专利名称：纯化罗汉果苷并提取生物活性物质的方法
技术领域：
本发明涉及天然调味物的纯化，具体而言，涉及罗汉果苷的纯化并同 时提取具有生物活性物质的方法。
背景技术：
罗汉果为葫芦科多年生宿根攀援藤本植物罗汉果(57r5/〃<3 ^YX Ke/70W/)的果实。罗汉果通常是指植物(i7ra/〃s gro^e朋W/)的果实, ^旦也包4舌相关的类似的才直物种类S. s/a/z/e/^/5"， 51 w7o/ra/^(^力e， 5. s/H/y 7e/LS"/s， 51 57ra/〃a， 51. 々ar/ ee"51/51 <3/^ 51 /^/附/ /a"a。 罗汉果 中的甜味成分罗汉果苷为三萜类化合物，其葡萄糖环与mogrol基相连。罗 汉果提取物是一种粉末，其罗汉果苷的含量为在60% ~99%,目前已被广泛 用作甜味剂。然而，目前生产的罗汉果提取物仍然含有一定程度的回苦味，
这影响了罗汉果提取物的口感并且限制了其作为天然甜味剂的应用。罗汉果 鲜果压碎制成的罗汉果浓缩果汁是近年来才开发出来的产品，记载在美国专
利US Patent 20060003053之中，同样也含有一定程度的回苦味，也会影响 饮料质量。长期以来，人们认为回苦味可能是罗汉果苷的一种特有性质。发 明人通过研究发现罗汉果，罗汉果提取物和浓缩果汁中回苦味的化学物质 具有与罗汉果苷相类似的化学结构，因此它们常被混合在一起而不易被分 离，以至以前的实验室及工业上都未能检测和分离出回苦味物质；从而证明 了回苦味不是罗汉果苷的一种特有性质。在此前，发明人发明了除去罗汉果 提取物回苦味的方法，并就此申请了专利，申请号为CN200610051186, 9。发
明人同时还发现苦p未物质具有抗微生物的活性。然而，迄今为止，还没有人
提出纯化罗汉果苷、同时提取具有抗微生物的活性物质的方法。
发明内容
本发明的目的就在于提供一种纯化罗汉果苷并提取具生物活性物质的 方法，使纯化过的罗汉果芬成为一种应用更广、甜味更浓，口感更纯的甜味 剂，同时得到具有抗微生物活性的物质。
发明人研究发现可将罗汉果，罗汉果提取物和浓缩果汁中的回苦味物 质分离出来，同时还发现回苦味物质具有很好的抗微生物活性。经测试，得
知含80 %的甜苷的罗汉果提取物大约含有7 %的回苦味物质；发明人经过研 究，发现并认定罗汉果提取物中的回苦味主要是类似葫芦科植物生长过程中
发明人暂将这些物质命名为"罗汉果素"；而且发现"罗汉果素，，存在于整 个罗汉果植抹即罗汉果叶、藤、根、茎和果实中，它具有抑制微生物的活性， 如对部分革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌及真菌等有抑制作用。
发明人研究发现利用极性及溶解性的差别，可以将"罗汉果素"和罗汉 果香分开；这样，可以在纯化罗汉果苷的同时4是:取具有生物活性物质"罗汉
果素"。因此，本发明提供的解决方案是采用溶剂提取法纯化罗汉果苷、同 时提取"罗汉果素"，即除去和收集苦味物质同时进行。
本发明提供的方法是如下实现的
①将罗汉果干果实进行机械粉碎得到粗粉，或将新鲜的罗汉果果实压 碎得到湿的碎块，用水、或不同浓度的醇溶液浸泡所述粗粉和碎块，并加热 到至少8(TC,进行60min以上的提取，得到提取物液；重复提取3次，将罗
汉果提取液过滤得到滤液，蒸发乙醇而得到水溶液；或将罗汉果提取物溶于 水直接得到水溶液；
②以非极性的溶剂提取至少1次以除去脂肪酸、蛋白质以及其它一些 杂质，分离有机层和水层；
未吸附的物质；再用3倍柱体积的10% ~95%的乙醇进行梯度洗脱；将40 % ~ 70 %的洗脱液合并除去乙醇得到罗汉果水溶液；将80 % ~ 95 %的洗脱液 合并除去乙醇，干燥得到"罗汉果素"；
