专利名称：一种富集孕妇血浆中胎儿游离dna的方法
技术领域：
本发明涉及一种富集孕妇血浆中胎儿游离DNA的试剂及使用该试剂富集孕妇血浆中胎儿游离DNA的方法。
背景技术：
目前，产前诊断主要是利用胎儿的组织来检测一些遗传性疾病，这对于预防及控制新生儿发病率及死亡率具有十分重要的临床意义。然而，损伤性的诊断如羊水和绒毛膜穿刺等方法都有机会对胎儿和孕妇造成一定的危害。因此，这些方法通常仅用于那些怀疑怀有遗传性疾病胎儿的高风险孕妇。鉴于损伤性产前诊断的局限性，故非损伤产前性诊断的方法，具有极大的发展空间和潜力。其中，母亲与胎儿之间存在细胞相互渗透的现象已为研究所证实，而孕妇血液中的胎儿细胞为有效地进行非损伤性诊断，提供了有价值的遗传物质。然而孕妇血液中的胎儿细胞数量极少，使其在临床应用中受到一定的限制。后又在孕妇的血浆和血清中发现了游离胎儿DNA，检测这类胎儿DNA，无疑是一种既安全又准确的非损伤性诊断方法为产前诊断开创了一个新的领域。但母血中胎儿DNA含量较低，而且受到母亲强大DNA背景的影响使目前的基于胎儿游离DNA的进行产前诊断方面的研究大多局限在父系遗传病方面。从孕妇血浆中提取高浓度的胎儿DNA，是一项有利于临床意义深远的工作。
发明内容
本发明的目的是提供一种富集孕妇血浆中胎儿游离DNA的试剂及使用该试剂富集孕妇血浆中胎儿游离DNA的方法，它涉及DNA富集试剂的组分及使用该试剂富集胎儿DNA的方法。本发明富集胎儿DNA的试剂价格低廉，易获得，富集方法操作简便、快捷，经过该方法处理后明显提高了孕妇血浆中胎儿DNA的提取含量。本发明胎儿DNA富集试剂包括0.5M EDTA(pH＝8.0)和分析纯甲醛。用该试剂富集胎儿游离DNA的具体操作方法为取孕妇外周血3-5ml，加入EDTA和分析纯甲醛，使其终浓度分别为0.5M和1ml/L。在24小时内，室温下1600g离心10分钟。将血浆转移至一新的离心管中，重复上述步骤，该血浆可用于后续试验或-80度冻存保存随时使用。经过上述处理后的样品可直接用于各种品牌或是实验室常规方法的DNA提取。
具体实施例选取2005年1月到2005年10月孕中期产妇30例，分别取外周血6ml。其中3ml，用本发明的方法处理后使用qiagen全血DNA提取试剂盒提取DNA.取孕妇外周血3-5ml，加入EDTA和分析纯甲醛，使其终浓度分别为0.5M和1ml/L。在24小时内，室温下1600g离心10分钟。将血浆转移至一新的离心管中，重复上述步骤，该血浆用qiagen提取试剂盒提取DNA.另3ml直接使用qiagen提取试剂盒提取DNA。
采用荧光定量PCR方法，扩增SRY基因，以获得胎儿DNA在孕妇血浆中总DNA的相对浓度。未经富集DNA处理组，相对浓度为6.10％。处理组，相对浓度为18.54％。
我们的处理方法，明显的提高了孕妇血浆中胎儿DNA的提取浓度。
权利要求
1.一种富集孕妇血浆中胎儿游离DNA的试剂包括0.5M EDTA(pH＝8.0)和分析纯甲醛。
2.使用该试剂富集孕妇血浆中胎儿游离DNA的方法，具体操作方法为取孕妇外周血3-5ml，加入EDTA和分析纯甲醛，使其终浓度分别为0.5M和1ml/L。在24小时内，室温下1600g离心10分钟。将血浆转移至一新的离心管中，重复上述步骤，该血浆可用于后续试验或-80度冻存保存随时使用。经过上述处理后的样品可直接用于各种品牌或是实验室常规方法的DNA提取。
全文摘要
富集孕妇血浆中胎儿游离DNA的试剂及使用该试剂富集孕妇血浆中胎儿游离DNA的方法，它涉及DNA富集试剂的组分及使用该试剂富集胎儿DNA的方法。本发明胎儿DNA富集试剂包括0.5M EDTA(pH＝8.0)和分析纯甲醛。用该试剂富集胎儿游离DNA的具体操作方法为取孕妇外周血3－5ml，加入EDTA和分析纯甲醛，使其终浓度分别为0.5M和1ml/L。在24小时内，室温下1600g离心10分钟。将血浆转移至一新的离心管中，重复上述步骤，该血浆可用于后续试验或－80度冻存保存随时使用。经过上述处理后的样品可直接用于各种品牌或是实验室常规方法的DNA提取。本发明富集胎儿DNA的试剂价格低廉，易获得，富集方法操作简便、快捷，经过该方法处理后明显提高了孕妇血浆中胎儿DNA的提取含量。
文档编号C07H21/00GK101016562SQ20061001315
公开日2007年8月15日 申请日期2006年2月8日 优先权日2006年2月8日
发明者陈熹 申请人:陈熹