专利名称：从食用油中提取脱氧核糖核酸的方法
技术领域：
本发明属于利用物理或化学的方法进行分离的技术领域，涉及一种从食用油中提取出所需成分的方法，特别是涉及一种从食用油中提取脱氧核糖核酸(DNA)的方法。
背景技术：
脱氧核糖核酸(DNA)是遗传物质，通过分析检测DNA，可以鉴别基因及其生物种类。食用油经过一系列高温等特殊物理条件处理，DNA破坏严重，很难从食用油中提取足以检测的DNA，因此也很难鉴别食用油生产原料的品种或品系。
与本发明较相关的现有技术是《中国油脂》2002年第2期刊登的“PCR法定性检测食用油脂中转基因成分”。该文献提到了食用油中脱氧核糖核酸(DNA)提取方法，在2mL离心管中分2次加入0.5mL食用油及400μl TE溶液，颠倒混匀5min，室温下离心13000r/m、3min，去除上层油脂层；再次向同一支管中分2次加入0.5mL食用油，离心，去除上层油脂层，反复2～5次。在获取的约400μl的水相中，加入400μl CTAB提取液和2μlRNase酶溶液旋涡振荡1-3s，置于65℃水浴30min，加入等体积24∶1氯仿/异戊醇，轻缓颠倒数次后室温静置5min；13000r/m室温下离心5min(如果上清液比较浑浊，重复此步骤)；转移并等分上清液于2支1.5mL离心管中；于每支离心管中加入1μg-2μg担体(Carrier)，并加入0.6体积预冷的异丙醇，颠倒混匀后于-20℃静置1～2h沉淀DNA；13000r/m室温离心10min，弃去上清液；用70％乙醇洗涤沉淀2次，干燥沉淀物；每支离心管中加入30μl-50μl0.1×TE溶解沉淀，4℃保存备用。
上述方法过程概括如下TE抽提DNA——CTAB提取液提取DNA(RNase酶降解RNA)——氯仿/异戊醇抽提蛋白——异丙醇和担体(Carrier)共沉淀DNA——乙醇洗涤DNA。
由此可见，该现有技术中所提及的方法较为烦琐，因此有必要提供一种简单、快速、有效的从食用油中提取DNA的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从食用油中提取脱氧核糖核酸(DNA)的方法，应用这种方法，可有效地从食用油中提取DNA，以利于随后的DNA检测，该方法能够有效克服现有技术中存在上述缺陷。
本发明的目的是这样实现的一种从食用油中提取脱氧核糖核酸的方法，其关键在于，所述的提取方法具有如下工艺步骤A.首先在食用油中加入水或缓冲液，并分离出含脱氧核糖核酸的水相；B.然后用乙醇或异丙醇沉淀水相中的脱氧核糖核酸；C.最后用乙醇洗涤脱氧核糖核酸。
本发明所述的从食用油中提取脱氧核糖核酸的方法，其中工艺步骤A所述的抽提过程需剧烈震荡(每分钟200次以上往复式运动)，并通过离心分离出水相。
本发明所述的从食用油中提取脱氧核糖核酸的方法，其特征在于，加入的缓冲液pH在5.0～9.0之间。
本发明所述的从食用油中提取脱氧核糖核酸的方法，其特征在于，乙醇最终浓度为60～80％，异丙醇最终浓度为30～50％。
也就是说，本发明提供了一种从食用油中提取脱氧核糖核酸(DNA)的方法，其是在食用油中，加入水或缓冲液，剧烈振荡混匀，12000r/m离心15min；取下层水相，加入2.5倍体积无水乙醇或0.8倍体积的异丙醇，轻缓颠倒混匀，12000r/m，4℃离心20min；弃去上清，加入70％乙醇洗涤沉淀两次，12000r/m，4℃离心20min，得DNA。
本发明适宜于从DNA含量稀少的食用油中提取到DNA。应用该方法提取到的DNA，适宜于进行PCR扩增、检测。
