专利名称：石莲花有效成分及其降糖活性的制作方法
技术领域：
本发明继高效纯天然降血糖剂(专利号ZL97.100285.1)、石莲花茶及其功能(申请号00132449.7)、石莲花多糖(申请号00133666.5)、全溶石莲花及其抗应激功能(申请号2003101010564)、复合石莲花茶(申请号031377688)等一系列研究之后，经七年之久对其有效成分的分离提取、降糖活性、人群试验及其降糖机理四个方面进行探讨。
1、石莲花有效成分的分离提取1.1景石酸的分离、提取(景石酸缩写EgA)实施例1将鲜石莲花洗净，40-50℃烘干后，取1Kg干石莲花，加入5升0.1MNaOH搅拌，在70-80℃煮沸30分钟后趁热过滤，然后将上述操作重复两次，将3次滤液合并后用0.1MHCL中和PH＝5~6，出现沉淀，过滤、烘干，景石酸产量为289.6g，收率28.96％。(见附
图1)1.2石莲花中生物黄酮的分离提取(石莲花黄酮缩写EgF)1.2.1甲醇法实施例2取2g干石莲花包在滤纸中，置于索氏提取器中，在底部接收瓶加入60ml甲醇(80％或100％)，水浴回流至无色为止，保留滤纸中残渣A备用，用旋转蒸发器浓缩至干，烘干，生物黄酮含量0.1248g，收率6.24％。(见附图2)1.2.2乙醇法实施例3取2g干石莲花包在滤纸中，置于索氏提取器中，在底部接收瓶加入60ml乙醇(无水或80％)，水浴回流至无色为止，保留滤纸中残渣B备用，用旋转蒸发器浓缩至干，烘干，生物黄酮含量0.1252g，收率6.26％。(见附图3)1.3石莲花的总皂甙分离提取(石莲花总皂甙EgS)实施例4取1.2.1甲醇法提取的残渣A1.5g，加入无离子水100ml回流1h后，过滤，残渣C备用，滤液用3×30ml正丁醇萃取，将正丁醇减压浓缩，烘干，总皂甙含量0.0852g，收率5.68％。(见附图4)1.4石莲花中多糖的分离提取(石莲花多糖缩写EgPS)1.4.1乙醇沉淀法实施例5向上述1.3滤液C中加入无水乙醇，出现沉淀，过滤，收集沉淀，烘干，得粗EgPS0.155g，收率为10.97％。(见附图5)1.4.2直接浓缩法实施例6将上述1.3中滤液C直接减压浓缩，烘干，得粗EgPS0.161g，收率为14.1％。(见附图6)1.5石莲花与降糖相关的有效成分(见表1-1)表1-1 石莲花与降糖相关的有效成分
2、石莲花降糖活性，用动物实验验证EgA、EgF、EgS、EgPS、(EgA+EgF)、(EgS+EgPS)降糖活性2.1 EgA、EgF、EgS、EgPS、(EgA+EgF)、(EgS+EgPS)白鼠，正常SD大白鼠(采购自北京大学医学部)77只，分成7组，每组11只，随机分成7组，实验组分别按4、4、4、4、2、2mg/kg，对照组灌等量的生理盐水，每日灌胃1次，连续4周，末次给药各2h，尾静脉取血测血糖，血糖(FBG)无影响见表2-1-1
表2-1-1 石莲花有效成分对正常大白鼠血糖无影响(X±S，n＝11)
结论石莲花有效成分对正常大鼠血糖无影响2.2石莲花有效成分对四氧嘧啶糖尿病(缩写DM)大鼠FBG、血清胰岛素(缩写ins)显示的活性(见表2-2-1)由表2-1-1可见，与正常对照组比较，四氧嘧啶糖尿病大鼠血糖值显著升高，血清ins明显下降(P＜0.01)，实验组分别按4、4、4、4、2、2mg/kg口服剂量对DM大鼠有非常明显的降糖活性，并使血清胰岛素(缩写ins)水平呈上升趋势。
表2-2-1 石莲花有效成分对四氧嘧啶糖尿病(缩写DM)大鼠FBG、血清胰岛素(缩写ins)显示的活性
*P＜0.05**P＜0.01与DM比较P＜0.01与正常对照组比较
2.3石莲花有效成分对DM大鼠血脂显示的降脂活性(见表2-3-1)实验动物按2.2安排，糖代谢、脂代谢均属于内分泌失调，而造成糖、脂代谢失调。如表2-3-1可见，与正常大鼠比较，DM大鼠血清甘油酸三脂(TG)、总胆固醇(Tc)、低密度脂蛋白(LDL)显著升高(P＜0.01)，高密度脂蛋白(HDL)显著下降(P＜0.01)，分别给石莲花有效成分后，TG、Tc、LDL显著降低(P＜0.01)而HDL显著升高(P＜0.01)，证明石莲花有效成分对DM大鼠血脂代谢具有较强的调节作用。
表2-3-1 石莲花有效成分对DM大鼠血脂显示的降脂活性
*P＜0.05**P＜0.01与DM比较石莲花有效成分均具备降脂升高HDL的功能，但最佳组合成分降脂活性最佳。
2.4石莲花有效成分对DM大鼠血清、肝、脑、胰腺中标志过氧脂质反应的丙二醛(MDA)显示降低活性(见表2-4-1)与正常对照组比较，DM大鼠血清、肝、脑、胰腺中含量显著升高。动物实验的设计同前。
表2-4-1 石莲花有效成分对DM大鼠血清、肝、脑、胰腺中标志过氧脂质反应的丙二醛(MDA)显示降低活性
