专利名称：一种从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法
技术领域：
本发明涉及一种罗汉果提取物的制备方法，具体地说，涉及一种从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法。
背景技术：
罗汉果(Momordicae grosvenori swingle)是传统的保健果品，已有三百年的食疗历史。其味甘、性微凉，具有清肺止咳、促进肠胃功能之疗效，治疗急、慢性支气管炎，急、慢性扁桃体炎，急性胃炎，大便秘结等。
罗汉果成份研究表明1、罗汉果含有1％的三萜系糖甙类S-5的强甜物质，其甜度相当于蔗糖的300倍，比甜菊甙和甘草素要甜得多，而且没有甜菊甙的苦异味，这种强甜物质味甜而纯正，无异味、回味感强、热稳定好，在100℃水溶液中稳定，在120℃连续加热12小时以上仍不被破坏。属非发酵物质，利于加工贮存。日本竹本常松教授研究推测，这种物质具有治疗癌症作用。
2、罗汉果的维生素C含量非常丰富，据测定每100g鲜罗汉果含维生素C为319-510mg，比柑桔、香蕉、小白菜等都高出十几倍至几十倍，比目前国内公认的维生素含量较高的猕猴桃(每100g含维生素100-420mg)还要高。
3、罗汉果含有治疗冠心病和预防血管硬化较理想的油酸和亚油酸成份。
4、罗汉果含有十七种氨基酸。又含有硒等十六种无机微量元素。现代医学证明硒在对冠心病治、抗衰老、抗癌方面均有疗效。
如日本学者竹本常松教授研究和中国药学证明罗汉果主要有效成分为罗汉果甜甙，它是三萜系的强甜物质。罗汉果甜甙是由天然罗汉鲜果提取，是罗汉果之精华，具有很好的保健作用，对促进肠胃机能和清热止咳、止渴化痰、清热润肺效果更为显著。与人工合成甜味剂及其它甜味剂比较，罗汉果甜甙最突出的优点是食用安全，甜度高(纯品甜度为蔗糖的300倍)，是肥胖症、高血压、糖尿病、心脏病等患者最好的甜味剂及最佳的保健品。本品易溶于水和酒精溶液，热稳定性好，在100℃水溶液中稳定，长时间在120℃高温下仍不被破坏，且属于非发酵物质，利于食品贮存和加工。可广泛应用于医药、食品、日化、饮料、老年保健品等工业。
现在，从罗汉果中提取罗汉果甜甙，使用的方法一般就是用水浸提，然后浓缩干燥水分即得罗汉果甜甙。如专利号为ZL 87101850的中国专利公开了一种罗汉果甜味素的提取方法。它用罗汉果生果研碎、打浆，温水50-60℃萃取，过滤。通过DA-201丙烯酸型吸附剂分离，50％(V/V)乙醇溶解，经D-211丙烯酸型阴树脂脱色、脱盐、去杂质，蒸馏法回收乙醇，经真空泵减压浓缩，冷冻干燥得到罗汉果甜甙。它工艺复杂，且罗汉果甜甙中的有效成分含量不高。其工艺方法急待改进。
发明内容
本发明需要解决的技术问题就在于克服现有从罗汉果中提取罗汉果甜甙方法的缺陷，提供一种从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法，通过该方法所得产品的有效成分含量高，按紫外--可见分光光度UV(ultraviolet-visible spectrophotometry)法测定罗汉果提取物中罗汉果甜甙重量含量为40～80％、或者按高效液相色谱HPLC(HighPerformance Liquid Chromatography)法测定，罗汉果提取物中罗汉果甜甙V重量含量为20～40％。本发明方法生产的罗汉果甜甙含量高、避免了活性成分的损失、简化了生产工艺、缩短了生产周期。
为解决上述问题，本发明采用如下技术方案本发明一种从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法，它是一种以罗汉果为原料，经提取溶媒提取、浓缩、分离纯化提取罗汉果甜甙的方法，按紫外--可见分光光度UV法测定，罗汉果提取物中罗汉果甜甙重量含量为40～80％、或者按高效液相色谱HPLC法测定，罗汉果提取物中罗汉果甜甙V重量含量为20～40％。
本发明方法中所述罗汉果可以为鲜罗汉果或干罗汉果。
本发明方法中所述提取溶媒为水或低碳醇。所述低碳醇为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇或戊醇，所述低碳醇的重量浓度为1％～95％。
本发明方法所述提取方法为加热提取或超声波提取或微波提取，超声波提取条件为工作频率15～60kHz，时间5～30min；微波提取条件为工作频率900～2500MHz，时间5～30min。
