专利名称：作为c－kit抑制剂的n3－取代的咪唑并吡啶衍生物的制作方法
背景技术：
本发明涉及N3-取代的咪唑并吡啶化合物。具体地，本发明涉及作为c-kit原癌基因(也称为KIT、CD-117、干细胞因子受体、肥大细胞生长因子受体)抑制剂的N3-取代的咪唑并吡啶化合物。
据信，c-kit原癌基因在胚胎发生、黑素生成、血细胞生成、和肥大细胞增生病、胃肠肿瘤和其它固体肿瘤、以及某些白血病包括AML的发病机制中很重要。因此，希望开发作为c-kit受体抑制剂的新型化合物。
许多治疗过度增殖性疾病(癌症)的现行方案利用了抑制DNA合成的化合物。这类化合物的作用机理是对于细胞，尤其是迅速分裂的肿瘤细胞有毒性。因此，它们的广泛毒性对于受体患者是一个问题。但是，已经研究了不通过抑制DNA合成而起作用的其它抗癌药剂方法，以努力增强抗癌作用的选择性，并因此减少有害副作用。
已经知道，通过将细胞的一部分DNA转化为癌基因(也就是该基因被激活后会导致恶性肿瘤细胞的形成)，该细胞可变成癌性的。许多癌基因编码那些作为能引起细胞转化的异常蛋白质-酪氨酸激酶的蛋白。通过不同的路线，正常原癌基因酪氨酸激酶的过度表达也会导致增殖性疾病，有时会导致恶性表型。或者，在相同的细胞类型内，受体酪氨酸激酶及其同源配体的共表达也会导致恶性转化。
受体酪氨酸激酶是巨大的酶，它横跨细胞膜，并具有i)胞外结合区，用于结合生长因子如KIT配体(也称为干细胞因子(SCF)、青灰因子(SLF)或肥大细胞生长因子(MGF))；ii)跨膜区；和iii)胞内部分，作为激酶以将蛋白质内的特异性酪氨酸残基磷酸化。将KIT配体结合到KIT酪氨酸激酶会导致受体的同二聚、KIT酪氨酸激酶活性的激活、和随后各种蛋白质底物的磷酸化，其中许多都是细胞内信号转导的效应物。这些事件能增强细胞增殖或促进增强的细胞存活。对于一些受体激酶，也可能发生受体的异二聚。
已知在普通人类癌症如乳腺癌、头颈癌、胃肠癌如结肠癌、直肠癌或胃癌、白血病、卵巢癌、支气管癌、肺癌或胰腺癌中，经常异常地表达这些激酶。KIT激酶的表达在广泛多样的人恶性病中被证明，所述人恶性病为例如肥大细胞增生病/肥大细胞白血病、胃肠基质瘤(GIST)、小细胞肺癌(SCLC)、鼻及鼻窦(sinonasal)自然杀伤细胞/T-细胞淋巴瘤、睾丸癌(精原细胞瘤)、甲状腺癌、恶性黑素瘤、卵巢癌、腺样囊性癌、急性髓细胞源性白血病(AML)、乳腺癌、儿童T-细胞急性成淋巴细胞白血病、血管肉瘤、间变性大细胞淋巴瘤、子宫内膜癌、和前列腺癌。在几种这些肿瘤以及其它肿瘤的病理生理学中暗示了KIT的激酶活性，所述肿瘤包括乳腺癌、SCLC、GIST、胚细胞瘤、肥大细胞白血病、成神经细胞瘤、AML、黑素瘤和卵巢癌。
已经报道了在肿瘤细胞内激活KIT的几种机理，包括激活突变、受体激酶通过其配体被自分泌和旁分泌激活、蛋白-酪氨酸磷酸酶活性的损失、和通过其它激酶交叉激活。据认为，通过激活突变引发的转化机理包括形成二聚物和增加激酶区的内在活性，这两者都会导致组成型配体非依赖性激酶的活化，可能会改变底物特异性。超过三十种的Kit蛋白激活突变与人体内的高度恶性肿瘤有关。
因此，已知意识到，受体酪氨酸激酶的抑制剂能用作哺乳动物癌细胞生长的选择性抑制剂。例如，GleevecTM(也称为甲磺酸伊马替尼，或STI571)是2-苯基嘧啶酪氨酸激酶抑制剂，能抑制BCR-ABL融合基因产物的激酶活性，最近被美国食品医药管理局批准用于治疗CML。GleevecTM除了能抑制BCR-ABL激酶外，还能抑制KIT激酶和PDGF受体激酶，但是它并非对KIT激酶的所有突变同工型都有效。GleevecTM能抑制Kit配体刺激的MO7e人白血病细胞生长，还能在这些条件下诱导细胞凋亡。相反，GM-CSF刺激的MO7e人白血病细胞生长不受GleevecTM的影响。此外，在近期用GleevecTM治疗GIST患者的临床研究中，GIST是一种在细胞转化中包括KIT激酶的疾病，许多患者表现出显著的改善。
这些研究表明KIT激酶抑制剂如何能治疗其生长依赖于KIT激酶活性的肿瘤。其它激酶抑制剂显示出甚至更强的激酶选择性。例如，4-苯胺并喹唑啉化合物TarcevaTM仅能高效抑制EGF受体激酶，虽然它也能抑制其它受体激酶的信号转导，这可能是因为这些受体与EGF受体异二聚的事实。
虽然抗癌化合物如上述的那些物质对本领域有显著的贡献，但仍然继续需要改进的抗癌药物，希望开发出具有更好选择性或效力、或具有更小毒性或副作用的新型化合物。
美国专利5,990,146和6,218,388描述了苯并咪唑，用于抑制由蛋白质酪氨酸激酶介导的细胞增殖。美国专利6,348,032描述了用苯并咪唑衍生物抑制肿瘤细胞的方法。国际专利公布WO 01/21634描述了苯并咪唑衍生物及其组合库。国际专利公布WO 01/57020描述了Xa因子的吲哚和苯并咪唑抑制剂。国际专利公布WO 00/15222描述了cGMP磷酸二酯酶的稠合吡啶抑制剂。国际专利公布WO 01/12600描述了Xa因子的抑制剂。国际专利公布WO 97/12613描述了治疗和防止炎症和动脉粥样硬化的方法。
美国专利6,316,474描述了2-苄基苯并咪唑和2-杂芳基苯并咪唑NMDA/NR2b拮抗剂。美国专利6,479,508描述了病毒聚合酶抑制剂。美国专利6,444,617描述了稠杂环二羧酸二酰胺衍生物或其盐、除草剂及其用途。美国专利6,087,380、6,414,008、和6,469,039描述了双取代的双环杂环。美国专利5,118,688描述了四氢吡啶酮喹啉酮(tetrahydropyridonquinolone)衍生物。美国专利4,975,435描述了某些用于治疗焦虑的1H-吡咯并[3，4-b]喹啉-1-酮-9-氨基-2，3-二氢衍生物。美国专利6,548,524描述了邻亚磺酰氨基双环杂芳基异羟肟酸。美国专利6,348,474描述了磺酰胺化合物。
美国专利5,972,980和6,001,866描述了治疗和防止炎症和动脉粥样硬化的方法。美国专利5,814,651描述了作为选择性PDEIV抑制剂的儿茶酚二醚。美国专利6,329,383描述了2-氨基-5-嘧啶乙酸化合物。美国专利5,688,809描述了5-杂芳基吲哚衍生物。欧洲专利申请号EP 0846 689描述了苯并咪唑化合物。国际专利公布WO 00/59888描述了N-苯并咪唑基甲基-苯甲酰胺和N-吲哚基甲基-苯甲酰胺以及它们作为CRF调节剂的用途。国际专利公布WO 02/069965描述了作为治疗药的苯并咪唑衍生物。国际专利公布WO 02/30886描述了杂环的血管生成抑制剂。美国专利6,162,804描述了酪氨酸激酶抑制剂。美国专利6,465,484描述了血管生成抑制剂。国际专利公布WO 00/12089描述了新型的血管生成抑制剂。
德国专利公布DE 2244908描述了可选择性渗透的高分子膜。欧洲专利申请0 706 795描述了作为TNF释放抑制剂的儿茶酚二醚化合物。国际专利公布WO 02/076960描述了过渡金属介导的过程。国际专利公布WO 02/059118描述了将氨甲酰的N-(烷氧基化)的方法。国际专利公布WO 02/04425描述了病毒聚合酶抑制剂。国际专利公布WO02/083143描述了CXCR3拮抗剂。国际专利公布WO 01/57019描述了Xa因子的吲哚酮和苯并咪唑酮抑制剂。欧洲专利申请EP 1 085 372描述了具有改善的彩色复制的照相材料。国际专利公布WO 01/14342描述了氨基羰基取代的苯并咪唑衍生物。国际专利公布WO 00/76501描述了IL-8受体拮抗剂。
因此，为了治疗肿瘤，希望开发能抑制Kit的化合物。此外，这些化合物可以在其它激酶如GIST、FLT3、造血R-PTK、PDGFR-β或KDR中具有活性，以在肥大细胞白血病、小细胞肺癌(SCLC)、肥大细胞增生病、白血病、骨髓发育不良病、或血管生成依赖性疾病的治疗中增加效力。
发明概述由式(I)表示的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物可用于治疗肿瘤。
发明详述本发明涉及由式(I)表示的化合物 其中R1为-NR3R31、-NR3C(O)R31、-NR3C(O)OR31、-NR3SO2R31、-OR3、-SR3、-SO2R3、-CO2R3、-CO2H、-CO-NR3R31、-N(C0-8烷基)(C0-8烷基)、或-CN基；除了当Y存在并且m＞1时，则R1为卤素、-CN、NO2、-C0-8烷基、-N(C0-8烷基)(C0-8烷基)、C2-8烯基、C2-8炔基、-NR3R31、NR3C(O)R31、-NR3C(O)OR31、-NR3SO2R31、-OR3、-SR3、-SO2R3、-CO2R3、-CO2H、-CO-NR3R31、环基、或杂环基；R2为H、-C0-8烷基、或-C3-10环烷基；