④以极性的溶剂萃取罗汉果水溶液三次得到有机层，此有机层即含有 "罗汉果素"，而水层含有罗汉果苷；分离有机层和水层，干燥有机层得到 "罗汉果素"，喷雾干燥水层得到罗汉果苷。
步骤① ③用于从罗汉果干果或新鲜的罗汉果果实中提純罗汉果苷；如 果将罗汉果干果机械粉碎成罗汉果粗粉，以步骤④处理，可直接得到"罗汉 果素，，和含罗汉果苷的罗汉果粉。
如果原料是用罗汉果提取物制成的水溶液或是用罗汉果浓缩果汁，则直 接进入步骤④，得到纯化的罗汉果苷和"罗汉果素"。
发明人指出，由于蜡质、色素(如叶绿素、叶黄素等)、高沸点的辟类、 非极性的脂肪酸和脂等可能会干扰"罗汉果素"的纯化，所以首先以非极性 的溶剂提取来除去它们，溶剂为正己烷和、石油醚和四氯化碳等，也可使用 它们的混合物。
发明人还指出，中度极性的溶剂指的是任何有一点极性，但不与水混溶 的有机溶剂，如二氯曱烷以及乙酸乙酯等，也可以是它们的混合溶剂。这些
溶剂对于"罗汉果素"具有很强的亲和力。经过中等极性的有机溶剂提取， 所得到的浅色的含有罗汉果苷的水溶液已脱去大部分的回苦味物质。
上述方法第3步用来进行分离的大孔树脂包括包括Amber lite和市售 的大孔吸附树脂。用大孔吸附树脂进行分离与用中度极性的溶剂的提取过程
前或通过大孔吸附树脂之后进行。
本发明的方法可以除去罗汉果、罗汉果甜料，罗汉果的提取物和罗汉果 浓缩果汁，罗汉果甜味剂及制品中的回苦味，改善罗汉果甜料的口味，进一 步纯化罗汉果苷和同时提取具有抗微生物的活性物质"罗汉果素，，，还可以 从罗汉果果实中直接提取较纯的罗汉果香。"罗汉果素"具有抑制微生物的 活性，如革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌及真菌等。发明人预测"罗汉果素" 的抗微生物活性可利用来制备抗微生物的药物和日用品如止咳糖浆，喉片， 牙膏和漱口液等，将会有很大的实用价值和经济价值。
具体实施例方式
以下实施例可以更好地说明本发明
实施例1:对于罗汉果
将10g罗汉果实进行机械粉碎得到罗汉果粗粉，或将新鲜的10g罗汉果 实压碎得到湿的碎块，以100ml的乙酸乙酯进行120min以上的提取，得到 有机层；将有机层萃取重复3次，分离有机层和罗汉果粗粉；合并有机层， 将其干燥得到约0. 4g"罗汉果素，，；喷雾干燥得到约9. 4g较纯的罗汉果苷。
实施例2:对于罗汉果
将100g罗汉果干果进行机械粉碎得到粗粉，或将新鲜的100g罗汉果实
压碎得到湿的碎块，用500ml水、或50%的乙醇水溶液、或50%的甲醇水 溶液浸泡所述粗粉和碎块，并加热到至少8(TC,进行至少60min以上的提 取，得到提取物液；提取重复3次，将提取液过滤得到滤液12QQml;蒸 发乙醇而得到水溶液。以非极性的溶剂如正己烷提取至少一次以除去脂肪 酸、蛋白质以及其它一些杂质；分离有机层和水层，保留水层。以中度极 性的溶剂乙酸乙酯1000ml萃取水层至少3次得到有机层，此有机层即含有 "罗汉果素"，而水层含有罗汉果苷；分离有机层和水层，千燥有机层得到 0. 5g"罗汉果素"。将水层通过水平衡的非极性的100ml大孔吸附树脂，例 如Amberlite XAD16柱。用水洗以移去未吸附的物质；再用3倍柱体积的 10%到95%的乙醇进行梯度洗脱直到没有甜味物质；40%到95°/。的洗脱液中 含有我们所需要的成分，收集40%到95%的洗脱液，将40%至70%的洗 脱液合并喷雾千燥除去乙醇得到1.5g较纯罗汉果苷粉。将80%至95%的 洗脱液合并喷雾干燥除去乙醇得到较纯0. 2g "罗汉果素"。 实施例3:对于罗汉杲
