独活提取物、其制备方法及含有该提取物的药物的制作方法

专利名称：独活提取物、其制备方法及含有该提取物的药物的制作方法
技术领域：
本发明涉及独活提取物、其制备方法以及含有该提取物的药物，具体而言，本发明涉及用于治疗类风湿性关节炎的独活提取物，通过超临界提取工艺制备该提取物的方法，以及含有该提取物的药物特别是软胶囊。
背景技术：
类风湿性关节炎(RA)是常见病、多发病，人群广，有效药物少，西医治疗类风湿常用非甾体抗炎药，慢作用抗炎药及糖皮质激素等。虽然在改善症状方面有一定疗效，但副作用明显，愈后多不理想。
类风湿性关节炎是一种以关节病变为主的慢性自身免疫性疾病，属于中医痹病范畴。部颁标准中药成方制剂和国家药典中，用于风寒湿痹的中药制剂较多，而用于类风湿性关节炎的中成药极少，国家药典中收载的昆明山海棠片由昆明山海棠一味组成，具有祛风除湿，舒筋活络，清热解毒功能，用于风湿、类风湿性关节炎的治疗。目前市售的治疗类风湿性关节炎的中成药除昆明山海棠片外，还包括雷公藤片、风湿圣药胶囊等，其中雷公藤因毒性大，已引起广泛注意；而风湿圣药胶囊为硬胶囊，处方中有川乌、草乌等毒性药材。
独活为伞形科植物重齿毛当归Angelica pubecens的干燥根，具有祛风除湿，通痹止痛的功能，为中医临床用于类风湿性关节炎常用之品。经药效学证明，独活具有祛风除湿、免疫调节、温经止痛和活血通络作用。古今文献对独活治疗类风湿性关节炎均有报道，根据《普济方》数据库管理系统检索，我国古代医家已广泛应用配伍独活治疗风寒湿痹，其中用于治疗与痹病和类风湿性关节炎密切相关的古代病症的处方达到230首。目前已有很多关于含独活的方剂治疗类风湿性关节炎方面的报道(邱联群，湖南中医药导报2000，6(10)22；刘维君等，天津中医2000，17(5)19；王禄海等，陕西中医学院学报2000，23(6)27；韩振贵等，河北中医2000，22(12)906)。
中医运用独活配伍治疗类风湿性关节炎相当普遍。归结起来，目前运用独活治疗类风湿性关节炎具有如下几个特点1、所用处方普遍为多味中药的大复方，药物组合大而杂；2、从所设基本方的构成情况可以明确看出祛风除湿、散寒止痛、温经通脉、行气活血、舒筋活络、强壮筋骨为基本治疗方法，临床表现上为数法合用，而以祛风除湿、散寒止痛、温经通脉的药物应用更为广泛。但这些复方制剂均存在配剂复杂的问题。
由此可知，目前为止应用独活治疗类风湿性关节炎的中药制剂均为复方制剂，尚没有单独应用独活治疗类风湿性关节炎的药物，且对于独活中含有的药理活性成分也没有详细的有关报道。

发明内容
本发明的目的在于提供一种药理活性成分确定的独活提取物、该提取物的制备方法以及含有该独活提取物作为有效成分的类风湿性关节炎治疗药，特别是含有独活提取物的软胶囊及该软胶囊的制备方法。
本发明人通过对独活的有效部位进行分离研究，结果发现在独活提取物中含有二氢欧山芹素(Columbianedin)、甲氧基欧芹素(Osthol)、二氢欧山芹醇乙酸酯(Columbianetin acetate)、花椒内酯(Xanthotoxin)和二氢欧山芹醇(Columbianetin)等活性成分，并确定了各成分的结构。
另外，本发明人发现通过采用超临界CO2萃取法，将萃取压力、萃取温度、萃取时间控制在一定范围内，可以使得到的独活提取物中上述各活性成分的合计含量达到提取物干燥重量的50％以上。
