专利名称：4,5－二取代苯基－1,2,3－噻二唑类衍生物,及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种4，5-二取代苯基-1，2，3-噻二唑类衍生物，及该化合物作为微管抑制剂在制备抑制肿瘤药物中的应用，同时涉及该类化合物的制备方法。
背景技术：
肿瘤，特别是恶性肿瘤，已经严重威胁人类健康和生命安全，在中国是第一位的致死病因。发现和寻找新的有效的抗肿瘤新药是当前的重大课题。
微管蛋白是寻找抗肿瘤药物的一个重要靶点，已经有很多重要的微管抑制剂构成抗肿瘤药物的重要组成部分，数以百计的微管抑制剂，包括天然的，半合成或全合成的，已经被报道。其中，CombretastatinA-4(CA-4)，从南部非洲柳树中被分离得到，具有非常强大的微管抑制作用。由于CA-4结构简单，以此为先导物，进行结构改造已经有很多报道，可以参见文献Nam，N.H.Curr.Med.Chem.2003，10，1697.和Tron，G.C.；Pirali，T.；Sorba，G.；Pagliai，F.；Busacca，S.；Genazzani，A.A.J.Med.Chem.2006，49，3033，有比较详细的综述。但是CA-4本身水溶性差，容易形成反式异构体而失去活性，已有文献报道的结构改造，存在或合成比较复杂，或者活性不够高，或毒性大等缺点。
目前，它的前药，CA-4磷酸盐(CA-4P)，已经在美国上三期临床。
我们基于CA-4的化学结构特点和已有文献报道，设计合成以1，2，3-噻二唑五元环来替代CA-4的顺式二苯乙烯结构。
发明内容
本发明的目的在于设计与合成具有良好抗肿瘤作用的CA-4类似物。本发明的另一目的是提供制备这一系列化合物的方法，同时测定其体外的药理活性，显示出很好的结果。
本发明的目标产物可以用以下结构式来表示 其中，R1～R6各自独立地为氢、甲氧基、卤素原子、硝基、氨基、羟基或二甲基叔丁基硅氧基等，但R1～R6不同时为氢，或者相邻两取代基还可以为-OCH2O-从而构成五元环。
本发明化合物还包括上述结构式所示衍生物所形成的在药学上可接受的无毒盐及其水合物等。这些无毒盐包括该衍生物与酸形成的盐。所述的酸可以为如盐酸、硫酸、氢溴酸、磷酸等的无机酸或如乙酸、柠檬酸、草酸、酒石酸、苯甲酸、苹果酸等的有机酸。所述水合物的结晶水数目为0～16中的任意实数。
本发明的化合物其代表性的例子可以为如下化合物化合物1
化合物2 化合物3 化合物4 化合物5 化合物6 化合物7
化合物8 化合物9 化合物10 化合物11 化合物12 化合物13
化合物14 化合物15 化合物16 化合物17 化合物18 化合物19
化合物20 化合物21 化合物22 本发明还提供了该类化合物的制备方法本发明的化合物可以按照以下反应路线合成得到反应路线
步骤1将取代二苯乙酮原料2(1-2毫摩尔，制备方法参考文献Napolitano，E.；Ramacciotti，A.Gazzetta Chimica Italiana，1989，119，19；Angle，S.R.；Neitzel，M.L.J.Org.Chem.2000，65，6458.)和对甲苯磺酰肼(2～3当量)溶于乙醇(25毫升)中，在加热回流条件下，反应3小时左右。减压蒸除溶剂，油泵抽干，得到中间产物。
步骤2将步骤1中得到的中间产物溶于干燥氯仿(30毫升)中，小心滴加亚硫酰氯(2毫升)，冰水冷却，自然升至室温，反应4～6小时。停止反应，减压蒸除溶剂，倒入饱和碳酸氢钠水溶液，或者直接小心加入饱和碳酸氢钠水溶液，分液，萃取。有机相依次用饱和碳酸氢钠水溶液，饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠(镁)干燥。柱分离得到产物1，产率30～80％。
其中当取代基为二甲基叔丁基硅氧基，采用以下常规方法脱除该取代基将所得产物1溶于四氢呋喃中，加入等当量的四丁基氟化铵，室温反应10～40分钟，按通常方法后处理即得。
其中当取代基为硝基时，可以按通常方法将硝基还原成为氨基。当取代基为氨基时，可以按以下常规方法将其制成药学上可接受的无毒盐或水合物将含有氨基的产物1溶于溶剂中，滴加1～10当量的酸，按寻常方法后处理得到。
所述的酸为选自包括盐酸、硫酸、氢溴酸、磷酸的无机酸或包括乙酸、柠檬酸、草酸、酒石酸、苯甲酸、苹果酸的有机酸。水合物结晶水数目为0～16中的任意实数。
本发明进一步提供了上述化合物在制备治疗肿瘤疾病的药物中的应用。
具体实施例方式
通过下述实例将有助于理解本发明，但本发明的内容并不限于所举实例。
本发明所用试剂均为市售，核磁共振谱由Varian Mercury-400傅立叶变换核磁共振波谱仪测定，质谱由MAT-95型质谱仪测定，熔点仪采用Buchi 510，温度未校正。
