新的硝基苯基氮芥和硝基苯基氮丙啶醇以及它们相应的磷酸酯和作为靶向细胞毒素剂的用途的制作方法

专利名称：新的硝基苯基氮芥和硝基苯基氮丙啶醇以及它们相应的磷酸酯和作为靶向细胞毒素剂的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的硝基苯基氮芥(mustard)和硝基苯基氮丙啶醇、它们相应的磷酸酯、它们作为靶向细胞毒素剂、作为低含氧量肿瘤中的生物还原药物的用途以及它们与硝基还原酶组合在细胞清除(cell ablation)、包括基因导向性酶前药疗法(GDEPT)和抗体导向性酶前药疗法(ADEPT)中的用途。
背景技术：
肿瘤选择性前药(可在体内选择性转化为更具活性的化合物的相对无活性的化合物)的使用是癌症治疗中一种有价值的概念(参见例如Denny，Eur.J.Med.Chem.(2001)36，577)。
例如，前药可在酶的影响下转化为抗肿瘤药，所述的酶可与将结合肿瘤相关抗原的单克隆抗体结合。这种前药与这种酶单克隆/抗体缀合物的组合代表了一种非常有效的临床药物。这种癌症疗法的途径通常称为“抗体导向性酶前药疗法”(ADEPT)，在WO88/07378中有公开。
另一种称为“病毒导向性酶前药疗法”(VDEPT)的治疗途径已经作为采用前药来治疗患者肿瘤细胞的方法被提出。肿瘤细胞用病毒载体来靶向，这种病毒载体载有编码能激活前药的酶的基因。基因通过组织特异性启动子或增强子序列来被转录性调节。病毒载体进入肿瘤细胞并表达酶，目的在于前药在肿瘤细胞内被转化为活性药物(Huber等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1991)88，8039)。或者，已经使用非病毒方法来传送基因。这些方法包括磷酸钙共沉淀、显微注射、脂质体、直接DNA摄取和受体介导的DNA转送。它们在Morgan & French，Annu.Rev.Biochem.，1993，62；191中进行了综述。术语“GDEPT”(基因导向性酶前药疗法)用于包括病毒和非病毒传送系统(Denny等人，US 6,310,237)。
4-硝基芳族化合物被哺乳动物和细菌两者的黄素蛋白酶还原，它分阶段影响至多6个电子的加入。主要的酶代谢物通常是4-电子还原类型(羟胺)。
大量硝基苯基氮芥和硝基苯基氮丙啶已经作为用于与硝基还原酶组合的基因导向性酶前药疗法(GDEPT)的前药进行了报道。具体而言，CB 1954[5-(氮丙啶-1-基)-2，4-二硝基苯甲酰胺，(1)，见下文]被报道为从E.coli B分离的需氧硝基还原酶NTR(nfsB基因产物)的底物(Boland等人，Biochem.Pharmacol.1991，41，867-875；Anlezark等人，Biochem.Pharmacol，1992，44，2289-2295；Parkinson等人，J.Med.Chem.2000，43，3624)。这种化合物已经用作ADEPT(Knox等人，Biochem.Pharmacol.，1995，49，1641-1647)和GDEPT(Bridgewater等人.Eur.J.Cancer，1995，31A，2362-2370；Bailey等人，Gene Ther.，1996，3，1143-1150；Bailey和Hart，Gene Ther，1997，4，80-81；Green等人，Cancer Gene Ther.，1997，4，229-238)申请、包括临床试验的前药(Chung-Faye等人，Clin.Cancer Res.，2001，7，2662-2668)。
类似地，二硝基苯基氮芥SN 23862(2)同样是NTR的底物，表现出对表达该酶的细胞系的选择性毒性。它通过硝基还原被激活(Palmer等人，J.Med.Chem.，1995，38，1229；Kestell等人，Cancer Chemother.Pharmacol.，2000，46，365-374)。4-SO2Me衍生物(3)也是底物(Atwell等人，Anti-Cancer DrugDes.，1996，11，553)，区域异构体(4)和(5)亦如此(Friedlos等人，J.Med.Chem.，1997，40，1270)。
然而，当这种类型的化合物在低含氧量肿瘤组织中被内源性还原酶激活时，它们作为生物还原性前药不是非常有效，在野生型AA8细胞系中采用克隆源性(clonogenic)分析法在低含氧量条件下所测定的效价比是富氧条件下的2-5倍(Palmer等人，J.Med.Chem.1996，39，2518-2528)。
出于增溶化合物的目的，已经描述了一些氮芥的磷酸类似物。最常知的是磷酸雌莫司汀(Estracyt；6)，已经证明它与各种微管相关蛋白的微管蛋白结合域结合(Moraga等人，Biochim.Biophys.Acta，1992，1121，97-103)，并且已经蒸发它在晚期乳腺癌中有活性(Keren-Rosenberg等人，Semin.Oncol.，1997，24(增刊3)，26-29)，但是还没有证明它可被NTP或低氧激活。另一研究还已经证明磷酸雌莫司汀是放射敏化剂(Kim等人，Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phys，1994，29，555-557)。苯酚氮芥磷酸酯类似物7是在低氧条件下不被激活的羧肽酶底物(Matsui等人，日本专利07082280 A2，1995)，增溶氮芥8已经被描述为磷酸酶抑制剂，但是还没有证明它在低氧条件下被激活(Workman，Chem.-Biol.Interact.，1978，20，103-112)。
本发明的目的是，提供用作靶向细胞毒素剂或生物还原性前药的特定类别的带有短链醇的硝基苯基氮芥和氮丙啶以及它们相应的磷酸酯，或者是至少给公众提供一种有用的选择。
发明简述和详述在第一方面，本发明提供了新的式I磷酸酯化合物及其可药用的盐和衍生物， 其中
X在任意可用的环位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；R代表任选被一个或多个基团取代的低级C1-6烷基，所述的基团包括羟基、氨基及其N-氧化物或者二烷基氨基及其N-氧化物；Y在任意可用的环位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自独立地选自卤素或-OSO2Me；Z在任意可用的环位置代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me。
在优选的实施方案中，式(I)磷酸酯化合物选自以式(Ia)、(Ib)或(Ic)表示的化合物及其可药用的盐和衍生物， 其中Y可代表 或 且其中，n代表1至6，Z代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me；且其中W各自独立地选自卤素或-OSO2Me。
优选式(I)磷酸酯化合物选自磷酸2-[[2-[双(2-溴乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲酰基]氨基]乙基酯；磷酸3-[[5-[双(2-氯乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰基]氨基]丙基酯；磷酸3-[[5-[双(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰基]氨基]丙基酯；
磷酸2-[[2-[双(2-氯乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲酰基]氨基]乙基酯；甲磺酸2-[(2-氯乙基)-2，4-二硝基-6-[[[2-(膦酰氧基)乙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯；磷酸2-({2-[双(2-溴丙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲酰基}氨基)乙基酯；甲磺酸2-[(2-溴乙基)-2，4-二硝基-6-[[[2-(膦酰氧基)乙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯；磷酸2-[[2-[双(2-碘乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲酰基]氨基]乙基酯；甲磺酸2-[(2-碘乙基)-2，4-二硝基-6-({[2-(膦酰氧基)乙基]氨基}羰基)-苯氨基]乙基酯；甲磺酸2-[(2-氯乙基)-2，4-二硝基-3-[[[3-(膦酰氧基)丙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯；磷酸3-({3-[双(2-溴乙基)氨基]-2，6-二硝基苯甲酰基}氨基)丙基酯；甲磺酸2-[(2-溴乙基)-2，4-二硝基-3-[[[2-(膦酰氧基)乙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯；甲磺酸2-[(2-溴乙基)-2，4-二硝基-3-[[[3-(膦酰氧基)丙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯；和甲磺酸2-[(2-碘乙基)-2，4-二硝基-3-[[[3-(膦酰氧基)丙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯。
在第二方面，本发明提供了式(II)醇化合物及其可药用的盐和衍生物， 其中X在任意可用的环位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的环位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自独立地选自卤素或-OSO2Me；Z在任意可用的环位置代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me；
R代表任选被一个或多个基团取代的低级C1-6烷基，所述的基团包括羟基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物；条件是，排除以下化合物， 在优选的实施方案中，式(II)醇化合物选自以式(IIa)、(IIb)或(IIc)表示的化合物及其可药用的盐和衍生物， 其中Y可代表 或 且其中n代表1至6，Z代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me；且其中W各自独立地选自卤素或-OSO2Me，条件是，排除以下化合物，
优选的式(II)化合物选自N-(3-羟基丙基)-5-[双(2-氯乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺；N-(3-羟基丙基)-5-[双(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺；N-(2-羟基乙基)-5-[双(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺；N-(4-羟基丁基)-5-[双(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺；N-(5-羟基戊基)-5-[双(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺；N-(6-羟基己基)-5-[双(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺；5-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-4-(甲磺酰基)-2-硝基苯甲酰胺；甲磺酸2[(2-溴乙基)-5-[[(3-羟基丙基)氨基]羰基]-2，4-二硝基苯氨基]乙基酯；5-[双(2-碘乙基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-2，4-二硝基苯甲酰胺；2-[双(2-氯乙基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[双(2-氯乙基)氨基]-N-(3-羟基丙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(3-羟基丙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[双(2-氯乙基)氨基]-N-(4-羟基丁基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(4-羟基丁基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[双(2-氯乙基)氨基]-N-(5-羟基戊基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(5-羟基戊基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[双(2-氯乙基)氨基]-N-(6-羟基己基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(6-羟基己基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[双(2-溴丙基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；
甲磺酸2-((2-溴乙基)-2-{[(2-羟基丙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯；甲磺酸2-((2-溴乙基)-2-{[(2-羟基乙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯；甲磺酸2-((2-氯乙基)-2-{[(2-羟基乙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯；2-[双(2-碘乙基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；甲磺酸2-((2-碘乙基)-2-{[(2-羟基乙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯；3-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-2，6-二硝基苯甲酰胺；甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(2-羟基乙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯；3-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(3-羟基丙基)-2，6-二硝基苯甲酰胺；甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(3-羟基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯；3-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(4-羟基丁基)-2，6-二硝基苯甲酰胺；甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(4-羟基丁基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯；甲磺酸2-((2-氯乙基)-3-{[(3-羟基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯；和甲磺酸2-((2-碘乙基)-3-{[(3-羟基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯。
在本发明的第三方面，提供了制备通式(I)所示的磷酸酯及其可药用的盐和衍生物的方法，
其中X在任意可用的环位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；R代表任选被一个或多个基团取代的低级C1-6烷基，所述的基团包括羟基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物；Y在任意可用的环位置代表-N-氮丙啶基或-N(CH2CH2W)2，其中W各自独立地选自卤素或-OSO2Me；Z在任意可用的环位置代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me；该方法包括以下步骤(i)使式(II)化合物磷酸化， 其中X在任意可用的环位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的环位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自独立地选自卤素或-OSO2Me；Z在任意可用的环位置代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me；且R代表任选被一个或多个基团取代的低级C1-6烷基，所述的基团包括羟基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物。
在第四方面，提供了制备式(IIa)、(IIb)或(IIc)化合物及其可药用的盐和衍生物的方法，