另外，本发明人将由上述提取方法得到的独活提取物用于制备软胶囊，结果得到了一种生物利用度高、刺激性低的用于治疗类风湿性关节炎的软胶囊。
具体而言，本发明涉及一种独活提取物，其中含有以下(1)-(5)种化学活性成分中的至少一种，
本发明还涉及一种独活提取物的提取方法，其特征在于包括以下步骤将一定粒度的独活粉碎物加入CO2超临界萃取釜中，对萃取釜和解析釜进行加热；当温度达到萃取温度和解析温度时，对萃取釜和解析釜进行加压，当压力分别达到萃取压力和解析压力时，开始进行循环萃取，并保持恒温恒压；萃取一定时间后，从解析釜的出料口出料，得独活提取物。
在上述提取方法中，独活提取物的粒度优选为通过60目筛，萃取温度为35～50℃，优选为40℃，解析温度为55～75℃左右，优选为65℃，萃取压力为15～25MPa，优选为20MPa，解析压力为2～10MPa，优选为5Mpa，萃取时间为2～5小时，优选为3小时。
本发明还涉及一种独活软胶囊，由内容物及囊壳组成，内容物由独活提取物及其溶剂、润湿剂、助悬剂组成，各组分的重量比为独活提取物溶剂∶润湿剂∶助悬剂＝1∶3～5∶0.4～0.6∶0.06～0.08。
在上述独活软胶囊中，溶剂为能溶解提取物的物质，优选使用大豆油，润湿剂一般为表面活性剂，可以使用吐温类、司盘类等，优选使用聚乙二醇400、聚山梨酯80，助悬剂可以使用能增加分散介质粘度的固体物质，如蜂蜡、单硬脂酸铝、乙基纤维素等，优选使用蜂蜡。
本发明优选的一种独活软胶囊以1000粒计的软胶囊内容物组成如下独活提取物100克大豆油350克聚乙二醇-400 50克聚山梨酯804克蜂蜡 6克具体实施方式
(独活提取物的制备)由于独活中含有的用于治疗风湿的活性成分为香豆素类化合物，多为一些极性小的化合物，因此本发明采用超临界CO2流体萃取的工艺制备独活提取物。
本发明制备独活提取物的具体方法如下取独活药材(伞形科植物重齿毛当归Angelica pubecens的干燥根)粉碎通过60目筛，投入超临界萃取釜中，对萃取釜和解析釜进行加热，当萃取温度和解析温度分别达到35～50℃和55～75℃时，通过压缩泵对萃取釜和解析釜进行加压，当萃取压力和解析压力分别达到15～25Mpa和2～10Mpa时，开始进行循环萃取，并保持恒温恒压萃取2～5小时后，从解析釜的出料口出料，得独活提取物。去除上层水分，下层浸膏于50～75℃减压干燥至密度为1.130，得提取物。
(对独活提取物中所含有效活性成分的确认)取上述制得的提取物，用薄层层析法进行分离，可见5个以上荧光斑点，然后用硅胶柱层析法分离得到5个主要活性成分，经紫外、红外、质谱及核磁共振光谱进行鉴定，确证各活性成分的结构。
(1)二氢欧山芹素(Columbianedin)(C19H20O5)
无色针晶(石油醚-醋酸乙酯)，mp 115-117℃；紫外光下呈蓝紫色荧光；UVλnm326，260，250；IRν(KBr)(cm-1)1727，1618，1267，1113，1066，834；EIMS m/z(％)328(M+)，228，213(100)，83，551H-NMR(CDCl3)δppm1.59(3H，s)，1.63(3H，s)，1.67(3H，s)，1.89(3H，d，J＝8Hz)，3.38(2H，d，J＝9Hz)，5.12(1H，t，J＝9Hz)，5.97(1H，q，J＝8Hz)，6.21(1H，d，J＝9Hz)，6.73(1H，d，J＝8Hz)，7.26(1H，d，J＝8Hz)，7.62(1H，d，J＝9Hz)；13C-NMR(CDCl3)δppm167.1，164.1，161.1，151.3，143.9，137.6，128.9，128.6，113.5，112.9，112.2，106.7，89.2，82.0，27.6，22.3，21.2，20.5，15.6。
