专利名称：：酶抑制剂的制作方法酶抑制剂本发明涉及抑制组蛋白脱乙酰酶家族成员的化合物以及该化合物在治疗包括癌症在内的细胞增殖疾病、聚谷氨酰胺病如亨廷顿病、神经变性疾病如阿耳茨海默病、自身免疫性疾病如类风湿性关节炎和器官移植排斥、糖尿病、血液学疾病、炎性疾病、心血管疾病、动脉粥样硬化以及感染的炎性后遗症中的应用。发明背景在真核细胞中，DNA被组蛋白包裹以形成染色质。大约150个DNA碱基对在组蛋白八聚体(组蛋白2A、2B、3和4各两个)周围被包裹两次从而形成染色质的基本单位一核小体。染色质的有序结构需要被修饰以转录相关基因。转录调节是分化、增殖和凋亡的关键，因此被密切控制。对染色质结构改变的控制(以及因此对转录的控制)受组蛋白的共价修饰调节，最显著的是N-末端尾巴。对氨基酸侧链的共价修饰(例如甲基化、乙酰化、磷酸化和泛素化)是由酶介导的(有关组蛋白的修饰以及它们在转录调节中的作用的综述可在BergerSL2001Oncogene20，3007-3013中找到；参见Grunstein，M1997Nature389，349-352;WolffeAP1996Science272，371-372;以及WadePA等，1997TrendsBiochemSci22，128-132，其中回顾了组蛋白的乙酰化和转录)。组蛋白的乙酰化与具有转录活性的染色质区域有关，而具有低乙酰化水平的核小体通常是转录沉默的。组蛋白的乙酰化状态受两类活性相对的酶控制组蛋白乙酰转移酶(HAT)和组蛋白脱乙酰酶(HDAC)。在转化的细胞中，据信HDAC的不适当的表达导致肿瘤抑制因子沉默(关于HDAC在肿瘤发生中的作用的综述，可参见GraySG和TehBT2001CurrMolMed1，401-429)。该文献中已经描述了HDAC酶抑制剂并显示它可诱导某些基因的转录再激活，从而导致抑制癌细胞增殖、诱导凋亡和抑制肿瘤在动物中生长(相关综述，可参见Kelly，WK等，2002ExpertOpinInvestigDrugs11，1695-1713)。这种发现提示，HDAC抑制剂有治疗癌症等增殖性疾病的治疗潜能(Kramer,OH等，2001TrendsEndocrinol12，294-300，VigushinDM和CoombesRC2002AnticancerDrugs13，1-13)。此外，还提到异常的HDAC活性或组蛋白乙酰化与以下疾病和紊乱有关聚谷氨酰胺病如亨廷顿病(HughesRE2002CurrBiol12，R141-R143;McCampbellA等，2001ProcSocNatlAcadSci98，15179-15184;HocklyE等，2003ProcSocNatlAcadSci100，2041-2046)，其它神经变性疾病如阿耳茨海默病(HempenB和BrionJP1996，JNeuropatholExpNeurol55，964-972)，自身免疫性疾病和器官移植排斥(SkovS等，2003Blood101，1430-1438;MishraN等，2003JClinInvest111，539-552)，糖尿病(MosleyAL和OzcanS2003JBiolChem278，19660陽19666)和糖尿病并发症，感染(包括原生动物感染(Darkin-Rattray，SJ等，1996ProcSocNatlAcadSci93，13143-13147))和血液学疾病包括地中海贫血(WittO等，2003Blood101，2001-2007)。这些文献中的观察结果提示，抑制HDAC对于这些疾病以及其它相关疾病应具有治疗益处。已经提出过许多类型的HDAC抑制剂化合物，这些化合物中的一些目前正在接受关于治疗癌症的临床评价。例如，以下专利申请公开了这种化合物US5,369,108禾卩WOWO03画395WO04/1109890測171WO03/076400WO04/092115US4,254,220WO03/076401WO0柳22柳1WO01/70675WO03/076421WO05/014588WO01/38322WO03/076430WO05/018578WO02/30879WO03/076422WO05/019174WO02/26703WO03舰2明WO05/004861WO02/069947WO03/08TO57WO05/007091WO02/26696WO03/092686WO05/030704WO0纖22幼WO03,579WO05/013958WO02/22577WO03/011851WO05/028447WO03/075929WO04/013,30WO05/026907其中，环A是具有任选的取代基R的碳环或杂环环系统，[键合基(linker)]是各种类型的键合基。异羟肟酸(hydroxamate)基团作为金属连接基团，与HDAC酶活性位点上的金属离子相互作用，其位于折叠的酶结构内的袋的基部。环或环系统A位于含有金属离子的袋内或入口上，而-(键合基]-基团深入到该袋中以使A与结合异羟躬本领域抑制的HDAC抑制剂中有许多具有式(A)所示的结构模板:酸基的金属相连。在本领域中，环或环系统A有时被非正式地称为抑制剂的"头部基团(headgroup)",在本文中有时也这样。使用前药来增强到靶器官和组织的递送或克服母体药物较差的药代动力学特性是一种熟知的药物化学方法。给予酯类前药，例如可在体内被血清羧酸酯酶水解成活性母体酸的酯，能使母体酸的血清水平高于给予酸本身。发明简述本发明基于以下发现，即将a氨基酸酯基团引入上述HDAC抑制剂分子模板(A)有助于药剂透过细胞膜，从而使细胞内羧酸酯酶活性水解酯以释放母体酸。酸在带有电荷时不容易被转运出细胞，从而会累积而提高活性HDAC抑制剂的细胞内浓度。这导致作用潜能提高且持续时间增加。因此，本发明提供了一类以具有a氨基酸酯部分为结构特征的化合物，a氨基酸酯部分是共价连接到HDAC抑制剂分子模板的细胞内羧酸酯酶(文中也称为"酯酶基序")的底物，并提供了相应的去酯化的母体酸，这种化合物具有药物用途，可用于治疗诸如癌症等受益于在细胞内抑制HDAC的疾病。发明详述根据本发明，提供了一种式(I)的化合物其盐、N-氧化物、水合物或溶剂合物/N—Y—L1—X1—[CH2];H其中，&是羧酸基(-COOH)或是可被一种或多种细胞内羧酸酯酶水解成羧酸基的酯基；R2是天然或非天然a氨基酸的侧链；Y是键、-C(=0)-、-S(=0)r、-C(=0)0-、-C(=0)NR3-、-C(=S)-NR3、-C(=NH)NR3或-S(K))2NR3-，其中R3是氢或任选取代的C,-C6烷基；L1是式-(Alk、(Q)n(Alk2)p-的二价基团，其中，m、n和p独立为0或1，Q是:(i)具有5-13个环成员的任选取代的二价单环或双环碳环或杂环基团，或(ii)，当m和p都是0时是式-X、QL或-Q^X、的二价基团，其中乂2是-0-，:键合基1—CONHOH(I)S-或NRA-，其中RA是氢或任选取代的C广C3烷基，(^是具有5-13个环成员的任选取代的二价单环或双环碳环或杂环基团，AU^和AlP独立代表任选取代的二价C3-C7环烷基，或任选取代的直链或支链的C,-C6亚垸基、CrC6亚烯基或C2-C6亚炔基，所述基团可任选含有或终止于醚(-O-)、硫醚(-S-)或氨基(-NRA-)连接，其中，RA是氢或任选取代的C1-C3院基5X1代表键；-C(=0);或-8(=0)2-;-NR4C(=0)-、國C(K))NR4-、-NR4C(=0)NR5-、-^8(=0)2-或-8(=0)2^-，其中R4和Rs独立为氢或任选取代的C,-C6垸基；Z是0或1;A代表任选取代的单环、二环或三环碳环或杂环环系统，其中，基团R,R2NH-Y-L、X、[CH2]z-和HONHCO-[键合基]-结合于不同的环原子；和-[键合基-代表连接A中的环原子与异羟肟酸基CONHOH的二价键合基，该键合基的长度，即从连接A的环原子的最后一个原子到连接异羟肟酸基的最后一个原子的长度，等于含有3-10个碳原子的无支链饱和烃链的长度。尽管上面的定义可能包括高分子量的分子，但根据药物化学实践的一般原则，优选本发明涉及的化合物的分子量应不超过600。在另一个广义方面，本发明提供了上面定义的式(I)的化合物或其N-氧化物、盐、水合物或溶剂合物在制备用于抑制HDAC酶活性的组合物中的应用。本发明涉及的化合物可用于在体外或体内抑制HDAC活性，尤其是HDAC1活性。在本发明的一个方面，本发明的化合物可用于制备用来治疗以下疾病的组合物细胞增殖疾病如癌细胞增殖、聚谷氨酰胺病如亨廷顿病、神经变性疾病如阿耳茨海默病、自身免疫性疾病如类风湿性关节炎、器官移植排斥、糖尿病、血液学疾病、感染(包括但不限于原生动物和真菌感染)、炎性疾病、以及包括动脉粥样硬化在内的心血管疾病。另一方面，本发明提供了一种治疗上述疾病类型的方法，所述方法包括给予患有这种疾病的对象有效量的如上文所定义的式(I)的化合物。术语"酯"或"酯化的羧基，，表示基团R90(C=0)-，其中R9是从理论上说衍生自醇R9OH的酯的特征性基团。文中，术语"(CVCb)垸基"，其中a和b是整数，表示含有a-b个碳原子的直链或支链垸基。因此，例如当a是l而b是6时，该术语包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基和正己基。文中，术语"二价(CVCb)亚烷基"，其中a和b是整数，表示含有a-b个碳原子和两个不饱和化学价的饱和烃链。文中，术语"((VCb)烯基"，其中a和b是整数，表示含有a-b个碳原子并具有至少一个合适的E或Z立体化学的双键的直链或支链烯基部分。该术语包括，例如，乙烯基、烯丙基、l-和2-丁烯基和2-甲基-2-丙烯基。文中，术语"二价(CVCb)亚烯基"表示含有a-b个碳原子、至少一个双键和两个不饱和化学价的烃链。文中，术语"CVCb炔基"，其中a和b是整数，表示含有2-6个碳原子且还含有一个三键的直链或支链烃基。该术语将包括，例如，乙炔基、l-丙炔基、l-和2-丁炔基、2-甲基-2-丙炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基和5-己炔基。文中，术语"二价(CVCb)亚炔基"，其中a和b是整数，表示含有2-6个碳原子和至少一个三键的二价烃链。文中，术语"碳环"指含有最多达16个环原子且所有环原子均为碳原子的单环、二环或三环基团，并包括芳基和环垸基。文中，术语"环烷基"指含有3-8个碳原子的单环的饱和碳环基团，该术语包括，例如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。文中，非限制性术语"芳基"指单环、二环或三环的碳环芳香基团，并包括含有两个通过共价键直接相连的单环碳环芳香环的基团。这种基团的例子有苯基、联苯基和萘基。文中，非限制性术语"杂芳基"指含有一个或多个选自S、N或0的杂原子的单环、二环或三环芳香基团，并包括含有通过共价键直接相连的两个此类单环或者一个此类单环和一个单环芳基环的基团。这种基团的例子有噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、吡咯基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、苯并噻唑基、异噻唑基、苯并异噻唑基、吡唑基、噁唑基、苯并噁唑基、异噁唑基、苯并异嚼、唑基、异噻唑基、三唑基、苯并三唑基、噻二唑基、噁二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、吲哚基和吲唑基。文中，非限制性术语"杂环基"或"杂环"包括上面定义的"杂芳基"，其非芳香含义包括含有一个或多个选自S、N或O的杂原子的单环、二环或三环非芳香基团，并包括由含有一个或多个这种杂原子的单环非芳香基团构成的基团，所述单环非芳香基团共价连接到另一个此类基团或连接到单环碳环基团。这种基团的例子有吡咯基、呋喃基、噻吩基、哌啶基、咪唑基、噁唑基、异嗎唑基、噻唑基、噻二唑基、吡唑基、吡啶基、吡咯垸基、嘧啶基、吗啉基、哌嗪基、吲哚基、吗啉基、苯并呋喃基、吡喃基、异嗯唑基、苯并咪唑基、亚甲基二氧苯基、亚乙基二氧苯基、马来酰亚胺基(maleimido)和琥珀酰亚胺基。除非当其出现时文中另有说明，术语"取代的"用于本文所述的任何部分时表示被最多4个相容的取代基取代，各取代基独立为，例如，(C!-C6)烷基，(d-C6)烷氧基，羟基，羟基(CrC6)垸基，巯基，巯基(CrC6)垸基，(d-C6)垸硫基，苯基，卤素(包括氟、溴和氯)，三氟甲基，三氟甲氧基，硝基，腈(-CN)，氧代，-COOH，-COORA，-cora，-so2ra，-conh2，-so2nh2，-conhra，-so2nhra，陽conrArb，-so2nrarb，-NH2，画NHRA，-NRARB，-OCONH2，-OCONHRA，-OCONRARB，-NHCORA，-NHCOORA，-NRBCOORA，-NHS02ORA，-NRBS02OH，-NRBS02ORA，-NHCONH2，-NRACONH2，-NHCONHR8，-NRaCONHRb，-NHCONRARB或-NRACONRARB，其中，rA和rB独立为(C,-C6)烷基，(C3-C6)环垸基，苯基或含有5或6个环原子的单环杂芳基。"任选的取代基"可以是上述取代基之一。术语"天然或非天然a-氨基酸的侧链"表示式NH2-CH(R、COOH所示天然或非天然氨基酸的W基团。天然a氨基酸的侧链的例子包括丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、谷氨酸、组氨酸、5-羟基赖氨酸、4-羟基脯氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、a-氨基己二酸、a-氨基-正丁酸、3,4-二羟基苯丙氨酸、高丝氨酸、a-甲基丝氨酸、鸟氨酸、2-哌啶酸和甲状腺素的侧链。在其特征性侧链中含有功能性取代基如氨基、羧基、羟基、巯基、胍基、咪唑基或吲哚基的天然a-氨基酸包括精氨酸、赖氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、色氨酸、组氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸和半胱氨酸。在本发明的化合物中，当R2是上述侧链之一时，则所述功能性取代基可任选被保护。术语"保护的"当用于天然a-氨基酸侧链中的功能性取代基时表示衍生这种取代基使其基本失去功能。例如，羧基可被酯化(例如Q-C6垸基酯)，氨基可被转化成酰胺(例如作为NHCOd-C6烷基酰胺)或氨基甲酸酯(例如作为NHC—0)OCrC6烷基或NHC(=0)OCH2Ph氨基甲酸酯)，羟基可被转化成醚(例如OCrC6烷基或0(d-C6垸基)苯基醚)或酯(例如0C—0)d-C6烷基酯)，硫醇基团可被转化成硫醚(例如叔丁基或苄基硫醚)或硫代酸酯(thioester)(例如SC(=0)CrC6垸基硫代酸酯)。非天然a氨基酸的侧链的例子包括下文在讨论用于本发明化合物的合适的R2基团时提到的那些。文中，术语"盐"包括碱加成盐、酸加成盐和季盐(quatemarysalt)。酸性的本发明的化合物可与碱、有机碱形成盐，包括药学上可接受的盐，所述碱例如碱金属的氢氧化物如氢氧化钠和氢氧化钾；碱土金属的氢氧化物如氢氧化钙、氢氧化钡和氢氧化镁；所述有机碱例如N-甲基-D-葡糖胺、胆碱三(羟甲萄氨基-甲垸、L-精氨酸、L-赖氨酸、N-乙基哌啶、二苄基胺等。那些碱性的化合物(I)可与无机酸和有机酸形成盐，包括药学上可接受的盐，所述无机酸例如氢卤酸如盐酸或氢溴酸、硫酸、硝酸或磷酸等，所述有机酸例如乙酸、酒石酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、苹果酸、水杨酸、柠檬酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、苯甲酸、苯磺酸、谷氨酸、乳酸和扁桃酸等。由于存在不对称碳原子，含有一个或多个实际的或潜在的手性中心的本发明的化合物可作为许多在各手性中心上具有R或S立体化学的非对映异构体存在。本发明包括所有这些非对映异构体和它们的混合物。如上所述，本发明的酯是它们将被细胞内羧酸酯酶转化成的相应羧酸的主要前药。然而，只要它们还未被水解，所述酯本身就具有HDAC抑制活性。本发明的化合物不仅包括酯，还包括相应的羧酸水解产物。异羟肟酸基团-C一O)NHOH在本发明的化合物中，异羟肟酸基团作为金属连接基团，与HDAC醇活性位点上的金属离子相互作用，其位于折叠的酶结构内的袋的基部。环或环系统A环或环系统A是任选被取代的单环、二环或三环碳环或杂环环系统。在本发明的化合物中，当结合到HDAC酶的活性位点时，环或环系统A位于含有金属离子的袋内或入口处，而-(键合基]-基团深入到该袋中以使A与结合异羟肟酸基的金属相连。在本领域中，环或环系统A有时被非正式地称为抑制剂的"头部基团"。环系统A的例子包括以下这些其中R,o是氢或任选取代的C,-C6烷基，被波浪线贯穿的键连接化合物(I)中的键合基，而化合物(I)中的基团R,R2CHNHYlJx、CH2]z与所示环系统中任何方便的环原子相连。-r键合基i-基团-[键合基]-代表连接A中的环原子与异羟肟酸基CONHOH的二价键合基，该键合基的长度，即从连接A的环原子的最后一个原子到连接异羟肟酸基的最后一个原子的长度，等于含有3-10个碳原子的无支链饱和烃链的长度。含有3个碳原子的无支链饱和烃链的长度约为2.5埃，含有10个碳原子的无支链饱和链烃的长度约为11.3埃。任何给定的-[键合基]-的长度可根据文献中的原子半径和键长数据来确定，或者可用DSViewerPro(Accelrys，Inc)等化学结构建模软件来确定。-[键合基]-的规定长度反映了头部基团A可位于酶活性位点上的含有金属离子的袋入口处或该袋内这一事实，因此与袋的深度松散相关。在多数情况下，键合基的长度将等于有4-9个碳原子，例如5、6或7个碳原子的无支链饱和烃链的长度。具体通用类型的-[键合基]-是下述"1型"、"2型"和"3型"键合基。l型键合基在这种类型中，-[键合基]-代表式为-(<:112、-2丄2-的二价基团，其中x是O或1;Z是键、-NR3-、-NR3C(=0)-、-C(=0)NRr、-NR4C(=0)-NR3-、-C(=S)-NR3、陽C^N)-NR3-NR3S^O)2-或-S(K))2NR3-，其中R3是氢或CVC6烷基；-C(=0);或-S(=0)2-;禾口1^代表任选取代的直链或支链的CVC7亚垸基、C4-C6亚烯基或C4-C6亚炔基，所述基团任选含有或终止于醚(-O-)、硫醚(-S-)或氨基(-NRA-)连接，其中，RA是氢或任选取代的Q-C3垸基。在这种类型的键合基的一个亚类中，在任何相容的组合中，x是0;Z是-NH-、-c(=o)-、-,<:(=0)-或-(:(=0),國和1是-((:112)5-、-(<:!12)6-或-((:112)7陽。2型键合基在这种类型中，-[键合基]-代表式为-(<:112))(丄3-八一丄4-的二价基团，其中X是O或1;1^是Z或I^或Z-L2，其中，Z如对l型键合基的定义，I是键或任选取代的二价Q-C3亚烷基；Ar'是二价苯基或具有5-13个环成员的二价单环或二环杂芳基，和L4是键或任选取代的-CH2-或-Cr^CH-。在这种类型的键合基的一个亚类中，在任何相容的组合中，x是0或l;I是Z或Z-L2，其中Z是-NH-、-NHS(=0)2-、-S(K))2NH-或-S(-0)2-;1^2是-0"12丄4是键或-CH2-;和Ar'是选自下组的二价基团其中，X是O、S或NH。在上述A,基团中，一个具体的例子是苯并[b]噻吩-6-基在这种类型的键合基的一个亚类中，在任何相容的组合中，X是0;1^是L2，其中I是可任选含有醚(-0-)、硫醚(-S-)或氨基(-NRA-)连接的直链CrC5亚烷基，其中，RA是氢或任选取代的CrC3烷基，例如羟乙基；Ar1是选自上段所列基团的二价基团。在这种类型的另一个亚类中，x是0，1^3和1/是键，A—是二价苯基或含有9-13个环成员的二价二环杂芳基，例如可选自下组xw々uX少Q、、Pu'其中，X选自0、S或NH，P、Q和U独立选自N和CH;用"标记的键连接到CONHOH基团；用4示记的键连接到环或环系统A。3型键合基在这种类型中，-[键合基]-代表式为-(CH2)x-L3-B-Ar1-L4-的二价基团，其中x、Ar1，!^和1/如上文对2型键合基的讨论；B是单环或二环杂环环系统。在这种类型的键合基的一个亚类中，B是以下基团之一厂NVN-<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>其中，X是N，W是NH、O或S。酯基A必须是本发明化合物中被一种或多种细胞内羧酸酯酶水解成羧酸基的基团。能够将本发明化合物的酯基水解成相应的酸的细胞内羧酸酯酶包括三种已知的人类的酶的同种型hCE-l、hCE-2和hCE-3。尽管这些酶被认为是主要的酶，但其它的酶如联苯基水解酶(BPH)也具有水解酯的作用。通常，如果羧酸酯酶将游离的氨基酸酯水解成母体酸，由于下述hCE-2和hCE-3针对的是N-羰基，则当共价结合到HDAC抑制剂时羧酸酯酶也会水解酯基序(estermotif)。因此，本文描述的破细胞测定法(brokencellassay)提供了一种直接、快速且简便的首次筛选具有所需水解曲线的酯的方法。当将用这种方法选出的酯基序通过选择性结合化学结合到调节物时可采用相同的羧酸酯酶测定法再次测定，以证实它仍旧是该背景下的羧酸酯酶底物。为被细胞内羧酸酯酶水解，特定的酯基!^的例子包括式-(CW)OR9的基团，其中，R9是(i)R7R8CH-，其中，R7是任选取代的(CrC3)垸基-(Z')a-(C,-C3)烷基-或(C2-C3)烯基-(Z')a-(C广C3)垸基-，其中a是0或l，Zi是-0-、-S-或-NH-，R8是氢或(C!-C3)烷基-，或者R7和R8与它们所结合的碳原子一起形成任选取代的C3-C7环烷基环或任选取代的5或6个环原子的杂环；或(ii)任选取代的苯基或含有5或6个环原子的单环杂环。在这些种类中，R9可以是，例如，甲基，乙基，正或异丙基，正或仲丁基，环己基，烯丙基，苯基，苄基，2-、3-或4-吡啶基甲基，N-甲基哌啶-4-基，四氢呋喃-3-基或甲氧基乙基。目前优选R9是环戊基。已知巨噬细胞通过释放细胞因子，尤其是TNFa和IL-1而在炎性疾病中发挥关键作用(vanRoon等，ArthritisandRheumatism,2003，1229-1238)。在类风湿性关节炎中，它们是维持关节炎症和关节破坏的主要贡献者。巨噬细胞也参与肿瘤的生长和发展(Naldini和Carraro，CurrDrugTargetsInflammAllergy,2005，3-8)。因此，选择性靶向巨噬细胞增殖的试剂对于治疗癌症和自身免疫性疾病很有价值。预计靶向特定细胞类型能降低副作用。发明人已经发现了将HDAC抑制剂靶向巨噬细胞的方法，该方法基于以下发现，即酯酶基序连接HDAC抑制剂的方式决定了它是否被水解，因此是否在不同细胞类型中累积。具体地说，已经发现巨噬细胞含有人羧酸酯酶hCE-l而其它细胞类型不含有。在通式(I)中，当酯酶基序R^2CHNH-的氮不直接连接到羰基(-C(K))-)时，即当Y不是-C(-O)、-CtO)O-或-C(K))NRr基团时，该酯将仅被hCE-l水解，因此HDAC抑制剂将仅在巨噬细胞中累积。文中，除非具体提到"单核细胞"或"单核细胞"，术语巨噬细胞将用来表示巨噬细胞(包括肿瘤相关的巨噬细胞)和/或单核细胞。氨基酸侧链R7当需要使酯基&被细胞内羧酸酯酶水解时，不要求侧链基团R2是相同的。氨基酸侧链的例子包括C,-Q烷基，苯基，2-、3-或4-羟基苯基,2-、3-或4-甲氧基苯基，2-、3隱或4-吡啶基甲基、苄基、苯基乙基，2-、3-或4-羟基苄基，2-、3-或4-苄氧基苄基，2-、3-或4-d-C6烷氧基苄基，以及苄氧基(CrC6垸基)-基团；天然a氨基酸的特征性基团，其中的任何官能团可被保护；基团-[Alky^，其中，Alk是任选被一个或多个-0-或-S-原子或-N(R7)-基团[其中，R7是氢原子或(CVC6)烷基]打断的(C,-C6)烷基或(CVC6)烯基或，n是0或l，&是任选取代的环烷基或环烯基；在苯环中被式-OCH2COR8的基团取代的苄基，其中R8是羟基、氨基、(Q-C6)垸氧基、苯基(Q-C6)垸氧基、(CrC6)烷基氨基、二((CrC6)垸基)氨基、苯基(Q-C6)烷基氨基、氨基酸或酰基卤的残基、酯或其酰胺衍生物，所述残基通过酰胺键连接，所述氨基酸选自甘氨酸、a或(3丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、赖氨酸、组氨酸、精氨酸、谷氨酸或天冬氨酸；在杂环环中未被取代或被以下基团单-或二-取代的杂环(Q-C6)垸基卤素、硝基、羧基、(C-C6)烷氧基、氰基、(C广C6)垸酰基、三氟甲基(C广C6)烷基、羟基、甲酰、氨基、(CVC6)烷基氨基、二-(CrC6)烷基氨基、巯基、(C,-C6)垸硫基、羟基(CrC6)垸基、巯基(CrC6)垸基或(d-C6)垸基苯基甲基；和基团-CRaRbR^，其中Ra、Rb和K各自独立为氢、(C,-C6)烷基、(CVC6)烯基、(CVC6)炔基、苯基(CVC6)垸基、(C3-C8)环烷基；或Rc是氢，Ra和Rb独立为苯基或杂芳基，如吡啶基；或Rc是氢、(CrC6)垸基、(CVC6)烯基、(C2-C6)炔基、苯基(CVC6)垸基或(C3-C8)环垸基，Ra和Rb与它们所结合的碳原子一起形成3-8元环烷基或5-6元杂环；或Ra、Rb和Rc与它们所结合的碳原子一起形成三环(例如金刚垸基)；或Ra和Rb各自独立为(C,-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(CrC6)炔基、苯基(Ci-C6)焼基、或是除氢之外的如下文对Rc定义的基团，或者Ra和Rb与它们所结合的碳原子一起形成环烷基或杂环，且Rc是氢、-OH、-SH、卤素、-CN、-c02H、(CVC4)全氟垸基、-ch2oh、-c02(c广C6)垸基、-0(<:1曙(:6)垸基、-0((:2-(:6)烯基、-s(c广C6)垸基、-80(<:1-(:6)垸基、-802((:1-<:6)垸基、-8(<:2-(:6)烯基、-80(<32《6)烯基、-802((:2-(:6)烯基或基团-(^\^，其中，Q代表键或-O-、-S-、-SO-或-SOr，w代表苯基、苯基烷基、(C3-C8)环垸基、(C3-C8)环垸基垸基、(C4-C8)环烯基、(C4-C8)环烯基垸基、杂芳基或杂芳基烷基，基团w可任选被一个或多个独立选自下组的取代基取代羟基、卤素、-cn、-c02h、-c02(c广C6)垸基、-conh2、-(:0丽((:1-(:6)烷基、-<:0丽(<:1-(:6烷基)2、-cho、-ch2oh、(c广Q)全氟烷基、-0(cvc6)烷基、-s(d-C6)烷基、-80(<:1-(:6)烷'基、陽so2(c广C6)烷基、-no2、-nh2、-丽(<:1-(:6)烷基、->^((<:1-(:6)烷基)2、-雨(:0((:1《6)烷基、(c广C6)烷基、(crc6)烯基、(CVC6)炔基、(C3-C8)环烷基、(CVC8)环烯基、苯基或苄基。具体的R2基团的例子包括氢(甘氨酸"侧链")、苄基、苯基、环己基甲基、环己基、吡啶-3-基甲基、叔丁氧基甲基、异丁基、仲丁基、叔丁基、l-苄硫基-l-甲基乙基、l-甲硫基-l-甲基乙基、l-巯基-l-甲基乙基和苯基乙基。目前优选的R2基团包括苯基、苄基和异丁基。对于要全身给予的本发明的化合物，优选被羧酸酯酶断裂的速率慢的酯，因为这种酯不易于被系统前代谢。因此它们完整到达其靶组织的能力增强了，且所述酯可在靶组织的细胞内被转化成酸产物。然而，对于局部给药而言，此时酯被直接施加于耙组织或通过例如吸入直接到达靶组织，通常需要这种酯被酯酶快速断裂，以使全身暴露和随后不希望的副作用最小。在本发明的化合物中，如果邻近a氨基酸酯a碳原子的碳原子被单取代，即R2是CH2RZ(RZ为单取代基)，则与上述碳原子如果被二取代或三取代(例如R2是苯基或环己基的情况)相比，这种酯趋于更快被断裂。该基团(或键)来自于选择用来偶联氨基酸酯基序RiCH(R2)NH-与抑制剂的头部基团A的特定化学方法。显然，用于该偶联的化学方法可以非常多，因此Y、L1、X1和z可以有许多组合。然而，如上所述，当抑制剂结合到HDAC酶的活性位点时，头部基团A位于该酶含有金属离子的袋的顶部或之内，因此，将氨基酸酯基序与头部基团连接时，头部基团通常向离开袋的方向延伸，从而最小化或避免了对抑制剂模板A-[键合基]-CONHOH的结合模式的干扰。因此，构成氨基酸酯基序与头部基团A之间的连接化学的变量的精确组合将通常与作为一个整体的化合物的结合模式无关。另一方面，在一些情况下，连接化学选择与位于含有金属离子的袋顶部或邻近该袋的酶采取其它结合相互作用，从而增强了结合。还应当注意，当氨基酸酯基序与头部基团之间的键不是细胞内肽酶活性(这种活性可导致从分子中切割下氨基酸)的底物时，上述氨基酸酯基序的益处(易于进入细胞、在细胞内被羧酸酯酶水解、以及在细胞内累积活性羧酸水解产物)最大。当然，也可将该化合物与破裂的细胞内容物一起孵育并分析任何此类切割来方便地测量对细胞内肽酶的稳定性。当头脑中有了上述一般概念时，接下来就可以考虑构成基团-Y-lAx^[CH2]z-的各种变量Z可以是0或1，因此头部基团A上可任选连接有亚甲基；当不需要巨噬细胞选择性时，特别优选的Y的例子包括-(0=0)-、-(CK))NH-和-(CK))O-;当需要巨噬细胞选择性时，Y的任何其它选择，包括Y是键的情况，都是合适的。在基团L1中，当AlW和AlP基团存在时，其例子包括-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH=CH-、-CH=CHCH2-、-CH2CH=CH-、CH2CH=CHCH2-、-C三C-、-C=CCH2-、CH2C三C-和CH2C=CCH2。Alk1和Alk2的其它例子包括-CH2W-、-CH2CH2W-、-CH2CH2WCH2-、-CH2CH2WCH(CH3)-、-CH2WCH2CHr、-CH2WCH2CH2WCH2^n-WCH2CHr，其中W是-O-、-S-、-nh-、-1^(013)-或-(:112<:112:^((:112(:112011)012-。aiW和Aik2进一步的例子包括二价环丙基、环戊基和环己基。在lJ中，当n是0时，所述基团是烃链(任选被取代，且可能含有醚、硫醚或氨基连接)。目前优选I^中没有任选的取代基。当m和p都是0时，"是含有5-13个环原子的二价单环或双环碳环或杂环基团(任选被取代)。当n是1且m和p中至少有一个是l时，U是二价基团，包括一条或多条烃链以及含有5-13个环原子的单环或双环碳环或杂环基团(任选被取代)。当Q存在时它可以是，例如，二价苯基、萘基、环丙基、环戊基或环己基，或是含有5-13个环成员的单环或二环杂环基团，如哌啶基、哌嗪基、吲哚基、吡啶基、噻吩基或吡咯基，但目前优选l,4-亚苯基。具体地说，在本发明的一些实施方案中，L1、m和p可以是O而n为1。在其它实施方案中，n和p可以是O而m为l。在其它实施方案中，m、n和p可以都是0。再在其它实施方案中，m可以是0，n可以是l，而Q为单环杂环基团，且p可以是0或l。Alk1和Alk2当存在时可以选自-CHr、-CH2CH24n-CH2CH2CH2-，而Q可以是1,4-亚苯基。基团-Y-I^X^CH^-的具体例子包括-C(=0)-和-C(=0)NH-、以及-(CH2)V-、<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>其中，v是l、2、3或4，w是l、2或3，如-CH2-、-CH20-、-C(=0)-CH2-、-C(=0)-CH20-、-C(=0)-NH-CH2^n-C(=0)-NH-CH20-。本发明化合物特定亚组的例子包括式(IA)-(IM)所示的那些<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>其中，z、R卜R2、R3、L1以及^和Y如上述有关式(I)的定义，包括其优选条件。具体的本发明化合物的例子包括以下这些(S)-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-苯基-乙酸环戊酯(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-节基氨基]-4-苯基-丁酸环戊酯(S)-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-苯基-乙酸环戊酯(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-4-甲基-戊酸环戊酯(SH2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯基]-乙基氨基)-苯基-乙酸环戊酯(S)-2-(3-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯氧基]-丙基氨基〉-3-苯基-丙酸环戊酯(8)-2-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[13]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-3-(4-羟基-苯基)-丙酸环戊酯(S)-3-叔丁氧基-2-(4-U(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基h苄基氨基)-丙酸环戊酯(8)-1-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[13]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基)-吡咯烷-2-羧酸环戊酯(S)-2-(4《(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基L苄基氨基)-丙酸环戊酯(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[，塞吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-乙酸环戊酯例如，可通过下述方法和这里的实施例中描述的方法制备本发明的化合物。例如，本发明的化合物可从相应的相应的羧酸(II)制备，方法是将其活化衍生物如酰基氯与羟胺或保护的羟胺反应。或者，N-或O-保护的或N，O-双保护的所需化合物(I)的前体可被去保护。在这种方法的一种有用的版本中，O-保护由树脂载体提供，可通过例如酸性水解从树脂载体上切下所需的异羟肟酸(I)。本发明的羧基保护的化合物(II)的衍生物，或O-连接的树脂-支持的化合物(II)的衍生物可用文献中所述的方法合成，按照所需化合物的具体结构进行选择。那种情况下，上述专利公开提供了关于合成与本发明的那些HDAC抑制剂结构类似的HDAC抑制剂的信息。在一种适用于化合物(I)的方法中，其中Z是亚磺酰氨基-NHS02-，可使胺(III)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>(III)与活化衍生物，例如磺酸HOS02-lAzS的酰基氯反应，其中，ZZ是保护的羧基，如可切割的酯或O-连接的树脂-支持的异羟肟酸基。在另一种适用于化合物(I)的方法中，Z是酰胺基-NHC(K))-，可在存在碳二亚胺偶联剂时使胺(III)与羧酸HOC(=0)-L-Z2反应，Z2如上一段中的定义。对于环或环系统A通过环氮原子连接到-键合基-CONHOH部分且Z是-(CK))-或-S02-的化合物(1)，可使合适的N-杂环(IV)(IV)与相应的羧酸或磺酸(即H00C-L、ZZ或H0S02-IAZ2，其中，ZZ如上文的定义)反应，所述羧酸或磺酸可作为其活化衍生物如氯化物或在存在碳二亚胺偶联剂时反应。为进一步阐述文献方法在合成上述式(I)范围内的化合物中的应用，提供了以下反应方案l-6。在这些方案中，基团R代表本发明化合物中存在的基团R2N—Y—L'—X'——[CH2]Z——H，或代表可用文献方法构建该基团的官能团。还在这些方法中，符号@代表固相树脂载体。NaOH,THFEDC,HOBtNH2OH,DMF方案l、NaH,Br',OH<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>TFA/DCM[OHAPyBOPDCMiPr2EtN,皂化和>与氨基酸方案3<formula>formulaseeoriginaldocumentpage30</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage31</formula>如上所述，本发明涉及的化合物是HDAC抑制剂，因此可用于治疗人类和其它哺乳动物的细胞增殖疾病，如癌症。