专利名称：从发酵液的油相中提取4－雄烯二酮的方法
技术领域：
本发明属于植物化学技术领域。具体涉及从发酵液的油相(植物油)中提取4-雄烯二酮4-Androstadiendione(4-AD)的方法。
背景技术：
植物甾醇在油相(植物油)为媒介的情况下，经特殊的细菌发酵生物转化后，可以将植物甾醇转化为4-AD，由于4-AD具有较强的亲油性，所以主要存在于发酵液中的油相媒介中。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于克服提取4-AD的现有工艺中的不足之处，设计一种提取收率高，环境污染少的提取方法。
本发明提供了一种从发酵液的油相(植物油)中提取4-雄烯二酮(4-AD)的方法，该方法包括下列步骤(1)收集与萃取发酵液的油相在发酵液中加入适量的盐使发酵液中的水相与油相部分分层，收集油相部分，用1∶1(V/V)的乙醇萃取4-5次，合并萃取液；(2)提取4-雄烯二酮粗品I将步骤(1)的萃取液在45℃、0.095Mpa条件下减压蒸发回收乙醇，当有少量晶体出现时停止浓缩，冷却至5℃结晶8小时，离心收集晶体，得粗品I；(3)纯化制得4-雄烯二酮纯品用1∶15(W/V)丙酮溶解粗品I，过滤，在25℃、0.095Mpa条件下减压蒸发回收丙酮，当有少量晶体出现时停止浓缩，冷却至5℃结晶8小时，离心收集晶体，得粗品II；用1∶20 W/V乙酸乙脂溶解，加0.1％ W/V活性碳搅拌脱色1小时，过滤，减压蒸发至少量结晶析出时停止浓缩，冷却至5℃结晶8小时，离心得粗品III；将粗品III用1∶25 W/V甲醇溶解，加0.1％W/V活性碳搅拌脱色1小时，过滤，减压蒸发至时少量结晶析出时停止浓缩，冷却至5℃结晶8小时，离心，用少量甲醇洗涤晶体，45℃、0.095Mpa真空干燥8小时得纯品4-AD。
另外，本发明的方法步骤(1)经乙醇萃取后的油相部分再用1∶2(V/V)乙酸乙脂溶解，静置分层8小时，上清液经过滤处理后在45℃-60℃、0.095Mpa条件下减压蒸发回收乙酸乙脂，得澄清的回收油，此油可重复用于生产。
本发明的方法有下列特点①用加食盐在发酵液中的方法，使发酵液水相和油相分层，并使部分溶解于水相部分的4-雄烯二酮全部溶于油相中；②用极性大的有机溶剂萃取溶解在油相中的4-雄烯二酮，使溶解于油相部分的4-雄烯二酮转移到萃取液中；③用不同极性的溶剂反复溶解处理粗品结晶，使得不同极性的杂质得到有效分离。萃取液经浓缩，过滤，冷却，得第一次粗品结晶后，用非极性有机溶剂溶解粗品结晶，经过滤后除去部分极性杂质；过滤液经浓缩，冷却，得第二次粗品结晶后，用极性小的有机溶剂溶解该粗品结晶，经过滤除去部分杂质；过滤液经浓缩，冷却，得第三次粗品结晶后，用极性大的有机溶剂溶解粗品结晶，经活性碳脱色过滤后除去部分非极性杂质及色素；过滤液经浓缩，冷却，得纯品结晶。
④用有机溶剂溶解处理萃取后的油相，使回收油达到可反复套用的目的。
本发明的的方法与现有工艺的比较见表1
表1本发明技术水平与原工艺技术水平数据一览表
本发明的方法工艺路线短、产品纯度高、回收油可以重复利用，减少环境污染，适宜规模型工业化生产。
*发酵油中析纯产物系指植物甾醇经发酵转为为AD后的总质量。
*收率(析纯)合格产品经析纯后与投入的植物甾醇重量之比，指重量收率。