(2)甲氧基欧芹素(Osthol)(C15H16O3)
无色针晶(无水乙醇)，mp 82.2-82.8℃，紫外光下呈蓝色荧光；UVλnm257，322；IRν(KBr)(cm-1)1720，1605，1560，1480；EIMS m/z(％)244(M+，100)，228，201，189；1H-NMR(CDCl3)δppm1.66(3H，s)，1.83(3H，s)，3.53(2H，d，J＝7.2Hz)，3.90(3H，s)，5.20(1H，t，J＝7.2Hz)，6.22(1H，d，J＝9Hz)，6.83(1H，d，J＝8Hz)，7.27(1H，d，J＝8Hz)，7.59(1H，d，J＝9Hz)；13C-NMR(CDCl3)δppm161.2，160.3，152.9，143.7，132.6，126.2，121.1，118.1，113.0，113.1，107.3，56.0，25.7，21.9，17.9。
(3)二氢欧山芹醇乙酸酯(Columbianetin acetate)(C16H16O5) 无色棱晶(无水乙醇)，mp.133-134℃，紫外光下呈蓝紫色荧光；UVλnm250，260，325；IRν(KBr)(cm-1)1741，1617，1453，1251，841；EIMS m/z(％)288(M+)，228，213(100)，187，159，131；1H-NMR(CDCl3)δppm1.52(3H，s)，1.57(3H，s)，1.99(3H，s)，3.28(2H，m)，5.15(1H，t)，6.20(1H，d，J＝9.5Hz)，6.74(1H，d，J＝8Hz)，7.27(1H，d，J＝8Hz)，7.64(1H，d，J＝9.5Hz)；13C-NMR(CDCl3)δppm170.1，163.9，161.0，151.3，143.9，128.8，114.5，113.1，112.2，106.6，88.7，82.0，27.5，22.2，21.9，20.9。
(4)花椒内酯(Xanthotoxin)(C12H8O4) 无色针晶(无水乙醇)，mp.142.8-143.6℃，紫外光下呈黄色荧光；UV λnm299，248；IRν(KBr)(cm-1)1705，1675，1580；EIMSm/z(％)216(M+，100)，201，188，173，145，89，63；1H-NMR(CDCl3)δppm4.30(3H，s)，6.37(1H，d，J＝9Hz)，6.82(1H，d，J＝2.5Hz)，7.35(1H，s)，7.68(1H，d，J＝2.5Hz)，7.75(1H，d，J＝9Hz)；13C-NMR(CDCl3)δppm160.4，147.7，146.6，144.3，143.0，132.8，126.1，116.5，114.8，112.9，106.7，61.3。
(5)二氢欧山芹醇(Columbianetin)(C14H14O4)