应理解，用于任何特定患者的具体剂量水平将取决于各种因素，其中包括采用的具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康、性别、饮食、给药次数、给药途径、排泄率、药物组合以及接受治疗的特定疾病的严重性。最佳剂量水平和给药频率将由临床试验确定。本发明涉及的化合物可被制成通过任何与其药代动力学特性一致的途径给予。可口服给予的组合物的形式可以是片剂，胶囊，粉末，颗粒，锭剂，液体或凝胶制品如口服、局部或无菌肠胃外溶液或悬浮液。供口服给药的片剂或胶囊可采用单位剂型，并可含有常规赋形剂，如粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨糖醇、黄蓍胶或聚乙烯吡咯烷酮；填料，例如乳糖、蔗糖、玉米淀粉、磷酸钙、山梨糖醇或甘氨酸；压片润滑剂，例如硬脂酸镁、滑石、聚乙二醇或二氧化硅；崩解剂，例如马铃薯淀粉，或可接受的润湿剂如月桂基硫酸钠。可按照常规制药实践中熟知的方法将片剂包衣。口服液体制剂的形式可以是，例如，水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂，或者可呈现为在使用前用水或其它合适载体重建的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，如悬浮剂，例如山梨糖醇、糖浆、甲基纤维素、葡萄糖浆、明胶、氢化食用脂肪；乳化剂，例如卵磷脂、去水山梨糖醇单油酸酯或阿拉伯胶；非水性载体(可包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、油性酯如甘油、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，需要的话还可含有常规的调味剂或着色剂。当局部施用于皮肤时，可将药物制成霜剂、洗剂或软膏剂。可用于药物的霜剂或软膏剂配方是本领域熟知的常规配方，例如标准药物教科书如《英国药典》(BritishPharmacopoeia)中描述的配方。为通过吸入局部施用，可将药物制成通过气雾剂递送，例如通过压力驱动的喷射雾化器或超声雾化器，或者优选通过推进剂驱动的计量式气雾剂或者不釆用推进剂给予微粉化粉末，例如吸入剂胶囊或其它"干粉"递送系统。这种吸入配方中可含有赋形剂，例如推进剂(例如，在计量式气雾剂中为Frigen)、表面活性物质、乳化剂、稳定剂、防腐剂、调味剂和填料(例如，在干粉吸入器中为乳糖)。为了吸入，大量装置都是适用的，这些装置能产生最佳粒度的气溶胶并采用适合患者的吸入技术给予。除了采用适配器(间隔物(spacer)、扩展器)和梨形容器(例如Nebulator、Volumatic)以及发射吹入喷雾的自动装置(Autohaler⑧)，为给予经过计量的气溶胶，尤其是采用干粉吸入器时，许多技术方案是适用的(例如，Diskhaler、Rotadisk、Turbohaler或者例如欧洲专利申请EPO505321中描述的吸入器)。为局部施用于眼睛，可用合适的水性或非水性无菌载体将药物制成溶液或悬浮液。也可含有添加剂，例如，缓冲剂，如偏亚硫酸氢钠或依地酸二钠；防腐剂，包括杀菌剂和杀真菌剂如醋酸苯汞或硝酸苯汞、苯扎氯铵或氯己定；以及增稠剂，如羟丙甲纤维素。也可采用无菌介质肠胃外给予活性成分。根据所用载体和浓度，药物可悬浮于或溶于载体中。有利地，佐剂如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可溶于载体。以下实施例例举了本发明的具体化合物的制备及其HDAC抑制特性在这些实施例中市售试剂和溶剂(HPLC级)无需进一步纯化即可使用。微波照射用CEMDiscover聚焦微波反应器进行。用无加热的GeneVacSeriesI或具有30°CVacRamp的GenevacSeriesII或Buchi旋转式蒸发仪除去溶剂。用获自Silicycle的粒度为40-63|im(230-400目)的硅胶通过快速层析柱纯化化合物。用制备型HPLC纯化化合物是在Gilson系统上进行的，采用反相ThermoHypersil-KeystoneHyperprepHSC18柱(12,，訓x21.2mm)，9.5分钟20-100%B梯度(A-水/0.P/oTFA，B=乙腈/0.1o/。TFA)，流速=30ml/min，加样溶剂2:1DMSO:乙腈(1.6ml)，在215nmUV检测。在氘化溶剂中用Bruker400MHzAV光谱仪记录NMR谱。化学位移(S)用用百万分之一份(ppm)表示。用Kieselgel60F254(Merck)板进行薄层层析(TLC)分析并用紫外光显色。分析型HPLCMS在AgilentHPllOO、Waters600或Waters1525LC系统上进行，采用反相HypersilBDSC18柱(5pm,2.1x50mm)，2.10分钟0-95%B梯度(A^水/0.1%TFA，B=乙腈/0.1。/。TFA)，流速=1.0ml/min。用GilsonG1315A二极管阵列检测器、G1214A单波长UV检测器、Waters2487双波长UV检测器、Waters2488双波长UV检测器或Waters2996二极管阵列UV检测器记录215nm的UV光谱。用具有Z-喷射界面的MicromassLCT或者具有Z-喷射或MUX界面的MicromassLCT以每秒扫描2次或每1.2秒扫描1次的采样速率获得m/z150-850之间的质谱。数据用OpenLynx和OpenLynxBrowser软件积分和报告。采用以下縮写MeOH=甲醇EtOH-乙醇EtOAc=乙酸乙酯Boc=叔丁氧基羰基Cbz=节氧羰基(carbobenzyloxy)DCM=二氯甲烷DCE=二氯乙烷DMF=二甲基甲酰胺DMSO=二甲亚砜TFA=三氟乙酸THF=四氢呋喃Na2C03=碳酸钠HC1=盐酸DIPEA=二异丙基乙胺NaH=氢化钠NaOH=氢氧化钠NaHC03=碳酸氢钠Pd/C=碳载钯TBME=叔丁基甲基醚DMAP=4-二甲基氨基吡啶N2=氮气PyBop=苯并三唑-l-基-氧-三-吡咯垸-磷镜六氟磷酸盐Na2S04=硫酸钠Et3N=三乙胺NH3=氨TMSC1=三甲基氯硅烷NH4C1=氯化铵LiAlH4=氢化铝锂pyBrOP=溴代-三-吡咯垸磷铩v六氟磷酸盐MgS04=硫酸镁Mn02=二氧化锰nBuLi=正丁基锂C02=二氧化碳EDCI-AK3-二甲基氨基丙基)W-乙基碳二亚胺盐酸盐Et20=二乙醚LiOH=氢氧化锂HOBt-l-羟基苯并三唑DIAD=偶氮二羧酸二异丙酯HATU=0-(7-氮杂苯并三唑-l-基-A/;A/;A^7V'-四甲基脲镜(uronium)六氟磷酸盐ELS=蒸发光散射TLC=薄层层析ml=毫升g=克mg=毫克mol=摩尔mmol=毫摩尔eq=摩尔当量LCMS-高效液相色谱/质谱NMR=核磁共振r.t.=室温树脂化学的标准洗涤过程树脂按以下顺序洗涤DMF，MeOH,DMF，MeOH，DCM，MeOH，DCM，MeOHx2，TBMEx2。树脂的测试切除室温下将少量功能化的羟胺2-氯三苯甲基树脂(约0.3ml反应混合物，约10mg树月旨)用2。/。TFA/DCM(0.5ml)处理10分钟。过滤树脂，滤液通过氮气气流吹扫浓縮。获得残余物的LCMS。(注意对于功能化的羟胺Wang树脂的测试切除采用50%TFA/DCM进行)。制备辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂<formula>formulaseeoriginaldocumentpage36</formula>阶段1—固定到2-氯三苯甲基-0-NH2树脂<formula>formulaseeoriginaldocumentpage36</formula>在装有2-氯三苯甲基-0-NH2树脂(6g，以1.14mmol/g加载，6.84mmol)和DCM(60ml)的圆底烧瓶中加入二异丙基乙胺(5.30，41.0mmol，6eq)。边定轨振荡(orbitalshaking)边在反应混合物中缓慢加入8-氯-8-氧代辛酸甲酯(4.2g，20.5mmol，3eq)，再将将反应混合物振荡48小时。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。LCMS纯度通过ELS检测测定，100%，m/z204[]Vr+H]+。阶段2_皂化<formula>formulaseeoriginaldocumentpage36</formula>在装有阶段1的树脂(4g，以1.14mmol/g加载，4.56mmol)的圆底烧瓶中加入THF(16ml)和MeOH(16ml)。在反应物中加入NaOH(0.91g，22.8mmol，5叫)的水(16ml)溶液。将反应混合物振荡48小时。将树脂过滤并用水X2和MeOHX2洗涤，然后用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。LCMS纯度通过ELS检测测定，100%m/z190[M"+H]+。制备环戊酯该酯按照以下方法之一制备。方法A—合成(S)-2-氨基-3-叔丁氧基-丙酸环戊酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage36</formula>阶段1:(S)-2-苄氧基羰基氨基-3-叔丁氧基-丙酸环戊酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage37</formula>将(S)-2-苄氧基羰基氨基-3-叔丁氧基-丙酸(4g，0.014mol)溶于DMF(40ml)。加入环戊醇(2.54ml，0.027mol)和二甲基氨基吡啶(0.165g，0.014mol)。溶液用冰浴冷却至(TC并在其中加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N，-乙基碳二亚胺盐酸盐(2.73g，(X014mo1，1.05eq.)。混合物在0。C搅拌IO分钟，然后使其回复室温并再搅拌18小时。在反应混合物中加入水(20-30ml)，然后加入EtOAc(40ml)。分离各层，含水层用EtOAc(15ml)重新萃取。合并的有机层用水(4x20ml)洗涤，干燥(MgS04),并在真空下除去溶剂以得到残余物。通过柱层析(l:lEtOAc/庚烷)纯化得到无色油状产物(3.82g，78%产率)。！HNMR(300MHz，CDC13)，5:U5(9H，s，CH3x3)，1.50-1.90(8H，m，CH2x4)，3.57(1H，dd，J=7.4,1.2Hz，CH)，3.85(1H，dd，J=7.4，1.2Hz，CH)，4.45(1H，m，CH)，5.15(2H，s，CH2)，5.25(1H，m，CH)，5.65(1H，d，CH，J=7,6Hz)，7.30-7.50(5H，m，ArHx5)。阶段2:(S)-2-氨基-3-叔丁氧基丙酸环戊酯将(S)-2-苄氧基羰基氨基-3-叔丁氧基-丙酸环戊酯(3.82g，O.Ollmol)溶于EtOH(50ml)。在溶液中小心加入20重量％氢氧化钯(湿)。将系统排空并在氢气氛下放置4小时。将系统排空并通过硅藻土滤去残余的钯。硅藻土用EtOH(3x5ml)充分洗涤。在真空下除去滤液的溶剂以得到无色油状产物(2.41g，100%产率)。^NMR(300MHz，CDC13)，5:1.15(9H,s，CH3x3)，1.50-1.90(IOH，m，CH2x4，NH2)，3.50-3,70(3H，m，CH2，CH)，5.22(1H，s，CH)。方法B—合成(S)-氨基-环己基-乙酸环戊酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage38</formula>阶段l:(S)-叔丁氧基羰基氨基-环己基-乙酸环戊酯该物质用与(S)-2-节氧基羰基氨基-3-叔丁氧基-丙酸环戊酯(方法A，阶段l)相同的方法但从(S)-叔丁氧基羰基氨基-环己基乙酸制备。1HNMR(300MHz，CDC13)，S:1.00-1.40(IOH，m，CHxlO)，1.45(9H，s，C(CH3)3)，1.60-2.00(8H，m，4xCH2)，4.15(1H，m，CH)，5.05(1H，d，NH，J=7.6Hz)，5.25(1H，m，CH)。阶段2:(S)-氨基-环己基-乙酸环戊酯(TC下将(S)-叔丁氧基羰基氨基-环己基-乙酸环戊酯(1.17g，3.60mmol)溶于TFA/DCM混合物(l:l，10ml)。将溶液搅拌90分钟，在真空下除去溶剂。残余物与DCM/庚烷混合物共沸(2x)以得到胶状物。将胶状物重溶于DCM(10ml)并用饱和NaHC03水溶液(3xl0ml)洗涤，干燥(MgS04)并过滤。在真空下除去滤液的溶剂以得到油状产物(0.780g，78%产率)。'H薩R(300MHz，CDC13)，S:1.00-1.40(IOH，m，CHxlO)，1.50-2.00(8H，m，CHx8)，3.25(1H，d，CH，J=7.2Hz)，5.20(1H，m，CH)。方法C一合成(S)-2-氨基-4-甲基-戊酸环戊酯阶段l:(S)-2-氨基-4-甲基-戊酸环戊酯甲苯-4-磺酸<formula>formulaseeoriginaldocumentpage39</formula>在(S)-亮氨酸(15g，0.11mol)的环己烷(400ml)悬浮液中加入环戊醇(103.78ml，1.14mmol)和对甲苯磺酸(23.93g，0.13mol)。将悬浮液加热回流以有效溶剂化。将溶液回流16小时后将其冷却以得到白色悬浮液。将庚烷(500ml)加入混合物并过滤悬浮液以得到白色固体状产物(35g，85%产率)。iHNMR(300MHz，MeOD)，5:1.01(6H，t，CH3x2，J=5.8Hz)，1.54-2.03(IIH，m，llxCH)，2.39(3H，s，CH3)，3.96(1H，t，CH，J=6.5Hz)，5.26-5.36(1H，m，CH)，7.25(2H，d，ArHx2，J=7.9Hz)，7.72(2H，d，ArHx2，J=8.3Hz)。阶段2:合成(S)-2-氨基-4-甲基-戊酸环戊酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage39</formula>(S)-2-氨基-4-甲基-戊酸环戊酯甲苯-4-磺酸(2.57g，0.013mol)的DCM(5ml)溶液用饱和NaHC03水溶液(2x3ml)洗涤。合并的含水层用DCM(3x4ml)回萃。将合并的有机层干燥(MgSO4)并在真空下除去溶剂以得到无色油状物(1.10g,80%产率)。iHNMR(300固z，CDC13)，5:0.卯(6H，t，CH3x2,J=6.4Hz)，1.23-1.94(IIH，m，5xCH2，CH)，3.38(1H，dd，CH，J=8.4，5.9Hz)，5.11-5.22(1H,m，CH)。方法D—合成(S)-2-氨基-3-叔丁硫基(butylsulfanyl)-丙酸环戊酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage39</formula>阶段1:(S)-3-叔丁硫基-2-(9H省-9-基甲氧基羰基氨基)-丙酸环戊酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage39</formula>该物质用与(S)-2-苄氧基羰基氨基-3-叔丁氧基-丙酸环戊酯(方法A，阶段l)相同的方法但从(S)-3-叔丁硫基-2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-丙酸制备。]HNMR(300顧z，CDC13)，5:1.30(9H，s，(CH3)3)，1,55-1,95(8H，m，CH2x4)，3.05(2H，d，CH2，J=4.8Hz)，4.20-4.30(1H，m，CH)，4.40(2H，d，CH2，J=7.5Hz)，4.65(1H，m，CH)，5.25(1H，m，CH)，5.70(1H，d，NH，J=7.8Hz)，7.30-7.50(4H，m，ArHx4)，7.65(2H，d，J=7.5Hz，ArHx2)，7.80(2H，d，J=7.5Hz，ArHx2)。阶段2:(S)-2-氨基-3-叔丁硫基-丙酸环戊酯(TC下将(S)-3-叔丁硫基-2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-丙酸环戊酯(1.63g，3.5Ommol)溶于CH3CN(25ml)。在此溶液中加入哌啶(21ml)。搅拌30分钟后在真空下除去溶剂以得到残余物。通过柱层析(EtOAc洗脱液)纯化得到无色油状产物(628mg，73%产率)。!HNMR(300MHz，CDC13)，5:1.30(9H，s，(CH3)3)，1.55-1.95(8H，m，CH2x4)，2.75(1H，dd，CH，J=7.2，12.3Hz)，2.95(1H，dd，CH，J=4.8，12.3Hz)，5.25(1H，m，CH)。按照上述方法A将以下N-Cbz保护的氨基酸转化成环戊酯(S)-2-苄氧基羰基氨基-琥珀酸4-叔丁酯(S)-2-苄氧基羰基氨基-琥珀酸(succinamicacid)(S)-2-节氧基羰基氨基-4-氨甲酰基-丁酸(S)-2-节氧基羰基氨基-3-(4-叔丁氧基-苯萄-丙酸(S)-2-苄氧基羰基氨基-3-羟基-丁酸(S)-2-节氧基羰基氨基-3，3-二甲基-丁酸(S)-2-节氧基羰基氨基-3-(lH-吲哚-2-基)-丙酸(8)-2-苄氧基羰基氨基-6-叔丁氧基羰基氨基-己酸按照上述方法B将以下N-Boc保护的氨基酸转化成环戊酯叔丁氧基羰基氨基-乙酸(S)-2-叔丁氧基羰基氨基-3-甲基-戊酸(S)-吡咯垸-l,2-二羧酸1-叔丁酯(S)-2-叔丁氧基羰基氨基-3-甲基-丁酸(S)-2-叔丁氧基羰基氨基-4-甲硫基(methylsuIfanyl)-丁酸按照上述方法C将以下游离氨基酸转化成环戊酯(s)-氨基-苯基-乙酸(S)-2-氨基-3-苯基-丙酸(S)-2-氨基-丙酸(S)-2-氨基-4-甲基-戊酸制备6-甲酰-苯并fW噻吩-2-羧酸(l-异丁氧基-乙氧基)酰胺合成显示在下面的方案7中。与该途径有关的其它文献参考可在refra/z^ro"35，2，219-222和WO05/034880中找到。NalO,_硫基乙醇酸乙酯K2C03,DMF阶段3方案7啶热M力段阶段l:4-(2-二甲基氨基-乙烯基)-3-硝基苯甲酸甲酯将4-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯(5g，25.6mmol)溶于DMF(25mL，5体积)并在其中加入AUV-二甲基甲酰胺二甲基縮醛(4.4mL，33.3mmol)。混合物在140。C搅拌3小时。将所得深红色溶液冷却并真空浓縮。残余物与甲醇一起研磨并过滤。滤液用甲醇洗涤并在烧结漏斗(sinter)上干燥以得到4-(2-二甲基氨基-乙烯基)-3-硝基苯甲酸甲酯(5.2g，80%)。'H丽R(300MHz，DMSO)，5:2.98(6H，s，2xCH3)，3.87(3H，s，CH3)，5.58(1H，m，CH)，7.72-7.83(3H，m，ArH)，8.32(1H，m，CH)。阶段2:4-甲酰-3-硝基苯甲酸甲酯在烯胺(5g，20.0mmol)的THF(50mL，10体积)和水(50mL，IO体积)溶液中加入高碘酸钠(12.8g，60.0mmol)并将混合物搅拌2小时。将混合物过滤，所得固体用EtOAc(500mL)洗涤。将有机层分离，用NaHC03(3xlOOmL)洗涤并干燥(MgS04)。真空浓縮得到4-甲酰-3-硝基苯甲酸甲酯(3.9g，93%)。LCMSm/z210[M^H]+，&NMR(300画z，DMSO)，5:3.96(3H，s，OMe)，8.01(1H，d，ArH)，8.39(1H，d，ArH)，8.54(1H，s，ArH)，10.31(1H，s，CHO)。阶段3:苯并[b]噻吩-2,6-二羧酸2-乙酯6-甲酯将4-甲酰-3-硝基苯甲酸甲酯(3.9g，18.7mmol)、巯基-乙酸乙酯(2.2mL，20.4mmol)和K2C03(3.3g,24mmol)的DMF(40ml，10体积)的混合物在50。C加热过夜。冷却至室温后将混合物倒入冰冷的水(250mL)中并将所得混合物搅拌40分钟。形成的固体通过过滤分离，用水(4x50mL)洗涤并真空干燥以得到标题化合物(3.9g，80%)。LCMSm/z265[Iv^+H]+，'HNMR(300MHz，CDC13)S:1.40(3H，tJ=6.8Hz,CH3)，3.95(3H，s，OMe)，4.40(2H，qJ=7.2Hz，CH2)，7.88(1H，dJ=8.0Hz，ArH)，7.97-8.09(2H，m.ArH)，8.56(1H，s，ArH)。阶段4:苯并[b]噻吩-2,6-二羧酸2-乙酯将苯并[b]噻吩-2,6-二羧酸2-乙酯6-甲酯(3.9g，14.77mmol)和碘化锂(10g，74.6mmol)的无水吡啶(30ml，9体积)混合物搅拌回流16小时。冷却至室温后将混合物加入(以熔化物形式或切碎的形式)冰冷的2NHC1(200mL)中。形成的固体通过过滤分离并用水(3x50mL)洗涤。产物通过从甲醇中重结晶纯化以得到标题化合物(1.8g，49%)。LCMSm/z251[lyT+H]+，'HNMR(300應z，DMSO)，S:1.35(3H，tJ=6.9Hz，CH3)，4.38(2H，qJ=7.1Hz，CH2)，7.99(1H，dJ=8.3Hz，ArH)，8.12(1H，dJ=8.3Hz，ArH)，8.27(1H，s，ArH)，8.70(1H，s，ArH)。阶段5:6-羟甲基-苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯将苯并[b]噻吩-2,6-二羧酸2-乙酯(1.6g，6.4mmol)的无水THF(40mL，25体积)溶液冷却至(TC。在其中缓慢加入BH3(1M，用THF配制，30mL，30.Ommo1)。使反应物回复至室温并搅拌3小时。然后将溶液冷却至O'C并用INHC1(7.5mL)淬灭(quench)。将反应混合物真空浓縮以除去所有THF，所得固体通过过滤分离并真空干燥以得到6-羟甲基-苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯(1.3g，87%)。LCMSm/z237pvT+H]+，&NMR(300丽z，DMSO)，5:1.34(3H，tJ=6.9Hz，CH3)，4.35(2H，qJ=7.1Hz，CH2)，4.65(2H，s，CH2)，6.53(1H，brs，OH)，7.42(1H，dJ=9.4Hz)，7,98(3H，m，ArH)，8.18(1H，s，ArH)。阶段6:6-羟甲基-苯并[b]噻吩-2-羧酸将6-羟甲基-苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯(2.4g，9.6mmo1，1叫)溶于THF(10mL，4体积)并加入(IOmL)和LiOH(0.69g，28.8mmol)。反应混合物在50。C搅拌3小时，然后浓縮至干并无需纯化用于下一步骤。阶段7:6-羟甲基-苯并[b]噻吩-2-羧酸(l-异丁氧基-乙氧基)酰胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage44</formula>在6-羟甲基-苯并[b]噻吩-2-羧酸(1.76g，8.4mmol，1eq)的DMF溶液中加入PyBrOP(4.3g，9.2mmol)、0-(异丁氧基-乙基)-羟胺(11.5mL，84.0mmol)(通过WO0160785所述方法制备)和DIPEA(2.9mL，16.7mmol)。反应混合物在室温搅拌2小时，然后用水(40mL)和EtOAc(40mL)稀释。将有机层分离，用盐水(50mL)洗涤并浓縮。残余物通过硅胶层析纯化，用EtOAc/庚烷(l:l)洗脱以得到标题化合物(1.8g，两个步骤的产率为67%)。LCMSm/z322[M^H]+，^NMR(300MHz，MeOD)，5:0.83(6H，dJ=6.6Hz，2xCH3)，1.32(3H，dJ=5.9Hz，CH3)，1.75(1H，m，CH)，3.38(2H，m，CH2)，4.63(2H，s，CH2)，4.95(1H，m，CH)，7.32(1H，dJ=8.2Hz，ArH)，7.77(3H，m，ArH)。阶段8:6-甲酰-苯并[b]噻吩-2-羧酸(l-异丁氧基-乙氧基)酰胺在6-羟甲基-苯并[b]噻吩-2-羧酸(l-异丁氧基-乙氧基)酰胺(600mg，1.86mmol)的DCM(3mL)溶液中加入Mn02(2.1g，24.1mmol)。将混合物室温搅拌30分钟然后通过硅藻土过滤。将滤液浓縮以得到标题化合物(435mg，82%)。LCMSm/z320[M+-H]+，iHNMR(300顧z，MeOD)，S:0.94(6H，dJ=6.7Hz，2xCH3)，1.45(3H，dJ=5.3Hz，CH3)，1.87(1H，m，CH)，3.40(2H，m，CH2)，5.08(1H，ddJ=5.2，10.6Hz，CH)，7.89-8.09(3H，m，ArH)，8.55(1H，s，ArH)，10.11(1H，s，CHO)。合成图1的化合物，以化合物(1)和化合物(2)为例力HR=环戊基1R=H2R=环戊基3R=H4<formula>formulaseeoriginaldocumentpage44</formula>制备结构单元A-G结构单元A和B将N-Boc-D-四氢-P-咔啉-3-羧酸(5.0g，15.8mmol)和TMSC1(20ml，158mmol)的MeOH(50ml)溶液加热回流2小时。将反应混合物蒸发至干以得到(R)-2，3，4,9-四氢-lH-!3-咔啉-3-羧酸甲酯(结构单元A)。LCMS纯度100%。m/z231[]Vr+H]+，461[2M^H]+。结构单元A无需进一步纯化即可使用。用N-boc-L-四氢-P-咔啉-3-羧酸通过与结构单元A相同的方法获得(S)-2,3，4,9-四R=乙基5R=H6R-OMeOR=环戊基11R-H12R—O'OHPhOR二环戊基13R=H14R-环戊基15R=H16PhOR—OR=环戊基17R=H18R-叔丁基19图1ooo=氢-lH-p-昨啉-3-羧酸甲酯(结构单元B)。阶段h边搅拌边将乙醛酸单水合物(1.51g，16.4mmol)的水(10ml)溶液逐滴加入盐酸色胺(3.0g，15.3mmol)的水(200ml)溶液。加入KOH(0.827g，14.7mmol)的水(10ml)溶液。将反应混合物室温搅拌1小时，之后发生随时间沉淀。减压过滤后收集四氢-(3-咔啉-l-羧酸并用水洗涤。产量为1.9g(58%);m/z217[M"+H]+。阶段2:四氢-P-咔啉-l-羧酸(7.4g)的MeOH(250ml)溶液用HC1气体饱和20分钟。反应混合物在室温温和搅拌18小时，观察到约80%转化。反应混合物用HC1气体再次处理并再搅拌18小时。反应完成后真空浓縮混合物以得到2,3,4,9-四氢-lH-p-咔啉-l-羧酸甲酯(结构单元C)，LCMS纯度95。/。，m/z231[M++H]+。产物无需进一步纯化即可使用。结构单元DD采用结构单元C所用的方法将6-甲氧基-四氢-p-咔啉-l-羧酸酯化得到6-甲氧基-2,3，4,9-四氢-111-(3-咔啉-1-羧酸甲酯(结构单元D)。结构单元D:LCMS纯度98%,m/z261[AT+H]+。结构单元D无需进一步纯化即可使用。结构单元E4-哌嗪-l-基-苄腈(1.5g，8.0mmol)的MeOH(150ml)溶液用HCl气体饱和。加入水(0.17ml)并将混合物加热回流18小时。将反应混合物冷却至室温并用HC1气体再次饱和。再回流24小时。将混合物减压浓縮得到4-哌嗪-l-基-苯甲酸甲酯(结构单元E)。LCMS纯度90%，m/z221[M^H]+。结构单元E无需进一步纯化即可使用。结构单元FO按照与结构单元E相同的方法制备l，2，3，4-四氢-异喹啉-7-羧酸甲酯(结构单元F)。LCMS纯度89。/。。m/z193[M"+H]+。该产物无需进一步纯化即可使用。结构单元GoG4-氨基-苯甲酸甲酯(结构单元G)是市售的合成化合物(1)和化合物(2)在无水DCM(50ml)中溶胀用辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(4.6g，以U4mmol/g加载，5.24mmo1)。加入结构单元A(4.76g，15.72mmo1)，然后加入pyBOP(8.18g，15.72mmo1，3eq)和DIPEA(6.77g，52.4mmo1，10eq)。将反应物振荡18小时，过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。注意对于结构单元G，采用上述条件偶联得到约10%的转化。因此采用另一种条件将阶段2的树脂(1.0g，以1.14mmol/g加载)在无水DCM(100ml)中溶胀。0°C时在氮气下加入l-氯-W/Z-2-三甲基丙烯胺(Ghosez试剂y(7.53ml，57.0mmol，50叫)。使混合物回复室温并温和振荡1-2小时。在20分钟内分批加入苯胺结构单元G(8.6g，57.0mmo1，50eq)。加入Et3N(8.0ml，57.0mmo1，50eq)。将混合物振荡18小时。测试切除后的LCMS显示有70%转化，m/z323[M^H]+，645[2!vT+H]+。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。阶段2:皂化将阶段1的树脂(4.8g，以U4mmol/g加载，5.47mmol)悬浮于MeOH(17.5ml)和THF(17.5ml)。加入NaOH(l.lg，27.5mmol，5eq)的水(17.5ml)溶液。将混合物振荡18小时。测试切除后的LCMS证实反应完全，m/z388[M^H]+，775[2M"+H]+。将树脂过滤并用水x2和MeOHx2洗涤，然后用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。注意对于结构单元E，皂化用10eq.2.7MNaOH进行并振荡72小时。阶段3:与L-苯基甘氨酸环戊酯偶联将阶段2的树脂(2.4g，以U4mmol/g加载，2.7mmol)悬浮于无水DCM(30ml)。加入L-苯基甘氨酸环戊酯甲苯磺酸盐(tosyl5化)(3.2§，8.111111101，369)，然后加入？丫80(4.2g，8.1mmo1，3叫)和DIPEA(3.5g，27.0mmo1，IO叫)。将混合物振荡18小时。测试切除后的LCMS(即用标准洗涤过程洗涤少量树脂，干燥，并在2。/oTFA/DCM中切除。将树脂滤出并浓縮至干。获得LCMS)证实反应完全，m/z589[M++H]+。将所有树脂样品过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。注意对于化合物5-8，采用L-苯丙氨酸乙酯(3eq)。对于化合物19，采用L-苯基甘氨酸叔丁酯(3eq)。阶段4:0{[(11)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3,4,9-四氢-111-卩-咔啉-3-羰基]-氨基}-苯基-乙酸环戊酯(l)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage49</formula>将阶段3的树脂(1.0g，以1.14mmol/g加载)在2%TFA/DCM(10ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。收集滤液并在室温下减压蒸发。树脂用2n/。TFA/DCM(10ml)重新处理，20分钟后过滤。将合并的滤液在室温下减压蒸发至干，残余物(约300mg)通过制备型HPLC纯化以得到化合物(l)，m/z589[Nf+H]+;NMR(400MHz,CD3OD)S:1.3-1.7(16H，m，CH2)，2.1-2.3(2H，m，CH2)，2.5(2H，m，CH2)，3.0-3.5(2H，m，CH2)，4.5-4.8(2H，m，CH2)，5.1(1H，m，C02CH)，5.2(1H，dd，CH2C1JNC0)，5.5-5.9(1H，d，CONHC)，7.0-7.5(9H，m，Ar)。相应的羧酸通过以下过程获得阶段5:皂化将阶段3的树脂(1.0g，以1.14mmol/g加载)悬浮于MeOH(4ml)和THF(4ml)。加入NaOH(0.23g，5.7mmoI)的水(4ml)溶液。将混合物振荡18小时。测试切除后的LCMS证实反应完全，m/z521[N^+H]+。将树脂过滤并用水x2和MeOHx2洗涤，然后通过标准洗涤过程洗涤。树脂在真空下干燥。阶段6:0{[(!1)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2,3,4,9-四氢-111-(3-咔啉-3-羰基]-氨基}-苯基-乙酸(2)阶段5的树脂(1.0g，以1.14mmol/g加载)用阶段6所述方法切割得到化合物(2)，m/z521[M+十H]+;'HNMR(400丽z，CD3OD)，5:1.3-1.5(4H，2xCH2),1.6-1.8(4H，2xCH2)，2.1-2.2(2H，m，CH2)，2.4-2.7(2H，m，CH2)，3.0-3.2(1H，m)，3.5(1H，m)，4.55(m)，4.9(m)，5.1-5.35(2H，m)，(2H，m，CH2NCO)，5.75-5.8(1H，2xd，NHCgPh),7.0-7.5(9H，m，Ar)，7.6(d),7.7(d),8.35(d),8.95(s)，9.05(s)。以下化合物按照为化合物(1)和化合物(2)描述的方法制备(SH[(S)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-lH-P-咔啉-3-羰萄-氨基卜苯基-乙酸环戊酯(3)使用结构单元BLCMS纯度98。/。，m/z589[Nf+H]+，HNMR(400MHz，MeOD)，5:1.20-1.40(8H，m，4xCH2)，1.40-1.80(8H，m，4xCH2)，2.10(2H，m，CH2)，3.45(2H，m，CH2)，5.0(2H，m，(3112与020峰重叠)，5.25-5.45(2H，m，2xCH)，5.50(1H，s，CONHCgPh)，7.00-7.50(9H，m，Ar)。(SH[(S)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-lH-P-咔啉-3-羰基]-氨基)-苯基-乙酸(4)使用结构单元BLCMS纯度100%，m/z521[M^H]+，^NMR(400固z，MeOD)，51.30-1.50(4H,m，2xCH2)，1.55-1.80(4H，m，2xCH2)，2.15(2H，m，CH2)，2.60(2H，m，CH2)，3.00-3.25(2H，m，CH2)，3.40-3.55(2H，m，CH2)，5.20-5.30(1H，m，CHCON)，5.35(IH，s，NHCgPh)，7.05-7.50(9H，m，Ar)。(S)-2-U(R)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-lH-p-咔啉-3-羰基-氨基)-3-苯基-丙酸乙酯(5)使用结构单元ALCMS纯度100%m/z563[Nf+H]+，iHNMR(400MHz，MeOD)，51.00(3H，t，CH3)，1.20-1.24(4H，m，2xCH2)，1.50-1.70(4H，m，2xCH2)，2.00(2H，m，CH2)，2.30-2.50(2H，m，CH2)，2.80-3.00(2H，m，CH2)，4.05(2H，q，C02CH2)，4.35-4.50(1H，m，CH)，4.80-5.05(2H，m,CH2)，5.40(1H，s，NHPhCO)，6.80-7.30(9H，m，Ar)。(S)-2-U(R)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-lH-P-咔啉-3-羰基-氨基H-苯基-丙酸(6)使用结构单元ALCMS纯度100%，m/z534[JVT+H]+，'HNMR(400MHz，MeOD)，51.30-1.50(4H，m，2xCH2)，1.60-1.80(4H,m，2xCH2)，2.15(2H，m，CH2)，2.50(2H，m，CH2)，3.00(2H，m，CH2)，3.20(2H，m，CH2)，4.30-4.80(2H，m，CH2)，5.15(1H，m，CH)，6.90-7.50(9H，m，Ar)。