从大花金挖耳提取的具杀菌活性的桉烷型倍半萜内酯化合物及其用途的制作方法

专利名称：从大花金挖耳提取的具杀菌活性的桉烷型倍半萜内酯化合物及其用途的制作方法
技术领域：
本发明专利涉及化合物及其制备，特别是具杀菌活性的桉烷型倍半萜内酯化合物及其该化合物作为杀菌剂在防治植物病害方面的应用。
背景技术：
大花金挖耳为菊科天明精属植物，西北农林科技大学无公害农药研究服务中心在植物源杀菌剂研究中，发现其对植物病原真菌具有很高的抑制活性，并申请专利“大花金挖耳杀菌剂及其制备方法”，专利申请号02139350.8。在此基础上，申请人对大花金挖耳中的抑菌活性成分进行了系统研究，从中得到了具有抑菌活性的化合物。

发明内容
本发明的目的在于，提供一种从大花金挖耳中提取的具杀菌活性的桉烷型倍半萜内酯化合物及其该化合物作为杀菌剂在防治植物病害方面的应用。
为了实现上述任务，本发明采取的技术方案是一种从大花金挖耳分离的具杀菌活性的桉烷型倍半萜内酯化合物，其特征在于，分离的该具杀菌活性的桉烷型倍半萜内酯化合物包括2α-乙酰氧基-5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯；5α，6α-二羟基-4α，11αH-桉烷-12，8β-内酯；5α-羟基-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯；2α-羟基-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯；2α，5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯；5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯；5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯；5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯；2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯；2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯；其分子结构分别为化合物I2α-乙酰氧基-5α-羟基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯
化合物II5α，6α-二羟基-4α，11αH-桉烷-12，8β-内酯 化合物III5α-羟基-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯 化合物IV5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯 化合物V2α-羟基-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯
化合物VI2α，5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯 化合物VII5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯 化合物VIII5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯 化合物IX5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯
化合物X；2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯 化合物XI2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯 大花金挖耳中主要的抑菌活性化合物为萜类和倍半萜内酯化合物，按结构特点，倍半萜内酯化合物又分为卡拉布烷型倍半萜内酯和桉烷型倍半萜内酯。
本发明对分离得到的具杀菌活性的桉烷型倍半萜内酯化合物进行了系统的抑菌活性测定，证明上述化合物I～XI对供试的植物病原菌具有较高的抑制活性，能够用于防治由植物病原真菌引起的植物病害的农药制剂应用。