无色柱晶(无水乙醇)，mp.157.8-158.6℃，紫外光下呈蓝紫色荧光；UV λnm328，261；IRν(KBr)(cm-1)3500，1700，1610；EIMS m/z(％)246(M+)，228，213，187(100)，131，59；1H-NMR(CDCl3)δppm1.24(3H，s)，1.36(3H，s)，1.73(1H，s，加入D2O后消失，-OH)，3.31(2H，m)，4.79(1H，t)，6.19(1H，d，J＝9.5Hz)，6.74(1H，d，J＝8Hz)，7.25(1H，d，J＝8Hz)，7.61(1H，d，J＝9.5Hz)；13C-NMR(CDCl3)δppm163.7，160.9，151.3，143.9，128.7，114.0，113.1，112.3，106.6，91.4，71.8，27.6，26.0，24.0。
(含有独活提取物的软胶囊的制备)本发明的独活提取物可以按常用方法制成通常的口服制剂，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液等剂型。但由于独活的超临界提取物为疏水性成分，在将其作为中间提取物制成制剂过程中，提高其活性成分的生物利用度是需考虑解决的技术问题，本发明考虑到普通固体口服制剂存在溶解度小、口服后吸收较差，从而对血药浓度产生影响，难以达到预期的临床疗效的缺陷。而软胶囊是由亲水性的明胶胶皮包裹着液体状的疏水性药物，这些药物基本是以油溶液、混悬液、糊状物或聚乙二醇溶液等形式所组成。口服后能很快地在消化道内崩解，崩解后的药液迅速广泛地粘附于组织表面，促进活性成分的吸收，从而获得较高的生物利用度。实验证实，软胶囊的生物利用度优于合颗粒的硬胶囊更优于片剂及包衣片。另外软胶囊因其独特的包埋和掩盖作用，制成后还可降低其刺激性。基于上述考虑，本发明将独活提取物制成含混悬液的软胶囊。
本发明独活软胶囊内容物为独活提取物(活性成分)与基质制成的混悬液，其中基质为在作为溶剂的大豆油中加入辅料而形成的。由于独活提取物常温下非常粘稠，基质加入量不宜过少，为保证在较好的流动性的前提下尽量少加基质，本发明提出独活提取物与基质的用量比为(以重量计)约1∶3～5。此外由于独活的超临界CO2提取物室温下为非常粘稠的胶状物，只能部分溶解在大豆油中，故需加入适当的辅料——润湿剂和助悬剂，制成混悬液，在加入辅料的情况下各组分的重量比优选为独活提取物溶剂∶润湿剂∶助悬剂＝1∶3～5∶0.4～0.6∶0.06～0.08。润湿剂一般为表面活性剂，如吐温类，司盘类等。助悬剂可选用能增加分散介质粘度的固体物质，如蜂蜡、单硬酯酸铝、乙基纤维素等。一般润湿剂与助悬剂适当配合较单一助悬剂的效果好。本发明优选采用聚乙二醇-400及聚山梨酯80为润湿剂，使用蜂蜡作为助悬剂。本发明独活软胶囊内容物的优选配方如下(以1000粒计)独活提取物100克大豆油350克聚乙二醇400 50克聚山梨酯804克蜂蜡 6克本发明独活软胶囊囊壳可以使用常用的囊壳，以明胶为胶料，甘油为增塑剂，尼泊金乙酯作防腐剂，以红氧化铁作遮光剂。
本发明独活软胶囊具体可以采用以下制备方法1、独活软胶囊内容物的制备按配方称取各配料，在大豆油中加入助悬剂，加热使助悬剂熔融，放冷后成凝胶状；取独活提取物用润湿剂稀释、搅匀，一并加入凝胶状溶液中，置胶体磨中研匀，得胶囊内容物，备用。
2、独活软胶囊囊壳的制备取尼泊金乙酯用乙醇稀释(优选至浓度为16％)，与明胶、甘油、红氧化铁一并加水浸泡(优选2小时)，使明胶膨胀，然后，置胶锅中加热(优选加热至65℃)，混合均匀，抽真空至没有气泡，用不锈钢筛网(优选使用100目筛)过滤，滤液置贮胶桶中静置(优选在50℃下保持3-4小时)，使泡沫上浮，刮去上浮的泡袜，取下面的胶作为囊壳，保温待用。