按照本发明所述的从食用油中提取脱氧核糖核酸(DNA)的方法，采用以下简单过程水或缓冲液抽提DNA——乙醇或异丙醇沉淀DNA——乙醇洗涤DNA，得到了适宜于进行PCR扩增、检测的DNA。DNA片段游离于食用油中，加入水或缓冲液后，剧烈震荡，使DNA片段和水或缓冲液充分接触，导致DNA片段溶于水或缓冲液中，由于食用油中几乎不含有蛋白质和RNA等杂质，因此直接加入2.5倍体积无水乙醇或0.8倍体积的异丙醇，沉淀DNA，最后用70％乙醇洗涤沉淀两次，即得到适宜于进行PCR扩增、检测的DNA。
使用本提取方法，能够简单、快速、高效地从食用油中提取到DNA。
下面，结合具体实施例对本发明作进一步详细说明，但它们并非用于对本发明的限定。
具体实施方法实施例1取30ml食用油样品至50ml离心管中，加入15ml水，剧烈振荡混匀，12000r/m离心15min；取下层水相转至另一50ml离心管中，加入2.5倍体积无水乙醇，轻缓颠倒混匀，12000r/m，4℃离心20min；弃去上清，加入500μl 70％乙醇洗涤沉淀两次，12000r/m离心20min，得DNA。
实施例2取15ml食用油样品至50ml离心管中，加入10ml TE缓冲液[10mmol/LTris-HCl(pH 8.0)，1mmol/L EDTA(pH8.0)]，剧烈振荡混匀，12000r/m离心15min；取下层水相转至另一50ml离心管中，加入1.5倍体积无水乙醇，轻缓颠倒混匀，12000r/m，4℃离心20min；弃去上清，加入500μl 70％乙醇洗涤沉淀两次，12000r/m离心20min，得DNA。
实施例3取50ml食用油样品至100ml离心管中，加入25ml磷酸钾缓冲液(100mmol/L、pH7.5)，剧烈振荡混匀，12000r/m离心15min；取下层水相转至另一100ml离心管中，加入0.8倍体积异丙醇，轻缓颠倒混匀，12000r/m，4℃离心20min；弃去上清，加入500μl 70％乙醇洗涤沉淀两次，12000r/m离心20min，得DNA。
与现有技术相比，本发明具有的优点为可简单、快速、高效地从食用油中提取到DNA。
权利要求
1.一种从食用油中提取脱氧核糖核酸的方法，其特征在于，所述的提取方法具有如下工艺步骤A.首先在食用油中加入水或缓冲液，并分离出含脱氧核糖核酸的水相；B.然后用乙醇或异丙醇沉淀水相中的脱氧核糖核酸；C.最后用乙醇洗涤脱氧核糖核酸。
2.如权利要求1所述的从食用油中提取脱氧核糖核酸的方法，其特征在于，工艺步骤A所述的抽提过程需剧烈震荡，并通过离心分离出水相。
3.如权利要求1或2所述的从食用油中提取脱氧核糖核酸的方法，其特征在于，加入的缓冲液pH在5.0～9.0之间。
4.如权利要求1或2所述的从食用油中提取脱氧核糖核酸的方法，其特征在于，乙醇最终浓度为60～80％，异丙醇最终浓度为30～50％。
全文摘要
本发明公开了一种从食用油中提取脱氧核糖核酸(DNA)的方法，其是在食用油中加入水或缓冲液，剧烈振荡混匀，离心；取下层水相，加入无水乙醇或异丙醇，轻缓颠倒混匀，离心；加入乙醇洗涤沉淀两次。本发明适宜于从DNA含量稀少的食用油中提取到DNA。应用该方法提取到的DNA，适宜于进行PCR扩增、检测。
文档编号C07H1/00GK1482133SQ0213161
公开日2004年3月17日 申请日期2002年9月11日 优先权日2002年9月11日
发明者徐宝梁, 刘博 , 陈颖, 王丙武, 王曙光, 苏宁 申请人:北京陆桥技术有限责任公司