图1是具杀菌活性的桉烷型倍半萜内酯化合物分子结构，中(a)～(k)分别表示化合物I～XI。
图2是倍半萜内酯分离纯化流程图；以下结合附图和实施例对本发明作进一步的详细说明。
具体实施例方式
研究发现，大花金挖耳中含有的桉烷型倍半萜内酯化合物种类较多，其中对植物病原菌具有活性的主要有化合物I2α-乙酰氧基-5α-羟基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯；化合物II2α-乙酰氧基-5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯；化合物III5α，6α-二羟基-4α，11αH-桉烷-12，8β-内酯；化合物IV5α-羟基-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯；化合物V2α-羟基-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯；化合物VI2α，5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯；化合物VII5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯；化合物VIII5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯；化合物IX5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯；化合物X2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯；化合物XI2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯。各个化合物的分子结构参见图1。
1、化合物的分离过程将大花金挖耳植物样品粉碎，用重蒸工业甲醇室温(25℃左右)下浸泡提取6次，每次2天，提取液经活性炭脱色后减压浓缩得总浸膏。用硅胶拌样进行硅胶柱层析，依次用石油醚、氯仿、氯仿∶甲醇(1∶1)和甲醇梯度洗脱，得石油醚洗脱部分、氯仿洗脱部分，氯仿∶甲醇(1∶1)洗脱部分，甲醇洗脱部分。氯仿洗脱部分经过反复柱层析及重结晶得到化合物I～IV；氯仿∶甲醇(1∶1)洗脱部分经过反复柱层析及重结晶得到化合物V～XI。各化合物具体的分离过程见图2。
2、各化合物的理化性质及波谱数据在分离得到各化合物后，对其的理化性质及分子结构进行了鉴定，得到各化合物的理化性质及波谱数据如下化合物I2α-乙酰氧基-5α-羟基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯，无色针状结晶，折光率为+77.0°(c 0.44，CHCl3)。溶于氯仿、乙酸乙酯、甲醇和芳香类溶剂。m/z308(M+)，1H-NMR(CDCl3)δH1.95(1H，dd，12，12，H-1)，1.40(1H，dd，5，12.5，H-1’)，4.98(1H，dddd，5，6，11，12，H-2)，2.64(1H，ddd，2，11，12，H-3)，2.58(1H，ddd，2，6，12，H-3’)，1.65(1H，dd，6，14，H-6)，1.56(1H，dd，12，14，H-6’)，2.86(1H，dddd，5，6，7，12，H-7)，4.58(1H，ddd，2，4.6，5，H-8)，2.02(1H，dd，4.6，15，H-9)，1.83(1H，dd，2，15，H-9)，2.97(1H，dq，7，7，H-13)，1.16(3H，s，H-13)，4.93(1H，brs，H-15)，4.78(1H，brs，H-15’)，2.04(s，2’H)，13C-NMR的化学位移见表1。
化合物II2α-乙酰氧基-5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯，无色针状结晶，溶于氯仿、乙酸乙酯、甲醇和芳香类溶剂。m.p＝128-130℃，折光率为+68.8℃(c0.46，CHCl3).m/z292(M+)，1H-NMR(CDCl3)δH1.99(1H，dd，12，12，H-1)，1.40(1H，dd，J＝5，12.5，H-1’)，4.98(1H，dddd，5，6，11，12，H-2)，2.08(1H，ddd，2，11，12，H-3)，2.38(1H，ddd，2，6，12，H-3’)，1.75(1H，dd，6，14，H-6)，2.50(1H，dd，12，14，H-6’)，2.34(1H，dddd，5，6，7，12，H-7)，4.44(1H，ddd，2，4.6，5，H-8)，1.54(1H，dd，4.6，15，H-9)，2.28(1H，dd，2，15，H-9)，2.81(1H，dq，7，7，H-11)，1.25(1H，d，7，H-13)，1.23(3H，s，H-13)，1.68(brs，H-15)，2.04(s，2’H)，13C-NMR的化学位移见表1。
化合物III5α，6α-二羟基-4α，11αH-桉烷-12，8β-内酯，无色针状结晶，溶于氯仿、乙酸乙酯、甲醇和芳香类溶剂。m.p＝178-180℃，折光率为-22°(c 0.36，CHCl3)。m/z268(M+)，1H-NMR(CDCl3)δH1.43(1H，ddd，13，12，4.5，H-1)，1.18(1H，ddd，13，4，2，H-1’)，1.78(1H，m，H-2)，1.92(1H，ddd，5.5，11，12，H-3)，1.66(1H，m，H-3’)，2.04(1H，m，H-3’)，3.90(1H，dd，6，9，H-6)，2.60(1H，ddd，5，9，7.5，H-7)，4.56(1H，ddd，2，4.5，5，H-8)，2.03(1H，dd，4.5，15，H-9)，1.62(1H，dd，2，15，H-9)，2.91(1H，dq，7，7.5，H-11)，1.39(1H，d，7，H-13)，1.10(3H，s，H-13)，1.08(d，7.5，H-15)，13C-NMR的化学位移见表1。
化合物IV5α-羟基-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯，无色棱状结晶，m.p＝156-158℃，折光率为+196°(c 0.2，CHCl3)。溶于氯仿、乙酸乙酯、甲醇和芳香类溶剂。m/z248(M+)，1H-NMR(CDCl3)δH6.13(1H，d，1.2，H-13)，5.58(1H，d，1.2，H-13’)，4.85(1H，brs，H-15)，4.68(1H，brs，H-15’)，4.56(1H，td，1.2，5，5，H-8)，3.34(1H，ddd，5，8，11.8，H-7)，0.94(3H，S，14-CH3)，13C-NMR的化学位移见表1。
