专利名称：唑类化合物的单赖氨酸盐的制作方法
技术领域：
本发明涉及新颖的水溶性唑类化合物，其适用于治疗如严重的全身性真菌感染并适于口服、局部和胃肠外给药。更特别的，本发明涉及新颖的具有通式I的水溶性盐前药
在式I中，R和R1各自为氢或(C1-C6)烷基，和A是包含仲羟基或叔羟基的类型的三唑抗真菌化合物的非羟基部分。本发明还包括式I盐化合物的药学上可接受的溶剂化物，使用该物质的和制备该物质的方法。
背景技术：
三唑抗真菌化合物是本领域中已知的。在已知的几种类别中，一类特别有效的类别包含叔羟基。例如，美国专利第5648372号公开了(2R，3R)-3-[4-(4-氰苯基)噻唑-2-基]-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-丁-2-醇化合物具有抗真菌活性。美国专利第5648372的化合物如下所示。
然而，该类化合物的效用受其低水溶性的限制。例如，上述三唑化合物在pH6.8的水中溶解度为0.0006mg/mL。这极大地阻碍了适宜的胃肠外剂型的开发。
欧洲专利申请第829478号公开了一种解决该问题的方法，其中通过在分子的唑部位上接一个连接的氨基酸来增加唑类抗真菌试剂的水溶性(如下所示)。
可选的，WO97/28169公开了可将磷酸酯部分直接接到抗真菌化合物的叔羟基部分，例如具有如下式的化合物。
另一方面，美国专利第5707977号和WO95/19983公开了具有如下通式的水溶性前药。
在上面结构式中，X是OP(O)(OH)2或易水解的酯OC(O)RNR1R2。
相反的，WO95/17407公开了如下通式所示的水溶性唑类前药。
在上面结构式中，X是P(O)(OH)2、C(O)-(CHR1)n-OP(O)(OH)2或C(O)-(CHR1)n-(OCHR1CHR1)mOR2。
已经提出了其它的唑类化合物。例如，WO96/38443公开了如下所示通式的水溶性唑类前药。
美国专利5883097公开了水溶性氨基酸唑类前药，如甘氨酸酯，如下所示。
公开了将膦酰氧基甲基部分引入包含羟基的药物中，作为制备包含羟基的药物的水溶性前药的方法。
欧洲专利申请第604910号公开了如下所示通式的膦酰氧基甲基紫杉烷衍生物。
在上面结构式中，R1’、R2”、R3’、R6’或R7’中的至少一个是OCH2OP(O)(OH)2。
欧洲专利申请第639577号公开了式T-[OCH2(OCH2)mOP(O)(OH)2]n的膦酰氧基甲基紫杉烷衍生物，其中式中的T是在C13碳原子上接有一个取代的3-氨基-2-羟基丙酰氧基的紫杉烷部分，n是1，2或3，m是0或包含端值的1-6的整数。
WO99/38873公开了二芳基1，3，4-二唑酮钾通道开放剂的O-膦酰氧基甲基醚前药。
Golik，J.等人在Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters(1996)第6卷第1837-1842页公开了新颖的紫杉醇水溶性前药，例如如下所示的前药。
美国专利第6362172号公开了具有如下所示通式的水溶性唑类前药。
在上面结构式中，A是包含仲羟基或叔羟基的类型的三唑抗真菌化合物的非羟基部分，R和R1各自独立地为氢或(C1-C6)烷基。
然而，美国专第6362172号的前药不易用作口服给药。
发明内容
现已发现包含仲羟基或叔羟基的三唑抗真菌磷酸酯化合物(包括((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯)的单赖氨酸盐较之以前公开的化合物具有出人意料的优越性质。具体而言，本发明涉及式I化合物的单赖氨酸盐，或其药学上可接受的溶剂化物
在式I中，R和R1各自为氢原子或(C1-C6)烷基，优选其一或两者均为氢。此外在式I中，A代表包含仲羟基或叔羟基的类型的三唑抗真菌盐化合物的非羟基部分。
式I化合物中优选的是那些A代表包含叔羟基的类型的三唑抗真菌化合物的非羟基部分。
在上述类型盐化合物的另一个实施方案中，A可以是式(i)
其中式(i)的R3代表被一个或多个(优选1-3个)卤素原子取代的苯基；R4代表氢原子或甲基(CH3)；R5代表氢原子，或与R4一起可代表＝CH2；R6代表5元或6元含氮环，其可任选地被一个或多个选自卤素、＝O、CH＝CH-(C6H4)-OCH2CF2CHF2、和被一个或多个选自CN和OCH2CF2CHF2的基团取代的苯基、或被一个或多个选自卤素和甲基吡唑基的基团取代的苯基的基团所取代。
当R6代表含氮杂环时，这样的例子包括三唑基、嘧啶基和噻唑基，其中每个环任选地被一个或多个选自卤素、＝O、CH＝CH-(C6H4)-OCH2CF2CHF2、和被一个或多个选自CN和OCH2CF2CHF2的基团取代的苯基、或被一个或多个选自卤素和甲基吡唑基的基团取代的苯基的基团所取代。
A的例子包括但不限于以下
和
上述那些具体化合物中，以下是优选的实施方案
和
式I的单赖氨酸盐化合物更优选的实施方案具有如下所示的结构
式I的盐化合物的溶剂化物形式也是本发明进一步的实施方案。
除了本发明适用于包含叔醇的结构，还应该理解的是该发现可应用于包含仲醇的抗真菌成分。包含仲羟基的类型的三唑抗真菌盐化合物的非羟基部分的一些例子包括，但不限于以下
或者
附图概述
图1显示了(2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-[(二氢膦酰氧基)甲氧基]丁烷的双赖氨酸乙醇溶剂化物的吸湿性。
图2显示了((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯的单赖氨酸乙醇溶剂化物的吸湿性。
图3显示了((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯的单赖氨酸异丙醇溶剂化物的吸湿性。
图4显示了单赖氨酸盐较之双赖氨酸盐的吸湿性。
图5是((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯的单赖氨酸乙醇溶剂化物获得的粉末X射线衍射(PXRD)数据图。
图6A-6C是((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯的单赖氨酸乙醇溶剂化物的NMR数据图。
图7是((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基基)1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯的单赖氨酸乙醇溶剂化物的差示扫描量热法(DSC)曲线。