其中Y可代表 且其中n代表1至6，Z代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me；且其中W1是卤素且W2是-OSO2Me；该方法包括以下步骤使式(IIa’)、(IIb’)或(IIc’)化合物与有效量的甲磺酸银(AgOMs)在溶剂中反应，任选加热，
其中Y可代表 其中W’1和W’2各自为卤素；得到上文定义的式(IIa)、(IIb)或(IIc)化合物。
可以理解，在上文刚刚定义的其中W’1和W’2为碘和/或溴的方法中，碘和/或溴可部分或全部被-OSO2Me替换。当W’1和W’2之一或之二表示氯时，氯是惰性的并且不被-OSO2Me替换。
优选溶剂选自MeCN或其它极性非质子溶剂。
在第五方面，提供了制备式(Ia)、(Ib)或(Ic)化合物及其可药用的盐和衍生物的方法， 其中Y可代表 或 且其中n代表1至6，Z代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me；且其中W各自独立地选自卤素或-OSO2Me，该方法包括以下步骤使式(IIa)、(IIb)或(IIc)所示的化合物及其可药用的盐和衍生物磷酸化，
其中Y代表 或 且其中n代表1至6，Z代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me；且其中W各自独立地选自卤素或-OSO2Me。
在第六方面，提供了通过上文定义的制备方法中任一种所获得的式(I)、式(Ia)、(Ib)或(Ic)或者式(IIa)、(IIb)或(IIc)化合物。
在第七方面，本发明提供了用作适于下述用途的前药的方法，(i)GDEPT(基因导向性酶前药疗法)或ADEPT(抗体导向性酶前药疗法)与至少一种硝基还原酶的组合；或者(ii)用作一种或多种低氧选择性细胞毒素；该方法包括以下步骤对受治疗者的肿瘤细胞给予治疗有效量的如上定义的式(I)化合物或下述式(II)化合物及其可药用的盐和衍生物或者它们的混合物， 其中X在任意可用的环位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的环位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自独立地选自卤素或-OSO2Me；Z在任意可用的环位置代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me；R代表任选被一个或多个基团取代的低级C1-6烷基，所述的基团包括羟基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物。
优选硝基还原酶通过大肠杆菌(E.coli)的nfsB基因或梭菌属(Clostridia)中的直向同源基因来编码。
优选该方法还包括照射肿瘤细胞的步骤。
在第八方面，本发明提供了用作适于GDEPT(基因导向性酶前药疗法)或ADEPT(抗体导向性酶前药疗法)与至少一种硝基还原酶的组合的前药、用作抗癌剂的方法，该方法包括以下步骤以治疗有效量施用如上定义的式(I)化合物或下述式(II)化合物及其可药用的盐和衍生物或者它们的混合物以靶向于受治疗者的肿瘤细胞， 其中X在任意可用的环位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的环位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自独立地选自卤素或-OSO2Me；Z在任意可用的环位置代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me；R代表任选被一个或多个基团取代的低级C1-6烷基，所述的基团包括羟基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物。
优选硝基还原酶通过大肠杆菌的nfsB基因或梭菌属中的直向同源基因来编码。
优选该方法还包括照射肿瘤细胞的步骤。
可以理解，对于ADEPT有必要提供还原辅助因子，因为在细胞外可能不以显著浓度存在。可以想像，可以使用合成的辅助因子通过与细胞内酶类似之处来刺激前药的活化。GDEPT没有这样的问题，因为有数种显著浓度的细胞内还原辅助因子，例如NADH和NADPH。
在本发明的第九方面，提供了采用至少一种硝基还原酶的细胞清除方法，其中该方法包括以下步骤以清除细胞有效量施用如上定义的式(I)化合物或下述式(II)化合物及其可药用的盐和衍生物或它们的混合物， 其中X在任意可用的环位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的环位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自独立地选自卤素或-OSO2Me；Z在任意可用的环位置代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me；R代表任选被一个或多个基团取代的低级C1-6烷基，所述的基团包括羟基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物；其中所述的细胞表达至少一种硝基还原酶。
优选硝基还原酶通过大肠杆菌的nfsB基因或梭菌属中的直向同源基因来编码。
优选清除靶向的细胞是受治疗者的组织中的肿瘤细胞。
采用至少一种硝基还原酶的细胞清除方法优选通过ADEPT或GDEPT技术进行。
优选细胞清除提供了基本上最小的副作用。
在第十方面，本发明提供了一种提供抗癌疗法的方法，其中如上定义的式(I)化合物以治疗有效量施用于受治疗者的肿瘤细胞。
优选所述方法的治疗有效量为所述受治疗者最大耐受剂量的约20％至100％。
优选该方法还包括照射肿瘤细胞的步骤。
在本发明的第十一方面，提供了如下定义的药物组合物，该组合物包括治疗有效量的式(I)化合物或式(II)化合物及其可药用的盐和衍生物或它们的混合物以及可药用的赋形剂、添加剂、载体、缓冲剂或稳定剂， 其中X在任意可用的环位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的环位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自独立地选自卤素或-OSO2Me；Z在任意可用的环位置代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me；R代表任选被一个或多个基团取代的低级C1-6烷基，所述的基团包括羟基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物。
可药用的赋形剂、添加剂、载体、缓冲剂或稳定剂应当优选是无毒的，并且应当对活性成分的效力没有干扰。载体或其它材料的精确性质取决于施用途径，所述的施用途径可以是口服、注射如表皮、皮下或静脉内注射。应当理解，这些因素可容易地由本领域技术人员不需要过多的试验来确定。
口服给药的药物组合物可以是片剂、胶囊、散剂或液体形式。片剂可包含固体载体或添加剂。液体药物组合物通常包含液体载体如水、石油、动物或植物油、矿物油或合成油。可以包括生理盐水溶液、葡萄糖或其它糖溶液或二醇类如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。胶囊可包含固体载体如明胶。
对于静脉内、表皮或皮下注射，活性成分为胃肠道外可接受的溶液的形式，它是无热原的，具有适宜的pH、等张性和稳定性。相关领域的技术人员完全能够采用例如等张溶媒如氯化钠注射液、Ringer’s注射液或乳酸盐Ringer’s注射液来制备适宜的溶液。可以根据需要加入防腐剂、稳定剂、缓冲剂、抗氧化剂和/或其它添加剂。
在本发明的第十二方面，提供了有效量的如上定义的式(I)化合物或下述式(II)化合物及其可药用的盐和衍生物或它们的混合物在制备药物中的用途， 其中X在任意可用的环位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的环位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自独立地选自卤素或-OSO2Me；Z在任意可用的环位置代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me；R代表任选被一个或多个基团取代的低级C1-6烷基，所述的基团包括羟基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物；所述的药物(i)用于GDEPT或(ii)用作低氧选择性细胞毒素以靶向于需要其的受治疗者的癌细胞。
在本发明的第十三方面，提供了有效量的如上定义的式(I)化合物或下述式(II)化合物及其可药用的盐和衍生物或它们的混合物在制备药物中的用途， 其中X在任意可用的环位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的环位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自独立地选自卤素或-OSO2Me；Z在任意可用的环位置代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me；
R代表任选被一个或多个基团取代的低级C1-6烷基，所述的基团包括羟基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物；所述的药物用于细胞清除疗法以靶向于需要其的受治疗者的癌细胞。
虽然本发明的化合物通常用于靶向于人类受治疗者的肿瘤细胞或肿瘤组织，但是它们可用于靶向于其它温血动物受治疗者的肿瘤细胞或组织，例如其它灵长类、农场动物如牛和运动动物及宠物如马、狗和猫。
如说明书全文中所用的术语“治疗有效量”应理解为如上定义的式(I)或式(II)化合物或者如上定义的化合物Ia-Ic或IIa-IIc中任一化合物或其混合物足以对具有癌细胞的受治疗者表现出益处的量。实际的施用量、速率和时间过程将取决于所治疗疾病的性质和严重程度。治疗方案在全科医师和其它医生的能力范围内。
如说明书全文中所用的术语“卤素”包括氯、溴或碘。
应当理解，如上定义的本发明化合物可单独施用或者与其它治疗、特别是放射疗法和细胞毒素化疗药物组合施用，同时还是依次施用取决于所治疗的病症。
如说明书全文中所用的术语“其可药用的衍生物和盐”包括由盐酸、硫酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、草酸、丙二酸、水杨酸、苹果酸、富马酸、琥珀酸、抗坏血酸、马来酸、甲磺酸和羟乙磺酸等形成的酸衍生盐以及由碳酸钠和碳酸钾、氢氧化钠和氢氧化钾、氨、三乙胺和三乙醇胺等形成的碱衍生盐。
如说明书全文中所用的术语“细胞清除”应理解为通过施用被酶如硝基还原酶激活的前药来杀死已经被工程化以表达该酶的细胞。结果，细胞清除可用于通过硝基还原酶的特定酶表达来选择性清除特定的靶细胞或组织，例如它们由组织来特异性地表达，然后可用于将前药激活为活性代谢物来清除特定的靶细胞或组织。(Gusterson等人，Endocrine Related Cancer，1997，4，67-74)表述“基本最小的副作用”应理解为杀死邻近非靶细胞是最少的，因为由如上定义的式(I)或式(II)化合物或者如上定义的化合物Ia-Ic或IIa-IIc中任一化合物或者它们的混合物被酶激活所产生的活化代谢物在靶细胞和非靶细胞之间没有扩散或扩散很少。
式(I)的可药用盐包括式(I)碱性或酸性化合物与有机和无机酸和/或有机和无机碱形成的可药用盐。适于形成盐的酸的实例有盐酸、硫酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、草酸、丙二酸、水杨酸、苹果酸、富马酸、琥珀酸、抗坏血酸、马来酸、甲磺酸、羟乙磺酸等。适于形成盐的碱的实例有碳酸钠和碳酸钾、氢氧化钠和氢氧化钾、氨、三乙胺和三乙醇胺等。
本发明的其它方面由下述仅以举例的方式给出的描述并参考其合成流程从而是显而易见的。
其中X是-CONH-的式(I)化合物的实例可通过流程1所述的方法来制备，其中Z如上文式(I)中定义。
流程1 下述表1a和2a给出了通式(I)和(II)范围内的代表性化合物的物理数据，这些化合物能够通过本发明的方法来制备。
其中Y可代表 或
表1a.母体醇类化合物的代表性实例
Aα-甲基氮芥注释已知化合物的参考文献1.Khan AH，Ross WCJ.抑制肿瘤生长的硝基苯基氮丙啶及相关化合物。
构效关系.II.Chem.-Biol.Int，1971，4，11-22。
2 NZ专利号2407853.共同悬而未决的NZ申请号5218514.Wilson WR，Pullen SM，Hogg A，Helsby NA，Hicks KO，Denny WA.对采用三维细胞培养物的硝基还原酶自杀基因疗法中副作用的定量。Cancer Res.，2002，62，1425-1432。
表1a中化合物可通过流程2a-2k中描述的通用方法来制备，它们在下文实施例1-20中例证。
其中Y可代表
或
表1b.式Ia-Ic磷酸酯的实例
Aα-Me
表1b化合物可通过流程3描述的通用方法来制备，它们在下文实施例26-39中例证。
流程2a 流程2b (i) SOCl2/MeOH；(ii)二乙醇胺；(iii)MsCl/py，然后LiBr；(iv)KOH；(v)(COCl)2/催化剂，DMF，然后2-氨基乙醇流程2c (i)SOCl2/催化剂DMF或(COCl)2/催化剂DMF，然后2-氨基乙醇(ii)SOCl2/催化剂DMF或(COBr)2/催化剂DMF，然后3-氨基-1-丙醇(iii)LiBr(1.4当量)/DMF；(iv)NaI(过量)/MeCN。
流程2d (i)SOCl2/催化剂DMF，然后RNH2；(ii)HN(CH2CH2Cl)2；(iii)LiBr/3-甲基丁酮流程2e (i)二异丙醇胺；(ii)MsCl/Et3N；(iii)1N HCl/THF；(iv)LiBr(过量).
流程2f (i)3，4-二氢-2H-吡喃，p-TsOH；(ii)二乙醇胺；(iii)MsCl/Et3N；(iv)1N HCl/THF；(v)LiBr(1.2eq).
流程2g 流程2h (i)LiCl(1.2eq)(ii)NaI或LiBr(1.2eq)然后MeSO3Ag(1.5eq)流程2i (i)NaI(1.5eq)流程2j
流程2k 流程3 (i)Et2NP(OtBu)2或i-Pr2NP(OtBu)2/1H-四唑，然后mCPBA或H2O2(ii)TFA/CH2Cl2在流程3中，X、Y、Z和R如上文式(I)和(II)中所述。
实施例通过下述实施例1-25(醇)和实施例26-39(磷酸酯)解释说明本发明和实施本发明的最佳模式。
实施例1(流程2a).N-(3-羟基丙基)-5-[双(2-氯乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺(IIa-3)将5-[双(2-氯乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酸[Palmer等人，J.Med.Chem.，1994，37，2175](1)(2.50g，7.1mmol)在含有DMF(2滴)的SOCl2(20mL)中的混悬液回流加热1小时，然后减压浓缩至干，并用苯重蒸。将所得苯甲酰氯粗品溶于Me2CO(50mL)中，将冷(-5℃)溶液用3-氨基-1-丙醇(1.09g，14.5mmol)在水(25mL)中的冷溶液处理。将反应混合物于室温振摇5分钟，然后用水(25mL)稀释，浓缩至一半体积，用CH2Cl2(2×)萃取。有机萃取液用0.1N HCl和水洗涤，然后后处理，得到固体，将其进行硅胶色谱法，用EtOAc洗脱，得到IIa-3(2.37g，82％)mp(EtOAc/i-Pr2O)90-91℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.63(t，J＝5.6Hz，1H，CONH)，8.53(s，1H，H-3)，7.42(s，1H，H-6)，4.46(t，J＝5.1Hz，1H，OH)，3.82(t，J＝5.9Hz，4H，N(CH2CH2Cl)2)，3.68(t，J＝5.9Hz，4H，N(CH2CH2Cl)2)，3.49(q，J＝6.0Hz，2H，CH2OH)，3.29(q，部分模糊，J＝5.9Hz，2H，CONHCH2)，1.68(五，J＝6.7Hz，2H，CH2CH2CH2).分析.(C14H18Cl2N4O6)C，H，N，Cl。
实施例2(流程2a).N-(3-羟基丙基)-5-[双(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺(IIa-8)将粉末状5-[双(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酸(2)(1.10g，2.49mmol)在苯(170mL)中的混悬液于20℃用草酰溴(1.10mL，11.7mmol)和DMF(2滴)处理。将混合物于20℃搅拌2小时，然后减压浓缩，在苯存在下在高真空中重蒸至干。将所得酰基溴溶于Me2CO(20mL)中，溶液用3-氨基-1-丙醇(0.39g，5.19mmol)在水(10mL)中的冷溶液于-5℃处理。将混合物于室温振摇5分钟，然后用水稀释并用EtOAc(2×)萃取。将有机萃取液进行后处理，所得残余物进行硅胶色谱法，用EtOAc洗脱，得到IIa-8(1.06g，85％)mp(EtOAc/i-Pr2O)85-86℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.64(t，J＝5.6Hz，1H，CONH)，8.53(s，1H，H-3)，7.41(s，1H，H-6)，3.77-3.64(m，8H，N(CH2CH2Cl)2)，4.46(br s，1H，OH)，3.49(t，J＝6.3Hz，2H，CH2OH)，3.33-3.25(m，部分模糊，2H，CONHCH2)，1.68(五，J＝6.72Hz，2H，CH2CH2CH2).分析.(C14H18Br2N4O6)C，H，N，Br。