实施例1由如下结构式表示的4-对甲氧基苯基-5-(3，4，5-三甲氧基苯基)-1，2，3-噻二唑(化合物15)的制备。
取2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-1-(4-甲氧基苯基)-乙酮(1mmol)和对甲苯磺酰肼(2mmol)溶于乙醇(25毫升)中，加热回流3h，减压蒸除溶剂，油泵抽干。溶于干燥氯仿(30毫升)中，小心滴加亚硫酰氯(2毫升)，冰水冷却，自然升至室温，反应4小时。停止反应，减压蒸除溶剂，加入饱和碳酸氢钠水溶液，分液，萃取。有机相依次用饱和碳酸氢钠水溶液，饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥。柱分离得到产品，收率51％。
Mp95-97℃；NMR3.73(s，6H)，3.84(s，3H)，3.89(s，3H)，6.55(s，2H)，6.93(d，2H，J＝9.0)，7.62(d，2H，J＝9.0)；MS358(21)，330(91)，315(100)，163(24)，149(14)。
实施例2化合物1的制备除了使用相应的原料外，以实施例1相同的方法制备化合物1，化合物1的结构式、熔点以及NMR和MS数据列于下表1中。
实施例3化合物2的制备除了使用相应的原料外，以实施例1相同的方法制备化合物2，化合物2的结构式、熔点以及NMR和MS数据列于下表1中。
实施例4化合物3的制备除了使用相应的原料外，以实施例1相同的方法制备化合物3，化合物3的结构式、熔点以及NMR和MS数据列于下表1中。
实施例5化合物4的制备除了使用相应的原料外，以实施例1相同的方法制备化合物4，化合物4的结构式、熔点以及NMR和MS数据列于下表1中。
实施例6化合物5的制备除了使用相应的原料外，以实施例1相同的方法制备化合物5，化合物5的结构式、熔点以及NMR和MS数据列于下表1中。
实施例7化合物6的制备除了使用相应的原料外，以实施例1相同的方法制备化合物6，化合物6的结构式、熔点以及NMR和MS数据列于下表1中。
实施例8化合物7的制备除了使用相应的原料外，以实施例1相同的方法制备化合物7，化合物7的结构式、熔点以及NMR和MS数据列于下表1中。
实施例9化合物8的制备除了使用相应的原料外，以实施例1相同的方法制备化合物8，化合物8的结构式、熔点以及NMR和MS数据列于下表1中。
实施例10化合物9的制备除了使用相应的原料外，以实施例1相同的方法制备化合物9，化合物9的结构式、熔点以及NMR和MS数据列于下表1中。
实施例11化合物10的制备除了使用相应的原料外，以实施例1相同的方法制备化合物10，化合物10的结构式、熔点以及NMR和MS数据列于下表1中。
实施例12化合物11的制备除了使用相应的原料外，以实施例1相同的方法制备化合物11，化合物11的结构式、熔点以及NMR和MS数据列于下表1中。
实施例13化合物12的制备除了使用相应的原料外，以实施例1相同的方法制备化合物12，化合物12的结构式、熔点以及NMR和MS数据列于下表1中。
实施例14化合物13的制备除了使用相应的原料外，以实施例1相同的方法制备化合物13，化合物13的结构式、熔点以及NMR和MS数据列于下表1中。
实施例15化合物14的制备除了使用相应的原料外，以实施例1相同的方法制备化合物14，化合物14的结构式、熔点以及NMR和MS数据列于下表1中。
实施例16化合物16的制备除了使用相应的原料外，以实施例1相同的方法制备化合物16，化合物16的结构式、熔点以及NMR和MS数据列于下表1中。
实施例17化合物17的制备除了使用相应的原料外，以实施例1相同的方法制备化合物17，化合物17的结构式、熔点以及NMR和MS数据列于下表1中。
实施例19化合物18的制备除了使用相应的原料外，以实施例1相同的方法制备化合物18，化合物18的结构式、熔点以及NMR和MS数据列于下表1中。
实施例19化合物19的制备除了使用相应的原料外，以实施例1相同的方法制备化合物19，化合物19的结构式、熔点以及NMR和MS数据列于下表1中。
实施例20化合物20的制备除了使用相应的原料外，以实施例1相同的方法制备化合物20，化合物20的结构式、熔点以及NMR和MS数据列于下表1中。
表1
实施例22本发明的化合物的药理活性测试1体外活性测试方法和结果如下其中CA-4和秋水仙素为阳性对照实验组。
抗肿瘤生物活性体外筛选试验1筛选方法四氮唑盐(microculture tetrozolium，MTT)还原法*细胞株HL60人白血病作用时间72h对肿瘤细胞生长的抑制率％