本发明干罗汉果提取后需要进行脱色处理。脱色方法为通过脱色树脂或者阴阳离子柱或者Al2O3柱脱色处理。
本发明方法所述浓缩为真空浓缩，温度为60℃以下，浓缩至原来提取液体积的1/4-1/2。
本发明所述分离纯化可以为柱层析分离纯化或膜分离纯化。
本发明柱层析分离纯化为1)提取液经浓缩(真空浓缩，温度控制在60摄氏度以下，真空度0.08MPa以上，浓缩至原来提取液体积的1/4-1/2)、离心(卧式离心机4800r/min)后，直接进入大孔树脂柱；2)用去离子水洗柱至流出液清澈；3)用低碳醇洗柱至流出液无甜味；4)分别收集从大孔树脂柱中的流出液和由低到高浓度醇水溶液洗脱的洗脱液；5)醇水洗脱液经真空浓缩，真空度0.06-0.1MPa，浓缩至8婆美度左右，喷雾干燥进风口温度190℃，出风口温度80℃，得罗汉果甜甙。
其中所述低碳醇为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇或戊醇，低浓度醇水溶液的浓度最低为体积浓度30％，高浓度醇水溶液的浓度最高为体积浓度95％，用醇将从大孔树脂中收集液的混合液调整至醇在其中的总含量为体积含量70％～90％；其中所述大孔树脂为以聚苯乙烯为骨架的材料，如DIAION品牌，型号为D101、D130、AB-8或HP-20。
本发明所述膜分离纯化包括1)微滤除杂将提取液浓缩后进行微滤，微滤膜为0.05μm～0.3μm孔径的微孔滤膜，除去溶液中绝大多数的水溶性蛋白质、果胶及悬浮物等杂质；2)超滤分离采用截流相对分子量为40000的中空纤维超滤膜，进行罗汉果甜甙与其它组分间的分离；3)纳滤浓缩采用截流相对分子量为100～400的纳滤膜或RO反渗透设备进行浓缩。
优选地，所述微滤膜为0.08μm～0.12μm孔径的微孔滤膜；所述纳滤为采用截流相对分子量为150～250的陶瓷膜，进一步优选地，所述微滤膜为0.1μm孔径的不锈钢微孔滤膜；所述纳滤为采用截流相对分子量为200的纳滤膜。
本发明方法可以在提取前先将罗汉果进行破碎，罗汉果经破碎后有利于各种成分的充分溶出。鲜果将其榨碎即可。
本发明还提供了一种由上述方法制备的罗汉果提取物，按紫外--可见分光光度UV法测定，罗汉果提取物中罗汉果甜甙重量含量为40～80％、或者按高效液相色谱HPLC法测定，罗汉果提取物中罗汉果甜甙V重量含量为20～40％。
本发明方法以罗汉果为原料，以水为提取溶媒，集成应用膜分离微滤、超滤、纳滤技术，解决罗汉果甜甙提取中的除杂、分离、浓缩问题。按紫外--可见分光光度UV法测定，罗汉果提取物中罗汉果甜甙重量含量为40～80％、或者按高效液相色谱HPLC法测定，罗汉果提取物中罗汉果甜甙V重量含量为20～40％。本发明方法生产的罗汉果甜甙含量高、避免了活性成分的损失、简化了生产工艺、缩短了生产周期。
具体实施例方式
实施例11)前处理将罗汉果鲜果榨碎。
2)回流提取将原料与去离子水按1∶3比例混合装入提取罐，加热至沸腾后保持温度2小时，收取第一次提取料液，第二次提取再加入3倍量的去离子水，加热沸腾保温2小时，收取第二次提取料液。
3)减压浓缩将提取液导入浓缩器中进行减压浓缩，温度控制在60摄氏度以下，真空度控制在0.08以上。
4)离心将浓缩后的提取液通过离心机离心。
5)浓缩、离心后的提取液直接进大孔树脂柱；6)用水洗柱至流出液清澈；7)用乙醇洗柱至流出液无甜味；8)收集从大孔树脂柱中的流出液和由低到高浓度醇水溶液洗脱的洗脱液；9)洗脱液进行减压浓缩，浓缩至8婆美度；10)喷雾干燥、灭菌包装实施例21)前处理将罗汉果干果破碎。
2)回流提取将原料与重量浓度为1％的乙醇按1∶12比例混合，进行超声波提取，提取条件为工作频率15～60kHz，时间5～30min，提取3次；提取后通过脱色树脂进行脱色处理。
3)减压浓缩将提取液导入浓缩器中进行减压浓缩，温度控制在60摄氏度以下，真空度控制在0.08以上，缩至原来提取液体积的1/4-1/2。
4)微滤除杂将减压浓缩液抽入管式不锈钢微滤膜设备中，微滤膜为0.05μm～0.3μm孔径的微孔滤膜，除去溶液中绝大多数的水溶性蛋白质、果胶及悬浮物等杂质，操作过程中压力为0.2Mpa，收取透过微滤膜的滤液。
5)超滤分离将微滤滤液导入中空纤维膜超滤设备储罐中，操作过程中压力为1Mpa，通过截流相对分子量为40000的超滤膜，进行罗汉果甜甙与其它组分间的分离，收取透过超滤膜的滤液。
6)纳滤浓缩将超滤滤液导入纳滤设备的储液罐中，调节压力至3Mpa，采用截流相对分子量为100～400的纳滤膜进行浓缩。待浓缩液达到8婆美度时，收取浓缩液。
