专利名称：：用于治疗动脉硬化的药物组合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及V或X型分泌性磷脂酶A2抑制剂，所述抑制剂能有效抑制V或X型分泌性磷脂酶A2(sPLA2)对血清脂蛋白的变性活性，尤其涉及用于治疗、预防和诊断基于动脉硬化的缺血性疾病的药物组合物。
背景技术：
：动脉硬化是一个普通术语，是指动脉壁变厚并硬化的病状。从病理学上可将动脉硬化病变分为三类动脉粥样硬化、小动脉性动脉硬化和主动脉中层坏死，其中动脉粥样硬化被认为是局部缺血疾病(例如心急梗死和脑梗)的的诱因。高脂血症是指血清中的血脂例如胆固醇和中性脂肪增加的状况，它与血脂动脉粥样硬化的发生密切相关。血脂是以与蛋白质形成络合物的脂蛋白形式出现的。具体的说，可根据其密度将含有胆固醇的脂蛋白分为极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)等。其中的LDL通过LDL受体被周缘组织中的细胞摄取，同时将胆固醇运送到细胞中。与正常LDL相比，动脉粥样硬化初级阶段时的LDL任何方式的变性(degenerate)均可引起脂类过氧化、整个颗粒的负电荷增加、成分因磷脂分解和结构变化而改变、尺寸减小(密度增加)等(Yokode等，Rinshokensa44，10.1058(2000))，并且变性的LDL通过清除剂被渗入血管内膜组织中的单核细胞和巨噬细胞摄取，由此在泡沫细胞中沉积胆固醇酯的油性小滴，并且促进了与T淋巴细胞和血管平滑肌相关的脂肪纹的形成。此后，脂肪纹中细胞间相互作用导致的病理学进程在血管腔内形成了严重的突出性(protruded)损害即纤维斑块，进而发展成动脉粥样硬化，随着周围结缔组织的增加还伴随着钙化和血栓形成的发生。另一方面，HDL在由周围组织向肝脏中传递过量胆固醇的过程中起一定作用，并能抑制动脉硬化的发展。这样，当血液中的HDL水平降低或发生变性时，HDL的功能就降低了，并且血液中释放的胆固醇水平也增加，这是动脉粥样硬化的一个致病因素。如上所述，脂蛋白例如LDL和HDL的变性或性质上的改变是动脉硬化发展过程中的一个主要病因。对其中的一种变性即氧化变性已经有了认识，其中被氧化的LDL的负电荷增加、缩小、密度增加。据信，氧化变性可引起动脉硬化病状的发展，这是因为在动脉硬化的实际病变中发现了氧化的LDL，并且人为氧化的LDL可诱发巨噬细胞发沫，激活细胞而促进各种细胞因子的生成。另一方面，业已发现变性LDL中的磷脂成分发生变化(磷脂分解)，这将研究的注意力集中到磷脂分解性酶--磷脂酶A2(PLA2)上面，并认为该分子可引起LDL和HDL的变性。磷脂酶(PLA2；EC3.1.1.4)是一种通称，它代表一类能水解3-sn-磷酸甘油酯的2-酰基酯键的磷脂分解性酶。其中分泌型PLA2(sPLA2)代表胞外分泌的具有较低分子量(13-18kDa)的PLA2分子，已知在人体内包括八种即IB、IIA、IID、IIE、IIF、V、X和XII型。任何一种分子结构中军包含可形成分子内二硫键的12-16个半胱氨酸残基，并且包含由His-Asp残基组成的保守的活性中心。它们也包含共同的Ca2+-结合部位，并且需要mM级Ca2+水平来表达酶活性(Ishizaki等，J.Biol.Chem.274，24973-24979(1999)；Suzuki等，J.Biol.Chem.275，5785-5793(2000)；Six等，Biochim.BiophysActa1488，1-19(2000)；和Gelb等，J.Biol.Chem.275，39823-39826(2000))。IIA型sPLA2被发现在人动脉硬化病变的血管平滑肌和泡沫细胞中表达，并且这种表达被认为是与动脉硬化的发展相关(Elinder等，Arterioscler.ThrombVasc.Biol.17，2257-2263(1997)，和Menschikowski等，Atherosclerosis118，173-181(1995))。此外，还发现表达高水平人IIA型sPLA2的转基因小鼠中的LDL水平增加和HDL水平降低，并且出现了动脉硬化病变(Tietge等，J.Biol.Chem.27510077-10084((2000))，当给予高脂肪饮食时，与正常的鼠相比，动脉硬化出现恶化(Ivandic等，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.191284-1290(1999))，因此IIA型sPLA2在动脉硬化发展中的作用引起了研究者的关注。同时还发现，LDL经来源于蜂毒的sPLA2处理后，磷脂成分的整个颗粒负电荷增加，并且被巨噬细胞摄取的LDL也增加(Aviram等，Biochem.Biophys.Res.Commun.185，465-472(1992))，并且它们的特征与那种低密度LDL非常相似，这种低密度LDL被认为是缺血性疾病的一个危险因子(Sartipy等，J.Biol.Chem.274，25913-25920(1999))。此外，业已认识到HDL经蛇毒sPLA2处理后，其与磷脂分解相关的尺寸和密度发生变化，并且被肝细胞摄取增加(Collet等，Biochim.Biophys.Acta1043，301-310(1990))。在人sPLA2分子中，尽管IIA型sPLA2尤其具有上述水解脂蛋白中磷脂的效力，但是也发现IIA型sPLA2在磷脂分解LDL方面极端弱于来源于毒液的sPLA2(Hurt-Camejo等，Curr.Opin.Lipidol.11465-471(2000))，而它对HDL的磷脂分解强于对LDL的磷脂分解(Pruzanski等，Lipid.Res.，2150-2160(1998))。从这些发现来看，除了IIA型sPLA2外，还有sPLA2分子种类会对动脉硬化发展有影响，但是不清楚哪种内源性sPLA2分子对动脉硬化发展有影响，这表明这些sPLA2分子对脂蛋白的确切变性活性及其在动脉硬化中的确切表达特征也不清楚。在DNA数据库的sPLA2-相关序列基础上，于1997年从胎肺组织中克隆出了人X型sPLA2(Cupillard等，J.Biol.Chem.272，15745-15752(1997))。与其他sPLA2不同的是，人X型sPLA2位于染色体16。酶分子中含有16个半胱氨酸残基，并且在表征IIB型sPLA2和(IIA/IID/IIE/IIF型)sPLA2的位置上包含所有分子内二硫键。另外，这种酶所具有的含羧基端的伸展结构是II型sPLA2所独具的。X型sPLA2存在着两种分子种类，一种为灭活型即原形(pro-form)，它具有前肽序列(由连接于N端的11个氨基酸残基组成)；和另一种为激活型，它是由前肽序列与蛋白酶(例如胰蛋白酶)的分裂及缺失所产生的(Morioka等，ArchBiochem.Biophys.381，31-42(2000))。不考虑底物、磷脂的种类和性质，与来源于哺乳动物的其他sPLA2(例如IIB和IIA型sPLA2)相比，激活型X型sPLA2呈现出更强的酶活性，并且具有比IIB和IIA型sPLA2更强的活性，即能在触点将花生四烯酸从细胞膜释放到细胞中，并能生成脂质介质(例如类花生酸和溶血磷脂)(Hanasaki等，J.Biol.Chem.274，34203-34211(1999)；Saiga等，Biochim.BiophysActa1530，67-76(2001))。采用特殊抗体进行的免疫组织化学分析显示X型sPLA2在II型肺泡上皮细胞和脾巨噬细胞中表达，并且在人结肠癌细胞中的表达被加速，表明这种酶会引起炎症和免疫应答，并会引起癌症的发病和发展(Morioka等，FEBSLett.487，262-266(2000))。然而，没有文献描述X型sPLA2对脂蛋白的变性活性及其在动脉硬化病变中的表达，有关这种酶在动脉硬化的发病和发展中的作用依然不清楚。1994年克隆了人V型sPLA2(Chen等，J.Biol.Chem.，1994，269，2365-2368)。与IIA型sPLA2一样，人V型sPLA2的基因位于染色体1。这种酶分子12个半胱氨酸残基(比IIA型sPLA2少2个)，并且不含有在II型sPLA2中发现的含羧基伸展结构。主要在心脏以及肺和炎性细胞(例如肥大细胞和巨噬细胞)中发现了V型sPLA2的表达，已知该酶在这类细胞中与脂质介质的生成有关(MakMurakami，IchirouKudou，Gendaiiryou，2000，32，517-548)。然而，没有文献描述V型sPLA2对脂蛋白的变性活性，有关这种酶在动脉硬化的发病和发展中的作用依然不清楚。发明描述本申请的发明人对人V或X型sPLA2的生理学活性进行了研究，发现这些酶对血液脂蛋白中的磷脂表现出有力地释放脂肪酸的作用。在上述发现的基础上，本发明人证实那些对V和/或X型sPLA2有抑制作用的化合物能抑制V和/或X型sPLA2对血清脂蛋白的变性活性，从而完成了本发明。至于能抑制的sPLA2化合物，可参见EP620214(日本专利公开No.7-010838、US-5578634)，EP620215(日本专利公开No.7-025850、US5684034)，EP675110(日本专利公开No.7-285933、US5654326)，WO96/03120(日本专利公开No.10-505336)，WO96/03376(日本专利公开No.10-503208、US-5641800)，WO96/03383(日本专利公开No.10-505584)，WO97/21664(EP779271)，WO97/21716(EP779273)，WO98/18464(EP839806)，WO98/24437(EP846687)，WO98/24756，WO98/24794，WO98/25609，WO99/51605和WO99/59999描述了一些化合物；RobertsM.F.