抗肿瘤生物活性体外筛选试验2筛选方法磺酰罗丹明B(sulforhodamine B，SRB)蛋白染色法细胞株A-549人肺腺癌作用时间72h对肿瘤细胞生长的抑制率％
抗肿瘤生物活性体外筛选试验3筛选方法磺酰罗丹明B(sulforhodamine B，SRB)蛋白染色法细胞株HT29人肠癌作用时间72h对肿瘤细胞生长的抑制率％
2体内活性测试方法和结果如下。
从药理实验可以看出，本发明所合成的一系列化合物中，含有CA-4的结构特征的一系列噻二唑衍生物均具有较强的抗肿瘤细胞生长的作用，当取代基一边为三甲氧基取代苯基，另一边优选甲氧基，羟基，硝基或者氨基时，具有很强的体外活性同时羟基和氨基的存在也会使毒性加大。根据实际情况，申请人选择其中四个体外活性比较强的化合物做了体内动物实验，发现与体外实验的结果较好的吻合。
给药方法及疗程选用18-22克雌性KM小鼠及生长良好的7-11天的S-180瘤种，将瘤组织制成细胞悬液，接种于小鼠右侧腋部皮下，约1.0-2.0×106细胞/只，接种24小时后随机分笼，腹腔注射给药连续7天。停药后24小时处死动物，称体重、瘤重，计算各组平均瘤重，按下列公式求出肿瘤抑制率并进行t检验。
肿瘤抑制率＝[(空白对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/(空白对照组平均瘤重)]×100％实验结果
注CA-4为阳性对照，NS为空白对照组，5-Fu为模型采用阳性对照。
权利要求
1.由下面结构式1所表示的4，5-二取代苯基-1，2，3-噻二唑类衍生物 上面结构式1中，R1～R6各自独立地为氢、甲氧基、卤素原子、硝基、氨基、羟基或二甲基叔丁基硅氧基，但R1～R6不同时为氢，或者相邻两取代基还可以为-OCH2O-从而构成五元环。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中该化合物包括所述衍生物所形成的在药学上可接受的无毒盐及其水合物，这些药学上可接受的无毒盐包括该衍生物与酸形成的盐，所述水合物的结晶水数目为0～16中的任意实数。
3.根据权利要求2所述的化合物，其中所述的酸包括选自盐酸、硫酸、氢溴酸、磷酸的无机酸或选自乙酸、柠檬酸、草酸、酒石酸、苯甲酸、苹果酸的有机酸。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中该化合物为以下化合物化合物1 化合物2 化合物3 化合物4 化合物5 化合物6 化合物7 化合物8 化合物9 化合物10 化合物11 化合物12 化合物13 化合物14 化合物15 化合物16 化合物17 化合物18 化合物19 化合物20 或化合物21
5.权利要求1所述的化合物的制备方法，该方法按照以下反应路线进行 2 中间产物1其中，R1～R6各自独立地为氢、甲氧基、卤素原子、硝基、氨基、羟基或二甲基叔丁基硅氧基，但R1～R6不同时为氢，或者相邻两取代基还可以为-OCH2O-从而构成五元环；(1)将2代表的化合物和2～3当量的对甲基苯磺酰肼溶于乙醇中，加热回流2～5小时，蒸除溶剂，得到中间产物；(2)将上步所得中间产物溶于氯仿或二氯甲烷的溶剂中，滴加二氯亚砜，冰水冷却，自然升至室温，反应4-6小时，然后经后处理得到产物1。
6.根据权利要求5描述的制备方法，其中当取代基为二甲基叔丁基硅氧基时，采用以下方法脱除该取代基将所得产物1溶于四氢呋喃中，加入等当量的四丁基氟化铵，室温反应10～40分钟，然后经后处理即得。
7.根据权利要求5描述的制备方法，其中当取代基为硝基时，可以将硝基还原成为氨基。
8.根据权利要求5描述的制备方法，其中当取代基为氨基时，可以将其制成药学上可接受的无毒盐或水合物将含有氨基的化合物1，溶于溶剂中，滴加1～10当量的酸，经后处理得到。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其中所述的酸为选自包括盐酸、硫酸、氢溴酸、磷酸的无机酸或包括乙酸、柠檬酸、草酸、酒石酸、苯甲酸、苹果酸的有机酸，水合物结晶水数目为0-16中的任意实数。
10.权利要求1所述的衍生物在制备抗肿瘤的药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种4，5－二取代苯基－1，2，3－噻二唑类衍生物，以及该类化合物作为微管抑制剂在制备抑制肿瘤的药物方面的应用，同时涉及该类化合物的制备方法。
文档编号C07D417/04GK1865252SQ20061002778
公开日2006年11月22日 申请日期2006年6月19日 优先权日2006年6月19日
发明者吴茂江, 丁健, 陈奕, 林莉萍, 杨春皓, 谢毓元 申请人:中国科学院上海药物研究所