化合物V2α-羟基-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯，无色棱状晶体，m.p＝134-135℃，折光率为+142°(c 1.0，CHCl3)。溶于氯仿、乙酸乙酯、甲醇和芳香类溶剂。m/z248(M+)，1H-NMR(CDCl3)δH6.15(1H，d，3.0，H-13a)，5.62(1H，d，3.0，H-13b)，4.89(1H，brs，H-15a)，4.57(1H，brs，H-15b)，4.49(1H，ddd，H-8)，3.83(1H，m，H-2)，3.03(1H，m，H-7)，2.65(2H，dd，12.3，H-3)，2.23(2H，dd，15.6，H-9)，2.00(1H，t，H-5)，1.82(2H，m，H-1)，1.79(2H，d，6.9，H-6)，0.84(3H，s，H-14)，13C-NMR的化学位移见表1。
化合物VI2α，5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯，无色颗粒晶体(甲醇)，m.p＝108-110℃，折光率为+68.0°(c0.74，CH3OH)。溶于氯仿、乙酸乙酯、甲醇和芳香类溶剂。m/z266(M+)，1H-NMR(CDCl3)δH1.81(1H，dd，12，12，H-1)，1.40(1H，dd，5，12.5，H-1’)，3.79(1H，dddd，5，5.5，11.5，12，H-2)，2.59(1H，ddd，2，11.5，12，H-3)，2.42(1H，ddd，2.5，5，12，H-3’)，1.69(1H，dd，6，13.8，H-6)，1.42(1H，dd，12，13.8，H-6’)，2.86(1H，dddd，5，6，7，12，H-7)，4.58(1H，ddd，2，4.6，5，H-8)，2.02(1H，dd，4.6，15，H-9)，1.83(1H，dd，2，15，H-9)，2.97(1H，dq，7.7，H-13)，0.9(3H，s，H-13)，4.93(1H，brs，H-15)，4.78(1H，brs，H-15’)，13C-NMR的化学位移见表1。
化合物VII5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯，无色针状结晶，m.p＝106-108℃，折光率为+168°(c1.43，CHCl3)。溶于氯仿、乙酸乙酯、甲醇和芳香类溶剂。m/z232(M+)，1H-NMR(CDCl3)δH6.14(1H，brs，H-13)，5.60(1H，brs，H-13’)，4.78(1H，brs，H-15)，4.45(1H，brs，H-15’)，4.51(1H，ddd，1.5，5，5Hz，H-8)，2.98(1H，ddd，5，6.8，13.5Hz，H-7)，0.83(3H，S，14-CH3)，13C-NMR的化学位移见表1。
化合物VIII5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯，无色针状结晶，m.p＝172-173℃，折光率为+18.5°(c0.70，CHCl3)。溶于氯仿、乙酸乙酯、甲醇和芳香类溶剂。m/z234(M+)，1H-NMR(CDCl3)δH2.80(1H，dq，H-11)，1.23(3H，d，7.4，H-13)，4.78(1H，brs，H-15)，4.48(1H，brs，H-15’)，4.47(1H，ddd，2，5，5Hz，H-8)，2.38(1H，m，H-7)，0.83(3H，S，14-CH3)，13C-NMR的化学位移见表1。
化合物IX5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯，无色针状结晶，m.p＝188-190℃，折光率为+130.8°(c0.37，CHCl3)。溶于氯仿、乙酸乙酯、甲醇和芳香类溶剂。m/z250(M+)，1H-NMR(CDCl3)δH4.88(1H，brs，H-15)，4.73(1H，brs，H-15’)，4.56(1H，td，J＝1.2，5，5，H-8)，2.84(1H，dq，H-11)，2.48(1H，m，H-7)，1.21(3H，d，J＝7，H-13)，0.94(3H，S，H-14)，13C-NMR的化学位移见表1。
化合物X2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯，无色针状结晶，m.p.206-208℃(甲醇)。溶于氯仿、乙酸乙酯、甲醇和芳香类溶剂。折光率为+17.9°(c 0.56，CH3OH)。m/z412(M+)，1HNMR(CH3OH)δ1.25(1H，br，dd，12.5，12.5，1αH)，1.99(1H，ddd，2，5，12.5，1βH)，3.87(1H，m，2βH)，2.11(1H，t，12.5，12.5，3αH)，2.79(1H，ddd，2，5，12.5，3βH)，1.88(1H，brs，d，12.5，5αH)，1.63(1H，m，6αH)，1.06(1H，ddd，12.5，12.5，12.5，6βH)，2.49(1H，m，7α)，4.52(1H，ddd，2，4，4.5，8α)，1.58(1H，dd，4.5，15.5，9α)，2.16(1H，dd，2，15.5，9β)，2.93(1H，m，11α)，1.18(3H，m，13H)，0.78(3H，s，14H)，4.89(1H，br.s，15αH)，4.62(1H，br.s，15βH)，13C-NMR的化学位移见表1。
化合物XI2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯，无色针状结晶，m.p.176-178℃(甲醇)；折光率为+13.0°(c 0.69，CH3OH)。溶于氯仿、乙酸乙酯、甲醇和芳香类溶剂。m/z410(M+)，1HNMR(CH3OH)δ1.24(1H，br，dd，12，4，12.4，1αH)，1.99(1H，ddd，2，5，12.4，1βH)，3.84(1H，m，2βH)，2.12(1H，t，12，12，3αH)，2.79(1H，ddd，2，6，13，3βH)，1.95(1H，brs，d，13，5αH)，1.82(1H，m，6αH)，1.26(1H，ddd，13，13，13，6βH)，3.10(1H，m，7α)，4.55(1H，ddd，2，4，5，8α)，1.63(1H，dd，5，15.5，9α)，2.16(1H，dd，2，15.5，9β)，6.06，5.70(2H，br.s，13H)，0.78(3H，s，14H)，4.89(1H，br.s，15αH)，4.56(1H，br.s，15βH)，13C-NMR的化学位移见表1。
3、化合物制备的杀菌制剂桉烷型倍半萜内酯化合物包括的上述11种化合物，可以制成各种制剂形态的杀菌剂，喷雾使用，用于植物真菌性病害的防治。各种剂型中各物质的重量百分比为