等，J.BicChem.1977，252，2405-2411描述了对-溴苯酰基溴；VadasP.等，Lab.Invest.1986，55，391-404描述了阿的平；LombardoD.等，J.Biol.Chem.1985，260，7234-7240描述了Manoalide；和YoshidaT.等，J.Antibiotics.1991，44，1467-1470描述了thielocinA1；和HanasakiK.等，J.Biol.Chem.1999年11月26；274(48)34203-11和SuzukiN等，J.Biol.Chem.2000年2月25；275(8)5785-93描述了indoxam。然而，并没有出版物披露了在此所述sPLA2抑制性化合物对血清脂蛋白的变性具有任何抑制活性。在上述发现的基础上完成了本发明。具体地说，本发明涉及(1)用于抑制血清脂蛋白变性的药物组合物，用于治疗或防止动脉硬化的药物组合物，或用于治疗或预防基于动脉硬化的缺血性疾病的药物组合物，其中包括V和/或X型sPLA2抑制性化合物为活性成分。(2)本发明药物组合物，其中V和/或XsPLA2抑制性化合物如通式(I)所示其中环A是或其中R1和R2之一为式-(L1)-(酸基)，其中L1是与酸基连接的连接基，和连接基的长度为1-5，和另一个为氢原子、非干扰性取代基，或-(L1)-(酸基)，其中L1的定义如上；和每个R3和R4独立地为氢原子、非干扰性取代基、碳环、非干扰性取代基取代的碳环、杂环、非干扰性取代基取代的杂环；和-B-为(e)-(h)或其中R5是选自以下组的取代基(j)--包括C1-C20烷基、C2-C20链烯基、C2-C20链炔基、碳环或杂环；(k)--包括被一种或更多非干扰性取代基取代的独立选择的上述(j)；或式-(L2)-，L2是1-18个原子的二价连接基，它选自氢原子、氮原子、碳原子、氧原子和硫原子，和R8选自j)和(k)；R6为氢原子、卤素、C1-C3烷基、C3-C4环烷基、C3-C4环烯烃、C1-C3烷氧基或C1-C3烷基硫基；R7为氢原子或或非干扰性取代基；RA为式或其中每个R9和R10独立地为氢原子、C1-C3烷基或卤素；每一X和Y独立地为氧原子或硫原子；和Z是-NH2或-NHNH2；R8是-CONH2或-CONHNH2；和环D是环己烯环或苯环；条件是当-B-为(e)或(f)时，环A是环(b)、(c)或(d)；其前药或可药用盐或溶剂化物。优选地，本发明药物组合物中的V和/或X型sPLA2抑制性化合物如通式(I)所示，其中R1是氢原子或式-(L3)-R11，其中L3是-OCH2-、-SCH2-、-NH-CH2-、-CH2-CH2-、-O-CH(CH3)-或-O-CH-(CH2CH2C6C5)-；和R11是-COOH、-CONHSO2CH、-SO3H或-P(O)(OH)2；和R2是氢原子或式-(L4)-R12，其中L4如下式所示或其中每个R13和R14独立地为氢原子、C1-C10烷基、C1-C10芳烷基、羧基、烷氧基羰基、或卤素；和R12为-COOH、-SO3H或-P(O)(OH)2；条件是R1和R2不同时为氢原子；或其前药或可药用盐或溶剂化物。更优选地，本发明药物组合物中的V和/或X型sPLA2抑制性化合物如通式(I)所示，其中R3为氢原子、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、芳香基或杂环，和R4为氢原子或卤素；或其前药或可药用盐或溶剂化物；甚至更优选地，本发明药物组合物中的V和/或X型sPLA2抑制性化合物如通式(I)所示，其中R5为-(CH2)1-6-R15，其中R15为式或其中每一b、d、f、h、j、m和o独立地为0-2的整数；每一R16和17独立地选自卤素、C1-C10烷基、C1-C10烷氧基、C1-C10烷基硫基、芳氧基、苯基和C1-C10卤烷基；α是氧原子或硫原子；β是-CH2-或-(CH2)2-；γ是氧原子或硫原子；c、i和p为0-5的整数；e为0-7的整数；g为0-4的整数；和每一k和n独立地为0-3的整数；或其前药或可药用盐或溶剂化物；甚至更优选地，本发明药物组合物中的V和/或X型sPLA2抑制性化合物如通式(I)所示，其中R5为-CH2-R18，其中R18为式或其中β为-CH2-或-(CH2)2-；R19为氢原子、C1-C3烷基或卤素；和E为单键、-CH2-或-O-；或其前药或可药用盐或溶剂化物；甚至更优选地，本发明药物组合物中的V和/或X型sPLA2抑制性化合物如通式(I)所示，其中R1是-OCH2COH；或其前药或可药用盐或溶剂化物；甚至更优选地，本发明药物组合物中的V和/或X型sPLA2抑制性化合物如通式(I)所示，其中R2为氢原子；或其前药或可药用盐或溶剂化物；甚至更优选地，本发明药物组合物中的V和/或X型sPLA2抑制性化合物如通式(I)所示，其中R6为C1-C3烷基；或其前药或可药用盐或溶剂化物；甚至更优选地，本发明药物组合物中的V和/或X型sPLA2抑制性化合物如通式(I)所示，其中RA为-CH2CONH2或-COCONH2；或其前药或可药用盐或溶剂化物；甚至更优选地，本发明药物组合物中的V和/或X型sPLA2抑制性化合物如下式(I)所示或或其前药或可药用盐或溶剂化物；具体地说，本发明药物组合物中的V型sPLA2抑制性化合物如下式(I)所示或或其前药或可药用盐或溶剂化物；作为选择，本发明药物组合物中的X型sPLA2抑制性化合物如下式(I)所示或或其前药或可药用盐或溶剂化物。(3)V和/或X型sPLA2抑制性化合物在制备用于治疗或预防动脉硬化或基于动脉硬化的缺血性疾病的药物中的应用；优选地，如上所述的本发明V和/或X型sPLA2抑制性化合物的应用；和(4)治疗或预防哺乳动物包括人动脉硬化或基于动脉硬化的缺血性疾病的方法，包括将治疗有效量的V和/或X型sPLA2抑制性化合物给予所述哺乳动物，从而减轻他们的症状；优选地，如上所述的本发明V和/或X型sPLA2抑制性化合物在治疗或预防动脉硬化或基于动脉硬化的缺血性疾病的方法。附图简述Fig.1为IB、IIA和X型sPLA2诱导的花生四烯酸从LDL中的剂量依赖性释放曲线(37℃，1小时)。Fig.2表示抑制剂对X型sPLA2诱导的花生四烯酸从LDL中释放的作用曲线(sPLA2抑制剂indoxam，COX抑制剂吲哚美辛，5-LOX抑制剂AA-861，均为10μmol/L，结果以相对于不含抑制剂时X型sPLA2诱导花生四烯酸释放的百分率表示)。Fig.3表示LDL中主要磷脂、磷脂酰胆碱(PC)(Fig.3A)及其溶血形式(lyso-PC)(Fig.3B)的含量变化，其中LDL与IIA和X型sPLA2、CuSO4反应3、6和24小时。Fig.4表示代表琼脂糖凝胶电泳结果的照片，该实验用于分析LDL与IB、IIA和X型sPLA2、CuSO4反应3、6和24小时时的电荷(上面为阴极，下面为阳极)。Fig.5表示与IB、IIA和X型sPLA2、CuSO4反应3、6和24小时的LDL(A)和HDL(B)中所含脂质过氧化作用的变化，其中以术语丙二醛(MDA)表示硫代巴比妥酸反应物(TBARS)。Fig.6表示X型sPLA2变性HDL诱导的胆固醇流出减少曲线。与不向介质中加入物质相比，向介质中加入非变性HDL(天然HDL)，可显著地降低胞内胆固醇酯的水平，而加入X-变性的HDL(X-HDL)可显著地抑制这种降低。Fig.7表示IIA或V型sPLA2诱导的脂肪酸从LDL中的时间依赖性释放曲线(37℃，加入50nmol/LsPLA2)。Fig.8表示抑制剂对V型sPLA2诱导的亚油酸从LDL中释放的作用曲线(sPLA2抑制剂indoxam，COX抑制剂吲哚美辛，均为10μM，结果以相对于不含抑制剂时V型sPLA2诱导亚油酸释放的百分率表示)。Fig.9表示LDL中主要磷脂、磷脂酰胆碱(PC)(A)及其溶血形式(lyso-PC)(B)的含量变化，其中LDL与IIA和V型sPLA2、CuSO4反应3、6和24小时(37℃，加入50nmol/LsPLA2)。Fig.10表示代表琼脂糖凝胶电泳结果的照片，该实验用于分析LDL与V型sPLA2反应3、6和24小时时的电荷(上面为阴极，下面为阳极)。本发明最佳实施方式(1)用于抑制血清脂蛋白变性的药物组合物，其中包括V和/或X型sPLA抑制性化合物作为活性成分。本发明人发现，人V和X型sPLA2能使脂肪酸从血液脂蛋白的磷脂中强烈地释放。此外，本发明人发现，与IB和IIA型sPLA2相比，V和/或X型sPLA2在LDL和HDL变性方面非常有效(包括磷脂分解、脂肪酸释放、溶血磷脂的产生、负电荷增加、巨噬细胞摄取)，同时还发现V和/或X型sPLA2的这些作用不同于在先报道的氧化所引起的脂蛋白变性作用。在本文中，术语“血清脂蛋白的变性”是指磷脂分解、脂肪酸的释放、溶血磷脂的产生、负电荷增加、被巨噬细胞摄取等，不包括氧化所致的变性。在此所述的“V和/或X型sPLA2抑制性化合物”或“V和/或X型sPLA2抑制剂”包括能抑制V型sPLA2的化合物，能抑制X型sPLA2的化合物，以及对V和X型sPLA2均具有抑制活性的化合物。在一个实施方案中，本发明包括一种药物组合物，其中包括能抑制V型sPLA2的化合物和能抑制X型sPLA2的化合物作为活性成分。本发明人还发现，在病理性动脉硬化动物模型中，将抗体施于X型sPLA2上，可在血管病损的泡沫细胞中表达X型sPLA2。