X为环基或杂环基，其任选地被选自下列的一个或多个取代基取代H、卤素、NR32R33、NR32COR33、NR32CO2R33、NR32SO2R33、OR32、SR32、SO2R32、SO2NR32R33、CO2R32、CO2H、CONR32R33、-C0-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、CN、CF3、OCF3、NO2、氧基、环基或杂环基；Y不存在，或为---O--- 或 其中与X连接的点可以来自所示连接基的左边或右边；Ra和Rb各自独立地为-C0-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、C3-10环烷基、-C3-10环烯基、-C1-8烷氧基、-硫代C1-8烷基、羧基、-N(C0-8烷基)(C0-8烷基)、氧基、或羟基；或者与所连接的C一起形成饱和或部分不饱和的3-10元环，在环结处任选地包含0-4个N、O、S、SO、或SO2；Rc和Rd各自独立地为-C0-8烷基、-C2-8烯基、苄基、或酰基；或者结合起来、或者与Ra或Rb结合，形成饱和或部分不饱和的3-7元环；m为0、1、2、3、4、或5；Z为环基或杂环基，其任选地被选自下列的一个或多个取代基取代卤素、NR34R35、NR34COR35、NR34CO2R35、NR34SO2R35、OR34、SR34、SO2R34、SO2NR34R35、CO2R34、CO2H、CONR34R35、-C0-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、CN、CF3、NO2、氧基、环基或杂环基；或者当X和Y存在时，Z可以是-C1-8烷基或-C1-8烷基-O-C1-8烷基；并且R3、R31、R32、R33、R34和R35独立地为任选地被杂环基或OH取代基取代的C0-8烷基；-C0-8烷基-C3-8环烷基、CF3、C0-8烷基-O-C0-8烷基、-C0-8烷基-N(C0-8烷基)(C0-8烷基)、-C0-8烷基-S(O)0-2-C0-8烷基；或任选地被-C0-8烷基、环基或取代的环基取代基取代的杂环基。
在一个方面，本发明涉及由式(I)表示的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物，其中R1为-CONR3R31；其它变量如上面对式(I)的描述。
在一个实施方案中，本发明涉及由式(I)表示的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物，其中R1为-CONR3R31；X为环基；其它变量如上面对式(I)的描述。
在另一个实施方案中，本发明涉及由式(I)表示的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物，其中R1为-CONR3R31；X为环基；Y不存在；其它变量如上面对式(I)的描述。
在还一个实施方案中，本发明涉及由式(I)表示的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物，其中R1为-CONR3R31；X为环基；Y为 其它变量如上面对式(I)的描述。
在还一个实施方案中，本发明涉及由式(I)表示的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物，其中R1为-CONR3R31；X为环基；Y为 其它变量如上面对式(I)的描述。
在还一个实施方案中，本发明涉及由式(I)表示的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物，其中R1为-CONR3R31；X为环基；Y为 其它变量如上面对式(I)的描述。
在还一个实施方案中，本发明涉及由式(I)表示的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物，其中R1为-CONR3R31；X为环基；Y为 其它变量如上面对式(I)的描述。
用于本文时，除非另有说明，“烷基”以及其它具有前缀“alk”的基团如烷氧基、链烷基、烯基、炔基等是指直链或支链或其组合的碳链。烷基的例子包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基和叔丁基、戊基、己基、庚基等。“烯基”、“炔基”和其它类似术语包括具有至少一个不饱和碳-碳键的碳链。
用于本文时，“C0-4烷基”用于指在直链或支链结构中具有0-4个碳(即0、1、2、3、或4个碳)的烷基。当烷基为端基时，不含碳的烷基为氢。当烷基为桥连(连接)基团时，不含碳的烷基为直接的键。
术语“环烷基”、“碳环”、“环状的”、或“环基”是指不含杂原子的3-10元单环或多环的芳香、部分芳香或非芳香环的碳环，包括单环、双环、和三环饱和碳环，以及稠合和桥连体系。这类稠环体系可以包括部分或全部不饱和的环如苯环，以形成稠环体系如苯并稠合碳环。环烷基包括这些稠环体系如螺旋稠环体系。环烷基和碳环的例子包括C3-8环烷基如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、和十氢化萘、金刚烷、茚满基、1，2，3，4-四氢化萘等。
术语“卤素”包括氟原子、氯原子、溴原子、和碘原子。
除非另有说明，术语“氨基甲酰基”是指-C(O)-NH-或-NH-C(O)-。
术语“芳基”对化学工作者是公知的。优选的芳基是苯基和萘基。
术语“杂芳基”对化学工作者是公知的。该术语包括含1-4个杂原子的5元或6元杂芳环，所述杂原子选自氧、硫、和氮，其中氧和硫彼此不相邻。这些杂芳环的例子是呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、恶唑基、异恶唑基、噻唑基、异噻唑基、三唑基、恶二唑基、噻二唑基、四唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、和三嗪基。术语“杂芳基”包括具有部分或完全不饱和的稠合碳环体系如苯环的杂芳环，以形成苯并稠合杂芳基。例如苯并咪唑、苯并恶唑、苯并噻唑、苯并呋喃、喹啉、异喹啉、喹喔啉等。
除非另有说明，术语“杂环”、“杂环的”、和“杂环基”是等同的，不仅定义为环，而且包含独立选自N、O、和S中的一个或多个原子和它们的氧化物，条件是这些衍生物具有适当和稳定的价态，并排除含O-O、S(O)n-S(O)n、S(O)n-O键(其中n＝0-2)的部分。这些术语包括含一个或两个杂原子的4-8元饱和环，所述杂原子选自氧、硫和氮。杂环的例子包括氮杂环丁烷、氧杂环丁烷、四氢呋喃、四氢吡喃、氧杂环戊烷(oxepane)、氧杂环辛烷(oxocane)、硫杂环丁烷(thietane)、噻唑烷、恶唑烷、氧氮杂环丁烷、吡唑烷、异恶唑烷、异噻唑烷、四氢噻吩、四氢噻喃、硫杂环戊烷(thiepane)、硫杂环己烷(thiocane)、氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、氮杂环戊烷(azepane)、氮杂环己烷(azocane)、[1，3]二恶烷、恶唑烷、哌嗪、高哌嗪、吗啉、硫代吗啉等。杂环的其它例子包括含硫环的氧化形式。因此，四氢噻吩-1-氧化物、四氢噻吩-1，1-二氧化物、硫代吗啉-1-氧化物、硫代吗啉-1，1-二氧化物、四氢噻喃-1-氧化物、四氢噻喃-1，1-二氧化物、噻唑烷-1-氧化物、和噻唑烷-1，1-二氧化物也可以被认为是杂环。术语“杂环”还包括稠环体系，可以包括部分或完全不饱和的碳环如苯环，以形成苯并稠合杂环。例如3，4-二氢-1，4-苯并二恶烯、四氢喹啉、四氢异喹啉等。
本文所述的化合物可以包含一个或多个不对称中心，因此会产生非对映异构体和旋光异构体。本发明包括所有这些可能的非对映异构体以及它们的外消旋混合物、它们的基本上纯的解析(resolved)对映体、所有可能的几何异构体、及其可药用的盐。上面所显示的式I没有在特定位置处的确定立体化学。本发明包括式I的所有立体异构体及其可药用的盐。此外，立体异构体的混合物以及经分离的特异性立体异构体也包括在内。在用于制备这些化合物的合成方法的过程中，或在使用本领域技术人员已知的外消旋或差向异构化方法时，这些方法的产物可以是立体异构体的混合物。
上面所显示的式I在某些位置没有确定的立体化学。本发明包括式I的所有立体异构体及其可药用的盐。此外，立体异构体的混合物以及经分离的特异性立体异构体也包括在内。在用于制备这些化合物的合成方法的过程中，或在使用本领域技术人员已知的外消旋或差向异构化方法时，这些方法的产物可以是立体异构体的混合物。
本发明还包括由式I化合物与可药用载体组成的药物组合物。
优选地，组合物由可药用载体和无毒的治疗有效量的上述式I化合物(或其可药用的盐或其N-氧化物)组成。
而且，在该优选实施方案中，本发明包括通过抑制c-Kit激酶来治疗疾病的药物组合物，所述激酶可以是野生型或变异形式的蛋白质，该药物组合物包括可药用的载体和无毒的治疗有效量的上述式I化合物(或其可药用的盐或其N-氧化物)。
本发明的化合物和组合物能有效治疗哺乳动物如人。