由桉烷型倍半萜内酯化合物组成的各种制剂，其中的填料可以是白炭黑、膨润土、硅澡土等本领域工作人员共知的物质中的一种或几种混合物；溶剂可以是甲醇、乙醇、正(异)丙醇，乙酸乙酯，芳香烃等本领域工作人员共知的物质中的一种或几种混合物；表面活性剂可以是本领域人员共知且常用的各类表面活性物质的一种或几种的混合物。
表1化合物1～XI的13C-NMR(100MHz)数据

以下通过实施例对本专利涉及的化合物及其制剂对植物病害防治效果进行阐述。
4、各化合物的生物活性测定共选取6种病原菌作为供试菌种，供试菌种列于表4-1。所有供试菌种均由西北农林科技大学无公害农药研究服务中心提供。
供试植物寄主材料番茄Lycopersicon esculentum果实，采自杨凌杨村乡大棚温室；黄瓜(津研七号)，市购。
标准药剂50％乙膦铝WP，50％速克灵WP。
表4-1供试病原菌

生长速率法化合物对病原菌菌丝生长抑制作用的测定采用生长速率法，设丙酮和空白对照，每种供试菌一皿为一处理，每处理三次重复。用十字交叉法测量菌落直径，按式4-1和式4-2计算抑制率(计算抑制率时以丙酮处理为对照)菌落直径(mm)＝菌落平均直径-4(菌饼直径) 4-1

