专利名称：果糖－1,6－二磷酸三钠盐结晶新工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及利用果糖-1，6-二磷酸水溶液生产晶形果糖-1，6-二磷酸三钠盐(FDPNa3H·8H2O)的新方法并且使用该方法制备果糖-1，6-二磷酸三钠盐注射剂，应用在临床上明显降低了药物对肌肉、血管的刺激性。
背景技术：
果糖-1，6-二磷酸(Fructose 1，6-diphosphate，FDP)也称哈登-杨氏酯(esterof Harden Young)。它是一种重要的细胞内代谢产物，是人体糖酵解代谢途径中的中间产物。能直接调节很多代谢途径，可视为一种代谢调节剂，特别在能量代谢和调节某些酶活性方面具有重要的作用。在临床上，可调节糖代谢中若干酶的活性，恢复及改善分子水平的细胞代谢，作用于细胞膜，通过刺激磷酸果糖激酶的活性，增加细胞内ATP浓度，促进K+内流，恢复细胞极化状态，从而有利于在休克、缺氧、缺血、损伤、体外循环、输血等状态下的细胞能量代谢及对葡萄糖的利用，促进细胞修复，改善功能状态。
FDP在刚开始作为商品是以冻干粉的形式出现的，而这种形式的产品在空气中极易吸湿和潮解。因此对产品的包装和运输提出了更高的要求，尤其是限制了盖仑氏制剂的发展。于是Bergmeyer等于1972年报道了用乙醇—低温法制备带8个结晶水的FDP钠盐，该形式的产品在空气中的稳定性大大增强，但是该方法产品收率仅为78％。90年代，塞卡瑞利和徐汉标等人也报道了用有机溶剂—低温法制备FDP。该方法需要在低于10℃下，将FDP水溶液与总体积等于2-3倍起始于水溶液体积的丙酮混合，搅拌数十小时后，在低温下静置至晶体析出。该方法产品收率为90％，纯度为98％；由于采用低温，这样势必增加工业生产的费用。由于此种方法生产FDP晶体时易发生初级非均相成核，导致产品颗粒大小参差不齐，稳定性差。
发明内容
本发明的目的在于避免上述现有技术中的不足之处而提供一种乙醇-醋酸钠体系结晶出大小可控的果糖-1，6-二磷酸三钠盐晶体新工艺。
本发明的目的可以通过以下措施来达到
一种果糖-1，6-二磷酸三钠盐结晶新工艺，其特征是在pH值为4.0-6.0和质量百分数为35％-50％浓度的FDP溶液中，缓缓加入质量百分数为1％-20％的醋酸钠和乙醇，乙醇的加入量为起始水溶液体积的0.5-3倍，然后在20℃-40℃的温度下搅拌结晶，搅拌转速控制在20-200rpm/min；待结晶完全后抽滤，用乙醇洗涤，真空干燥。
本发明的目的还可以通过以下措施来达到加入质量百分数5％-8％的醋酸钠；pH值为4.5-5.2；乙醇加入量为起始水溶液体积的1.6-2倍；在20℃-35℃的温度下搅拌结晶；搅拌转速控制在40-70rpm/min。
本发明相比现有技术具有如下优点本发明就产品收率和质量而论均取得了极好的结果，使产品收率从90％提高到95％，产品纯度从98％提高到99.5％。由于采用了常温结晶，因此在生产过程中无需冷却装置，节约投资，而且更易控制操作，重复性好。通过控制成核速率和晶体的生长速率，从而控制晶体的大小，提高晶体颗粒的均一性。
利用本方法结晶FDP具有颗粒大小均匀，光泽度好，呈流沙状，乙醇用量少的优点。通过温度加速试验也证明，使用此法生产的FDP较之国内外当前使用乙醇—低温结晶法所制得的FDP具有热分解慢，稳定性好的特点。
利用本工艺结晶FDP可通过调节溶液的pH或结晶温度制备不同颗粒大小的晶体，有利于FDP无菌结晶粉的自动分装，但用其他文献报道的工艺则不能控制晶体颗粒大小。
图1为采用乙醇醋酸钠体系制得的晶体放大100倍后的电镜照片图。
图2为采用乙醇低温体系(传统方法)制得的晶体放大200倍后的电镜照片图。
图3为注射用果糖二磷酸钠血管刺激性试验中乙醇-醋酸钠体系给予注射用水家兔右耳缘静脉放大100倍电镜照片图。
图4为注射用果糖二磷酸钠血管刺激性试验中给予对照药家兔右耳缘静脉放大100倍电镜照片图。
图5为注射用果糖二磷酸钠肌肉刺激性试验中乙醇-醋酸钠体系给予注射用水家兔右股四头肌放大100倍电镜照片图。
图6为注射用果糖二磷酸钠肌肉刺激性试验中给予对照药家兔右股四头肌放大100倍电镜照片图。
其中，图1中显示的晶体平均粒径162μm，图2中显示的晶体粒径从50μm至110μm不等
具体实施例方式以下实施例将对本发明作进一步说明，但对本发明没有限制。
实施例1将无水的100gFDP三钠盐溶于300mL水中，用醋酸调至pH4.8，加入醋酸钠10g，搅拌下加入乙醇450ml，在25℃保温搅拌至结晶完全。将该悬浮液抽滤，用85％的乙醇洗涤所得的白色固体，真空干燥，于是即可以得到产品128g，结晶收率为95％。