这样，本发明涉用于治疗或预防基于动脉硬化的缺血性疾病的药物组合物，其中包括V和/或X型sPLA2抑制性化合物为活性成分。在此所用的术语“动脉硬化”是一个普通术语，是指动脉壁变厚并硬化的病状，并且是指导致脑缺血发作、脑梗死、心绞痛、心肌梗死、和间歇性跛行的任何病理学表现，所有这些症状均由动脉的收缩和闭塞所引起。本发明优选用于治疗动脉硬化中的动脉粥样硬化。在此所用的术语“基于动脉硬化的缺血性疾病”是指动脉硬化引起的或动脉硬化相关的缺血性疾病。缺血性疾病通常包括局部贫血所致的各种病理学表现，例如坏死。然而，按照本发明，术语“缺血性疾病”是指由于血管改变或血管本身所引起的闭塞性局部缺血，例如心绞痛、心肌梗死、心力衰竭和脑梗死。(2)本发明药物组合物，包括如通式(I)所示的V和/或X型sPLA2抑制性化合物。在式(I)中，单独或与其他术语联用的术语“烷基”是指含有标示数目碳原子的直链或支链单价烃基。例如包括甲基，乙基，正-丙基，异丙基，正丁基，异丁基，正-丁基，叔丁基，正戊基，正己基，正庚基，正辛基，正壬基，正癸基，正十一烷基，正十二烷基，正十三烷基，正十四烷基，正十五烷基，正十六烷基，正十七烷基，正十八烷基，正十九烷基，正二十烷基等。在式(I)中，单独或与其他术语联用和术语“链烯基”是指含有标示数目的具有一个或更多双键的直链或支链单价烃基。例如包括乙烯基，烯丙基，丙烯基，丁烯基，异戊烯，各种丁烯基异构体等。在式(I)中，单独或与其他术语联用和术语“链炔基”是指含有标示数目的具有一个或更多三键的直链或支链单价烃基。例如包括乙炔基，丙炔基，6-庚炔基，7-辛炔基，8-壬炔基等。式(I)中所用的术语“碳环基团”是指饱和或不饱和的、取代或未被取代的5-14-，优选5-10-，更优选5-7-元有机环衍生的基团，其环形成原子(除了氢)均为碳原子。该术语包括其中两或三个上述基团彼此连接的基团。典型的碳环基团括环烷基(例如环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环庚基和环辛基)；环烯基(例如环丁烯基，环戊烯基，环己烯基，环庚烯基和环辛烯基)，苯基，萘基，降冰片基(norbornanyl)，二环庚二烯基，茚基，芪基(stilbenyl)，三联苯，苯基环己烯基，苊基(acenaphthyl)，蒽基，联苯基，联苄基和式(II)所示的苯基烷基苯基衍生物R3和R4中的碳环基团优选包括苯基、环己基等。式(I)中所用的术语“杂环基团”是指衍生于含有5-14个环原子的单环或多环、饱和或不饱和、取代或未取代杂环的基团，其中包含1-3个选自氮、氧和硫的杂原子。杂环基团包括例如吡啶基，吡咯基，呋喃基，苯并呋喃基，噻酚基，苯并噻酚基，吡唑基，咪唑基，苯基嘧唑基，三唑基，异恶唑基，恶唑基，噻唑基，噻二唑基，吲哚基，咔唑基，norharmanyl，氮杂吲哚基，苯并呋喃基，二苯并呋喃基，二苯并噻酚基，吲唑基，咪唑并[1.2-a)吡啶基，苯并三唑基，氨茴基，1，2-苯并异恶唑基，苯并恶唑基，苯并噻唑基，嘌呤基，吡啶基，二吡啶基，苯基吡啶，嘧啶基，苯基嘧啶，吡嗪基，1，3，5-三嗪基，喹啉基，2，3-二氮杂萘基，喹唑啉基，喹喔啉基等。R3和R4中的杂环基团优选包括呋喃基、噻吩基等。R5中的优选的碳环基团和杂环基团包括下式所示的基团或其中h是0-2的整数；每一R16和R17独立地选自卤素、C1-C10烷基、C1-C10烷氧基、C1-C10烷基硫基、芳氧基、苯基和C1-C10卤代烷基；α为氧原子或硫原子；β为-CH2-或-(CH2)2-；γ为氧原子或硫原子；c、I和p为0-5的整数；e为0-7的整数；g为0-4的整数；和每个k和n独立地为0-3的整数。当c、e、g，、I、k、n和/或p为2或更高时，每一R16和R17彼此不相同，R16可在萘基的任何位置被取代。更优选的基团包括下式所示的基团或其中R19为氢原子、C1-C3烷基或卤素；e为单键、-CH2-或-O-；β是-CH2-或-(CH2)2-。优选的的R5基团包括“碳环基团”-C1-C3烷基，和“杂环基团”-C1-C3烷基。式(I)所用的术语“非干扰性取代基”是指适于取代如上定义“碳环基团”、“杂环基团”以及基础环的基团。示例性的非干扰性基团包括C1-C10烷基，C2-C6链烯基，C2-C6炔基，C7-C12芳烷基(例如苄基和苯乙基)，C7-C12烷芳基，C3-C8环烷基，C3-C8环烯基，苯基，甲苯基，二甲苯基，联苯，C1-C10烷氧基，C1-C6烷氧基-C1-C6烷基(例如甲氧基甲基、乙氧基甲基，甲氧基乙基和乙氧基乙基)，C1-C6烷氧基-C1-C6烷氧基(例如甲氧基甲氧基和甲氧基乙氧基)，C1-C6烷基羰基(例如甲基羰基和乙基羰基)，C1-C6烷基羰基氨基(例如甲基羰基氨基和乙基羰基氨基)，C1-C6烷氧基氨基(例如甲氧基氨基和乙氧基氨基)，C1-C6烷氧基氨基羰基(例如甲氧基氨基羰基和乙氧基氨基羰基)，一或二-C1-C6烷基氨基(例如甲基氨基，乙基基氨基、二甲基氨基和乙基甲基氨基)，C1-C10烷基硫基，C1-C6烷基硫基羰基(例如甲硫基羰基和乙硫基羰基)，C1-C6烷基亚硫酰基(例如甲基亚硫酰基和乙基亚硫酰基)，C1-C6烷基磺酰(例如甲磺酰和乙磺酰)，C2-C6卤代烷氧基(例如2-氯代乙氧基和2-溴代乙氧基)，C1-卤代烷基磺酰(例如氯代甲基磺酰和2-溴代甲基磺酰)，C1-C10卤代烷基，C1-C6羟烷基(例如羟甲基和羟乙基)，C1-C6烷氧基羰基(例如甲氧基羰基和乙氧基羰基)，-(CH2)1-8-O(C1-C6烷基)，苄氧基，芳氧基(例如苯氧基)，芳硫基(例如笨硫基)，-(CONHSO2R20，其中R20为C1-C6烷基或芳基)，-CHO，氨基，脒基，卤素，氨基甲酰，羧基，烷氧羰基，(CH2)1-8-COOH(例如羧甲基，羧乙基和羧丙基)，氰基，氰基胍，胍基，酰肼，肼基，羟基，羟氨基，硝基，膦酰基，-SO3H，硫缩醛，硫代羰基，C1-C6羰基，碳环，杂环等。这些取代基可被一种或更多选自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、和卤素的取代基所取代。在R3、R4和R5中，“被非干扰性取代基取代”中的非干扰性取代基优选包括卤素、C1-C6烷基，C1-C6烷氧基、C1-C6烷基硫基和C1-C6卤烷基。更优选包括C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基和C1-C3卤烷基。R1、R2、R3、R4和R7中所用的非干扰性取代基优选包括C1-C6烷基、芳烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基硫、C1-C6羟烷基、C2-C6卤代烷氧基、卤素、羧基、C1-C6烷氧基羰基、芳氧基、芳基硫基、碳环基团和杂环基团。更优选包括C1-C6烷基、芳烷基、羧基、C1-C6羟烷基、苯基和C1-C6烷氧基羰基。式(I)所用的术语“卤素”是指氟、氯、溴和碘。式(I)所用的术语“环烷基”是指含有标示数目碳原子的一价环烃。环烃基例如包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基等。式(I)所用的术语“环烯基”是指含有标示数目碳原子和包含一种或更多双键的一价环烃。例如包括1-环丙烯基，2-环丙烯基，1-环丁烯基，2-环丁烯基等。式(I)所用的术语“烷氧基”例如包括甲氧基、乙氧基、n-丙氧基、异-丙氧基、n-丁氧基、n-戊氧基、n-己氧基等。式(I)所用的术语式(I)所用的术语“烷基硫基”例如包括甲硫基、乙硫基、n-丙氧基、异-丙硫基、n-丁硫基、n-戊硫基、n-己硫基等。式(I)所用的术语“酸基”是指通过适当的连接原子(下称“酸基的连接基团”)与环相连的有机官能团，用作氢键合的质子供体。酸基例如包括下式所示的基团或其中R21为氢原子、金属、或C1-C10烷基，和每一R22独立地为氢原子或C1-C10烷基、条件是当酸基具有R21和R22时，R21和R22中至少一个是氢原子。优选的基团包括-COOH、-SO3H、-CONHSO2C6H5，或P(O)(OH)2，更优选包括-COOH。式(I)所用的术语“酸基的连接基团”是指-(L1)-所代表的二价连接基团，它具有以一般方式连接环和酸基的官能。例如，包括下式所示的基团其中M是-CH2-、-O-、-N(R25)-或-S-，其中每一R23和R24独立地为氢原子、C1-C10烷基、芳基芳、烷基、羧基或卤素，和下式所示的基团或其中每一R13和R14独立地为氢原子、C1-C10烷基、C1-C10芳烷基、羧基、烷氧基羰基，或卤素。例如，优选包括-O-CH2-、-S-CH2-、-N(R25)-CH2、-CH2-CH2-、-O-CH(CH3)-、和-O-CH((CH2)2C6H5)-，其中R25是C1-C6烷基，更优选包括-O-CH2-和-S-CH2。式(I)所用的术语“酸基连接子的长度”是将环和酸基连接的连接基团-(L1)-的最短链中的原子数(氢除外)。-(L1)中存在碳环时，按约等于该碳环的理论直径来计算原子数目。这样，酸基连接子中苯环己烷环在计算-(L1)-的长度时按2个原子计。优选的长度是2-3。式(I)所用的术语“卤代烷基”是指经如上定义卤素在任何位置取代的如上定义的“烷基”。卤烷基包括例如氯甲基、三氟甲基、2-氯甲基、2-溴乙基等。式(I)所用的术语“羟烷基”是指羟基在任何位置取代的如上定义的“烷基”。羟烷基包括例如羟甲基、2-羟乙基、羟丙基等，优选为羟甲基。式(I)“卤代烷氧基”中所用的术语“卤烷基”的定义如上。卤代烷氧基包括例如2-氯乙氧基、2-三氟乙氧基、2-氯乙氧基等。