实施例3(流程2a).N-(2-羟基乙基)-5-[双(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺(IIa-7)。
使酰基溴(2)与2-氨基乙醇进行类似反应，得到IIa-7(0.78g，46％)mp(MeOH/EtOAc/pet.醚)151-152℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.73(t，J＝5.7Hz，1H，CONH)，8.53(s，1H，H-3)，7.43(s，1H，H-6)，4.76(t，J＝5.6Hz，1H，OH)，3.77-3.64(m，8H，N(CH2CH2Br)2)，3.53(q，J＝6.0Hz，2H，CH2OH)，3.31(q，部分模糊，J＝6.1Hz，2H，CONHCH2)；分析.(C13H16Br2N4O6)C，H，N，Br。
实施例4(流程2a).N-(4-羟基丁基)-5-[双(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺(IIa-9)。
使酰基溴(2)和4-氨基-1-丁醇在冷Me2CO中进行类似反应，然后进行硅胶色谱法，用EtOAc洗脱，得到IIa-9(69％)，为黄色固体mp(EtOAc/iPr2O)123-124℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.62(t，J＝5.6Hz，1H)，8.53(s，1H)，7.39(s，1H)，4.39(t，J＝5.1Hz，1H)，3.78-3.64(m，8H)，3.47-3.40(m，2H)，3.27-3.20(m，2H)，1，61-1.44(m，4H).分析.(C15H20Br2N4O6)C，H，N，Br。
实施例5(流程2a).N-(5-羟基戊基)-5-[双(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺(IIa-10)。
使酰基溴(2)和5-氨基-1-戊醇在冷Me2CO中进行类似反应，然后进行硅胶色谱法，用EtOAc洗脱，得到IIa-10(66％)，为黄色泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.62(t，J＝5.6Hz，1H)，8.53(s，1H)，7.38(s，1H)，4.34(t，J＝5.1Hz，1H)，3.79-3.64(m，8H)，3.44-3.37(m，2H)，3.26-3.18(m，2H)，1.59-1.29(m，4H)。HRMS(FAB)C16H2379Br2N4O6[M+H+]m/z计算值524.9984，实测值524.9964。
实施例6(流程2a).N-(6-羟基己基)-5-[双(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺(IIa-11)。
使酰基溴(2)和6-氨基-1-己醇在冷Me2CO中进行类似反应，然后进行硅胶色谱法，用EtOAc洗脱，得到IIa-11(72％)，为黄色泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.61(t，J＝5.6Hz，1H)，8.53(s，1H)，7.38(s，1H)，4.31(t，J＝5.2Hz，1H)，3.79-3.64(m，8H)，3.43-3.36(m，2H)，3.27-3.19(m，2H)，1.58-1.26(m，4H)。HRMS(FAB)C17H2579Br2N4O6[M+H+]m/z计算值539.0141，实测值539.0137。
实施例7.(流程2b).5-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-4-(甲磺酰基)-2-硝基苯甲酰胺(IIa-7s)。
将5-氟-4-(甲磺酰基)-2-硝基苯甲酸[Atwell等人，ACDD，1996，11，553](3)在过量SOCl2/催化量DMF中加热，得到酰基氯，与无水MeOH反应，得到5-氟-4-(甲磺酰基)-2-硝基苯甲酸甲酯(4)mp(EtOAc/己烷)134-135℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.49(d，J＝5.9Hz，1H)，8.14(d，J＝9.3Hz，1H)，3.92(s，3H)，3.46(s，3H).分析.(C9H8FNO6S)C，H，N。
将4(1.48g，5.34mm0l)和二乙醇胺(1.40g，13.3mmol)在DMA(6mL)中的混合物于30℃搅拌1小时，然后用EtOAc(60mL)稀释。溶液用盐水(2×)洗涤并减压浓缩。残余物经硅胶色谱法纯化，用EtOAc/MeOH洗脱，然后从EtOAc/iPr2O中重结晶，得到5-[双(2-羟基乙基)氨基]-4-(甲磺酰基)-2-硝基苯甲酸甲酯(5)(1.41g，73％)mp 99-100℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.56(s，1H)，7.73(s，1H)，4.62(t，J＝4.9Hz，2H)，3.89(s，3H)，3.59-3.49(m，8H)，3.45(s，3H).分析.(C13H18N2O8S)C，H，N。
于0℃，将5(1.48g，4.08mmol)在无水吡啶(15mL)中的溶液用MsCl(0.80mL，10.3mmol)逐滴处理。将反应物于0℃搅拌2小时，然后倒入10％NaBr水溶液中。收集所得二甲磺酸酯粗品，用水充分洗涤，干燥，溶于DMF(15mL)中，用NaBr(21.6g，25mmol)于70℃搅拌1.5小时。将冷的混合物倒入水中，所得固体经硅胶色谱法纯化，用CH2Cl2洗脱，然后从CH2Cl2/iPr2O中重结晶，得到5-[双(2-溴乙基)氨基]-4-(甲磺酰基)-2-硝基苯甲酸甲酯(6)(1.47g，74％)mp 161-162℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.58(s，1H)，7.94(s，1H)，3.90(s，3H)，3.82(t，J＝7.0Hz，4H)，3.63(t，J＝6.9Hz，4H)，3.48(s，3H).分析.(C13H16Br2N2O6S)C，H，N。
于10℃将6(1.00g，2.05mmol)在二烷/MeOH(1∶1，20mL)中的溶液用4N KOH水溶液(5mL)处理，并于10℃搅拌45分钟。将混合物用1N HBr水溶液酸化至pH2，减压浓缩至较小体积，然后用饱和NaBr水溶液(20mL)稀释。分离所得半固体，从MeOH/H2O中结晶两次，得到5-[双(2-溴乙基)氨基]-4-(甲磺酰基)-2-硝基苯甲酸(7)(0.70g，72％)
mp 174-176℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.50(s，1H)，7.88(s，1H)，3.79(t，J＝7.0Hz，4H)，3.62(t，J＝7.0Hz，4H)，3.48(s，3H).分析.(C12H14Br2N2O6S)C，H，N。
将7(260mmg，0.55mmol)在无水苯(50mL)中的微细分散的混悬液用(COBr)2(2.13mL，0.20mmol)和催化量DMF处理。混合物搅拌2小时，然后减压浓缩至干，用苯高真空重蒸。所得酰基溴粗品溶于Me2CO(10mL)中，于-5℃用2-氨基乙醇(101mg，1.65mmol)在水(5mL)中的冷溶液处理。将混合物于0℃搅拌5分钟，然后用1N HBr水溶液酸化至pH4，并减压浓缩。将残余物进行硅胶色谱法，用EtOAc洗脱，得到IIa-7s(222mg，78％)mp(EtOAc/iPr2O)126-127℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.75(t，J＝5.6Hz，1H)，8.51(s，1h)，7.68(s，1H)，4.79(t，J＝5.4Hz，1H)，3.76(t，J＝7.1Hz，4H)，3.62(t，J＝7.0Hz，4H)，3.54(q，J＝5.9Hz，2H)，3.48(s，3H)，3.31(D2O交换后，t，J＝6.0Hz，2H)。
HRMS(FAB)C14H2079Br2N3O6S(MH+)m/z计算值515.9440；实测值515.9425。
实施例8(流程2c).甲磺酸2[(2-溴乙基)-5-[[(3-羟基丙基)氨基]羰基]-2，4-二硝基苯氨基]乙基酯(IIa-13)和5-[双(2-碘乙基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-2，4-二硝基苯甲酰胺(IIa-14)。
将5-(双{2-[(甲磺酰基)氧基]乙基}氨基)-2，4-二硝基苯甲酸[制备该化合物的方法在共同悬而未决的NZ申请号521851中公开](9)在过量SOCl2(60mL)和催化量DMF中回流加热1小时。减压蒸发，然后在苯中共沸，得到酰基氯粗品。将它溶于无水Me2CO中，于0℃用0℃的3-氨基-1-丙醇处理5分钟。用0.2N HCl使混合物酸化至pH2-3，浓缩至一半体积，然后加入NaBr固体，然后用EtOAc(2×)萃取。蒸发，残余物进行硅胶色谱法，用EtOAc/MeOH(9∶1)洗脱，得到甲磺酸2-(5-{[(3-羟基丙基)氨基]羰基}{2-[(甲磺酰基)氧基]乙基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯(8)(68％)，为黄色胶状；
1H NMR[(CD3)2SO]δ8.54(t，J＝5.7Hz，1H)，8.53(s，1H)，7.45(s，1H)，4.43(t，J＝5.1Hz，1H)，4.33(t，J＝5.2Hz，4H)，3.69(t，J＝5.2Hz，4H)，3.57(q，J＝5.9Hz，2H)，3.26(D2O交换后，t，J＝7.0Hz，2H)，3.12(s，6H)，1.66(五，J＝6.7Hz，2H)。
HRMS(FAB)C16H25N4O12S(MH+)m/z计算值529.0910；实测值529.0904将8的DMF溶液用LiBr(1.4当量)处理，然后如上所述进行后处理，将产物进行硅胶色谱法，用EtOAc洗脱，得到少量二溴氮芥，用EtOAc/MeOH(19∶1)洗脱，得到IIa-13(31％)，为黄色胶状1H NMR[(CD3)2SO]δ8.60(t，J＝5.6Hz，1H)，8.54(s，1H)，7.44(s，1H)，4.45(t，J＝5.2Hz，1H)，4.33(t，J＝5.1Hz，2H)，3.74(t，J＝5.2Hz，2H)，3.72-3.66(m，4H)，3.49(q，J＝5.9Hz，2H)，3.27(D2O交换后，t，J＝7.0Hz，2H)，3.14(s，3H)，1.68(五，J＝6.7Hz，2H)。HRMS(FAB)C15H2279BrN4O9S(MH+)m/z计算值515.0270；实测值515.0283。
使酰基氯(9)(用(COCl)2/DMF活化)和2-氨基乙醇进行类似反应，得到甲磺酸2-(5-{[(2-羟基乙基)氨基]羰基}{2-[(甲磺酰基)氧基]乙基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯(10)。将10(1.42g，2.76mmol)和NaI(3.3g，22mmol)在无水MeCN(45mL)中的搅拌混合物回流加热1小时，然后减压浓缩。将残余物在EtOAc和水之间分配，有机层用水洗涤并蒸发。将残余物进行硅胶色谱法，用CH2Cl2/EtOAc(1∶4)洗脱，然后从MeOH/EtOAc/i-Pr2O中重结晶，得到IIa-14(2.9g，81％)mp 142-143℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.73(t，J＝5.7Hz，1H)，8.53(s，1H)，7.38(s，1H)，4.76(t，J＝5.5Hz，1H)，3.68(t，J＝6.9Hz，4H)，3.57-3.49(m，2H)，3.39(t，J＝6.9Hz，4H)，3.34-3.26(m，部分模糊，2H).分析.(C13H16I2N4O6)C，H，N。
实施例9.2-(氮丙啶-1-基)-N-(6-羟基己基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIa-1)。
将2-氯-N-(6-羟基己基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(16)[其制备参见下述实施例14](118mg，0.34mmol)和Et3N(200mg)在EtOAc(200mL)中的溶液用氮丙啶(100mg)于室温处理3小时。将混合物用EtOAc稀释，用水洗涤三次，干燥后减压浓缩至约20mL，收集黄色固体，得到101mg产物(84％)；
1HNMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.8Hz，1H)，8.63(m，1H)，8.29(d，J＝2.8Hz，1H)，4.31(m，1H)，3.39(m，2H)，3.25(m，2H)，2.37(s，4H)，1.56(m，2H)，1.43(m，2H)，1.33(m，4H).分析.(C15H20N4O6)C，H，N。
实施例10(流程2d).2-[双(2-氯乙基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-2)和2-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-7)将2-氯-3，5-二硝基苯甲酸(1)(18g，81mmol)用含有一滴DMF的SOCl2(250ml)处理并回流加热6小时。蒸发试剂，然后用苯共沸，得到酰基氯粗品，将其溶于THF(200mL)中，滴加至由25mL 2-氨基乙醇在THF(400mL)中组成的溶液中，用干冰丙酮浴冷却。搅拌20分钟后，将反应混合物用1NHCl酸化至pH4-5，蒸发大部分溶剂，将残余物在水(250mL)和EtOAc(300mL)之间分配。水相用EtOAc萃取，所合并的有机相用饱和NaHCO3、1N HCl和盐水分别洗涤，然后浓缩，得到2-氯-N-(2-羟基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(2)21.34g(91％)，为白色固体mp(EtOAc)159-160℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.99(d，J＝2.6Hz，1H，H-4)，8.86(m，1H，CONH)，8.56(d，J＝2.6Hz，1H，H-6)，4.83(m，1H，OH)，3.54(m，4H).分析.(C9H8ClN3O6)C，H，N。
于50℃将12(1.52g，5.3mmol)和Et3N(4mL)在p-二烷(60mL)中的溶液用N，N-双(2-氯乙基)胺盐酸盐(3.0g，16.5mmol)处理24小时。将混合物倒入水中，用EtOAc萃取，得到粗品，将其进行硅胶色谱法。用EtOAc/石油醚(4∶1)洗脱并将洗脱液减压浓缩，得到溶于最少量EtOAc中的油性残余物。缓慢加入石油醚直至开始变浑浊，将溶液静置过夜，沉淀出2-[双(2-氯乙基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-2)(2.07g，100％)，为黄色晶体mp(EtOAc/石油醚)109-111℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.73(d，J＝2.6Hz，1H，H-4)，8.72(m，1H，CONH)，8.34(d，J＝2.6Hz，1H，H-6)，4.83(m，1H，OH)，3.72(m，4H，2xCH2Cl)，3.55(m，2H)，3.42(m，4H，2xCH2N)，3.34(m，2H)；13CNMRδ165.3，145.8，145.3，141.0，136.3，127.5，122.1，59.1，54.1，42.1，41.5。
HRMS(FAB)[MH+]C13H1735Cl2N4O6m/z计算值395.0525；实测值395.0525将IIb-2(1.20g，3.0mmol)和LiBr(5.0g，58mmol)在3-甲基-2-丁酮(20mL)中的溶液回流加热6小时，然后冷却并倒入水中。用EtOAc萃取，得到粗品(＜95％纯度)，将其用在3-甲基-2-丁酮中的LiBr(5.0g，58mmol)另外处理4小时，然后进行后处理，进行硅胶色谱法，用EtOAc/石油醚(由1∶1至1∶0)洗脱，得到IIb-7(1.39g，95％)mp(EtOAc/石油醚)105-108℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.7Hz，1H，H-4)，8.73(m，1H，CONH)，8.34(d，J＝2.7Hz，1H，H-6)，4.83(m，1H，OH)，3.59-3.29(m，12H)；13C NMRδ165.3，145.4，145.3，141.1，136.5，127.4，122.1，59.3，53.9，42.1，30.0。
HRMS(FAB)C13H1779Br2N4O6[M+H+]m/z计算值482.9515；实测值482.9492；分析(C13H16Br2N4O6)H，N，Br；C实测值32.9；计算值32.3％。