图8是((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯的单赖氨酸乙醇溶剂化物的热重量分析(TGA)曲线。
图9是((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基基)1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯的单赖氨酸异丙醇溶剂化物的PXRD数据图。
图10是((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯的单赖氨酸异丙醇溶剂化物的DSC曲线。
图11是((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯的单赖氨酸异丙醇溶剂化物的TGA曲线。
图12是((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯的单赖氨酸正丙醇溶剂化物的PXRD数据图。
图13是((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯的单赖氨酸正丙醇溶剂化物的DSC曲线。
图14是((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯的单赖氨酸正丙醇溶剂化物的TGA曲线。
实施本发明的最佳方式 当通式I的单赖氨酸盐化合物被施加到体内时，其作为“前药”发挥作用，在碱性磷酸酶的存在下转化为具备生物活性的母体唑类。此外，通式I的单赖氨酸盐化合物具有低的吸湿性从而具备出乎意料的改进的物理稳定性，这使其在制备过程中更易处理，同时保持合适的溶解度，使得该前药适于口服、局部和胃肠外给药。
本发明的单赖氨酸盐化合物可以是水合物、溶剂化物或非溶剂化物。还可以是几种异结构溶剂化物形式的晶体结构。例如，这样的溶剂化物形式包括由水、乙醇、甲醇、异丙醇和正丙醇形成的溶剂化物形式。此外，还可以是本发明单赖氨酸盐或其溶剂化物的晶体多晶型物。
优选的化合物溶剂化物中A为
或
这些化合物中的第一个是最优选的。
本发明的单赖氨酸盐可以制成高纯度且具备出乎意料的良好溶解度和低吸湿性的结晶固体，这较之相同化合物的双赖氨酸盐具备更好的可处理性。例如，本发明的单赖氨酸盐可以是((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯的结晶盐。
本文中所用的“(C1-C6)烷基”指具有1到6个碳原子的直链或支链饱和脂肪族基团，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基等。
本文中所用的术语“卤素”包括氯、溴、氟和碘，优选氯或氟，最优选氟。
如前所述，通式I中的R和R1各自可为氢原子或长度具有1到6个碳原子的烷基。例如，R和/或R1可以是甲基或乙基。优选的，通式I中的R和R1各自代表氢。
此外，式(i)中的R3-R6可以是若干种可能的取代基。在一个实施方案中，单赖氨酸盐或其溶剂化物的R3为2，4-二氟苯基。在另一个实施方案中，当R5为氢原子时，单赖氨酸盐或其溶剂化物的R4为甲基。在又一个实施方案中，式(i)的R6是4-(4-氰苯基)-噻唑-2-基。
本发明的又一个实施方案是((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯的单赖氨酸盐，或其药学上可接受的溶剂化物，如下所示。
本发明的单赖氨酸盐和溶剂化物可以是结晶形式，并以片剂、胶囊、粉末、溶液、悬浮液、乳剂、软膏、洗液、乳膏或喷雾剂形式的药物组合物使用。例如，前药可包含单赖氨酸盐化合物的乙醇溶剂化物晶体。
另外，式I化合物的单赖氨酸盐或溶剂化物较之其双赖氨酸盐形式令人惊奇地保持了其水溶性，且由于低吸湿性具有出乎意料的改善的可处理性，这使其可用于口服以及胃肠外给药。
此外，单赖氨酸盐和其溶剂化物在制备和压制(压缩行为)中较之双赖氨酸盐显示出改善的可处理性，从而适用于固体剂型(即片剂)。已经发现单赖氨酸盐较之双赖氨酸盐形式具有更低的内聚指数，而具有与母体化合物(即立福康唑)相似的内聚指数。单赖氨酸盐和其溶剂化物较之双赖氨酸形式还显示出更大的堆积密度和摇实密度。因此，单赖氨酸形式可用于压制(成为片剂)，药物负载量减少，并且较之双赖氨酸形式具有对高湿度环境更低的敏感性(无论有无包衣)这些优点。此外，单赖氨酸盐和其溶剂化物在溶液中稳定(无论以其药物物质形式还是以制剂形式)，可以结晶形式分离并容易在体内转化为原药。
单赖氨酸盐和其溶剂化物还表现出更好的固态稳定性。这里的固态稳定性意指在环境和/或加速存储条件下的API稳定性。例如，单赖氨酸盐和其溶剂化物较之双赖氨酸具有更低的吸湿(和吸湿度)，从而具有改善的、更好的可处理性。这些性质也导致更好的可处理性和长期稳定性(更低的含水量，更少的降解等)。
单赖氨酸盐或其溶剂化物的吸湿行为与对应的双赖氨酸盐或其溶剂化物在更低的RH值下(例如0％直至50％RH)的吸湿行为相当，但在更高的高于50％RH的RH值下则令人惊奇地低很多(例如在60％RH下单赖氨酸单乙醇化物的重量变化为2-3％而双赖氨酸单乙醇化物的重量变化为10％)。如图1-4中所见，较之双赖氨酸盐化合物，单赖氨酸盐化合物在相对湿度高和高温条件下具有出乎意料的改善的可处理性和吸湿量。
图1显示了(2R，3R)-[4(4-氰苯基)噻唑-2-基]-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-[(二氢膦酰氧基)甲氧基]丁烷的双赖氨酸乙醇溶剂化物的吸湿。给出了相比于相对湿度(x-轴)重量的变化(y-轴)，其中—○—所示为吸附，—●—为解吸附。
图2显示了((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯的单赖氨酸乙醇溶剂化物的吸湿，其中给出了相比于相对湿度(x-轴)的重量变化(y-轴)，其中—○—所示为吸附，—●—为解吸。
图3显示了((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯的单赖氨酸异丙醇溶剂化物的吸湿，其中给出了相比于相对湿度(x-轴)的重量变化(y-轴)，其中—○—所示为吸附，—●—为解吸。
图4显示了单赖氨酸盐和双赖氨酸形式(也称为二赖氨酸)相比较的吸湿数据，其中给出了相比于相对湿度(x-轴)的重量变化(y-轴)，—◆—代表双赖氨酸形式，—▲—代表单赖氨酸形式。