式(I)所用的术语“芳基”是指单环或稠合芳烃，例如包括苯基、1-萘基、2-萘基、蒽基等，优选为苯基1-萘基。式(I)所用的术语“芳烷基”经如上定义的“芳基”在任何可取代位置取代的“烷基”，例如包括苄基、苯乙基、苯丙基(例如3-苯丙基)、萘甲基(例如1-萘甲基)等。式(I)所用的术语“烷氧基羰基”例如包括甲氧基羰基、乙氧基羰基、n-丙甲氧基羰基。式(I)所用的术语“芳氧基”包括苯氧基等。式(I)所用的术语“芳硫基”包括苯基硫基等。式(I)所用的术语“卤代苯基”是指经上述“卤素”在一个或更多位置取代的苯基，例如包括氟苯基、氯苯基、溴苯基、碘苯基、二氟苯基、二氯苯基、二溴苯基、三氟苯基、三氯苯基、三溴苯基、氯代氟苯基、溴代氟苯基等。式(I)环D中的“环己烯环”是指在环中与相邻环共用的稠和部分仅有一个双键。优选地，环A与-B-的组合是如下所示的(m)-(r)之一或更优选为(m)-(p)之一。可采用已知方法制备通式(I)所示的V和/或X型sPLA2抑制性化合物，例如EP620214(日本专利公开No.7-010838、US5578634)、EP620215(日本专利公开No.7-025850、US5684034))、EP675110(日本专利公开No.7-285933、US5654326)、WO96/0312(日本专利公开No.10-505336)、WO96/03383(日本专利公开No.10-505584)、WO98/18464(EP839806)、WO99/51605、WO99/59999等。可通过以下方法选择X型sPLA2抑制性化合物制备表达人X型sPLA2的细胞以及培养物上清液，然后按以下描述分析待试品的抑制活性。具体地说，将编码人X型sPLA2的cDNA序列(Cupillard等，J.Biol.Chem，1997，272，15745-15752)插入动物细胞用表达载体中。将所得的表达载体转染到宿主细胞中，提供稳定表达人X型sPLA2的细胞。培养细胞，配制培养物上清液。然后，采用下面描述的显色分析法鉴定X型sPLA2抑制性化合物，并且评价其活性。有关该分析方法的一般方法可参见“AnalysisofHumANSynovialFluidPhospholipaseA2onShortChainPhosphatidylchoiMixedMicellesDevelopmentofaSpectrophotometricAssaySuitableforaMicrotiterplateReader”，LaureJ.，Reynolds，LoriL.Hughes和EdwardA.Dennis分析生物化学，204，190-97页，1992。也可从采用与上述相似的方法选择V型sPLA2抑制性化合物，但是采用编码人V型sPLA2的cDNA序列(Chen等，J.Biol.Chem，1994，269，2365-2368)。当V和/或X型sPLA2抑制性化合物具有酸基或碱基时，它能形成更具水溶性和生理学适宜的盐类。典型的可药用盐包括但不限于与碱金属或碱土金属(例如锂、钠、钾、钙、镁、铝等)形成的盐。在溶液中用碱处理酸，或者使酸与离子交换树脂接触，可容易地由游离酸制得盐。可药用盐包括由用于或预防缺血性再灌注损伤的相对无毒的无机和有机碱性化合物所形成的加成盐，所述无机和有机碱性化合物例如由氮碱衍生的其碱性足以与化合物形成盐的衍生胺阳离子、铵、季铵(例如S.M.Berge等，“PharmaceuticalSalts，”J.Phar.Sci.，66，1-19(1977))。此外，V和/或X型XsPLA2抑制性化合物中的碱性基能与适宜的有机或无机酸反应形成盐，这些盐例如醋酸盐，苯磺酸盐，苯甲酸盐，碳酸氢盐，硫酸氢盐，洒石酸氢盐、硼酸盐，氢溴酸盐，樟脑磺酸，碳酸盐，氢氯酸盐，棒酸盐，柠檬酸盐，乙二胺四乙酸盐，乙二磺酸盐，丙酸酯十二烷基硫酸盐，乙磺酸盐，氟化物，富马酸盐，葡庚糖酸盐，葡糖酸盐，谷氨酸盐，乙醇酰基阿散酸盐(glycolylarsanilates)，己基间苯二酚酸盐，羟基萘甲酸盐，氢碘酸盐，酰基羟乙磺酸(isothionate)，乳酸盐，乳糖酸盐，月桂酸盐，苹果酸盐，malseate，苦杏仁酸盐，甲磺酸盐，甲基氢溴酸盐，甲基硝酸盐，甲基硫酸盐，粘酸盐，萘磺酸盐、硝酸盐，油酸酯，乙二酸盐，棕榈酸，泛酸盐，磷酸盐，多聚半乳糖醛酸，水杨酸盐，硬脂酸盐，碱式醋酸盐，琥珀酸盐，丹宁酸盐，酒石酸盐，甲苯磺酸盐，三氟醋酸盐，三氟甲烷磺酸盐，戊酸盐等。在此所用的溶剂化物包括与有机溶剂和/或水形成的物质。水合物可与任意数目的水分子形成。当V和/或X型sPLA2抑制性化合物具有一个或更多手性中心时，它们可能存在着旋光体。同样地，当化合物含有链烯基或亚链烯基时，该化合物可能存在着顺式和反式异构体。本发明也涉及R-和S-异构体及其混合物(包括外消旋混合物以及顺式和反式异构体的混合物)。取代基例如烷基中可能含有其他不对称碳原子。所有此类异构体及其混合物均包含于本发明之内。如果需要特定的立体异构体，可采用包含不对称中心和易于拆分的起始物经本领域已知方法进行立体有择反应制备，或者采用能形成立体异构体混合物(可经已知方法随后拆分)的方法进行制备。在此所用的前药是指V和/或X型sPLA2抑制性化合物的衍生物，它具有化学或代谢性裂解基团，并可提供媒解作用或在生理条件下变成体内药学活性的化合物。酸化和碱性前药衍生物均有活性，酸衍生物可提供优良的溶解性、组织相容性或在哺乳动物生物体实现释放控制(Bundgard，H.，DesignofProdrugs，7-9、21-24页，Elsevier出版社，Amsterdam1985)。例如，包括酸性衍生物的前药是本领域熟知的，例如母体酸性化合物与适宜醇反应制得的酯，或者酰胺母体酸性化合物与适宜胺反应制得的酰胺。由本发明化合物所含的酸性基团衍生的简单脂族或芳族酯是优选的前药。更优选的前药包括酸基的C1-C6烷基酯，例如甲酯、乙酯。在某些情况下，也可制备双酯型前药，例如(酰氧基)烷基酯或((烷氧羰基)氧基)烷基酯。术语“可药用”是指载体稀释剂或添加剂与组合物中的其它成分相容并且对接受者无害。本发明用于治疗或预防组合物可经多种途径施用，包括经口、气雾剂、直肠、经皮、皮下、静脉内、肌内、和经鼻。将治疗有效量的化合物与可药用载体或稀释剂合并(例如混合)，可本发明制剂。采用已知且容易获得的成分经已知方法即可制得制剂。在制备本发明组合物时，可将活性成分与载体混合，或者用载体稀释，或者装入胶囊、小袋、纸包或其它容器状的载体中。用作稀释剂的载体可以是固体、半固体或液体材料的介质，也可以是片剂、丸剂、粉剂、锭剂、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂、气雾剂(固体液体介质中)或软膏形式，其中包含例如高达10％的活性物质。优选在施用之前配制本发明具有抗癌活性的化合物。制剂中可采用本领域已知的的任何适宜载体。在这种制剂中，载体可以是固体、液体或者是固体与液体的混合物。例如，将治疗或预防缺血性再灌注损伤的化合物溶于4％葡萄糖/0.5％柠檬酸钠水溶液中，得到供静脉注射用的2μg/ml浓度。固态制剂包括散剂、片剂和胶囊剂。固体载体可以是一种或更多物质，它们也可用作调味剂、润滑剂、增溶剂、助悬剂、粘合剂、片剂崩解剂和包囊材料。口服用的片剂可含有适宜的赋形剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙，以及崩解剂例如玉米淀粉或海藻酸，和/或粘合剂例如明胶或阿拉伯胶，和润滑剂例如硬脂酸镁、硬脂酸和滑石粉。散剂中的载体是与细粉状活性成分混合的细粉固体。在片剂中，活性成分与具有必要的粘合特性的载体以适宜的比例混合，并压制成所需的形状和大小。和片剂优选含有约1-99wt％的本发明新颖化合物为活性成分。适宜的固体载体是碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖类、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡和可可脂。无菌液态制剂混悬剂、乳剂、糖浆剂和酏剂。可将活性成分溶解或混悬于可药用载体(例如无菌水、无菌有机溶剂或者它们的混合物)中。活性成分一般可溶于适宜的有机溶剂例如水性丙二醇中。将细粉碎的活性成分分散于淀粉或羧甲基纤维素钠水性溶液或适宜的油类中，可制得其它组合物。尽管合理的剂量会随着疾病种类、给药途径、患者的年龄和体重因素而变化，但供成年人静脉内施用的剂量通常为0.01-10mg/kg/小时，和优选0.1-1mg/kg/小时。实施例以下实施例旨在示例说明，不应视为是对本发明范围的限定。实施例1X型sPLA2对脂肪酸从分离的人脂蛋白中释放的影响经超速离心法从人血浆中分离LDL和HDL(Havel等，J.Clin.Invest.34，1345-1353(1955))。于37℃，在包含12.5mmol/LTris-HCL缓冲剂(pH8.0)、125mg/L牛血清清蛋白和1mmol/L氯化钙的溶液中，人IB、IIA和X型sPLA2(0.5-500nmol/L)与LDL和HDL(0.35-1mg/ml)反应。根据Dole的方法(Dole等，J.Biol.Chem.235，2595-2599(1960))，提取从脂蛋白中释放的脂肪酸。并按照已知方法(Hanasaki等，J.Biol.Chem.274，34203-34211(1999))，用9-蒽基重氮甲烷(annthryldiazomethane)标记。然后，采用荧光检测高压液相色谱(反向相柱，LichroCART125-4Superspher100RP-18柱mol/，Merck公司)中洗脱出的标记物(脂肪酸)，测定释放出的脂肪酸。