术语“可药用的盐”是指从可药用的无毒碱或酸制备的盐。当本发明的化合物为酸性时，它对应的盐可以从可药用的无毒碱中容易地制得，所述碱包括无机碱和有机碱。源自这些无机碱的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐(二价铜和一价铜)、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐(三价锰和二价锰)、钾盐、钠盐、锌盐等。特别优选的是铵盐、钙盐、镁盐、钾盐和钠盐。源自可药用的有机无毒碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺、以及环胺和取代的胺如天然和合成的取代胺。可以从中形成盐的其它可药用的有机无毒碱包括离子交换树脂，如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N’，N’-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺(glucamine)、葡萄糖胺(glucosamine)、组氨酸、海巴明、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。
当本发明的化合物为碱性时，它对应的盐可以从可药用的无毒酸中容易地制备，所述酸包括无机酸和有机酸。这些酸包括例如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、氢氯酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、双羟萘酸(pamoic acid)、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。特别优选的是柠檬酸、氢溴酸、氢氯酸、马来酸、磷酸、硫酸、甲磺酸和酒石酸。
本发明的药物组合物包括作为活性成分的由式I表示的化合物(或其可药用的盐或其N-氧化物)、可药用的载体和任选的其它治疗成分或佐剂。组合物包括适于口服给药、直肠给药、局部给药、和肠外给药(包括皮下、肌内、和静脉内)的组合物，但是在任何给定的情况下，最合适的途径将取决于被施用活性成分进行治疗的具体宿主、以及疾病的性质和严重性。药物组合物可以方便地存在于单元剂型中，可以通过药学领域公知的任何方法制备。
在实践中，可以按照常规配药技术，将本发明的式I化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物作为活性成分在紧密混合物中与可药用载体联用。载体可以采用广泛多样的形式，这取决于给药如口服或肠外给药(包括静脉内给药)所需的制剂形式。因此，本发明的药物组合物可以作为适于口服给药的离散单元出现，例如分别包含预定量活性成分的胶囊、扁囊剂或片剂。此外，组合物可以作为粉剂、作为颗粒粒、作为溶液、作为水性液体中的悬浮液、作为非水液体、作为水包油型乳剂、或作为油包水型液体乳剂出现。除了上述普通剂型外，还可以通过控释手段和/或递药装置施用由式I表示的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物。可以通过任一种药学方法制备组合物。通常，这些方法包括将活性成分与载体结合的步骤，载体构成一种或多种必需组分。通常，通过将活性成分与液体载体或细碎的固体载体或两者均匀和紧密地掺合，来制备组合物。然后将产物方便地成型为所需的外观。
因此，本发明的药物组合物可以包括可药用的载体与式I化合物或其可药用的盐或其N-氧化物。也可以在药物组合物中包括式I的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物以及与一种或多种其它治疗活性的化合物。
本发明的药物组合物包括可药用的脂质体剂型，该剂型中包含式I的化合物或其可药用的盐或其N-氧化物。
所用的可药用载体可以是例如固体、液体、或气体。固体载体的例子包括乳糖、白土、蔗糖、滑石、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁、和硬脂酸。液体载体的例子是糖浆、花生油、橄榄油、和水。气体载体的例子包括二氧化碳和氮气。
在制备用于口服剂型的组合物时，可以使用任何方便的药用介质。例如水、二醇、油、醇、调味剂、防腐剂、着色剂等可以用于形成口服液体制剂，如混悬剂、酏剂和溶液；而载体如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等可以用于形成口服固体制剂如粉剂、胶囊和片剂。因为易于给药，所以片剂和胶囊是使用固体药用载体的优选口服剂量单元。任选地，可以通过标准的水性或非水技术将片剂包衣。
通过将本发明组合物任选地与一种或多种辅助成分或佐剂压制或模制，可以制备含本发明组合物的片剂。可以按如下制备压制片将自由流动形式的活性成分如粉末或颗粒任选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、表面活性剂或分散剂或其它这种赋形剂混合，在合适的机器中压片。这些赋形剂可以是例如惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；成粒剂和崩解剂，如玉米淀粉、或海藻酸；粘合剂，如淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可以是未包衣的，或者可以用已知技术将它们包衣，以延迟在胃肠道内的崩解和吸收，从而在更长的时间内提供缓释作用。例如，可以使用延时材料如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
在硬明胶胶囊中，将活性成分与惰性固体稀释剂如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合。在软明胶胶囊中，将活性成分与水或油介质如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。可以按如下制备模制片在合适的机器中模塑被惰性液体稀释剂润湿的粉状化合物的混合物。每个片剂优选包含约0.05mg至约5g活性成分，每个扁囊剂或胶囊优选包含约0.05mg至约5g活性成分。
例如，用于向人口服施用的剂型可以包含约0.5mg至约5g活性成分，并混有适当和方便量的载体材料，该载体材料占总组合物的约5％至约95％。单元剂型通常会包含约1mg至约2g活性成分，典型地包含25mg、50mg、100mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、800mg、或1000mg活性成分。
可以将适于肠外给药的本发明药物组合物制成为活性化合物在水中的溶液或悬浮液。可以包括合适的表面活性剂，如羟丙基纤维素。也可以在甘油、液体聚乙二醇、及它们在油中的混合物中制备分散体。此外，可以包括防腐剂以防止微生物的有害生长。
适于注射使用的本发明药物组合物包括无菌水溶液或分散体。此外，组合物可以是无菌粉末形式，以用于这些无菌注射用溶液或分散体的即时制备。在所有情况下，最终的注射形式必须是无菌的，且必须是有效流动的，以便于注射。在制备和保藏条件下，药物组合物必须是稳定的；因此，优选的是，应在保存时能抵抗微生物如细菌和真菌的污染作用。载体可以是溶剂或分散介质，其包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)、植物油、及其合适的混合物。
本发明的药物组合物可以是适于局部应用的形式，例如气雾剂、乳膏、软膏剂、洗剂、扑粉等。此外，组合物可以是适合在透皮装置中使用的形式。可以通过常规加工方法，利用本发明的式I化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物来制备这些剂型。例如，可以按如下制备乳膏或软膏剂将亲水材料与水以及约5wt％至约10wt％的化合物掺混，以产生具有所需稠度的乳膏或软膏剂。
本发明的药物组合物可以是适于直肠给药的形式，其中载体为固体。优选由混合物形成单位剂量的栓剂。合适的载体包括可可油和本领域常用的其它材料。可以按如下方便地形成栓剂首先将组合物与软化或熔化的载体掺混，然后冷却并在模具中成型。
除了上述载体成分外，上述药物剂型还可以适当地包括一种或多种其它载体成分，例如稀释剂、缓冲剂、调味剂、粘合剂、表面活性剂、增稠剂、润滑剂、防腐剂(包括抗氧化剂)等。此外，可以包括其它佐剂，以使剂型与预定受体的血液等渗压。包含式I所述的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物的组合物也可以被制成粉末或液体浓缩物形式。
通常，在治疗上述病症时，每天大约使用约0.01mg/kg体重至约750mg/kg体重的剂量水平，或者每位患者每天使用约0.5mg至约75g。例如，通过按每千克体重每天施用约0.01mg至约500mg化合物，或每位患者每天施用约0.5mg至约50g化合物，可以有效地治疗乳腺癌、头颈癌、和胃肠癌如结肠癌、直肠癌或胃癌。