产品的分析结果C6H11O12P2Na3·8H2O(分子量为550.18)元素 测定值(％) 理论值(％)C13.6 13.10H5.02 4.96O58.2858.16P11.2311.26Na 12.3112.53实施例2在30％的FDP溶液中，分别调pH值为4.5、4.8、5.0、5.2，加入8％的醋酸钠，边搅拌边加入1.6倍FDP溶液体积的乙醇，在30℃保温搅拌至结晶完全。抽滤，乙醇洗涤，真空干燥。表1.1给出了产品粒度分布。
由此可得，pH对晶体颗粒分布的影响较大。溶液的pH从4.5增加到5.2相差0.7，而晶体的平均粒度差异却达84μm，因此，可以通过控制溶液的pH值达到控制晶体颗粒大小的目的。
表1.1 pH对晶体颗粒分布的影响
实施例3在pH4.5 30％的FDP溶液中，加入8％的醋酸钠，边搅拌边加入1.6倍FDP溶液体积的乙醇，分别在20℃、25℃、30℃保温搅拌至结晶完全。抽滤，乙醇洗涤，真空干燥。表1.2给出了产品粒度分布。
表1.2温度对晶体颗粒分布的影响
温度对FDP结晶的影响较大，尤其是对FDP晶体颗粒大小的影响。结晶温度从20℃增加到30℃，而晶体颗粒却从92μm增加到241μm，因此，可以通过调节结晶温度的方法来生产不同颗粒大小的晶体。
实施例4将无水的2000gFDP三钠盐溶于6000mL水中，用醋酸调至pH4.8，加入醋酸钠200g，搅拌下加入乙醇9L，在25℃保温搅拌至结晶完全。将该悬浮液抽滤，用85％的乙醇洗涤所得的白色固体，真空干燥，于是可以得到产品2709g，结晶收率为95％。
将该晶体用灭菌注射用水溶解后(药物浓度为2mg/ml)，进行溶血试验，静脉注射血管、肌肉刺激性试验。方法和结果如下
1、溶血试验方法日本大耳白雌性无孕家兔1只，2.2kg，取家兔心脏血20ml，按常规方法制备血球，并用生理盐水稀释成2％的混悬液供测试用。
判断标准全溶血(溶液澄明红色，管底无细胞残留部分)；溶血(红细胞全部下沉，上层液体无色澄明)；聚集(虽不溶血，但出现红细胞聚集，振摇后不能分散)。
结果37摄氏度水浴中保温3小时，不溶血，也不发生聚集。
2、静脉注射血管刺激性试验方法日本大耳白家兔4只，雌雄不拘(雌性兔无孕)，2.2～2.5kg，分两组(乙醇-醋酸钠体系组、乙醇低温体系组即对照组)，每组2只，按常规方法进行试验和检查。
结果家兔每日以7.5ml/kg耳缘静脉滴注0.2g/ml的注射用果糖二磷酸钠，连续5次，24h后注射部位血管未见明显充血及水肿，血管边缘清晰，病理组织检查未见组织变性及坏死等病理改变；对照药注射侧的血管亦未见异常改变；见图3。
3、静脉注射肌肉刺激性试验方法日本大耳白家兔8只，雌雄不拘(雌性兔无孕)，2.2～2.5kg，分两组(乙醇-醋酸钠体系组、乙醇低温体系组即对照组)，每组4只，按常规方法进行试验和检查。
结果家兔股四头肌肌注0.1g/ml和0.2g/ml的注射用果糖二磷酸钠1ml，家兔无异常反应，48h后注射部位血管均未见家兔有刺激现象和充血、水肿、变性，病理组织检查未见组织变性及坏死等病理改变，见图1。注射对照药的一侧，在0.2g/ml浓度注射时家兔有刺激现象，出现蹬腿、挣扎情况，处死后见注射部位有＜1cm的充血区；0.1g/ml浓度注射时家兔无异常，见图4。
上述的试验结果证明，使用本发明的新方法所制注射剂安全性高，刺激性小。
权利要求
1.一种果糖-1，6-二磷酸三钠盐结晶新工艺，其特征是在pH值为4.0-6.0和质量百分数为35％-50％浓度的FDP溶液中，缓缓加入质量百分数为1％-20％的醋酸钠和乙醇，乙醇的加入量为起始水溶液体积的0.5-3倍，然后在20℃-40℃的温度下搅拌结晶，搅拌转速控制在20-200rpm/min；待结晶完全后抽滤，用乙醇洗涤，真空干燥。
2.根据权利要求1所述的果糖-1，6-二磷酸三钠盐结晶新工艺，其特征是加入质量百分数5％-8％的醋酸钠。
3.根据权利要求1所述的果糖-1，6-二磷酸三钠盐结晶新工艺，其特征是pH值为4.5-5.2。
4.根据权利要求1所述的果糖-1，6-二磷酸三钠盐结晶新工艺，其特征是乙醇加入量为起始水溶液体积的1.6-2倍。
5.根据权利要求1所述的果糖-1，6-二磷酸三钠盐结晶新工艺，其特征是在20℃-35℃的温度下搅拌结晶。
6.根据权利要求1所述的果糖-1，6-二磷酸三钠盐结晶新工艺，其特征是搅拌转速控制在40-70rpm/min。
全文摘要
本发明提供一种乙醇－醋酸钠体系结晶出大小可控的果糖－1，6－二磷酸三钠盐晶体新工艺。该工艺，其特征是在pH值为4.0－6.0和质量百分数为35％－50％浓度的FDP溶液中，缓缓加入质量百分数为1％－20％的醋酸钠和乙醇，乙醇的加入量为起始水溶液体积的0.5－3倍，然后在20℃－40℃的温度下搅拌结晶，搅拌转速控制在20－200rpm/min；待结晶完全后抽滤，用乙醇洗涤，真空干燥。
文档编号C07H11/00GK1651448SQ20041006544
公开日2005年8月10日 申请日期2004年12月6日 优先权日2004年12月6日
发明者应汉杰, 欧阳平凯, 吕浩, 赵谷林, 史隽 申请人:南京工业大学