实施例11(流程2d).2-[双(2-氯乙基)氨基]-N-(3-羟基丙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-3)和2-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(3-羟基丙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-8)。
于0℃使酰基氯(11)(17g)与3-氨基丙醇(7.5g)在Me2CO(120mL)中如上所述进行反应，得到2-氯-N-(3-羟基丙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(13)(5.06g，26％)mp(EtOAc/石油醚)120-121℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.99(d，J＝2.6Hz，1H，H-4)，8.79(m，1H，CONH)，8.51(d，J＝2.6Hz，1H，H-6)，4.50(m，1H，OH)，3.49(m，2H)，3.32(m，2H)，1.70(m，2H).分析.(C10H10ClN3O6)C，H，N。
将13(1.39g，4.58mmol)和Et3N(4mL)在p-二烷(60mL)中的溶液用N，N-双(2-氯乙基)胺盐酸盐(2.9g，16.0mmol)于50℃处理24小时。如上所述进行后处理，得到IIb-3(1.84g，100％)mp(EtOAc/石油醚)89-91℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.7Hz，1H，H-4)，8.71(m，1H，CONH)，8.30(d，J＝2.7Hz，1H，H-6)，4.52(m，1H，OH)，3.71(m，4H，2xCH2Cl)，3.50(m，2H)，3.42(m，4H，2xCH2N)，3.32(m，2H)，1.71(m，2H)；13C NMR δ165.1，145.7，145.5，141.0，136.4，127.3，122.1，58.4，54.1，41.5，36.7，31.8。
HRMS(FAB)C14H1935Cl2N4O6[M+H+]m/z计算值409.0682；实测值409.0678。
如上所述，用在3-甲基-2-丁酮中的LiBr处理IIb-3两次，得到IIb-8(74％产率)mp(EtOAc/石油醚)89-94℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.7Hz，1H，H-4)，8.72(m，1H，CONH)，8.30(d，J＝2.7Hz，1H，H-6)，3.77-3.44(m，12H)，1.70(m，2H)；13C NMR δ165.1，145.5，145.3，141.2，136.5，127.3，122.1，58.4，54.0，36.7，31.8，29.9。HRMS(FAB)C14H1979Br2N4O6[M+H+]m/z计算值496.9671；实测值496.9658。
实施例12(流程2d).2-[双(2-氯乙基)氨基]-N-(4-羟基丁基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-4)和2-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(4-羟基丁基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-9)。
使酰基氯(11)(2.65g，10mmol)与4-氨基丁醇(1.9g)如上所述进行反应，然后用1N HCl酸化至pH4-5，蒸发大部分溶剂，得到残余物。将其在水(50mL)和EtOAc(100mL)之间分配。将水相用EtOAc萃取，所合并的有机相用饱和NaHCO3、1N HCl和盐水分别洗涤，然后浓缩，得到2-氯-N-(4-羟基丁基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(14)1.11g(35％)mp(EtOAc)121-124℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.98(d，J＝2.7Hz，1H)，8.79(m，1H)，8.52(d，J＝2.7Hz，1H)，4.43(m，1H)，3.43(m，2H)，3.26(m，2H)，1.54(m，4H)；13C NMRδ162.6，148.4，145.9，140.4，128.2，125.8，120.4，60.2，39.1，29.8，25.3.分析.(C11H12ClN3O6)C，H，N。
将14(0.75g，2.3mmol)和Et3N(2mL)在p-二烷(30mL)中的溶液用N，N-双(2-氯乙基)胺盐酸盐(1.5g，8.0mmol)于50℃处理24小时。将混合物倒入水中，用EtOAc萃取，得到粗品，将其进行硅胶色谱法。用EtOAc/石油醚(4∶1)洗脱，得到IIb-4(0.99g，100％)，为黄色泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.71(d，J＝2.8Hz，1H)，8.69(m，1H)，8.27(d，J＝2.8Hz，1H)，4.37(m，1H)，3.70(m，4H)，3.38(m，6H)，3.25(m，2H)，1.56(m，2H)，1.47(m，2H)；13C NMR δ165.0，145.7，145.5，141.0，136.4，127.2，122.0，60.2，54.2，41.5，39.2，29.8，25.2。
HRMS(FAB)C15H2135Cl2N4O6[M+H+]m/z计算值423.0838；实测值423.0847。
将IIb-4(0.96g，3.04mmol)和LiBr(5g)在3-甲基-2-丁酮(15mL)中的溶液回流加热6小时，然后冷却并倒入水中。用EtOAc萃取，得到粗品(＜95％纯度)，将其用在3-甲基-2-丁酮中的LiBr(5g)再另外处理4小时，然后进行后处理并进行硅胶色谱法，用EtOAc/石油醚(由1∶1至3∶1)洗脱，得到IIb-9(1.01g，87％)，为黄色泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.8Hz，1H)，8.72(m，1H)，8.28(d，J＝2.8Hz，1H)，3.60-3.26(m，12H)，1.58(m，2H)，1.49(m，2H)；13C NMR δ165.0，145.6，145.2，141.2，136.5，127.2，122.0，60.2，54.1，39.2，29.9，29.8，25.2。
HRMS(FAB)C15H2179Br2N4O6[M+H+]m/z计算值510.9828；实测值510.9832。
实施例13(流程2d).2-[双(2-氯乙基)氨基]-N-(5-羟基戊基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-5)和2-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(5-羟基戊基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-10)。
使酰基氯(11)和5-氨基戊醇如上所述进行类似反应，得到2-氯-N-(5-羟基戊基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(15)，1.3g(39％)，mp(EtOAc)105-108℃；1.3g(39％)，mp(EtOAc)105-108℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.98(d，J＝2.7Hz，1H)，8.79(m，1H)，8.50(d，J＝2.7Hz，1H)，4.35(m，1H)，3.39(m，2H)，3.26(m，2H)，1.54(m，2H)，1.44(m，2H)，1.36(m，2H)；13C NMRδ162.7，148.4，145.9，140.4，128.2，125.8，120.4，60.5，39.1，32.0，28.4，22.8.分析.(C12H14ClN3O6)C，H，N。
于50℃将15(0.63g，2.3mmol)和Et3N(2mL)在p-二烷(30mL)中的溶液用N，N-双(2-氯乙基)胺盐酸盐(1.5g，8.0mmol)处理24小时。将混合物倒入水中，用EtOAc萃取，得到粗品，将其进行硅胶色谱法。用EtOAc/石油醚(4∶1)洗脱，得到IIb-5(0.82g，100％)，为黄色泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.73(d，J＝2.8Hz，1H)，8.69(m，1H)，8.28(d，J＝2.8Hz，1H)，4.32(m，1H)，3.70(m，4H)，3.40(m，6H)，3.25(m，2H)，1.55(m，2H)，1.47(m，2H)，1.37(m，2H)；13C NMR δ165.0，145.7，145.5，141.0，136.4，127.2，122.0，60.5，54.2，41.5，39.3，32.0，28.3，22.9。
HRMS(FAB)C16H2335Cl2N4O6[M+H+]m/z计算值437.0995；实测值437.0991.
使IIb-5(1.3g)和LiBr进行类似反应，得到IIb-10(1.35g，86％)，为黄色泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.8Hz，1H)，8.71(m，1H)，8.28(d，J＝2.8Hz，1H)，3.60-3.26(m，12H)，1.55(m，2H)，1.48(m，2H)，1.37(m，2H)；13C NMRδ165.0，145.6，145.2，141.2，136.5，127.2，122.0，60.5，54.1，39.3，32.0，29.8，28.4，22.9。
HRMS(FAB)C16H2379Br2N4O6[M+H+]m/z计算值524.9984；实测值524.9975。
实施例14(流程2d).2-[双(2-氯乙基)氨基]-N-(6-羟基己基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-6)和2-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(6-羟基己基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-11)。
使酰基氯(11)和6-氨基己醇如上所述进行类似反应，得到2-氯-N-(6-羟基己基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(16)，0.9g(26％)，mp(EtOAc)88-91℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.98(d，J＝2.7Hz，1H)，8.78(m，1H)，8.49(d，J＝2.7Hz，1H)，4.32(m，1H)，3.39(m，2H)，3.26(m，2H)，1.54(m，2H)，1.44(m，2H)，1.34(m，4H)；13CNMR δ162.7，148.4，145.9，140.4，128.2，125.8，120.4，60.5，39.1，32.3，28.6，26.2，25.1.分析.(C13H16ClN3O6)C，H，N。
于50℃将16(0.67g，2.5mmol)和Et3N(2mL)在p-二烷(30mL)中的溶液用N，N-双(2-氯乙基)胺盐酸盐(1.5g，8.0mmol)处理24小时。将混合物倒入水中，用EtOAc萃取，得到粗品，将其进行硅胶色谱法。用EtOAc/石油醚(4∶1)洗脱，得到IIb-6(0.87g，100％)，为黄色泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.73(d，J＝2.8Hz，1H)，8.70(m，1H)，8.28(d，J＝2.8Hz，1H)，4.31(m，1H)，3.70(m，4H)，3.38(m，6H)，3.25(m，2H)，1.54(m，2H)，1.40(m，2H)，1.32(m，4H)；13C NMRδ165.0，145.7，145.6，141.0，136.4，127.2，122.0，60.5，54.2，41.5，39.2，32.3，28.5，26.3，25.1。
HRMS(FAB)C17H2535Cl2N4O6[M+H+]m/z计算值451.1151；实测值451.1154。
使IIb-6(0.97g)和LiBr进行类似反应，得到IIb-11(0.96g，81％)，为黄色泡沫；
1H NMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.8Hz，1H)，8.70(m，1H)，8.28(d，J＝2.8Hz，1H)，3.60-3.26(m，12H)，1.54(m，2H)，1.43(m，2H)，1.32(m，4H)；13C NMRδ165.0，145.6，145.2，141.2，136.5，127.2，122.0，60.6，54.1，39.2，32.4，29.9，28.5，26.3，25.1。
HRMS(FAB)C17H2579Br2N4O6[M+H+]m/z计算值539.0141；实测值539.0135。
实施例15(流程2e).2-[双(2-溴丙基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-7a)。
使2-氯-3，5-二硝基-N-[2-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)乙基]苯甲酰胺(17)(1.02g)[制备方法参见共同悬而未决的NZ专利号521851]和二异丙醇胺(0.8g)如上所述进行反应，得到2-[双(2-羟基丙基)氨基]-3，5-二硝基-N-[2-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)乙基]苯甲酰胺(18)(1.29g，100％)为黄色泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ9.22(br，1H)，8.66(d，J＝2.8Hz，1H)，8.29(d，J＝2.8Hz，1H)，4.99(m，1H)，4.85(br，1H)，4.62(br，1H)，3.94(m，2H)，3.77(m，2H)，3.53(m，4H)，3.26(m，2H)，1.48(m，10H)，0.98(m，6H)；13CNMRδ166.5，147.8，142.4，138.2，132.6，128.8，123.8，98.1，64.8，63.5，61.5，60.1，30.1，25.0，20.5，20.2，19.1。
HRMS(FAB)C20H31N4O9[M+H+]m/z计算值471.2091；实测值471.2089.
使18和MsCl如上所述进行反应，得到甲磺酸1-甲基-2-[{2-[(甲磺酰基)氧基]丙基}-2，4-二硝基-6-({[2-(四氢-2H)吡喃-2-基氧基)乙基]氨基}羰基)苯氨基]乙基酯(19)(2.52g，100％)为黄色泡沫；将其直接用于下一步骤。
将19(2.52g，4.03mmol)在THF(150mL)中的溶液用1N HCl(100mL)处理，将溶液于20℃搅拌1小时，然后用水稀释(100mL)，用饱和NaHCO3中和，并用EtOAc(3×80mL)萃取。所合并的有机相用盐水洗涤并干燥，蒸发溶剂，残余物经硅胶色谱法纯化，用EtOAc/MeOH(100∶1)洗脱，得到甲磺酸2-(2-{[(2-羟基乙基)氨基]羰基}{2-[(甲磺酰基)氧基]丙基}-4，6-二硝基苯氨基)-1-甲基乙基酯(20)(0.80g，37％)为黄色泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.94(m，1H)，8.72(m，1H)，8.35(m，1H)，4.92(m，2H)，3.56(m，2H)，3.30(m，6H)，3.16(s，6H)，1.32(m，6H)；13C NMRδ165.9，145.8，143.4，139.4，133.6，128.0，123.1，76.3，59.2，57.3，42.2，37.7，18.6。
HRMS(FAB)C17H27N4O12S2[M+H+]m/z计算值543.1067；实测值543.1074。
于60℃将20(0.52g，0.96mmol)用在EtOAc(50mL)中的LiBr(0.5g，5.8mmol)处理3小时，将产物进行硅胶色谱法，用EtOAc/石油醚(由2∶1至1∶0)洗脱，得到IIb-7a(0.31g，62％)为黄色固体mp(EtOAc/石油醚)127-130℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.91(m，1H，CONH)，8.70(d，J＝2.8Hz，1H，H-4)，8.32(d，J＝2.8Hz，1H，H-6)，4.80(m，1H)，4.42(m，2H)，3.55(m，4H)，1.62(m，6H)；13C NMRδ165.8，144.8，143.5，139.6，133.6，128.0，122.9，60.6，59.2，47.9，42.2，23.4.分析.(C15H20Br2N4O6)C，H，N。
实施例16(流程2f).甲磺酸2-((2-溴乙基)-2-{[(2-羟基丙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯(IIb-13).
