白细胞减少或mucocitis的方法，该方法包括给予需要这种治疗的哺乳动物治疗有效量的权利要求1的化合物。
37.权利要求1的化合物，其中所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、三氟乙酸盐和盐酸盐的混合物、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐。
38.权利要求2的化合物，其中所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、三氟乙酸盐和盐酸盐的混合物、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐。
39.权利要求3的化合物，其中所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、三氟乙酸盐和盐酸盐的混合物、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐。
40.权利要求4的化合物，其中所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、三氟乙酸盐和盐酸盐的混合物、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐。
41.权利要求5的化合物，其中所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、三氟乙酸盐和盐酸盐的混合物、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐。
42.权利要求6的化合物，其中所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、三氟乙酸盐和盐酸盐的混合物、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐。
43.权利要求7的化合物，其中所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、三氟乙酸盐和盐酸盐的混合物、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐。
44.权利要求8的化合物，其中所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、三氟乙酸盐和盐酸盐的混合物、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐。
45.权利要求9的化合物，其中所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、三氟乙酸盐和盐酸盐的混合物、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐。
46.权利要求10的化合物，其中所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、三氟乙酸盐和盐酸盐的混合物、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐。
47.权利要求11的化合物，其中所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、三氟乙酸盐和盐酸盐的混合物、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐。
48.权利要求12的化合物，其中所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、三氟乙酸盐和盐酸盐的混合物、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐。
49.权利要求13的药用组合物，其中所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、三氟乙酸盐和盐酸盐的混合物、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐。
50.权利要求14的药用组合物，其中所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、三氟乙酸盐和盐酸盐的混合物、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐。
51.权利要求15的药用组合物，其中所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、三氟乙酸盐和盐酸盐的混合物、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐。
52.权利要求17的方法，其中所述化合物的所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、三氟乙酸盐和盐酸盐的混合物、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐。
53.权利要求18的方法，其中所述化合物的所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、三氟乙酸盐和盐酸盐的混合物、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐。
54.权利要求20的方法，其中所述化合物的所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、三氟乙酸盐和盐酸盐的混合物、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐。
55.权利要求27的方法，其中所述化合物的所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、三氟乙酸盐和盐酸盐的混合物、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐。
56.权利要求28的方法，其中所述化合物的所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、三氟乙酸盐和盐酸盐的混合物、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐。
57.权利要求31的方法，其中所述化合物的所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、三氟乙酸盐和盐酸盐的混合物、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐。
58.权利要求32的方法，其中所述化合物的所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、三氟乙酸盐和盐酸盐的混合物、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐。
59.权利要求36的方法，其中所述化合物的所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、二盐酸盐、硫酸盐、三氟乙酸盐、三氟乙酸盐和盐酸盐的混合物、酒石酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐、溴酸盐和碘酸盐。
全文摘要
本发明描述了式I化合物和其对映体、非对映体、溶剂合物及药学上可接受的盐。该式化合物为蛋白激酶抑制剂，可用于治疗增生性疾病，例如癌症、炎症和关节炎。它们还可用于治疗Alzheimer病、化疗诱发的脱发和心血管疾病。
文档编号C07D417/12GK1444584SQ01813367
公开日2003年9月24日 申请日期2001年5月9日 优先权日2000年7月26日
发明者R·N·米斯拉, H·-Y·肖 申请人:布里斯托尔-迈尔斯斯奎布公司