(S)-2-U(S)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-lH-p-咔啉-3-羰基卜氨基)-3-苯基-丙酸乙酯(7)使用结构单元BLCMS纯度100%，m/z563[ivT+H]+，'HNMR(400MHz，MeOD)，S1.00(3H，t，CH3)，1.30-1.50(4H，m，2xCH2)，1.60-1.70(4H，m，2xCH2)，2.10(2H，m，CH2)，2.30-2.65(2H，m，CH2)，2.95-3.20(2H，m，CH2)，3.45(1H，m，CH)，4.05(2H，q，C02CH2)，4.35-4.50(1H，m，CH)，4.80-5.05(2H，m，CH2)，5.50(1H，s，丽PhCO)，6.90-7.50(9H，m，Ar)。(S)-2-U(S)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-lH-p-咔啉-3-羰基-氨基)-3-苯基-丙酸(8)使用结构单元BLCMS纯度100%，m/z534[M++H]+，&NMR(400MHz，MeOD)，51.30-1.50(4H，m，2xCH2)，1.60-1.80(4H，m，2xCH2)，2.15(2H，m，CH2)，2.50(2H，m，CH2)，2.95-3.15(2H，m，CH2)，3.20-3.50(2H，m，CH2)，4.30-4.50(2H，m，2xCH)，4.80-5.20(2H，m，CH2)，6.90-7.50(9H，m，Ar)。(SH[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-lH-p-咔啉-l-羰基-氨基!-苯基-乙酸环戊酯(9)使用结构单元CLCMS纯度100%，m/z589[Nf+H]+，！HNMR(400MHz，CDC13)，S1.30-1.80(16H，m，8xCH2)，2.15(2H，m，CH2)，2.45-2.70(2H，m，CH2)，2.95(2H，m，CH2)，3.55(1H，m，CH)，4.35(1H，m，CH)，5.15(1H，m，C02CH)，5.45(1H，m，CH)，6.20(1H，d，PhCHNH)7.00-7.80(9H，m，Ar)，8.80-9.20(1H，宽峰m，CHNHOH)。(SH2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-lH-p-咔啉-l-羰基-氨基)-苯基-乙酸(10)使用结构单元cLCMS纯度100%,m/z521[Nf+H]+，！HNMR(400MHz，MeOD)，51.30-1.50(4H，m，2xCH2)，1.60-1.80(4H,m，2xCH2)，2.15(2H，m，CH2)，2.50-2.65(2H，m，CH2)，2.95(2H，m，CH2)，3.70(1H，dd，CH)，4.30(1H，dd，CH)，5.50(1H，m，CH)，6.10禾口6.20(各0.5H，s，PhCiJNH)7.00-7.50(9H，m，Ar)。(SH[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-6-甲氧基-2,3，4，9-四氢-lH-p-咔啉-l-羰基-氨基卜苯基-乙酸环戊酯(ll)使用结构单元DLCMS纯度100%，m/z619[]Vr+H]+，'HNMR(400顧z，CDC13)，S1.30-1.80(16H，m，8xCH2)，2.15(2H，m，CH2)，2.50-2.65(2H，m，CH2)，2.85(2H，m，CH2)，3.70(1H，dd，CH)，3.80(3H，s，OMe)，4.30(1H，dd，CH)，5.20(1H，m，C02CH)，5.30-5.50(1H，m，CH)，6.15-6.20(1H，d，PhQiNH)6.80-7,80(8H，m，Ar)，8.80-9.00(1H，m，CONHOH)。(SH2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-6-甲氧基-2，3，4，9-四氢-lH-P-咔啉-l-羰基-氨基〉誦苯基-乙酸(12)使用结构单元DLCMS纯度1000/0，m/z551[M++H]+，'HNMR(400MHz，MeOD)，51.30-1.60(8H，m，4xCH2)，2.05(2H，m，CH2)，2.50-2.65(2H，m，CH2)，2.80(2H，m，CH2)，3.55(1H，dd，CH)，3.70(3H，s，OMe)，4.30(1H，dd，CH)，5.30-5.50(1H，m，CH)，5.90-6.10(各0.5H，s，PhCHNH)，6.65(1H，m，Ar)，6.80(1H，m，Ar)，7.10(1H，m，Ar)，7.35(5H，m，Ar)。(SH[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-6-甲氧基-2，3，4，9-四氢-111-|}-咔啉-1-羰基-氨基}-苯基-乙酸环戊酯(13)使用结构单元ELCMS纯度95%，m/z579[M++H]+，'H画R(400MHz，CDC13)，51.40-1.90(16H，m，8xCH2)，2.15(2H，m，CH2)，2.45(2H，m，CH2)，3.40(4H，m，2xCH2N),3.60-3.80(4H，m，2><CH2N)，5.30(1H，m，C02CH)，5.70(1H，d，PhQJNH)，6.90(2H，d，Ar)，7.30-7.50(6H，m，Ar)，7.80(2H，d，Ar)。(8)-{[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-6-甲氧基-2，3，4，9-四氢-111爷咔啉-1-羰基-氨基}-苯基-乙酸(14)使用结构单元ELCMS纯度100%，m/z511[M^H]+，iHNMR(400固z，MeOD)，51.30(4H，m，2xCH2)，1.50(4H，m，2xCH2)，2.00(2H，t，CH2)，2.35(2H，t，CH2)，3.30(4H，m，2xCH2N)，3,70(4H，m，2xCH2N)，5.55(1H，s，PhQJNH)，6.90(2H，d，Ar)，7.30(3H，m，Ar)，7.40(2H，m，Ar)，7.70(2H，d，Ar)。(SH[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-l，2，3，4-四氢-异喹啉-7-羰基-氨基)-苯基-乙酸环戊酯(15)使用结构单元FLCMS纯度100%，m/z550[]VT+H]+，iHNMR(400固z，CDC13)，S1.30-1.80(16H，m，8xCH2)，2.15(2H，m，CH2)，2.45(2H，m，CH2)，2,95(2H，m，2xCH2)，3.70-3.90(2H，m，2xCH2)，4.60-4.70(2H，m，CH2)，5.25(1H，m，C02CH)，5.70(IH，m，PhCHNH)，7.20-7.70(8H，m，Ar)。(SH[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-l，2，3，4-四氢-异喹啉-7-羰基-氨基p苯基-乙酸(16)使用结构单元FLCMS纯度87%,m/z482[M++H]+，NMR(400固z，MeOD)，S1.30-1.50(4H，m，2xCH2)，1.60-1.70(4H，m，2xCH2)，2.15(2H，m，CH2)，2.50(2H，m，CH2)，2.95(2H，m，2xCH2)，3.70(2H，m，CH2)，4.80(2H，m，CH2)，5.70(1H，s，PhCMNH)，7.20-7.80(8H，m，Ar)。(SH4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯甲酰氨萄-苯基-乙酸环戊酯(17)使用结构单元GLCMS纯度94%，m/z510[M^H]+，^画R(400固z，MeOD)，51.30-1.80(16H，m，8xCH2)，2.00-2.20(4H，m，2><CH2)，5.10-5.30(1H，m，C02CH)，5.70(IH，m,PhCHNH)，7.30-7.80(9H，m，Ar)。(SH4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯甲酰氨萄-苯基-乙酸(18)使用结构单元GLCMS纯度100%，m/z442[M++H]+，'HN證(400画z，MeOD)，51.30-1.40(4H，m，2xCH2)，1.50-1.70(4H，m，2xCH2)，2.20(2H，t，CH2)，2.35(2H，t，CH2)，5.70(1H，s，PhCHNH)，7.25-7.40(3H，m，Ar)，7.50(2H，d，Ar)，7.65(2H，d，Ar)，7.80(2H，d，Ar)。(8)-{[(议)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-111+咔啉-3-羰基1-氨基}-苯基-乙酸叔丁酯(19)使用结构单元ALCMS纯度100%，m/z577[M++H]+，！HNMR(400画z，CDC13)，51.20-1.40(17H，m，4xCH2禾口C(CH3)3)，2.10(2H，m，CH2)，2.45(2H，m，CH2)，3.15-3.60(2H，m，CH2)，4.75(2H，m，CH2)，5.35(2H，m，PhCHNH和CH)，6.90-7.50(9H，m，Ar)o合成化合物(20)和化合物(21)20阶段l:(S)-(4-硝基-苄基氨基)-苯基-乙酸环戊酯,0、'21将DMF(250ml)中的4-硝基苄基溴化物(15g，69.4mmo1)、L-苯基甘氨酸环戊酯甲苯磺酸盐(27.1g，60.4mmol)和碳酸钾(19.6g，138.8mmol)的混合物室温搅拌18小时。反应混合物用EtOAc(300ml)稀释并用水(3x200ml)洗涤。将EtOAc层分离，干燥(Na2S04)，过滤并浓縮至干得到橙色油状物。分离出21克粗产物。LCMS纯度81%,m/z355[M++H;T。该产物无需进一步纯化即可使用。阶段2:(S)-[叔丁氧基羰基-(4-硝基-节基)-氨基]-苯基-乙酸环戊酯,0、=在阶段1的产物(15g，42.37mmol)的THF(150ml)溶液中加入K2C03(6.9g，50.8mmo1)，然后加入二碳酸二叔丁酯(22.2g，101.7mmo1)。加入水(150ml)并将反应物室温搅拌36小时。将反应混合物蒸发至干。将残余物重溶于EtOAc(300ml)，用0.1MHC1(150ml)、饱和NaHC03水溶液和水(150ml)依次洗涤。将EtOAc层干燥(Na2S04)，过滤并浓縮至干得到黄色油状物。通过柱层析(10。/。EtOAc/己垸)纯化后获得澄清的黄色油状产物(12g，62%产率)。LCMS纯度95%，m/z455[]Vf+H]+，496[M^H+41]+。阶段3:(S)-[(4-氨基-苄基)-叔丁氧基羰基-氨基]-苯基-乙酸环戊酯.0、将EtOAc(350ml)中的阶段2的产物(12g，26.4mmol)和10%Pd/C(2.0g)的混合物在室温下氢化18小时。通过硅藻土垫滤去Pd/C催化剂。将滤液减压浓縮以得到白色固体(10.1g，90%产率)。LCMS纯度1000/。，m/z425[1VT+H]+，466[!VT+H+41]+。阶段4:偶联阶段3的苯胺将用辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(1.0g，以0.94mmol/g加载)在无水DCM(100ml)中溶胀。0。C时在氮气下加入l-氯-A^-2-三甲基丙烯胺(Ghosez试剂)1(0.373ml，2.82mmo1，3叫)。使混合物回复室温并温和振荡1-2小时。在20分钟内分批加入阶段3的苯胺(1.2g，2.82mmo1，3叫)。加入Et3N(0.53ml，3.76mmo1，4eq)。将混合物振荡l小时。测试切除后的LCMS显示有70。/。转化，m/z596[]Vr+H]+。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。阶段5:(S)-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-苯基-乙酸环戊酯(20)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage55</formula>将阶段4的树脂(1.5g，以0.94mmol/g加载)在2%TFA/DCM(10ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。收集滤液并在室温下减压蒸发。树脂用2%TFA/DCM(10ml)重新处理，20分钟后过滤。合并的滤液在室温下减压蒸发至干以得到残余物。使该残余物在20。/。TFA/DCM中静置40分钟。再在室温下减压蒸发至干后，残余物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(20)，其为TFA盐，LCMS纯度95%，m/z496[M^+H]+，'HNMR(400固z，DMSO)，S:1.30-1.50(6H，m，3xCH2)，1.50-1.70(8H，m，4xCH2)，1.80(2H，m，CH2)，2.10(2H，t，CH2)，2.45(2H，t，CH2)，4.1(2H，dd，賜NH)，5.25(1H，m，C即CO)，5.35(1H，m，OCOC^Ph),7.45(2H，d，Ar)，7.60(5H，m，Ar)，7.80(2H，d，Ar)，10.00-10.10(2H，brs)，10.50(1H，s)。阶段6:环戊酯的皂化将阶段4的树脂(2.5g，以0.94mmol/g加载，2.35mmol)悬浮于MeOH(8.7ml)和THF(8.7ml)。加入2.7NNaOH水溶液(8.8ml，10eq，23.5mmo1)。将混合物振荡36小时。测试切除后的LCMS证实反应完全，m/z528[Nf+H]+。将树脂过滤并用水x2和MeOHx2洗涤，然后通过标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。阶段7:(S)-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-苯基-乙酸(21)将阶段6的树脂(2.5g，以0.94mmol/g加载，2.35mmol)切除并用阶段5中列出的过程进行boc去保护。粗产物(0.40g)通过制备型HPLC纯化得到化合物(21)，其为TFA盐。LCMS纯度100。/。，m/z428[W+H]，NMR(400MHz，CD3OD)，5:1.30(4H，2xCH2)，1.55(4H，2xCH2)，2.00(2H，t，CH2)，2.30(2H，t，CH2)，3.90(1H，s，NHCH2)，4.05(2H，dd，NHQ^),4.95(1H，s，CgPh)，7.35(2H，d，Ar)，7.40(5H,m，Ar)，7.55(2H，d，Ar)。合成化合物(22)和化合物(23)(TC下，在L-苯基甘氨酸(0.227g，1.5mmol)的水(5ml)和二嚼烷(5ml)溶液中加入三乙胺(0.42ml，3.0mmol)，然后缓慢加入4-硝基苯磺酰氯(0.5g，2.3mmol)的二噁烷(5ml)溶液。搅拌45分钟后将反应混合物蒸发至干，重溶于EtOAc并用饱和NaHC03阶段l(S)-(4-硝基-苯磺酰基氨基)-苯基-乙酸溶液(2x20ml)和水(10ml)洗涤。EtOAc层用Na2S04干燥，过滤并蒸发至干。LCMS纯度75%，(未观察到分子离子)产量为0.58g，(76%)。该材料无需任何纯化即可使用。阶段2:(S)-(4-硝基-苯磺酰基氨基)-苯基-乙酸环戊酯(TC时在阶段1的酸(4.32g，12.8mmol)的环戊醇(60ml)溶液中缓慢加入亚硫酰氯(9.3ml，128mmo1)。搅拌反应混合物并在7(TC加热回流2小时。在真空下蒸发除去过量亚硫酰氯，将反应混合物萃入EtOAc，用饱和NaHC03溶液洗涤并用Na2S04干燥，过滤并蒸发至干。用DCM进行快速柱层析纯化得到所需产物(3.6g，70%产率)。LCMS纯度为100%，(未观察到分子离子)。阶段3:(S)-(4-氨基-苯磺酰基氨基)-苯基-乙酸环戊酯室温下，将EtOAc(350ml)中的(S)-(4-硝基-苯磺酰基氨基)-苯基-乙酸环戊酯(5.29g，13.1mmol)和10%Pd/C(5.0g)的混合物在气球压力(balloonpressure)下氢化24小时。通过硅藻土垫滤去Pd/C催化剂。将滤液减压浓縮以得到所需产物(4.54g，92%产率)。LCMS纯度100%，m/z375[1VT+H]+。阶段4:偶联苯胺(anline)将用辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(0.39g，以1.14mmol/g加载)在无水DCM(25ml)中溶胀，并于O'C在氮气下逐滴加入l-氯-WM2-三甲基丙烯胺(0.175ml，1.33mmo1)。将(25ml)溶液，然后加入三乙胺(0.251111，1.76mmo1)。将反应混合物再振荡10分钟。测试切除后的LCMS显示61。/。转化，m/z546[1Vr+H]+。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。树脂在真空下干燥并用于下一步骤。阶段5:(S)-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯磺酰基氨萄-苯基-乙酸环戊酯(22)将阶段4的树脂(1.12g，以1.14mmol/g加载)在2%TFA/DCM(10ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。收集滤液并在室温下减压蒸发。树脂用2%TFA/DCM(10ml)重新处理，20分钟后过滤。合并的滤液在室温下减压蒸发至干以得到残余物。残余物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(22)。LCMS纯度93%，m/z546[M++H]+，&NMR(400MHz，DMSO)，5:1.20-1.68(16H，m，8><CH2)，1.93(2H，t，CH2)，2.33(2H，t，CH2)，4.80(1H，m，C邸CO)，4.81(1H，d，OCOCgPh)，7.27(5H，m，Ar)，7.65(2H，d，Ar)，7.71(2H，d，Ar)，8.67(1H，brs)，8.75(1H，d)，10.24(1H，s)，10.34(1H，s)。阶段6:环戊酯的皂化将阶段4的树脂(1.2g，以1.14mmol/g加载)悬浮于THF(8ml)和甲醇(8ml)并加入2.7M氢氧化钠(5.1ml，13.68mmo1)。将混合物振荡48小时。测试切除后的LCMS证实反应完全，m/z478[NT+H]+。将树脂过滤并用水x2和MeOHx2洗涤，然后通过标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。阶段7:(S)-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯磺酰基氨基]-苯基-乙酸(23)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage59</formula>将阶段6的树脂(1.2g，以1.14mmol/g加载)在2%TFA/DCM(10ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。收集滤液并在室温下减压蒸发。树脂用2%TFA/DCM(10ml)重新处理，20分钟后过滤。合并的滤液在室温下减压蒸发至干以得到残余物。残余物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(23)。LCMS纯度91。/。，m/z478[1Vr+H]+，&NMR(400顧z，MeOD)，S:1.44(4H，m，2xCH2)，1.62-1.74(4H，m，2xCH2)，2.12(2H，t，CH2)，2.34(1H，m，OCOCgPh)，2.41(2H，t，CH2)，7.25(5H，m，Ar)，7.69(2H，d，Ar)，7.72(2H，d，Ar)。合成化合物(24)和化合物(25)(<formula>formulaseeoriginaldocumentpage59</formula>阶段1:(2,3，4,9-四氢-lH-(3-咔啉-6-基氧基)-乙酸甲酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage59</formula>将5-羧基甲氧基色胺(1.248，4.56mmol)、36%甲醛水溶液和MeOH(25ml)的混合物加热回流1.5小时。将反应混合物蒸发至干。依次加入MeOH(50ml)和TMSC1(1.24ml)。继续回流l小时。将反应混合物蒸发至干并不经纯化用于下面的阶段。阶段2:酰胺化MeO将用辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(2.0g，以1.14mmol/g加载，2.28mmo1)悬浮于DCM(40ml)。加入pyBOP(3.56g)，然后加入阶段1的胺(4.56mmol)的DCM溶液(40ml)和DIPEA(3.9ml，22.8mmol)。将反应物室温振荡18小时。测试切除后的LCMS证实反应完全。将树脂过滤，用标准洗涤过程洗涤并充分干燥。阶段3:甲酯的皂化o将阶段2的树脂(2.0g，1.14mmol/g，2.28mmol)悬浮于THF(10ml)和MeOH(10ml)的混合物。在5分钟内加入1.4MNaOH(10ml)。将混合物振荡18小时。测试切除后的LCMS证实反应完全。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。阶段4:与L-苯基甘氨酸环戊酯偶联将阶段3的树脂(2.0g，以1.14mmol/g加载，2.28mmol)悬浮于DCM(30ml)。加入pyBOP(3.56g，6.84mmo1)，然后加入L-苯基甘氨酸环戊酯(2.59g，6.84mmol)和DIPEA(3.9ml，22.8mmo1)。将混合物振荡18小时。测试切除后的LCMS证实反应完全。将树脂过滤，用标准洗涤过程洗涤并真空干燥。阶段5:(SH2-[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2,3，4,9-四氢-lH-(3-咔啉-6-基氧基]-乙酰氨基}-苯基-乙酸环戊酯(24)用2%TFA/DCM(3xl0ml)切除阶段4的树脂(0.8g，以1.14mmol/g加载，0.91mmo1)。滤液在室温下减压蒸发至干以得到油状残余物(200mg)，该物质通过制备型HPLC纯化以得到化合物(24)，其为TFA盐。LCMS纯度95%，m/z619[JVT+H]+，!HNMR(400匿z，固SO)，S:1.05-1.66(16H，m，8xCH2)，1Z79(2H，m，CH2)，2.16-2.31(2H，m，2.41-2.56(2H，m，CH2)，3.60(2H，m，CH2)，4.42(2H，s，CH2)，4.49(2H，s，CH2)，4,93(1H，m，QJOCO)，5.28(1H，m，OCOCgPh)，6.59(1H，d，Ar)，6.65(1H，s，Ar)，7.04(1H，d，Ar)，7.21(5H，m，Ar)，8.57(1H，m)，10.17(1H，s)，10.58(1H，s，Ar)。阶段6:环戊酯的皂化阶段4的树脂(1.0g，以1.14mmol/g加载，1.14mmol)按照阶段3中描述的过程皂化。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage61</formula>阶段7:(SH2-[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4,9-四氢-m-l3-咔啉-6-基氧基]-乙酰氨基}-苯基-乙酸环戊酯(25)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage61</formula>将阶段6的树脂(1.0g，以1.14mmol/g加载，1.14mmol)切除并用阶段5中详细描述的过程纯化。化合物(25):LCMS纯度97。/。，m/z551[M""+H]+，NMR(400MHz，MeOD)，S:1.33-1.49(4H，m，2xCH2)，1.58-1.75(4H，m，2xCH2)，2.06-2.17(2H，m，CH2)，2.51-2.60(2H，m，CH2)，2.70-2.83(2H，m，CH2)，3.85-3.96(2H，m，CH2)，4.61(2H，m，CH2)，4.78(2H，m，CH2)，5.56(1H，s，OCOCgPh)，6.89(1H，m，Ar)，7.00(1H，s，Ar)，7.26(1H，m，Ar)，7.35(5H，m，Ar)。合成图2的化合物，以化合物(26)和化合物(27)为例<formula>formulaseeoriginaldocumentpage61</formula>R=乙基26R=乙基29R-H27R-H30合成化合物(26)和化合物(27)阶段1:(S)-2-(3-硝基-苄基氨基)-3-苯基-丙酸乙酯将3-硝基苄基溴化物(10.0g，46mmol)溶于DMF(180ml)并加入碳酸钾(12.7g，92mmol)和L-苯丙氨酸乙酯盐酸(10.6g，46mmo1)。将反应物室温搅拌17小时，然后蒸发至干。将残余物重溶于EtOAc(150ml)，并用水(3x80ml)洗涤，干燥(^2804)，过滤并浓縮至干。通过快速柱层析(30。/。EtOAc/己垸)纯化后获得产物(3.7g，24%产率)。LCMS纯度86%,m/z329[1Vf+H]+。阶段2:(S)-2-[叔丁氧基羰基-(3-硝基-苄基)-氨基]-3-苯基-丙酸乙酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage62</formula>将阶段1的胺(13.4g，40.9mmol)溶于THF(250ml)，然后加入碳酸钾(8.46g，61.4mmol)和水(150ml)。加入二碳酸二叔丁酯(35.6.163mmol)并将反应混合物在50°C加热18小时。在所得混合物中加入DCM，用0.1MHC1(150ml)、饱和NaHC03水溶液和水(150ml)连续洗涤。将DCM层干燥(Na2S04)，过滤并浓縮至干。通过快速柱层析(5%EtOAc/己垸)纯化后将产物分离(9.4g，54。/。产率)。LCMS纯度95%，m/z428[M++H]+。阶段3:(S)-2-[(3-氨基-节萄-叔丁氧基羰基-氨基]-3-苯基-丙酸乙酯将阶段2的氨基甲酸酯(4.92g，11.5mmol)溶于EtOAc(150ml)，然后加入Pd/C(100/0湿(wet))催化剂(0.8g)并于室温在气球压力下氢化18小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并蒸发至干以得到红色固体(4.0g，89%产率)。LCMS纯度100%，m/z399[M++H]+。阶段4:偶联到树脂将用辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(0.39g，以0.83mmol/g加载)在DMF(15ml)中溶胀并加入PyBOP(1.36g，2.61mmo1)，接着加入DIPEA(1.5ml，8.7mmo1)。将阶段3的苯胺(1.04g，2.61mmol)溶于DCM(15ml)并加到反应混合物中。将反应物室温振荡24小时。测试切除后的LCMS显示86%转化，m/z570[M++H]+。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。阶段5:(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-3-苯基-丙酸乙酯(26)阶段4的树脂(1.3g，以0.83mmol/g加载)在2%TFA/DCM(10ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。滤液在室温下减压蒸发。树脂用2。/。TFA/DCM(10ml)重新处理，20分钟后过滤。合并的滤液在室温下减压蒸发至干以得到油状残余物。使残余物在20%TFA/DCM中静置40分钟。同样在室温下减压蒸发至干后，将粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(26)。LCMS纯度100%，m/z470[M^H]+，iHNMR(400固z，MeOD)，5:1.08(3H，t，CH3)，1.35-1,45(4H，m，2xCH2)，1.60-1.80(4H，m，2xCH2)，2.10(2H，t，CH2)，2.40(2H，t，CH2)，3.13(1H，dd，PhCgH)，3.40(1H，dd，PhC昭)，4.11(2H，q，C压CH3)，4.14-4.22(3H，m)，7.20-7.48(8H，m，Ar)，7.92(1H，s，Ar)。阶段6:皂化将阶段4的树脂(1.4g，以0.83mmol/g加载)悬浮于THF(8.6ml)和甲醇(8.6ml)并加入1.4M氢氧化钠溶液(8.6ml，5.98mmo1)。将混合物振荡24小时，然后测试切除显示83%转化成所需的酸，m/z541[IVf+H]将树脂过滤并用水x2和MeOHx2洗涤，然后通过标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。阶段7:(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-3-苯基-丙酸(27)将阶段6的树脂(1.44g，以0.83mmol/g加载)在2%TFA/DCM(10ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。滤液在室温下减压蒸发。树脂用2%TFA/DCM(10ml)重新处理，20分钟后过滤。合并的滤液在室温下减压蒸发至干以得到油状残余物。使残余物在20。/。TFA/DCM中静置40分钟。在室温下减压蒸发至干后，将粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(27)。LCMS纯度100%，m/z442[VT+H]+，^NMR(400顧z，MeOD)，S:1.35-1.48(4H，m，2><CH2)，1.60-1.78(4H，m，2xCH2)，2.10(2H，t，CH2)，2.40(2H，t，CH2)，3.20(1H，dd，PhC邸)，3.28(1H，dd，PhCHg),3.90(1H，t，OCOCg)，4.14(2H，m)，7.15(1H，d，Ar)，7.26(6H，m，Ar)，7.51(1H，d，Ar)，7.73(lHs，Ar)。以下化合物按照为化合物(26)和化合物(27)描述的方法制备(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基卜3-苯基-丙酸环戊酯(28)LCMS纯度100%，m/z510[M++H]+，!HNMR(400薩z，MeOD)，S:1.00-1.61(16H，m，8xCH2)，1.90(2H，t，CH2)，2.20(2H，d，CH2)，2.90(1H，dd，PhC昭)，3.20(1H，dd，PhCHH)，4.00-4.11(3H，m)，4.91(1H，m)，7.00-7.25(8H，m,Ar)，7.75(1H，s，Ar)。(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨萄-节基氨基卜4-苯基-丁酸乙酯(29)LCMS纯度100%,m/z484pvT+H]+，'HNMR(400固z，MeOD)，S:1.23-1.29(7H，m，CH3，2xCH2)，1.53(2H，t,CH2)，1.62(2H，t，CH2)，1.99(2H，t，CH2)，2.11-2.16(2H，m，CH2)，2.28(2H，t，CH2)，2.53-2.61(1H，m，CH)，2.65-2.76(1H，m，CH)，3.80-3.90，(1H，m，CHC02Et),4.05(2H，s，CH2)，4.21(2H，q，CH2)，7.05-7.15(4H，m，Ar)，7.15-7.22(2H，m，Ar)，7.25-7.39(2H，m，Ar)，7.75(1H，s，Ar)。(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-节基氨基-4-苯基-丁酸(30)LCMS纯度100%,m/z456[M++H]+，'HNMR(400MHz，MeOD)，5:1.27-1.32(4H，m，2xCH2)，1.53(2H，t，CH2)，1.62(2H，t，CH2)，1.99(2H，t，CH2)，2.11-2.16(2H，m，CH2)，2.29(2H，t，CH2)，2.57-2.64(1H，m，CH)，2.69-2.77(1H，m，CH)，3.84-3.87(1H，m，CHC02H)，4.12(2H，q，CH2)，7.09-7.11(4H，m，Ar)，7.16-7.20(2H，m，Ar)，7.27-7.35(2H，m，Ar)，7.78(1H，s，Ar)。(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨萄-节基氨萄-4-苯基-丁酸环戊酯(31)LCMS纯度100%，m/z524[Nf+H]+，'HNMR(400函z，MeOD)，S:1.20-1.35(4H，m)，1.45-1.62(10H，m)，1.85(2H，m)，2.00(2H，t，CH2)，2.10(2H，m)，2.28(2H，t，CH2)，2.55(1H，m)，2.68(1H，m)，3.88(1H，t，OCOC^NH),4.11(2H，s，CH2Ph)，5.24(1H，m)7.02-7.12(4H，m，Ar)，7.18(2H，m，Ar)，7.30(2H，m，Ar)，7.80(1H，s，Ar)。(S)-3-叔丁氧基-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨萄-丙酸乙酯(32)LCMS纯度90%，m/z466[IVT+Hf,!HNMR(400MHz，MeOD)，S:1.25(9H，s，C(CH3)3)，1.35(3H，t，CH2Qi3)，1.35-1.45(4H，m，2xCH2)，1.62-1.76(4H，m，2xCH2)，2.12(2H，t,CH2)，2.40(2H，t，CH2)，3.89(1H，m)，3.98(1H，m)，4.20-4.40(5H，m)，7.25(1H，d，Ar)，7.39-7.50(2H，m，Ar)，7.90(1H，s，Ar)。(S)-3-叔丁氧基-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-节基氨萄-丙酸(33)LCMS纯度86%，m/z438CVT+H]+，！HNMR(400固z，MeOD)，5:1.20(9H，s，C(CH3)3)，1.38(4H，m，2xCH2)，1.57-1.75(4H，m，2xCH2)，2.10(2H，t，CH2)，2.39(2H，t，CH2)，3.78-3.85(3H，m)，4.26(2H，s，CH2Ph)，7.21(1H，d，Ar)，7.39(1H，t，Ar)，7.50(1H，d，Ar)，7.80(1H，s，Ar)。(S)-3-叔丁氧基-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-节基氨萄-丙酸环戊酯(34)LCMS纯度94%，m/z506[VT+H]+，HNMR(400MHz,MeOD)，S:1.25(9H，s'C(C潟3)，1.33-1.50(4H，m，2><CH2)，1.60-2.00(12H，m)，2.13(2H，t，CH2)，2.42(2H，t，CH2)，3.83-4.00(2H，m)，4.18(1H，m)，4.28(2H，s，CH2Ph)，5,35(1H，m)，7.25(1H，m，Ar)，7.45(2H，m，Ar)，7.卯(1H，s，Ar)。(S)-3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基-苯基-乙酸叔丁酯(35)LCMS纯度97%，m/z484[M^H]+，！H雨R(400画z，MeOD)，5:1.30(13H，m，2xCH2，C(Qi3)3)，1.45-1.65(4H，m，CH2x2)，1.93-2.05(2H，m，CH2)，2.20-2.40(2H，m，CH2)，3,99(2H，q，CH2)，4.65-4.95(1H，m，CH，掩蔽的信号)7.05(1H，d，Ar)，7.25-7.33(2H，m，Ar)，7.35-7.50(5H，m，Ar)，7.75(1H，s，Ar)。