将13(1.22g，4.0mmol)在50mL CH2Cl2中的溶液在冰浴中冷却，加入3，4-二氢-2H-吡喃(1.0mL)和对甲苯磺酸(0.1g)。将反应混合物搅拌2小时，然后减压浓缩。残余物进行硅胶色谱法，用EtOAc/石油醚(由1∶2至2∶1)洗脱，得到2-氯-3，5-二硝基-N-[2-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙基]苯甲酰胺(21)(1.45g，94％)为浅黄色油；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.99(d，J＝2.7Hz，1H，H-4)，8.81(m，1H，CONH)，8.51(d，J＝2.7Hz，1H，H-6)，4.57(m，1H)，3.72(m，2H)，3.46-3.25(m，4H)，1.82-1.44(m，8H).13C NMRδ162.7，148.4，145.9，140.3，128.2，125.8，120.5，98.0，64.2，61.3，36.5，30.2，28.9，24.9，19.1。
HRMS(FAB)C15H1935ClIN3O7[M+H+]m/z计算值388.0912；实测值388.0915。
使21(1.45g，3.75mmol)和二乙醇胺(1.67g)如上所述进行反应，得到2-[双(2-羟基乙基)氨基]-3，5-二硝基-N-[2-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙基]苯甲酰胺(22)(1.62g，95％)为黄色泡沫；
1H NMR[(CD3)2SO]δ8.96(m，1H，CONH)，8.66(d，J＝2.8Hz，1H，H-4)，8.31(d，J＝2.8Hz，1H，H-6)，4.95(m，2H)，4.56(m，1H)，3.79-3.16(m，14H)，1.80-1.45(m，8H)；13C NMRδ166.2，148.1，143.6，139.3，133.8，128.9，123.8，98.5，64.8，61.7，58.5，54.6，37.3，30.6，29.2，25.4，19.6。
HRMS(FAB)C19H29N4O6[M+H+]m/z计算值457.1935；实测值457.1939。
使22(1.62g，3.55mmol)和MsCl(2mL)如上所述进行反应，得到甲磺酸2-[{2-[(甲磺酰基)氧基]乙基}-4，6-二硝基-6-({[2-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙基]-氨基}羰基)苯氨基]乙基酯(23)(2.17g，100％)为黄色泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.71(d，J＝2.8Hz，1H)，8.71(m，1H)，8.31(d，J＝2.8Hz，1H)，4.26(m，4H)，3.71-3.37(m，10H)，3.13(s，6H)，3.10(m，2H)，1.82-1.43(m，8H)；13CNMRδ165.1，146.3，145.4，140.9，135.9，127.4，122.2，98.0，67.2，64.3，51.4，45.7，36.5，30.2，28.7，24.9，19.1，8.5。
HRMS(FAB)C21H33N4O13S2[M+H+]m/z计算值613.1486；实测值613.1481。
将23(2.95g，3.55mmol)的THF(120mL)溶液用1N HCl(80mL)处理，将溶液于20℃搅拌1小时，然后用水(100mL)稀释，用饱和NaHCO3中和，用EtOAc(3×80mL)萃取。所合并的有机相用盐水洗涤并干燥，蒸发溶剂，残余物经硅胶色谱法纯化，用EtOAc/MeOH(100∶1)洗脱，得到甲磺酸2-(2-{[(3-羟基丙基)氨基]羰基}{2-[(甲磺酰基)氧基]乙基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯(24)(1.4g，75％)为黄色固体mp(EtOAc/石油醚)130-133℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.8Hz，1H)，8.72(m，1H)，8.32(d，J＝2.8Hz，1H)，4.29(m，4H)，3.47(m，8H)，3.14(s，6H)，1.71(m，2H)；13C NMRδ165.2，146.3，145.3，140.8，135.9，127.5，122.3，67.3，58.4，51.4，36.8，36.5，31.7.分析.(C16H24N4O12S2)C，H，N。
于60℃将24(0.25g，0.45mmol)用在EtOAc(50mL)中的LiBr(53mg，0.61mmol)处理3小时，产物进行硅胶色谱法，用EtOAc/石油醚(由2∶1至1∶0)洗脱，得到IIb-13(0.16g，66％)为黄色泡沫；
1HNMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.8Hz，1H)，8.73(m，1H)，8.31(d，J＝2.8Hz，1H)，4.28(m，2H)，3.65-3.44(m，10H)，3.13(s，3H)，1.70(m，2H)；13C NMRδ165.1，145.7，145.4，141.0，136.2，127.3，122.1，67.5，58.4，51.1，36.7，36.5，31.7，29.6。
HRMS(FAB)C15H2279BrN4O9S[M+H+]m/z计算值513.0291；实测值513.0281。
实施例17(流程2g).甲磺酸2-((2-溴乙基)-2-{[(2-羟基乙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯(IIb-12)。
将固体IIb-7(300mg，0.62mmol)和甲磺酸银(130mg，0.65mmol)在无水MeCN(15mL)中回流加热3小时，然后冷却并过滤。将AgBr固体用EtOAc洗涤，得到98％产率的AgBr。减压除去溶剂，残余物通过硅胶色谱法分离，用EtOAc/石油醚(由1∶1至1∶0)洗脱，相继得到-原料(IIb-7)(28mg，9％)-IIb-12(123mg，38％)，为黄色泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.77(m，1H，CONH)，8.74(d，J＝2.7Hz，1H，H-4)，8.36(d，J＝2.7Hz，1H，H-6)，4.28(m，2H，CH2OMs)，3.58(m，4H)，3.44(m，4H)，3.14(s，3H，OSO2CH3)；13C NMRδ165.3，145.8，145.2，140，9，135.1，127.5，122.2，67.5，59.2，54.2，51.0，42.1，36.4，29.7；HRMS m/z C14H2079BrN4O9S计算值499.01344；实测值499.01324最后用EtOAc/MeOH(9∶1)洗脱柱子，得到甲磺酸2-(2-{[(2-羟基乙基)氨基]羰基}{2-[(甲磺酰基)氧基]乙基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯(25)(159mg，53％)，为黄色固体mp 128-132℃(EtOAc/石油醚)；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.78(m，1H，CONH)，8.74(d，J＝2.7Hz，1H，H-4)，8.36(d，J＝2.7Hz，1H，H-6)，4.29(m，4H，2xCH2OMs)，3.56(m，2H)，3.45(m，6H)，3.14(s，6H，2xOSO2CH3)；13C NMRδ165.4，146.3，145.1，140，6，135.8，127.6，122.3，67.3，59.2，51.3，42.1，36.4；HRMSC15H23N4O12S2m/z计算值515.0754；实测值515.0744
实施例18(流程2h)。甲磺酸2-((2-氯乙基)-2-{[(2-羟基乙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯(IIb-2m)。
于60℃将25(5.3g，10.3mmol)的DMF(100mL)溶液用LiCl(524mg，12.4mmol)处理2小时，然后冷却并倒入稀HCl中，用EtOAc(3×150mL)萃取。将产物进行后处理并进行硅胶色谱法，用EtOAc/石油醚(1∶1至1∶0)洗脱，得到IIb-2(2.4g，59％)，然后得到IIb-2m(1.94g，41％)，为黄色油；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.77(m，1H，CONH)，8.74(d，J＝2.7Hz，1H，H-4)，8.36(d，J＝2.7Hz，1H，H-6)，4.28(m，2H，-CH2O-Ms)，3.58(m，4H)，3.44(m，4H)，3.14(s，3H，-OSO2CH3)；13C NMRδ165.3，145.8，145.2，140，9，135.1，127.5，122.2，67.5，59.2，54.2，51.0，42.1，36.4，29.7。
以如下所述的可选方法制备IIb-2m将IIb-2(12.50g，31.6mmol)的3-甲基-2-丁酮(150mL)溶液于25℃用NaI(5.69g，38.0mmol)处理，混合物于70℃搅拌2小时，然后减压浓缩。将残余物在水(250mL)和EtOAc(250mL)之间分配，所分离的有机层用水洗涤，干燥(Na2SO4)，然后减压浓缩。将所得油(15.23g)溶于CH3CN(80mL)中，用甲磺酸银(9.63g，47.4mmol)处理，混合物于25℃搅拌1小时，然后减压浓缩。将残余物用EtOAc(200mL)萃取，过滤，固体用EtOAc(100mL)洗涤，蒸发EtOAc溶液，如上所述通过硅胶色谱法分离油性混合物，得到原料(3.61g，29％)、IIb-2m(4.55g，32％)和25(4.98g，31％)。当用LiBr替换NaI时，该反应得到类似结果。
实施例19(流程2i).2-[双(2-碘乙基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺(IIb-14)和甲磺酸2-((2-碘乙基)-2-{[(2-羟基乙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯(IIb-15)。
于60℃将25(6.7g，13.0mmol)用在EtOAc(200mL)中的NaI(2.9g，20mmol)处理3小时，产物进行硅胶色谱法，用EtOAc/石油醚(由2∶1至1∶0)洗脱，得到IIb-14(3.3g，44％)，为黄色固体mp(EtOAc/石油醚)129-131℃；
1H NMR[(CD3)2SO]δ8.72(d，J＝2.8Hz，1H，H-4)，8.70(m，1H，CONH)，8.32(d，J＝2.8Hz，1H，H-6)，4.80(m，1H)，3.55(m，2H)，3.43(m，4H)，3.31(m，6H)；13C NMRδ165.3，145.2，144.7，141.0，136.3，127.3，122.0，59.3，54.7，42.1，2.94.分析(C13H16N4I2O6)C，H，N。
由稍后的洗脱液得到IIb-15(1.35g，19％)，为黄色泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.74(d，J＝2.8Hz，1H，H-4)，8.74(m，1H，CONH)，8.34(d，J＝2.8Hz，1H，H-6)，4.28(m，2H)，3.56(m，2H)，3.43(m，2H)，3.31(m，6H)，3.13(s，3H)；13CNMRδ165.3，145.5，145.2，140.8，136.1，127.4，122.1，67.5，59.2，55.4，50.6，42.1，36.5，2.6。
HRMS(FAB)C14H20IN4O9S[M+H+]m/z计算值546.9996；实测值546.9997。
实施例20(流程2j).3-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-2，6-二硝基苯甲酰胺(IIc-7)和甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(2-羟基乙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯(IIc-12)。
将在EtOAc(50mL)中的甲磺酸2-(3-{[(2-羟基乙基)氨基]羰基}{2-[(甲磺酰基)氧基]乙基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯(26)[制备方法参见NZ申请号521851](310mg，0.6mmol)用LiBr(78mg，0.9mmol)处理，然后进行硅胶色谱法，用EtOAc/石油醚洗脱(由1∶1至1∶0)，得到IIc-7(70mg，25％)，为泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.80(m，1H，CONH)，8.24(d，J＝9.4Hz，1H)，7.63(d，J＝9.4Hz，1H)，4.66(m，1H)，3.70(m，4H)，3.60(m，4H)，3.45(m，2H)，3.22(m，2H)；13C NMRδ161.4，145.8，140.2，137.5，129.2，127.6，122.6，59.0，52.6，41.7，30.0。
HRMS(FAB)C13H1779Br2N4O6[M+H+]m/z计算值482.9515；实测值482.9508。
进一步用EtOAc/MeOH(50∶2)洗脱，得到IIc-12(118mg，39％)mp.94-97℃；
1HNMR[(CD3)2SO]δ8.80(m，1H，CONH)，8.25(d，J＝9.4Hz，1H)，7.64(d，J＝9.4Hz，1H)，4.67(m，1H)，4.27(m，2H)，3.63(m，4H)，3.57(m，2H)，3.45(m，2H)，3.26(m，2H)，3.15(s，3H)；13C NMRδ161.4，146.2，140.5，137.7，129.2，127.5，122.9，66.8，59.0，50.0，41.7，36.6，29.9.分析.(C14H19BrN4O9S)C，H，N。
实施例21(流程2j).3-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(3-羟基丙基)-2，6-二硝基苯甲酰胺(IIc-8)和甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(3-羟基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯(IIc-13)。
将在EtOAc(200mL)中的甲磺酸2-(3-{[(3-羟基丙基)氨基]羰基}{2-[(甲磺酰基)氧基]乙基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯(27)[制备方法参见共同悬而未决的NZ申请号521851](716mg，1.36mmol)用LiBr(175mg，2.0mmol)处理，然后进行硅胶色谱法，用EtOAc/石油醚(由1∶1至1∶0)洗脱，得到IIc-8(289mg，42％)，为黄色固体；mp(EtOAc/石油醚)142-144℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.75(t，J＝5.8Hz，1H，CONH)，8.23(d，J＝9.4Hz，1H，H-5)，7.62(d，J＝9.4Hz，1H，H-6)，4.47(m，1H，CHOH)，3.68(m，4H)，3.57(m，4H)，3.43(m，2H)，3.20(m，2H)，1.60(m，2H)；13C NMRδ161.2，146.9，140.2，137.5，129.4，127.7，122.6，58.3，52.6，36.4，31.6，30.1。
HRMS(FAB)C14H1979Br2N4O6[M+H+]m/z计算值496.9671；实测值496.9667进一步用EtOAc/MeOH(50∶2)洗脱，得到IIc-13(270mg，39％)mp.115-117℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.75(t，J＝5.8Hz，1H，CONH)，8.24(d，J＝9.4Hz，1H，H-5)，7.64(d，J＝9.4Hz，1H，H-6)，4.43(m，1H，CHOH)，4.27(m，2H，CH2OMs)，3.66(m，4H，2xCH2N)，3.59(m，2H)，3.44(m，2H)，3.22(m，2H)，3.15(s，3H，CH3SO3)，1.60(m，2H)；13C NMRδ161.1，146.2，140.5，137.7，129.2，127.6，122.9，66.8，58.2，52.9，50.0，36.6，36.4，31.6，30.0.分析.(C15H21BrN4O9S)C，H，N。
实施例22(流程2j).3-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(4-羟基丁基)-2，6-二硝基苯甲酰胺(IIc-9)和甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(4-羟基丁基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯(IIc-14)。
将在EtOAc(100mL)中的甲磺酸2-(3-{[(4-羟基丁基)氨基]羰基}{2-[(甲磺酰基)氧基]乙基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯(28)[制备方法参见NZ申请号521851](500mg，0.92mmol)用LiBr(110mg，1.4mmol)处理，然后进行硅胶色谱法，用EtOAc/石油醚(由1∶1至1∶0)洗脱，得到IIc-9(100mg，21％)，为泡沫；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.73(m，1H，CONH)，8.25(d，J＝9.4Hz，1H)，7.63(d，J＝9.4Hz，1H)，4.38(m，1H)，3.69(m，4H)，3.57(m，4H)，3.40(m，2H)，3.14(m，2H)，1.47(m，4H)；13C NMRδ161.0，145.8，140.2，137.6，129.3，127.6，122.6，60.2，52.6，30.0，29.6，24.8。