为了测定每种sPLA2诱导的脂肪酸的剂量依赖性释放，将脂蛋白与0.5、5、50和500nmol/LX型sPLA2，和50以及500nmol/LIB和IIAsPLA2反应60分钟。此外，为了研究sPLA2诱导的脂肪酸的时间依赖释放，采用每种sPLA2的用量为50nmol/L，在加入sPLA24小时后，记录释放随时间的变化。在测定sPLA2抑制剂的抑制活性实验中，在加入sPLA2的同时，将indoxam(Yokota等，BiochimBiophActa1438，213-222(1999))、环加氧酶(COX)抑制剂(吲哚美辛)或5-脂加氧酶(5-LOX)抑制剂(AA-861；2，3，5-三甲基-6-(12-羟基-5，10-十二碳二炔基)-1，4-苯醌(Yoshimoto等，Biochem.Biophys.Acta.713，470-473(1982))到反应中(终浓度为10μmol/L)，。时间依赖释放实验表明，在IB、IIA和X型sPLA2中，只有X型sPLA2能使脂肪酸显著释放。加入X型sPLA2后，X型sPLA2诱导的脂肪酸从HDL中的释放在60分钟时达到稳态，而脂肪酸从LDL的释放呈时间依赖性增加达4小时。脂肪酸的剂量依赖性释放实验表明，低至5nmol/L的X型sPLA2可显著地使脂肪酸从LDL和HDL中以剂量依赖性方式释放，而高达500nmol/L的IB和IIA型sPLA2仅能使少量的脂肪酸释放(Fig.1)。X型sPLA2诱导的脂肪酸释放能被sPLA2抑制剂(indoxam)抑制，但不受COX抑制剂(吲哚美辛)或5-LOX抑制剂(AA-861)的影响(Fig.2)。实施例2X型sPLA2脂蛋白磷脂成分的影响经超速离心法从人血浆中分离LDL和HDL(Havel等，J.Clin.Invest.34，1345-1353(1955))。于37℃，在包含12.5mmol/LTris-HCL缓冲剂(pH8.0)、125mg/L牛血清清蛋白和1mmol/L氯化钙的溶液中，人IB、IIA和X型sPLA2(50mol/L)和CuSO4(20μmol/L)与LDL和HDL(1mg/ml)反应3、6和24小时。然后，用HPLC测定LDL和HDL中磷脂成分的变化。根据已知的方法(Bligh等，Can.J.Biochem.Physiol.37，911-917(1959))，从10μgLDL样品和15μgHDL样品中提取磷脂。接着，将磷脂加载到正相HPLC柱(Ultraspheresilica，4.6×250mm和4.6×45mm，Beckm公司)中，对洗脱出的磷脂酰胆碱(PC)和溶血卵磷脂(lyso-PC)进行分级，按照已知方法测定磷的含量(Saiga等，Biochim.Biophys.1530，67-76(2001))。结果表明，经CuSO4和X型sPLA2处理后，LDL中的PC含量随时间而降低(如Fig.3A中的3、6、和24小时时间点所示)，而lyso-PC含量相应地随PC的降低而升高(Fig.3B)。用CuSO4处理能引起HDL中PC含量的降低以及lyso-PC含量随时间的升高，对LDL的作用也如此。用X型sPLA2处理能使HDL中的PC更快速地分解(快于在LDL中的情况)，经3小时的处理可使含量降至原水平的10％，而lyso-PC的含量相应地随PC降低而升高，并且其生成量是HDL经CuSO4处理3小时后生成量的6倍。另一方面，用IB和IIA型sPLA2处理对磷脂成分没有显著的影响(Fig.3A、B)。实施例3X型sPLA2对分离的人脂蛋白负电荷的影响经超速离心法从人血浆中分离LDL和HDL(Havel等，J.Clin.Invest.34，1345-1353(1955))。于37℃下，在包含12.5mmol/LTris-HCL缓冲剂(pH8.0)、125mg/L牛血清清蛋白和1mmol/L氯化钙的溶液中，人IB、IIA和X型sPLA2(50nmol/L)和CuSO4(20μmol/L)与LDL和HDL(1mg/ml)反应3、6和24小时。然后，取1μgLDL样品和2μgHDL样品，在琼脂糖凝胶上进行电泳(HelenaLaboratories，TITANGELLipoprotein；90V，25分钟)。电泳后，凝胶于50-60℃干燥约1小时，用6ml染色剂溶液(HelenaLaboratories，FatRed7B琼脂糖溶液)染色约3分钟，然后用25ml脱色溶液(70％甲醇)脱色。在测定sPLA2抑制剂(indoxam)活性的实验中，在加入sPLA2的同时，将COX抑制剂(吲哚美辛)或5-LOX抑制剂(AA-861)加到反应中，终浓度为10μmol/L。结果如Fig.4所示。与未经处理的脂质(lipo)相比(HDL数据未给出)，用CuSO4处理的LDL和HDL均随着时间而明显向阳极迁移。在用人sPLA2处理的试验中，只有用X型sPLA2处理的样品于用CuSO4处理的结果相似，即产生了时间依赖性的向阳极迁移，这表明X型sPLA2诱导的脂肪酸释放使磷脂成分发生变化(即使每种脂蛋白的负电荷增加)。这种由X型sPLA2诱导的脂蛋白变性能被sPLA2抑制剂(indoxam)抑制，但不受COX抑制剂(吲哚美辛)或5-LOX抑制剂(AA-861)的影响。实施例4X型sPLA2对阿朴蛋白的变性活性经超速离心法从人血浆中分离LDL和HDL(Havel等，J.Clin.Invest.34，1345-1353(1955))。于37℃下，在包含12.5mmol/LTris-HCL缓冲剂(pH8.0)、125mg/L牛血清清蛋白和1mmol/L氯化钙的溶液中，人IB、IIA和X型sPLA2(50nmol/L)和CuSO4(20μmol/L)与LDL和HDL(1mg/ml)反应3、6和24小时。用丙酮∶乙醇(1∶1)溶液去脂之后，将反应混合物溶于电泳缓冲液中(10mmol/LTris-HCL缓冲剂(pH6.8)、2％SDS、30％甘油、0.1％2ME、0.1％BPB)，用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析。在电泳中，将5μgLDL(apoB-100)和5μgHDL(apoA-1)分别加载于4％凝胶和4-20％梯度凝胶上。结果表明，经CuSO4处理后，起始位置上的apoA-1谱带会消失，进而因蛋白质分子量的不同发生迁移，并且向高分子量一侧移动(即谱带类似于聚集形式)，而LDL中的apoB-100谱带也向高分子量一侧移动。另一方面，在处理24小时后，一部分经X型sPLA2处理的apoB-100和apoA-1也向高分子量一侧移动，但不如经CuSO4处理的那样显著移动。与未经处理的相比，用IB和IIA型sPLA2处理的样品没有变化。实施例5X型sPLA2对脂蛋白中脂质过氧化作用的影响A.对硫代巴比妥酸反应物形成的影响经超速离心法从人血浆中分离LDL和HDL(Havel等，J.Clin.Invest.34，1345-1353(1955))。于37℃下，在包含12.5mmol/LTris-HCL缓冲剂(pH8.0)、125mg/L牛血清清蛋白和1mmol/L氯化钙的溶液中，人IB、IIA和X型sPLA2(50nmol/L)和CuSO4(20μmol/L)与LDL和HDL(1mg/ml)反应3、6和24小时。然后，根据已知方法(Nagano等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.88，6457-6461，(1991))，将500μl的20％TCA和500μl硫代巴比妥酸(3.35mg/ml)加入含10μgLDL和10μgHDL200μl生理盐水配制品中，混合物于95℃沸腾60分钟。冷却后，用正丁醇萃取硫代巴比妥酸反应物(TBARS，即脂质过氧化作用的指示物)，测定其上清液中的荧光(激发波长515nm，荧光波长550nm)。参考标准曲线(四乙氧基丙烷为标准品)，计算TBARS的量。结果如Fig.5A和B所示。可观察到经CuSO4处理的LDL(Fig.5A)和HDL(Fig5B)均在6小时时出现显著增加的TBARS峰。另一方面，经所有sPLA2(包括X型sPLA2)处理的样品没有观察到TBARS增加。B.对共轭二烯形成的影响经超速离心法从人血浆中分离LDL和HDL(Havel等，J.Clin.Invest.34，13451353(1955))。于37℃下，在包含12.5mmol/LTris-HCL缓冲剂(pH8.0)、125mg/L牛血清清蛋白和1mmol/L氯化钙的溶液中，人IB、IIA和X型sPLA2(50nmol/L)和CuSO4(20μmol/L)与LDL和HDL(0.2mg/ml)反应0-6小时。然后，按照已知方法(Esterbauer等，FreeRad；Res.Comms.6，67-75(1989))，通过检测234nm吸收度变化，分析共轭二烯(即脂质过氧化作用的指示物)的形成。结果表明，经CuSO4处理后，LDL和HDL在234nm的吸光度以时间依赖方式增加90分钟，然后逐渐降低。另一方面，所有sPLA2(包括X型sPLA2)处理的样品在234nm的吸光度没有变化。上述结果证明，X型sPLA2诱导的脂蛋白变性(释放脂肪酸、改变磷脂成分、增加负电荷、聚合阿朴蛋白)与CuSO4氧化处理所致的变性相似，但是与脂蛋白的氧化无关。实施例6X型sPLA2对小鼠腹膜巨噬细胞摄取变性LDL的影响C57BL/6J小鼠(雄性，8周龄)腹膜注射4％巯基醋酸酯溶液(2ml)，4天后从腹膜液中采集细胞。将细胞置于室式载玻片(chamberslide)上，在无血清培养液(BIOWHITTAKERX-VIVO15)中保温2小时。