(SH3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-节基氨萄-苯基-乙酸环戊酯(36)LCMS纯度100%，m/z496[]VT+H]+，^NMR(400画z，MeOD)，5:1.30-1.70(16H，m，8xCH2)，2.00(2H，t，CH2)，2.30(2H，t，CH2)，4.05(2H，dd，Q^NH),5.00(1H，m，OCOCHPh)，5.15(1H，m，CgOCO)，7.05(1H，m，Ar)，7.30(2H，m，Ar)，7.40(5H，m，Ar)，7.75(1H，m，Ar)。(S)-3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基-苯基-乙酸(37)LCMS纯度100%，m/z428[MVH]+，'HNMR(400MHz,MeOD)，S:1.20-1.35(4H，m，2xCH2)，1.50-1.65(4H，m，2xCH2)，2.00(2H,m，CH2)，2.30(2H，m，CH2)，4.00(2H，dd，CH^NH),4.卯(1H，m，OCOCHPh)，7.05(1H，m，Ar)，7.25-7.50(7H，m，Ar)，7.70(1H，m，Ar)。(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-4-甲基-戊酸(38)LCMS纯度91。/。，m/z408[M^+H]+，'HNMR(400MHz，MeOD)，S:0.78(3H，d，J=6.6Hz，CH3)，0.84Hz(3H，d，J=6.6Hz,CH3)，1.26-1.40(6H，m，烷基)，1.49-1.70(5H，m，CH+2xCH2)，1.95(2H，t，J=7.32，CH2)，2.25(2H，t，J=7.36，CH2)，3.00(1H，t，J=6.88Hz，NHCgCO),3.42(1H，d，J=12.7Hz，CH)，3.68(1H，d,J=12.5Hz，CH),7.00(1H,d，J=7.6Hz，Ar)，7.15(1H，t，J=7.8Hz，Ar)，7.30(1H，s.Ar)，7.47(1H，brd，Ar)(S)-2-[M7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-节基氨基-4-甲基-戊酸环戊酯(39)LCMS纯度100。/。，m/z476[M""+H]+，'HNMR(400固z，MeOD)，5:0.85-0.95(6H，2xd，2xCH3)，1.30(4H，m，2xCH2)，1.50-1.70(13H，m，烷基)，1.75(2H，m，CH2)，2.00(2H，t，CH2)，2.30(2H，t，CH2)，3.90(1H，NHCgCO)，4.10(2H，q，CH2)，5.25，(1H，m，CH)，7.10(1H，d，Ar)，7.30(2H，m)，7.80(1H，s，Ar)合成化合物(40)和化合物(41)4041阶段l:(S)-(2-硝基-苄基氨基)-苯基-乙酸环戊酯将DMF(300ml)中的2-硝基苄基溴化物(15g，69.4rnrno1)、L-苯基甘氨酸环戊酯甲苯磺酸盐(27.2g，69.4!!111101)和碳酸钾(19.2§，138.8mmol)的混合物室温搅拌18小时。反应混合物用EtOAc(300ml)稀释并用水(3x200ml)洗涤。将EtOAc层分离，干燥(Na2S04)，过滤并浓縮至干得到橙色油状物。分离出24克粗产物。LCMS纯度81。/t)，m/z355[M"+H]+。该产物无需进一步纯化即可使用阶段2:(SH叔丁氧基羰基-(2-硝基-节基)-氨基]-苯基-乙酸环戊酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage68</formula>在(S)-(2-硝基-苄基氨基)-苯基-乙酸环戊酯(24.4g，69.1mmol)的THF(150ml)溶液中加入K2C03(7.6g，69.1mmo1)，然后加入二碳酸二叔丁酯(30.1g，138.1mmo1)。加水(150ml)，再加入二碳酸二叔丁酯(45.1g，206.6mmo1)，并将反应物室温搅拌8天。将反应混合物蒸发至干。残余物重溶于EtOAc(300ml)，用0.1MHC1(150ml)、饱和NaHC03水溶液和水(150ml)洗涤。将EtOAc层干燥(Na2S04)，过滤并浓縮至干得到黄色油状物。通过柱层析(20%EtOAc/己垸)纯化后获得澄清的黄色油状产物(15g，48%产率)。「段3:(S)-[(2-氨基-苄基)-叔丁氧基羰基-氨基]-苯基-乙酸环戊酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage68</formula>室温下，将EtOAc(130ml)中的阶段2的氨基甲酸酯(4.44g，9.78mmol)和10%Pd/C(0.7g)的混合物在气球压力下氢化18小时。通过硅藻土垫滤去Pd/C催化剂。将滤液减压浓縮以得到白色固体(4.25g)。LCMS纯度100。/。，m/z425[M^H]+，阶段4:偶联阶段3的苯胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage68</formula>将用辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(1.6g，以0.83mmol/g加载)在无水DCM(100ml)中溶胀。(TC在氮气下加入l-氯-A^-2-三甲基丙烯胺(Ghosez试剂)1(0.56ml，3.3mmo1，3eq)。使混合物回复室温并温和振荡1-2小时。在20分钟内分批加入阶段3的苯胺(1.4g，3.3mmo1，3叫)。加入Et3N(0.76ml，4.4mmo1，4eq)。将混合物振荡1小时。测试切除后的LCMS显示有97n/。转化，m/z596[M++H]+。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。_1.Ghosez等，J.C,S.Chem.Comm.,1979，1180。阶段5:(S)-[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-苯基-乙酸环戊酯(40)将阶段4的树脂(1.34g，以0.83mmol/g加载)在2°/。TFA/DCM(10ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。收集滤液并在室温下减压蒸发。树脂用2%TFA/DCM(10ml)重新处理，20分钟后过滤。合并的滤液在室温下减压蒸发至干以得到残余物。使残余物在20。/。TFA/DCM中静置40分钟。同样在室温下减压蒸发至干后，将粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物40，其为TFA盐，LCMS纯度100%，m/z496[M十+H]+，'HNMR(400MHz，MeOD)，S:1.40-2.00(16H，m,8xCH2)，2.15(2H,m，CH2)，2.45(2H，m，CH2)，3.95(1H，d，Qj^NH),4.20(1H，d，CH^NH)'5.20(1H，m，OCOCHPh)，5.35(1H，m，CgOCO),7.25(1H，m，Ar)，7.40(1H，m，Ar)，7.50-7.60(7H，m，Ar)。阶段6:皂化将阶段4的树脂(2.0g，以0.83mmol/g加载，2.35mmol)悬浮于MeOH(6.1)和THF(6.1ml)。加入2.7NNaOH(水溶液，6.1ml)。将混合物振荡5天。测试切除后的LCMS证实反应完全，m/z528[MT+H]+。将树脂过滤并用水x2和MeOHx2洗涤，然后通过标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。阶段7:(S)-[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-节基氨蜀-苯基-乙酸化合物(41)将阶段6的树脂(2.0g，以0.83mmol/g加载)切除并用阶段5中列出的方法进行boc去保护。粗产物通过制备型HPLC纯化得到化合物(41)，其为TFA盐。LCMS纯度98%，m/z428[M++H]+，'HNMR(400固z，MeOD)，5:1.25-1.35(4H，m，2xCH2)，1.50-1.65(4H，m，2xCH2)，2.00(2H，m，CH2)，2.30(2H，m，CH2),3.80(1H，d，C1^NH)，4.10(1H，d，Q^NH)，5.00(1H，m，OCOCgPh)，7.10(1H，m，Ar)，7.30(1H，m，Ar)，7.40-7.50(7H，m，Ar)。合成化合物(42)和化合物(43)阶段1:1,3，4,9-四氢-P-咔啉-l，2-二羧酸2-苄基酯将1，2,3,4-四氢咔啉-l-羧酸(5g，23.1mmol)在二噁垸(25ml)和2MNaOH(23ml，46mmol)中的溶液冷却至0'C。缓慢加入氯甲酸苄酯(3.95ml，27mmo1)。室温搅拌1小时后再加入氯甲酸苄酯(1.4ml，9.5mmo1)。2.5小时后用醚洗涤反应混合物。将含水层酸化至pH2并用DCM萃取，干燥(MgS04)，过滤并蒸发至干，得到第一批黄色固体，其LCMS纯度为79。/。，m/z351[!VT+H]+。最初的一批无需进一步纯化即可使用。将醚层浓縮后获得第二批材料从而得到进一步的粗产物。该粗材料通过快速层析纯化，用DCM到20%2M甲醇NH3、80%DCM洗脱，得到进一步的Cbz-保护的化合物(产率49。/。)，其LCMS纯度为82。/。，m/z351[Nf+H]+。阶段2:1-(甲氧基-甲基-氨甲酰基)-1,3,4,9-四氢-P-咔啉-2-羧酸苄基酯^^^^N-cbzHO6—将1,3,4,9-四氢-(3-咔啉-1,2-二羧酸2-苄基酯(3g，8.4mmol)溶于无水DCM(30ml)并加入三乙胺(5.22ml，37.8mmo1)。在此溶液中加入HOBt(2.848g，21.4mmol)、EDCI(4.08g，21.4mmol)和N，O-二甲基羟胺盐酸盐(1.86g，19丄mmo1)。室温搅拌2小时后将反应混合物蒸发至干，重溶于EtOAc并用饱和NaHC03溶液(2x100ml)和水(50ml)洗涤。将EtOAc层干燥(Na2S04)，过滤并蒸发至干。通过柱层析纯化，用DCM到3。/o甲醇/DCM洗脱，得到所需的Weinreb酰胺(产率40%)。LCMS纯度85%，m/z394[VT+H]+。阶段3:l-甲酰-l,3,4,9-四氢-P-咔啉-2-羧酸苄基酯氮气下将1,3,4,9-四氢-卩-咔啉-l,2-二羧酸2-苄基酯(3.7mg，9.4mmol)的THF(100ml)溶液冷却至-78"C。在2小时内加入1.5MDIBAL的甲苯溶液(31.2ml，47mmo1)。搅拌4小时后用甲醇和水淬灭反应混合物，萃入EtOAc并用稀HCl水溶液洗涤。有机层用Na2S04干燥，过滤并蒸发至干。LCMS纯度50。/。，m/z335[NT+H]+。该材料无需进一步纯化便可用于下一阶段。阶段4:l-([((S)-环戊氧基羰基-苯基-甲基)-氨基]-甲基W,3,4,9-四氢-卩-咔啉-2-羧酸苄基酯将IPA(100ml)中的l-甲酰-l,3,4，9-四氢-P-咔啉-2-羧酸苄基酯(lg，3mmo1)、乙酸钠(0.68g，87.4mmo1)、L-苯基甘氨酸环戊酯甲苯磺酸盐(1.16g，3mmo1)、氰基硼氢化钠(0.26g，4.2mmol)和分子筛的混合物室温搅拌1小时。将反应混合物蒸发至干，重溶于EtOAc并依次用饱和NaHC03溶液和盐水洗涤。将EtOAc层用MgS04干燥，过滤并蒸发至干。LCMS纯度为39。/。，m/z538[VT+H]+。粗材料无需进一步纯化便可用于下一阶段。阶段5:l-U叔丁氧基羰基-((S)-环戊氧基羰基-苯基-甲萄-氨基]-甲基卜1,3,4,9，氢-P-咔啉-2-羧酸苄基酯HO边搅拌边在阶段4的胺(1.08g，2.0mmol)的THF(20ml)溶液中加入碳酸钾(0.42g，3.0mmol)和二碳酸二叔丁酯(1.75g，8.0mmo1)。将反应混合物在50。C搅拌96小时，冷却至室温，用DCM(50ml)稀释并用O.IMHC1溶液(25ml)、饱和NaHC03溶液(2x25ml)和水(15ml)洗涤。将DCM层用Na2S04干燥，过滤并蒸发至干。用10%EtOAc/庚垸通过柱层析纯化得到产物(0.89g70。/。产率)。LCMS纯度为79%，m/z638[M^H]+。阶段6:(S)-[叔丁氧基羰基-(2,3,4,9-四氢-lH-P-咔啉-l-基甲基)-氨基]-苯基-乙酸环戊酯氢气下，在存在10%Pd/C(0.4g)时将阶段5的二氨基甲酸酯(0.5g，0.78mmol)的乙醇(40ml)溶液在气球压力下搅拌2小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并蒸发至干得到所需产物(0.35g，90%)，91。/o纯度(LCMS)，m/z504[]VT+H]+。阶段7:偶联阶段6的胺将用辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(703mg，以0.83mmol/g加载)在DCM(12ml)中溶胀。加入PyBOP(912mg，1.75mmo1)，然后加入阶段6的胺(325mg，0.64mmol)和DIPEA(1.01ml，5.8mmo1)。将反应混合物振荡18小时。测试切除后材料的LCMS显示80%转化。m/z675[]VT+H]+。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。阶段8:(SH[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2,3,4,9-四氢-lH-P-咔啉-l-基甲基]-氨基卜苯基-乙酸环戊酯(42)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage73</formula>将阶段7的树脂(135mg，以0.83mmol/g加载)在2%TFA/DCM(10ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。滤液在室温下减压蒸发。树脂用2%TFA/DCM(10ml)重新处理，20分钟后过滤。合并的滤液在室温下减压蒸发至干以得到油状残余物。使残余物在20。/。TFA/DCM中静置40分钟。同样在室温下减压蒸发至干后，将粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(42)，其为TFA盐，LCMS纯度91%，m/z575[M十+H]+，'HNMR(400画z，MeOD)，5:1.30-1.70(16H，m，8xCH2)，2.00(2H，m，CH2)，2.50(2H，m，CH2)，2.75(2H，m，CH2)，3.30-3.50(2H，m，CH2)，4.15(1H，m，CH2CH)，4.80(2H，m，CgNH,掩蔽的信号)，5.25(1H，m，CgOCO),6.00(1H，m，OCOQiPh)，6.90(1H，m，Ar)，7.00(1H，m，Ar)，7.20(IH，m，Ar)，7.30(IH，m，Ar)，7.45(5H，m，Ar)。阶段9:环戊酯的皂化<formula>formulaseeoriginaldocumentpage73</formula>将阶段7的树脂(395mg，以0.83mmol/g加载)悬浮于THF(1.5ml)和甲醇(1.5ml)并加入1.4M氢氧化钠水溶液(1.17ml，1.6mmol)。将混合物振荡8天。测试切除显示86%转化成酸，m/z607[M++H]。将树脂过滤并用水x2和MeOHx2洗涤，然后通过标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。阶段10:(SH[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2,3，4,9-四氢-lH-P-咔啉-l-基甲基]-氨基卜苯基-乙酸(43)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage73</formula>将阶段9的树脂(100mg，以0.83mmol/g加载)切除并用为化合物(42)列出的过程进行boc去保护。通过制备型HPLC纯化得到化合物(43)，其为TFA盐，LCMS纯度96%，m/z507[M""+H]+，'HNMR(400顧z，MeOD)，S:1.25-1.40(4H，m，2xCH2)，1.50-1.65(4H，m，2xCH2)，2.00(2H，m，CH2)，2.50(2H，m，CH2)，2.70(2H，m，CH2)，3.40(2H，m，CH2)，4.15(1H，m，CH2Cg)，4.80(2H，m，C]^NH，掩蔽的信号)，6.00(1H，m，OCOCHPh)，6.90(1H，m，Ar)，7.00(1H，m，Ar)，7.20(1H，m，Ar)，7.30-7.50(6H，m，Ar)。合成图3的化合物，以化合物(44)和化合物(45)为例r=乙基50r=环戊基53r二环戊基51r=h.54r=hs2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage75</formula>制备结构单元h-l结构单元hTMSCIMeOH将(S)-l,2,3，4-四氢异喹啉-3-羧酸(10g，56mmol)、TMSCI(39ml，310mmol)和甲醇(500ml)—起回流(在7(TC)2小时。将反应混合物蒸发至干，LCMS分析表明100%转化成(S)-l,2,3,4-四氢-异喹啉-3-羧酸甲酯，m/z192[IvT+H]+。结构单元iJLTMSCI1zIj!jHMeOHVnHHCI将DL-脯氨酸(10g，87mmol)、TMSCI(51ml，430mmol)和甲醇(500ml)—起回流2小时(在7(TC)。将反应混合物蒸发至干，LCMS分析显示100%转化成所需产物吡咯垸-2-羧酸甲酯，m/z130[1Vr+H]+。结构单元J阶段1和2将(R)-2-Fmoc-l，2，3,4-四氢去甲哈尔满(norharmane)-3-羧酸(2.0g，9.25mmol)加入TMSCl(6ml，47.17mmol)的甲醇(100ml)溶液并加热回流2小时。将反应混合物蒸发至干以得到1.7g产物(LCMS显示100%转化，m/z453[VT+H]+)。用20%哌啶的DCM溶液(100ml)处理阶段l的酯(1.7g)30分钟以有效除去fmoc。将粗制反应混合物蒸发至干，溶于DCM并用饱和NaHC03溶液洗漆。将DCM层分离，干燥(Na2S04)，过滤并浓縮至干。用3%MeOH/DCM通过柱层析纯化以得到(S)-2，3，4,9-四氢-lH-p-咔啉-4-羧酸甲酉旨。LCMS100%，m/z231[Nf+H]+。结构单元KO3-氨基苯甲酸甲酯获自市售原料结构单元Lo阶段l边搅拌边在盐酸色胺(3.0g，15.3mmol)的水(200ml)溶液中加入乙醛酸单水合物(1.51g，16.4mmol)的水(10ml)溶液。加入KOH(0.827g，14.7mmol)的水(10ml)溶液。将反应混合物室温搅拌1小时，之后发生随时间沉淀。减压过滤后收集白色沉淀并用水洗涤以得到2，3,4，9-四氢-lH-(3-咔啉-l-羧酸，产量为1.9g(58%);m/z217[IvT+H]+。阶段21,2,3,4-四氢-(3-咔啉-l-羧酸(7.4g)的MeOH(250ml)溶液用HC1气体饱和20分钟。将反应混合物在室温温和搅拌18小时。反应混合物再用HC1气体处理并再搅拌18小时。反应完成后将混合物真空浓縮以得到结构单元L，LCMS纯度95。/。，m/z231[ivT+H]+。产物(2,3,4,9-四氢-lH-p-咔啉-l-羧酸甲酯)无需进一步纯化即可使用。合成图3列出的化合物，以化合物(44，R-环戊基)和化合物(45，R-H)为例0H阶段l:将胺加载到树脂上o将用辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(6.6g，以0.83mmol/g加载)在无水DCM(65ml)中溶胀。加入PyBOP(8.6g，16.43mmo1)、胺结构单元A(3.7g，16.43mmol)和DIPEA(9.5ml，58.4mmo1)。将反应物室温振荡24小时。测试切除材料的LCMS显示反应完全。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。阶段2:甲酯的皂化O将结合树脂的阶段1的酯(6.95g，以0.83mmol/g加载)悬浮于THF(25ml)和甲醇(25ml)。加入1.4M的氢氧化钠水溶液(25ml)。将混合物振荡48小时，24小时后再加入氢氧化钠(25ml)。测试切除材料的LCMS显示65。/。转化成酸。m/z349[IvT+H]+。将树脂过滤并用水x2和MeOHx2洗涤，然后通过标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。阶段3:与L-苯基甘氨酸环戊酯偶联<formula>formulaseeoriginaldocumentpage78</formula>在无水DCM(25ml)中溶胀结合树脂的阶段2的羧酸(2.2g，以0.83mmol/g加载)。加入PyBOP(2.85g，5.48mmo1)、L-苯基甘氨酸环戊酯甲苯磺酸盐(2.14g，5.48mmo1)和DIPEA(3.17ml，18.3mmo1)。将混合物室温振荡24小时。测试切除后的LCMS显示52%转化，m/z550[1Vr+H]+。将树脂过滤并用标准洗涤过程洗涤。树脂在真空下干燥。阶段4:(S)-U(S)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-l,2,3，4-四氢-异喹啉-3-羰基]-氨基)-苯基-乙酸环戊酯(44)将阶段3的树脂(2.2g，以0.83mmol/g加载)在2%TFA/DCM(10ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。收集滤液并在室温下减压蒸发。树脂用2%TFA/DCM(10ml)重新处理，20分钟后过滤。合并的滤液在室温下减压蒸发至干以得到残余物。残余物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(44)，其为TFA盐。LCMS纯度95%，m/z550[M+十H]+，'HNMR(400画z，MeOD)，5:1.12-1.75(16H，m，8xCH2)，1.92-2.02(2H，m，CH2)，2.09-2.30(1H，m)，2.48(1H，m)，3.10(2H，m，CH2)，4.58-4.66(2H，m，CH2)，4.82(1H，m)，5.04(1H，m)，5.20(1H，s，OCOCHPh)，6.95-7.20(9H，m，Ar)。阶段5:环戊酯的皂化将阶段3的树脂(1.3g，1.13mmol)悬浮于THF(4.6ml)和甲醇(4.6ml)。加入1.4M的氢氧化钠水溶液(4.6ml)。将混合物振荡24小时。测试切除材料的LCMS证实转化成所需的酸。将树脂过滤并用水x2和MeOHx2洗涤，然后通过标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。阶段6:(SH[(S)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-l,2,3，4-四氢-异喹啉-3-羰基]-氨基)-苯基-乙酸(45)将阶段5的树脂(1.3g，以0.83mmol/g加载)在2%TFA/DCM(10ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。收集滤液并在室温下减压蒸发。树脂用2%TFA/DCM(10ml)重新处理，20分钟后过滤。合并的滤液在室温下减压蒸发至干以得到残余物。残余物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(45)。LCMS纯度96%，m/z482[]VT+H]+，^NMR(400固z，MeOD)，S:1.12-1.38(4H，m，2xCH2)，1.45-1.61(4H，m，CH2)，1.98(2H，m，CH2)，2.10-2.58(2H，m，CH2)，3.04-3.20(2H，m，CH2)，4.48-4.65(2H,m)，4.85(1H，m)，5.20(1H，m)，6.92-7.25(9H，m，Ar)。以下化合物按照为化合物(44)和化合物(45)描述的方法制备(SH[(S)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-l，2，3，4-四氢-异喹啉-3-羰基-氨基r苯基-乙酸乙酯(46)使用结构单元HLCMS纯度97%，m/z510[M^H]+，'HNMR(400固z，MeOD)，S:1.19(3H，t，CH3)，1.32-1.48(4H，m，2xCH2)，1.54-1.73(4H，m，2xCH2)，2.02-2.15(2H，m，CH2)，2.50-2.70(2H，m，CH2)，3.10-3.30(2H，m，CH2)，4.10(2H，m，CH2)，4.70(2H，m)，4.95(1H，m)，5.35(1H，s，OCOCgPh)，7,10-7,40(9H，m，Ar)。(8)-2-{[(8)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-1，2，3，4-四氢-异喹啉-3-羰基-氨基}-3-苯基-丙酸乙酯(47)使用结构单元HLCMS纯度100。/。，m/z524[VT+H]+，'HNMR(400廳z，MeOD)，5:1.20(3H，m，CH3)，1,30-1.49(4H，m，2xCH2),1.55-1.70(4H，m，CH2)，2.10(2H，m，CH2)，2.60(2H，m)，2.88-3.25(4H，m)，4.08-4.20(2H，m，CH2)，4.45-4.62(2H，m)，4.75(IH，m)，5.03(1H，m)，7.09-7.32(9H，m，Ar)。，(8)-2-{[(8)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-1，2，3，4-四氢-异喹啉-3-羰萄-氨基}-3-苯基-丙酸(48)使用结构单元HLCMS纯度100%,m/z564[ivT+Hf,!HNMR(400顧z，MeOD)，5:1.25-1.85(16H，m，8xCH2)，2.10(2H，m，CH2)，2.55(2H，t，CH2)，2.85-3.20(4H，m)，4.40-4.60(2H，m)，4.75(1H，m)，4.95-5.15(2H，m)，7.05-7.30(9H，m，Ar)。(8)-2-{[(8)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-1，2，3，4-四氢-异喹啉-3-羰基-氨基}-3-苯基-丙酸(49)使用结构单元HLCMS纯度100%，m/z496[M"+H]+，'HNMR(400固z，MeOD)，5:1.10-1.31(4H，m，2xCH2)，1.40-1.55(4H，m，2xCH2)，1.98(2H，m，CH2)，2.43(2H，m，CH2)，2.75-3.10(4H，m)，4.30-4.75(3H，m)，4.90(1H，m)，6.90-7.15(9H，m，Ar)。(S)-2-U(S)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-1，2,3，4-四氢-异喹啉-3-羰基-氨基}-4-甲基-戊酸乙酯(50)使用结构单元HLCMS纯度98%,m/z490[lVr+H]+，'HNMR(400固z，MeOD)，5:0.60(1H，m，CH)，0.70-0.85(6H，m，2xCH3)，1.25(3H，t，CH2賜)，1.38-1.65(10H，m，5xCH2)，2.10(2H，m，CH2)，2.60(2H，m，CH2)，3.20(2H，m，CH2)，4.10(2H，q，Ci^CH3)，4.35(1H，m，CH)，4.70-4.80(2H，m，CH2)，4.95(1H，m，CH)，7.23-7.25(4H，m，Ar)。(8)-2-{(8)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-1，2，3，4-四氢-异喹啉-3-羰基-氨基}-4-甲基-戊酸环戊酯(51)使用结构单元HLCMS纯度96。/。，m/z530pvT+H]+，^NMR(400應z，MeOD)，S:0.75(3H，d，CH3)，0.88(3H，d，CH3)，1.30-1.90(19H，m)，2.10(2H，t，CH2)，2,60(2H，m，CH2)，3.15-3.30(2H，m，CH2)，4.30(1H，m)，4.65-4.85(2H，m)，4.95(1H，m)，5.10(1H，m)，7.15-7.28(4H，m，Ar)。(8)-2-{[(8)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-1，2，3，4-四氢-异喹啉-3-羰基]-氨基}-4-甲基-戊酸乙酯(52)使用结构单元HLCMS纯度1000/0，m/z462[]VT+H]+，'HNMR(400MHz，MeOD)，S:0.60(1H，m，CH)，0.70-0.85(6H，m，2xCH3)，1.38-1.65(10H，m，5xCH2)，2.10(2H，m，CH2)，2.40-2.60(2H，m，CH2)，3.20(2H，m，CH2)，4.35(1H，m，CH)，4.70-4.80(2H，m，CH2)，4.95(1H，m，CH，掩蔽的信号)，7.23-7.25(4H，m，Ar)。(8)-{[1-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-吡咯垸-2-羰基-氨基}-苯基-乙酸环戊酯(53)使用结构单元ILCMS纯度100%，m/z488[!VT+H]+，^NMR(400顧z，MeOD)，5:1.30-2,45(24H，m)，3.50-3.70(2H，m，CH2)，4.55(1H，m，CH)，5.18(1H，m，CH)，5.40(1H，m，CH)，7.40(5H，m，Ar)。(SH[l-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-吡咯垸-2-羰基-氨基卜苯基-乙酸(54)使用结构单元ILCMS纯度90%，m/z420[M++H]+，^NMR(400MHz,MeOD)，5:1.20-1.20(4H，m，2xCH2)，1.45-1.56(4H，m，CH2)，1.75-2.35(8H，m)，3.35-3.60(2H，m)，4.45(1H，m)，5.35(1H，m)，7.18-7.35(5H，m，Ar)。(S)-2-Ul-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-吡咯垸-2-羰基-氨基P-苯基-丙酸乙酯(55)使用结构单元ILCMS纯度100%，m/z462[M++H]+，^NMR(400固z，MeOD)，S:1.20-2.20(19H，m)，2.94-3.20(2H，m，CH2Ph)，3.48-3.69(2H，m，CJ^N),4.10-4.25(2H，m，CS2CH3)，4.33-4.49(1H，m)，4.60-4.79(1H，m)，7.20-7.35(5H，m，Ar)。(S)-2-Ul-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-吡咯垸-2-羰基卜氨基〉-3-苯基-丙酸环戊酯(56)使用结构单元ILCMS纯度100。/。，m/z502[M++H]+，'HNMR(400画z，MeOD)，5:1.27-2.23(22H，m，llxCH2)，2.35(2H，m，CH2)，2.97-3.27(2H，m，CH2Ph)，3.53-3.63(2H，m，CH2)，4.35-4.45(1H，m，CH)，4.60-4.70(1H，m，CgCH2Ph)，5.10-5.20(1H，m，CgOCO)，7.23-7.30(5H，m，Ar)。(S)-2-Ul-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-吡咯垸-2-羰基]-氨基)-3-苯基-丙酸(57)使用结构单元ILCMS纯度90。/。，m/z434[JVT+H]+，！HNMR(400画z，MeOD)，5:1.30-1.41(4H，m，2xCH2)，1.55-1.69(4H，m，2xCH2)，1.80-1.90(8H，m)，2.91-3.26(2H，m)，3.45-3.70(2H，m)，4.40(1H，m)，4.72(1H，m)，7.16-7.30(5H，m，Ar)。(S)-2-U(S)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-lH-p-咔啉-4-羰基-氨基)-3-苯基-丙酸环戊酯(58)使用结构单元JLCMS纯度为100%,m/z563[Nf+H]+，^NMR(400顧zMeOD)，S:1.10-1.30(3H，m，CH3)，1.35-1.80(8H，m，4xCH2)，2.15(2H，m，CH2)，2.4-2.65(2H，m，CH2)，2.95-3.20(3H，m)，4.0-4.2(2H，mC,)，4.3-5.0(4H，m掩蔽的信号)，5.05-5.20(1H，mCgOCO)，6.90-7.50(9H，m，Ar)。(S)-2-U(S)-2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2,3,4，9-四氢-lH-P-咔啉-4-羰基-氨基)-3-苯基-丙酸(59)使用结构单元JLCMS纯度为100%，m/z535[M++H]+，&NMR(400固zMeOD)，5:1.20-1.40(4H，m，2xCH2)，1.45-1.65(4H，m，2xCH2)，1.90-2.10(2H，m，CH2)，2.30-2.50(2H，m，CH2)，2.70-3.15(3H，m)，4.2-4.9(4H，m掩蔽的信号)，5.00(1H，mCgOCO)，6.75-7.40(9H，m，Ar)(S)-P-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯甲酰氨基]-苯基-乙酸环戊酯(60)使用结构单元KLCMS纯度100。/。，m/z510[1VT+H]+，'HNMR(400MHz，MeOD),5:1.28(4H，m，2xCH2)，1.40-1.80(12H，m，6xCH2)，1.98(2H，t，CH2)，2,27(2H，t，CH2)，5.12(1H，m)，5.50(1H，s，OCOCgPh),7.21-7.32(4H，m，Ar)，7.36(2H，m，Ar)，7,45(1H，d，Ar)，7.61(1H，d，Ar)，7.90(1H，s，Ar)。(S)-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯甲酰氨基-苯基-乙酸(61)使用结构单元KLCMS纯度1000/。，m/z442pyT+H]+，iHNMR(400画z，MeOD)，5:1.21-1.34(4H，m，2xCH2)，1.48-1.63(4H，m，2xCH2)，1.98(2H，t，CH2)，2.26(2H，t，CH2)，5.55(1H，s，OCOCgPh)，7.20-7.32(4H，m，Ar)，7.40(2H，d，Ar)，7.48(1H，d，Ar)，7.64(1H，d，Ar)，7,89(1H，s，Ar)。(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯甲酰氨萄-4-甲基-戊酸环戊酯(62)使用结构单元KLCMS纯度93。/。，m/z490[M^H]+，'HNMR(400顧z，MeOD)，5:0.84(3H，d，CH(Cii2))，0.88(3H，d，CH(CHi))，1.20-1.40(4H，m，2xCH2)，1.40-1.85(15H，m，6xCH2，CH(CH3)2，賜CH(CH3)2)，2.00(2H，t，CH2)，2.25(2H，t，CH2)，4.45(1H，m，OCOCHCH2)，5.10(1H，m，C即CO)，7.25(1H，mAr)，7.40(1H，d，Ar)，7.60(1H，d，Ar)，7.90(1H，s，Ar)。