图5显示了((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯的单赖氨酸乙醇溶剂化物(实施例1)的PXRD重叠图，其为单晶结构的模拟图对比堆积样品的实验收集图。
图6A-6C涉及实施例1的核磁共振数据。图6A涉及H-1NMR数据；图6B涉及F-19NMR数据；图6C涉及P-31NMR数据。
图7是实施例1的DSC曲线，其中y-轴为热流(W/g)，x-轴为温度(℃)。
图8是实施例1的TGA曲线(y-轴为重量(％)，x-轴为温度(℃))。
图9描绘了((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯的单赖氨酸异丙醇溶剂化物(实施例5)的PXRD重叠图，其为单晶结构的模拟图对比堆积样品的实验收集图。
图10是实施例5的DSC曲线，其中y-轴为热流(W/g)，x-轴为温度(℃)。
图11是实施例5的TGA曲线(y-轴为重量(％)，x-轴为温度(℃))。
图12描绘了((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯的单赖氨酸正丙醇溶剂化物(实施例6)的PXRD重叠图，其为单晶结构的模拟图对比堆积样品的实验收集图。
图13是实施例6的DSC曲线，其中y-轴为热流(W/g)，x-轴为温度(℃)。
图14是实施例6的TGA曲线(y-轴为重量(％)，x-轴为温度(℃))。
本发明的单赖氨酸盐和其溶剂化物可通过以下一般反应路线制备。在本方法中，A代表包含仲羟基或叔羟基的三唑抗真菌化合物的非羟基部分，Pr代表常规的羟基保护基例如叔丁基、苄基或烯丙基，R和R1各自独立为氢或(C1-C6)烷基。最优选R和R1都为氢。
为了详细说明本方法，目标抗真菌母体化合物II通过在合适的碱存在下用氯化物中间体III进行O-烷基化，转化为磷酸酯中间体IV(第一中间体)。所述合适的碱可以是氢化钠、氢化钾、氨基钠、叔丁醇钠、叔丁醇钾、二(三甲基甲硅烷基)氨基钠、二(三甲基甲硅烷基)氨基钾、或者其联合，例如氢化钠加二(三甲基甲硅烷基)氨基钠。该反应步骤可以在惰性有机溶剂中进行，例如四氢呋喃、甲基四氢呋喃、甲基叔丁基醚、乙醚或者二甲基乙酰胺中，温度为大约0℃到50℃，更优选大约20℃到40℃，最优选大约40℃。最优选的碱是氢化钠，最优选的溶剂是四氢呋喃。最优选的R是氢，而最优选的R1也是氢。
磷酸酯中间体IV随后进行常规的脱保护步骤以脱去羟基保护基Pr，随后形成式V的(第二)中间体(参见T.W.Greene等人，Protecting Groups in OrganicSynthesis，John Wiley & Son(1991)，在此引入作为参考)。该步骤所用的试剂取决于所用的具体羟基保护基，但这是本领域技术人员所熟知的。最优选的羟基保护基是叔丁基，其可用三氟乙酸、盐酸或甲酸在适宜的惰性有机溶剂中除去。所述惰性有机溶剂可以是，例如二氯甲烷、二氯乙烷、甲苯或者三氟甲基苯。在二叔丁酯的优选脱保护步骤中，优选在大约0℃到40℃下用三氟乙酸在二氯甲烷中进行脱保护步骤，最优选的温度为大约0-5℃。
中间产物V可随后通过常规方法回收和纯化，例如反相C18柱色谱法或溶剂萃取。当然，中间产物V也可通过常规方法转化为如前所述的所需的药学上可接受的盐。中间产物V随后与赖氨酸源混合得到本发明的单赖氨酸盐。
特别的，中间产物V被溶于溶剂中(例如低级醇)以形成游离酸溶液。随后，加热该游离酸溶液(包含中间产物V)并用赖氨酸(即L-赖氨酸)水溶性溶液处理，其中pH调节到大约3.5到大约6.0之间，优选大约4.2到大约5.5之间，得到最终产物I。该狭小的pH范围有益于得到纯的式I的单赖氨酸盐而不会污染产生双赖氨酸盐杂质。
上述反应中纯化的试剂III的使用导致中间体IV的收率相当低(大约10-35％的收率)，从而导致产物I的总收率较低。然而，当在上述反应的O-烷基化步骤中加入碘离子源时，中间体IV的收率出乎意料地增加到大约90％，因此也显著增加了中间体产物V的收率。人们认为碘离子的加入可导致原位形成相应的碘化物中间体式IIIa
且该试剂的使用大幅度增加了中间体IV的收率。然而，试图在上面反应的第一步中直接用中间体IIIa替代中间体III，却因碘化物试剂IIIa较之氯化物中间体III极大降低的稳定性而未能成功。一种成功的可选方法包括在碱例如NaH(其还可作为碘的还原剂起作用)存在下将碘和氯化物中间体III一起用于O-烷基化步骤中。人们认为碘被还原为碘离子，其随后将氯化物中间体III原位转化为碘化物中间体IIIa有助于该方法的这一步骤。下面的实施例显示了利用碘元素的O-烷基化步骤，这是实施本反应得到中间体IV的优选方法。
通过加入碘离子源或通过碘和试剂III在强碱下反应原位形成碘化物试剂IIIa，中间体IV收率的极大增加使得获得中间产物V的收率加大增加。当然，这使得式I的单赖氨酸盐及其溶剂化物的收率极大增加。
碘离子源优选碘化钠，但也包括碘化锂、碘化铯、碘化镉、碘化钴、碘化铜、碘化铷、碘化钡、碘化锌和碘化钙。每当量母体化合物A-OH通常使用大约2-3当量的碘化物盐。
当偶合步骤使用碘元素时，每当量母体化合物A-OH使用大约0.1到1.0当量的碘，优选0.5当量的碘。
使用碘或碘离子时所用的碱和溶剂与上面所述的使用试剂III时所用的实质上相同。
可以理解的是上述反应中所用的取代基团包括一些反应敏感的官能团如氨基或羧酸酯基(其可能导致不希望的副反应)时，这些基团可通过本领域技术人员所熟知的常规保护基进行保护。适宜的保护基和其脱去方法，例如被阐述在Protective Groups in Organic Synthesis，Theodora W.Greene(John Wiley &Sons，1991)中。
可以理解的是式I范围内的一些产物可能具有能导致光学异构体形成的取代基。本发明试图在其范围内包括所有这些光学异构体以及其差向异构体混合物，即R-或S-或外消旋形式。
本发明的药学活性的盐或其溶剂化物可以单独使用或配制为医学或药物组合物，其除了包括活性三唑成分外还包含药学上可接受的载体、辅料或稀释剂。
药物组合物可以是固体形式例如胶囊、片剂、粉末等，或液体形式，如溶液、悬浮液或乳剂。这样的胶囊、片剂等，可包含控释的制剂。这样的固体形式，例如明胶胶囊或压制片，可以任何常规方法制备。例如，活性化合物可引入包含药学上可接受的载体的制剂，例如赋形剂(例如淀粉、乳糖)、粘合剂(例如明胶、纤维素、树胶)、崩解剂(例如藻酸盐、Primogel和玉米淀粉)、润滑剂(例如硬脂酸镁、二氧化硅)以及甜味剂或者调味剂(例如葡萄糖、蔗糖、糖精、水杨酸甲酯和薄荷)。还可制备不同的包衣用于胶囊和片剂以改变胶囊和片剂的香味、味道、颜色和形状。另外，液体载体例如脂肪油、无菌水、聚乙二醇、非离子型表面活性剂以及食用油如玉米、花生和芝麻油，都是与活性成分的性质和所需要的特定给药方式相适应的。通常用于制备药物组合物的助剂可有益地包括，例如调味剂、着色剂、防腐剂和抗氧化剂如维生素E、抗坏血酸、BHT和BHA。组合物可以是即可使用的形式或用于在给药的时候用适当的载体如无菌水重新配制的粉末形式。