3、将上述的软胶囊内容物和囊壳胶液经软胶囊机轧制成软胶囊。
(药理试验)下述药效试验例中所用的药品与试剂包括本发明独活软胶囊(0.42g/粒，每粒含提取物84mg，相当于生药量3.36g)；吉林省辉南天泰药业股份有限公司生产的风湿圣药胶囊(阳性对照药)；沈阳药科大学制药厂生产的角叉菜胶；沈阳试剂厂生产的醋酸；上海试剂厂生产的2，4-二硝基氯苯(DNCB)；上海市生物制品厂生产的晶体牛血清蛋白(BSA)；除特别说明外，试验用药液的溶剂为生理盐水。
试验动物为由沈阳医学院实验动物中心提供的昆明种小鼠，体重18-22g；Wistar大鼠雄性，体重140g-160g；家兔(北京大耳白)体重2.0-2.5kg。
(本发明独活软胶囊对佐剂性关节炎的抑制作用试验)取大鼠60只，雄性，体重140-160g，每组10只，随机分成6组，即对照组(0.5g/kg生理盐水(每kg大鼠用0.5g生理盐水)，以下类同)、风湿圣药预防组(0.5g/kg)、凤湿圣药治疗组(0.5g/kg)，独活预防组(0.15g/kg，含提取物30mg，相当于生药1.2g)、独活治疗I组(0.15g/kg，含提取物30mg，相当于生药1.2g)、独活治疗II组(0.30g/kg，含提取物60mg，相当于生药2.4g)。每只大鼠在右足皮内注射Frenumd’s完全佐剂(自制)0.05ml(内含死结核杆菌0.5mg)，注射佐剂当日即开始给药的为预防组，第8天开始给药的为治疗组，采用灌胃给药，连续观察21天，停药后继续观察3天。注射佐剂前及后3小时且每隔3日用玻管容积法各测左右足容积1次，同侧足给佐剂前后容积之差值为肿胀度，计算出各组肿胀度均值，各给药组与对照组比较并进行t检验，实验结果见表1。
表1本发明独活软胶囊对大鼠佐剂性炎症的影响n＝10

与对照组比较*P＜0.05；**P＜0.01
由表1可以看出，本发明独活预防组能明显抑制佐剂引起的早期炎症反应(第6天后)，并能明显抑制12天以后的再度肿胀，又能抑制另侧足因迟发性超敏反应引起肿胀，作用强度与风湿圣药相当。独活治疗组(I、II)给药后明显抑制了注射佐剂侧足肿胀，并使再度肿胀的程度明显下降，对另侧迟发性超敏反应足肿胀亦有明显的抑制作用，其作用强度与风湿圣药相当。
(本发明独活软胶囊对角叉菜胶引起的足肿胀的抑制作用试验)取雄性大鼠50只，体重140g-160g，每组10只，随机分成5组，即对照组(同容量生理盐水)、独活软胶囊低、中、高剂量组(分别为0.15g/kg、0.30g/kg、0.60g/kg)、风湿圣药组(0.5g/kg)，用玻璃容器法测量右后足正常足容积。采用灌胃给药，每天1次，连续3天，未次给药30分钟后，分别在大鼠右后足皮下注射1％角叉菜胶0.1ml/只致炎，随后1h、2h、4h、6h，按上法测每鼠足容积。并按下述公式分别计算肿胀率(％)和抑制率(％) 计算出各组肿胀率均值，各给药组与对照组比较并进行t检验，实验结果见表2。
表2 本发明独活软胶囊对角叉菜胶引起的大鼠足肿胀的影响

与对照组比较**P＜0.01；( )为抑制率。
由表2可以看出，本发明独活软胶囊低、中、高剂量组可明显抑制角叉菜胶引起的大鼠足肿胀，与对照组比较，差异非常显著，且有一定量效依存关系，其作用与风湿圣药相当略强。