(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯甲酰氨基-4-甲基-戊酸(63)使用结构单元KLCMS纯度97%，m/z422pvT+H]+，'HNMR(400函z，MeOD)，5:1.03(3H，d，CH(Qi2》，1.06(3H，d，CH(Q^))，1.40-1.55(4H，m，2xCH2)，1.65-1.95(7H，m,2xCH2，C,H3)2，賜(:即113)2)，2.15(2H，t，CH2)，2.45(2H，t，CH2)，4.70(1H，m，OCOCHCH2)，7.45(1H，m，Ar)，7.60(1H，d，Ar)，7.80(1H，d，Ar)，8.05(IH，s，Ar)。(8)-2-{[2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-111+-咔啉-1-羰基-氨基}-3-苯基-丙酸环戊酯(64)使用结构单元LLCMS纯度100%，m/z603[1Vf+H]+，'HNMR(400MHz，MeOD)，5:1.18-1.71(16H，m，8xCH2)，2.00(2H，t，CH2)，2.45(2H，m)，2.70(2H，m)，2.90-3.11(2H，m)，3.40(1H，m)，4.10(1H，m)，4.50(1H，m)，5.00(1H，m)，5.95(1H，m)，6.90-7.11(7H，m，Ar)，7.25(1H，d，Ar)，7.34(1H，d，Ar)。(S)-2-U2-(7-羟基氨甲酰基-庚酰)-2，3，4，9-四氢-lH-P-咔啉-l-羰基-氨基l-3-苯基画丙酸(65)使用结构单元LLCMS纯度91%，m/z535[N^+H〗+，！HNMR(400而z，MeODS:1.15-1.32(4H，m，2xCH2)，1.40-1.60(4H，m，2xCH2)，1.98(2H，t，CH2)，2.41(2H，m)，2.69(2H，m)，2.90-3.11(2H，m)，3.30(1H，m)，4.06(1H，m)，4.60(1H，m)，5.92(1H，m)，6.84(7H，m，Ar)，7.20(1H，d，Ar)，7.31(1H，d，Ar)。合成化合物(66)和化合物(67)6667阶段l:5-氨基-烟酸甲酯将5-氨基烟酸(lg，7.2mmmol)悬浮于甲醇(100ml)并在Ot:时逐滴加入亚硫酰氯(4.22ml，57.9mmo1)。将反应混合物室温搅拌18小时。将反应混合物蒸发至干，将所得黄色油状物重溶于甲醇/乙醚(l:l)，并通过过滤收集所得黄色晶体(盐酸盐)，产量为1.2g(85%)。LCMS纯度91%，m/z153[Nf+Hf阶段2:(5-氨基-吡啶-3-基)-甲醇N将5-氨基-烟酸甲酯(5.7g，30.2mmol)溶于THF(150ml)并在0。C下缓慢加入LiAlH4(1M的THF溶液，133ml，133mmo1)。将反应混合物室温搅拌21小时。淬灭反应混合物，用稀HCl酸化至pH3，并用固体Na2C03碱化(pH8)。减压除去溶剂。残余物通过硅胶过滤，用20%MeOH/DCM洗脱得到3.8g产物，(100%)LCMS纯度为97%，m/z125[VT+H]+，通过ELS测定。阶段3:将阶段2的酸偶联到树脂上将用辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(0.49g，0.86mmol/g，0.42mmol)在无水DCM(6ml)中溶胀并加入PyBOP(0.67g，1.3mmo1)。将阶段2的苯胺(0.16g，1.3mmo1)加入DMF(6ml)，随后加入DIPEA(0.75ml，4.2mmo1)。测试切除后的LCMS显示27%转化，m/z296[Ivr+H]+。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。阶段4:甲磺酰化将结合树脂的阶段3的醇(1.8g，1.57mmol)在无水DCM(30ml)中溶胀并在O'C下加入DIPEA(1.62ml，9.42mmo1)，然后加入甲磺酰氯(0.23ml，3.14mmo1)。将反应混合物在0。C振荡30分钟。测试切除后的LCMS显示21。/。转化，m/z374[]Vr+H]+，并有9%通过用氯化物取代甲磺酸酯衍生得到的副产物，m/z314[NT+H]+。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。阶段5:用L-苯丙氨酸乙酯取代甲磺酸酯将结合树脂的阶段4的产物(0.5g，0.43mmol)在无水DMF(4ml)中溶胀并加入碘化钠(0.05g，10。/。重量/体积)。加入L-苯丙氨酸乙酯盐酸盐(0.3g，1.29mmol)的无水DMF(4ml)溶液，然后加入DIPEA(0.75ml，4.3mmo1)。振荡3小时后，测试切除材料的LCMS显示35。/。转化，m/z471[lVr+H]+。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗漆。真空干燥树脂。阶段6:(S)-2-U5-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-吡啶-3-基甲蜀-氨基H-苯基-丙酸乙酯(66)阶段5的树脂(2g，以0.87mmol/g加载)在2%TFA/DCM(20ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。收集滤液并在室温下减压蒸发。树脂用2。/。TFA/DCM(10ml)重新处理，10分钟后过滤。合并的滤液在室温下减压蒸发至干以得到粗产物。粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(66)，其为TFA盐。LCMS纯度100%，m/z471[Nf+H]+，'HNMR(400画z，MeOD)，S:1.10(3H，t，C02CH2Qi3)，1.31-1.50(4H，m，2xCH2)，1.58-1.80(4H，m，2xCH2)，2.05-2.15(1H，m，CH)，2.24-2.38(1H，m，CH)，2.45(2H，t，CH2)，3.10-3.20(1H，m，CH)，3.38-3.49(1H，m，CH)，4.12(2H，q，CH2)，4.35(3H，m，CH2，CH)，7.20-7.40(5H，m，Ar)，8,30-9.00(3H，m，Ar)。阶段7:(S)-2-([5-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-吡啶-3-基甲基]-氨基H-苯基-丙酸(67)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage86</formula>在阶段6的产物(30mg，以1.8mmol/g加载)的THF(lml)溶液中加入1.4M氢氧化钠(lml)。将反应混合物搅拌30分钟。LCMS显示75。/。转化，m/z442[]VT+H]+。将反应混合物蒸发至干并通过制备型HPLC纯化以得到所需化合物，其为TFA盐，化合物(67)。LCMS纯度100%，m/z443[M++H]+。'HNMR(400画z，MeOD)，5:1.30(4H，m，2xCH2)，1.50-1.70(4H，m，2xCH2)，2.00(2H，t，CH2)，2.30(2H，t，CH2)，3.20(2H，m，CM2Ph，掩蔽的信号)，4.20(3H，m)，7.20(5H，m，Ar)，8.30(1H，brs，Ar)，8.40(1H，s，Ar)，8.65(1H，brs，Ar)。合成化合物(68)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage86</formula>(S)-2-([5-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-吡啶-3-基甲基]-氨基H-苯基-丙酸叔丁酯(68)使用所列出的用来制备化合物(66)的步骤进行制备LCMS纯度100。/。，m/z499[M十+H]+，！HNMR(400顧z，MeOD)，5:1.20(9H，s，C(Cg3)3)，1.25-1.35(4H，m，2xCH2)，1.49-1.65(4H，m，2xCH2)，2.00(2H，t，CH2)，2.35(3H，t，CH2)，3.00(1H，m)，3.32(1H，m)，4.15-4.30(3H，m)，7.15-7.30(5H，m，Ar)，8.30(1H，brs，Ar)，8.45(1H，s，Ar)，8.65(1H，brs，Ar)。合成化合物(69)和化合物(70)86<formula>formulaseeoriginaldocumentpage87</formula>阶段L将Fmoc氨基己酸加载到树脂上<formula>formulaseeoriginaldocumentpage87</formula>在羟胺2-氯三苯甲基树脂(2.5g，以0.94mmol/g加载)和无水DCM(10ml)的混合物中加入1，3-二异丙基碳二亚胺(l.lml，7.05mmol)和6-(Fmoc-氨基)己酸(2.5g，7.05mmol)的无水DCM(10ml)溶液。加入DMF(5ml)并在室温振荡反应物1小时。测试切除显示96%转化成所需产物。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。阶段2:Fmoc去保护将阶段1的Fmoc保护的胺树脂(2.0g，以0.94mmol/g加载)溶于20%的哌啶的DMF(25ml，过量)溶液并室温振荡30分钟。测试切除，LCMS显示完全转化，100%(ELS检测)。将树脂过滤，用标准洗涤过程洗涤并真空干燥。阶段3:偶联反应在结合树脂的阶段2的胺(2.0g，以0.94mmol/g加载)的无水DCM(10ml)和DMF(10ml)溶液中加入DIC(0.71ml，5.64mmol)和3-(氯甲基)苯甲酸(0.96g，5.64mmo1)。将混合物振荡l小时，然后测试切除，LCMS显示49。/。转化，m/z219[VT+H]+。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。阶段4:用L-苯基甘氨酸环戊酯取代氯化物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage87</formula>在结合树脂的阶段3的氯化物(0.5g，0.47mmol)的无水DMF(51111)溶液中加入L苯基甘氨酸环戊酯甲苯磺酸盐(0.57g，1.41mmol)、DIPEA(0.24ml，1.41mmoI)和催化量的碘化钠。反应混合物在6(TC加热1小时。测试切除后的LCMS显示45%转化，m/z482[M"+H]+。将树脂过滤，并用标准洗涤过程洗涤。真空干燥树脂。阶段5:(S)-[3-(5-羟基氨甲酰基-戊基氨甲酰基)-节基氨蜀-苯基-乙酸环戊酯(69)将阶段4的树脂(1.0g，以0.94mmol/g加载)在2%TFA/DCM(10ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。收集滤液并在室温下减压蒸发。树脂用2%TFA/DCM(10ml)重新处理，20分钟后过滤。合并的滤液在室温下减压蒸发至千以得到残余物。残余物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(69)。LCMS纯度89%，m/z482[N^+H]+，]HNMR(400固z，MeOD)，S:1.24-1.82(14H，m，7xCH2)，2.03(2H，t，CH2)，3.30(2H，t，CH2)，4.08(1H，d，CHgPh)，2.20(1H，d，CgHPh)，5.09(1H，s，OCOQiPh)，5.18(1H，m，C即CO)，7.39-7.54(7H，m，Ar)，7.77(2H，m，Ar)。阶段6:环戊酯的皂化将阶段4的树脂(1.35g，以0.94mmol/g加载)悬浮于THF(4.7ml)和甲醇(4.7ml)。加入1.4M氢氧化钠(9.4ml，12.66mmol)。将混合物振荡48小时。测试切除后的LCMS显示49%转化成酸，m/z414[NT+H]+。将树脂过滤并用水x2和MeOHx2洗涤，然后通过标准洗涤过程洗涤。树脂在真空下干燥阶段7:(S)-[3-(5-羟基氨甲酰基-戊基氨甲酰萄-节基氨基]-苯基-乙酸(70)将阶段6的树脂(1.35g，以0.94mmol/g加载)在2%TFA/DCM(10ml)中温和振荡20分钟。将树脂过滤。收集滤液并在室温下减压蒸发。树脂用2%TFA/DCM(10ml)重新处理，20分钟后过滤。合并的滤液在室温下减压蒸发至干以得到残余物。残余物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(70)。LCMS纯度100%,m/z414[M""+H]+，!HNMR(400函z，MeOD)，S:1.30(2H，m，CH2)，1.57(4H，m，2xCH2)，2.20(2H，t，CH2)，3.30(2H，t，CH2)，4.05(1H，d，CJiHPh)，4.18(1H，d，CH,)，4.90(1H，s，OCOCHPh)，7.35-7.52(7H，m，Ar)，7.78(2H，m，Ar)。合成图4的化合物，以化合物(71)和化合物(72)为例<formula>formulaseeoriginaldocumentpage89</formula>R=环戊基71R=H72<formula>formulaseeoriginaldocumentpage89</formula>R=环戊基73R=H74<formula>formulaseeoriginaldocumentpage89</formula>R=环戊基75R=H76<formula>formulaseeoriginaldocumentpage89</formula>R=环戊基77R=H78<formula>formulaseeoriginaldocumentpage89</formula>图4制备结构单元M，N，O结构单元M<formula>formulaseeoriginaldocumentpage90</formula>阶段l:2-(3-氨基-苯基)-乙醇将硝基苯乙醇(8.0g，0.047mol)和10%Pd/C(0.6g)的乙醇(100ml)混合物在氢气下(气球压力)搅拌18小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并除去Pd/C催化剂。将滤液减压浓縮以得到淡棕色固体6.1g(95%产率)。LCMS纯度98%，m/z138[M+H]+。阶段2:3-(2-溴-乙基)-苯胺将2-(3-氨基-苯基)-乙醇(2.0g)在48%的HBr水溶液(20ml)中的溶液于9(TC加热18小时。将混合物冷却至室温，并通过过滤收集形成的沉淀。真空干燥固体得到结构单元M，1.8g(61。/。产率)。LCMS纯度90。/。，m/z200/202[M+H]+。结构单元N<formula>formulaseeoriginaldocumentpage90</formula>结构单元N阶段l:2-(3-硝基-苯氧基)-乙醇在3-硝基苯酚(10g，71.9mmol)的DMF(40ml)溶液中加入加入NaOH颗粒(3.16g，79.1mmol)和2-溴乙醇(5.6ml，79.1mmo1)。反应混合物于60。C加热18小时。LCMS显示65%转化成所需产物。反应混合物用水(10ml)稀释并用2MHCl慢慢中和。反应混合物用EtOAc(50ml)萃取并用水(50ml)洗涤。将EtOAc层干燥(Na2S04)，过滤并蒸发至干。快速柱层析纯化，用3(P/。EtOAc/庚垸洗脱，得到所需产物(8.2g，62%产率)。LCMS纯度100%，m/z184[M+H]+。阶段2:2-(3-氨基-苯氧基)-乙醇还原反应按照对于结构单元M列出的过程进行。阶段3:3-(2-溴-乙氧基)-苯胺溴化反应按照对于结构单元M列出的过程进行。结构单元O<formula>formulaseeoriginaldocumentpage91</formula>阶段3结构单元O结构单元O按照对结构单元G的描述用3-溴-l-丙醇代替2-溴乙醇进行制备(合成图4的化合物，以化合物(71，R-环戊基)和化合物(72，R-H)为例<formula>formulaseeoriginaldocumentpage91</formula>阶段l:将苯胺衍生物偶联到羧酸官能化的树脂<formula>formulaseeoriginaldocumentpage91</formula>、在用辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(1.0g，0.94mmo1，以0.94mmol/g加载)的DCM/DMF(10ml/10ml)悬浮液中加入DIPEA(1.75ml)，然后加入结构单元M(0.8g，2.82mmo1)。加入PyBrOP(0.53g，3.76mmol)并将悬浮液振荡18小时。树脂用标准洗涤过程洗涤并充分干燥。阶段2:用L-苯基甘氨酸环戊酯取代溴化物在瓶中的阶段l的树脂(0.4g，0.38mmol)的DMF(4ml)的悬浮液中加入L-苯基甘氨酸环戊酯甲苯磺酸盐(0.44g，U2mmol)和DIPEA(0.67ml，3.76mmo1)，然后加入Nal(50mg)。使反应物在65'C静置8小时。用标准洗涤过程充分洗涤树脂。阶段3:(S):2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯基]-乙基氨基卜苯基-乙酸环戊酯(71)用2%TFA/DCM(10mlx3)切除阶段2的树脂。将滤液浓縮至干并通过制备型HPLC纯化残余物以得到化合物(71)，其为TFA盐。产量为21mg(总共11%)，LCMS纯度99%，m/z510[M^H]+，'HNMR(400MHz，MeOD)，S:1.35-1.95(16H,m8xCH2)，2.10(2H，t，CH2)，2.38(2H，t，CH2)，2.91-3.29(4H，m)，5.18(1H，s，OCOQiPh)，5.32(1H，m，CgOCO),6.98(1H，m，Ar)，7.30(2H，m，Ar)，7.47-7.56(5H，m，Ar)，7.62(1H，s，Ar)。阶段4:皂化将阶段2的树脂(1.2g，1.12mmol)悬浮于THF/MeOH(12ml/12ml)。加入2.7MNaOH溶液并将混合物室温振荡18小时。反应完成后充分洗涤树脂(标准洗涤过程)。阶段5:(SH2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯基]-乙基氨基卜苯基-乙酸(72)用2。/。TFA7DCM(10mlx3)切除阶段4的树脂(0.8g，0.76mmo1)。将滤液浓縮至干并通过制备型HPLC纯化残余物以得到化合物(72)，其为TFA盐，产量为40mg(总共10%)。LCMS纯度为100。/。，m/z442[M+十H]+，'HNMR(400MHzMeOD)，S:1.20-1.35(4H，m，2xCH2)，1.45-1.70(4H，m，2><CH2)，1.95(2H，t，CH2)，2.25(2H，t，CH2)，2.80-3.20(4H，mCH^NH，CJ^Ph),5.00(1H，s，CHCOOH)，6.85(1H，m，Ar)，7.15(2H，m，Ar)，7.40(5H，s，Ar)，7.50(1H，s，Ar)。以下化合物按照关于化合物(71)和化合物(72)描述的方法制备(S)-2-(2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯氧基-乙基氨基)-3-苯基-丙酸环戊酯(73)采用结构单元NLCMS纯度94。/。，m/z540[M"+H]+，NMR(400MHz，MeOD)'5:1.26-1.82(16H，m,8xCH2)，2.11(2H，t，CH2)，2.39(2H，t，CH2)，3.15(1H，dd，QiHPh)，3.44(1H,dd，C昭Ph)，3.56(2H，m，CH2)，4.30(2H，t，CH2)，4.40(1H，m)，5.13(1H，m，CgOCO)，6.76(1H，d，Ar)，7.00(1H，d，Ar)，7.24-7.41(6H，m，Ar)，7.57(1H，s，Ar)。(S)-2-(2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯氧基〗-乙基氨基H-苯基-丙酸(74)采用结构单元NLCMS纯度100%，m/z472[IV^+H〗+，！HNMR(400MHz'MeOD)'5:1.35-1.46(4H，m，2xCH2)，1.61-1.77(4H，m，2xCH2)，2.11(2H，t，CH2)，2.40(2H，t，CH2)，3.28-3.40(2H，m，CH2，掩蔽的信号)，3.53(2H，t，CH2)，4.29(2H，t，CH2)，4.38(1H，t，OCOC|iCH2)，6.75(1H，d，Ar)，7.00(1H,d，Ar)，7.25(1H，t，Ar)，7.30-7.41(5H，m，Ar),7.53(1H，s，Ar)。(8)-2-{3-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯氧基-丙基氨基}-3-苯基-丙酸环戊酯(75)采用结构单元OLCMS纯度100%，m/z554[Nf+H]+，'HNMR(400顧z，MeOD)，5:1.29-1.87(16H，m，8xCH2)，2.10(2H，t，CH2)，2.21(2H，m，CH2)，2.37(2H，t，CH2)，3.12(1H，dd，CHHPh)，3.25-3.43(3H，m，CH,，CH2)，4.11(2H，t，CH2)，4,33(1H，m，OCOCliCH2)，5.18(1H，m，CHOCO)，6.78(1H，d，Ar)，7.00(1H，d，Ar)，7.22(1H，t，Ar)，7.24-7.39(5H，m，Ar)，7.44(1H，s，Ar)。(S)-2-(3-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯氧基-丙基氨基卜3-苯基-丙酸(76)采用结构单元oLCMS纯度100%，m/z486[IvT+H]+，^NMR(400顧z，MeOD)，S:1.34-1.47(4H，m，2xCH2)，1.60-1.75(4H，m，2xCH2)，2.10(2H，t，CH2)，2,19(2H，m，CH2)，2.38(2H，t，CH2)，3.25-3.40(4H，m，2xCH2，掩蔽的信号)，4.09(2H，t，CH2)，4.35(IH，OCOQiCH2)，6.75(1H，d，Ar)，6.98(1H，d，Ar)，7.20(IH，t，Ar)，7.28-7.39(5H，m，Ar)，7.41(1H，s，Ar)。(SH3-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯氧基-丙基氨基h苯基-乙酸环戊酯(77)采用结构单元OLCMS纯度为100%，m/z540[M++H]+，！HNMR(400MHz，MeOD)，S:1.20-1.50(8H，m，4xCH2)，1.50-1.80(8H，m，4><CH2)，1.80-1.90(2H，m，NHCH2CH2)，2.00(2H，t，CH2)，2.25(2H，t，CH2)，2.55-2.70(2H，m，NHCJ^),3.90(2H，t，CH2CHzO)，4.25(1H，s，OCOCgPh)，5.05(1H，m，CgOCO)，6.55(1H，m，Ar)，6,95(1H，m，Ar)，7.00-7.10(1H，m，Ar)，6.15-6.35(6H，m，Ar)(SH3-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯氧基-丙基氨基)-苯基-乙酸环戊酯(78)采用结构单元OLCMS纯度为100%,m/z472[Iv/T+H]+，NMR(400MHz，DMSO)，5:1.20-1.40(4H，m，2xCH2)，1.45-1.65(4H，m，2xCH2)，1.90(2H，m，丽(:恥歸，2.00-2.20(2H，m，CH2)，2.20-2.35(2H，m，CH2)，2.80-3.10(2H，m，NHCHa掩蔽的信号)，3.90-4.00(2H，m，CH2C|^0)，4.60-4.85(1H，brs，OCOCgPh)，6.55(1H，d，Ar)，7.05(1H，d，Ar)，7.15(1H，m，Ar)，7.30-7.60(6H，m,Ar)，8.50-8.85(IH，brs)，9.85(1H，s)，10.35(1H，s)。合成图5的化合物，以化合物79和化合物80为例R=环戊基79R=H80图5合成化合物79(R-环戊基)和化合物80(R=H)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage95</formula>阶段l:3-硝基-苄胺将3-硝基苄基溴化物(10g，46.3mmol)溶于乙醇(200ml)并于室温搅拌。在30分钟内在反应物中逐滴加入浓氨水(200ml)的乙醇(300ml)溶液。将反应物室温搅拌18小时，然后蒸发至干。在残余物中加入水(350ml),溶液用EtOAc(2x200ml)洗涤。含水层用1MNaOH碱化并用EtOAc(2x200ml)萃取。将碱性层的有机萃取物合并，干燥(Na2S04)并蒸发至干。所得产物为橙色油状物(4.6g，65%产率)。LCMS纯度100%，m/z153[Nf+H]+。阶段2:l-异氰酸甲酯基-3-硝基-苯在氮气下将3-硝基-苄胺(2.3g，15.1mmol)溶于无水二噁垸(50ml)。加入双光气(2.2ml，18.2mmo1)，有沉淀形成，该沉淀在加热至75'C时溶解。将反应物在75'C搅拌3小时，冷却并蒸发至干，得到3.4g粗材料，该材料无需进一步纯化即可用于下一步骤。阶段3:(S)-[3-(3-硝基-苄基)-脲基]-苯基-乙酸环戊酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage96</formula>将L-苯基甘氨酸环戊酯甲苯磺酸盐(7.47g，19.1mmol)溶于DMF(70ml)。加入三乙胺(5.8ml，42.0mmol)并将混合物冷却至0°C。氮气下，在反应混合物中缓慢加入l-异氰酸甲酯基-3-硝基-苯溶液(3.4g，19.1mmo1，溶于30mlDMF)。继续搅拌18小时使反应物回复室温。混合物用水(200ml)稀释并用EtOAc(2x200ml)萃取。有机萃取物用水(3xl00ml)和盐水(100ml)洗涤，干燥(Na2S04)并蒸发至干。粗制的脲通过柱层析(1%MeOH/DCM)纯化以得到淡黄色油状物(4.6g，65%产率)。LCMS纯度85%，m/z398[M+十H]+。阶段4:(S)-[3-(3-氨基-苄基)-脲基]-苯基-乙酸环戊酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage96</formula>将(S)-[3-(3-硝基-苄基)-脲基]-苯基-乙酸环戊酯(3.6g，9.0mmol)溶于乙醇(50ml)，加入Pd/C(10M，湿重)催化剂(100mg)，混合物在氢气(气球压力)下搅拌18小时。将反应混合物通过硅藻土塞过滤并蒸发至干以得到紫色油状物(2.34g，71%产率)。LCMS纯度90%，m/z368[M^+H]+。阶段5:偶联到树脂<formula>formulaseeoriginaldocumentpage96</formula>将用辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(1.5g，以0.94mmol/g加载)在DMF(15ml)中溶胀，加入PyBOP(2.2g，4.23mmol)和DIPEA(2.4ml，14.1mmo1)。将阶段4的苯胺(1.3g，3.53mmol)溶于DCM(15ml)并加入反应混合物中。反应物在室温下振荡42小时，然后进行标准树脂洗涤步骤和干燥。阶段6:(SH3-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基]-脲基》-苯基-乙酸环戊酯(79)79将阶段5的结合树脂的环戊酯(1.75g)与2%TFA/DCM(15ml)—起振荡10分钟，然后过滤树脂并在室温下减压蒸发溶剂。重复该过程(3次)，合并的粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(79)。LCMS纯度100%，m/z539[M^+H]+，&NMR(400MHz，MeOD)，5:1.34-1.90(16H，m，8xCH2),2.11(2H，t，CH2)，2.38(2H，t，CH2)，4.30(2H，s，CH2)，5.18(1H，m，C即CO)，5.30(1H，s，OCOCHPh)，7.05(1H，d，Ar)，7.26(1H，t，Ar)，7.34-7.40(5H，m，Ar)，7.47(2H，m，Ar)。阶段7:(SH3-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-节基]-脲基)-苯基-乙酸(80)将化合物(79)(75mg)溶于THF(lml)并加入2MNaOH(水溶液，lml)。反应物室温搅拌2小时。在氮气气流下除去THF，含水层(约lml)通过制备型HPLC纯化以得到化合物(80)。LCMS纯度99%，m/z471[M^H]+，&NMR(400MHz，MeOD)，5:1.20-1.35(4H，m，2xCH2)，1.45-1.65(4H，m，2xCH2)，2.00(2H，t，CH2)，2.25(2H，t，CH2)，4.20(2H，s賜,，5.25(1H，sCgPh)，6.90(1H，d，Ar)，7.10(1H，t，Ar)，7.15-7.40(7H，m，Ar)。以下化合物按照为化合物(79)和化合物(80)描述的方法制备(S)-2-(3-3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-节基-脲基H-苯基-丙酸环戊酯(81)LCMS纯度950/0，m/z553[M^H]+，'HNMR(400固z，MeOD)，5:1.20-1.40(4H，m，2xCH2)，1.40-1.80(12H，m，6xCH2)，2.00(2H，t，CH2)，2.25(2H，t，CH2)，2.90(2H，m，CHC^Ph),4.15(2H，s賜NH)，4.40(1H，m，OCOCgCH2)，5.00(1H，m，CgOCO)，6.85(1H，d，Ar)，7.00-7.25(6H，m，Ar)，7.35(2H，brs，At)。(S)-2-P-3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-节基l-脲基卜3-苯基-丙酸(82)LCMS纯度94。/。，m/z485[M十+H]+，!HNMR(400画z，MeOD)，S:1.30-1.50(4H，m，2xCH2)，1.60-1.80(4H，m，2xCH2)，2.10(2H，t，CH2)，2.35(2H，t，CH2)，2.95-3.25(2H，m，CHCH^Ph)，4.25(2H，s，賜NH)，4.60(1H，mOCOC￡iCH2)，7.00(1H，d，Ar)，7.15-7.35(6H，m，Ar)，7.45(2H，m，Ar)合成图6所示的化合物，以化合物(83)和化合物(84)为例R=环戊基83R=H84R=环戊基86R=H87R=环戊基89R=H90R=环戊基85O一HR=环戊基88R=环戊基91图6O一HO一卜阶段l:7-(l-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-庚酸甲酯0/0v0将辛二酸一甲酯(25.0g，13.3mmol，1.0eq)溶于THF(300mL)和DCM(300mL)。边搅拌边在溶液中加入EDC.HCl(25.46g，13.3mmol，1.0eq)，然后加入HOBt(17.95g，13.3mmol，1.0eq)和三乙胺(48.5mL，34.5mmol，2.6叫)。在粘性溶液中加入O-(l-异丁氧基-乙基)-羟胺(21.9mL，15.9mmol，1.2叫)并将反应物在室温搅拌过夜。将反应混合物真空浓縮，加入DCM(350mL)并用水(250mL)和盐水(200mL)洗涤。将有机层分离，干燥(MgS04)，过滤并真空浓縮。所得产物为白色固体(36.6g，91%产率)LCMS纯度88。/。，m/z302(M^H)+。该物质无需进一步纯化便可用于下一步骤。阶段2:7-(l-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-庚酸5CTC时，在存在氢氧化锂(8.68g，36.2mmol，3.0叫)时将7-(l-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-庚酸甲酯(36.6g，12.1mmo1,1.0eq)在THF(200mL)和水(200mL)中搅拌3小时。在真空下蒸发掉THF并在混合物中加入水(100mL)和乙酸乙酯(200mL)。加入1NHCl将混合物小心酸化至pH3。分离有机相，含水层用乙酸乙酯(150mL)重新萃取。将有机相合并，干燥(MgS04)，过滤并真空浓縮。所得产物为白色固体(29.0g，83%产率)，m/z288[IVT+Hf，该产物无需进一步纯化便可用于阶段4。阶段3:4-三甲基甲硅垸氧基甲基-苯胺边搅拌边在4-氨基苄醇(16.0g，13.0mmol，1.0eq)的THF(400mL)溶液中加入三乙胺(18.9mL，13.6mmol，1.05eq)，然后加入三甲基氯硅烷(17.2mL，13.6mmol，1.05eq)。室温氮气下搅拌反应混合物过夜。在真空下蒸发THF并将混合物在乙酸乙酯(300mL)和水(300mL)之间分配。分离有机相，含水层用乙酸乙酯(2x100mL)重新萃取。合并的有机相用盐水(2xl50mL)洗涤，干燥(MgS04)，过滤并真空浓縮。所得产物为黄色油状物(24.0g，95%产率)，该产物无需进一步纯化便可用于阶段4。阶段4:辛二酸(Octanedioicacid)(4-羟甲基-苯基)-酰胺(l-异丁氧基乙氧基)-酰胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage99</formula>在DMF(140mL)中一起搅拌7-(1-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-庚酸(5.0g，1.72mmol，1.0eq)和4-三甲基甲硅烷氧基甲基-苯胺(3.38g，1.72mmol，1.0叫)。在混合物中加入PyBroP(10.5g，2.25誦ol，1.3eq)和DiPEA(3.9mL，2.25腿ol，1.3eq)。室温下在氮气下搅拌反应物过夜。加入乙酸乙酯(200mL)和水(200mL)。将水相分离并用乙酸乙酯(2x100mL)重新萃取。合并的有机相用水(2x50mL)和盐水(50mL)洗涤，然后干燥(MgS04)，过滤并真空浓縮。将粗产物溶于最小量的乙酸乙酯并通过二氧化硅垫纯化。产物通过二氧化硅用乙酸乙酯洗涤，并收集在100mL的锥形瓶中，直到LCMS分析显示洗脱终止。纯化得到黄色油状物(3.59g，53%产率)。LCMS纯度61%，m/zWClvr+Nar阶段5:辛二酸(4-甲酰-苯基)-酰胺(l-异丁氧基-乙氧基)-酰胺o将辛二酸(4-羟甲基-苯基)-酰胺(1-异丁氧基乙氧基)-酰胺(100mg，0.025mmol，l.Oeq)溶于DCM(5mL)。在反应混合物中加入Mn02(286mg，0.33mmol，13.0叫)并室温搅拌1.5小时。将反应混合物通过硅藻土过滤并用DCM洗涤，然后蒸发溶剂以得到黄色油状物(78.6mg，79。/。产率)LCMS纯度53%，m/z415[M"+Na]+。产物无需进一步纯化便可用于下面的步骤。阶段6:(RH4-[7-(l-异丁氧基-乙氧基氨甲酰萄-庚酰氨基]-苄基氨基)-苯基-乙酸环戊酯将辛二酸(4-甲酰-苯基)-酰胺(l-异丁氧基-乙氧基)-酰胺(276mg，0.70mmol，1.0eq)和D-苯基甘氨酸环戊酯(170mg，0.77mmol，1.1eq)在DCE(15mL)中搅拌10分钟。加入乙酸(65pL)并搅拌2分钟。加入三乙酰氧基硼氢化钠(448mg，0.21mmol，3.0eq)并将反应混合物在氮气下室温搅拌1小时。加入碳酸氢钠以淬灭反应。然后加入DCM并分离有机相。