说明以上数据为5次实验结果的平均数据。从数据上可以看出本发明在提取收率上要比原工艺提高近11个百分点。产物质量从纯度、熔点，比悬及付产物含量上都要优于原工艺的产品。
具体实施例方式(1)将30kg食盐加入500L发酵液中，搅拌30分钟，静止分层8小时，收集油相部分120L。在萃取罐中分次萃取5次，每次都用1∶1(V/V)的乙醇萃取，合并5次萃取液约610L，(萃余油约110L待回收处理)。将610L萃取液在浓缩罐中减压浓缩，冷却结晶，离心过滤得粗品约20kg；用300L丙酮溶解20kg粗品，过滤，在浓缩罐中减压浓缩，冷却结晶，离心过滤得粗品约15kg；用300L乙酸乙脂溶解15kg粗品，加0.3kg活性碳，搅拌脱色1小时，过滤，在浓缩罐中减压浓缩，冷却结晶，离心过滤得粗品约12kg；用300L甲醇溶解12kg粗品，加0.3kg活性碳，搅拌脱色1小时，过滤，在浓缩罐中减压浓缩，冷却结晶，离心洗涤结晶，在真空干燥箱中45℃、0.095Mpa真空干燥8小时得纯品4-AD约8kg；(2)将萃余油约110L用220L乙酸乙脂搅拌溶解，静置分层8小时，弃去下层沉淀部分，上清液经过滤后在45℃—60℃、0.095Mpa条件下减压蒸发回收乙酸乙脂，得澄清的回收油约80L，此油可重复用于生产。
权利要求
1.一种从植物甾醇发酵液油相中提取4-雄烯二酮的方法，其特征在于该方法包括下列步骤(1)收集与萃取发酵液的油相在发酵液中加入适量的盐使发酵液中的水相与油相部分分层，收集油相部分，用1∶1(V/V)的乙醇萃取4-5次，合并萃取液；(2)提取4-雄烯二酮粗品I将步骤(1)的萃取液在45℃、0.095Mpa条件下减压蒸发回收乙醇，当有少量晶体出现时停止浓缩，冷却至5℃结晶8小时，离心收集晶体，得粗品I；(3)纯化制得4-雄烯二酮纯品用1∶15(W/V)丙酮溶解粗品I，过滤，在25℃、0.095Mpa条件下减压蒸发回收丙酮，当有少量晶体出现时停止浓缩，冷却至5℃结晶8小时，离心收集晶体，得粗品II；用1∶20W/V乙酸乙脂溶解，加0.1％W/V活性碳搅拌脱色1小时，过滤，减压蒸发至少量结晶析出时停止浓缩，冷却至5℃结晶8小时，离心得粗品III；将粗品III用1∶25W/V甲醇溶解，加0.1％W/V活性碳搅拌脱色1小时，过滤，减压蒸发至时少量结晶析出时停止浓缩，冷却至5℃结晶8小时，离心，用少量甲醇洗涤晶体，45℃、0.095Mpa真空干燥8小时得纯品4-AD。
2.根据权利要求1所述的一种从植物甾醇发酵液油相中提取4-雄烯二酮的方法，其特征在于其中步骤(1)经乙醇萃取后的油相部分再用1∶2(V/V)乙酸乙脂溶解，静置分层8小时，上清液经过滤处理后在45℃-60℃、0.095Mpa条件下减压蒸发回收乙酸乙脂，得澄清的回收油，此油可重复用于生产。
全文摘要
本发明属于植物化学技术领域。本发明提供了一种从植物甾醇发酵液相中提取4－雄烯二酮的方法。本发明的方法提取效果好，产品纯度高，回收油经处理后，可以反复使用，减少环境污染；工艺路线短，适宜于规模型的工业化生产。
文档编号C07J1/00GK1712410SQ20041002516
公开日2005年12月28日 申请日期2004年6月15日 优先权日2004年6月15日
发明者郑雄敏, 荣绍丰 申请人:上海迪赛诺医药发展有限公司, 上海迪赛诺生物技术有限公司