例如，片剂可以通过任选与一种或多种助剂压制或模塑制备。压制片剂可通过在适当的设备中压缩自由流动形式的活性成分，包括但不限于粉末或颗粒(任选地与药学可接受的载体混合)来制备，后者可包含一种或多种润滑剂、惰性稀释剂、表面活性剂或者分散剂等等。模制片剂可通过在适当的设备中将用惰性液体稀释剂湿化的粉末状化合物的混合物模塑制备。组合物中发现的活性成分的含量可根据施加给病人的活性成分的量而变化。
此外，由于通式I的单赖氨酸盐和/或其溶剂化物因其低吸湿性和良好的溶解性在加工过程中具有改善的可处理性，本发明的化合物可以冻干制剂的形式给药。另外，这些性质使得本发明化合物可以多种方式给药。给药在本文中意味着若干给药方式。例如，给药可以是口服、局部或胃肠外(包括静脉内、血管内、腹腹内、皮下、肌内、胸骨内和输注技术)，其中该给药使用有效或治疗抗真菌量的盐化合物。哺乳动物受治疗者(例如人、狗、猫、马、猪等)在需要它时可接受这样的口服、局部或胃肠外给药。
适于注射用的药物溶液包括无菌水溶液或分散体和用于临时制备无菌注射溶液或分散体的无菌粉末。添加剂包括助溶剂(例如水杨酸钠、乙酸钠)、缓冲剂(例如柠檬酸钠、甘油)、等渗化剂(例如葡萄糖)和稳定剂(例如聚乙二醇)。活性盐或溶剂化物作为游离碱的溶液或悬浮液可以在甘油、液体、聚乙二醇、其在油中的混合物，或一些其它的非毒性的胃肠外给药可接受的稀释剂或溶剂中制备，例如，在1，3-丁二醇中形成溶液。可以使用的可接受的载体和溶剂是水，林格溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌、不挥发油类常用作溶剂或悬浮介质。在常规的储藏和使用条件下，这些制剂包含防腐剂。另外，用于注射的组合物可以单位剂型制备装入安瓿或多剂量容器中，并可包含如悬浮、稳定和分散剂等添加剂。在所有情况下，所述形式必须是无菌的并必须是流动的至容易注射的程度。其在制备和储藏条件下必须稳定并必须保存抵抗微生物如细菌的污染。所述载体可以是溶剂或分散介质，包括如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)、其合适的混合物和植物油。
另外，给药剂量可以变化。给药剂量在很大程度上取决于所使用的特定化合物，所制备的特定组合物、给药途径、宿主的属性和情况以及治疗的特定部位和生物。然后让特定优选剂量和应用途径的选择由医生或兽医决定并可通过常规方法确定。
另外，给药次数可以变化。然而通常所述盐或溶剂化物化合物可以大约5mg/天到大约1.0g/天的剂量以胃肠外或口服形式向哺乳动物宿主给药。这些剂量是具有代表性的平均情况，可能存在需要更高或更低剂量的个别情况，这些剂量都属于本发明的范围内。另外，本发明化合物的给药可以单次剂量或分次剂量进行。
当采用胃肠外或口服给药时，本领域技术人员能够确定所述盐化合物的合适剂量和给药次数。
当口服给药时，所述盐化合物的合适剂量为85mg到1020mg，大致每天一次到一天三次。
当胃肠外给药时，所述盐化合物的合适剂量为85mg到1020mg，大致每天一次到一天三次。
可选的，本发明的化合物可以栓剂或阴道栓剂的形式给药，或者它们可以洗液、溶液或乳膏形式局部给药。另外，可将其掺入(浓度直到10％)由白蜡或软白石蜡基质以及需要的稳定剂和/或防腐剂组成的软膏中。
对于局部给药，所述组合物每天可用于被影响部位2到4次，或其一些其它变化形式。
适于局部给药的制剂包括液体或半液体的适于透过皮肤的制剂(例如涂沫剂、洗液、软膏、乳膏剂或者糊剂)。这样的局部给药的制剂可包括一种或多种增稠剂、湿润剂、和/或润肤剂包括然而并非限于黄原胶、软石蜡、蜂蜡、或者聚乙二醇、山梨糖醇、矿物油、羊毛脂、角鲨烯等等。例如，在洗液或乳膏剂中，本发明的盐或溶剂化物悬浮或溶解在如一种或多种如下物质的混合物中矿物油、脱水山梨醇单硬脂酸酯、聚乙二醇、液体石蜡、聚山梨酯60、十六烷基酯蜡、十六十八醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。对于包含活性盐或溶剂化物的软膏制剂，活性成分悬浮或溶解在如一种或多种如下物质的混合物中矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧化乙烯聚氧化丙烯化合物、乳化蜡和水。本发明的活性成分盐或溶剂化物的合适的局部给药剂量是0.1mg到150mg，每天1到4次，优选1到2次。对于局部给药，活性成分可占0.001％到10％w/w，例如1％到2％，基于制剂的重量，尽管可以包含多达制剂的10％w/w，但优选不超过5％w/w，更优选0.1％到1％。
本发明的盐或其溶剂化物还可以鼻内或吸入方式给药，并以干燥粉末吸入器或由增压容器、泵、喷雾器或雾化器借助合适的推进剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、氢氟烷烃例如1，1，1，2-四氟乙烷(HFA 134A[商品名])或1，1，1，2，3，3，3-七氟丙烷(HFA 227EA[商品名])、二氧化碳或者其他的适当的气体提供的气溶胶喷射从而便利地给药。在增压气雾剂的情况下，剂量单位可通过提供递送定量的阀门来确定。增压容器、泵、喷雾器或雾化器可包含活性盐或溶剂化物的溶液或悬浮液，例如，利用乙醇和推进剂的混合物作为溶剂，其可额外包含润滑剂，例如去水山梨糖醇三油酸酯。用于吸入器或吹药器的胶囊和药筒(如由明胶制备的)可以被配制以包含本发明化合物和适当的粉末基质例如乳糖或淀粉的粉末混合物。喷雾组合物例如包含式I的新颖盐(或其溶剂化物)和上面提到的药学上可接受的液体载体的溶液。喷雾也可用于局部给药。吸入组合物也包含式I的新单赖氨酸盐或其溶剂化物和上面提到的可接受的推进剂。