7)喷雾干燥、灭菌包装。
实施例31)前处理将罗汉果干果破碎。
2)回流提取将原料与重量浓度为95％的丙醇按1∶2比例混合，进行微波提取，提取条件为工作频率900～2500MHz，时间5～30min。提取，提取2次；提取后通过阴阳离子柱进行脱色处理。
3)减压浓缩将提取液导入浓缩器中进行减压浓缩，温度控制在60摄氏度以下，真空度控制在0.08以上，缩至原来提取液体积的1/4-1/2。
4)微滤除杂将减压浓缩液抽入管式不锈钢微滤膜设备中，微滤膜为0.08μm～0.12μm孔径的微孔滤膜，除去溶液中绝大多数的水溶性蛋白质、果胶及悬浮物等杂质，操作过程中压力为0.2Mpa，收取透过微滤膜的滤液。
5)超滤分离将微滤滤液导入中空纤维膜超滤设备储罐中，操作过程中压力为1Mpa，通过截流相对分子量为40000的超滤膜，进行罗汉果甜甙与其它组分间的分离，收取透过超滤膜的滤液。
6)纳滤浓缩将超滤滤液导入纳滤设备的储液罐中，调节压力至3Mpa，采用截流相对分子量为150～250的陶瓷膜进行浓缩。待浓缩液达到8婆美度时，收取浓缩液。
7)喷雾干燥、灭菌包装实施例4
1)前处理将罗汉果干果破碎。
2)回流提取将原料与重量浓度为50％的异丙醇按1∶5比例混合，进行微波提取，提取条件为工作频率900～2500MHz，时间5～30min。提取2次；提取后通过Al2O3柱进行脱色处理。
3)减压浓缩将提取液导入浓缩器中进行减压浓缩，温度控制在60摄氏度以下，真空度控制在0.08以上，缩至原来提取液体积的1/4-1/2。
4)微滤除杂将减压浓缩液抽入管式不锈钢微滤膜设备中，微滤膜为0.08μm～0.12μm孔径的微孔滤膜，除去溶液中绝大多数的水溶性蛋白质、果胶及悬浮物等杂质，操作过程中压力为0.2Mpa，收取透过微滤膜的滤液。
5)超滤分离将微滤滤液导入中空纤维膜超滤设备储罐中，操作过程中压力为1Mpa，通过截流相对分子量为40000的超滤膜，进行罗汉果甜甙与其它组分间的分离，收取透过超滤膜的滤液。
6)纳滤浓缩将超滤滤液导入纳滤设备的储液罐中，调节压力至3Mpa，采用截流相对分子量为150～250的陶瓷膜进行浓缩。待浓缩液达到8婆美度时，收取浓缩液。
7)喷雾干燥、灭菌包装。
权利要求
1.一种从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法，其特征在于它是一种以罗汉果为原料，经提取溶媒提取、浓缩、分离纯化提取罗汉果甜甙的方法，按紫外--可见分光光度UV法测定，提取物中罗汉果甜甙重量含量为40～80％、或者按高效液相色谱HPLC法测定，提取物中罗汉果甜甙V重量含量为20～40％。
2.如权利要求1所述从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法，其特征在于所述罗汉果为鲜罗汉果或干罗汉果。
3.如权利要求1所述从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法，其特征在于所述提取溶媒为水或低碳醇，提取次数为3～4次，溶媒用量为2～12倍；温度为40～100℃。
4.如权利要求3所述从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法，其特征在于所述低碳醇为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇或戊醇，所述低碳醇的重量浓度为1％～95％。
5.如权利要求1所述从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法，其特征在于所述提取方法为加热提取或超声波提取或微波提取。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于超声波提取条件为工作频率15～60kHz，时间5～30min；微波提取条件为工作频率900～2500MHz，时间5～30min。
7.如权利要求2所述从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法，其特征在于干罗汉果提取后进行脱色处理。
8.如权利要求7所述从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法，其特征在于所述脱色方法为通过脱色树脂或者阴阳离子柱或者Al2O3柱脱色处理。