类似地，通过按每千克体重每天施用约0.01mg至约500mg化合物，或每位患者每天施用约0.5mg至约50g化合物，可以有效地治疗白血病、卵巢癌、支气管癌、肺癌、和胰腺癌。
通过按每千克体重每天施用约0.01mg至约500mg化合物，或每位患者每天施用约0.5mg至约50g化合物，可以有效地治疗肥大细胞增生病/肥大细胞白血病、胃肠基质瘤(GIST)、小细胞肺癌(SCLC)、结肠癌、鼻及鼻窦自然杀伤细胞/T-细胞淋巴瘤、睾丸癌(精原细胞瘤)、甲状腺癌、恶性黑素瘤、卵巢癌、腺样囊性癌、急性髓细胞源性白血病(AML)、乳腺癌、儿童T-细胞急性成淋巴细胞白血病、血管肉瘤、间变性大细胞淋巴瘤、子宫内膜癌、和前列腺癌。
但是应该理解，任何具体患者的具体剂量水平将取决于各种因素，这些因素包括年龄、体重、总体健康、性别、饮食、给药时间、给药途径、排泄速率、药物组合以及正在治疗的具体疾病的严重性。
也可以将本发明的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物与其它癌症治疗化合物有效地联合施用。例如，细胞毒素剂和血管生成抑制剂可以是本发明化合物的有利共用药剂。因此，本发明包括如下组合物，其包括由式I表示的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物，和细胞毒素剂或血管生成抑制剂。每种成分的量可以是单独治疗有效的量，在这种情况下，加成效果能克服对单一治疗有抵抗力的癌症。任一成分的量也可以是亚剂量的，从而使负作用最小化，尤其是在敏感患者体内。
应理解，癌症的治疗取决于癌症的类型。例如，对于第一线治疗，肺癌的治疗与结肠癌或乳腺癌的治疗不同。例如，即使在肺癌中，第一线治疗也不同于第二线治疗，第二线治疗又不同于第三线治疗。可能用含顺铂的方案治疗新诊断的患者。如果失败，会转向第二线治疗如紫杉烷。最后，如果这也失败了，可能会给他们使用酪氨酸激酶EGFR抑制剂作为第三线治疗。此外，地区与地区之间的管理批准程序也不同。因此，地区与地区之间可接受的治疗方案可能不同。然而，本发明的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物可以有益地与其它这种癌症治疗化合物联合或组合起来共同施用。这些其它化合物包括例如各种细胞毒素剂(烷化剂、DNA拓扑异构体酶抑制剂、抗代谢药、微管蛋白结合剂)；血管生成抑制剂；和其它不同类型的治疗药，包括激酶抑制剂如Tarceva、单克隆抗体、和癌疫苗。能够有益地与本发明化合物共同施用的其它这些化合物包括多柔比星、长春新碱、顺铂、卡铂、吉西他滨、和紫杉烷。因此，本发明的组合物包括式I的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物，和抗肿瘤药、抗癌药、抗血管生成药、或化疗药物。
除了治疗癌症外，本发明的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物也可以有效地与其它治疗化合物联合施用。例如，能有效改善不利副作用的治疗药可以有利地与本发明化合物共同施用。
I.在完整细胞内抑制c-Kit的测定使用H526细胞系(ATCC#CRL-5811)，在基于细胞的ELISA测定法中确定化合物抑制c-Kit酪氨酸激酶活性的能力，所述H526细胞系源自人小细胞肺癌。该测定法确定了化合物阻断野生型c-Kit受体蛋白的配体刺激的酪氨酸磷酸化的能力，在H526细胞中内源表达所述c-Kit受体蛋白。在添加干细胞因子(SCF)即c-Kit受体酪氨酸激酶的配体之前，用各种浓度的化合物预先培育细胞。然后制备细胞溶解产物，将c-Kit蛋白质捕获到涂布了c-Kit抗体的96-孔ELISA平板上。然后通过量化抗体结合的程度来监测受体蛋白的磷酸酪氨酸含量，所述抗体仅识别被捕获的蛋白内磷酸化的酪氨酸残基。所用抗体具有共价连接的报告酶(例如辣根过氧化物酶，HRP)，从而可以通过用合适的HRP底物培育来定量测定抗体与磷酸化c-Kit的结合。
所用贮存试剂如下细胞溶解缓冲液50mM Tris(三羧甲基氨基甲烷缓冲液)-HCl，pH7.4150mM NaCl10％甘油1％ Triton X-1000.5mM EDTA1μg/mL亮抑酶肽1μg/mL抑酶肽1mM原钒酸钠抗c-Kit抗体0.5μg/mL抗c-Kit Ab-3(Lab Vision，目录#MS289P1)在50mM碳酸氢钠中，pH9ELISA测定平板通过将100μL抗c-Kit抗体添加到96-孔Microlite-2平板(Dynex，目录#7417)的每个孔内，然后在37℃培育2h，从而制备ELISA测定平板。然后用300μL洗涤缓冲液将孔洗涤两次。
平板洗涤缓冲液含0.5％ Tween-20的PBS(PBST)细胞测定介质含0.1％ BSA的RPMIpY20-HRP25ng/mL pY20-HRP(Calbiochem，目录#525320)的PBS溶液，包含0.5％ Tween-20、5％ BSA、1mM原钒酸钠HRP底物化学发光检测试剂(Pierce，目录#37075)测定方案通过离心来收集在含10％胎牛血清的RPMI中生长的H526细胞培养物，用PBS洗涤两次，悬浮于细胞测定介质中。然后在100μL细胞测定介质中，以7.5×104个细胞/孔将细胞分布到V形底96-孔平板内。
通过在细胞测定介质中稀释，从10mM DMSO原料中制备化合物稀释液，DMSO在测定中的最终浓度为0.1％。向化合物培育孔中添加50μL受试化合物(在0.1nM和100μM之间的浓度下测定化合物)；向阳极和阴性对照孔中添加含0.1％ DMSO的50μL细胞测定介质。然后在37℃下，用化合物将细胞培育3h。然后添加SCF(R&D Systems，目录#255-SC-010)，以刺激Kit受体并诱导其酪氨酸磷酸化。然后，除了阴性对照孔之外，向所有孔中添加10μL 1.6μg/mL SCF的细胞测定介质溶液，将细胞在37℃下另外培育15min。添加冰冷的PBS后，在1000rpm将平板离心5min，通过抽吸除去培养基，通过向每个孔中添加120μL冰冷的细胞溶解缓冲液来溶解细胞团块(pellet)。将平板在冰上放置20min，然后从每个孔中转移100μL细胞溶解物至ELISA测定平板的孔中，在4℃培育16h。
在ELISA平板内培育细胞溶解物后，用300μL洗涤缓冲液将孔洗涤4次，然后向每个孔中添加100μL磷酸酪氨酸检测抗体pY20-HRP，将平板在室温下培育2h。然后用300μL洗涤缓冲液将孔洗涤4次。然后，将50μL化学发光HRP底物添加到每个孔中，用于定量发光检测结合到平板的抗磷酸酪氨酸-HRP共轭物量。
比较在化合物存在时获得的测定信号与阳性和阴性对照(在存在或不存在SCF的情况下培育细胞，不添加化合物)的测定信号，在化合物浓度范围内确定抑制c-Kit受体酪氨酸磷酸化的程度。将这些抑制值拟合到S型剂量-响应抑制曲线，以确定IC50值(即抑制50％ SCF-诱导的c-Kit蛋白质酪氨酸磷酸化的化合物浓度)。
如上面测定中所确定的，在完整H526细胞中，本发明实施例减少了SCF-诱导的Kit酪氨酸磷酸化水平，其IC50值在15μM和0.1nM之间。
实验通过下列示意图中所示的方法，按照下列步骤制备本发明的实施例。本领域的普通技术人中可以容易地选择合适的溶剂、温度、压力和其它反应条件。类似地，可以从商业上得到或容易地制得合适的原材料。
示意
图1 在示意图1中，将硝基吡啶(I，X＝F、Cl、Br、OMS、OTs)与取代苯胺(II)缩合，可以制备二芳基胺(III)。当X＝I、Br、Cl、OTf时，通过利用Pd(0)介导的Buchwald-Hartwig型条件(如Journal of OrganicChemistry(1996)，61(21)，7240中所述的那些)或使用Cu(I)催化剂，也可以偶合苯胺(II)。在酸性条件下，在合适的过渡金属催化剂(钯、铂、钌、镍)、铁、锌或钛的存在下，可以使用例如氢与亚硫酸氢钠或与二水合氯化锡(II)，将III还原得到二氨基吡啶(IV)。通过使IV与相应的羧酸、酰基卤、酸酐或原甲酸酯(例如(MeO)3CH))和酸如甲酸或对甲苯磺酸反应，可以将IV环化为苯并咪唑(V)。在用于还原III的某些条件下，例如铁粉的甲酸溶液，可以在单罐中将III转化为咪唑并[4，5-b]吡啶。而且，通过将原甲酸三甲酯包括到与III的氢化混合物中，能直接将III转化为V。