然后，洗涤除去非粘附细胞，富集腹膜巨噬细胞。向细胞中加入0.2mg/mlLDL(Sigma公司)和50nmol/LX型PLA2，于无血清培养液中保温48小时。将细胞用4％甲醛固定20分钟，并用油红O染色溶液对脂质染色，从而确定被巨噬细胞摄取的LDL。在测定sPLA2抑制剂(indoxam)、COX抑制剂(吲哚美辛)或5-LOX抑制剂(AA-861)抑制活性的试验中，在加入sPLA2的同时，将药物加入反应中，终浓度为10μmol/L。结果表明，在经X型sPLA2处理的细胞中检测到油红O染色剂的正信号，这证明LDL被摄取到细胞中，而未经处理的细胞中未检测到正信号。这说明X型sPLA2能增加LDL被巨噬细胞摄取，并且有可能促进动脉硬化病变中发育的泡沫细胞的形成。X型sPLA2对细胞摄取LDL的影响能被同时加入的sPLA2抑制剂(indoxam)所抑制，但不受COX抑制剂(吲哚美辛)或5-LOX抑制剂(NDGA)的影响。实施例7采用抗X型sPLA2多克隆抗体对小鼠动脉硬化病变的免疫组织化学分析阿朴脂蛋白E基因缺陷小鼠，C57BL/6J-Apoetm1Unc小鼠(雌性，8周龄)(见JournalofClinicalInvestigation，94卷，937-945页(1994)的描述)购自JackscLab.，用作动脉硬化动物模型。采用C57BL/6小鼠(雄性，8周龄)作为对照。购买后，给动物饲以高脂肪饮食(添加有15.8％、1.25％胆固醇和0.5％胆酸钠的常规小丸，CA-1)。对生长至12、17、和22周龄的每只小鼠进行灌注排出血液，并用4％水性聚甲醛对血管进行化学固定，解剖除去近心升主动脉。将组织浸入上述固定液中过夜，用磷酸盐缓冲液洗涤，通常用水性乙醇略加脱水，固定在石蜡中。用显微切片机制备厚约5μm的石蜡切片，然后固定于载片上，制备供染色的病理标本。在免疫组织化学分析中，将每一样品载玻片浸于二甲苯中以除去石蜡，与包含0.3％H2O2反应以除去内源性过氧化酶，然后用5％正常山羊血清处理20分钟。接着，将样品载玻片浸于包含0.1％牛血清清蛋白的PBS中30分钟，并于4℃与抗人X型sPLA2兔多克隆抗体(6μg/mL)反应14小时(参见TheJournalBiologicalChemistry，274卷，No.48，34203-34211页(1999)。然后，载玻片用包含0.1％聚氧乙烯(20)单月桂酸山梨醇酐酯(Tween20；WakoPureChemicalIndustries公司，Osaka)的PBS充分洗涤，与生物素化山羊抗-兔IgG抗体反应30分钟，并用包含抗生物素蛋白-生物素(biothin)复合试剂的过氧化酶(VectorLaboratories)处理，然后放置30分钟。用PBS洗涤后，在包含200μg二氨基联苯胺和0.006％H2O2的50mmol/LTris-HCl(pH7.6)缓冲液中反应10分钟，所形成的过氧化物酶活性显色增强了周围的目标X型sPLA2分子，这样可看见X型sPLA2在组织样品中的区域。该分析法将检测X型sPLA2分子的正信号，即赤褐色二氨基联苯胺色沉。在X型sPLA2信号的吸收-中和实验中，在加到载玻片上之前，抗体先与纯化的小鼠X型sPLA2蛋白质(300μgmL)反应2小时，然后用抗体和蛋白反应处理载玻片。组织样品也用0.4％的苏木精溶液处理复染(counter-stain)细胞核。结果表明，仅在泡沫细胞群(即动脉硬化的最初病征信号)中，才能局部地检测到从阿朴脂蛋白E基因缺陷小鼠(12、17和22周龄)中分离的血管中X型sPLA2的正信号。另一方面，在正常小鼠的对照血管组织中，没检测到动脉生成的最初迹象，也没有检测X型sPLA2的正信号。此外，阿朴脂蛋白E基因-缺陷小鼠经小鼠X型sPLA2蛋白质吸收-中和处理后，在动脉硬化病变检测到的信号消失，这提示正反应是X型sPLA2分子特异性的。在由非免疫兔制备的IgG中没有检测到正信号。上述结果表明，在小鼠动脉硬化血管病变模型的泡沫细胞中，X型sPLA2分子以高水平被显著表达。实施例8X型sPLA2-变性LDL诱导的巨噬细胞中胆固醇酯的增加于37℃，在包含12.5mmol/LTris-HCL缓冲剂(pH8.0)、125mg/L牛血清清蛋白和1mmol/L氯化钙的溶液中，X型sPLA2(50nmol/L)与来源于人血浆的LDL反应24小时，制备X型sPLA2变性的LDL。如下制备腹膜巨噬细胞经腹膜注射给予C57BL/6J小鼠(雄性，8周)3％巯基醋酸酯溶液(2ml)，4天后从腹膜液采集细胞置于24孔平板中，在无血清培养基(BIOWHITTAKERX-VIVO15)保温2小时，然后经洗涤除去非粘附细胞。细胞中加入0.2mg/mlLDL，在无血清培养液中保温48小时，并置于己烷和异丙醇(3∶2)的混合物中30分钟，萃取沉积在巨噬细胞中的胆固醇。用异丙醇代替溶剂后，于37℃，在0.1M磷酸盐缓冲液中，将萃取出的胆固醇与1单位/ml胆固醇氧化酶(Roche公司)、10单位/ml过氧化物酶(BoehringerMannheim)、40μg/ml对-羟苯乙酸(Sigma公司)和1单位/ml胆甾醇酯酶(TOYOBO)反应30分钟。根据已知方法(Gamble等，J.Lipid.Res.19，10(1070(1978)，通过测量溶液中的荧光(激发波长305nm，荧光波长420nm)，测定总胆固醇(包括游离胆固醇和胆固醇酯)。此外，不含胆甾醇酯酶的反应混合物于37℃反应30分钟，仅测量游离胆固醇。参考标准曲线(以胆固醇和胆固醇油酸酯为标准品)，计算总胆固醇和游离胆固醇的量，并由总胆固醇量减去游离胆固醇量，得到胆固醇酯量。结果表明，与未经处理的LDL相比，X型sPLA2处理的LDL显著增加了胆固醇酯的摄取量，这样，经酶改性的LDL有可能促进动脉硬化病变发育的泡沫细胞的形成。实施例9X型sPLA2诱导变性对HDL提取胆固醇的影响于37℃，在包含12.5mmol/LTris-HCL缓冲剂(pH8.0)、125mg/L牛血清清蛋白和1mmol/L氯化钙的溶液中，X型sPLA2(50nmol/L)与来源于人血浆的HDL反应24小时，制备X型sPLA2变性的HDL。采集ICR小鼠(雌性，12周龄)的腹膜液冲积物，制备腹膜巨噬细胞，并置于24孔平板中，于含10％胎牛血清的培养基(GIBCOBRLDulbecco改进型Eagle培养基)中保温2小时，然后经洗涤除去非粘附细胞。细胞中加入50μg/乙酰化的LDL(BiomedicalTechnology公司)，并保温24小时，制备泡沫状巨噬细胞。除去培养基中过量的乙酰化LDL后，向培养基中加入100μg/mlHDL，然后将培养基于血清中保温24小时。萃取并测定胞内胆固醇，然后测定HDL使细胞胆固醇从泡沫细胞中流出的能力。结果表明，与从未变性HDL处理的细胞的流出相比，胞内胆固醇从X型sPLA2变性HDL处理的细胞中的流出显著降低。这证明酶对HDL的变性作用有可能抑制HDL所致的胆固醇从动脉硬化病变发育的泡沫细胞中的流出(Fig.6)。实施例10V型sPLA2对脂肪酸从分离的人脂蛋白中释放的影响A.制备表达人V型sPLA2的细胞和从培养物上清液中纯化酶采用来自CLONTECH的humanheartmarathonreadycDNA为模板，经PCR获得编码人V型sPLA2。PCR中采用了以下启动子hGV-S5′-caaagaacgcgtccaccatgaaaggcctcctcccactggct-3′(SEQIDNO1)hGV-AS5′-ctcgctgcggccgcctaggagcagaggatgttgggaaa-3′(SEQIDNO2)hGV-S含有Kozak序列和限制酶MluI的识别位点。hGV-AS含有NotI的识别位点。PCR进行35个循环，于94℃用时0.5分钟、于55℃用时0.5分钟和于72℃用时2.5分钟。用MluI和NotI消化PCR扩增片段，接着插入改性的pBluescript-SK(-)中。用测序酶Ver.2.0(USB)确认碱基序列。然后，以人V型sPLA2质粒DNA为模板，采用hGV-S启动子和GV-H6AS启动子(5′-ctcgctgcggccgcctaatggtgatggtgatgatgggagcagaggatgttgggaaag-3′)(SEQIDNO3)，经PCR构建V型sPLA2-HisTag(其中6个His残基附着于羧基端)。PCR扩增片段用SmaI和NotI消化，并用V型sPLA2质粒DNA相应的位点代替。待确认区域中的碱基序列刚被PCR扩增后，将cDNA下游插入哺乳动物细胞用表达载体的SR-α启动子中。根据制造商提供的说明书，用LipofectAMINEregent(GibcoBRL)，将表达载体转染到CHO宿主细胞中，制得稳定表达人V型sPLA2的CHO细胞。细胞在含10％胎牛血清的α-MEM培养基中保温成融合状(confluentphase)，收集培养物上清液得到供纯化的物质。从培养物上清液中，用镍螯合物HiTrap螯合HP柱(AmershamPharmaciaBiotech公司)将V型sPLA2纯化成均态(即以单一谱带在SDS-PAGE电泳中迁移，分子量约14kDa)，供以下的脂蛋白变性分析用。B.V型sPLA2对脂肪酸从分离的人脂蛋白中释放的影响经超速离心法从人血浆中分离LDL和HDL(Havel等，J.Clin.Invest.34，1345-1353(1955))。于37℃，在包含12.5mmol/LTris-HCL缓冲剂(pH8.0)、125mg/L牛血清清蛋白和1mmol/L氯化钙的溶液中，人IIA和V型sPLA2与LDL和HDL(1mg/ml)反应，并按照Dole的方法(Dole等，J.Biol.Chem.235，2595-2599(1960))，萃取释放出的脂肪酸。