孢子萌发法上述化合物对病菌孢子萌发抑制作用的测定采用悬滴法[114]([114]方仲达，植病研究方法[M]，北京农业出版社，第三版，1995)。试验中，当对照萌发(以孢子芽管长超过孢子短直径一半时即为萌发，若来不及镜检，可加0.5％升汞一滴固定)率大于80％后，记录检查所有处理的萌发情况；若对照萌发率低于80％，本次试验作废重做。采用公式(4-3)和(4-4)计算孢子萌发抑制率。


盆栽试验将本发明涉及的所述各化合物配制成乳油制剂，进行盆栽和组织法测定。
黄瓜霜霉病的防治效果采用盆栽试验法进行。具体方法如下在每营养钵播种2～3粒已催芽的黄瓜种子，在温室培养，待黄瓜长至两叶(真叶)，进行治疗和保护作用试验。以常量喷雾进行施药，每个处理设3次重复，设溶剂对照和清水对照。
从田间采集带黄瓜霜霉病原菌的病叶，用清水冲洗后保湿培养24h，用毛笔刷下病叶上的病原菌孢子，配置成10×10倍显微镜视野下30～50个孢子悬浮液进行喷雾接种，处理后的黄瓜放在高湿、20℃左右的环境中培养。
治疗作用，首先在未被处理的苗上接病菌孢子，24h后再进行喷药处理、培养。6～8d后检查试验结果；保护作用，首先对苗进行喷药处理，24h后再接菌，培养6～8d后检查叶片发病情况并记录，统计试验结果。
黄瓜霜霉病的分级标准(以叶片为单位)(方仲达，植病研究方法[M]，北京农业出版社，第三版，1995)0级无病；1级病斑面积占整片叶面积的5％以下；2级病斑面积占整片叶面积的6～25％；3级病斑面积占整片叶面积的26％～50％；4级病斑面积占整片叶面积的50％以上。
按式5-5和式5-6计算病情指数和防治效果 组织测定法对番茄灰霉病的药效试验采用番茄幼果法进行。具体方法为将从田间采集的未施任何杀菌药剂的番茄果实，先用清水洗涤干净、晾干，再用脱脂棉醮取75％的乙醇擦拭果实表面，进行灭菌处理。用接种针在番茄果实表面刺出直径约5mm的侵染区域，以利灰霉病菌的侵染。以直径4mm的打孔器打制菌饼，将菌饼倒扣在番茄果实表面。分保护和治疗两种方法处理。保护作用为先在番茄表面采用喷雾法将稀释好的药剂直接喷洒在果实表面，待药液晾干后即开始接菌。治疗作用为先将菌饼接在番茄果实表面，4h后开始接菌。保湿培养，3d后检查结果。按4.1.2.1中的方法对结果进行统计分析。
4.1 11种化合物对病原菌孢子萌发的抑制毒力参见下表化合物I对4种病原菌孢子萌发的抑制毒力

化合物II对4种病原菌孢子萌发的抑制毒力

化合物III对4种病原菌孢子萌发的抑制毒力

化合物IV对6种病原菌孢子萌发的抑制毒力

化合物V对6种病原菌孢子萌发的抑制毒力

化合物VI对4种病原菌孢子萌发的抑制毒力

化合物VII对4种病原菌孢子萌发的抑制毒力

化合物VIII对4种病原菌孢子萌发的抑制毒力

化合物IX对4种病原菌孢子萌发的抑制毒力

化合物X对4种病原菌孢子萌发的抑制毒力

化合物XI对4种病原菌孢子萌发的抑制毒力

4.2 11种化合物对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制毒力见下表11种化合物对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制作用(72h)

注空白对照菌落直径为68.37mm。
4.3 11种化合物对番茄灰霉病和黄瓜霜霉病的防治效果见下表11种化合物对番茄果实上灰霉病的防治效果(7d)