下面的示意图2显示，也可以通过该过程形成N-芳基-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶(V)(和它们的1H-同分异构体Va)，由此在Pd(0)介导的条件下将咪唑并[4，5-b]吡啶(VIII)芳化，这与Journal of the AmericanChemical Society(2000)，122，7600中公开的内容相似。可以通过本领域技术人员已知的许多方式分离同分异构体V和Va，这些方式包括但不限于色谱法或通过从合适的溶剂中结晶。可以用酸将酰基苯胺(VII)环化，产生咪唑并[4，5-b]吡啶(VIII)，这些酸为例如但不限于乙酸、对甲苯磺酸、盐酸、硫酸或磷酸。接着，可以在本领域技术人员已知的合适偶合剂的存在下，使二氨基吡啶与酰基卤或酸酐或与羧酸反应，制备酰基苯胺(VII)，所述偶合剂为例如但不限于EDC、DCC、HOAt、HOBt、HATU、TBTU、CDI，包括这些溶液相试剂的固体负载形式。当R3＝H时，可以通过用甲酸烷基酯(例如甲酸甲酯)将VI甲酰化而制备化合物如VII。在上述方法中，将VI转化为VII也可以导致部分或全部转化为VIII，例如当R3＝H时，在甲酸的存在下加热。
示意图2 通过适当地选择例如I、II、VI和IX类型的原材料，可以极大程度地将官能团R1和R2包括到目标分子中。当不能通过该过程直接获得最终官能团，或者当该官能团可能在随后制备最终分子的化学过程中受损害时，可以使用替代官能团，然后通过本领域技术人员容易确定的方法在依照顺序的点处转化为最终希望的官能团。例如，这些转化的非详尽列表包括如下转化OMe→OH(BBr3)、NH2→Cl(NaNO2、CuCl)、Br→CN(Pd2(dba)3、Zn(CN)2、DPPF)、Me→CO2H(KMnO4)、CO2H→CO2Me(MeOH、H2SO4)、OH→O烷基(烷基卤、碱)、CO2H→CONR’R”(EDC、HOAt、DIPEA、HNR’R”)、Br→CO2Me(Pd2(dba)3、DPPF、CO(g)、MeOH)、Br→CO2H(tBuLi、CO2)、Ar-H→Ar-Br(NBS)、CN→CO2H(浓H2SO4)、Br→NR’R”(Pd2(dba)3、DPPF、HNR’R”)。将这类官能团包括到目标分子中的更具体和更代表性的例子示于下面的示意图3-5中。
示意图3 在DMAP的存在下，可以使5-溴-3-硝基-2-吡啶酚可以与对甲苯磺酰氯反应，得到甲苯磺酸酯IX，将其与3-氟苯胺缩合，得到仲苯胺X。用铁粉的乙酸溶液还原该中间体，然后用甲酸将产物XI环化为咪唑并[4，5-b]吡啶。用叔丁基锂处理该材料，然后用二氧化碳和酸猝灭中间体阴离子，得到羧酸衍生物XII。用1，1’-羰基二咪唑可以将它与3-氨基甲基吡啶偶合，得到酰胺XIII。
示意图4 类似地，在示意图4中，甲苯磺酸酯IX与4-苄氧基苯胺可以在乙醇中缩合，得到硝基吡啶XIV。可以在回流的乙醇中，用二水合氯化锡(II)将XIV还原，得到二胺XV，在对甲苯磺酸的存在下，用原甲酸三甲酯将XV环化，得到咪唑并[4，5-b]吡啶XVI。作为示意图3中金属化的替换方法，使用氰化锌，通过Pd(0)介导的方式可以导入氰基，但是Rosenmund-von Braun(CuCN)条件也能成功。腈的酸解还有利于脱苄基化以得到XVIII，在碱如氢化钠的存在下，使用例如苄基溴衍生物可以将XVIII烷基化，通过水解处理得到醚XIX。通过1，1’-羰基二咪唑介导，XIX与2-吗啉-4-基乙胺偶合，提供目标化合物XX。
示意图5 用于合成衍生化咪唑并[4，5-b]吡啶的另一种替换路线示于示意图5中。在发红烟硝酸的存在下，将6-羟基烟酸(XXI)硝化，用PCl5/POCl3将产物(XXII)氯化，然后小心地用MeOH猝灭，得到中间体XXIII。可以使XIII与苯胺如上述的4-苄氧基苯胺反应，得到硝基-苯胺基-吡啶如XXIV，可以如前所述将其还原(例如通过催化氢化)并环化(例如用原甲酸三甲酯和PTSA)，得到酚XXVI。可以例如在碳酸钾的存在下，用苄基溴衍生物将该酚烷基化，在酸性条件下将酯基水解，用CDI使之与胺如甲胺偶合，得到目标酰胺XXIX。
定义EDC＝乙基二甲氨基丙基碳二亚胺盐酸盐，HOAt＝1-羟基氮杂苯并三唑，HOBt＝1-羟基苯并三唑，CDI＝1，1’-羰基二咪唑，TBTU＝邻苯并三唑-N，N，N’，N’-四甲基脲(uronium)四氟硼酸盐，HATU＝氮杂苯并三唑基-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐，DIPEA＝二异丙基乙胺，TEA＝三乙胺，DMF＝N，N-二甲基甲酰胺，NMP＝N-甲基吡咯烷酮，DCM＝二氯甲烷，DMAP＝4-二甲氨基吡啶，TFA＝三氟乙酸，Boc＝叔丁氧羰基，Fmoc＝芴基甲氧基羰基，DMSO＝二甲亚砜，OMs＝OSO2Me，OTs＝OSO2-(4-Me)Ph，OTf＝OSO2CF3，DPPF/dppf＝1，1′-双(二苯膦基)二茂铁，dba＝二亚苄基丙酮，NBS＝N-溴丁二酰亚胺，HCl(aq)＝盐酸水溶液，DMA＝N，N-二甲基乙酰胺，MeOH＝甲醇，EtOH＝乙醇，EtOAc＝乙酸乙酯，THF＝四氢呋喃，HOAc＝乙酸，DMF＝N，N-二甲基甲酰胺，HPLC＝高效液相色谱法。
实施例R13-{4-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-(2-吗啉-4-基乙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺a)在N2中，将5-溴-3-硝基吡啶-2-酚(30.00g，0.137mmol)和对甲苯磺酰氯(30.03g，0.158mmol)悬浮于CH2Cl2中，在添加DMAP(3.35g，0.027mmol)之前，滴加三乙胺(38.2mL，0.274mmol)来处理该悬浮液。在室温下搅拌16h后，用CH2Cl2(500mL)稀释混合物，然后用1MHCl(aq)(2×500mL)和盐水(500mL)洗涤。用CH2Cl2(200mL)反萃取水层，合并的有机层用Na2SO4干燥，真空浓缩。由此分离的粗材料在硅胶上进行色谱分离，用50％ EtOAc/己烷洗脱，蒸发得到固体，将固体从50％ EtOAc/己烷中结晶，得到5-溴-3-硝基吡啶-2-基-4-甲基苯磺酸酯。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.51(s，3H)，7.43(dd，2H，J＝8.4，0.4Hz)，7.99(dt，2H，J＝6.8，2.0Hz)，8.52(d，1H，J＝2.4Hz)，8.60(d，1H，J＝2.4Hz)。
b)在N2中，将5-溴-3-硝基吡啶-2-基-4-甲基苯磺酸酯(38.2g，0.102mmol)和4-苄氧基苯胺(24.13g，0.102mmol)悬浮于900mL甲苯中，用三乙胺(14.27mL，0.102mmol)处理，在110℃下将混合物加热16h。然后，用CH2Cl2(1L)稀释反应混合物，用2M HCl(aq)(4×500mL)和盐水(500mL)洗涤，合并的有机提取物用Na2SO4干燥，然后真空浓缩。由此分离的粗产物从乙醇中结晶两次，获得N-[4-(苄氧基)苯基]-5-溴-3-硝基吡啶-2-胺。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.11(s，2H)，7.04(d，2H，J＝9.2Hz)，7.34-7.50(m，7H)，8.48(d，1H，J＝2.4Hz)，8.66(d，1H，J＝2.4Hz)，9.94(bs，1H)。
c)在N2中，将N-[4-(苄氧基)苯基]-5-溴-3-硝基吡啶-2-胺(28.5g，0.071mmol)和氯化锡(II)二水合物(160.67g，0.712mmol)溶于500mL乙醇中，将反应混合物回流加热(70℃)30min。然后向冷却的混合物中添加碳酸氢钠，直到pH大于9.5，然后将混合物通过塞里塑料(celite)过滤，用甲醇洗涤。将合并的有机相真空浓缩，然后在CH2Cl2中再生(re-constituted)，用Na2SO4干燥，真空浓缩，获得N2-[4-(苄氧基)苯基]-5-溴吡啶-2，3-二胺。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.44(bs，2H)，5.07(s，2H)，6.02(bs，1H)，6.97(dt，2H，J＝5.6，3.6Hz)，7.12(d，1H，J＝2.0Hz)，7.32(dt，2H，J＝4.8，0.4Hz)，7.34-7.48(m，5H)，7.84(d，1H，J＝2Hz)；MS(ES+)m/z 371[MH+]，372(35)[MH2+]。
d)将原甲酸三甲酯(9.0mL，81mmol)和对甲苯磺酸(384mg，2.0mmol)添加到N2-[4-(苄氧基)苯基]-5-溴吡啶-2，3-二胺(3g，8.1mmol)的二氯甲烷(40mL)溶液中，在室温下将反应混合物搅拌4h。然后，过滤收集沉淀物，再溶于CH2Cl2中，用10％ NaOH(aq)(200mL)和盐水(200mL)洗涤溶液，然后用MgSO4干燥，真空浓缩，得到3-[4-(苄氧基)苯基]-6-溴-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.14(s，2H)，7.16(d，J＝8.8Hz，2H)，7.33-7.47(m，5H)，7.58(d，J＝8.8Hz，2H)，8.25(s，1H)，8.28(d，J＝2Hz，2H)和8.46(d，J＝2Hz，2H)；MS(ES+)m/z380[Br79MH+]，382[Br81MH+]。