本发明的单赖氨酸盐或其溶剂化物是有用的，因为其对动物具有药理学活性，特别包括哺乳动物，最特别的是人类。特别的，本发明的盐或溶剂化物可用于治疗或预防局部的真菌感染，包括由念珠菌属(Candida)、毛癣菌属(Trichophyton)、小孢子菌属(Microsporum)或者表皮癣菌属(Epidermophyton)的物种引起的真菌感染。另外，其可用于治疗或预防白色念珠菌(Candida albicans)引起的粘膜感染。其还可用于治疗或预防由例如白色念珠菌、新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)、黄曲霉(Aspergillus flavus)、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、球孢子菌属(Coccidioides)、副球孢子菌属(Paracoccidiodes)、组织胞浆菌属(Histoplasma)或者芽生菌属(Blastomyces)的物种引起的全身性真菌感染。
因此，根据本发明的另一个方面，提供治疗真菌感染的方法，其包括对宿主施用药学上或治疗上有效量的所述化合物。该宿主特别是哺乳动物宿主，最特别是人类患者。
还提供本发明的盐或其溶剂化物用作药物的用途，以及本发明化合物在制备用于治疗真菌感染的药物中的用途。
本发明化合物的抗真菌活性的体外评估可通过测定最小抑制浓度(MIC)来进行。MIC是测试化合物抑制测试微生物生长的浓度。在测试中，一系列的琼脂平板(各自掺入了特定浓度的测试化合物)被接种真菌株随后各个平板在37℃下孵化48小时。检查平板上真菌生长与否，并记录相关浓度。可用于该试验的微生物包括白色念珠菌、烟曲霉、毛癣菌属物种、小孢子菌属物种、絮状表皮癣菌(Epidermophyton floccosum)、粗球孢子菌(Coccidioides immitis)和光滑球拟酵母(Torulopsos galbrata)。应该认识到，作为前药，本发明的某些盐或其溶剂化物在体外测试中可能不具备活性。
本发明的盐或其溶剂化物的活体内评估可通过对接种了一种真菌株(如白色念珠菌)小鼠以一系列剂量水平腹膜内或静脉内注射或口服来执行。活性通过比较在未处理组小鼠死亡后不同剂量水平的处理组小鼠的存活来测定。记录测试盐或溶剂化物提供50％的防感染致死效应的剂量水平。
本发明的单赖氨酸盐或其溶剂化物由于低吸湿性同时保持了母体三唑抗真菌化合物的良好溶解性而出乎意料地增加了可处理性并且还释放生物活性化合物(例如作为前药发挥作用)。例如，如图2所示，乙醇溶剂化物形式在60％RH下具有＜2.5％的吸附重量变化和＜5％的解吸重量变化。作为另一个例子，异丙醇溶剂化物在60％RH下具有＜0.5％的吸附重量变化和＜1％的解吸重量变化。
实施例 下面的实施例对本发明进行说明但并无意限制本发明。实施例中所用的缩写为本领域技术人员所熟知的常规缩写。所使用的一些缩写如下 h＝小时 rt＝室温 mmol＝毫摩尔 g＝克 THF＝四氢呋喃 mL＝毫升 L＝升 Et2O＝乙醚 EtOAc＝乙酸乙酯 TFA＝三氟乙酸 CH2Cl2＝二氯甲烷 CH3CN＝乙腈 在随后的实施例中，给出的所有温度都为摄氐度(℃)。熔点由电热仪器测量且没有校正。质子核核磁共振(1H NMR)光谱由Bruker-500、BrukerAM-300或Varian Gemini 300分光计记录。除非另有指出，所有的光谱以CDCl3或D2O测量。化学位移以相对于四甲基硅烷(TMS)或参考溶剂峰的δ单位(ppm)报告，质子间偶合常数以赫兹(Hz)报告。分裂图式如下所指示s，单峰；d，双重峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；br，宽峰；dd，双重峰的双重峰；dt，三重峰的双重峰；和app d，明显的双重蜂，等。质谱以利用直接化学电离(DCI，异丁烯)、快原子轰击(FAB)或电子离子喷射(ESI)的Kratos MS-50或Finnegan 4500仪器来记录。
分析型薄层色谱法(TLC)在预涂好的硅胶板(60F-254)上进行并利用紫外光、碘蒸汽和/或通过甲醇磷钼酸加热着色显像。反相色谱法利用C18硅胶(Waters公司制备型C18 125A)在玻璃柱中以稍高于大气压的压力进行。
实施例1 ((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯单赖氨酸盐乙醇溶剂化物
步骤A 烘箱干燥的1L圆底烧瓶装有机械搅拌器、氮气入口转接器、装备橡胶隔片的压力平衡添加漏斗和温度探针，向其中加入氢化钠(2.89g，0.069mol，60％)和THF(50mL)。将溶于30mL THF中的(2R，3R)-3-[4-(4-氰苯基)噻唑-2-基]-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-醇(式B)(10g，0.023mol)在室温下用20分钟滴加到该搅拌后的悬浮液中。搅拌45分钟后，将溶于30mLTHF中的碘(2.99g，0.0115mol)溶液用10分钟滴加加入，随后用15分钟滴加加入二叔丁基氯甲基磷酸酯(式III)(13.29g，0.035mol，～68％纯度)。反应混合物在约41℃下搅拌4小时使反应完成。以过程中HPLC判断反应是否完成。
将该反应混合物倒入冰水(100mL)中。分离水相并以乙酸乙酯萃取(3×50mL)，混合的有机萃取物以10％的硫代亚硫酸钠(50mL)、水(50mL)、盐水(50mL)洗涤，硫酸镁干燥并减压浓缩，得到浅黄色油状物(22.8g，过程中HPLC～97面积百分比)。粗产物(式IV)在步骤B中按原态使用。
步骤B 圆底烧瓶装有磁性搅拌器、冷却浴、pH探针和氮气进出口，向其中加入溶于CH2Cl2(23mL)的上述步骤A的产物(式IV)(7.5g)并冷却到0℃。向该搅拌的溶液中缓慢加入三氟乙酸(8.8mL)并搅拌3小时至完成反应。以过程中HPLC判断反应是否完成。将该反应混合物倒入2N NaOH(64mL)的冷却溶液中。反应混合物以乙酸叔丁酯萃取(2×65mL)去除所有的有机杂质。含有双钠盐产物的水层以活性炭(10g)处理并以硅藻土层过滤。清滤液以1N HCl酸化到pH2.5。游离酸产物被萃取到乙酸乙酯(2×50mL)中。混合的有机层以水洗涤，MgSO4干燥，过滤，滤液减压浓缩得到3.39g粗产物V。可选地，在本发明的一个优选方面，步骤B可以连续过程进行，其细节可由本领域普通技术人员来确定。
步骤C 将上面得到的产物V溶于甲醇(75mL)中。将L-赖氨酸(1.8g)加入该游离酸溶液中并维持pH在4.2到5.5，混合物在60℃加热4.5小时。热反应物以硅藻土层过滤。滤液浓缩到大约5mL，与乙醇(100mL)混合并加热到65℃以结晶出单赖氨酸盐的溶剂化物。该溶剂化物收集到布氏漏斗上并真空干燥，得到3.71g呈结晶固体的标题溶剂化物化合物。
