专利名称：怀山药提取物怀山药皂甙的提取方法
技术领域：
本发明涉及中草药材怀山药提取物怀山药皂甙的提取方法，属中草药化学提炼制备技术领域。
背景技术：
药用怀山药系薯蓣科植物薯蓣，药用部分为根茎，主要化学成分有甘露聚糖、尿囊素、多巴胺、山药碱、植酸、槭素II和16种氨基酸，还含有淀粉、鞣质、粘液汁、糖蛋白、多酚氧化酶、胆甾醇、麦角甾醇、β-谷甾醇、油菜甾醇和皂甙类等成分，此外尚含碘、磷、钙等多种无机元素。
怀山药提取物中的怀山药皂甙，具有α-糖苷酶抑制活性，同时有己糖激酶激活活性和醛糖还原酶抑制活性，故可用作降血糖药物治疗糖尿病及其并发症。
发明内容
本发明的目的是提取一种由原药材怀药提取物怀山药皂甙的方法。
本发明的目的是提供一种既具有α-糖苷酶抑制活性，又具有醛糖还原酶抑制活性和己糖激酶激活活性的怀山药提取物，其有效部分即为具有良好降血糖活性的水溶性怀山药皂甙。
本发明的目的是通过以下技术方案来达到的。
本发明的一种怀山药提取物怀山药皂甙的提取方法，其特征在于，该方法包括以下几个工艺步骤a.原药材怀山药经过粉碎后，用甲醇冷浸提取，提取时间为10-24小时，共提取两次，其溶剂用量为原药材的3-5倍；b.然后过滤，滤液用旋转蒸发仪进行浓缩，温度控制为30-50℃左右，浓缩后得到浸膏；c.将浸膏放置于200ml-300ml蒸馏水中，使其成为水悬浮液；d.将水悬浮液用无水乙醚脱脂萃取2-3次；e.将经无水乙醚脱脂萃取后的水层用正丁醇饱和水萃取2-3次；f.收集水饱和正丁醇的萃取液，放置于旋转蒸发仪中进行浓缩，温度控制在50℃，浓缩而得浸膏；
g.将上述浸膏用热甲醇溶解达到饱和状态，然后在0-4℃的冰箱中放置3天，得到乳白色结晶；h.将上述结晶用蒸馏水溶解，上大孔型吸附树脂，先用2-5倍层析柱体积的蒸馏水洗脱，再用20％乙醇、70％乙醇、无水乙醇依次洗脱，收集70％乙醇的洗脱液，放入旋转蒸发仪中进行加热浓缩，然后将其冷冻干燥，最后主要成分为怀山药皂甙的乳白色无定形粉末。
上述方法制得的怀山药皂甙，具有α-糖苷酶抑制活性，其作用机理是怀山药皂甙通过与消化道内的许多酶作用，特别是对α-糖苷酶的抑制活性，从而控制了机体对葡萄糖等营养成分的吸收，使其具有了抗营养性。同时怀山药皂甙具有己糖激酶激活活性，从而加快了糖代谢途径中糖的降解。对于糖尿病并发症中的眼部病变、神经病变和肾部病变的病人而言，怀山药还具有醛糖还原酶抑制活性，从而能消除体内山梨醇的蓄积，因此怀山药皂甙可作为治疗糖尿病及其并发症的药物。
本发明的提取工艺，使用设备简单，分离提取操作容易。
具体实施例方式
本发明的具体实施例如上所述，现再详细叙述于后。
本实施例中的具体工艺步骤如下a.称取原药材怀山药1000克(干料)，经过粉碎后，用甲醇浸提取，冷浸提取时间为24小时，共提取两次，溶剂量为原药材的3-5倍；b.然后过滤，将滤液用旋转蒸发仪进行浓缩，旋转蒸发时的温度控制在45℃，浓缩后得到浸膏；c.将浸膏放置于300ml蒸馏水中，使其成为水悬浮液；d.将水悬浮液在分液漏斗中用无水乙醇脱脂萃取2次；e.将经无水乙醇脱脂萃取后收集的水液层在分液漏斗中进行浓缩，加热温度为50℃；f.收集水饱和正丁醇的萃取液，放置于旋转蒸发仪中进行浓缩，温度控制在50℃，浓缩而得浸膏；g.将上述浸膏用热甲醇溶解达到饱和状态，然后在0-4℃的冰箱中放置3天，得到乳白色结晶；h.将上述结晶用蒸馏水溶解，上大孔型吸附树脂，先用2-5倍层析柱体积的蒸馏水洗脱，再用20％乙醇、70％乙醇、无水乙醇依次洗脱，收集70％乙醇的洗脱液，放入旋转蒸发仪中进行加热浓缩，然后将其冷冻干燥，最后主要成分为怀山药皂甙的乳白色无定形粉末。
为了说明本发明制备物怀山药皂甙可降低血液血糖浓度的效果，特做了一些有关试验一、怀山药皂甙对动物小鼠的降血糖作用和体内酶学作用。
试验1怀山药皂甙一次给药对正常小鼠血糖含量的影响取正常小鼠50只，随机分为5组，分别灌胃生理盐水、拜糖苹(100mg/kg)、怀山药皂甙(30mg/kg、60mg/kg、100mg/kg)。禁食4h后断尾取血测定血浆血糖浓度。结果见表1。
表1 怀山药皂甙一次给药对正常小鼠血糖含量的影响
与生理盐水组比较1p＜0.005上述拜糖苹对照试剂为德国拜耳公司产品上述试验结果表明，怀山药皂甙30mg/kg、60mg/kg、100mg/kg剂量均能明显降低正常小鼠血糖。