e)在N2中，将3-[4-(苄氧基)苯基]-6-溴-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶(2g，5.26mmol)、Zn(CN)2(371mg，3.16mmol)、Pd2(dba)3(101mg，0.11mmol)和dppf(122mg，0.22mmol)的脱气DMF/H2O(100∶1)(15mL)溶液在120℃搅拌20h。然后将混合物冷却到室温，用NH4Cl∶NH4OH∶H2O(4∶1∶4)(45mL)处理，在80℃下重新加热30min，然后在0℃另外搅拌30min。过滤分离沉淀的固体，用色谱法在硅胶上纯化，用50％ EtOAc/己烷洗脱，得到3-[4-(苄氧基)苯基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-腈。1H NMR(400MHz，D6-丙酮)δ5.16(s，2H)，7.18(d，J＝8Hz，2H)，7.36-7.47(m，5H)，7.57(d，J＝8Hz，2H)，8.41(s，1H)，8.44(d，J＝2Hz，1H)和8.70(d，J＝2Hz，1H)；MS(ES+)m/z 327[MH+]。
f)将3-[4-(苄氧基)苯基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-腈(650mg)的37％ HCl(20mL)溶液在100℃下搅拌48h。然后将反应混合物冷却到室温，过滤收集粗3-(4-羟基苯基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酸。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ6.91(d，J＝8Hz，2H)，7.58(d，J＝8Hz，2H)，8.54(d，J＝2Hz，1H)，8.86(s，1H)和8.9(d，J＝2Hz，1H)；MS(ES+)m/z 256[MH+]。
g)在氮气中，将3-(4-羟基苯基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酸(54mg，0.21mmol)、碘化四丁胺(8mg，0.021mmol)、4-(三氟甲氧基)苄基溴(0.13mL，0.84mmol)和氢化钠(50.4mg，1.26mmol)在DMF(3mL)中的混合物在室温下搅拌4h。然后，添加水(3mL)，用EtOAc(10mL)洗涤混合物。用6N HCl(aq)酸化水相，过滤分离所得沉淀物。真空浓缩EtOAc洗液，将残余物溶于MeOH中，与6N NaOH(aq)搅拌2h，然后酸化(2MHCl(aq))，并过滤产物。真空干燥总固体，得到3-{4-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酸。1H NMR(400MHz，D6-DMSO)δ5.26(s，2H)，7.26(d，J＝8.9Hz，2H)，7.42(d，J＝8.2Hz，2H)，7.63(d，J＝8.2Hz，2H)，7.82(d，J＝8.9Hz，2H)，8.61(d，J＝1.6Hz，1H)，8.95(s，1H)，8.97(d，J＝1.6Hz，1H)和13.2(br.s，1H)；MS(ES+)m/z 430[MH+]。
h)在60℃，将3-{4-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酸(42mg，0.1mmol)、CDI(32.4mg，0.2mmol)和DIPEA(87μL，0.5mmol)在干燥THF(2mL)中的混合物搅拌2h，然后用2-(吗啉-4-基)乙胺(26μL，0.2mmol)处理。在60℃经过另外2h后，将混合物真空浓缩，残余物在硅胶上进行色谱分离，用5％ MeOH/CHCl3洗脱，得到3-{4-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-(2-吗啉-4-基乙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺。1H NMR(400MHz，D4-MeOH)δ2.57(br.s，4H)，2.65(t，J＝8Hz，2H)，3.60(t，J＝8Hz，2H)，3.71(t，J＝8Hz，4H)，5.21(s，2H)，7.22(dd，J＝6.8Hz和2Hz，2H)，7.30(d，J＝8.4Hz，2H)，7.59(d，J＝8.8Hz，2H)，7.71(dd，J＝6.8Hz和2Hz，2H)，8.57(d，J＝1.6Hz，1H)，8.71(s，1H)和8.90(d，J＝1.6Hz，1H)；MS(ES+)m/z 542[MH+]。
按照上面实施例1所述的步骤，利用合适的苯胺和胺分别代替4-苄氧基苯胺(步骤a)和2-(吗啉-4-基)乙胺(步骤h)，制备下面的实施例。
实施例R23-{4-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-(2-甲氧基乙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺。MS(ES+)m/z 487[MH+]。
实施例R33-{3-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-(吡啶-3-基甲基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺。MS(ES+)m/z 520[MH+]。
实施例R43-{3-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-(2-甲氧基乙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺。MS(ES+)m/z 487[MH+]。
实施例R53-{4-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺。MS(ES+)m/z 569[MH+]。
实施例R63-{4-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-(2-二甲氨基乙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺。MS(ES+)m/z 500[MH+]。
实施例R73-{4-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-(2-哌啶-1-基乙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺。MS(ES+)m/z 540[MH+]。
实施例R83-{4-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-(吡啶-3-基甲基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺。MS(ES+)m/z 520[MH+]。
实施例R93-{4-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-甲基-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺。MS(ES+)m/z 443[MH+]。
实施例R103-{4-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-乙基-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺。MS(ES+)m/z 457[MH+]。
实施例R113-{4-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-(2-吡咯烷-1-基乙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺。MS(ES+)m/z 526[MH+]。
实施例R123-{3-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-甲基-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺。MS(ES+)m/z 443[MH+]。
实施例R133-{3-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-乙基-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺。MS(ES+)m/z 457[MH+]。