HRMS(FAB)C15H2079Br2N4O6[M+H+]m/z计算值510.9828；实测值510.9819进一步用EtOAc/MeOH(50∶2)洗脱，得到IIc-14(117mg，30％)mp.114-117℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.74(m，1H，CONH)，8.25(d，J＝9.4Hz，1H)，7.65(d，J＝9.4Hz，1H)，4.37(m，1H)，4.27(m，2H)，3.65(m，4H)，3.57(m，2H)，3.35(m，2H)，3.16(m，2H)，3.15(s，3H)，1.47(m，4H)；13C NMRδ160.0，146.1，140.6，137.8，129.2，127.5，122.9，66.8，60.2，52.9，50.0，36.6，29.9，29.6，24.9.分析.(C16H23BrN4O9S)C，H，N。
实施例23(流程2k).甲磺酸2-(3-{[(3-羟基丙基)氨基]羰基}{2-[(甲磺酰基)氧基]乙基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯(27)和甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(3-羟基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯(IIc-13)。
将固体IIc-8(2.15g，4.3mmol)加入甲磺酸银(0.992g，4.9mmol)在无水MeCN(40mL)中的热溶液中。将混合物回流加热3小时，然后冷却并过滤。减压除去溶剂，通过硅胶色谱法分离残余物，用EtOAc/石油醚(由1∶1至1∶0)洗脱，相继得到IIc-13(0.5g，25％)、IIc-8(0.3g，14％)和27(0.4g，18％)。实施例24(流程2k)。甲磺酸2-((2-氯乙基)-3-{[(3-羟基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯(IIc-6)。
于60℃将27(9.0g，17.0mmol)的DMF(110mL)溶液用LiCl(860mg，20.4mmol)处理2小时，然后冷却，倒入稀HCl中，并用EtOAc(3×150mL)萃取。产物进行后处理并进行硅胶色谱法，用EtOAc/石油醚(由1∶1至1∶0)洗脱，，得到IIc-6(4.0g，50％)，为黄色晶体mp 104-109℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.75(t，J＝5.8Hz，1H，CONH)，8.24(d，J＝9.4Hz，1H，H-5)，7.64(d，J＝9.4Hz，1H，H-6)，4.44(m，1H，CHOH)，4.26(m，2H)，3.72(m，2H)，3.65(m，2H)，3.59(m，2H)，3.43(m，2H)，3.20(m，2H)，3.15(s，3H)，1.60(m，2H)；13C NMRδ161.1，146.4，140.5，137.7，129.2，127.6，122.9，66.8，58.2，52.9，50.1，41.4，36.6，36.4，31.6.分析.(C15H21ClN4O9S)C，H，N。
实施例25(流程2k)。甲磺酸2-((2-碘乙基)-3-{[(3-羟基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯(IIc-15)。
于60℃将27(5.28g，10.0mmol)的EtOAc(250mL)溶液用NaI(1.8g，12.0mmol)处理2小时，产物进行硅胶色谱法，用EtOAc/石油醚(由1∶2至1∶0)洗脱，得到IIc-15(2.29g，41％)，为黄色晶体mp 100-103℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ10.05(s，1H)，7.40(d，J＝11.5Hz，1H)，7.09(s，1H)，6.70(d，J＝11.5Hz，1H)，2.50(m，2H)，2.21(m，2H)，2.03(s，3H)，1.52(m，4H)；13C NMRδ161.1，145.8，140.5，137.7，129.2，127.6，122.9，66.8，58.2，53.9，49.9，41.4，36.6，36.4，31.6.分析.(C15H21IN4O9S)C，H，N。
磷酸酯的制备(流程3)实施例26.磷酸2-[[2-[双(2-溴乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲酰基]氨基]乙基酯(Ib-7P)。
将醇IIb-7(2.58g，5.33mmol)和二乙基氨基亚磷酸二叔丁基酯(93％，2.0mL，6.9mmol)在无水DMF(20mL)中的溶液在N2中用1H-四唑(3wt.％，在CH3CN中，55mL，18.7mmol)处理，于20℃搅拌1.5小时。然后将反应混合物冷却至-50℃，快速加入3-氯过氧苯甲酸(55％，2.68g，8.54mmol)溶液，以使得温度保持低于-5℃。将反应混合物温热至室温，用CH2Cl2(150mL)稀释。将溶液用5％Na2S2O5水溶液(2×50mL)、10％NaHCO3水溶液(2×50mL)、水(2×50mL)洗涤，干燥，低于30℃下减压浓缩，残余物用i-Pr2O/己烷振摇，冷却。将所得固体经硅胶色谱法纯化，用CH2Cl2/EtOAc洗脱，然后从CH2Cl2/己烷中重结晶(低于40℃)，得到磷酸二叔丁基酯2-[[2-[双(2-溴乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲酰基]氨基]乙基酯(Ib-7E)(2.59g，72％)，为不稳定的黄色固体mp 99-101℃(分解)；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.93(t，J＝5.6Hz，1H)，8.76(d，J＝2.8Hz，1H)，8.33(d，J＝2.8Hz，1H)，4.01(g，J＝6.1Hz，2H)，3.62-3.42(m，10H)，1.43(s，18H)。HRMS(FAB)C21H3479Br2N4O9P(MH+)m/z计算值675.0430，实测值675.0398；C21H3479Br81BrN4O9P(MH+)m/z计算值677.0410，实测值677.0397；C21H3481Br2N4O9P(MH+)m/z计算值679.0389，实测值679.0398。分析.(C21H33Br2N4O9P)。
将Ib-7E(2.80g，4.14mmol)和TFA(15mL)在无水CH2Cl2(15mL)中的溶液于20℃搅拌1小时，然后减压浓缩。用CH3CN(2×)共沸除去残余的TFA，将所得残余物溶于EtOAc中。加入过量己烷，沉淀出半固体，将其在于20℃高真空干燥，得到Ib-7P(98％)，为黄色泡沫。1H NMR[(CD3)2SO]δ8.93(t，J＝5.6Hz，1H)，8.75(d，J＝2.8Hz，1H)，8.36(d，J＝2.8Hz，1H)，3.97(q，J＝6.3Hz，2H)，3.62-3.43(m，10H)。HRMS(FAB)C13H1879Br2N4O9P(MH+)m/z计算值562.9178，实测值562.9171；C13H1879Br81BrN4O9P(MH+)m/z计算值564.9158，实测值564.9152；C13H1881Br2N4O9P.(MH+)m/z计算值566.9137，实测值566.9121。用NaHCO3(2.0当量)处理二酸Ib-7P，得到二钠盐。
实施例27.磷酸3-[[5-[双(2-氯乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰基]氨基]丙基酯(Ia-3P)。
使IIa-3进行类似的磷酸化，然后将产物进行硅胶色谱法，用CH2Cl2/EtOAc(2∶3)洗脱，得到磷酸二叔丁基酯3-[[5-[双(2-氯乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰基]氨基]丙基酯(Ia-3E)(76％)，为黄色固体mp(EtOAc/i-Pr2O/己烷)120-121℃(分解)；
1H NMR[(CD3)2SO]δ8.70(t，J＝5.6Hz，1H)，8.55(s，1H)，7.45(s，1H)，3.96(q，J＝6.7Hz，2H)，3.82(t，J＝5.8Hz，4H)，3.69(t，J＝5.8Hz，4H)，3.34(D2O交换后，t，J＝6.8Hz，2H)，1.86(五，J＝6.6Hz，2H)，1.42(s，18H).分析.(C22H35Cl2N4O9P)C，H，N。
将酯Ia-3E用TFA进行类似处理，得到二酸Ia-3P(99％)，为吸湿性黄色固体。1H NMR[(CD3)2SO]δ8.71(t，J＝5.6Hz，1H)，8.54(s，1H)，7.45(s，1H)，3.92(q，J＝6.7Hz，2H)，3.82(t，J＝5.8Hz，4H)，3.69(t，J＝5.8Hz，4H)，3.31(q，J＝6.5Hz，2H)，1.84(五，J＝6.6Hz，2H)。HRMS(FAB)C14H2035Cl2N4O9P[M+H]+m/z计算值489.0345；实测值489.0344。C14H2035Cl37ClN4O9P[M+H]+m/z计算值491.0316；实测值491.0317。C14H2037Cl2N4O9P[M+H]+m/z计算值493.0286；实测值493.0312。用NaHCO3(2∶0当量)处理二酸I-3P，得到二钠盐。
实施例28.磷酸3-[[5-[双(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰基]氨基]丙基酯(Ia-8P)。
使IIa-8进行类似的磷酸化，然后产物进行硅胶色谱法，用CH2Cl2/EtOAc(1∶1)洗脱，得到磷酸二叔丁基酯3-[[5-[双(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰基]氨基]丙基酯(Ia-8E)(66％)，为黄色固体mp(EtOAc/i-Pr2O/己烷)110-111℃(分解)。
1H NMR((CD3)2SO)δ8.70(t，J＝5.6Hz，1H)，8.55(s，1H)，7.44(s，1H)，3.96(q，J＝6.7Hz，2H)，3.79-3.63(m，84H)，3.35(D2O交换后，t，J＝6.8Hz，2H)，1.86(五，J＝6.6Hz，2H)，1.42(s，18H).分析.(C22H35Br2N4O9P)C，H，N。
将酯Ia-8E用TFA进行类似处理，得到二酸Ia-8P(99％)，为吸湿性黄色固体。1H NMR[(CD3)2SO]δ8.71(t，J＝5.6Hz，1H)，8.55(s，1H)，7.43(s，1H)，3.93(q，J＝6.7Hz，2H)，3.79-3.63(m，8H)，3.31(q，J＝6.5Hz，2H)，1.85(五，J＝6.6Hz，2H)。HRMS(FAB)C14H2079Br2N4O9P(MH+)m/z计算值576.9335；实测值576.9314。C14H2079Br81BrN4O9P(MH+)m/z计算值578.9314；实测值578.9305。C14H2081Br2N4O9P(MH+)m/z计算值580.9294；实测值580.9297。用NaHCO3(2.0当量)处理二酸Ia-8P，得到二钠盐。
实施例29.磷酸2-[[2-[双(2-氯乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲酰基]氨基]乙基酯(Ib-2P)。
使IIb-2进行类似的磷酸化，然后产物进行硅胶色谱法，用CH2Cl2/EtOAc(13∶7)洗脱，得到磷酸二叔丁基酯2-[[2-[双(2-氯乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲酰基]氨基]乙基酯(Ib-2E)(72％)，为黄色固体mp(EtOAc/i-Pr2O/己烷)107-108℃(分解)；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.90(t，J＝5.6Hz，1H)，8.75(d，J＝2.8Hz，1H)，8.33(d，J＝2.8Hz，1H)，4.01(q，J＝6.1Hz，2H)，3.72(t，J＝6.8Hz，4H)，3.53(q，J＝5.5Hz，2H)，3.43(t，J＝6.8Hz，4H)，1.43(s，18H).分析.(C21H33Cl2N4O9P)C，H，N，P.CRL 11363。
将酯Ib-2E用TFA进行类似处理，得到二酸Ib-2P(98％)，为黄色泡沫。1H NMR[(CD3)2SO]δ8.89(t，J＝5.6Hz，1H)，8.74(d，J＝2.8Hz，1H)，8.36(d，J＝2.8Hz，1H)，3.98(q，J＝6.2Hz，2H)，3.72(t，J＝6.7Hz，4H)，3.51(q，J＝5.6Hz，2H)，3.43(t，J＝6.7Hz，4H)。HRMS(FAB)C13H1835Cl2N2O9P[M+H]+m/z计算值475.0189；实测值475.0189C13H1835Cl37ClN2O9P[M+H]+m/z计算值477.0159；实测值477.0167C13H1835Cl2N2O9P[M+H]+m/z计算值479.0130；实测值479.0160用NaHCO3(1.0当量)处理二酸Ib-2P，得到一钠盐。
实施例30.甲磺酸2-[(2-氯乙基)-2，4-二硝基-6-[[[2-(膦酰氧基)乙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯(Ib-2mP)。
使IIb-2m进行类似的磷酸化，然后产物进行硅胶色谱法，用EtOAc洗脱，得到甲磺酸2-[(2-氯乙基)-2-(6-叔丁氧基-8，8-二甲基-6-氧化-5，7-二氧杂-2-氮杂-6-磷杂壬-1-酰基)-4，6-二硝基苯氨基]乙基酯(Ib-2mE)(80％)，为黄色泡沫。
1H NMR[(CD3)2SO]δ8.94(t，J＝5.6Hz，1H)，8.75(d，J＝2.8Hz，1H)，8.34(d，J＝2.8Hz，1H)，4.28(t，J＝5.4Hz，2H)，4.02(q，j＝6.2Hz，2H)，3.74-3.43(m，8H)，3.13(s，3H)，1.43(s，18H).13C NMRδ265.6，146.2，145.3，140.8，135.6，127.5，122.4，81.7，67.5，64.2，54.3，51.3，41.4，36.5，29.5。
将酯Ib-2mE用TFA进行类似处理，得到二酸Ib-2mP(68％)，为黄色固体。Mp(EtOAc/CH2Cl2)132-134℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.92(t，J＝5.6Hz，1H)，8.74(d，J＝2.8Hz，1H)，8.37(d，J＝2.8Hz，1H)，4.29(t，J＝5.4Hz，2H)，3.98(q，J＝6.0Hz，2H)，3.58-3.40(D2O交换后，m，8H)，3.13(s，2H).13C NMRδ165.5，146.1，145.3，140.8，135.7，127.6，122.3，67.5，63.3，63.2，54.3，51.3，41.3，36.5.分析(C14H20ClN4O12PS)C，H，N。
实施例31.磷酸2-({2-[双(2-溴丙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲酰基}氨基)乙基酯(Ib-7aP)。
用二乙基氨基亚磷酸二叔丁基酯(93％，489mg，2.0mmol)使醇IIb-7a(0.67g，1.3mmol)进行类似的磷酸化，然后进行快速硅胶柱色谱法，用EtOAc/石油醚(1∶1)洗脱，得到Ib-7aE，为黄色固体(0.74g，81％)mp(EtOAc/石油醚)121-123℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ9.09(m，1H)，8.73(m，1H)，8.32(m，1H)，4.44(m，2H)，4.00(m，2H)，3.39(m，2H)，3.60(m，4H)，1.62(m，6H)，1.44(s，18H).13C NMR δ165.9，144.8，143.6，139.6，133.2，128.0，123.1，81.6，64.0，60.4，39.9，29.4，23.5.分析.(C23H37Br2N4O9P)C，H，N。
将Ib-7aE(100mg)用TFA(6mL)进行类似处理，然后从CH2Cl2/EtOAc中结晶，得到Ib-7aP，为黄色固体(70mg，85％)mp 157-161℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ9.07(m，1H)，8.72(m，1H)，8.36(m，1H)，4.43(m，2H)，4.00(m，2H)，3.52(m，6H)，1.62(m，6H).13C NMRδ165.9，144.8，143.6，139.7，133.4，128.1，123.1，63.2，60.4，47.9，39.9，23.5.分析.(C15H21Br2N4O9P)C，H，N。
实施例32.甲磺酸2-[(2-溴乙基)-2，4-二硝基-6-[[[2-(膦酰氧基)乙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯(Ib-12P)。
使IIa-12进行类似的磷酸化，然后产物进行硅胶色谱法，用EtOAc洗脱，得到甲磺酸2-[(2-溴乙基)-2-(6-叔丁氧基-8，8-二甲基-6-氧化-5，7-二氧杂-2-氮杂-6-磷杂壬-1-酰基)-4，6-二硝基苯氨基]乙基酯(Ib-12E)(66％)，为黄色泡沫。1H NMR[(CD3)2SO]δ8.94(t，J＝5.6Hz，1H)，8.75(d，J＝2.8Hz，1H)，8.34(d，J＝2.8Hz，1H)，4.28(t，J＝5.4Hz，2H)，4.02(q，J＝6.2Hz，2H)，3.62-3.43(m，8H)，3.13(s，3H)，1.43(s，18H)。HRMS(FAB)C22H3779BrN4O12PS[M+H]+m/z计算值693.1029；实测值693.1010。
