专利名称：一种附着法保藏抗菌肽的方法
技术领域：
本发明涉及到微生物技术领域，具体讲是涉及一种抗菌肽保藏方法。
背景技术：
目前传统抗生素耐药性形势日益严峻，对人类的健康构成了严重威胁，为了解决抗药性问题，科学界发现了抗菌肽，抗菌肽表现出来的优越性在于不易产生抗药性，且无残留现象，同时，抗菌肽表现出广谱抗菌活性的同时还对原虫、癌细胞及病毒表现出较好的活性。然而，尽管如此但抗菌肽的普及应用还为时尚早，这主要是因为目前在抗菌肽活性及天然抗菌肽提取量有限的情况下，要制备出传统抗生素的替代品，其成本非常高；另一重要因素是其保藏问题，与传统抗生素相比，抗菌肽容易因氧化或酶解而失去活性。目前在抗菌肽保藏方面主要是添加抑制剂和冻干保藏两种途径，这两个途径中前者存在副作用，不仅制约着作为药物的普及应用同时对科研工作也产生一定的干扰，而后者成本较高且不利于大众化操作，因此为了促进抗菌肽的普及应用，需在保藏上开拓新方法。
发明内容
本发明目的在于提供一种便于使用且无副作用的抗菌肽保藏方法。
本发明所提供的抗菌肽保藏方法，其技术方案是将抗菌肽溶液浸入到吸水纸或纤维织物的载体中，然后将含有抗菌肽成分的载体烘干，再进行真空包装，在30℃以下保藏。
所说的吸水纸载体最好采用滤纸。
所说的纤维织物载体可为医用纱布，也包括无纺布。
进一步的方案是，将含有抗菌肽成分的载体进行真空包装并于4℃保藏。
对于耐热性强的抗菌肽经100℃热处理后再按上述方法保藏，则稳定性更强。
本发明方法的具体操作过程如下1.将滤纸和纱布分别剪成宽0.5cm，长2cm的长条后灭菌烘干并于室温干燥保存备用。
2.将抗菌肽溶液浸入载体后烘干。
3.将含有抗菌肽成分的载体进行真空包装并于30℃以下保藏，最好在4℃保藏。
本发明方法保藏的抗菌肽与现有保藏方法保藏的抗菌肽比较其中，现有保藏抗菌肽的方法包括一、添加抑制剂的保藏方法在抗菌肽溶液中加入抑制剂(苯基硫脲20μg/ml、PMSF30μg/ml及20μg/mlAprotinin)后直接于-80℃保存。
二、冻干法保藏将抗菌肽溶液分装在1.5mL的离心管中，置-80℃速冻，然后放入冻干机中冻干成粉状，转入-20℃保存。
本发明方法保藏的抗菌肽与现有保藏方法保藏的抗菌肽活性通过下列方法检测比较，结果如下1.将固体LB培养基融化，待温度降至45℃左右(不烫手)时加入测试菌摇匀(使得培养基含菌的浓度约1×106cells/μL)，然后倒入培养皿。
2.对液态的样品利用琼脂糖孔穴扩散法检测其抗菌活性，以冻干粉保存的样品在做抑菌实验前需用无菌ddH2O重溶，抑菌试验方法同样用琼脂糖孔穴扩散法，对于本发明保藏的样品则将载体平均剪成4等份后直接贴于含菌培养基表面(每份所含抗菌肽量与琼脂糖孔穴扩散法中孔中所加的量相同)，置37℃培养过夜，测量抑菌圈直径。
3.活性检测分别在保藏日当天和保藏日起5天、10天、20天、30天、40天、50天、60天时进行。
实验结果(见附图
中表1和表2)表1为棉铃虫抗菌肽几种保藏样品的抑菌结果，表中显示抑制剂组的活性减弱最为明显，60天后活性已减弱过半；冻干组与两种附着法保藏的样品活性减幅较缓慢且在60天后活性依然保留在50％以上。表2为抗菌肽Hex-Mag几种保藏样品的抑菌结果，结果显示抑制剂组的活性减弱最快，冻干组与两种附着法保藏的样品活性减幅较缓慢且都能在60天后保留50％以上的活性。
表1不同条件保藏的棉铃虫抗菌肽在不同时期的抑菌实验结果(抑菌圈直径毫米)
表2不同条件保藏的抗菌肽Hex-Mag在不同时期的抑菌实验结果(抑菌圈直径毫米) 结果证明本发明方法所保藏的抗菌肽，其活性维持的时间比添加抑制剂的保藏方法明显要长，与冻干法保藏的样品活性维持时间相当，而与这两种方法相比，本发明方法保藏抗菌肽费用低，方便使用且无毒副作用。
具体实施例方式
实施例一棉铃虫抗菌肽的保存1.将滤纸剪成宽0.5cm，长2cm的长条后灭菌烘干并于室温干燥保存备用。
2.将棉铃虫抗菌肽溶液浸入滤纸载体后烘干。
3.将含有棉铃虫抗菌肽成分的滤纸载体进行真空包装并于4℃保存。
结果显示，本附着法保藏的样品活性减幅较缓慢且在60天后活性依然保留在50％以上。
实施例二抗菌肽Hex-Mag的保存1.将医用纱布剪成宽0.5cm，长2cm的长条后灭菌烘干并于室温干燥保存备用。
2.将抗菌肽Hex-Mag溶液浸入医用纱布载体后烘干。
3.将含有抗菌肽Hex-Mag成分的医用纱布载体进行真空包装并于4℃保存。
结果显示，本附着法保藏的样品活性减幅较缓慢且都能在60天后保留50％以上的活性。
权利要求
1.一种附着法保藏抗菌肽的方法，其特征在于将抗菌肽溶液浸入到灭菌后的吸水纸或纤维织物的载体中，然后将含有抗菌肽成分的载体烘干，再进行真空包装，在30℃以下保藏。
2.根据权利要求1所述的附着法保藏抗菌肽的方法，其特征在于所说的吸水纸载体为滤纸。
3.根据权利要求1所述的附着法保藏抗菌肽的方法，其特征在于所说的纤维织物载体为医用纱布。
4.根据权利要求1所述的附着法保藏抗菌肽的方法，其特征在于将含有抗菌肽成分的载体进行真空包装并于4℃保存。
5.根据权利要求1所述的附着法保藏抗菌肽的方法，其特征在于将要保藏的抗菌肽溶液于100℃下热处理后，再按权利要求1所述的方法保藏。
全文摘要
本发明提供一种附着法保藏抗菌肽的方法，其技术方案是将抗菌肽溶液浸入到吸水纸或纤维织物的载体中，然后将含有抗菌肽成分的载体烘干，再进行真空包装，在30℃以下保藏。本发明方法所保藏的抗菌肽，其活性维持的时间比现有用添加抑制剂的保藏方法明显要长，与冻干法保藏的样品活性维持时间相当，而与这两种方法相比，本发明方法保藏抗菌肽费用低，方便使用且无毒副作用。
文档编号C07K17/10GK1884298SQ200610035759
公开日2006年12月27日 申请日期2006年6月2日 优先权日2006年6月2日
发明者李桂平, 陈仪本 申请人:广东省微生物研究所