实施例R14
3-{3-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-(3-甲氧基丙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺。MS(ES+)m/z 501[MH+]。
实施例R153-{3-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-(2-二甲氨基乙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺。MS(ES+)m/z 500[MH+]。
实施例R163-(4-甲氧基苯基)-N-(吡啶-3-基甲基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺。1H NMR(400MHz，CD3OD/CDCl3)δ3.87(3H，s)，4.64(2H)，7.10(2H，d，J＝9.0Hz)，7.36(1H，dd，J＝5.0Hz，7.9Hz)，7.61(2H，d，J＝9.0Hz)，7.83(1H，dt，J＝1.6Hz，7.8Hz)，8.41(1H，dd，J＝1.3Hz，4.8Hz)，8.49(1H，s)，8.55(1H，br)，8.59(1H，d，J＝2.0Hz)，8.95(1H，d，J＝2.0Hz)；MS(ES+)m/z 360[MH+]。
实施例R173-(4-甲氧基苯基)-N-(2-吗啉-4-基乙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.54(4H，br)，2.65(2H，t，J＝6.0Hz)，3.62(2H，四重峰，J＝5.5Hz)，3.89(3H，s)，6.94(1H，br)，7.10(2H，d，J＝8.9Hz)，7.61(2H，d，J＝8.9Hz)，8.35(1H，s)，8.53(1H，d，J＝1.9Hz)，8.91(1H，J＝1.9Hz)；MS(ES+)m/z 382[MH+]。
实施例R183-(4-甲氧基苯基)-N-(吡啶-2-基甲基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.90(3H，s)，4.83(2H，d，J＝4.7Hz)，7.11(2H，d，J＝8.9Hz)，7.24-7.28(1H，m)，7.38(1H，d，J＝7.8Hz)，7.63(2H，d，J＝8.9Hz)，7.73(1H，td，J＝1.6Hz，7.7Hz)，7.98(1H，br)，8.37(1H，s)，8.58(1H，d，J＝4.7Hz)，8.67(1H，d，J＝1.9Hz)，9.04(1H，d，J＝1.9Hz)；MS(ES+)m/z 360[MH+]。
实施例R193-(4-甲氧基苯基)-N-(3-甲氧基丙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.91(2H，五重峰，J＝5.5Hz)，3.41(3H，s)，3.61(2H，t，J＝5.5Hz)，3.66(2H，t，J＝5.4Hz)，3.89(3H，s)，7.10(2H，d，J＝8.9Hz)，7.21(br)，7.61(2H，d，J＝8.9Hz)，8.34(1H，s)，8.52(1H，d，J＝2.0Hz)，8.90(1H，d，J＝1.9Hz)；MS(ES+)m/z 341[MH+]。
作为本文所述咪唑并吡啶的替换路线，也可以使用下列路线来合成关键中间体XXVI。
6-羟基-5-硝基烟酸(XXII)向250mL烧瓶中添加6-羟基烟酸(20g，Aldrich)和100mL发红烟硝酸。将混合物缓慢加热到50℃(浴温度)，在该温度下搅拌8h。然后将温度缓慢升至80℃，将混合物另外搅拌7h。将混合物冷却到室温过夜，过滤收集黄色沉淀物，用水(10mL)洗涤并干燥。LC-MS纯度＞95％。1H NMR(CD3OD，400MHz)δ＝8.45(d，J＝2.5Hz，1H)，8.85(d，J＝2.5Hz，1H)。
6-氯-5-硝基烟酸甲酯(XXIII)将6-羟基-5-硝基-烟酸(1.1g，6.0mmol)和PCl5(3.75g，18.0mmol)的POCl3(5mL)悬浮液在100℃搅拌2h。减压蒸发过量的磷酰氯。将残余物溶于10mL无水醚中，冷却到0℃，然后滴加10mL甲醇。10min后，在室温下减压蒸发醚。用水(40mL)稀释剩余的甲醇溶液，过滤收集浅黄色固体。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ＝4.03(s，3H)，8.77(d，J＝2.1Hz，1H)，9.18(d，J＝2.1Hz，1H)。
6-(4-苄氧基苯基氨基)-5-硝基烟酸甲酯(XXIV)向6-氯-5-硝基-烟酸甲酯(216mg，1.0mmol)和4-苄氧基苯胺盐酸盐(280mg，1.2mmol)的MeOH(10mL)溶液中添加iPr2NEt(0.35mL，2.0mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜，过滤收集从混合物中沉淀的红色固体。MS(ES，Pos.)m/z 380[MH+]。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ＝3.94(s，3H)，5.10(s，2H)，7.03(d，J＝8.8Hz，2H)，7.38-7.46(m，5H)，7.50(d，J＝8.8Hz，2H)，9.01(d，J＝2.0Hz，1H)，9.08(d，J＝2.0Hz，1H)，10.2(br s，1H)。
3-(4-羟基苯基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酸甲酯(XXVI)在氮气气氛中，向XXIV(235mg，0.62mmol)的MeOH(3mL)和乙酸乙酯(3mL)悬浮液中添加10％ Pd-C(47mg)。在室温下将所得混合物氢化过夜。在氮气中，过滤除去催化剂，用甲醇洗涤，减压浓缩滤液，得到白色固体。MS(ES，Pos.)m/z 260[MH+]。将氢化产物悬浮于原甲酸三甲酯(5mL)中，添加对甲苯磺酸一水合物(12mg，0.062mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。过滤收集白色固体。MS(ES，Pos.)m/z 270[MH+]。1H NMR(CD3OD，400MHz)δ＝3.99(s，3H)，7.00(d，J＝8.8Hz，2H)，7.59(d，J＝8.8Hz，2H)，8.71(d，J＝1.8Hz，1H)，8.72(s，1H)，9.05(d，J＝1.8Hz，1H)。
权利要求
1.一种由式(I)表示的化合物 其中R1为-NR3R31、-NR3C(O)R31、-NR3C(O)OR31、-NR3SO2R31、-OR3、-SR3、-SO2R3、-CO2R3、-CO2H、-CO-NR3R31、-N(C0-8烷基)(C0-8烷基)、或-CN基；除了当Y存在并且m＞1时，则R1为卤素、-CN、NO2、-C0-8烷基、-N(C0-8烷基)(C0-8烷基)、C2-8烯基、C2-8炔基、-NR3R31、-NR3C(O)R31、-NR3C(O)OR31、-NR3SO2R31、-OR3、-SR3、-SO2R3、-CO2R3、-CO2H、-CO-NR3R31、环基、或杂环基；R2为H、-C0-8烷基、或-C3-10环烷基；X为环基或杂环基，其任选地被由选自下列的一个或多个取代基取代H、卤素、NR32R33、NR32COR33、NR32CO2R33、NR32SO2R33、OR32、SR32、SO2R32、SO2NR32R33、CO2R32、CO2H、CONR32R33、-C0-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、CN、CF3、OCF3、NO2、氧基、环基或杂环基；Y不存在，或为 或 其中与X连接的点可以来自所示连接基的左边或者右边；Ra和Rb各自独立地为-C0-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、C3-10环烷基、-C3-10环烯基、-C1-8烷氧基、-硫代C1-8烷基、羧基、-N(C0-8烷基)(C0-8烷基)、氧基、或羟基；或者与所连接的C一起形成饱和或部分不饱和的3-10元环，环结处任选地包含0-4个N、O、S、SO、或SO2；Rc和Rd各自独立地为-C0-8烷基、-C2-8烯基、苄基、或酰基；或者结合起来、或者与Ra或Rb结合，形成饱和或部分不饱和的3-7元环；m为0、1、2、3、4、或5；Z为环基或杂环基，其任选地被选自下列的一个或多个取代基取代卤素、NR34R35、NR34COR35、NR34CO2R35、NR34SO2R35、OR34、SR34、SO2R34、SO2NR34R35、CO2R34、CO2H、CONR34R35、-C0-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、CN、CF3、NO2、氧基、环基或杂环基；或者当X和Y存在时，Z可以是-C1-8烷基或-C1-8烷基-O-C1-8烷基；并且R3、R31、R32、R33、R34和R35独立地为任选地被杂环基或OH取代基取代的C0-8烷基；-C0-8烷基-C3-8环烷基、CF3、C0-8烷基-O-C0-8烷基、-C0-8烷基-N(C0-8烷基)(C0-8烷基)、-C0-8烷基-S(O)0-2-C0-8烷基；或任选地被-C0-8烷基、环基或取代的环基取代基取代的杂环基。