将酯Ib-12E用TFA进行类似处理，得到二酸Ib-12P(98％)，为黄色泡沫。1H NMR[(CD3)2SO]δ8.92(t，J＝5.6Hz，1H)，8.74(d，J＝2.8Hz，1H)，8.37(d，J＝2.8Hz，1H)，4.28(t，J＝5.4Hz，2H)，3.98(q，J＝6.0Hz，2H)，3.58-3.40(D2O交换后，m，8H)，3.13(s，2H)。HRMS(FAB)C14H2179BrN4O12PS[M+H]+m/z计算值578.9798；实测值578.9784。C14H2181Br81BrN4O12PS[M+H]+m/z计算值580.9777；实测值580.9784。用NaHCO3(1.0当量)处理二酸Ib-12P，得到一钠盐。
实施例33.磷酸2-[[2-[双(2-碘乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲酰基]氨基]乙基酯(Ib-14P)。
使Ib-14进行类似的磷酸化，然后产物进行硅胶色谱法，用CH2Cl2/EtOAc(3∶1)洗脱，得到磷酸二叔丁基酯2-[[2-[双(2-碘乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲酰基]氨基]乙基酯(Ib-14E)(67％)，为黄色固体mp(CH2Cl2/i-Pr2O/己烷)108-110℃(分解)；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.91(t，J＝5.6Hz，1H)，8.74(d，J＝2.8Hz，1H)，8.30(d，J＝2.8Hz，1H)，4.01(q，J＝6.3Hz，2H)，3.53(q，J＝5.7Hz，2H)，3.45(t，J7.8Hz，4H)，3.24(D2O交换后，t，J＝7.6Hz，4H)，1.44(s，18H).分析.(C21H33I2N4O9P)，C，H，N，P。
将酯Ib-14E用TFA进行类似处理，得到二酸Ib-14P(97％)，为黄色泡沫。
1H NMR[(CD3)2SO]δ8.90(t，J＝5.6Hz，1H)，8.73(d，J＝2.8Hz，1H)，8.34(d，J＝2.8Hz，1H)，3.98(q，J＝6.4Hz，2H)，3.49(after D2O exchange t，J＝5.6Hz，2H)，3.45(t，J＝7.8Hz，4H)，3.29(t，J＝7.7Hz，4H)。
HRMS(FAB)C13H18I2N4O9[M+H]+m/z计算值658.3911；实测值658.3907。用NaHCO3(2.0当量)处理二酸Ib-14P，得到二钠盐。
实施例34.甲磺酸2-[(2-碘乙基)-2，4-二硝基-6-({[2-(膦酰氧基)乙基]氨基}羰基)-苯氨基]乙基酯(Ib-15P)。
用二乙基氨基亚磷酸二叔丁基酯(93％，1.15g，4.5mmol)使醇IIb-15(1.68g，3.1mmol)进行类似的磷酸化，然后进行快速硅胶柱色谱法，用EtOAc/石油醚(1∶1)洗脱，从EtOAc/石油醚中结晶，得到Ib-15E，为黄色固体(2.23g，97％)mp(EtOAc/石油醚)109-111℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.98(m，1H)，8.76(d，J＝2.8Hz，1H)，8.33(d，J＝2.8Hz，1H)，4.27(m，2H)，4.00(m，2H)，3.53(m，2H)，3.46(m，4H)，3.14(s，3H)，1.43(s，18H).13C NMRδ165.5，145.6，145.2，140.8，135.6，127.4，122.4，81.7，67.5，64.2，55.4，50.7，39.9，36.5，29.3，2.6.分析.(C22H36IN4O12PS)，C，H，N。
将Ib-15E(405mg)用TFA(6mL)进行类似处理，产物从CH2Cl2/石油醚中结晶，得到二酸Ib-15P，为黄色固体(306mg，89％)mp 147-150℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.93(m，1H)，8.74(d，J＝2.8Hz，1H)，8.36(d，J＝2.8Hz，1H)，4.27(m，2H)，4.00(m，2H)，3.46(m，6H)，3.31(m，2H)，3.12(s，3H).13CNMRδ165.5，145.6，145.2，140.8，135.7，127.6，122.3，67.6，63.3，55.5，50.7，39.9，36.5，2.7.分析.(C14H20IN4O9PS)，C，H，N。
实施例35.甲磺酸2-[(2-氯乙基)-2，4-二硝基-3-[[[3-(膦酰氧基)丙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯(Ic-6P)。
使IIc-6进行类似的磷酸化，然后产物进行硅胶色谱法，用EtOAc/石油醚(由1∶2至1∶1)洗脱，得到甲磺酸2-[(2-氯乙基)-3-(7-叔丁氧基-9，9-二甲基-7-氧化-6，8-二氧杂-2-氮杂-7-磷杂己-1-酰基)-2，4-二硝基苯氨基]乙基酯(Ic-6E)(98％)，为黄色固体mp(EtOAc/石油醚)98-102℃。
1H NMR[(CD3)2SO]δ8.83(t，J＝5.6Hz，1H)，8.26(d，J＝9.4Hz，1H)，7.65(d，J＝9.4Hz，1H)，4.29(t，J＝5.3Hz，2H)，3.92(q，J＝6.7Hz，2H)，3.72-3.62(m，4H)，3.62-3.55(m，2H)，3.23(q，J＝6.5Hz，2H)，3.15(s，3H)，1.79(五，J＝6.7Hz，2H)，1.42(s，18H).13C NMRδ161.3，146.4，140.4，137.6，129.1，127.6，123.0，81.2，66.8，64.1，64.0，52.9，50.1，41.4，36.6，35.9，29.3.分析.(C23H38ClN4O12PS)C，H，N。
将酯Ic-6E用TFA进行类似处理，得到二酸Ic-6P(84％)，为黄色固体mp(EtOAc/CH2Cl2)98-102℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.84(t，J＝5.7Hz，1H)，8.26(d，J＝9.4Hz，1H)，7.65(d，J＝9.4Hz，1H)，4.28(t，J＝5.3Hz，2H)，3.88(q，J＝6.8Hz，2H)，3.72-3.62(m，4H)，3.53(D2O交换后，t，J＝6.0Hz，2H)，3.23(q，J＝6.6Hz，2H)，3.15(s，3H)，1.76(pent，J＝6.7Hz，2H).分析.(C15H22ClN4O12PS)C，H，N。
实施例36.磷酸3-({3-[双(2-溴乙基)氨基]-2，6-二硝基苯甲酰基}氨基)丙基酯(Ic-8P)。
用二乙基氨基亚磷酸二叔丁基酯(93％，1.25g，5.0mmol)使醇IIc-8(1.41g，2.83mmol)进行类似的磷酸化，然后进行快速硅胶柱色谱法，用EtOAc/石油醚(1∶1)洗脱，得到Ic-8E，为黄色固体(1.77g，91％)mp(EtOAc/石油醚)112-114℃；1HNMR[(CD3)2SO]δ8.86(m，1H)，8.24(d，J＝9.4Hz，1H)，7.63(d，J＝9.4Hz，1H)，3.92(m，2H)，3.70(m，4H)，3.60(m，4H)，3.22(m，2H)，1.78(m，2H)，1.41(s，18H).13C NMRδ161.4，145.9，139.9，137.3，129.2，127.8，122.5，81.3，64.1，52.5，35.9，30.1，29.4.29.1.分析.(C22H35Br2N4O9P)，C，H，N。
将Ic-8E(900mg)用TFA(10mL)进行类似处理，得到二酸Ic-8P，为黄色泡沫(754mg，100％)1H NMR[(CD3)2SO]δ8.83(m，1H)，8.24(d，J＝9.4Hz，1H)，7.63(d，J＝9.4Hz，1H)，3.86(m，2H)，3.73(m，4H)，3.60(m，4H)，3.22(m，2H)，1.76(m，2H).13C NMRδ161.3，145.9，140.1，137.4，129.2，127.6，122.5，62.9，52.5，36.0，30.0，29.3。
HRMS(FAB)C14H2079Br2N4O9P.[M+H]+m/z计算值576.9335，实测值576.9326。
实施例37.甲磺酸2-[(2-溴乙基)-2，4-二硝基-3-[[[2-(膦酰氧基)乙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯(Ic-12P)。
使IIc-12进行类似的磷酸化，然后产物进行硅胶色谱法，用EtOAc/石油醚(由1∶2至1∶0)洗脱，得到(Ic-12E)(99％)，为黄色固体mp(EtOAc/石油醚)82-86℃(分解)。
1H NMR[(CD3)2SO]δ9.00(t，J＝5.6Hz，1H)，8.26(d，J＝9.4Hz，1H)，7.65(d，J＝9.4Hz，1H)，4.28(t，J＝5.3Hz，2H)，3.92(q，J＝6.7Hz，2H)，3.72-3.62(m，4H)，3.62-3.55(m，2H)，3.23(q，J＝6.5Hz，2H)，3.15(s，3H)，1.42(s，18H).分析.(C22H36BrN4O12PS)C，H，N。
将酯Ic-12E用TFA进行类似处理，得到二酸Ic-12P(100％)，为黄色固体mp(EtOAc/CH2Cl2)93-97℃；1H NMR[(CD3)2SO]δ8.99(t，J＝5.7Hz，1H)，8.26(d，J＝9.4Hz，1H)，7.65(d，J＝9.4Hz，1H)，4.28(t，J＝5.3Hz，2H)，3.88(q，J＝6.8Hz，2H)，3.72-3.62(m，4H)，3.53(D2O交换后，t，J＝6.0Hz，2H)，3.23(q，J＝6.6Hz，2H)，3.15(s，3H).分析.(C14H20BrN4O12PS)C，H，N。
实施例38.甲磺酸2-[(2-溴乙基)-2，4-二硝基-3-[[[3-(膦酰氧基)丙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯(Ic-13P)。
使IIc-13进行类似的磷酸化，然后产物进行硅胶色谱法，用CH2Cl2/EtOAc(1∶3)洗脱，得到甲磺酸2-[(2-溴乙基)-3-(7-叔丁氧基-9，9-二甲基-7-氧化-6，8-二氧杂-2-氮杂-7-磷杂己-1-酰基)-2，4-二硝基苯氨基]乙基酯(Ic-13E)(70％)，为黄色固体mp(CH2Cl2/i-Pr2O)95-96℃(分解)。
1H NMR[(CD3)2SO]δ8.83(t，J＝5.6Hz，1H)，8.26(d，J＝9.4Hz，1H)，7.65(d，J＝9.4Hz，1H)，4.28(t，J＝5.3Hz，2H)，3.92(q，J＝6.7Hz，2H)，3.72-3.62(m，4H)，3.62-3.55(m，2H)，3.23(q，J＝6.5Hz，2H)，3.15(s，3H)，1.79(五，J＝6.7Hz，2H)，1.42(s，18H).分析.(C23H38BrN4O12PS)C，H，N，P。
将酯Ic-13E用TFA进行类似处理，得到二酸Ic-13P(98％)，为吸湿性黄色固体。
1H NMR[(CD3)2SO]δ8.84(t，J＝5.7Hz，1H)，8.26(d，J＝9.4Hz，1H)，7.65(d，J＝9.4Hz，1H)，4.28(t，J＝5.3Hz，2H)，3.88(q，J＝6.8Hz，2H)，3.72-3.62(m，4H)，3.53(after D2O exchange，t，J＝6.0Hz，2H)，3.23(q，J＝6.6Hz，2H)，3.15(s，3H)，1.76(pent，J＝6.7Hz，2H)。
HRMS(FAB)C15H2379BrN4O12PS[M+H]+m/z计算值592.9954；实测值592.9956。用NaHCO3(1∶0当量)处理二酸Ic-13P，得到一钠盐。
实施例39.甲磺酸2-[(2-碘乙基)-2，4-二硝基-3-[[[3-(膦酰氧基)丙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯(Ic-15P)。
使IIc-15进行类似的磷酸化，然后产物进行硅胶色谱法，用CH2Cl2/EtOAc(1∶3)洗脱，得到甲磺酸2-[(2-碘乙基)-3-(7-叔丁氧基-9，9-二甲基-7-氧化-6，8-二氧杂-2-氮杂-7-磷杂己-1-酰基)-2，4-二硝基苯氨基]乙基酯(Ic-15E)(58％)，为黄色固体mp(EtOAc/iPr2O)90-100℃。
1H NMR[(CD3)2SO]δ8.86(t，J＝5.6Hz，1H)，8.25(d，J＝9.4Hz，1H)，7.63(d，J＝9.5Hz，1H)，4.27(t，J＝5.2Hz，2H)，3.91(q，J＝6.7Hz，2H)，3.67(t，J＝5.2Hz，2H)，3.60(t，J＝7.1Hz，2H)，3.26-3.17(D2O交换后，m，部分模糊，2H)，3.23(q，J＝6.5Hz，2H)，3.15(s，3H)，1.78(五，J＝6.6Hz，2H).分析.(C23H38IN4O12PS)C，H，N，P。
将酯Ic-15E用TFA进行类似处理，得到二酸Ic-15P(97％)，为吸湿性黄色固体mp(CH3CN/EtOAc)84-86℃.1H NMR[(CD3)2SO]δ8.90(t，J＝5.6Hz，1H)，8.24(d，J＝9.4Hz，1H)，7.57(d，J＝9.5Hz，1H)，4.25(t，J＝5.2Hz，2H)，3.81(D2O交换后，q，J＝6.7Hz，2H)，3.62(D2O交换后，t，J＝5.2Hz，2H)，3.56(t，J＝7.1Hz，2H)，3.26(t，J＝6.9Hz，2H)，3.20(q，J＝6.5Hz，2H)，3.09(s，3H)，1.73(五，J＝6.6Hz，2H)。HRMS(FAB)C15H22IN4O12PS(MH+)m/z计算值640.9816；实测值640.9795。分析.(C15H22IN4O12PS)C，H。
表2.表1a和1b中新化合物的燃烧分析数据
式(I)代表性醇(列于表1a)显示出对人癌细胞系的选择性细胞毒性，该细胞系用E.coli硝基还原酶cDNA(NTR)(表3，第2和3栏)或低氧条件下的人细胞色素P450还原酶(P450R)(表3，第4和5栏)转染。在该表中，给出选择性比例来表明对NTR表达(第3栏)或低氧(第5栏)的选择性程度。然而，P450R过表达不是低氧选择性所要求的。
由细胞增殖试验、然后在20％氧气或0％氧气(缺氧，采用厌氧室获得)的气相中接触4小时药物，得到IC50值。细胞在需氧条件下另外生长5天，采用sulphorhodamine B分析评价细胞密度，以确定抑制控制50％生长所需的前药浓度。
表3.表1a中醇类化合物的代表性实例的选择性细胞毒性
通过

图1中代表性实施例(Ib-7P)的数据证明了磷酸酯作为低含氧量细胞毒素的活性。这采用Rif-1肿瘤体内切除分析，其中有氧肿瘤细胞采用15Gy放射断种，并且对药物对抗其余低含氧量细胞的细胞毒性进行定量。意外的是，发现在它们各自的最大耐受剂量(Ib-7P＝750μmol/kg；IIb-7＝1000μmol/kg)，磷酸酯Ib-7P的活性超过其母体醇(IIb-7)的活性。该实验证明，磷酸酯Ib-7P对抗低含氧量细胞的活性比参比低氧细胞毒素替拉扎明高，并且对抗低含氧量细胞的活性高于对抗有氧细胞的活性(即放射后给予高于没有放射时给予)。因此，Ib-7P在体内作为低氧-选择性细胞毒素起作用。虽然对抗有氧肿瘤细胞的活性较低，但是该活性显然证明该化合物还具有作为单一药物的功效(无放射时)。
表4的数据说明了式(I)磷酸酯对抗人肿瘤异种移植物的低含氧量细胞的显著活性。在这些实验中，SiHa人宫颈癌细胞在CD-1裸鼠(免疫缺陷)中生长。在给予最于使有氧细胞断种的全身剂量(15Gy)的电离放射(钴-60γ射线)后5分钟，以相当于最大耐受剂量(MTD)的75％或20％的剂量施用化合物。18小时后切除肿瘤，用蛋白酶合剂分解，采用克隆源性(clonogenic)分析确定细胞存活。杀死细胞的对数由经处理和对照肿瘤之间的克隆源性数/克肿瘤组织的差异来计算。所有所测试的磷酸酯在75％MTD时表现出较大的对抗低含氧量细胞的作用(表4，第4栏)。这是对低氧有选择性的，正如在没有放射时杀死细胞较少所证明的。然而，仅施用化合物所杀死的细胞数量在所有情况下是显著的(表4，第5栏)，这证明化合物作为单一药物也具有抗肿瘤活性。还证明了相同化合物在相当于仅20％MTD的剂量下对抗低含氧量细胞的活性(表4，第7栏)。参比低含氧量细胞毒素替拉扎明和参比氮芥(苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥和环磷酰胺)在其各自的20％MTD时没有活性。
表4.式(I)磷酸酯对抗裸鼠的SiHa人肿瘤异种移植物中的有氧和的含氧量细胞的活性。化合物在盐水中单次腹腔注射施用。
a关于对照，在同一实验中，仅用溶媒(盐水)处理。杀死细胞的log对数＝log10(对照肿瘤的克隆源性/克肿瘤)-log10(所处理肿瘤的克隆源性/克肿瘤)。
b在同一实验中，关于仅放射的平均值。杀死细胞的log对数＝log10(仅放射的肿瘤的克隆源性/克肿瘤)-log10(经放射和化合物处理的肿瘤的克隆源性/克肿瘤)。
c未检测作为NTR活化细胞毒素的式(I)磷酸酯的代表性实例见图2。在WiDr体内生长延迟分析中，含有WiDrWT和WiDrNTR细胞混合物的异种移植物生长至300mm3，用单一剂量的前药以MTD进行处理。监测肿瘤随时间的生长，当平均肿瘤体积＞1600mm3时，将动物处以安乐死。数据以死亡时间给出。意外的是，当以各自的最大耐受剂量(750μmol/kg)施用时，观察到磷酸酯(Ib-7P)的活性超过其母体醇(IIb-7)的活性。在(i)首次治疗失败时间(77-天vs.17-天)和(ii)总存活数(40％vs.6％)方面，Ib-7P优于IIb-7。

Ib-2mP、Ib-7P、Ib-12P和Ic-12P磷酸酯以相当于最大耐受剂量的75％的剂量腹腔注射施用于雌性CD-1裸鼠后的药动学。将化合物的一钠盐溶于磷酸盐缓冲盐水(pH7.4)中，加入1当量碳酸氢钠。通过少量尾静脉放血获得系列血样，每份制得10μl血浆。加入3体积甲醇沉淀出蛋白质，通过采用UV或质谱检测的HPLC测定磷酸酯和相应的醇的浓度。
化合物Ib-2mP(1.333mmol/kg，i.p.，雌性CD-1稞鼠) 化合物Ib-7P(0.562mmol/kg，i.p.，雌性CD-1稞鼠) 化合物Ib-12P(1mmol/kg，i.p.，雌性CD-1稞鼠) 化合物Ic-12P(1.33mmol/kg，i.p.，雌性CD-1稞鼠) 数据表明，磷酸酯在小鼠内可有效地转化为相应的醇。醇在低含氧量细胞或NTR-表达细胞中被硝基还原酶激活。