按已知方法(Hanasaki等，J.Biol.Chem.274，34203-342111(1999))，用9-蒽基重氮甲烷标记脂肪酸，然后通过荧光检测高压液相色谱(反向相柱，LichroCART125-4Superspher100RP-18柱，Merck公司)中洗脱出的标记物，测定脂肪酸。为了研究IIA和V型sPLA2诱导的脂肪酸的时间依赖性释放，每种sPLA2的用量为50nmol/L，在加入sPLA2的3、6和24小时后，记录释放随时间的变化。在测定sPLA2抑制剂(indoxam)、COX抑制剂(吲哚美辛)抑制活性的实验中，在加入sPLA2的同时，将这些药物加到反应中，终浓度为10μmol/L。结果表明，V型sPLA2使脂肪酸非常显著地释放，在加入V型sPLA23小时后，脂肪酸从HDL中的释放达到稳态，并且持续24小时。另一方面，V型sPLA2诱导的脂肪酸从LDL释放随时间持续增加24小时，而IIA型sPLA2诱导的脂肪酸释放仅增加少许(Fig.7)。V型sPLA2诱导的脂肪酸释放中的亚油酸释放可被sPLA2抑制剂(indoxam)抑制，但它不受COX抑制剂(吲哚美辛)的影响(Fig.8)。实施例11V型sPLA2对脂蛋白中磷脂成分的影响经超速离心法从人血浆中分离LDL和HDL(Havel等，J.Clin.Invest.34，1345-1353(1955))。于37℃，在包含12.5mmol/LTris-HCL缓冲剂(pH8.0)、125mg/L牛血清清蛋白和1mmol/L氯化钙的溶液中，人IIA和V型sPLA2(50nmol/L)与LDL和HDL(1mg/ml)反应3、6和24小时，然后用HPLC测定LDL和HDL中磷脂成分的变化。根据Bligh等的方法(Bligh等，Can.J.Biochem.Physiol.37，911-917(1959))，从10μgLDL样品和15μgHDL样品中提取磷脂。接着，将磷脂加载于正相HPLC柱(Ultraspheresilica，4.6×250mm和4.6×45mm，Beckm公司)中，对洗脱出的磷脂酰胆碱(PC)和溶血卵磷脂(lyso-PC)进行分级，按照已知方法测定磷的含量(Saiga等，Biochim.Biophys.Acta1530，67-76(2001))。结果表明，LDL经V型sPLA2处理后，PC的含量随时间而降低(如3、6和24小时所示)，lyso-PC的含量随着PC的降低而增加(Fig.9A和B)。经V型sPLA2处理的HDL使PC分解得更快，3小时的处理使PC含量约降至初始水平的30％，而lyso-PC含量也随着PC的降低而。另一方面，IIA型sPLA2处理对磷脂成分没有显著的影响。实施例12V型sPLA2对分离的人脂蛋白的变性活性经超速离心法从人血浆中分离LDL和HDL(Havel等，J.Clin.Invest.34，1345-1353(1955))。于37℃，在包含12.5mmol/LTris-HCL缓冲剂(pH8.0)、125mg/L牛血清清蛋白和1mmol/L氯化钙的溶液中，人IIA和V型sPLA2(50nmol/L)与LDL和HDL(1mg/ml)反应3、6和24小时，然后取1μgLDL样品和2μgHDL样品，在琼脂糖凝胶上进行电泳(HelenaLaboratories，TITANGELLipoprotein；90V，25分钟)。电泳后，凝胶于50-60℃干燥约1小时，用6ml染色剂溶液(Helena实验室，FatRed7B琼脂糖溶液)染色约3分钟，然后用25ml脱色溶液(70％甲醇)脱色。在测定sPLA2抑制剂(indoxam)、COX抑制剂(吲哚美辛)抑制活性的实验中，在加入sPLA2的同时，将这些药物加到反应中，终浓度为10μmol/L。结果表明，与未经处理的样品相比，经V型sPLA2处理的LDL和HDL均随着时间而明显向阳极迁移。在象脂肪酸释放试验一样加入3小时后，HDL向阳极的迁移达到稳态并持续24小时。LDL向阳极的迁移随时间持续增加24小时。如上所述，V型sPLA2诱导的脂肪酸释放显示每种脂蛋白的负电荷发生了变化(变性)(Fig.10)。经人IIA型sPLA2处理的脂蛋白均没有向阳极迁移。V型sPLA2诱导的脂蛋白变性可被sPLA2抑制剂(indoxam)抑制，但它不受COX抑制剂的影响。实施例13V型sPLA2对脂蛋白的过氧化作用的影响(对硫代巴比妥酸反应物形成的有影响)经超速离心法从人血浆中分离LDL和HDL(Havel等，J.Clin.Invest.34，1345-1353(1955))。于37℃，在包含12.5mmol/LTris-HCL缓冲剂(pH8.0)、125mg/L牛血清清蛋白和1mmol/L氯化钙的溶液中，人IIA和V型sPLA2(50nmol/L)与LDL和HDL(1mg/ml)分别反应24和3小时，将500μl的20％TCA和500μl硫代巴比妥酸(3.35mg/ml)加入含10μgLDL和10μgHDL200μl的生理盐水配制品中，按照Nagano等的方法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA88，6457-6461，(1991))，于95℃沸腾60分钟。冷却后，用正丁醇(2ml)萃取硫代巴比妥酸反应物(TBARS，即脂质过氧化作用的指示物)，测定其上清液中的荧光(激发波长515nm，荧光激发波长550nm)。参考标准曲线(四乙氧基丙烷为标准品)，计算TBARS的量。结果表明，所有经IIA和V型sPLA2处理的样品中没有观察到TBARS含量增加。实施例14V型sPLA2对小鼠腹膜巨噬细胞摄取变性LDL的影响如下制备腹膜巨噬细胞经腹膜注射给予C57BL/6J小鼠(雄性，8周)2ml4％巯基醋酸酯溶液，4天后从采集腹壁细胞，置于室式载玻片上，在无血清培养基(BIOWHITTAKERX-VIVO15)中保温2小时，然后经洗涤除去非粘附细胞。向细胞中加入0.2mg/mlLDL(Sigma公司)和50nmol/LIIA或V型sPLA2，培养物于无血清培养液中保温48小时。如下确定LDL被摄入巨噬细胞中细胞用4％甲醛固定20分钟，然后用油红油红O染色溶液对脂质染色。结果表明，在经V型sPLA2处理的细胞中检测到油红O染色剂的正信号，这证明LDL被摄取到细胞中，而在IIA型sPLA2处理的细胞以及未经处理的细胞中未检测到正信号。这说明V型sPLA2能增加巨噬细胞对LDL的摄取，并且有可能促进动脉硬化病变中发育的泡沫细胞的形成。以下参考实施例证明了本发明优选化合物抑制人V或X型sPLA2的活性。参考实施例A.制备表达人或X型sPLA2的细胞和制备其培养物上清液将编码V或X型sPLA2的cDNA序列(Chen等，J.Biol.Chem，1994，269，2365-2368；和Cupillard等，J.Biol.Chem，1997，272，15745-15752)正向下游插入哺乳动物用细胞表达载体的启动子、pSVLSV40晚期启动子表达载体(AmershamPharmaciaBiotech公司)中。根据制造商提供说明书，用LipofectAMINEregent(GibcoBRL)，将表达载体转染到CHO宿主细胞中，制得稳定表达人V或X型sPLA2的CHO细胞。细胞在包含10％胎牛血清的α-MEM培养基中保温3天，其培养物上清液供酶活性测定。B.抑制活性分析以下显色分析用于鉴定并评价V或X型sPLA2抑制剂。为了使用96孔微量滴定板进行大容量的筛选，对分析法作了调整。有关该分析法的一般方法可参见“AnalysisofHumanSynovialFluidPhospholipaseA2onShortChainPhosphatidyicholine-MixedMicellesDevelopmentofaSpectrophotometricAssaySuitableforaMicrotiterplateReader”，LaureJ.，J.Reynolds，LoriL.Hughe和EdwardADennis，分析生物化学，204，190-197页，1992。按照平板的预定排列加入待试化合物(或溶剂空白)，在TritonX-100(0.3mM)、在Tris缓冲液(25mM，pH7.3)中的5，5′-二硫代双-(2-硝基苯甲酸)(125μM)、CaCl2(10mM)、KCl(100mM)和牛血清清蛋白的存在下，二庚硫醇PC(1mM)与人V或X型sPLA2反应。记录405nm处的吸光度，供抑制活性评价。与人V型sPLA2的反应在40μl/孔中40℃进行45分钟，与人型sPLA2的反应在15μl/孔中40℃进行30分钟。将表1-4中待试化合物的log浓度对抑制值(10-90％抑制)作图，测地IC50值。V型sPLA2的抑制试验结果见表5，X型sPLA2的抑制试验结果见表6。表1.V型sPLA2抑制剂表2.V型sPLA2抑制剂(续上)，或表3.V型sPLA2抑制剂表4.V型sPLA2抑制剂(续上)，或表5.V型sPLA2抑制试验结果表6.V型sPLA2抑制试验结果制剂实施例以下制剂实施例1-8旨在示例说明，不应视为是对本发明范围范围的限定。术语“活性成分”是指能抑制V和/或X型sPLA2的化合物及其前药、可药用盐或溶剂化物。制剂实施例1采用以下成分制备硬胶囊剂剂量(mg/胶囊)活性成分250淀粉，干燥200硬脂酸镁10总计460mg制剂实施例2采用以下成分制备片剂剂量(mg/片)活性成分250纤维素，微晶400二氧化硅，热解10硬脂酸5总计665mg混合上述成分并压制成片重为665mg的片剂。