*P＜0.05**P＜0.01与DM比较在实验中DM大鼠血清、肝、脑、胰腺等组织中MDA含量显著升高，表明DM大鼠体内发生明显的脂质过氧化反应。
3、最佳组合成分(EgS+EgPS)、(EgF+EgA)的人群试验3.1人群试验的设计3.1.1总人数96人，其中糖尿病患者48人，糖耐量异常者28人，正常人20名。
3.2服用(EgS+EgPS)前后人群试验对象糖尿病生化指标变化(见表3-1)3.2.1代号说明FBG血糖；TG甘油酸三脂、Tc胆固醇、LDL低密度脂蛋白；HDL高密度脂蛋白；HbAlc糖基化血红蛋白；ins血清胰岛素。
3.2.2最佳组合成分(EgS+EgPS)对降血糖、降HbAlc、改善与缓解并发症尤为显著。
表3-1 服用(EgS+EgPS)前后人群试验对象糖尿病生化指标变化一览表
3.3服用(EgF+EgA)前后人群实验对象糖尿病生化指标变化(见表3-2)3.3.1对表3-2的说明表中罗列糖尿病患者21人，糖耐量异常者13人，其余14人均为正常人。
3.3.2最佳组合成分(EgF+EgA)对降血脂、升高高密度脂蛋白、改善血清胰岛素的分泌非常显著。
表3-2 服用(EgF+EgA)前后人群实验对象糖尿病生化指标变化一览表
2.评分标准表10 皮肤刺激性反应评分标准
表11 皮肤刺激性强度评价标准
3.试验结果疤痕止痒软化乳膏完整组中多次给药组一次给药组，皮肤刺激反应总积分、皮肤刺激反应平均分值均为0；皮肤刺激反应强度均为无刺激性。破损组中多次给药组、一次给药组皮肤刺激反应总积分分别为1、中间态，即可作为还原剂也可作为氧化剂，基与上述EgA配合使用则降糖降脂效果更好。
4.3石莲花皂甙皂甙是由皂甙元与糖基组成的甙基，具有很强的生物活性功能，例如人参皂甙、柴胡皂甙、绞股蓝皂甙，其皂甙元均含羟基、乃至不饱和羟基基团，通常其有抗癌、提高免疫功能、耐缺氧、抗疲劳、消炎等特殊功能，也是人类从植物界取之不尽，用之不竭的能源，况且皂甙元和糖基均富含羟基，是消除自由基的H给予体的仓库。
4.4石莲花多糖(EgPS)众所周知，人参多糖、枸杞多糖、牛膝多糖基均具有良好降糖降血脂的功能，而且对人体的免疫功能有特殊的调节作用，从表2-2-1可见，血清ins明显增加，证明EgPS对胰岛β-细胞具有明显保护与修复作用。
4.5石莲花最佳组合成份之一如表3-1所示，服用EgS+EgPS人群实验对象糖尿病人群实验表明EgS具有提高肌体免疫功能，改善与调节整体功能，糖基化血红蛋白的第一阶段的希佛碱的形成，从而逆转为血红蛋白与葡萄糖，有效地降低了HbAlc，最终并发症得以改善。
4.6石莲花最佳组合成份之二如表3-2所示，除上述降糖、降HbAlc、提升高密度脂蛋白、改善并发症外，该组合中提升ins，降Tc、TG、LDL是非常显著的。提升ins的分泌必须首先对β-细胞加以保护，EgA+EgF组成β-细胞的蛋白与核酸加以修饰，缓慢恢复与激活β-细胞，从而ins分泌逐步上升而降糖灵降血糖是快速的，它直接刺激胰岛产生胰岛素，乃至胰岛素由于过度分泌而导致枯竭。
4.7总结根据近年来一些学者的研究，证实自由基代谢参与了糖尿病的发生和发展过程，本发明在实验中发现糖尿病大鼠血清、肝、脑、胰腺等组织中MDA含量显著提高，表明糖尿病大鼠体内发生了明显的脂质过氧化反应。给与石莲花有效成分治疗后上述组织中MD含量明显下降，有效成分改善了自由基代谢，减少了组织和血液中自由基对脂蛋白的不饱和脂肪酸残基的攻击，减轻并抑制了脂质过氧化程度，因而减低了自由基在糖尿病的发生和发展过程中所起的破坏作用，使糖尿病病理状况得以根本改善。
权利要求
1.本发明首次发现石莲花中具有降糖、降脂活性的有效成分及其分离提取方法；
2.根据权利要求1所述，其有效成分包括石莲花皂甙(EgS)、石莲花黄酮(EgF)、景石酸(EgA)以及它们之间的最佳组合成分；
3.根据权利要求2所述，其最佳组合为(EgS+EgF)、(EgF+EgA)，每一组合各占50％；
4.根据权利要求1所述的降糖活性有效成分，发现其降HbA1C，从保护和修复胰岛β-细胞的前提下，增加血清胰岛素(ins)的分泌及改善糖尿病的并发症等用途。
全文摘要
本发明首次发现石莲花中的景石酸(EgA)、石莲花皂甙(EgS)、石莲花黄酮(EgF)等与降糖活性相关的有效成分，并再次证实石莲花多糖(EgPS)降糖、降血脂的生理活性功能。本产品适合于亚健康人士服用，并开发成能预防糖耐量异常和治疗糖尿病及其并发症的保健食品或医药品，适于保健食品、医药品生产厂家生产。
文档编号C07H1/00GK1679655SQ200410029939
公开日2005年10月12日 申请日期2004年4月6日 优先权日2004年4月6日
发明者丁庆 申请人:丁庆