(本发明独活软胶囊对蛋清引起的大鼠足肿胀的抑制作用试验)取雄性大鼠50只，体重140g-160g，每组10只，随机分成5组，参照上述独活软胶囊对角叉菜胶引起的足肿胀的抑制作用试验方法的实验剂量及方法给药，未次给药30分钟后，分别在大鼠右后足皮下注射蛋清0.1ml/只致炎，随后1h、2h、4h、6h，按实施例4方法分别测大鼠右后足容积，并分别计算肿胀率(％)和抑制率(％)，求出各组肿胀率均值，各给药组与对照组比较并进行t检验，实验结果见表3。
表3 本发明独活软胶囊对蛋清引起的大鼠足肿胀的影响

与对照组比较**P＜0.01；( )为抑制率。
由表3可以看出，本发明独活软胶囊低、中、高剂量组对蛋清引起的大鼠足肿胀有非常明显的抑制作用，且呈现出一定的量效关系，其作用强度与风湿圣药相当略强。
(本发明独活软胶囊对牛血清白蛋白(BSA)引起的III型超敏反应的影响试验)取北京大耳白家免30只，雌雄各半，体重2.0g-2.5kg，每组6只，随机分成5组，即对照组(同容量生理盐水)，独活软胶囊低剂量组(78.9mg/kg、含提取物6.6mg，相当于生药0.3g)，独活软胶囊中剂量组(157.8mg/kg、含提取物13.2mg，相当于生药0.6g)，独活软胶囊高剂量组(315.6mg/kg、含提取物26.4mg，相当于生药1.2g)风湿圣药组(240mg/kg)。各组动物分别一次耳缘静脉注射牛血清白蛋白(BSA)250mg/kg，3天后重复注射一次，致家兔急性血清病(III型超敏反应)，其症状为家兔排出大量的蛋白尿。采用灌胃验药，每天1次。连续用药10天，10天后，采用双缩脲法测定尿蛋白的含量(mg/10ml)，搜集家兔24小时尿量(ml/日)。计算出各组家兔尿蛋白均值，尿量均值，各给药组与对照组比较，并进行t检验，结果见表4。
表4本发明独活软胶囊对BSA引起的家兔III型超敏反应的影响(X±SD)

与对照组比较**P＜0.01由表4可以看出，本发明独活软胶囊低、中、高剂量组对BSA引起的家兔III型超敏反应尿蛋白排出量有明显的抑制作用，与对照组比较差异非常显著，其作用强度与风湿圣药相当，对尿量无明显影响。
(本发明独活软胶囊对DNCB引起的小鼠迟发性超敏反应的影响试验)取昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18-22g，每组10只，随机分成5组，即对照组(同容量生理盐水)，独活胶软囊低剂量(0.22g/kg，含提取物18.3mg，相当生药0.86g)，独活软胶囊中剂量(0.44g/kg，含提取物36.6mg，相当生药1.72g)，独活软胶囊高剂量(0.88g/kg，含提取物73.2mg，相当生药3.44g)，风湿圣药组(0.7g/kg)。分别用5％的2，4-二硝基氯苯(DNCB)乙醇液涂于小鼠腹部皮肤致敏，致敏前一天各组动物采用灌胃给药，每天1次，连续9天，致敏前7天后用1％的DNCB(溶于橄榄油中)分别涂于小鼠右耳，一天后分别处死小鼠，称量两耳重量，以小鼠两耳重之差为迟发性超敏反应值，计算出各组小鼠两耳重差值均值，各给药组与对照组比较并进行t检验，实验结果见表5表5本发明独活风湿胶囊对DNCB引起的小鼠迟发性超敏反应的影响

与对照组比较**P＜0.01由表5可以看出，本发明独活软胶囊低、中、高剂量组对DNCB引起的小鼠迟发性超敏反应有明显的抑制作用，且有一定量效依存关系，其作用与风湿圣药相当略强。