对于实施例1，收集粉末X射线衍射数据(PXRD)(见图5)，单晶的X射线晶体学数据(表1-2)和核磁共振光谱数据(图6A、6B、6C)，并获得了差示扫描量热曲线(图7)和热重量分析(TGA)曲线(图8)。
表1实施例1的晶体数据和结构细化 表2原子坐标(×104)和等量同位素置换参数(×103).U(eq)定义为正交化Uij张量的痕量的三分之一。
实施例2 1-((2S，3S)-3-(4-(4-(4-(4(((3S)-5-((1H-1，2，4-三唑-1-基)甲基)-5-(2，4-二氟苯基)-四氢呋喃-3-基)甲氧基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-三唑-1-基)戊-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯单赖氨酸盐 重复实施例1的步骤A，只是用下面化合物代替式B化合物
得到式IV’化合物的粗产物并原态用于步骤B
重复实施例1的步骤B，只是用式IV’化合物代替式IV化合物，得到粗产物V’
重复实施例1的步骤C，只是用式V’化合物代替式V化合物制备单赖氨酸盐化合物
实施例3 ((2R，3R)-3-(3-((E)-4-(2，2，3，3-四氟丙氧基)苯乙烯基)-1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯单赖氨酸盐 重复实施例1的步骤A，只是用下面化合物代替式B化合物
得到式IV”化合物的粗产物并原态用于步骤B
重复实施例1的步骤B，只是用式IV”化合物代替式IV化合物，得到粗产物V”
重复实施例1的步骤C，只是用式V”化合物代替式V化合物制备单赖氨酸盐化合物
实施例4 1-(2S，3S)-3-(4-(4-(4-(4(((3S)-5-((1H-1，2，4-三唑-1-基)甲基)-5-(2，4-二氟苯基)-四氢呋喃-3-基)甲氧基)苯基)哌嗪-1-基)苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-三唑-1-基)戊-2-基氧基)丙基二氢磷酸酯单赖氨酸盐 重复实施例1的步骤A，只是用下面化合物代替式B化合物
得到式IV化合物的粗产物，其中氯化物中间体III的R1是乙基且R是氢，并原态用于步骤B
重复实施例1的步骤B，只是用式IV化合物代替式IV化合物，得到粗产物V
重复实施例1的步骤C，只是用式V化合物代替式V化合物制备单赖氨酸盐化合物
实施例5 ((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯单赖氨酸盐异丙醇溶剂化物 重复实施例1的步骤A、B、C，只是将步骤C的滤液浓缩并与异丙醇(100mL)混合并加热到65℃以使单赖氨酸盐的溶剂化物结晶。将溶剂化物收集到布氏漏斗上并真空干燥，得到呈结晶固体的标题溶剂化物化合物。
对于实施例5，收集了粉末X射线衍射数据(PXRD)(见图9)，单晶的X射线晶体学数据(表3-4)，并获得了差示扫描量热(DSC)曲线(图10)和热重量分析(TGA)曲线(图11)。
表3实施例5的晶体数据和结构细化 表4原子坐标(×104)和等量同位素置换参数(×103).U(eq)定义为正交化Uij张量的痕量的三分之一。
实施例6 ((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯单赖氨酸盐正丙醇溶剂化物 重复实施例1的步骤A、B、C，只是将步骤C的滤液浓缩并与正丙醇(100mL)混合并加热到65℃以使单赖氨酸盐的溶剂化物结晶。将溶剂化物收集到布氏漏斗上并真空干燥，得到呈结晶固体的标题溶剂化物化合物。
对于实施例6，收集了粉末X射线衍射数据(PXRD)(见图12)，单晶的X射线晶体学数据(表5-6)，并获得了差示扫描量热曲线(图13)和热重量分析(TGA)曲线(图14)。
表5实施例6的晶体数据和结构细化 表6原子坐标(×104)和等量同位素置换参数(×103).U(eq)定义为正交化Uij张量的痕量的三分之一。
对比实施例1 (2R，3R)-3-[4-(4-氰苯基)噻唑-2-基]-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-[(二氢膦酰氧基)甲氧基]丁烷的双赖氨酸盐 在步骤A和B之后将由实施例1得到的上述式V产物，溶于甲醇(75mL)。向其中加入L-赖氨酸(1.8g)，pH维持在7.0到9.0，混合物在60℃加热4.5小时。热反应物以硅藻土层过滤。滤液浓缩到大约5mL，与乙醇(100mL)混合并加热到65℃以结晶出双赖氨酸盐。该盐收集到布氏漏斗上并真空干燥，得到3.71g呈灰白色结晶固体的标题化合物。
对比实施例2 (2R，3R)-3-[4-(4-氰苯基)噻唑-2-基]-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-[(二氢膦酰氧基)甲氧基]丁烷的双-三羟甲基氨基甲烷盐 将对比实施例1(10g，11.3mmol)溶于水中。加入22.6mL1N HCl使pH为2.65，并加入70mL乙酸乙酯用于萃取。混合物用70mL水洗涤。乙酸乙酯层的游离酸被分离，其中水层以乙酸乙酯萃取(30mL×2)，乙酸乙酯层真空浓缩得到380mg透明固体。加入溶于3.6mL水(70-80℃)中的2.596g的三羟甲基氨基甲烷胺盐。得到乳状悬浮液。反应混合物加热到50-55℃持续两小时，冷却到室温并搅拌18小时。过滤并以乙酸乙酯漂洗。双-三羟甲基氨基甲烷盐收集到布氏漏斗上并真空干燥，得到7.92g呈灰白色结晶固体的化合物。
对比实施例3 (2R，3R)-3-[4-(4-氰苯基)噻唑-2-基]-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-[(二氢膦酰氧基)甲氧基]丁烷的叔丁胺盐 在步骤A和B之后将由实施例1的产物IV的溶液，溶于50mL乙酸乙酯中并在氮气氛中向其中加入叔丁胺(5.3mL)。反应混合物在40℃下搅拌约1小时使产物结晶。双叔丁胺盐收集到布氏漏斗上并真空干燥，得到2.21g呈灰白色结晶固体的化合物。
对比实施例4 (2R，3R)-3-[4-(4-氰苯基)噻唑-2-基]-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-[(二氢膦酰氧基)甲氧基]丁烷，钠盐
步骤A