9.如权利要求1所述从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法，其特征在于所述浓缩为真空浓缩，温度为60℃以下，浓缩至原来提取液体积的1/4-1/2。
10.如权利要求1所述从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法，其特征在于所述分离纯化为柱层析分离纯化或膜分离纯化。
11.如权利要求10所述从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法，其特征在于柱层析分离纯化包括1)提取液经浓缩、离心后，直接进入大孔树脂柱；2)用去离子水洗柱至流出液清澈；3)用低碳醇洗柱至流出液无甜味；4)分别收集从大孔树脂柱中的流出液和由低到高浓度醇水溶液洗脱的洗脱液；5)真空浓缩、喷雾干燥真空度0.06-0.1MPa，浓缩至8婆美度进行喷雾干燥进风口温度190℃，出风口温度90℃。
12.如权利要求11所述的从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法，其特征在于所述低碳醇为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇或戊醇，低浓度醇水溶液的浓度最低为体积浓度30％，高浓度醇水溶液的浓度最高为体积浓度95％，用醇将从大孔树脂中收集液的混合液调整至醇在其中的总含量为体积含量70％～90％。
13.如权利要求11或12所述从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法，其特征在于所述大孔树脂为以聚苯乙烯为骨架的材料。
14.如权利要求13所述的从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法，其特征在于所述聚苯乙烯型号为D101、D130、AB-8或HP-20。
15.如权利要求10所述从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法，其特征在于所述膜分离纯化为1)微滤除杂将提取液浓缩后进行微滤，微滤膜为0.05μm～0.3μm孔径的微孔滤膜，除去溶液中绝大多数的水溶性蛋白质、果胶及悬浮物等杂质；2)超滤分离采用截流相对分子量为40000的中空纤维超滤膜，进行罗汉果甜甙与其它组分间的分离；3)纳滤浓缩采用截流相对分子量为100～400的纳滤膜或RO反渗透设备进行浓缩。
16.如权利要求15所述从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法，其特征在于所述微滤膜为0.08μm～0.12μm孔径的微孔滤膜；所述纳滤为采用截流相对分子量为150～250的陶瓷膜。
17.如权利要求15所述从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法，其特征在于所述微滤膜为0.1μm孔径的不锈钢微孔滤膜；所述纳滤为采用截流相对分子量为200的纳滤膜。
18.如权利要求1-17之任一所述从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法，其特征在于在提取前先将罗汉果进行破碎。
19.一种如权利要求1-18之任一所述方法制备的罗汉果提取物，其特征在于按紫外--可见分光光度UV法测定，罗汉果提取物中罗汉果甜甙重量含量为40～80％、或者按高效液相色谱HPLC法测定，罗汉果提取物中罗汉果甜甙V重量含量为20～40％。
全文摘要
本发明公开了一种从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法，它是一种以罗汉果为原料，经提取溶媒提取、浓缩、分离纯化提取罗汉果甜甙的方法，它以水或低碳醇为溶媒；提取的方法为水加热提取或超声波提取或微波提取；分离纯化为柱层析分离纯化或膜分离纯化，提取物中罗汉果甜甙重量含量为40～80％(紫外——可见分光光度法，即UV法测定)、或者罗汉果甜甙V重量含量为20～40％(高效液相色谱法，即HPLC法测定)。本发明方法生产的罗汉果甜甙含量高、避免了活性成分的损失、简化了生产工艺、缩短了生产周期。
文档编号C07J9/00GK1683387SQ200510055229
公开日2005年10月19日 申请日期2005年3月16日 优先权日2005年3月16日
发明者秦本军, 宋云飞, 汤凌志, 季永贤 申请人:桂林莱茵生物科技股份有限公司