含水层用DCM重新萃取，将有机层合并，干燥(MgS04)，过滤并真空浓縮以得到粗产物(100mg，24%)，LCMS纯度94.0。/。，m/z496[m++H]+，该产物无需进一步骤7:(R)-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-苯基-乙酸环戊酯(83)将(RH4-[7-(l-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-庚酰氨基]-苄基氨基卜苯基-乙酸环戊酯(50mg，0.08mmol，1eq)溶于DCM(0.5mL)并与4MHC1—起在二嗯烷(0.2mL)中搅拌30分钟。将所得盐浓縮，溶于甲醇并通过制备型HPLC纯化以得到化合物(83)。LCMS纯度940/。，m/z496[Ivr+H]+，iH蘭R(300應z，MeOD)，5:1.41-1.95(16H,m，8xCH2)，2.15-2.17(2H，m，CH2)，2.40(2H，t，J=7.2Hz，CH2)，4.16(2H，q，J二13.5Hz，CH2)，5.12(1H，s，CH)，5.27-5.30(1H，m，CH)，7.40(2H，d，J=8.7Hz，Ar-H)，7.50-7.56(5H，m，Ar-H)，7.67(2H，d，J=8.7Hz，Ar-H)。阶段8:(R)-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基]-苯基-乙酸(84)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage101</formula>在CHR-003644(50mg，0.008mmol，1.0叫)的THF(2mL)和水(2mL)的溶液中加入LiOH(8.0mg，0.033mmol，4.0eq)。反应物在氮气下于40。C搅拌过夜。在真空下蒸发THF，所得水性反应溶剂用乙酸乙酯洗涤。将溶液酸化至pH3并真空浓縮产物。将所得盐溶于甲醇并通过制备型HPLC纯化产物以得到化合物(84)。LCMS纯度97%，m/z428[M"+H]+，'HNMR(300画z，MeOD)，S:1.39-1.41(4H，m，2xCH2)，1.62-1.74(4H，m，2><CH2)，2.13-2.15(2H，m，CH2)，2.40(2H，t，J=7.5Hz，CH2)，4.14(2H，q，J=12.9Hz，CH2)，5.06(1H，s，CH)，7.39(2H，d，J=8.4Hz，Ar-H)，7.54(5H，s，Ar-H)，7.67(2H，d，J=8.7Hz，Ar-H)以下化合物按照与化合物(83)和化合物(84)类似的方法采用合适的中间体制备。(S)-2-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨萄-4-甲基-戊酸环戊酯(85)LCMS纯度97%，m/z476pvT+H]+，^NMR(300顧z，MeOD)，5:0.98-1.03(6H，m，2xCH3)，1.41-1.42(4H，m，2xCH2)，1.71-1.96(14H，m，7xCH2)，2.10-2.15(2H，m，CH2)，2,40(2H，t，J=7.2Hz，CH2)，3.96-4.01(1H，m，CH)，4.15-4.26(2H，m，CH2)，4.81(1H，s，CH)，5.31-5.34(1H，m，CH)，7.44(2H，d，J=8.7Hz，Ar-H)，7.70(2H，d，J=8.7Hz，Ar-H)(S)-环己基-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨萄-乙酸(87)LCMS纯度95%，m/z434[Iv^+H]+，！HNMR(300應z，MeOD)，S:1.23-1.96(18H，m，9xCH2)，2.10-2.15(2H，m，CH2)，2.39(2H，m，CH2)，3.71(1H，m，CH)，4.12(2H，q，J=7.2Hz，CH2)，4.80(1H，s，CH)，7.43(2H，d，J=8.4Hz，Ar-H)，7.68(2H，d，J=8.7Hz，Ar-H)(S)-3-叔丁氧基-2-4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨基-丁酸环戊酯(88)LCMS纯度83%，m/z520[!Vr+H]+，tHN證(300MHz，MeOD)，S:1.19(9H，s，3xCH3)，1.29(3H，d，J=7.8Hz，CH3)，1.37-1.41(4H，m，CH2)，1.64-1.89(12H，m，CH2)，2.09-2.15(2H，m，CH2)，2.40(2H，t，J=7.2Hz，CH2)，3.36-3.37(IH，m，CH)，3.70-3.71(1H，m，CH)，4.24-4.27(2H，m，CH2)，5.17-5.19(1H，m，CH)，7.42(2H，d，J=6.9Hz，Ar-H)，7.68(2H，d，J=8.4Hz，Ar-H)(S)-3-叔丁氧基-2-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨萄-丙酸环戊酯(89)LCMS纯度95%，m/z506[M++H]+，^NMR(300應z，MeOD)，8:1.23(9H，s，C(CH3)3)，1.36-2.09(16H，m，8xCH2)，1.66(2H，t，J=7.7Hz，CH2)，1.75(2H，t，J=7.4Hz，CH2)，2.11(2H，t，J=7.4Hz，CH2)，2.40(2H，t，J=7.3Hz，CH2)，3,92(2H，m，CH2)，4.16(1H，m，CH)，4.26(2H，s，CH2)，5.32(1H，m，CH)，7.45(2H，d，J=8.5Hz，ArH)，7.67(2H，dd，J=3.2，8.3Hz，ArH)。(S)-3-叔丁氧基-2-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄基氨萄-丙酸(90)LCMS纯度95%，m/z438[M^H]+，^NMR(300固z，MeOD)，S:1.25(9H，s，C(CH3)3)，1.39-1.42(4H，m，2xCH2)，1.62-1.69(4H，m，2xCH2)，2.08-2.17(2H，m，CH2)，2.40(2H，t，J=7.5Hz，CH2)，3.85-3.96(2H，m，CH2)，4.01-4.04(1H,m，CH)，4.26(2H，s，CH2)，7.46(2H，d，J=8.4Hz，Ar隱H)，7.68(2H，d，J=8.4Hz，Ar邻(S)-2-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨萄-节基氨萄-3-苯基-丙酸环戊酯(91)LCMS纯度95。/。，m/z510[ivT+H]+，&NMR(300應z，MeOD)，S:1.17-2.43(22H，m，llxCH2)，4.19-4.30(2H，m，CH2)，5.08(1H，s，CH)，5.20-5.26(1H，m，CH)，7.24-7.71(9H，m，Ar-H)化合物(86)用另一种方法制备，改变的条件在下面详述步骤6b:(8)-环己基-{4-[7-(1-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-庚酰氨基]-苄基氨基}-乙酸环戊酯将辛二酸(4-甲酰-苯基)-酰胺(1-异丁氧基-乙氧基)-酰胺(220mg，0.056mmol，1.0eq)和L-环己基-甘氨酸环戊酯(138.9mg，0.062mmol，1.1eq)在甲醇(8mL)中室温搅拌过夜。加入氢硼化钠(31.8mg，0.084mmol，1.5eq)并将反应混合物搅拌15分钟。将反应混合物转移到冰浴中并加入2滴氢氧化钠(2M)。加入二乙醚并分离有机相。含水层用二乙醚重新萃取，将有机层合并并用盐水洗涤。然后将有机相干燥(MgS04)，过滤并真空浓缩以得到粗材料，该材料无需进一步纯化便可用于下一步骤。步骤L(8)-环己基-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-节基氨基]-乙酸环戊酯(86)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage103</formula>将步骤6b(50mg，0.083mmol，1eq)的材料溶于DCM/甲醇(2mL:2mL)并与TFA(1.0mL)—起搅拌2小时。将所得盐浓縮，溶于甲醇并通过制备型HPLC纯化以得到化合物(86)。LCMS纯度100。/。，m/z502[VT+H]+，^NMR(300MHz，MeOD)，5:1.28-1.98(26H，m，13xCH2)，2.10-2.15(2H，m，CH2)，2.40(2H，t，J=7.8Hz，CH2)，3.81(1H，d，J=3.9Hz，CH)，4.21(2H，m，CH2)，5.01(1H，s，CH)，5.23-5.25(1H，m，CH)，7.43(2H，d，J=8.4Hz，Ar-H)，7.68(2H，d，J=8.7Hz，Ar-H)合成92和93<formula>formulaseeoriginaldocumentpage104</formula>阶段l:4-(3-硝基-苯氧基)-丁酸甲酯在3-硝基苯酚(8.35g，60mmol)的DMF(50ml)溶液中加入K2C03(16.56g，12Ommo1)和1,4-溴代丁酸甲酯(11.95g，66mmo1)。将反应物室温搅拌16小时。用乙酸乙酯和水稀释反应物。将有机相分离并用水(2x200ml)洗涤。有机相用Na2S04干燥并真空浓縮。通过层析(乙酸乙酯:庚烷，l:9)分离所需的醚，其为淡黄色固体(12.2g，85%产率)。LCMS纯度100%，m/z240pvT+H]+。阶段2:4-(3-氨基-苯氧基)-丁酸甲酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage104</formula>将阶段1的硝基酯(250mg，lmmol)溶于乙醇(3ml)。加入Pd/碳(40mg)并将反应物在氢气(气球压力)下搅拌16小时。将反应混合物通过硅藻土过滤。硅藻土垫用乙醇洗涤并将合并的有机馏分真空浓縮以得到橙色油状的所需产物(210mg，100%产率)。LCMS纯度89M，m/z210[M++H]+。苯胺无需进一步纯化便可用于下一阶段。阶段3:偶联到树脂<formula>formulaseeoriginaldocumentpage104</formula>将辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(8g，7.52mmo1，以0.94mmol/g加载)在DCM/DMF(80ml/80ml)中溶胀。在烧瓶中加入PyBOP(11.8g，22.6mmol)和二异丙基乙胺(13.1ml，75.2mmol)，然后加入4-(3-氨基-苯氧基)-丁酸甲酯(4.73g，22.6mmol)。将反应物室温振荡72小时然后进行标准洗涤和干燥。阶段4:酯水解将阶段3的树脂(9.5g)悬浮于THF/MeOH(34ml/34ml)。加入NaOH(1.4M，水溶液，34ml)并将反应物室温振荡16小时。树脂用标准洗涤过程洗涤，然后空气干燥。阶段5:偶联氨基酸酯将阶段4的树脂(2.Ig)悬浮于DCM/DMF(20ml/20ml)。依次加入PyBOP(3.1g，5.92mmo1)、N-苯基甘氨酸环戊酯(2.4g，5.92mmol)和二异丙基乙胺(3.4ml，19.7mmo1)并将反应物室温振荡72小时。对树脂进行标准洗涤并干燥。阶段6:(S)-H-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯氧基]-丁酰氨基卜苯基-乙酸环戊酯(92)92将阶段5的结合树脂的环戊酯(l.lg)与2e/。TFA/DCM(10ml)—起振荡10分钟，然后过滤树脂并在室温减压蒸发溶剂。重复该过程(3次)，合并的粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(92)(114mg)。LCMS纯度99%,m/z568[TvT+H]+，^NMR(400丽z，MeOD)，S:1.40(4H，m，2xCH2)，1.45-1.90(13H，m，烷基)，2.10(4H，m，2xCH2)，2.40(2H，t，CH2)，2.50(2H，m，CH2)，4.00(2H,m，CH2)，5.15(1H，m，)，5.40(1H，s，NHCHCO)，6.65(1H，m，Ar)，7.15(1H，m，Ar)，7.20(1H，t，Ar)，7.30(1H，s，Ar)，7.40(5H，s，Ar)。阶段7:(S)-(4-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯氧基]-丁酰氨基卜苯基-乙酸(93)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage106</formula>将阶段6环戊酯树脂(500mg)悬浮于THF(15ml)。在悬浮液加入NaOH(1.4M水溶液，1.6ml)并将反应物室温振荡16小时。除去滤液，将树脂洗涤并干燥，然后切除。与2。/。TFA/DCM(5ml)—起振荡IO分钟以进行有效切除，然后过滤树脂并在室温减压蒸发溶剂。重复该过程(3次)，合并的粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(93)(62mg)。LCMS纯度99%,m/z500[M^H]+，'HNMR(400固z，MeOD)，5:1.40(4H，m，2xCH2),1.60-1.80(4H，m，烷基)，2.10(4H，m，2><CH2)，2.40(2H，t，CH2)，2.50(2H，t，CH2)，4.00(2H，m，CH2)，5.45(1H,s，NHCgCO),6.65(1H，d，Ar)，7.10(1H，m，Ar)，7.20(1H't，Ar)'7.25(1H，s，Ar)，7.30-7.45(5H，m，Ar)。合成94和95<formula>formulaseeoriginaldocumentpage106</formula>阶段l:形成氯甲酸3-硝基-苄基酯在3-硝基苄醇(10g，65mmol)的二嗯垸(无水，100ml)溶液中加入氯甲酸三氯甲酯(9.47ml，78mmol)。反应物在氮气下于75"C加热16小时。蒸发溶剂，将残余物重悬于二嚼烷并蒸发。重复该过程(3次)。粗制氯甲酸酯无需进一步纯化便可用于下一阶段。阶段2:(S)-2-(3-硝基-苄氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酸环戊酯将L-Phe-环戊酯的TsOH盐(9.42g，23mmol)悬浮于DCM(40ml)。加入三乙胺(6.5ml，47mmol)并将反应物室温搅拌5分钟。将溶于DCM(10ml)的阶段1的氯甲酸酯(5g，23mol)逐滴加入反应混合物并冷却(冰浴)。将反应物室温搅拌16小时。除去溶剂并将残余物溶于EtOAc(100ml)，用水(50mlx3)洗涤并干燥(Na2SO4)，然后真空浓縮。粗材料通过层析(EtOAc凍垸，l:9)纯化以得到所需的氨基甲酸酯(6.4g，67%产率)。m/z413[MVh;T阶段3:(S)-2-(3-氨基-苄氧基羰基氨基)-3-苯基-丙酸环戊酯将阶段2的硝基氨基甲酸酯(6.4g，15.5mmol)溶于乙醇(64ml)。加入二水合氯化锡(17.5g，77mmol)然后将反应物室温搅拌16小时。将溶剂蒸发并将残余物溶于EtOAc(60ml)。加入饱和酒石酸钠钾溶液(60ml)，然后加入加入饱和碳酸氢钠溶液(120ml)。将此双相溶液搅拌15分钟。分离有机层并用EtOAc(60mlxl)萃取水相。将有机层合并，干燥并蒸发溶剂以得到粗产物，粗产物通过层析(EtOAc:庚垸1:3—1:1)纯化。分离所需产物(3.5g,59%产率)。LCMS纯度100。/。，m/z383[VT+H;T。阶段4:偶联到树脂将辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(2.0g，1.88mmo1，以0.94mmol/g加载)在DMF(20ml)中溶胀。加入PyBOP(2.93g，5.64mmol)和二异丙基乙胺(3.25ml，18.8mmo1)。加入溶于DCM(20ml)的阶段3的苯胺基氨基甲酸酯(1.8g，4.7mmol)并将反应物振荡4天，然后除去滤液，对树脂进行标准洗涤并空气干燥。阶段5:(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-节氧基羰基氨基]-3-苯基-丙酸环戊酯(94)94将阶段4的结合树脂的环戊酯(2g)在2。/。TFA/DCM(15ml)中振荡10分钟，然后过滤树脂并在室温下减压蒸发溶剂。重复该过程(3次)，合并的粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(94)。LCMS纯度95%,m/z554[IVT+H],!HNMR(400MHz，MeOD)，S:1.30(4H，m，2xCH2)，1.40-1.卯(13H,m，烷基)，2.00(2H，t，CH2)，2.30(2H，t，CH2)，2.90(2H，ddd，CH2)，3.80(1H，m)，4.25(1H,dd，NHCgCO)，4.90(2H，s，CH2)，5.05(IH，m)，5.35(1H，m)，6.95(1H，d，Ar)，7.05-7.25(6H，m，Ar)，7.35-7.75(2H，m，Ar)。阶段6:(S)-2-[3-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苄氧基羰基氨基]3-苯基-丙酸(95)95将化合物(94)(100mg，0.18mmol)溶于THF(lml)并加入2MNaOH(lml)。将反应瓶振荡4小时，然后用氮气气流除去THF。水性残余物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(95)(62mg)。LCMS纯度95%，m/z486[M^H]+，&NMR(400固z，MeOD)，5:1.35(4H，m，2><CH2)，1.55-1.75(4H，m，烷基)，2.10(2H，t，CH2)，2.35(2H，t，CH2)，2.95(2H，dd，CH)，3.20(1H，dd，CH)，4.45(1H，dd，NHCgCO)，5.00(2H，s，CH2)，7.05(1H，d，Ar)，7.20-7.35(6H,m，Ar)，7.55(2H，m,Ar)。合成化合物(96)和化合物(97)R=环戊基96R=H97阶段1:(S)-7-硝基-l，2,3，4-四氢-异喹啉-3-羧酸按照TettLetts42，2001，3507的描述制备。阶段2:(S)-7-硝基-3,4-二氢-lH-异喹啉-2，3-二羧酸-2-叔丁酯将(S)-7-硝基-l,2,3,4-四氢-异喹啉-3-羧酸(7g，31.5mmol)溶于THF:7_K(1:1,350ml)。加入K2C03(5.2g，37mmol)，然后加入boc酸酐(13.7g，63mmol)并将溶液在4(TC加热1小时。通过蒸发除去THF，将含水层调至pH-7，然后用EtOAc萃取。有机层用0.1MHC1(X3)洗涤并用Na2S04干燥，然后真空浓缩。柱层析(EtOAc:庚垸2:3—EtOAc)后得到所需N-保护的产物(7.5g，74%)，LCMS纯度92。/。，未观察到分子离子阶段3:(S)-3-((S)-l-环戊氧基羰基-3-甲基-丁基氨甲酰基)-7-硝基-3,4-二氢-lH-异喹啉-2-羧酸叔丁酯将(S)-7-硝基-3,4-二氢-lH-异喹啉-2，3-二羧酸-2-叔丁酯(2.5g，7.76mmol)溶于DCM(100ml)。加入HOBt(1.16g，8.53mmo1)，加入L-亮氨酸环戊酯(3.19g，8.53mmo1)，然后加入三乙胺(2.38ml，n.lmmol)。加入EDCI.HC1(1.46g，8.5mmol)并将反应物室温搅拌16小时。在反应物中加入DCM(100ml)，有机层用水(3x300ml)洗涤，用Na2SO4干燥并在真空下除去溶剂。粗产物通过层析(EtOAc:庚烷1:2—EtOAc)纯化以得到所需产物3.14g(82%产率)，LCMS纯度100%,m/z504[IVT+Hf阶段4:(S)-7-氨基-3-((S)-l-环戊氧基羰基-3-甲基-丁基氨甲酰基)-3,4-二氢-lH-异喹啉-2-羧酸叔丁酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage110</formula>将(3)-3-((3)-1-环戊氧基羰基-3-甲基-丁基氨甲酰基)-7-硝基-3,4-二氢-lH-异喹啉-2-羧酸叔丁酯(3.14§，6.24mmol)和Pd/碳(0.4g)悬浮于EtOAc(20ml)。将反应物在氢气(气球压力)下搅拌16小时。溶液通过硅藻土垫过滤并除去溶剂。粗产物(3.04g)无需进一步纯化便可用于下一步骤。LCMS纯度83。/。，m/z474[1Vf+H]十阶段5:偶联到树脂将辛二酸衍生的羟胺2-氯三苯甲基树脂(2,2g，以0.94mmol/g加载)在DCM/DMF(l:l，80ml)中溶胀。加入PyBOP(3.20g，6.15mmol)和二异丙基乙胺(3.54ml，20.7mmo1)。加入溶解在DMF(40ml)的阶段3的苯胺基酰胺(3.04g，6.43mmol)并将反应物振荡3天，然后除去滤液，对树脂进行标准洗涤并空气干燥。阶段6:(S)-2-([(S)-7-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-l,2,3,4-四氢-异喹啉-3-羰基]-氨基}-4-甲基-戊酸环戊酯(96)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage110</formula>将阶段5的结合树脂的环戊酯(600mg)与2%TFA/DCM(8ml)—起振荡30分钟，然后滤去树脂并在室温减压蒸发溶剂。粗产物通过制备型HPLC纯化以得到(8)-2-{[(8)-7-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-1,2，3，4-四氢-异喹啉-3-羰基]-氨基}-4-甲基-戊酸环戊酯(17.5mg)。除了切除树脂外，还除去boc基团。LCMS纯度98。/。，m/z545PvT+H]+，'HNMR(400顧z，MeOD)，5:0.85-0.88(6H，2xd，J=6.4Hz，J=6.5Hz，2xCH3)，1.30(4H，m，烷基)，1.50-1.65(13H，m，烷基)，1.80(2H，m，CH2)，1.95(2H，t，CH2)，2.25(2H，t，CH2),3.00(1H，m，CH)，3.25(IH，m，CH)，4.10(1H，m，CH)，4.25(2H，s，CH2)，4.29(1H，m，CH)，5.10(1H，m，CH)，7.11(IH，d,J=8.4Hz'Ar)，7.25(1H,d，J=8.3Hz，Ar)，7,55(2H，m，Ar)。阶段7:(S)-2-U(S)-7-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-l，2,3，4-四氢-异喹啉-3-羰基]-氨基卜4-甲基-戊酸(96)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage111</formula>将阶段5的环戊酯树脂(1.55g)悬浮于THF/MeOH(10ml/10ml)。在悬浮液中加入NaOH(1.4M水溶液，5ml)并将反应物室温振荡16小时。除去滤液，将树脂洗涤(标准洗涤)并干燥，然后切除。与2。/。TFA/DCM(8ml)—起振荡30分钟以进行有效切除(600mg树脂)，然后过滤树脂并在室温减压蒸发溶剂。粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(97)(73.4mg)。除了切除树脂外，还除去boc基团。LCMS纯度％%,m/z477pvT+H]+，'HNMR(400羅z，MeOD)，5:0.98-1.02(6H，2xd，J=6Hz,J=6.1Hz，2xCH3)，1.40(4H，m，烷基)，1.60-1.80(7H，m，烷基)，2.10(2H，t,J=7.4Hz，CH2)，2.39(2H，t，7.6Hz，CH2)，3.15(1H，dd，J=12.5Hz，J=16.6Hz，CH)，3.45(1H，dd，J=4.9Hz，J=17Hz，CH)，4.00(1H，s，CH)，4.20(1H，dd，J=4.7Hz，J=12.2Hz，CH)，4.40(2H，m，CH2)，4.55(1H，dd，J=4.7Hz，J=10Hz，CH)，7.25(1H，d，J=8.4Hz，Ar)，7.25(1H，d，J=8Hz，Ar)，7.55(1H，J=7Hz，Ar)。合成化合物(98)和化合物(99)丫m<formula>formulaseeoriginaldocumentpage112</formula>阶段1:(S)-4-甲基-2-(4-硝基-苯甲酰氨基)-戊酸环戊酯将L-亮氨酸环戊酯的TsOH盐(7.98g，21.51mmol)溶于THF(40ml)并加入三乙胺(6ml，21.5mmo1)。分批加入4-硝基苯甲酰氯(4g，21.5mmol)并用冰浴冷却。将反应物室温搅拌16小时然后蒸发至干。将残余物溶于DCM(100ml)并用饱和碳酸氢钠(3xl00ml)、1MHC1(3xl00ml)和盐水洗涤，干燥(Na2S04),并在真空下除去溶剂以得到5.25g所需产物(70%产率)，该产物无需进一步纯化便可用于下一步骤，LCMS纯度100%，m/z349[M^Hf阶段2:(S)-2-(4-氨基-苯甲酰氨基)-4-甲基-戊酸环戊酯将阶段1的硝基酰胺(5.25g，15.1mmol)溶于乙醇(100ml)。加入Pd/碳(200mg)并将反应物在氢气(气球压力)下室温搅拌16小时。将反应混合物通过硅藻土过滤并蒸发以得到3.9g所需的胺酰胺(amineamide)(81。/。产率)，该物质无需进一步纯化便可用于下一步骤，LCMS纯度100%，m/z319[Nf+Hf阶段3:偶联到树脂将辛二酸衍生的Wang羟胺树脂(1.6g，以1.8mmoI/g加载)在DCM(无水，20ml)中溶胀。逐滴加入l-氯-AUV-2-三甲基丙烯胺(1.15ml，8.64mmol)，然后室温振荡1小时。加入(S)-2-(4-氨基-苯甲酰氨基)-4-甲基-戊酸环戊酯(2.75g，8.64mmol)和三乙胺(2.4ml，17.63mmol)并将反应物室温振荡16小时。将树脂洗涤(标准洗涤)并空气干燥。阶段4:(S)-2-[4-(7-羟基氨甲酰基-庚酰氨基)-苯甲酰氨基]-4-甲基-戊酸环戊酯(98)将阶段3的结合树脂的环戊酯与2%TFA/DCM(10ml)—起振荡10分钟，然后过滤树脂并于室温减压蒸发溶剂。重复该过程(3次)，合并的粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(98)(36mg)。LCMS纯度9P/。，m/z490[M++H]+，NMR(400丽z，MeOD)，5:0.80-0.95(6H，2xCH3)，1.25(4H，m，烷基)'1.40-1.85(15H，m，'烷基)，2.00(2H，t，CH2)，2.30(2H，t，CH2)，4.45(1H，m，CH)，5.05(1H，m，CH)，7.60(2H，d，Ar)，7.75(2H，d，Ar)。阶段5:(S)-2-[4-(7-羟基氨甲酰基庚酰氨基)-苯甲酰氨基]-4-甲基-戊酸(99)99将化合物(98)(21mg，0.043mmol)溶于THF(lml)并加入2MNaOH(lml)。将反应瓶振荡16小时，然后在溶液表面用氮气吹扫以除去THF。水性残余物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(99)(5,2mg)。LCMS纯度92%，m/z422[M"+H]+，'HNMR(400画z，MeOD)，5:0.95-1.05(6H，m，2xCH3)，1.30-1.50(4H，m，烷基)，1.55-1.85(7H，m，烷基)'2.10(2H，t，CH2)，2.40(2H，t，CH2)，4.65(1H，m，CH)，7.65(2H，d，Ar)，7.80(2H，d，Ar)。合成化合物(100)和化合物(101)HR=环戊基100R=H101阶段1:5-((E)-2-乙氧基羰基-乙烯基)-lH』引哚-2-羧酸在微波试管中加入5-溴吲哚-2-羧酸(400mg，1.66mmol)和三-0-甲苯基膦(96mg,0.32mmo1)。加入丙烯酸乙酯(0.56ml，5.6mmol)、Et3N(0.92ml，6.6mmol)、乙腈(2.5ml)和Pd(OAc)2(40mg,0.18mmo1)。反应物放置在150W、9CTC的CEM微波中处理30分钟，斜坡时间(ramptime)为5分钟。加入EtOAc并通过硅藻土过滤反应混合物。硅藻土垫用DCM洗涤，除去合并的有机组分以得到黄色固体。将该固体重溶于DCM并用饱和碳酸氢钠萃取。含水层用DCM和二乙醚洗涤。水性碱性层用2MHC1酸化(pt^5)并将产物萃取入EtOAc。除去溶剂以得到所需产物(370mg，86%产率)。LCMS纯度86%，m/z260[Nf+Hf阶段2:5-((E)-2-乙氧基羰基-乙烯基)-lH-吲哚-2-羧酸将5-((E)-2-乙氧基羰基-乙烯基)-lH-吲哚-2-羧酸(430mg，1.66mmol)溶于EtOAc(100ml)。加入Pd/碳(100mg)并将反应物在氢气(气球压力)下搅拌18小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并用EtOAc洗涤。除去溶剂以得到所需产物，该产物无需进一步纯化便可用于下一步骤(0.47g)。LCMS纯度92%，m/z262|>^+司+阶段3:3-{2-[6-(四氢-吡喃-2-基氧基氨甲酰基)-己基氨甲酰基]-旧-吲哚-5-基}-丙酸乙酯将5-((E)-2-乙氧基羰基-乙烯基)-lH-吲哚-2-羧酸(0.427g，1.6mmol)溶于无水DMF(20ml)。加入EDCI.HC1(0.38g，2mmo1)、Et3N(0.59ml，4.3mmol)、HOBt(0.27g，2mmol)和7-氨基庚酸(四氢吡喃-2-基氧基)酰胺*(0.4g，1.6mmo1，溶于20ml无水DMF)并将反应物在氮气下室温搅拌16小时。加入水，将反应混合物酸化至pH-6-7(10n/。柠檬酸)并用DCM萃取。有机层用10%柠檬酸和饱和碳酸氢钠(><2)洗涤。溶剂在真空下除去以得到粗产物，粗产物通过层析(EtOAc:己烷1:2—EtOAc)纯化以得到黄色固体状的所需产物(550mg，69%产率)。LCMS纯度93%，m/z488[W+Hf阶段4:3-(2-[6-(四氢-妣喃-2-基氧基氨甲酰基)-己基氨甲酰基]-lH-吲哚-5-基)-丙酸将3-{2-[6-(四氢-妣喃-2-基氧基氨甲酰基)-己基氨甲酰基]-1&吲哚-5-基}-丙酸乙酯(550rng，1.13mmol)溶于THF/甲醇(50ml/25ml)。加入1.4MNaOH溶液(50ml)并将反应物室温搅拌4小时。将溶剂减少至约50%体积，加入1MHCl使pH为6-7。混合物用DCM萃取并用EtOAc进一步萃取。合并的有机层用Na2S04干燥并在真空下除去溶剂以得到357mg黄色粉末状的所需产物(69。/。产率)，该产物无需进一步纯化便可用于下一步骤。LCMS纯度94。/。，m/z460[M"+H;T阶段5:(3)-3-苯基-2-(3-{2-[6-(四氢-吡喃-2-基氧基氨甲酰基)-己基-氮甲酰基]-111-吲哚-5-基}-丙酰氨基)-丙酸环戊酯将3-(2-[6-(四氢-吡喃-2-基氧基氨甲酰基)-己基氨甲酰基]-lH-吲哚-5-基卜丙酸(0.357g'0.78mmol)溶于DCM/DMF(20m脂ml)。力口入EDCI.HC1(0.163mg,0.86mmo1)、三乙胺(0.24ml，1.7mmo1)、HOBt(0.116mg，0.88mmol)禾卩L-苯丙氨酸环戊酯的TsOH盐(0.346mg，0.88mmo1)，并将反应混合物在氮气下室温搅拌16小时。减小溶剂体积(约10ml)，加入DCM并用水(x3)洗涤有机层。将有机层干燥(Na2S04)并除去溶剂以得到所需产物(500mg，95%产率)，该产物无需进一步纯化即可使用。LCMS纯度77。/。，m/z675[Nf+H]+阶段6:(8)-2-{3-[2-(6-羟基氨甲酰基-己基氨甲酰基)-1^吲哚-5-基]-丙酰氨基}-3-苯基-丙酸环戊酯(100)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage116</formula>将(S)-3-苯基-2-(3j2-[6-(四氢-吡喃-2-基氧基氨甲酰基)-己基-氨甲酰基]-lH-吲哚-5-基}-丙酰氨基)-丙酸环戊酯(200mg.0.297mrno1)在TFA/DCM/MeOH(1.5ml/15ml/15ml)中室温搅拌3.5小时。再加入TFA(0.3ml)并将反应物再搅拌30分钟。将溶液真空浓縮，重悬于DCM并除去溶剂(x3)。粗材料通过制备型HPLC纯化以得到纯的化合物(100)(19.3mg)，LCMS纯度100%，m/z591[M^H]+，^NMR(4(K)MHz，MeOD)，S:1.27-1.70(16H，m，烷基)，1.97(2H，t，CH2),2.40(2H，t，J=7.84Hz，CH2)，2.76-2.85(4H，m，2xCH2)，3.25(2H，t，J=7Hz，CH2)，4.41(1H，m，丽CHCO，4.95(1H，m，CH)，6.85(1H，s，CH)，6.95(3H，m，Ar)，7.05(3H，m，Ar)，7.20-7.26(2H，s+d,J=8.5Hz，Ar)阶段7:(3)-2-{3-[2-(6-羟基氨甲酰基-己基氨甲酰基)-111-吲哚-5-基]-丙酰氨基}-3-苯基-丙酸(lOl)将化合物(100)(80mg,0.14mmol)溶于THF/MeOH(lmV0.5ml)并加入1.4MNaOH(0.5ml)。将反应物室温搅拌2小时。在溶液表面用氮气气流吹扫以除去THF，残余物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(101)(34.9mg)，LCMS纯度95%,m/z523[M^H]+，iHNMR(400應z，MeOD)，S:1.35-1.50(4H，m，烷基)，1.60-1.75(4H，m，烷基)，2.15(2H，brt，CH2)，2.55(2H，brt，CH2)，2.95(3H，m，CH+CH2)，3.10(1H，dd，CH)，4.65，(1H，m，NHCHCO)，7.00-7.15(7H，m，Ar)，7.35-7.41(2H，m，Ar)*制备7-氨基庚酸(四氢吡喃-2-基氧基)酰胺阶段1:6-(四氢-吡喃-2-基氧基氨甲酰基)-己基]-氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯在7-(9H-芴-9-基氧基羰基氨基)庚酸(lg，2.72mmol)的无水DCM/THF(15ml/15ml)溶液中加入EDCI.HCl(627mg，3.27mmo1)、HOBt(442mg，3.27mmol)和O陽(四氢-吡喃-2-基)-羟胺(383mg，3.27mmol)并在氮气下搅拌48小时。加入EDCI.HC1(260mg，1.36mmol)、HOBt(184mg，1.36mmol)和0隱(四氢-吡喃-2-基)-羟胺(159mg，1.36mmo1)并将反应物继续搅拌24小时。反应混合物用稀DCM(IOOml)、水(3xl00ml)和盐水(100ml)洗涤，干燥(Na2S04)，过滤并真空浓缩。通过层析(MeOH:DCM2:98)纯化得到白色固体(1.03g，81%)。阶段2:7-氨基-庚酸四氢-吡喃-2-基酯将6-(四氢-吡喃-2-基氧基氨甲酰基)-己基]-氨基甲酸9H-芴-9-基甲酯(300mg，0.644,01)溶于20%呃啶/DCM(30ml)并将反应物搅拌0.5小时。将反应物蒸发至干，重溶于DCM并蒸发(x3)。层析(MeOH:DCM:NH3)后得到120mg所需产物。LCMS纯度98%，m/z245[M++H]+。合成化合物(102)和化合物(103)R=环戊基102R=H103阶段l:加载树脂将Wang羟胺树脂(3.72g，1.8mmol/g)在DMF(50ml)中溶胀。加入HATU(7.5g，19.7mmo1)、5-硝基-l-苯并噻吩-2-羧酸(3g，13.45mmo，溶于150mlDMF)和二异丙基乙胺(4.65ml，26.7mmol)并将树脂室温振荡4天。