向(2R，3R)-3-[4-(4-氰苯基)噻唑-2-基]-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-醇，2，(8.74g，20mmol)溶于THF(40mL)的溶液中在氮气氛中和室温下加入氢化钠(0.80g，60％油溶液，20mmol)。所得混合物在室温下搅拌0.25小时然后加入二叔丁基氯甲基磷酸酯，3，(10.3g，40mmol)。反应混合物在50℃加热16小时。该反应混合物随后冷却到室温并减压浓缩。所得残余物溶于Et2O中并以水和盐水洗涤。有机层以MgSO4干燥并减压浓缩得到17.0g胶状物的粗化合物，4。小部分的该粗化合物通过C18反相色谱法纯化。色谱柱依次以30％CH3CN/H2O，38％CH3CN/H2O，45％CH3CN/H2O和50％CH3CN/H2O洗脱。含产物的级分减压浓缩以除去CH3CN。所得水层随后以Et2O萃取。Et2O层以盐水洗涤，干燥并减压浓缩得到纯化的白色固体状的化合物，4。光谱数据如下1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.35(s，1H)，7.98(d，2H，J＝9)，7.76(s，1H)，7.71(d，2H，J＝9)，7.63(s，1H)，7.36-7.27(m，1H)，6.86-6.78(m，2H)，5.53(dd，1H，J＝28，6)，5.53(dd，1H，J＝9，6)，5.17(d，1H，J＝15)，5.03(d，1H，J＝15)，4.01(q，1H，J＝7)，1.47(s，9H)，1.45(s，9H)，1.37(d，3H，J＝7)。MS[ESI+(M+H+]测定值660.2。
步骤B
将粗制的(2R，3R)-3-[4-(4-氰苯基)噻唑-2-基]-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-2-[(二叔丁基膦酰氧基)甲氧基]丁烷，4，(17g)溶于CH2Cl2(100mL)中。向该溶液中加入TFA(50mL)并在室温下搅拌反应混合物0.25小时。反应混合物随后减压浓缩。向残留物中加入H2O(200mL)，Et2O(100mL)和EtOAc(100mL)。水层的pH通过加入固体Na2CO3调节到7.6，随后分离有机层和水层。水层随后用400g C-18的反相色谱法处理，以水到5％CH3CN/H2O洗脱。含产物的级分减压浓缩，冷冻并冻干得到1.5g白色固体状的化合物，1.(1.5g，12％，两步)。光谱数据如下1H NMR(500MHz，D2O)δ8.91(s，1H)，7.92(s，1H)，7.81(d，2H，J＝8)，7.80(s，1H)，7.77(d，2H，J＝8)，7.21(dd，1H，J＝15，9)，6.99(ddd，1H，J＝9，9，2)，6.91(ddd，1H，J＝9，9，2)，5.35(dd，1H，J＝6，6)，5.29(d，1H，J＝15)，5.21(dd，1H，J＝6，6)，5.19(d，1H，J＝15)，3.86(q，1H，J＝7)，和1.35(d，3H，J＝7)；MS[(ESI-(M-H)-546.1]；C23H18F2N5O5S1P1/Na2/3.5H2O的分析计算值C，42.21H，3.85N，10.70Na，7.03.测定值C，42.32H，3.83N，10.60Na，7.04。
二叔丁基氯甲基磷酸酯，3，可通过下列任意方法制备。
方法1 二叔丁基磷酸银(6.34g，20mmol)，其通过混合二叔丁基磷酸酯(由二叔丁基亚磷酸酯通过Zwierzak和Kluba，Tetrahedron，第27卷，3163(1971)的方法制得)与1当量的碳酸银在50％乙腈水溶液中混合并冻干制得，与氯碘甲烷(35g，200mmol)在苯中混合并在室温下搅拌18小时。过滤反应混合物并将滤液减压浓缩。残余物经二氧化硅色谱法并以2∶1己烷-乙酸乙酯洗脱。适当的级分浓缩至干得到副标题化合物3(3.7g，收率71％)1H NMR(CDCl3)δ5.63(d，2H，J＝17)，1.51(s，18H)；MS(MH+＝259)。
方法2 二叔丁基磷酸四丁铵通过将二叔丁磷酸酯(20g，94mmol(由二叔丁基亚磷酸酯通过Zwierzak和Kluba，Tetrahedron，第27卷，3163(1971)的方法制得))溶于甲醇氢氧化四丁铵(47mL的1M溶液，47mmol)得到。反应混合物温度为23℃，且pH为4.33。用0.2小时加入甲醇氢氧化四丁铵(48mL的1M溶液，48mmol)调节反应混合物pH到6.5-7.0。反应混合物在大约26℃下搅拌0.5小时随后在低于40℃的浴温度下减压浓缩。粗残留物通过加入甲苯(3×100mL)共沸三次，随后将混合物减压浓缩。粗残留物随后在冷己烷(0℃)中研磨1小时，然后过滤收集固体，以最小量的冷己烷洗涤，干燥得到第一批白色固体状的二叔丁基磷酸四丁铵(24.0g)。母液减压浓缩随后在冷己烷(20mL)中研磨1小时。然后过滤收集固体，以最小量的冷己烷洗涤，干燥得到第二批白色固体状的二叔丁基磷酸四丁铵((8.5g，总共32.5g(77％))。将二叔丁基磷酸四丁铵(218g，480mmol)在苯(200mL)中的溶液在室温下用1.5小时滴加到搅拌的氯碘甲烷(800g，4535mmol)中。反应混合物在室温下再搅拌1.5小时随后减压浓缩。油状残留物溶于乙醚并过滤除去白色沉淀固体。有机层以饱和NaHCO3和H2O/盐水(1/1)洗涤。有机层随后以硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩得到红棕色油状物(320g)。该红棕色油状物经硅胶(800g)色谱法处理并以20％乙酸乙酯/己烷，25％乙酸乙酯/己烷，和30％乙酸乙酯/己烷洗脱。含产物的级分减压浓缩得到金色油状物。油状物以CH2Cl2(30mL)稀释，减压浓缩并随后真空干燥，得到化合物3(61.3g，收率49％)。1H NMR(苯-d6)δ5.20(2H，d，J＝15)，1.22(18H，s)。
方法3 碘氯甲烷(974g，402mL，5.53mol)在25℃下以二叔丁基磷酸四丁铵(250g，0.553mol)处理。用10分钟分次加入该磷酸酯。大约15分钟后该非均匀混合物变成澄清的淡红的溶液。混合物搅拌3小时，碘氯甲烷随后通过低于30℃的浴温度旋转蒸发去除。残留物置于1L叔丁基甲醚中并搅拌15分钟以沉淀碘化四丁铵副产物。碘化四丁铵通过烧结玻璃漏斗真空过滤去除。滤液通过旋转蒸发浓缩得到油状物，包含5∶1的3”和不期望的二聚物杂质的混合物
混合物可通过硅胶色谱法纯化以获得纯净的油状化合物3，产率约60％。