2.如权利要求1所述的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物，其中R1为-CONR3R31。
3.如权利要求2所述的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物，其中X为环基。
4.如权利要求3所述的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物，其中Y不存在。
5.如权利要求3所述的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物，其中Y为
6.如权利要求3所述的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物，其中Y为
7.如权利要求3所述的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物，其中Y为
8.如权利要求3所述的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物，其中Y为
9.一种组合物，包括如权利要求1所述的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物，和可药用的载体。
10.一种组合物，包括如权利要求1所述的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物，和抗肿瘤药、抗癌药、抗血管生成药、或化疗药物。
11.一种组合物，包括如权利要求1所述的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物，和细胞毒素癌症治疗药。
12.一种组合物，包括如权利要求1所述的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物，和抑制血管生成的癌症治疗药。
13.一种由下列物质组成的化合物、或其可药用的盐或其N-氧化物3-{4-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-(2-吗啉-4-基乙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺；3-{4-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-(2-甲氧基乙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺；3-{3-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-(吡啶-3-基甲基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺；3-{3-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-(2-甲氧基乙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺；3-{4-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺；3-{4-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-(2-二甲氨基乙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺；3-{4-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-(2-哌啶-1-基乙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺；3-{4-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-(吡啶-3-基甲基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺；3-{4-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-甲基-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺；3-{4-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-乙基-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺；3-{4-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-(2-吡咯烷-1-基乙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺；3-{3-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-甲基-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺；3-{3-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-乙基-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺；3-{3-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-(3-甲氧基丙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺；3-{3-[(4-(三氟甲氧基)苄基)氧]苯基}-N-(2-二甲氨基乙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺；3-(4-甲氧基苯基)-N-(吡啶-3-基甲基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺；3-(4-甲氧基苯基)-N-(2-吗啉-4-基乙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺；3-(4-甲氧基苯基)-N-(吡啶-2-基甲基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺；3-(4-甲氧基苯基)-N-(3-甲氧基丙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-羧酰胺。
14.一种治疗过度增殖性疾病的方法，该方法包括施用治疗有效量的权利要求1的化合物的步骤。
15.如权利要求14所述的方法，还包括施用抗肿瘤药、抗癌药、抗血管生成药、或化学治疗药的步骤。
16.如权利要求14所述的方法，其中过度增殖性疾病为乳腺癌、头癌、或颈癌。
17.如权利要求14所述的方法，其中过度增殖性疾病为胃肠癌。
18.如权利要求14所述的方法，其中过度增殖性疾病为白血病。
19.如权利要求14所述的方法，其中过度增殖性疾病为卵巢癌、支气管癌、肺癌、或胰腺癌。
20.如权利要求14所述的方法，其中过度增殖性疾病为小细胞肺癌或结肠癌。
21.如权利要求14所述的方法，其中过度增殖性疾病为鼻及鼻窦自然杀伤细胞/T-细胞淋巴瘤、睾丸癌(精原细胞瘤)、甲状腺癌、恶性黑素瘤、卵巢癌、腺样囊性癌、血管肉瘤、间变性大细胞淋巴瘤、子宫内膜癌、或前列腺癌。
全文摘要
本发明公开了由式I表示的化合物或其可药用的盐或其N－氧化物，它们可用于治疗癌症。
文档编号C07D233/00GK1839132SQ200480024041
公开日2006年9月27日 申请日期2004年8月16日 优先权日2003年8月21日
发明者阿林多·L·卡斯特利亚诺, 安德鲁·菲利普·克鲁, 董汉清, 拉多斯劳·洛费尔, 李安虎, 裘力, 科林·皮特·桑布鲁克史密斯, 张涛 申请人:Osi制药公司