(本发明独活软胶囊的镇痛作用试验)取体重18-22g小鼠50只，雌雄各半，每组10只，随机分成5组，各组给药剂量同小鼠超敏反应实验。采用灌胃给药，每天1次，连续3天，末次给药30分钟，每只小鼠分别注射0.6％醋酸0.2ml/只，然后观察15分钟内小鼠扭体次数，计算各组小鼠扭体次数均值，各给药组与对照组比较并进行t检验，实验结果见表6。
表6独活风湿胶囊对醋酸所致小鼠扭体次数的影响

与对照组比较**P＜0.01由表6可以看出，本发明独活软胶囊低、中、高剂量组对醋酸引起的小鼠的扭体反应有明显的抑制作用，其作用强度与风湿圣药相当略强。
(本发明独活软胶囊对棉球肉芽肿形成的影响试验)取Wistar大鼠40只，体重140-160g，每组8只，随机分成5组，各组给药剂量同独活软胶囊对角叉菜胶引起的足肿胀的抑制作用试验。用戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，膝部用碘酒及75％酒精消毒后，切大约1cm的小口，用灭菌消毒的眼科镊子将20mg重的高压灭菌棉球(用青霉素和链霉素混合液0.2ml浸泡烘干)，由切口处放入皮下，随即缝合皮肤。各组均采用灌胃给药，每天1次，连续用药7天，第8天打开原切口，将棉球连同结缔组织一起取出，放入烘箱中70℃烘干，称重。将称得的重量减去棉球重量即为肉芽肿重量。计算出各组肉芽肿重量均值，各给药组与对照组比较并进行t检验，实验结果见表7。
表7本发明独活风湿胶囊对大鼠棉球肉芽肿的影响

与对照组比较**P＜0.01由表7可以看出，独活软胶囊低、中、高剂量组对对大鼠棉球肉芽肿的形成有明显的抑制作用，其作用强度与风湿圣药相当略强。
由以上药理试验可知，本发明独活软胶囊对佐剂性炎症有非常明显的预防和治疗作用，对角叉菜胶、新鲜蛋清引起的炎症反应也有明显的抑制作用，有很好的抗炎作用。对DNCB所致迟发性超敏反应和BSA引起的III型超敏反应有明显的抑制作用，有很好的抑制免疫反应的作用。对热刺激和醋酸刺激引起的疼痛反应有明显的抑制作用，有很好的镇痛作用。对棉球肉芽肿的形成有明显的抑制作用，有很好的抑制增生作用。综上所述，可以认为以上药理试验结果与本发明独活软胶囊的祛风除湿、通痹止痛的功能相符，说明本发明的独活软胶囊是一种对类风湿性关节炎有效的药物。
(实施例)下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但本发明并限于这些实施例。
实施例1独活提取物的制备称取3360g独活(按中国药典2000年版第215页，购自四川省药材公司)，粉碎通过60目筛，投入超临界萃取釜(所用的萃取仪器为美国惠普公司生产的HP7680A超临界流体萃取仪)中，对萃取釜和解析釜进行加热，当萃取温度和解析温度分别达到40℃和65℃时，通过压缩泵对萃取釜和解析釜进行加压，当萃取压力和解析压力分别达到20MPa和5Mpa时，开始进行循环萃取，并保持恒温恒压。萃取3小时后，从解析釜的出料口出料，得独活提取物。去除上层水分，下层浸膏70℃干燥至密度为1.130，制得100克提取物。经检测，每克本提取物中总香豆素的含量不低于500mg，甲氧基欧芹素的含量不低于60mg，二氢欧山芹素的含量不低于120mg。