制剂实施例3制备包含以下成分的气雾剂溶液重量活性成分0.25乙醇25.75抛射剂22(氯二氟甲烷)74.00总计100.00将活性成分与乙醇混合，将加到一部分抛射剂22中的混合物冷却到-30℃，并移至充料装置中。然后将所需量加到不锈钢容器中，并用余量抛射剂稀释。然后将阀装置装到容器上。制剂实施例4如下制备每片包含60mg活性成分的片剂活性成分60mg淀粉45mg微晶纤维素35mg聚乙烯吡咯烷酮(10％水溶液)4mg羧甲基淀粉钠4.5mg硬脂酸镁0.5mg滑石1mg总计150mg活性成分、淀粉和纤维素均过No.45目美国筛，然后充分混合。包含聚乙烯吡咯烷酮水溶液与所得粉末混合，然后混合物通过No.14目美国筛。所得颗粒于50℃干燥并通过No.18目美国筛。羧甲基淀粉钠硬脂酸镁和滑石预先通过No.60目美国筛，然后加至颗粒中，混合后在压片机中压片，得到片重为150mg的片剂。制剂实施例5如下制备包含80mg活性成分的胶囊剂。活性成分80mg淀粉59mg微晶纤维素59mg硬脂酸镁2mg总计200mg混合活性成分、纤维素、硬脂酸盐，通过No.45目美国筛，并以200mg的量填充到硬胶囊中。制剂实施例6如下制备每颗包含225mg活性成分栓剂活性成分225mg饱和脂肪酸甘油酯2000mg总计2225mg活性成分通过No.60目美国筛，并混悬于饱和脂肪酸甘油酯(预先用最小的必要热量熔化)中。然后将混合物倾入标示容量2g的栓剂模中并冷却。制剂实施例7如下制备包含50mg活性成分的混悬剂活性成分50mg羧甲基纤维素钠50mg糖浆1.25ml苯甲酸溶液0.10ml调味剂适量着色剂适量净化水加至5ml活性成分通过No.45美国筛，并与羧甲基纤维素钠和糖浆混合成光滑糊状。搅拌下，加入一部分水稀释苯甲酸溶液、调味剂和着色剂。然后加入足量水至需要量。制剂实施例8如下制备静脉内制剂活性成分100mg等渗盐水1000ml含有上述成分的溶液通常以1ml/分钟的速度经静脉内给予受试者。工业实用性如上所述，本发明人通过证实了V和X型sPLA2能使血清脂蛋白变性，并且这些酶在动脉硬化病变中表达，从而首次发现V和X型sPLA2是造成动脉硬化发病和发展的原因。本发明是基于上述发现完成的。本发明人研究了sPLA2抑制剂对V和X型sPLA2诱导的脂蛋白变性的抑制活性，结果表明这类化合物能用于治疗基于动脉硬化的缺血性疾病。更具体地说，本发明可用于通过抑制V和/或X型sPLA2诱导的血清脂蛋白变性来治疗和预防基于动脉硬化的局部缺血疾病的药物。序列表<110>盐野义制药株式会社<120>用于治疗动脉硬化的药物组合物<130>663124<140><141><150>JP2001-078569<151>2001-03-19<150>JP2001-401289<151>2001-12-28<160>3<170>专利版本2.1<210>1<211>41<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列说明启动子<400>1caaagaacgcgtccaccatgaaaggcctcctcccactggct41<210>2<211>38<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列说明启动子<400>2ctcgctgcggccgcctaggagcagaggatgttgggaaa38<210>3<211>57<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列说明启动子<400>3ctcgctgcggccgcctaatggtgatggtgatgatgggagcagaggatgttgggaaag5721权利要求1.用于抑制血清脂蛋白变性的药物组合物，其中包含V和/或X型sPLA2抑制性化合物为活性成分。2.用于治疗或预防动脉硬化的药物组合物，其中包含V和/或X型sPLA2抑制性化合物为活性成分。3.用于治疗或预防以动脉硬化为基础的局部缺血疾病的药物组合物，其中包含V和/或X型sPLA2抑制性化合物为活性成分。4.根据权利要求1-3之一的药物组合物，其中V和/或X型sPLA2抑制性化合物如通式(I)所示其中环A为或其中R1和R2之一为式-(L1)-(酸基)，其中L1是与酸基连接的连接基，和连接基的长度为1-5，和另一个为氢原子、非干扰性取代基，或-(L1)-(酸基)，其中L1的定义如上；和每个R3和R4独立地为氢原子、非干扰性取代基、碳环、非干扰性取代基取代的碳环、杂环、非干扰性取代基取代的杂环；和-B-为(e)-(h)或其中R5是选自以下组的取代基(j)包括C1-C20烷基、C2-C20链烯基、C2-C20链炔基、碳环或杂环；(k)包括被一种或更多非干扰性取代基取代的独立选择的上述(j)；或式-(L2)-，L2是1-18个原子的二价连接基，它选自氢原子、氮原子、碳原子、氧原子和硫原子，和R8选自j)和(k)；R6为氢原子、卤素、C1-C3烷基、C3-C4环烷基、C3-C4环烯烃、C1-C3烷氧基或C1-C3烷基硫基；R7为氢原子或或非干扰性取代基；RA为式或其中每个R9和R10独立地为氢原子、C1-C3烷基或卤素；每一X和Y独立地为原子或硫原子；和Z是-NH2或-NHNH；RB是-CONH2或-CONHNH2；和环D是环己烯环或苯环；条件是当-B-为(e)或(f)时，环A是环(b)、(c)或(d)；或其前药或可药用盐或溶剂化物。5.根据权利要求4的药物组合物，其中V和/或X型sPLA2抑制性化合物如通式(I)所示，其中R1是氢原子或式-(L3)-R11，其中L3是-OCH2-、-SCH2-、-NH-CH2-、-CH2-CH2-、-O-CH(CH3)-或-O-CH-(CH2CH2C6C5)-；和R11是-COOH、-CONHSO2CH、-SO3H或-P(O)(OH)2；和R2是氢原子或式-(L4)-R12，其中L4如下式所示或其中每个R13和R14独立地为氢原子、C1-C10烷基、C1-C10芳烷基、羧基、烷氧基羰基，或卤素；和R12为-COOH、-SO3H或-P(O)(OH)2；条件是R1和R2不同时为氢原子；或其前药或可药用盐或溶剂化物。6.根据权利要求4或5的药物组合物，其中V和/或X型sPLA2抑制性化合物如通式(I)所示，其中R3为氢原子、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、芳香基或杂环，和R4为氢原子或卤素；或其前药或可药用盐或溶剂化物。7.根据权利要求4-6之一的药物组合物，其中V和/或X型sPLA2抑制性化合物如通式(I)所示，其中R5为-(CH2)1-6-R15，其中R15为式或其中每一b、d、f、h、j、m和o独立地为0-2的整数；每一R16和R17独立地选自卤素、C1-C10烷基、C1-C10烷氧基、C1-C10烷基硫基、芳氧基、苯基和C1-C10卤烷基；α是氧原子或硫原子；β是-CH2-或-(CH2)2-；γ是氧原子或硫原子；c、i和p为0-5的整数；e为0-7的整数；g为0-4的整数；和每一k和n独立地为0-3的整数；或其前药或可药用盐或溶剂化物。8.根据权利要求7的药物组合物，其中V和/或X型sPLA2抑制性化合物如通式(I)所示，其中R5为-CH2-R18，其中R18为式或其中β为-CH2-或-(CH2)2-；R19为氢原子、C1-C3烷基或卤素；和E为单键、-CH2-或-O-；或其前药或可药用盐或溶剂化物。9.根据权利要求4-8之一的药物组合物，其中V和/或X型sPLA2抑制性化合物如通式(I)所示，其中R1是-OCH2COH；或其前药或可药用盐或溶剂化物。10.根据权利要求4-9之一的药物组合物，其中V和/或X型sPLA2抑制性化合物如通式(I)所示，其中R2为氢原子；或其前药或可药用盐或溶剂化物。11.根据权利要求4-10之一的药物组合物，其中V和/或X型sPLA2抑制性化合物如通式(I)所示，其中R6为C1-C3烷基；或其前药或可药用盐或溶剂化物。12.根据权利要求4-11之一的药物组合物，其中V和/或X型sPLA2抑制性化合物如通式(I)所示，其中RA为-CH2CONH2或-COCONH2；或其前药或可药用盐或溶剂化物。13.根据权利要求1-3之一的药物组合物，其中V和/或X型sPLA2抑制性化合物如下式(I)所示或或其前药或可药用盐或溶剂化物。14.根据权利要求1-3之一的药物组合物，其中V型sPLA2抑制性化合物如下式(I)所示或或其前药或可药用盐或溶剂化物。15.根据权利要求1-3之一的药物组合物，其中X型sPLA2抑制性化合物如下式(I)所示或或其前药或可药用盐或溶剂化物。16.V和/或X型sPLA2抑制性化合物在制备用于治疗或预防以动脉硬化为基础的局部缺血疾病的药物中的应用。17.根据权利要求16的应用，其中V和/或X型sPLA2抑制性化合物是如权利要求4-15之一定义的化合物。18.治疗或预防哺乳动物包括人动脉硬化或以动脉硬化为基础的局部缺血疾病的方法，包括将治疗有效量的V和/或X型sPLA2抑制性化合物给予所述哺乳动物以减轻症状。19.根据权利要求18的方法，其中V和/或X型sPLA2抑制性化合物是如权利要求4-15之一定义的化合物。全文摘要本发明公开了用于治疗或预防动脉硬化的新颖药物组合物。本发明的特征在于采用V和/或X型sPLA文档编号C07D209/22GK1553814SQ0280955公开日2004年12月8日申请日期2002年3月19日优先权日2001年3月19日发明者杂贺昭彦,小野隆,山田胜利,花崎浩二,二,利申请人:盐野义制药株式会社