将晒干的100g罗汉果果实进行机械粉碎得到粗粉，或将新鲜的罗汉果果 实压碎得到湿的碎块，用500ml水、或50%乙醇水溶液，加热到至少80°C 进行60min以上的提取，得到提取物液；离心分离并保留上清液和固体，将 固体物质提取重复3次，将罗汉果提取液过滤得到滤液；蒸发乙醇得到水溶 液；将提取液过滤得到滤液约1200ml;滤液通过100ml已进行过水平衡的非 极性的Atnberlite XAD柱；用1200ml水洗以移去未吸附的物质；再用10% 到95%的乙醇各300ml进行梯度洗脱，40°/。到60%的洗脱液中含有罗汉果苷， 分别收集40%到95%的洗脱液，将40%至70%的洗脱液合并干燥除去乙醇
得到罗汉果提取液水溶液。以5 0 0m 1中度极性的溶剂乙酸乙酯萃取罗汉果提 取液水溶液，得到有机层，此有机层含有"罗汉果素"，而水层含有罗汉果芬； 提取重复3次；分离有机层和水层，千燥水层得到1. 5g罗汉果苷。将80% 至95%的洗脱液干燥除去乙醇得到，干燥有机层得到O. 5g "罗汉果素"。 实施例4:对于罗汉果提取物
将10g含80%的罗汉果苷罗汉果提取物粉制成100ml水溶液以等体积的乙 酸乙酯进行30min以上的提取，得到有机层和水层；将水层萃取重复3次， 分离有机层和水层；合并有机层，将其干燥得到约O. 7g "罗汉果素，，；合并 含有罗汉果苷的水层并喷雾干燥得到约9g较纯的罗汉果香。
实施例5:对于罗汉果浓缩果汁
将100ml罗汉果浓缩果汁，以等体积的乙酸乙酯进行30min以上的提 取，得到有机层和水层；将水层提取重复3次，分离有机层和水层；合并有 机层，将其干燥得到约0. 67g "罗汉果素，，；合并含有罗汉果苷的水层得到纯 化过罗汉果浓缩果汁约100mi。
权利要求
1纯化罗汉果苷并提取生物活性物质的方法，其特征在于该方法采用溶剂提取法纯化罗汉果苷、同时提取“罗汉果素”，包括以下步骤①将罗汉果干果实进行机械粉碎得到粗粉，或将新鲜的罗汉果果实压碎得到湿的碎块，用水、或不同浓度的醇溶液浸泡所述粗粉和碎块，并加热到至少80℃，进行60min以上的提取，得到提取物液；提取重复3次，将罗汉果提取液过滤得到滤液，蒸发乙醇而得到水溶液；或将罗汉果提取物溶于水直接得到水溶液；②以非极性的溶剂提取至少1次以除去脂肪酸、蛋白质以及其它一些杂质，分离有机层和水层；③合并水层并通过水平衡的非极性的大孔吸附树脂，用水洗涤以除去未吸附的物质；再用3倍柱体积的10％～95％的乙醇进行梯度洗脱；将40％～70％的洗脱液合并除去乙醇得到罗汉果水溶液；将80％～95％的洗脱液合并除去乙醇，干燥得到“罗汉果素”；④以极性的溶剂萃取罗汉果水溶液3次得到有机层，此有机层即含有“罗汉果素”，而水层含有罗汉果苷；分离有机层和水层，干燥有机层得到“罗汉果素”，喷雾干燥水层得到罗汉果苷。
全文摘要
本发明公开了一种纯化罗汉果苷并提取生物活性物质的方法，该方法采用溶剂提取法纯化罗汉果苷、同时提取“罗汉果素”，包括制液、用中度非极性溶剂进行萃取、用中等极性的有机溶剂提取、喷雾干燥等步骤。本发明的方法可以除去罗汉果、罗汉果甜料，罗汉果的提取物和罗汉果浓缩果汁，罗汉果甜味剂及制品中的回苦味，改善罗汉果甜料的口味，纯化罗汉果苷，同时提取具有抗微生物的活性物质“罗汉果素”。“罗汉果素”具有抑制微生物的活性，如革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌及真菌等。用本发明提取的“罗汉果素”的抗微生物活性可利用来制备抗微生物的药物和日用品如止咳糖浆，喉片，牙膏和漱口液等，将会有很大的实用价值和经济价值。
文档编号C07J9/00GK101168556SQ20061005125
公开日2008年4月30日 申请日期2006年10月27日 优先权日2006年10月27日
发明者英 周, 黄赤夫 申请人:英 周