实施例2独活软胶囊的制备(所用试剂均为市售食品级或药用级)在350ml大豆油中加入6g蜂蜡，加热使蜂蜡熔融，放冷后成凝胶状；取由实施例1制备的100g独活提取物用50ml聚乙二醇-400稀释，加入4ml聚山梨酯80搅匀，一并加入凝胶状溶液中，置胶体磨中研匀，得胶囊内容物备用。取尼泊金内酯0.2g，用乙醇稀释至浓度为16％与明胶250g、甘油85g、红氧化铁3.8g一并加水300ml浸泡2小时，然后加热至65℃，搅拌均匀，抽真空至没有气泡，用100目不锈钢筛网过滤，滤液至贮胶桶中放置3-4小时(保持温度在50℃)，至气泡都浮在表面，取下面的胶作为囊壳备用。将上述的胶囊内容物和囊壳胶液经软囊机轧制软胶囊，制成每粒420mg的软胶囊1000粒。经检测，每粒软胶囊中总香豆素的含量不低于40mg，甲氧基欧芹素的含量不低于6mg。
权利要求
1.独活提取物，其中含有下式(1)-(5)表示的化学活性成分中的至少一种，
2.权利要求1所述的独活提取物的提取方法，其特征在于包括以下步骤将一定粒度的独活粉碎物加入CO2超临界萃取釜中，对萃取釜和解析釜进行加热；当温度达到萃取温度和解析温度时，对萃取釜和解析釜进行加压，当压力分别达到萃取压力和解析压力时，开始进行循环萃取，并保持恒温恒压；萃取一定时间后，从解析釜的出料口出料，得独活提取物。
3.如权利要求2所述的提取方法，其中独活提取物的粒度为通过60目筛，萃取温度为35～50℃，解析温度为55～75℃左右，萃取压力为15～25MPa，解析压力为2～10MPa，萃取时间为2～5小时。
4.如权利要求3所述的提取方法，其中萃取温度为40℃，解析温度为65℃，萃取压力为20Mpa，解析压力为5MPa，萃取时间为3小时。
5.独活软胶囊，由内容物及囊壳组成，内容物由独活提取物、溶剂、润湿剂、助悬剂组成，各组分的重量比为独活提取物∶溶剂∶润湿剂∶助悬剂＝1∶3～5∶0.4～0.6∶0.06～0.08，所述独活提取物为权利要求1所述的独活提取物。
6.独活软胶囊，由内容物及囊壳组成，内容物由独活提取物、溶剂、润湿剂、助悬剂组成，各组分的重量比为独活提取物∶溶剂∶润湿剂∶助悬剂＝1∶3～5∶0.4～0.6∶0.06～0.08，所述独活提取物为权利要求2-4中任一项所述的提取方法制得的提取物。
7.如权利要求5或6所述的独活软胶囊，其中溶剂使用大豆油，润湿剂使用吐温类、司盘类，助悬剂使用蜂蜡、单硬脂酸铝、乙基纤维素。
8.根据权利要求7所述的独活软胶囊，其特征在于1000粒计的软胶囊内容物的组成如下独活提取物 100克大豆油 0.35克聚乙二醇-400 0.05克聚山梨酯80 0.004克蜂蜡 6克
9.权利要求5或6所述的独活软胶囊的制备方法，包括以下步骤(1)独活软胶囊内容物的制备按配方称取各配料，在大豆油中加入助悬剂，加热使助悬剂熔融，放冷后成凝胶状，取独活提取物用润湿剂稀释、搅匀，一并加入凝胶状溶液中，置胶体磨中研匀，得胶囊内容物，备用；(2)独活软胶囊囊壳的制备取尼泊金乙酯用乙醇稀释，与明胶、甘油、红氧化铁一并加水浸泡，使明胶膨胀，然后，置胶锅中加热，混合均匀，抽真空至没有气泡，用不锈钢筛网过滤，滤液置贮胶桶中静置，使泡沫上浮，刮去上浮的泡袜，取下面的胶作为囊壳，保温待用；(3)将上述的胶囊内容物和囊壳胶液经软胶囊机轧制成软胶囊。
全文摘要
本发明涉及独活提取物、其制备方法以及含有该提取物的药物，具体而言，本发明涉及用于治疗类风湿性关节炎的独活提取物，通过超临界提取工艺制备该提取物的方法，以及含有该提取物的药物特别是软胶囊。
文档编号C07D307/00GK1718578SQ20041006880
公开日2006年1月11日 申请日期2004年7月5日 优先权日2004年7月5日
发明者陆蕾, 杨剑, 付霞仙 申请人:上海森泰医药科技有限公司