将树脂过滤，用标准洗涤过程洗涤并空气干燥。阶段2:还原硝基将阶段1的树脂(4.9g，1.8mmol/g)在DMF(200ml)中溶胀并加入二水合氯化锡(19.9g，88mmo1)。将反应物室温振荡16小时。将树脂过滤，用标准洗涤过程洗涤并空气干燥。阶段3:4-(4-苄氧基羰基甲基-苯氧基)-丁酸甲酯将4-羟基苯基乙酸苄酯(9g，37mmol)溶于DMF(300ml)。加入粉末氢氧化钠(2.23g,56mmol)和4-溴丁酸甲酯(6.4ml，56mmol)并将反应物在6(TC加热16小时。在冷却的反应混合物中加入水并用1MHC1酸化该溶液(pH=5/6)。含水层用EtOAc萃取，有机层用水(x2)洗涤，用Na2S04千燥，过滤并蒸发至干。层析(EtOAc:庚烷1:2)后获得所需的二酯(9.56g，75%)LCMS纯度90%，m/z343[VT+H]+。阶段4:4-(4-羧甲基-苯氧基)-丁酸甲酯将4-(4-苄氧基羰基甲基-苯氧基)-丁酸甲酯(1.4g，4.09mmol)溶于EtOAc(60ml)。加入Pd/碳(100mg)并将反应物在氢气(气球压力)下室温搅拌16小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，垫子用EtOAc洗涤。将滤液蒸发至干以得到白色固体(1.03g，100%产率)。LCMS纯度93%，m/z253[1Vf+H〗+。阶段5:偶联到树脂将阶段2的树脂(0.18g，1.8mmol/g)在DMF(5ml)中溶胀。加入HATU(0.37g，0.96mmo1)、4-(4-羧甲基-苯氧基)-丁酸甲酯(0.247g，0.96mmo1，溶于10mlDMF)禾口二异丙胺(0.56ml，3.3mmol)并将反应物室温振荡16小时。过滤反应物，树脂用标准洗涤过程洗涤并空气干燥。阶段6:酯水解将阶段5的甲酯(280mg，1.8mmol/g)溶于THF/MeOH(4ml/4ml)并加入1.4MNaOH(8ml)。将反应物室温振荡16小时。将树脂过滤，用标准洗涤过程洗涤并空气干燥。阶段7:氨基酸偶联<formula>formulaseeoriginaldocumentpage120</formula>将阶段6的树脂(1.6g，1.8mmol/g)在无水DMF(120ml)中溶胀。加入HATU(3.3g，8.6mmo1)、L-苯丙氨酸环戊酯的TsOH盐(3.4g，8.6mmol)和二异丙胺(5ml，2.9mmo1)并将反应物室温振荡16小时。过滤反应物，树脂用标准洗涤过程洗漆并空气干燥。阶段8:(S)-2-(4-(4-[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-5-基氨甲酰基)-甲基]-苯氧基卜丁酰氨基)-3-苯基-丙酸环戊酯(102)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage120</formula>将阶段7的结合树脂的环戊酯与2%TFA/DCM(10ml)—起振荡10分钟，然后滤去树脂并在室温下减压蒸发溶剂。重复该过程(3次)，合并的粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(102)(22.5mg)。LCMS纯度99%，m/z644[N^+H]+，'HNMR(400MHz，MeOD)，S:1.45-1.80(6H，m，烷基)，1.95(2H，pent,CH2)，2.34(2H，t，J=7.3Hz,CH2)，2.90(1H，dd，CH)，3.04(1H，dd，CH)，3.62(2H，s，CH2)，3.86，(2H，m,CH2)，4.55(1H，m，NHCgCO)，5.07(1H，brs，CH)，6.83(2H，d，J=8.3Hz，Ar)，7.14-7.18(5H，m，Ar)，7.25(2H，d，J=8Hz，Ar)，7.47(IH，d，J=9Hz，Ar)，7.73(1H，s，Ar)，7.81(1H，d，J=8.8Hz)，8.25(1H，s，Ar)阶段9:(S)-2-(4-(4-[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-5-基氨甲酰基)-甲基]-苯氧基)-丁酰氨基)-3-苯基-丙酸<formula>formulaseeoriginaldocumentpage120</formula>(103)将阶段7环戊酯树脂(200mg)在THF/MeOH(2ml/2ml)中溶胀并加入1.4MNaOH(2ml)。将反应物室温振荡16小时。将树脂过滤并用标准洗涤过程洗涤。将结合树脂的羧酸与2%TFA/DCM(3ml)—起振荡10分钟，然后滤去树脂并在室温下减压蒸发溶剂。重复该过程(3次)，合并的粗产物通过制备型HPLC纯化以得到化合物(103)(33.7mg)。LCMS纯度88%，m/z576[M++H]+，'HNMR(400MHz，d6醫DMSO),S:1.93(2H，m，CH2)，2.30(2H，m，CH2)，2.91(1H，dd，J=9.9Hz，J=13.8Hz，CH)，3.13(1H，dd，J=4.8Hz，J=13.9Hz，CH)，3.67(2H，s，CH2)，3.91，(2H,m，CH2)，4.50(1H，m，NHCgCO),6.92(2H，d，J=8.7Hz，Ar)，7.24-7.34(7H，m，Ar)，7.61(1H，m)，7.92(1H,brs，Ar)，8.00(1H，d，J=8.8Hz,Ar)，8.31(1H，d，J=8.1Hz，Ar)，8.39(1H，s)，9.36(1H，brs)，10.36(1H，s)，11.52(IH，s)，12.76(1H，brs)合成图7的化合物，以化合物(104)和化合物(105)为例OR-环戊基113U5R=H114oR=环戊基116R=环戊基118R-H117R=H119步骤l:4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-苯甲酸0将4-氨基甲基苄醇(1.0g，6.60mmol)在THF(10mL)和水(10mL)的混合物中调成浆液。加入饱和碳酸氢钠溶液直到溶液的pH值>pH9。将混合物冷却至0'C并加入二碳酸二叔丁酯(2.89g，13.23mmol)。将反应物搅拌过夜然后在真空下除去THF。含水混合物用EtOAc(20mL)萃取，然后加入INHC1酸化至pH3。再用EtOAc(2x10mL傳取，将有机层合并，干燥(MgSO4)并蒸发至干以得到所需产物(1.60g，97%)。m/z252[IVT+Hf步骤2:(4-羟甲基-苄基)-氨基甲酸叔丁酯将LiAU(227mg，5.97mmol)在THF(5mL)和二嗯垸(5mL)的混合物中调成浆液并在氮气下冷却至0°C。将4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-苯甲酸溶于THF(5mL)和二嚼烷(5mL)的混合物并用15分钟逐滴加入到所述的已冷却的溶液中。使反应混合物回复室温并搅拌16小时。在反应混合物中加水(lmL)，然后通过硅藻土过滤。将滤液蒸发至干并使残余物在EtOAc(25mL)和水(25mL)之间分配。含水层用EtOAC(2x25mL)萃取，将有机层合并，干燥(Na2SO4)并蒸发至干以得到所需产物(460mg，100%)。m/z260[M^Naf步骤3:(4-甲酰-苄基)-氨基甲酸叔丁酯将(4-羟甲基-苄基)-氨基甲酸叔丁酯(480mg，0.71mmol)溶于DCM(3mL)并冷却至-78。C(干冰/丙酮)。将Dess陽Martin氧化齐'J(Dess-Martinperiodinane)(331mg，0.78mmol)加入反应物中，使其回复室温并搅拌3小时。加入饱和碳酸氢钠和亚硫酸钠的l:l溶液(20mL)并将反应混合物剧烈搅拌15分钟。将有机层分离，用饱和碳酸氢钠(10mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发至干以得到所需化合物(480mg，100%)。m/z258[^T+Na〗十步骤4:(S)-2-[4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-苄基氨基]-3-苯基-丙酸环戊酯将(4-甲酰-苄基)-氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.85mmol)溶于DCE(10mL)并在其中加入苯丙氨酸环戊酯(214mg，0.94mmo1)。将反应物室温搅拌15分钟。加入三乙酰氧基硼氢化钠(538mg，2.55mmol)和乙酸(60uL)并将反应物再搅拌1小时。加入饱和碳酸氢钠(IOml)并用DCM(20mL)稀释该溶液。将有机层分离并浓縮以得到所需产物，该产物无需进一步纯化便可用于下一步骤。111/2453[1^+11]+步骤5:(S)-2-(4-氨基甲基-节基氨基)-3-苯基-丙酸环戊酯用4MHC1的二嚼烷(lmL，0.25mmol)溶液处理(S)-2-[4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-苄基氨基]-3-苯基-丙酸环戊酯并室温搅拌1小时。将混合物蒸发至干并在EtOAc(20mL)和水(20mL)之间分配。在含水层中加入饱和碳酸氢钠(20mL)然后用EtOAc(3x20mL)萃取。将有机层合并，干燥(Na2S04)并蒸发至干以得到所需产物(263mg，2个步骤79°/。)。m/z353[M^Hf步骤6:(3)-2-[4-({[2-(1-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-苯并[1)]噻吩-6-基甲基]-氨基}-甲基)-苄基氨基]-3-苯基-丙酸环戊酯在氮气下将6-甲酰-苯并[b]噻吩-2-羧酸(l-异丁氧基-乙氧基)酰胺(方案7)(220mg，0.68mmol)和(S)-2-(4-氨基甲基-苄基氨基)-3-苯基-丙酸环戊酯(263mg，0.75mmol)溶于DCE(10mL)。加入三乙酰氧基硼氢化钠(430mg，2.04mmoI)和乙酸(50pL)并将反应物室温搅拌3小时。加入碳酸氢钠(20mL)并用二氯甲烷(3x50mL)萃取反应混合物。将有机层合并并浓縮。残余物通过柱层析(50。/。-100。/。EtOAc/庚烷)纯化以得到保护的化合物(80mg，21%)。m/z658Of+H^步骤7:(S)-2-(4-([(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基卜苄基氨基)-3-苯基-丙酸环戊酯(104)将(S)-2-[4-(([2-(l-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-苯并[b]噻吩-6-基甲基]-氨基)-甲基)-苄基氨基]-3-苯基-丙酸环戊酯溶于DCM(2mL)和MeOH(2mL)并用TFA(1mL)处理。将混合物室温搅拌l小时，然后浓縮至干并加入DCM(5mL)和庚烷(5mL)。混合物蒸发至干。该过程重复三次以得到油状化合物(104)(20mg，59%)。LCMS纯度95%，m/z558[M^H]十，1HNMR(300MHz，MeOD)，5:1.25-1.91(8H，m，4xCH2)，3.12-3.47(2H，m，CH2)，4.26(1H，m，CH)，4.33(2H，d，J-5.5Hz，CH2)，4.36(2H，s，CH2)，4.43(1H，s，CH2)，5.16(1H，s，CH)，5.13(1H，m，CH)，7.25-7.37(6H，m,ArH)，7.54-7.63(4H，m，ArH)'7.94(2H，m，ArH)，8.09(1H，s，ArH)。步骤8:(S)-2-[4-(U2-(l-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-苯并[b]噻吩-6-基甲基]-氨基卜甲基)-苄基氨基]-3-苯基-丙酸将(S)-2-[4-(([2-(l-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-苯并[b]噻吩-6-基甲基]-氨基》-甲基)-苄基氨基]-3-苯基-丙酸环戊酯(40mg，0.06mmol)溶于THF(2mL)和水(2mL)。加入LiOH(8mg，0.30mmol)并将反应混合物在5(TC加热36小时。蒸发除去THF，将残余物在水(IOmL)和EtOAc(10mL)之间分配。分离含水层并加入1MHC1将pH调至3。用EtOAc(3x20mL)萃取，将有机层合并并蒸发至干。步骤9:(S)-2-(4-U(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基卜节基氨基)-3-苯基-丙酸(105)将(S)-2-[4-U[2-(l-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-苯并[b]噻吩-6-基甲基]-氨基)-甲基)-苄基氨基]-3-苯基-丙酸溶于MeOH(2mL)和THF(2mL)。在混合物中加入TFA(lmL)并室温搅拌1小时。将反应混合物浓縮至干并加入DCM(5mL)和庚烷(5mL)。将混合物蒸发至干。该过程重复三次以得到粉红色固体状的化合物(105)(17mg，57%)。LCMS纯度90%，m/z4卯[Nf+H]+，1HN證(300MHz，MeOD)，5:3.33(2H，m，CH2)，4.19(1H，m，CH2)，4.29(2H，s，CH2)，4.35(2H，s，CH2)，4.42(2H，s，CH2)，7.29-7.39(5H，m，ArH)，7.54-7.72(5H，m，ArH)，7.88(1H，s，ArH)，8.00(1H，dJ=8.0Hz，ArH)，8.08(1H，s，ArH)以下化合物按照为化合物(104)和化合物(105)描述的方法制备(8)-2-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[1)噻吩-6-基甲基)-氨基-甲基}-苄基氨基)-3-(4-羟基-苯基)-丙酸环戊酯(106)LCMS纯度98%,m/z574OvT+H]+，'HNMR(300MHz，MeOD)，S:1.30-1.87(8H，m，4xCH2)，2.97-3.35(2H，m，CH2)，4.17(1H，m，CH)，4.31(2H，d，J=5.4Hz，CH2)，4.36(2H，s，CH2)，4.42(2H，s，CH2)，5.11-5.16(1H，m，CH)，6.77(2H，d，J=8.4Hz，Ar-H)，7.06(2H，d，J=8.4Hz，Ar-H)，7,54-7.65(5H，m，Ar-H)，7.87(1H，s，Ar-H)，7.99(1H，d，J=8.4Hz，Ar-H)，8.08(1H，s，Ar陽H)(8)-2-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[1)噻吩-6-基甲基)-氨萄-甲基}-苄基氨基)-3-(4-羟基-苯基)-丙酸(107)LCMS纯度90%，m/z505[ivT+H]+，iHNMR(300MHz，MeOD)，S:3.09-3.27(2H，m，CH2)，4.03(1H，m，CH)，4.24(2H，s，CH2),4.34(2H，s，CH2)，4.42(2H，s，CH2)，6.76(2H，dJ^8.3Hz，Ar-H)，7.11(2H，dJ-8.5Hz，Ar-H)，7.56-7.59(5H，m，Ar-H)，7.89(1H，s，Ar-H),8.02(1H，d，J=8.4Hz，Ar-H)，8.08(1H，s，Ar隱H)(S)-3-叔丁氧基-2-(4-U(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲萄-氨萄-甲基卜苄基氨基)-丁酸环戊酯(108)LCMS纯度99。/。，m/z568[M++H]+，]HNMR(300MHz，MeOD)，S:1.20(9H，s，3xCH3)，1.29(3H，d，J=6.6Hz，CH3)，1.67-1.94(8H，m，4xCH2)，3.75(1H，d，J=2.7Hz，CH)，4.29-4.32(1H，m，CH)，4.36(4H，d，J=2.4Hz，2xCH2)，4.43(2H，s，CH2)，5.22-5.25(1H，m，CH)，7.54-7.65(5H，m，Ar-H)，7.88(1H，s，Ar-H)，8.01(1H，d，J=8.1Hz,Ar陽H)，8.08(1H，s，Ar-H)(S)-3-叔丁氧基-2-(4-U(2-羟基氨甲酰基-苯并[bj噻吩-6-基甲萄-氨萄-甲基卜苄基氨基)-丙酸环戊酯(109)LCMS纯度95%，m/z554[Ivf+H]十，JHNMR(300MHz，MeOD)，5:1.23(9H，s，3xCH3)，1.67-1.98(8H，m，4><CH2)，3.87-3.98(2H，m，CH2)，4.19-4.22(1H，m，CH)，4.34-4.36(4H，m，2><CH2)，4.42(2H，s，CH2)，5.31-5.35(1H，m，CH)，7.54-7.62(5H，m，Ar-H),7.87(1H，s，Ar-H)，8.00(1H，d，J=8.1Hz，Ar-H)，8.08(1H，s，Ar邻(S)-2-(4-U(2-羟基氨甲酰基-苯并[b噻吩-6-基甲基)-氨基-甲基卜苄基氨基)-4-甲硫基-丁酸环戊酯(UO)LCMS纯度90%,m/z541[M++H]+，iHNMR(300MHz，MeOD)，5:1.70-1.98(8H，m，4xCH2)，2.11(3H，s，CH3)，2.17-2.34(2H，m，CH2)，2.54-2.73(2H,m，CH2)，4.19-4.23(1H，m，CH)，4.27-4.42(6H，m，3xCH2)，5.35-5.39(1H，m，CH),7.54-7.63(5H，m，Ar-H)，7.87(1H，s，Ar-H)，7.97-8.00(1H，m，Ar-H)，8.08(1H，s，Ar-H)(S)-l-(4-U(2-羟基氨甲酰基-苯并[b噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基)-吡咯垸-2-羧酸环戊酯(lll)LCMS纯度96。/。，m/z508[N^+H]+，NMR(300MHz，MeOD)，5:1.66-2.29(12H，m，6xCH2)，3.59-3.67(2H，m，CH2)，4.38-4.46(6H'm，3xCH2)，4.62(1H，d，J=12.3Hz，CH)，5.21(1H，m，CH)，7.61-7.68(5H，m，Ar-H)，7.88(1H，s，Ar-H)，8.00-8.02(m，m，Ar國H)'8.13(1H，s，Ar-H)(8)-1-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[1>1噻吩-6-基甲基)-氨基卜甲基}-苄基)-吡咯烷-2-羧酸(U2)LCMS纯度100。/。，m/z440[M++H]+，!H雨R(300顧z，MeOD)，S:1.96-2.09(2H，m，CH2)，2.14-2.23(2H，m，CH2)，2.52-2.65(1H，m，CH2)，3.56-3.67(1H，m，CH2)，4.19-4.25(1H，m，CH),4.36-4.57(6H，m，3xCH2)，7.55-7.64(5H，m，Ar-H)，7.88(1H，s，Ar-H)，7.99-8.01(1H,m，Ar-H)，8.09(1H，s，Ar-H)(R)-3-叔丁硫基-2-(H[(2-羟基氨甲酰基-苯并[bl噻吩-6-基甲基)-氨萄-甲基p苄基氨基)-丙酸环戊酯(113)LCMS纯度97。/。，m/z570[M+H]+，'H蘭R(300MHz，MeOD)，5:1.36(9H，s)，1.79(8H，m)，3.16(2H，d，5.3Hz)，4.25(2H，t，J=5.6Hz)，4.31(2H，s)，4.36(2H,s)，4.42(2H，s)，5.34(m，m)，7.56(1H，d，J=8.1Hz)，7.62(4H，s)，7.89(1H，s)，8.09(1H，s)，8.51(m，d，J=8.1Hz)，(R)-3-叔丁硫基-2-(4-U(2-羟基氨甲酰基-苯并[bl噻吩-6-基甲基)-氨萄-甲基)-苄基氨基)-丙酸(U4)LCMS纯度97。/。，m/z502[M]+，'H画R(300固z，MeOD),5:1.35(9H,s，3xCH3)，3.09(2H，m，CH2)，3.22(2H，m，CH2)，3.83(1H，t，J=8.8Hz，CH)，4.34(2H，s，CH2)，4.42(2H，s，CH2),7.57(1H，d，J=10.0Hz，ArH)，7.62(4H，s，ArHx4)，7.89(1H，s，ArH)，8.02(1H，d，J=8.1Hz，ArH)，8.09(1H，s，ArH)。(S)-2-(H(2-羟基氨甲酰基-苯并Ib噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-3，3-二甲基-丁酸环戊酯(115)LCMS纯度94。/。，m/z546[M+Na]+，'HNMR(300MHz，MeOD)，S:1.08(9H，s，3xCH3)，1.80(8H，m，4><CH2)，3.49(1H，s，CH)，4.29(2H，d，J=13.5Hz，CH2)，4.29(2H，d，J=13.5Hz，CH2)，4.36(2H,s,CH2)，4.44(2H，s，CH2)，5.19(1H，t，J=5.7Hz)，7.59(5H，m，ArHx5)，7.88(1H，ArH)，8.00(1H，d，J=8.3Hz)，8.09(1H，s，ArH)。(S)-环己基-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b噻吩-6-基甲基)-氨基l-甲基}-苄基氨基)-乙酸环戊酯(U6)LCMS纯度100。/。，m/z550[M+H]+，NMR(300MHz，MeOD)，S:0.86-1.95(18H,m，9xCH2)，3.73(1H，m，CH)，4.11(1H，dJ=5.7Hz，CH)，4.19(2H，s，CH2)，4.26(2H，s，CH2)，4.36(2H，s,CH2)，7.53(5H，m，ArH)，7.77(1H，s，CH)，7.82(1H,dJ=11.6Hz，ArH)，8.02(1H，s，ArH)(8)-环己基-(4-{[(2-羟基氨甲酰基-苯并[1>噻吩-6-基甲基)-氨基-甲基}-节基氨基)-乙酸(U7)LCMS纯度100Q/。，m/z482[M+H]+，NMR(300MHz，MeOD),5:0.72-1.60(IOH，m，9xCH2)，3.89(1H，m,CH)，4.11(3H，m，CH)，4.23(2H，s，CH2)，4.31(2H，s，CH2)，7.48(5H，m，ArH)，7.76(1H，s，CH)，7.88(1H，dJ=11.6Hz，ArH)，7.98(1H，s，ArH)。(S)-2-(4-U(2-羟基氨甲酰基-苯并[bl噻吩-6-基甲基)-氨基卜甲基)-苄基氨基)-4-甲基-戊酸环戊酯(122)LCMS纯度940/。，m/z524[M++H]+，1HNMR(300MHz，MeOD)，S:1.01(6H，s，2xCH3)，1.28(1H，m，CH)，1.56-1.95(IOH，m，4xCH2，CH2)，4.00-4.43(6H，m，3xCH2)，4.88(m，m，CH)，5.36(1H，brs，CH)，7.47-7.62(5H，m，ArH)，7.94(2H，t，ArH)，8.08(1H，s，ArH)。(S)-2-(4-U(2-羟基氨甲酰基-苯并[bl噻吩-6-基甲基)-氨基-甲基)-苄基氨基)-4-甲基-戊酸(123)LCMS纯度980/0，m/z456pvT+H]+'lHNMR(300画z'MeOD)，5:1.00(6H，m，2xCH3)，1.86(2H，m,CH2)，3.86(1H，m，CH)，4.29(2H，s，CH2)，4.36(2H，s，CH2)，4.43(2H，s，CH2)，7.56(1H，m,ArH)，7.89(1H，s，CH)，8.02(1H，dJ=8.2Hz，ArH)，8.09(1H，s，ArH)。(S)-(H[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b噻吩-6-基甲基)-氨基-甲基)-节基氨基)-苯基-乙酸环戊酯(124)LCMS纯度卯。/。，m/z544[Nf+H]+，1HNMR(300MHz，MeOD)，S:1.31-1.91(IOH，m，4xCH2，CH2)，4.22(2H，ddJ=13.1Hz，CH2)，4.35(2H，s，CH2)，4.42(1H，s，CH2)，5.16(1H，s，CH)，5.30(1H，m，CH)，7.47-7.62(9H，m，ArH)，7.94(2H，m，ArH),8.08(1H，s,ArH)。(S)-(4-U(2-羟基氨甲酰基-苯并[bl噻吩-6-基甲基)-氨萄-甲基p苄基氨基)-苯基-乙酸(125)LCMS纯度1000/0，m/z476[^T+H]+，lHN魔(300丽z，MeOD)，5:4.08-4.24(3H，m，CH，CH2)，4.35(2H，s，CH2)，4.43(1H，s，CH2)，7.46-7.75(IOH，m，ArH)，7.89(1H，s，ArH),8.01(1H，dJ=7.9Hz,ArH)，8.09(1H，s，ArH)以下化合物按照为化合物(104)和化合物(105)描述的方法制备，步骤3和4采用下述可替换方法步骤3b:(4-溴甲基-苄基)-氨基甲酸叔丁酯将N-溴琥珀酰亚胺(5.13g，28.8mmol)溶于DCM(80mL)并冷却至(TC。制备三苯基膦(7.18g，27.0mmol)的DCM(20mL)溶液并将其加入所述已冷却的溶液中，然后加入吡啶(l.OmL，1.26mmol)。将步骤2的材料(2.14g，9.0mmol)溶于DCM(20mL)并加入，然后使反应物回复室温并搅拌16小时。浓缩混合物，残余物通过柱层析(50。/。/50。/oEtOAc/庚垸)纯化以得到所需化合物(864mg，32%)。m/z301[IvT+Naf步骤4b:(S)-2-[4-(叔丁氧基羰基氨基-甲萄-节基氨萄-丙酸环戊酯将L-丙氨酸环戊酯(463mg,1.41mmo)溶于DMF(9mL)并在其中加入DIPEA(0.74mL，4.24mmol)。将混合物室温搅拌15分钟，然后用1小时逐滴加入步骤3b所得材料(212mg，0.706mmol)的DMF(5mL)溶液。然后室温搅拌反应物16小时，之后用水(50mL)和EtOAc(50mL)稀释。有机层用盐水(2x50mL)洗涤，干燥并浓缩以得到粗材料(0.26g，100%)，其无需进一步纯化便可用于下一步骤。m/z377步骤5-9如对化合物(104)和化合物(105)的描述<formula>formulaseeoriginaldocumentpage129</formula>(S)-2-(4-U(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基卜苄基氨基)-丙酸环戊酯(118)LCMS纯度95。/。，m/z482[Ivt+H]+，'HNMR(300MHz，MeOD)，S:1.61(3H，d，J=7.2Hz，CH3)，1.71-1.97(8H，m,4><CH2)，4.13(1H，q,J=7.2Hz，CH)，4.30(2H，s，CH2)，4.36(2H，s，CH2)，4.43(2H，s，CH2)，5.33-5.36(1H，m，CH)，7.54-7.63(5H，m，Ar-H)，7.88(1H，s，Ar-H)，8.00(1H，d，J=8.1Hz，Ar-H)，8.08(1H，s，Ar邻<formula>formulaseeoriginaldocumentpage130</formula>(S)-2-(4-U(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-丙酸(119)LCMS纯度950/0，m/z414[M++H〗+，'HNMR(300MHz，MeOD)，S:1.64(3H，d'J=7.1Hz，CH3)，楊-4.4(lH,m,CH),4.31(2H,s，CH2)，4.36(2H，s，CH2)，4.43(2H，s,CH2)，7,55-7.63(5H，m，Ar-H)，7.88(1H，s，Ar-H)，8.00(1H，d，J=8.1Hz，Ar-H),8.09(1H，s，Ar陽H)以下化合物按照为化合物(118)和化合物(119)描述的过程制备，包括以下替换/额外步骤步骤4b:[4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-苄基氨基]-乙酸环戊酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage130</formula>过程如步骤4a(采用环戊酯的HC1盐)产物m/z363[M++H]+步骤4c:[[4-(叔丁氧基羰基氨基-甲萄-节蜀-(9H-莉-9-基甲氧基-羰基)-氨基]-乙<formula>formulaseeoriginaldocumentpage130</formula>在[4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-苄基氨基]-乙酸环戊酯(0.2g，0.55mmol)和lM酸环戊酯Na2C03(1.1mL，1.1mmol)的DCM(2mL)溶液中边搅拌和冰浴冷却边缓慢加入氯甲酸9-芴基甲基酯(0.14g，0.55mmol)的二噁烷(1.4mL)溶液。将混合物在冰浴中搅拌4小时并在室温搅拌过夜。将混合物倒入水(卯mL)中并用二乙醚萃取。将有机萃取物合并，干燥(MgSO4)并蒸发至干以得到所需产物(0.32g，100%)。1^2607[^+,〗+步骤5a:[(4-氨基甲基-节基)-(9H-芴-9-基甲氧基羰基)-氨基]-乙酸环戊酯过程如步骤5中所述。产物m/z485[M++H]+步骤6a:((9H-芴-9-基甲氧基羰基)-[4-(U2-(l-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-苯并[b〗噻吩-6-基甲基]-氨基}-甲基)-苄基]-氨基}-乙酸环戊酯过程如步骤6中所述。产物m/z790[VT+H]+步骤7a:(4-([(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基}-苄基氨基)-乙酸环戊酯(120)将{(附-芴-9-基甲氧基羰基)-[4-({[2-(1-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-苯并[b]噻吩-6-基甲基]-氨基}-甲基)-苄基]-氨基卜乙酸环戊酯(0.11g，0.14mmol)溶于乙腈(3mL)并在其中加入哌啶(1.5mL)。将所得混合物室温搅拌l小时。将溶剂蒸发至干并将产物分成2份。对于其中l份将环戊酯水解，而将另一份溶于DCM(1.5mL)并与4MHC1的二嗯烷(1.0mL)溶液一起搅拌2小时。将溶剂蒸发至干，产物通过制备型HPLC纯化以得到所需产物，其为TFA盐。LCMS纯度99°/。，m/z468[Nf+H]+，^NMR(300應z，MeOD)，5:8.09(1H，s，ArH)，8.00(1H，d，J=8.3Hz，ArH)，7.88(1H，s，ArH)，7.54-7.65(5H，m，ArH)，5.31-5.35(1H，m，CH)，4.43(2H，s，CH2)，4.35(2H，s，CH2)，4.31(2H，s，CH2)，3.96(2H，s，CH2)，1.65-1.93(8H，m，4xCH2)步骤9a:(4-U(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基卜苄基氨基)-乙酸(m)121过程如步骤9中所述。LCMS纯度99。/。，m/z400[M++H]+，'HNMR(300MHz,MeOD)，S:8.09(1H，s，ArH)，8.00(1H，d，J=8.3Hz，ArH)，7.89(1H，s，ArH),7.54-7.62(5H，m，ArH)，4.43(2H，s，CH2)，4.35(2H，s，CH2)，4.32(2H，s，CH2)，3.93(2H，s，CH2)合成图8的化合物，以化合物(126)和化合物(127)为例R=环戊基126R=环戊基128R=H127R=H129图8阶段l:4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基-环己烷羧酸将溶于40ml二嚼烷和40ml水的反-4-(氨基甲基)环己烷羧酸(lg，6.4mmol)和氢氧化钠(256mg,6.4mmol)的溶液边搅拌边在冰水浴中冷却。加入二碳酸二叔丁酯(1.39g，6.4mmol)并将混合物室温搅拌5小时，然后静置过夜。将溶液真空浓縮并用2NHCI酸化至pH2。酸化的含水层用EtOAc萃取3次。将有机层合并并用盐水洗涤。有机层通过硫酸镁干燥并蒸发至干。所得产物为白色固体(l.lg，64%产率)。^NMR(300MHz，CDC13)，S:0.86-1.07(2H，m，CH2),1.34-1.53(11H，m，boc和CH2)，1.84(2H，dd，J-13.0，2.3Hz，CH2)，2.05(2H，dd，CH2)，2.18-2.35(1H，m，CHCH2)，2.99(2H，t，J=6.3Hz，CJ^NH)'4.59(1H，br.s，CgCOOH)，II.0(1H，br.s，COOH)。阶段2:(4-羟甲基-环己基甲基)-氨基甲酸叔丁酯将氢化铝锂(465mg，12.2mmol)悬浮于无水THF(10m)并在氮气下冷却至0'C。缓慢加入4-(叔丁氧基-羰基-氨基-甲基-环己烷羧酸(Ug，4.1mmol)的THF和二嗯烷(10ml，l:l)溶液并将混合物室温搅拌过夜。逐滴加入水以猝灭过量的氢化铝锂。过滤并用THF(10ml)和MeOH(10ml)洗涤滤饼。真空浓缩滤液并用1NHCl酸化至pH2。水层用EtOAc萃取两次。有机层通过硫酸镁干燥，过滤并蒸发至干以得到964mg产物(97%产率)。'H羅R(300MHz，CDC13)，5:0.81-1.08(4H，m，2><CH2)，1.33-1.60(10H，m，boc和CH)，1.82(4H，d，月.7Hz，2xCH2)，2.98(2H，t'J二6.4Hz，賜NH)，3.46(2H，d，J-6.4Hz，C逸OH)，4.60(1H，br.s，CH)阶段3:(4-甲酰-环己基甲基)-氨基甲酸叔丁酯将(4-羟甲基-环己基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(965mg，4.0mmol)溶于DCM(20ml)并冷却至-78。C。将DessMartin试剂(2.52g，6.0mmol)溶于DCM(30ml)并缓慢加入阶段2的醇的溶液中。然后将反应混合物室温搅拌3小时。将所得溶液倒入饱和的NaHC03和Na2S203溶液(l:l，100ml)同时剧烈搅拌。将有机层分离并用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并蒸发至干以得到产物(786mg，82%产率)。'HNMR(300MHz，CDC13)，S:0.83-1.01(2H,m，CH2)，1.15-1.24(2H，m，CH2),1.34(9H，s，Boc)，1.75-1.88(2H，m，CH2)，1.90-2.00(2H，m，CH2)，2.05-2.18(1H，m，CH)，2.93(2H，t，7=6.4Hz，Qi^NH),4.53(1H，br.s，C旦CHO)，9.55(1H，s，CHO)阶段4:(S)-([4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-环己基甲基]-氨基)-苯基-乙酸环戊酯将(4-甲酰-环己基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(3卯mg，1.61!111101)和(3)-氨基-苯基-乙酸环戊酯(394mg，1.8mmol)在DCE(6ml)中室温搅拌25分钟。加入乙酸(9.6ul，0.16mmo1)和三乙酰氧基硼氢化钠(1.0g，4.8mmol)并将所得混合物在室温下搅拌1小时30分钟。加入DCM(0m)和饱和NaHCO3溶液(10ml)并分离各相。含水相用EtOAc(2xl0ml)萃取，有机相通过硫酸镁干燥，过滤并蒸发至干。粗产物通过柱层析(8:2庚烷/EtOAc)纯化以得到223mg纯的胺(31%产率)。LCMS纯度100%,m/z445[Nf+H]+。