试验2，怀山药皂甙连续多次给药对正常小鼠血糖含量的影响取正常小鼠30只，随机分为3组，分别灌胃生理盐水、拜糖苹(100mg/kg)、怀山药皂甙(100mg/kg)，连续八天。末次给药后禁食4h，断尾取血测定血浆血糖浓度。由表2的结果可见，表2怀山药皂甙连续多次给药对正常小鼠血糖含量的影响
与生理盐水组比较1p＜0.005上述拜糖苹对照试剂为德国拜耳公司产品上述实验结果表明，怀山药皂甙对此给药同样能够引起正常小鼠血糖的降低，其效果与市售降糖药物拜糖苹相当。
试验3怀山药皂甙对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖含量的影响四氧嘧啶糖尿病小鼠35只，分为3组(组间血糖值差异不超过0.1mmol/L)，分别灌胃生理盐水、拜糖苹(100mg/kg)、怀山药皂甙(100mg/kg)，连续八天。末次给药后禁食4h，取血测定血浆血糖浓度。其结果见表3。
表3怀山药皂甙对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖含量的影响
与生理盐水组比较1p＜0.005上述拜糖苹对照试剂为德国拜耳公司产品上述试验结果表明，怀山药皂甙能够有效的降低四氧嘧啶糖尿病小鼠的血糖，在同等剂量下，其效果略好于口服降糖药物拜糖苹。
试验4怀山药皂甙对小鼠体内酶活的影响将正常小鼠和四氧嘧啶糖尿病小鼠各10只，灌胃生理盐水，再将四氧嘧啶糖尿病小鼠15只灌胃怀山药皂甙(100mg/kg)，连续八天。末次给药后禁食4h，取血后断头法处死，测定体内α-葡萄糖苷酶、己糖激酶和醛糖还原酶活性，结果见表4。
表4怀山药皂甙在小鼠体内的酶作用
与生理盐水组比较2p＜0.05与糖尿病模型组比较1p＜0.05。
试验结果显示1.糖尿病模型组与生理盐水组(正常小鼠)比较而言，α-葡萄糖苷酶和己糖激酶的活性内有变化，而醛糖还原酶的活性有明显上升(酶活吸光度值上升0.023)，说明高血糖可激活醛糖还原酶。
2.给药组与糖尿病模型组比较而言，α-葡萄糖苷酶的活性有明显抑制(抑制率为26.21％)，醛糖还原酶的活性也受到抑制(抑制率位13.16)，而己糖激酶的活性则被激活(激活率为27.50％)通过以上各试验，总的来说，本发明制备物怀山药皂甙对实验小鼠具有体内α-葡萄糖苷酶抑制活性，同时有己糖激酶的激活活性，以及醛糖还原酶的抑制活性。
权利要求
1.一种怀山药提取物怀山药皂甙的提取方法，其特征在于该方法具有以下工艺过程和工艺步骤a.原材料原药材怀山药经过粉碎后，用甲醇和/或水冷浸提取，提取时间为10-24小时，共提取两次，溶剂用量为原药材的3-5倍；b.然后过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩，温度控制在30-50℃左右，浓缩后得到浸膏；c.将浸膏悬浮于200-300ml蒸馏水中，使其成为水悬浮液；d.经无水乙醚脱脂萃取后的水层用正丁醇饱和水溶液萃取2-3次；e.收集水饱和正丁醇的萃取液，放置于旋转蒸发仪中进行浓缩，温度控制在40-50℃左右，浓缩而得浸膏；f.将上述浸膏用热甲醇溶解达到饱和状态，然后在0-4℃的冰箱中放置3天，得到乳白色结晶；g.将上述结晶用蒸馏水溶解，上大孔型吸附树脂，先用2-5倍层析柱体积的蒸馏水洗脱，再用20％乙醇、70％乙醇、无水乙醇依次洗脱，收集70％乙醇的洗脱液，放入旋转蒸发仪中进行加热浓缩，然后将其冷冻干燥，最后得到主要成分为怀山药皂甙的乳白色无定形粉末。
2.根据权利要求1所述的一种怀山药提取物怀山药皂甙的提取方法所提取的怀山药皂甙产物，其用途可用作制备降血糖药物和治疗糖尿病并发症药物的主要活性成分或主要原料。
全文摘要
本发明涉及中草药材怀山药提取物怀山药皂甙的提取方法，属中草药化学提炼制备技术领域。本发明怀山药皂甙的提取方法为怀山药经粉碎后用冷甲醇浸泡，然后过滤，将滤液浓缩，得到的浸膏制成水悬浮液，经脱脂萃取，再用水饱和正丁醇萃取，经再次浓缩后的浸膏，用热的甲醇配制成饱和溶液，然后放置于冰箱内，将析出的沉淀物用蒸馏水溶解，上大孔径吸附树脂，然后收集、浓缩得白色无定型粉末，其主要成分既是怀山药皂甙。该制备物可作为制备降血糖药物和治疗糖尿病并发症药物的主要活性成分或主要原料。
文档编号C07G3/00GK1560061SQ200410016839
公开日2005年1月5日 申请日期2004年3月10日 优先权日2004年3月10日
发明者沈忠明, 殷建伟, 高宏武 申请人:上海大学