11种化合物对黄瓜霜霉病盆栽防治效果

5、各化合物各种制剂的制备实施例115％2α-乙酰氧基-5α-羟基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯(化合物I)可湿性粉剂的制备。在锥形混合机中，加入粉碎至200目左右的2α-乙酰氧基-5α-羟基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯15kg，市售的商品填料白碳黑50kg、膨润土25kg，以及拉开粉7.5kg、皂素2.5kg。充分混和，即可制得15％2α-乙酰氧基-5α-羟基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯可湿性粉剂100kg。制剂的水中分散性、稀释液稳定性、冷热贮稳定性符合商品农药制剂得要求。
实施例255％2α-乙酰氧基-5α-羟基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯(化合物I)可湿性粉剂的制备。将55kg2α-乙酰氧基-5α-羟基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯(化合物I)原药粉碎至300目，称取商品填料白碳黑30kg，木质素磺酸钠10kg，月桂醇聚氧乙烯醚5kg，加入混合机中充分混和均匀，即可制得55％2α-乙酰氧基-5α-羟基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯可湿性粉剂。制剂的水中分散性、稀释液稳定性、冷热贮稳定性符合商品农药制剂得要求。
实施例35％2α-乙酰氧基-5α-羟基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯(化合物I)乳油的制备。将5kg2α-乙酰氧基-5α-羟基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯，溶解于80kg乙酸乙酯中，苯乙烯酸聚氧乙烯醚15kg，加入到200L反应釜中，在40～50℃温度下搅拌0.5小时，即制得100kg 5％2α-乙酰氧基-5α-羟基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯乳油。乳油的水分散性、稀释液稳定性、冷热贮稳定性符合商品农药制剂得要求。
实施例450％2α-乙酰氧基-5α-羟基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯(化合物I)乳油的制备。200L反应釜中，将50kg天明精内酯酮，溶于25kg乙酸乙酯和10kg氯仿混和溶剂中，再加入苯乙烯酸聚氧乙烯醚5kg，辛基酚聚氧乙基醚10kg，在40～50℃温度下搅拌0.5小时，即制得100kg50％2α-乙酰氧基-5α-羟基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯乳油。乳油的水分散性、稀释液稳定性、冷热贮稳定性符合商品农药制剂得要求。
实施例510％2α-乙酰氧基-5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯(化合物II)微乳剂的制备。称取2α-乙酰氧基-5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯原药10kg，溶解于15kg异丙醇中，再加入10kg十二烷基苯磺酸钙，10kg辛基酚聚氧乙基醚，在高速搅拌下混和，加热至40℃左右；高速搅拌下滴加去离子水55kg，控制水的滴加速度，使温度保持在40℃左右；水滴加完毕，升温至50℃，搅拌1小时，制得10％2α-乙酰氧基-5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯微乳剂100kg。制剂的稳定性、外观等符合商品制剂的要求。
实施例620％5α，6α-二羟基-4α，11αH-桉烷-12，8β-内酯(化合物III)微乳剂的制备。称取5α，6α-二羟基-4α，11αH-桉烷-12，8β-内酯原药20kg，溶解于30kg乙酸乙酯中，再加入15kg十二烷基苯磺酸钙，5kg苯乙烯酸聚氧乙烯醚，在高速搅拌下混和，加热至40℃左右；高速搅拌下滴加去离子水30kg，控制水的滴加速度，使温度保持在40℃左右；水滴加完毕，升温至50℃，搅拌1小时，制得20％5α，6α-二羟基-4α，11αH-桉烷-12，8β-内酯微乳剂100kg。制剂的稳定性、外观等符合商品制剂的要求。
实施例740％2α-羟基-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯(化合物V)可湿性粉剂的制备。在锥形混合机中，加入粉碎至200目左右的2α-羟基-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯40kg，市售的商品填料白碳黑20kg、膨润土20kg，以及拉开粉5kg、木质素15kg。充分混和，即可制得40％2α-羟基-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯可湿性粉剂100kg。制剂的水中分散性、稀释液稳定性、冷热贮稳定性符合商品农药制剂得要求。
实施例830％2α，5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯(化合物VI)乳油的制备。200L反应釜中，将30kg 2α，5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯，溶于30kg甲醇和25kg甲苯混和溶剂中，再加入苯乙烯酸聚氧乙烯醚10kg，辛基酚聚氧乙基醚5kg，在40～50℃温度下搅拌0.5小时，即制得100kg 30％2α，5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯乳油。乳油的水分散性、稀释液稳定性、冷热贮稳定性符合商品农药制剂得要求。