在前述说明书中，已经对试剂做了描述，或者其整体有已知的等同物，则这些等同物如同单独给出的那样引入本文。
虽然已经参考某些实施方案和实施例描述了本发明，但是应当理解，可以对实施方案和实施例做进一步的变通而不背离本发明的范围。
权利要求
1.式(I)磷酸酯化合物及其可药用的盐和衍生物， 其中X在任意可用的环位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；R代表任选被一个或多个基团取代的低级C1-6烷基，所述的基团包括羟基、氨基及其N-氧化物或者二烷基氨基及其N-氧化物；Y在任意可用的环位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自独立地选自卤素或-OSO2Me；Z在任意可用的环位置代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me。
2.如权利要求1所要求的式(I)磷酸酯化合物，选自以(Ia)、(Ib)或(Ic)表示的化合物及其可药用的盐和衍生物， 其中Y代表 且其中n代表1至6，Z代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me；且其中W各自独立地选自卤素或-OSO2Me。
3.如权利要求1或2所要求的式(I)磷酸酯化合物，选自磷酸2-[[2-[双(2-溴乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲酰基]氨基]乙基酯；磷酸3-[[5-[双(2-氯乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰基]氨基]丙基酯；磷酸3-[[5-[双(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰基]氨基]丙基酯；磷酸2-[[2-[双(2-氯乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲酰基]氨基]乙基酯；甲磺酸2-[(2-氯乙基)-2，4-二硝基-6-[[[2-(膦酰氧基)乙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯；磷酸2-({2-[双(2-溴丙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲酰基}氨基)乙基酯；甲磺酸2-[(2-溴乙基)-2，4-二硝基-6-[[[2-(膦酰氧基)乙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯；磷酸2-[[2-[双(2-碘乙基)氨基]-3，5-二硝基苯甲酰基]氨基]乙基酯；甲磺酸2-[(2-碘乙基)-2，4-二硝基-6-({[2-(膦酰氧基)乙基]氨基}羰基)-苯氨基]乙基酯；甲磺酸2-[(2-氯乙基)-2，4-二硝基-3-[[[3-(膦酰氧基)丙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯；磷酸3-({3-[双(2-溴乙基)氨基]-2，6-二硝基苯甲酰基}氨基)丙基酯；甲磺酸2-[(2-溴乙基)-2，4-二硝基-3-[[[2-(膦酰氧基)乙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯；甲磺酸2-[(2-溴乙基)-2，4-二硝基-3-[[[3-(膦酰氧基)丙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯；和甲磺酸2-[(2-碘乙基)-2，4-二硝基-3-[[[3-(膦酰氧基)丙基]氨基]-羰基]苯氨基]乙基酯。
4.式(II)醇化合物及其可药用的盐和衍生物， 其中X在任意可用的环位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的环位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自独立地选自卤素或-OSO2Me；Z在任意可用的环位置代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me；R代表任选被一个或多个基团取代的低级C1-6烷基，所述的基团包括羟基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物；条件是，排除以下化合物，
5.如权利要求4所要求的式(II)醇化合物，选自以式(IIa)、(IIb)或(IIc)表示的化合物及其可药用的盐和衍生物， 其中Y可代表 且其中n代表1至6，Z代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me；且其中W各自独立地选自卤素或-OSO2Me，条件是，排除以下化合物，
6.如权利要求5所要求的式(II)醇化合物，选自如权利要求5所定义的式(IIb)或(IIc)化合物。
7.如权利要求5或6所要求的式(II)醇化合物，选自N-(3-羟基丙基)-5-[双(2-氯乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺；N-(3-羟基丙基)-5-[双(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺；N-(2-羟基乙基)-5-[双(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺；N-(4-羟基丁基)-5-[双(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺；N-(5-羟基戊基)-5-[双(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺；N-(6-羟基己基)-5-[双(2-溴乙基)氨基]-2，4-二硝基苯甲酰胺；5-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-4-(甲磺酰基)-2-硝基苯甲酰胺；甲磺酸2[(2-溴乙基)-5-[[(3-羟基丙基)氨基]羰基]-2，4-二硝基苯氨基]乙基酯；5-[双(2-碘乙基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-2，4-二硝基苯甲酰胺；2-[双(2-氯乙基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[双(2-氯乙基)氨基]-N-(3-羟基丙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(3-羟基丙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[双(2-氯乙基)氨基]-N-(4-羟基丁基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(4-羟基丁基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[双(2-氯乙基)氨基]-N-(5-羟基戊基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(5-羟基戊基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[双(2-氯乙基)氨基]-N-(6-羟基己基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(6-羟基己基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；2-[双(2-溴丙基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；甲磺酸2-((2-溴乙基)-2-{[(2-羟基丙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯；甲磺酸2-((2-溴乙基)-2-{[(2-羟基乙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯；甲磺酸2-((2-氯乙基)-2-{[(2-羟基乙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯；2-[双(2-碘乙基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-3，5-二硝基苯甲酰胺；甲磺酸2-((2-碘乙基)-2-{[(2-羟基乙基)氨基]羰基}-4，6-二硝基苯氨基)乙基酯；3-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(2-羟基乙基)-2，6-二硝基苯甲酰胺；甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(2-羟基乙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯；3-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(3-羟基丙基)-2，6-二硝基苯甲酰胺；甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(3-羟基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯；3-[双(2-溴乙基)氨基]-N-(4-羟基丁基)-2，6-二硝基苯甲酰胺；甲磺酸2-((2-溴乙基)-3-{[(4-羟基丁基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯；甲磺酸2-((2-氯乙基)-3-{[(3-羟基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯；和甲磺酸2-((2-碘乙基)-3-{[(3-羟基丙基)氨基]羰基}-2，4-二硝基苯氨基)乙基酯。
8.制备通式(I)所示的磷酸酯及其可药用的盐和衍生物的方法， 其中X在任意可用的环位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；R代表任选被一个或多个基团取代的低级C1-6烷基，所述的基团包括羟基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物；Y在任意可用的环位置代表-N-氮丙啶基或-N(CH2CH2W)2，其中W各自独立地选自卤素或-OSO2Me；Z在任意可用的环位置代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me；该方法包括以下步骤(i)使式(II)化合物磷酸化， 其中X在任意可用的环位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的环位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自独立地选自卤素或-OSO2Me；Z在任意可用的环位置代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me；且R代表任选被一个或多个基团取代的低级C1-6烷基，所述的基团包括羟基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物。
9.制备式(IIa)、(IIb)或(IIc)化合物及其可药用的盐和衍生物的方法， 其中Y可代表 且其中n代表1至6，Z代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me；且其中W1是卤素且W2是-OSO2Me；该方法包括以下步骤使式(IIa’)、(IIb’)或(IIc’)化合物与有效量的甲磺酸银(AgOMs)在溶剂中反应，任选加热， 其中Y可代表 其中W’1和W’2各自为卤素；得到此权利要求上文中定义的式(IIa)、(IIb)或(IIc)化合物。
10.如权利要求9所要求的方法，其中溶剂选自MeCN或其它极性非质子溶剂。
11.制备式(Ia)、(Ib)或(Ic)化合物及其可药用的盐和衍生物的方法， 其中Y可代表 且其中n代表1至6，Z代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me；且其中W各自独立地选自卤素或-OSO2Me，该方法包括以下步骤使式(IIa)、(IIb)或(IIc)所示的化合物及其可药用的盐和衍生物磷酸化， 其中Y代表 且其中n代表1至6，Z代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me；且其中W各自独立地选自卤素或-OSO2Me。
12.通过权利要求8所定义的方法获得的式(I)化合物。
13.通过权利要求11所定义的方法获得的式(Ia)、(Ib)或(Ic)化合物。
14.通过权利要求9或10所定义的方法获得的式(IIa)、(IIb)或(IIc)化合物。
15.采用至少一种硝基还原酶的细胞清除方法，该方法包括如下步骤以清除细胞有效量施用上文权利要求1至3中任一项所定义的式(I)化合物或下述式(II)化合物及其可药用的盐和衍生物或它们的混合物， 其中X在任意可用的环位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的环位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自独立地选自卤素或-OSO2Me；Z在任意可用的环位置代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me；R代表任选被一个或多个基团取代的低级C1-6烷基，所述的基团包括羟基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物；其中所述的细胞表达至少一种硝基还原酶。
16.如权利要求15所要求的方法，其中所述的至少一种硝基还原酶通过大肠杆菌的nfsB基因或梭菌属中的直向同源基因来编码。
17.如权利要求15或16所要求的方法，其中细胞清除提供了基本上最小的副作用。
18.如权利要求15至17中任一项所要求的方法，其中表达至少一种硝基还原酶的细胞是受治疗者的组织中的肿瘤细胞。
19.如权利要求15至18中任一项所要求的方法，其中细胞清除通过GDEPT(基因导向性酶前药疗法)进行。
20.如权利要求15至19中任一项所要求的方法，其中细胞清除通过ADEPT(抗体导向性酶前药疗法)进行。
21.如权利要求15至20中任一项所要求的方法，其中细胞是哺乳动物细胞。
22.提供抗癌疗法的方法，其中如上定义的权利要求1至3中任一项的式(I)化合物以治疗有效量施用于受治疗者的肿瘤细胞。
23.如权利要求22所要求的方法，其中所施用的治疗有效量为所述受治疗者最大耐受剂量的约20％至100％。
24.如权利要求21或22所要求的方法，其中式(I)或式(II)化合物与至少一种硝基还原酶组合施用，用于细胞清除。
25.如权利要求24所要求的方法，其中细胞清除通过GDEPT(基因导向性酶前药疗法)或ADEPT(抗体导向性酶前药疗法)进行。
26.如权利要求24或25所要求的方法，其中至少一种硝基还原酶通过大肠杆菌的nfsB基因或梭菌属中的直向同源基因来编码。
27.如权利要求21至26中任一项所要求的方法，还包括照射肿瘤细胞的步骤。
28.药物组合物，该组合物包括治疗有效量的如权利要求1-3中任一项所定义的式(I)化合物或下述式(II)化合物及其可药用的盐和衍生物或它们的混合物以及可药用的赋形剂、添加剂、载体、缓冲剂或稳定剂， 其中X在任意可用的环位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的环位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自独立地选自卤素或-OSO2Me；Z在任意可用的环位置代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me；R代表任选被一个或多个基团取代的低级C1-6烷基，所述的基团包括羟基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物。
29.有效量的如权利要求1至3中任一项所定义的式(I)化合物或下述式(II)化合物及其可药用的盐和衍生物或它们的混合物在制备药物中的用途， 其中X在任意可用的环位置代表-CONH-、-SO2NH-、-O-、-CH2-、-NHCO-或-NHSO2-；Y在任意可用的环位置代表-N-氮丙啶基、-N(CH2CH2W)2或-N(CH2CHMeW)2，其中W各自独立地选自卤素或-OSO2Me；Z在任意可用的环位置代表-NO2、-卤素、-CN、-CF3或-SO2Me；R代表任选被一个或多个基团取代的低级C1-6烷基，所述的基团包括羟基、氨基及其N-氧化物或二烷基氨基及其N-氧化物；所述的药物用于清除表达至少一种硝基还原酶的细胞。
30.如权利要求29所要求的方法，其中药物还用于GDEPT(基因导向性酶前药疗法)或ADEPT(抗体导向性酶前药疗法)。
31.如权利要求29或30所要求的方法，其中至少一种硝基还原酶通过大肠杆菌的nfsB基因或梭菌属中的直向同源基因来编码。
32.如权利要求29至31中任一项所要求的用途，其中药物用于以基本上最小的副作用清除靶细胞。
33.如权利要求29至31中任一项所要求的用途，其中药物用于哺乳动物细胞。
全文摘要
本发明涉及新的硝基苯基氮芥和硝基苯基氮丙啶醇、它们相应的磷酸酯、它们作为靶向细胞毒素剂、作为低含氧量肿瘤中的生物还原药物的用途以及它们与硝基还原酶组合在细胞清除、包括基因导向性酶前药疗法(GDEPT)和抗体导向性酶前药疗法(ADEPT)中的用途。
文档编号C07C317/00GK1902159SQ200480039430
公开日2007年1月24日 申请日期2004年10月29日 优先权日2003年10月31日
发明者W·A·丹尼, G·J·阿特韦尔, 杨尚金, W·R·威尔森, A·V·帕特森, N·A·赫尔斯比 申请人:奥克兰联合服务有限公司