阶段5:(S)-[(4-氨基甲基-环己基甲基)-氨基]-苯基-乙酸环戊酯将(S)-U4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-环己基甲基]-氨基)-苯基-乙酸环戊酯(223mg，0.5mmol)在DCM(4ml)中搅拌，加入TFA(lml)并将混合物室温搅拌2小时。将溶液真空浓缩，溶解在DCM中，用饱和NaHC03溶液洗涤2次并用饱和盐水溶液洗涤1次。有机相通过硫酸镁干燥，过滤并蒸发以得到所需的胺，其为黄色油状物(130mg，75%产率)。LCMS纯度100。/。，m/z345[N^+H]+。阶段6:(S)-[(4-([(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-甲基卜环己基甲基)-氨基]-苯基-乙酸环戊酯(126)将阶段5的胺(130mg，0.38mmol)与6-甲酰-苯并[b]噻吩-2-羧酸(l-异丁氧基-乙氧基)酰胺(方案7)(110mg，0.34mmol)的DCE溶液一起室温搅拌30分钟。加入乙酸(2.1ul，0.03mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(218mg，l.Ommol)，所得混合物室温搅拌过夜。将混合物真空浓縮，溶解在EtOAc中，用饱和NaHCO3溶液(10ml)和盐水(10ml)洗涤。有机相通过硫酸镁干燥，过滤并蒸发至干。粗产物(167mg)通过制备型HPLC纯化以得到淡粉色固体状的化合物(126)。LCMS纯度86%，m/z550[VT+H]+，约10%羧酸。'HNMR(300MHz，MeOD)，5:1.08(4H,m，2xCH2)，1.76(14H，m，6xCH2禾口2xCH)，2.81(4H，m，2xC腿H)，4.35(2H，s，賜NH)，5.12(1H，s，QJNH)，5.30(1H，m，OCH)，7.51(6H，m，Ar)，7.85(1H，s，Ar)，7.96(1H，d，Ar)，8.08(1H，s，Ar)。合成((S)-[(4-U(2-羟基氨甲酰基-苯并问噻吩-6-基甲基)-氨基j-甲基卜环己基甲基)-氨基1-苯基-乙酸(127)阶段1:(SH[4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-环己基甲基]-氨基》-苯基-乙酸叔丁西将(4-甲酰-环己基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(899mg，3.7mmol)和(S)-叔丁基苯基甘氨酸酯(850mg，4.1mmol)在DCE(20ml)中搅拌30分钟。加入乙酸(20ul，0.37mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(2.37g，11.1mmol)并将反应混合物室温搅拌3小时。加入DCM(10ml)和饱和NaHCO3溶液(20ml)并将各相分离。水相用EtOAc(20ml)萃取。有机相通过硫酸镁干燥，过滤并真空浓縮。粗产物(2.4g)用柱层析(7:3庚烷/EtOAe)纯化以得到所需产物(385mg，24%产率)。LCMS纯度100%，m/z433[VT+H]+。阶段2:(SH[4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-环己基甲基]-氨基)-苯基-乙酸叔丁酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage136</formula>将(S)《4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-环己基甲基]-氨基)-苯基-乙酸叔丁酯(385mg，0.9mmol)在DCM(5ml)中搅拌，加入TFA(2ml)并将混合物室温搅拌30分钟。将溶液真空浓縮，溶解在EtOAc(5ml)中，用NaHC03饱和溶液(2x5ml)洗涤两次并用饱和盐水溶液(5ml)洗涤1次。有机相通过硫酸镁干燥，过滤并蒸发以得到所需胺，其为黄色油状物(2卯mg，97%产率)。LCMS纯度100M，m/z333[M++H〗+。阶段3:(SH[4-(([2-(l-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-苯并[b]噻吩-6-基甲基]-氨基V甲基)-环己基甲基]-氨基}-苯基-乙酸叔丁酯将(S)-([4-(叔丁氧基羰基氨基-甲基)-环己基甲基]-氨基h苯基-乙酸叔丁酯(290mg，0.9mmol)和6-甲酰-苯并[b]噻吩-2-羧酸(l-异丁氧基-乙氧基)酰胺(方案7)(255mg，0.8mmol)在DCE(8ml)中搅拌30分钟。加入乙酸(4ul，0.08mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(504mg，2.4mmol)并将反应混合物室温搅拌1小时30分钟。加入DCM(5ml)和NaHCO3饱和溶液(10ml)并分离各相。水相用EtOAc(15ml)萃取。有机相通过硫酸镁干燥，过滤并真空浓縮。粗产物(543mg)用柱层析(5-10。/。的MeOH的DCM溶液)纯化以得到所需的纯产物(172mg，34%产率)。LCMS纯度100%，m/z638[M十+H]+。阶段4:(SH[4-(([2-(l-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-苯并[b]噻吩-6-基甲基]-氨基卜甲基)-环己基甲基]-氨基}-苯基-乙酸叔丁酯(127)将(S)-U4-({[2-(1-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-苯并问噻吩-6-基甲基]-氨基}-甲基)-环己基甲基]-氨基卜苯基-乙酸叔丁酯(172mg，0.27mmol)在4MHC1的二嗎烷溶液(2ml)中室温搅拌30分钟。将溶液蒸发至干以得到化合物(127)，其为米色固体(123mg，95%产率)。LCMS纯度98。/。，m/z482[VT+H]+。'HNMR(300固z，MeOD)，5:1.10(4H，m，2xCH2)，1.80(6H，m，2xCH2and2xCH)，2.88(2H，dd，C逸NH)，2.94(2H，d，賜,，4.36(2H，s，賜NH》5.07(1H，s，CH)，7.53(6H，m，Ar)，7.87(1H，s，Ar)，7.97(1H，d，Ar)，8.12(1H，s，Ar)。以下化合物按照为化合物(126)和化合物(127)描述的方法制备(S)-2-[(H(2-羟基氨甲酰基-苯并[bl噻吩-6-基甲基)-氨基j-甲基l环己基甲基)-氨基-4-甲基-戊酸环戊酯(128)LCMS纯度86°/。，m/z530[IVf+H]+，^NMR(300MHz，MeOD)，S:0.99(6H，t，J=6Hz，2xCH3)，1.11(4H，t，J=8.1Hz，2xCH2)，1.76(20H，m，2xCH和9xCH2)，2.80(1H，m，CH)，2.97(4H,m，2xC,H)，3.95(1H，m，CH)，4.35(2H，s，Qi2NH)，5.32(1H，m，OCH)，7.54(1H，d，J=6Hz，Ar)，7.84(1H，s，Ar)，7.94(1H，d，J=9Hz，Ar)，8.08(1H，s，Ar)。(S)-2-[(4-U(2-羟基氨甲酰基-苯并[b噻吩-6-基甲基)-氨基l-甲基)-环己基甲基)-氨基-4-甲基-戊酸(129)LCMS纯度95%，m/z462[M十+H]+，'HNMR(300MHz，MeOD)，5:1.00(6H，t，风3Hz，2xCH3)，1.10(4H，m，2>CH2)，1.85(8H，m，2xCH和3xCH2)，2.94(4H，m，2x賜NH)，3.91(1H，m，C,H)，4.36(2H，s，CHa卿，7.54(1H，d，J=7.8Hz，Ar)，7.85(1H，s，Ar)'7.95(1H，d，J=8.1Hz，Ar)，8.08(1H，s)。合成图9的化合物，以化合物(130)为例oo<formula>formulaseeoriginaldocumentpage138</formula>132<formula>formulaseeoriginaldocumentpage138</formula>133<formula>formulaseeoriginaldocumentpage138</formula>134阶段1:(S)-[(3-硝基-苄基)-氨基]-苯基-乙酸环戊酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage138</formula>在苯基甘氨酸环戊酯对甲苯磺酸盐(3.08g，7.8mmol)的DCE(120ml)溶液中加入3-硝基苯甲醛(1.01g，6.7mmo1)，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(3.03g)。将混合物搅拌3.5小时，然后加入饱和碳酸氢钠溶液(200ml)进行淬灭。产物用DCM(250ml)萃取，将有机萃取物干燥(MgS04)。产物无需进一步纯化即可进行下面的步骤。阶段2:(S)-[(3-硝基-节基)-叔丁氧基羰基-氨基]-苯基-乙酸环戊酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage138</formula>在DCM(50ml)中的(S)-[(3-硝基-苄基)-氨基]-苯基-乙酸环戊酯的粗制混合物中加入二碳酸二叔丁酯(3.38g，15.6mmo1)。混合物在5(TC加热过夜，然后冷却至室温。然后加入MW-三甲基乙二胺(2ml)并将混合物搅拌2小时。然后将混合物倒入乙酸乙酯(150ml)并用lMHCl(3X50ml)洗涤，干燥(MgS04)并浓縮以得到所需的无色油状产物(1.509g'42%产率)。LCMS纯度98。/。，m/z477(M+Na+)。&NMR(300MHz,d6-DMSO)，.5:7.97(1H，dd，J=2.1，9Hz),7.15-7.45(8H，m)，5.60-6.00(1H，m)，5.20-5,35(1H，m)，4.65-4.82(1H，m),4.21(1H，d，JN16Hz)，1.30-1.95(17H，m)阶段3:(S)-[(3-氨基-苄基)-叔丁氧基羰基-氨基]-苯基-乙酸环戊酯在(S)-[(3-硝基苄基)-叔丁氧基羰基-氨基]-苯基-乙酸环戊酯(1.509g，3.32mmol)的乙醇(IOml)溶液中加入碳载钯(10。/。，0.38g，0.36mmo)。将烧瓶排空并重新填满氢气。将混合物搅拌过夜，然后通过硅藻土过滤，用乙醇(150ml)洗涤并浓縮以得到所需无色油状产物(1.351g，96%产率)。iHNMR(300MHz，CDC13)，S:7.19-7.42(5H，m)，6.97(1H，t，J=7.5Hz)，6.46(2H，dd，J=8.1，16.5Hz)，6.29(1H，brs)，5.58(1H，brs)，5.29(1H，brs)，4.69(1H，brs)，4.00(1H，d，J=15.9Hz)，3.74(1H，q，J=6.9Hz)，3.51(2H，brs)，1.20-2.00(17H，m)阶段4:(SH叔丁氧基羰基-(3-([2-(l-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-苯射b]-噻吩-6-基甲基]-氨基}-苄基)-氨基]-苯基-乙酸环戊酯在(S)-[(3-氨基-苄基)-叔丁氧基羰基-氨基]-苯基-乙酸环戊酯(0.317g，0.75mmol)中加入6-甲酰-苯并[b]噻吩-2-羧酸(l-异丁氧基-乙氧基)-酰胺(方案7)(0.210g，0.65mmol)的DCE(8ml)溶液。加入2滴冰醋酸，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.170g，0.8mmol)。将混合物搅拌2小时然后倒入DCM(150ml)。溶液用饱和碳酸氢钠(50ml)洗涤，然后干燥(MgS04)，浓缩并通过快速柱层析纯化以得到所需淡黄色泡沫状的产物(0.346g，73%产率)。^NMR(300MHz，CDC13)，S:8.35-8.43(1H，m)，7.56-8.05(2H'm)，7.01-7.41(8H，m)，6.卯-7.01(1H，m)，6.42(1H，dd，J=2.6，7.9Hz)，5.25-5.31(1H，m)，5.12(1H，q，J=5.2Hz)，4.40(1H，d，J5.4Hz)，4.00(1H，dd，J-3.1,15.8Hz)，3.60-3.70(1H，m)，3.35-3.40(1H，m)，1.33-1.94(21H,m)，0.98(3H，d，J=6.6Hz)，0.97(3H，d，J=6.6Hz)阶段5:(SH3-[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b]噻吩-6-基甲基)-氨基]-苄基-氨基)-苯基-乙酸环戊酯(130)在(S)-[叔丁氧基羰基-(3-([2-(l-异丁氧基-乙氧基氨甲酰基)-苯并[b]噻吩-6-基甲基]-氨基}-苄基)-氨基]-苯基-乙酸环戊酯(0.100g，0.14mmol)的DCM/MeOH(lml:lml)溶液中加入TFA(8ml)。将溶液搅拌2小时，然后用DCM(200ml)稀释。溶液用饱和碳酸氢钠(IOOml)洗涤。将溶液干燥(Na2S04)，浓缩并通过反相HPLC纯化以得到所需产物(8.1mg，11%产率)。LCMS纯度98。/。，m/z531(M+H)+300MHz，DMSO，5:1.26-1.85(8H，m)，3.47(2H，s)，4.21(1H，s)，4.38(2H，d，J5.8Hz)，5.02-5.07(m，m)，6.32(m，t,J6.0Hz)，6.45(2H，d，J7.9Hz)，6.57(1H,s)，6.97(1H，t，J7.8Hz)，7.23-7.35(5H，m)，7.42(1H，dd，J1.2，8.3Hz)，7.84(1H，s)，7.87(1H，s)，7.93(1H，s)，9.23(1H，brs)，11.4(1H，brs)以下化合物按照为化合物(130)描述的过程制备(S)-(3-[(2-羟基氨甲酰基-苯并[b噻吩-6-基甲基)-氨基-苄基氨基卜环己基-乙酸环戊酯(131)LCMS纯度>98%，m/z536.25(M+H)+，！HNMR(300MHz，d6-DMSO)，5:0.7-1.25(8H，m)，.50-1.95(14H,m),3.69(1H，brs)，3.98(2H，brs)，4.43(2H，brs)，5.14(1H，t，J5.4Hz)，6.60-6.71(2H，m)，7.05-7.28(3H，m)，7.43(1H,d，J8.5Hz)，7.83-7.98(2H，m)，9.25(1H，brs)，11.45(1H，brs)(S)-3-叔丁氧基-2-(3-[(2-羟基氨甲酰基-苯并b噻吩-6-基甲基)-氨基]-节基氨基卜丙酸环戊酯(132)LCMS纯度〉980/。，m/z540.25(M+H)+，&NMR(300MHz，d6-DMSO)，5:1.05(9H,s)，1.50-1.78(8H，m)，3.15-3.67(5H，m)，4.38(2H，d，J5.8Hz)，5.05-5.15(1H，m)，6.31(1H，t，J5.9Hz)，6.40-6.48(2H，m)，6.56(1H，s)，6.96(1H，t，J7.8Hz)，7.42(1H，d，J8.2Hz)，7.87(1H，s)，7.93(1H，s)，9.24(1H，brs)，11.43(1H，brs)(S)-2-(3-(2-羟基氨甲酰基-苯并[b〗噻吩-6-基甲基)-氨基-节基氨基H-甲基-戊酸环戊酯(133)LCMS纯度98%，m/z510.25(M+H)+,!HNMR(300固z,d6-DMSO)，5:0.87(6H，d，J6.4Hz)，1.50-1.94(IOH，m)，3.57-4.20(3H，m),4.44(2H，s)，5.20(1H，t，J5.8Hz)，6.58-6.74(3H，m)，7.11(IH,t，J7.7Hz)，7.43(1H，dJOHz)，7.85-7.96(3H，m)，9.38(2H，brs)，11.46(1H，brs)(S)-3-叔丁氧基-2书-[(2-羟基氨甲酰基-苯并b噻吩-6-基甲基)-氨基]-节基氨基卜丙酸环戊酯(134)LCMS纯度98%，m/z540.25(M+H)+，^NMR(300MHz，d4-MeOD)，S:7.64-7.77(2H，m)，7.28(1H，d，J=7.2Hz)，6.99(2H，d，J=6.6Hz)，6.53(2H，d，J=6.6Hz)，5.06-5.08(1H，m)，4.35(2H,s)，3.40-3.75(5H，m)，1.50-1.82(8H，m)，1.04(9H，s)测量生物学活性组蛋白脱乙酰基酶活性用购自Biomol的HDAC荧光活性试验测量化合物抑制组蛋白脱乙酰基酶活性的能力。简言之，在存在或不存在抑制剂时将尸&orA丄^^底物(一种s-氨基被乙酰化的赖氨酸)与具有组蛋白脱乙酰基酶活性的原料(HeLa细胞核提取物)一起孵育。底物的脱乙酰化使底物对F/"or血Z^^显影剂敏感从而产生荧光。因此，将底物与具有HDAC活性的原料一起孵育导致信号增强，而当存在HDAC抑制剂时信号减弱。数据表达为占不存在抑制剂时测得的对照的百分比，所有样品要减去背景信号，如下所示%活性=((Si-B)/(S°-B))xl00其中，Si是存在底物、酶和抑制剂时的信号，S。是存在底物、酶和载体时的信号，其中的抑制剂是被溶解的，而B是不存在酶时测得的背景信号。确定IC50值时釆用GraphpadPrism软件，将8个数据点的结果拟合到具有可变斜率的S形剂量反应曲线方程(％活性与化合物浓度的对数)，然后通过非线性回归分析确定IC50值。利用HeLa细胞粗制核提取物的组蛋白脱乙酰基酶活性进行筛选。购自4C(Seneffe，Bdgium)的制品是从收获自指数生长期的HeLa细胞制备的。按照DignamJD1983Nucl.Acid.Res.il，1475-1489制备核提取物，在液氮中急冻并储存于-80'C。最终的缓冲液组成为20mMHepes、100mMKC1、0.2mMEDTA、0.5mMDTT、0.2mMPMSF和20。/。(v/v)甘油。IC50结果被归入3个范围之一，如下范围A:IC50〈100nM，范围B:IC50从101nM到1000nM;范围C:IC50>1001nM。NT=未检测实施例的化合物在该试验中的测试结果给在下面的表2的第二列中。细胞抑制试验收获生长在对数期的相应的癌细胞系(Hela、U937和HUT)并以1000细胞/孔(最终体积为200ul)接种到96孔组织培养板上。细胞生长24小时后用化合物(最终浓度为20uM)处理细胞。然后再将平板孵育72小时，之后按照Skehan19卯JNatlCancInst82，1107-1112进行磺基罗丹明B(SRB)细胞存活试验。数据表达为不存在抑制剂时测得的对照的抑制百分数，如下所示%抑制=ioo-((sVs°)xioo)其中，Si是存在抑制剂时的信号，S。是存在DMSO时的信号。确定IC50值时采用GraphpadPrism软件，将8个数据点的结果拟合到具有可变斜率的S形剂量反应曲线方程(。/。活性与化合物浓度的对数)，然后通过非线性回归分析确定IC50值。IC50结果被归入3个范围之一，如下范围A:IC5(K330nM，范围B:IC50从330nM到3300nM;范围C:IC50>3301nM。NT=未检测实施例的化合物在该试验中的测试结果给在下面的表2的第3-5列中。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage143</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage144</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage145</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage146</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage147</column></row><table>破碎细胞羧酸酯酶试验制备细胞提取物U937或Hctl16肿瘤细胞(约109，用4倍体积的DulbeccosPBS(约1升)洗涤并在4°。以160g离心IO分钟使其沉淀)。重复两次，然后在25"C将最终的细胞沉淀物重悬于35ml冷的匀浆缓冲液(Trizma10mM、NaCl130mM、CaCl20.5mMPH7.0)。通过氮气气蚀制备匀浆(700psi，50分钟，4°C)。将匀浆保持在冰上并用设计的抑制剂混合物补足以得到以下最终浓度亮肽素lpM抑肽酶0.1pME648jiM胃酶抑素1.5nM胰凝乳蛋白酶抑制剂33pM将细胞匀浆在360rpm离心10分钟以使其澄清，所得上清液被用作酯酶活性来源并可储存于-8(TC直至使用。测量酯的切除用这种细胞提取物可测量酯变为相应的羧酸的水解作用。为达到这种效果，将细胞提取物(约30ug/0.5ml总测试体积)在Tris-HCl25mM、125mMNaCl、缓冲液(25°。时PH为7.5)中于37"C孵育。在0时刻加入最终浓度为2.5pM的相应的酯(底物)并将样品在37。C孵育适当时间(通常为0或80分钟)。加入3倍体积的乙腈终止反应。对于0时刻样品，在加入酯化合物之前加入乙腈。12000g离心5分钟后，在室温下通过LCMS(SciexAPI3000，HP1100二元泵，CTCPAL)分析母体酯及其相应的羧酸。采用的色谱条件基于AceCN(75X2.1mm)柱和流动相，流动相为5-95%乙腈水溶液/0.1%甲酸。权利要求1.式(I)的化合物或其盐、N-氧化物、水合物或溶剂合物其中，R1是羧酸基(-COOH)或是可被一种或多种细胞内羧酸酯酶水解成羧酸基的酯基；R2是天然或非天然α氨基酸的侧链；Y是键、-C(＝O)-、-S(＝O)2-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NR3-、-C(＝S)-NR3、-C(＝NH)NR3或-S(＝O)2NR3-，其中R3是氢或任选取代的C1-C6烷基；L1是式-(Alk1)m(Q)n(Alk2)p-的二价基团，其中，m、n和p独立为0或1，Q是(i)具有5-13个环成员的任选取代的二价单环或双环碳环或杂环基团，或(ii)，当m和p都是0时是式为-X2-Q1-或-Q1-X2-的二价基团，其中X2是-O-，S-或NRA-，其中RA是氢或任选取代的C1-C3烷基，Q1是具有5-13个环成员的任选取代的二价单环或双环碳环或杂环基团，Alk1和Alk2独立代表任选取代的二价C3-C7环烷基，或任选取代的直链或支链的C1-C6亚烷基、C2-C6亚烯基或C2-C6亚炔基，所述基团可任选含有或终止于醚(-O-)、硫醚(-S-)或氨基(-NRA-)连接，其中，RA是氢或任选取代的C1-C3烷基；X1代表键；-C(＝O)；或-S(＝O)2-；-NR4C(＝O)-、-C(＝O)NR4-、-NR4C(＝O)NR5-、-NR4S(＝O)2-或-S(＝O)2NR4-，其中R4和R5独立为氢或任选取代的C1-C6烷基；z是0或1；A代表任选取代的单环、二环或三环碳环或杂环环系统，其中，基团R1R2NH-Y-L1-X1-[CH2]z-和HONHCO-[键合基]-结合于不同的环原子；和-[键合基]-代表连接A中的环原子与异羟肟酸基CONHOH的二价键合基，该键合基的长度，即从连接A的环原子的最后一个原子到连接异羟肟酸基的最后一个原子的长度，等于含有3-10个碳原子的无支链饱和烃链的长度。2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述键合基的长度等于含有4-9个:键合基1—CONHOH(I)碳原子的无支链饱和烃链的长度。3.如权利要求1或权利要求2所述的化合物，其特征在于，-[键合基]-代表式为-(012))^丄2-的二价基团，其中X是0或1;Z是键、-NR3C(=0)-、-C(=0)NR3-、-NR4C(=0)-NRr、-C(=S)-NR3、-C^NH)-NR3-NR3S(K))2-或-S^O)2NRr，其中R3是氢或C-C6烷基；-C(=0);或-S(=0)2-;和LM戈表任选取代的直链或支链的CVC7亚垸基、CVC6亚烯基或C4-C6亚炔基，所述基团可任选含有或终止于醚(-O-)、硫醚(-S-)或氨基(-NRA-)连接，其中，RA是氢或任选取代的C,-C3烷基。4.如权利要求2或权利要求3所述的化合物，其特征在于，x是0。5.如权利要求2-4中任一项所述的化合物，其特征在于，Z是-C(^0)-、-NHC(K))-或-C—0)NH-。6.如权利要求2-5中任一项所述的化合物，其特征在于，1^是-(CH2)5-、-(CH2)6-或-(CH2)7陽。7.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，-[键合基]-代表式为-(<:!12))4丄3-^1丄4-的二价基团，其中x是0或1;L^是Z或I^或Z-L2，其特征在于，Z如权利要求3中的定义，1^是键或任选取代的二价C,-C3亚垸基；Ar1是二价苯基或具有5-13个环成员的二价单环或二环杂芳基，和L4是键或任选取代的-CH2-或-CHK:H-。8.如权利要求7所述的化合物，其特征在于，x是0。9.如权利要求7或权利要求8所述的化合物，其特征在于，1^是Z或Z-L2，其中Z是-NH-、-NHS(=0)2-、-8(=0)2,-或-3(=0)2-;L2是-CHr和L4是键或-CHr。10.如权利要求7或权利要求8所述的化合物，其特征在于，！^是L2，其中L2是直链CVC5亚垸基，所述基团可任选含有醚(-O-)、硫醚(-S-)或氨基(-NRA-)连接，其中，RA是氢或任选取代的CVC3垸基，例如羟乙基。11.如权利要求7-10中任一项所述的化合物，其特征在于，"是-CI^CH-。12.如权利要求7-10中任一项所述的化合物，其特征在于，L^是-CH2-。13.如权利要求7-12中任一项所述的化合物，其特征在于，A^是选自下组的二价基团<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中，X是O、S或NH。14.如权利要求7所述的化合物，其特征在于，x是0，1^和"是键，A^是二价苯基或具有9-13个环成员的二价二环杂芳基。15.如权利要求7所述的化合物，其特征在于，Ar1是二价苯基或下式所示的二价苯并[b]噻吩基16.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，-[键合基]-代表式为-((^2))(丄3-8-/^1丄4-的二价基团，其中x、Ar1、1^3和"如权利要求7-13中任一项中的定义；B是单环或二环杂环系统。17.如权利要求16所述的化合物，其特征在于，B选自下组.-<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中，X是N，W是NH、O或S。18.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，A是任选被取代的以下基团之一<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中，RH)是氢或任选取代的CrCV烷基，显示为连接到固定原子的被波浪线贯穿的键连接化合物(I)中的键合基，而显示为浮动的另一个键将所示的环系统中任何方便的环原子连接到R,R2CHNHYi;xi[CH2]z基团。19.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，z是0。20.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，Y是-S(K))2-、-C(=S)-NR3、《(=顺)-顺3或-8(=0)2服3-，其中R3是氢或C广C6烷基。21.如权利要求1-19中任一项所述的化合物，其特征在于，Y是键。22.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，在基团L'中，当Alk1和Alk2存在时其选自-CHr、-CH2CHr、-CH2CH2CH2-、以及二价环丙基、环戊基和环己基。23.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，在基团lJ中，Q是二价苯基或具有5-13个环成员的单环或二环杂芳基。24.如权利要求22所述的化合物，其特征在于，Q是l,4-亚苯基。25.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，在基团L'中，m和p是0。26.如权利要求1-24中任一项所述的化合物，在基团I^中，n和p是0，m是l。27.如权利要求1-24中任一项所述的化合物，在基团U中，m、n和p都是0。28.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，基团-Y-LLxL[CH2;^选自-C(=0)-、-C(=0)NH-、-(CH2)v-、-(CH2)vO-、-C(=0)-(CH2)v-、-C(=0)-(CH2)vO-、-C(=0)-NH-(CH2)w-、-C(=0)-NH-(CH2)wO-、^H^^~(CH2)wO卜TO^(CH2)w01"其中，v是l、2、3或4，w是l、2或3。29.如权利要求1-27中任一项所述的化合物，其特征在于，基团-￥丄1-乂1-[(:112]2-是-<:12-、-ch2o-、-c(=o)-ch2-、-c(=o)-ch2o-、-<:(=0)-则陽012-或-(:(=0)-顺-0120-。30.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，R,是式-(CK))OR9的酯基，其中，R9是(i)R7R8CH-，其中R7是任选取代的(CrC3)烷基-(Z、-(d-C3)烷基-或(CrC3)烯基-^、-(€:1-(:3)烷基-，其中，a是o或i，z'是-o-、-s-或-nh-，仗8是氢或((:1-(:3)烷基-或R7和R8与它们所结合的碳原子一起形成任选取代的C3-C7环垸基环或含有5个或6个环原子的任选取代的杂环；或(ii)任选取代的苯基或含有5或6个环原子的单环杂环。31.如权利要求30所述的化合物，其特征在于，R9是甲基、乙基、正或异丙基，正或仲丁基、环己基、烯丙基、苯基、苄基、2-、3-或4-吡啶基甲基、N-甲基哌啶-4-基、四氢呋喃-3-基或甲氧基乙基。32.如权利要求30所述的化合物，其特征在于，R9是环戊基。33.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，R2是环己基甲基、环己基、吡啶-3-基甲基、仲丁基、叔丁基、l-苄硫基-l-甲基乙基、l-甲硫基-l-甲基乙基或l-巯基-l-甲基乙基。34.如权利要求1-32中任一项所述的化合物，其特征在于，R2是氢。35.如权利要求1-32中任一项所述的化合物，其特征在于，R2是苯基、苄基、苯基乙基、叔丁氧基甲基或异丁基。36.如权利要求1所述的具有文中具体实施例中的任何化合物的结构的化合物。37.—种药物组合物，所述药物组合物含有如上述任一权利要求所述的化合物以及药学上可接受的载体。38.如权利要求1-36中任一项所述的式(I)的化合物在制备用于抑制HDAC酶活性的组合物中的应用。39.如权利要求38所述的应用，用于在体外或体内抑制HDAC1活性。40.—种抑制HDAC酶活性的方法，所述方法包括使该酶接触有效产生这种抑制的量的如权利要求1-36中任一项所述的化合物。41.一种相对于其它细胞类型在巨噬细胞和/或单核细胞中选择性抑制HDAC酶活性的方法，所述方法包括使该酶接触有效产生这种抑制的量的如权利要求1-36中任一项所述的化合物，其中，Y是键、-S(=0)2或-S^O)2NR3-，其中R3是氢或任选取代的d-C6烷基。42.如权利要求40或权利要求41所述的方法，用于在体外或体内抑制HDAC1活性。43.—种治疗细胞增殖疾病、聚谷氨酰胺病、神经变性疾病、自身免疫性疾病、炎性疾病、器官移植排斥、糖尿病、血液学疾病和感染的方法，所述方法包括给予患有这种疾病的对象有效量的如权利要求1-36中任一项所述的式(I)的化合物。44.如权利要求43所述的方法，用于治疗癌细胞增殖、亨廷顿病或阿耳茨海默病。45.如权利要求43所述的方法，用于治疗类风湿性关节炎。46.—种相对于其它细胞类型在巨噬细胞和/或单核细胞中选择性抑制aurora激酶活性的方法，所述方法包括使所述酶接触有效产生这种抑制的量的如权利要求1-36中任一项所述的化合物，其中，Y是键、-3(=0)2或-3(=0)2顺3-，其中R3是氢或任选取代的CVCV烷基。47.如权利要求37所述的药物组合物，所述药物组合物适合局部给药，且在如权利要求1-36中任一项所述的化合物中，R2通过亚甲基-CH2-连接到碳原子上。全文摘要式(I)的化合物是组蛋白脱乙酰酶活性的抑制剂，并可用于治疗例如癌症，其中，R<sub>1</sub>是羧酸基(-COOH)或是可被一种或多种细胞内羧酸酯酶水解成羧酸基的酯基；R<sub>2</sub>是天然或非天然α氨基酸的侧链；Y是键、-C(＝O)-、-S(＝O)<sub>2</sub>-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NR<sub>3</sub>-、-C(＝S)-NR<sub>3</sub>、-C(＝NH)NR<sub>3</sub>或-S(＝O)<sub>2</sub>NR<sub>3</sub>-，其中R<sub>3</sub>是氢或任选取代的C<sub>1</sub>-C<sub>6</sub>烷基；L<sup>1</sup>是式-(Alk<sup>1</sup>)<sub>m</sub>(Q)<sub>n</sub>(Alk<sup>2</sup>)<sub>p</sub>-的二价基团，其中，m、n和p独立为0或1，Q是(i)具有5-13个环成员的任选取代的二价单环或双环碳环或杂环基团，或(ii)，当m和p都是0时是式-X<sup>2</sup>-Q<sup>1</sup>-或-Q<sup>1</sup>-X<sup>2</sup>-的二价基团，其中X<sup>2</sup>是-O-，S-或NR<sup>A</sup>-，其中R<sup>A</sup>是氢或任选取代的C<sub>1</sub>-C<sub>3</sub>烷基，Q<sup>1</sup>是具有5-13个环成员的任选取代的二价单环或双环碳环或杂环基团，Alk<sup>1</sup>和Alk<sup>2</sup>独立代表任选取代的二价C<sub>3</sub>-C<sub>7</sub>环烷基，或任选取代的直链或支链的C<sub>1</sub>-C<sub>6</sub>亚烷基、C<sub>2</sub>-C<sub>6</sub>亚烯基或C<sub>2</sub>-C<sub>6</sub>亚炔基，所述基团可任选含有或终止于醚(-O-)、硫醚(-S-)或氨基(-NR<sup>A</sup>-)连接，其中，R<sup>A</sup>是氢或任选取代的C<sub>1</sub>-C<sub>3</sub>烷基；X<sup>1</sup>代表键；-C(＝O)；或-S(＝O)<sub>2</sub>-；-NR<sub>4</sub>C(＝O)-、-C(＝O)NR<sub>4</sub>-、-NR<sub>4</sub>C(＝O)NR<sub>5</sub>-、-NR<sub>4</sub>S(＝O)<sub>2</sub>-或-S(＝O)<sub>2</sub>NR<sub>4</sub>-，其中R<sub>4</sub>和R<sub>5</sub>独立为氢或任选取代的C<sub>1</sub>-C<sub>6</sub>烷基；z是0或1；A代表任选取代的单环、二环或三环碳环或杂环环系统，其中，基团R<sub>1</sub>R<sub>2</sub>NH-Y-L<sup>1</sup>-X<sup>1</sup>-[CH<sub>2</sub>]<sub>z</sub>-和HONHCO-[键合基]-结合于不同的环原子；和-[键合基]-代表连接A中的环原子与异羟肟酸基CONHOH的二价键合基，该键合基的长度，即从连接A的环原子的最后一个原子到连接异羟肟酸基的最后一个原子的长度，等于含有3-10个碳原子的无支链饱和烃链的长度。文档编号C07D207/40GK101133060SQ200680006916公开日2008年2月27日申请日期2006年5月4日优先权日2005年5月5日发明者A·D·G·唐纳尔德,A·H·德吕蒙,A·H·戴维森,D·F·C·莫法特,F·A·马塞,K·W·J·贝克,S·J·戴维斯,S·R·佩特尔申请人:色品疗法有限公司