实施例910％5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯(化合物VII)微乳剂的制备。称取5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯原药10kg，溶解于30kg乙酸乙酯中，再加入10kg十二烷基苯磺酸钙，10kg苯乙烯酸聚氧乙烯醚，在高速搅拌下混和，加热至40℃左右；高速搅拌下滴加去离子水40kg，控制水的滴加速度，使温度保持在40℃左右；水滴加完毕，升温至55℃，搅拌1小时，制得10％5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯微乳剂100kg。制剂的稳定性、外观等符合商品制剂的要求。
实施例1035％2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯(化合物X)乳油的制备。200L反应釜中，将35kg 2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯，溶于55kg甲苯溶剂中，再加入苯乙烯酸聚氧乙烯醚15kg，在40～50℃温度下搅拌1.0小时，即制得100kg 35％2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯乳油。乳油的水分散性、稀释液稳定性、冷热贮稳定性符合商品农药制剂得要求。
实施例1115％5α-羟基-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯(化合物IV)微乳剂的制备。称取5α-羟基-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯原药15kg，溶解于30kg异丙醇中，再加入5kg十二烷基苯磺酸钙，10kg苯乙烯酸聚氧乙烯醚，在高速搅拌下混和，加热至40℃左右；高速搅拌下滴加去离子水40kg，控制水的滴加速度，使温度保持在40℃左右；水滴加完毕，升温至55℃，搅拌1小时，制得15％5α-羟基-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯微乳剂100kg。制剂的稳定性、外观等符合商品制剂的要求。
实施例1220％5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯(化合物VIII)可湿性粉剂的制备。在锥形混合机中，加入粉碎至200目左右的5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯20kg，市售的商品填料白碳黑30kg、膨润土30kg，以及拉开粉15kg、木质素5kg。充分混和，即可制得20％5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯可湿性粉剂100kg。制剂的水中分散性、稀释液稳定性、冷热贮稳定性符合商品农药制剂得要求。
实施例1325％5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯(化合物IX)乳油的制备。200L反应釜中，将25kg 5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯，溶于60kg二甲苯溶剂中，再加入苯乙烯酸聚氧乙烯醚15kg，在40～50℃温度下搅拌1.0小时，即制得100kg 25％5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯乳油。乳油的水分散性、稀释液稳定性、冷热贮稳定性符合商品农药制剂得要求。
实施例1410％2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯(化合物XI)微乳剂的制备。称取2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯原药10kg，溶解于20kg异丙醇中，再加入10kg十二烷基苯磺酸钙，10kg苯乙烯酸聚氧乙烯醚，在高速搅拌下混和，加热至40℃左右；高速搅拌下滴加去离子水50kg，控制水的滴加速度，使温度保持在40℃左右；水滴加完毕，升温至55℃，搅拌1小时，制得10％2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯微乳剂100kg。制剂的稳定性、外观等符合商品制剂的要求。
6、大田试验实验实施例将本发明涉及的上述11种桉烷型倍半萜内酯化合物，用本发明的制剂配制方法，配制成15％微乳剂，在大田进行了防治番茄灰霉病、豇豆灰霉病、黄瓜灰霉病以及草莓灰霉病的药效试验，清水为对照，不同浓度药液喷雾后的防治效果见表6-1～表6-4。
在实验中，对于化合物组成的各种制剂、填料或溶剂、表面活性剂的重量百分比，按本发明的技术方案配制，均可达到理想的效果。
调查方法采取平行线2行取样，每行调查1.5cm以上果子的发病情况，按以下分级标准对果实灰霉病的发生分级。据病情指数计算防治效果，以DMRT法分析各处理间的差异显著性。
0级果实不发病；1级病斑占整个果实面积的5％以下；3级病斑占整个果实面积的6％～15％；5级病斑占整个果实面积的16％～25％；7级病斑占整个果实面积的26％～50％；9级病斑占整个果实面积的50％以上。

表6-1化合物VII～XI微乳剂对番茄灰霉病防治效果

表6-2 15％化合物I和化合物II微乳剂对黄瓜灰霉病的防治效果

注施药前摘除所有病果。
表6-3 15％化合物III和化合物IV微乳剂对豇豆灰霉病的防治效果


注药前摘除所有病果。
表6-4 15％化合物V和化合物VI微乳剂对草莓灰霉病的防治效果

权利要求
1.从大花金挖耳分离的具杀菌活性的桉烷型倍半萜内酯化合物，其特征在于，分离的该具杀菌活性的桉烷型倍半萜内酯化合物包括2α-乙酰氧基-5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯；5α，6α-二羟基-4α，11αH-桉烷-12，8β-内酯；5α-羟基-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯；2α-羟基-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯；2α，5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯；5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯；5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯；5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯；2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯；2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯；其分子结构分别为2α-乙酰氧基-5α-羟基-11α-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯 5α，6α-二羟基-4α，11αH-桉烷-12，8β-内酯 5α-羟基-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯 5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯 2α-羟基-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯 2α，5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯 5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯 5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯 5α-羟基-11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯 2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5α，11αH-桉烷-4(15)-烯-12，8β-内酯 2α-O-β-D-吡喃葡萄糖甙-5αH-桉烷-4(15)，11(13)-二烯-12，8β-内酯
2.权利要求1所述的从大花金挖耳分离的具杀菌活性的桉烷型倍半萜内酯化合物用于防治由植物病原真菌引起的植物病害的农药制剂应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，将上述具杀菌活性的桉烷型倍半萜内酯化合物制成各种制剂喷雾，防治植物真菌性病害，各种制剂的各物质的重量百分比为剂型为可湿性粉剂桉烷型倍半萜内酯化合物20％～90％，填料或溶剂0～74％，表面活性剂1％～10％，原料物质的总和为100％；剂型为乳油桉烷型倍半萜内酯化合物5％～60％，填料或溶剂40％～95％，表面活性剂5％～35％，原料物质的总和为100％；剂型为微乳剂桉烷型倍半萜内酯化合物10％～40％，填料或溶剂40％～84％，表面活性剂1％～20％，原料物质的总和为100％。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的填料是白炭黑、膨润土、硅澡土或本领域公知的物质中的一种或几种混合物；所述的溶剂是甲醇、乙醇、正异丙醇，乙酸乙酯，芳香烃或本领域工作人员公知的物质中的一种或几种混合物；所述的表面活性剂是常用的各类表面活性物质的一种或几种的混合物。
全文摘要
本发明公开了从大花金挖耳分离的具杀菌活性的桉烷型倍半萜内酯化合物，包括2α－乙酰氧基－5α－羟基－11αH－桉烷－4(15)－烯－12，8β－内酯；5α，6α－二羟基－4α，11αH－桉烷－12，8β－内酯；5α－羟基－桉烷－4(15)，11(13)－二烯－12，8β－内酯；2α－羟基－5αH－桉烷－4(15)，11(13)－二烯－12，8β－内酯；2α，5α－羟基－11αH－桉烷－4(15)－烯－12，8β－内酯；5αH－桉烷－4(15)，11(13)－二烯－12，8β－内酯；5α，11αH－桉烷－4(15)－烯－12，8β－内酯；5α－羟基－11αH－桉烷－4(15)－烯－12，8β－内酯；2α－O－β－D－吡喃葡萄糖甙－5α，11αH－桉烷－4(15)－烯－12，8β－内酯；2α－O－β－D－吡喃葡萄糖甙－5αH－桉烷－4(15)，11(13)－二烯－12，8β－内酯；上述化合物的抑菌活性测定证明，对供试的植物病原菌具有较高的抑制活性。
文档编号C07H17/00GK101050209SQ20061010488
公开日2007年10月10日 申请日期2006年11月10日 优先权日2006年11月10日
发明者冯俊涛, 王俊儒, 李广泽, 何军, 王智辉, 张兴 申请人:西北农林科技大学无公害农药研究服务中心