晶体数据和理化性质 单赖氨酸盐的溶剂化物的单晶通过结晶学分析，发现乙醇溶剂化物和正丙醇溶剂化物与异丙醇溶剂化物为同晶的。(表7)表7结晶数据 得到的((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯单赖氨酸盐的溶剂化物按比例增加且充分表征。物化性质包括溶解度、稳定性、吸湿性、紧密性等，都被评估并与对比实施例1的双赖氨酸盐比较。
单赖氨酸盐或其溶剂化物证实了极大改善的吸湿性(图1，2)，尤其在较高的RH值下(在90％RH下相对于对比实施例1的双赖氨酸盐50％的吸湿量)。例如，对比实施例1在60％RH具有大约10％的重量变化(图1)，而实施例1在相同湿度水平下具有大约2-2.5％的重量变化(图2)。平均起来，单赖氨酸盐或其溶剂化物较之双赖氨酸盐形式具有更好的稳定性(图4)。
异丙醇溶剂化物的吸湿数据显示了更大的改善(图3)。例如，在60％RH下具有少于1％的重量变化(图3)。
另外，实施例1保特了高水溶性(＞200mg/mL)，与对比实施例1的双赖氨酸盐的相似。
单赖氨酸盐或其溶剂化物的结晶很容易生长并显示出更理想的形态。物化研究表明其较之双赖氨酸盐具有更优越的溶液和物理稳定性。基于物质存储在受压稳定性条件下收集到的两周的稳定性数据，结晶乙醇溶剂化物显示出相对较低湿度下良好的稳定性和高温下(表8)在40℃/75％RH(打开和封闭)下最小量的降解。在任何其它存储条件下没有见到分解。
本发明的低吸湿性依次提供物理稳定性和原料可处理性，使得式I的单赖氨酸盐及其溶剂化物适于作为口服固体以及静脉内剂型(图8)。除了其改善的物理稳定性，单赖氨酸盐或其溶剂化物的另一个主要优点是减少了药物负载量从而相应导致更好的加工性。
表8实施例1溶剂化物的物理稳定性 实施例7-9 实施例1-3用于制备如下实施例4-6的药物组合物。
实施例7 2.5mg实施例1的化合物与淀粉、甘露糖醇、微晶纤维素和硬脂酸镁混合，其中合适的组分和数量可由本领域的普通技术人员确定，然后压制形成片剂。
实施例8 将2.5mg实施例2的化合物转化为冻干形式，与无菌水、植物油和聚乙二醇混合，其中合适的组分和数量可由本领域的普通技术人员确定，以制备药物溶液。
实施例9 将2.5mg实施例3的化合物与矿物油、丙二醇、液体石蜡、乳化蜡和水混合(活性成分大约为制剂重量的大约0.01％w/w到1％)，其中合适的组分和数量可由本领域的普通技术人员确定，以制备蜡状软膏。
实施例10-12 实施例7-9如下给予受治疗者。
实施例10 实施例7通过口服施用给全身感染白色念珠菌的第一组小鼠，每天给药两次持续两周。另一组全身感染白色念珠菌的小鼠每天四次给药持续两周。每天观察每组的感染，持续7天。
实施例11 实施例8通过静脉内施用给全身感染新型隐球菌的小鼠每天两次，持续一周。每天观察感染，持续14天。
实施例12 实施例9的乳膏剂局部施用给感染毛癣菌属物种的小鼠每天两次，持续1周。每天观察感染，持续7天。
不管是口服、胃肠外还是局部给药，本发明的盐及其溶剂化物都显示出优秀的抗真菌活性。
工业实用性 根据本发明，提供一种式I唑类化合物的单赖氨酸盐，或其药学上可接受的溶剂化物
其中R和R1各自为氢原子或(C1-C6)烷基，且A代表包含仲羟基或叔羟基的类型的三唑抗真菌盐化合物的非羟基部分。根据本发明的这些单赖氨酸盐，或其药学上可接受的溶剂化物适用于治疗，例如严重的全身性真菌感染。
权利要求
1.式I化合物的单赖氨酸盐，或其溶剂化物
其中R和R1各自为氢原子或(C1-C6)烷基，和
A选自如下基团
和式(i)
其中，在式(i)中
R3代表被一个或更多卤素原子取代的苯基；
R4代表氢或CH3；
R5代表氢，或与R4一起代表＝CH2；和
R6代表噻唑基、嘧啶基或三唑基，其中每个环任选被一个或多个选自卤素、＝O、CH＝CH-(C6H4)-OCH2CF2CHF2、和被一个或多个选自CN和OCH2CF2CHF2的基团取代的苯基、或被一个或多个选自卤素和甲基吡唑基的基团取代的苯基的基团所取代。
2.根据权利要求1的单赖氨酸盐或其溶剂化物，其中A代表式(i)
其中
R3代表被一个或多个卤素原子取代的苯基；
R4代表氢或CH3；
R5代表氢，或与R4一起代表＝CH2；和
R6代表噻唑基、嘧啶基或三唑基，其中每个环任选被一个或多个选自卤素、＝O、CH＝CH-(C6H4)-OCH2CF2CHF2、和被一个或多个选自CN和OCH2CF2CHF2的基团取代的苯基、或被一个或多个选自卤素和甲基吡唑基的基团取代的苯基的基团所取代。
3.根据权利要求1或2的单赖氨酸盐或其溶剂化物，其中式(i)的R3是2，4-二氟苯基。
4.根据权利要求1-3中任一项的单赖氨酸盐或其溶剂化物，其中式(i)的R4是甲基和R5是氢。
5.根据权利要求1-4任一项的单赖氨酸盐或其溶剂化物，其中式(i)的R6是4-(4-氰苯基)-噻唑-2-基。
6.根据权利要求1-5任一项的单赖氨酸盐或其溶剂化物，其中式I的R和R1各自为氢。
7.根据权利要求1或2的单赖氨酸盐或其溶剂化物，其中A为
或
8.根据权利要求1的单赖氨酸盐或其溶剂化物，其中A选自
9.根据权利要求1的单赖氨酸盐或其溶剂化物，其中A选自
和
10.根据权利要求1-9任一项的单赖氨酸盐的溶剂化物，其中所述其溶剂化物是乙醇溶剂化物。
11.根据权利要求1-9任一项的单赖氨酸盐的溶剂化物，其中所述其溶剂化物是异丙醇溶剂化物。
12.根据权利要求1-9任一项的单赖氨酸盐的溶剂化物，其中所述其溶剂化物是正丙醇溶剂化物。
13.一种药物组合物，其包含
根据权利要求1-9任一项的单赖氨酸盐，或其药学上可接受的溶剂化物；和
药学上可接受的辅料、稀释剂、或载体。
14.一种治疗真菌感染的方法，所述方法包括
对需要该治疗的哺乳动物宿主施用有效抗真菌量的根据权利要求1-9任一项的单赖氨酸盐，或其药学上可接受的溶剂化物。
15.一种制备水溶性的式I的单赖氨酸盐的方法
其中R和R1各自为氢或(C1-C6)烷基，和
A选自如下基团
和式(i)
其中，在式(i)中，
R3代表被一个或多个卤素原子取代的苯基；
R4代表氢或CH3；
R5代表氢，或与R4一起代表＝CH2；和
R6代表噻唑基、嘧啶基或三唑基，其中每个环任选被一个或多个选自卤素、＝O、CH＝CH-(C6H4)-OCH2CF2CHF2、和被一个或多个选自CN和OCH2CF2CHF2的基团取代的苯基、或被一个或多个选自卤素和甲基吡唑基的基团取代的苯基的基团所取代；
所述方法包括
(a)将式A-OH化合物，其中A如上述式I中所定义，与式III化合物反应
其中式III中的R和R1各自独立地为氢或(C1-C6)烷基，Pr代表羟基保护基；所述反应在惰性有机溶剂中，在碱存在下和大约25℃到50℃的温度下进行，形成式IV第一中间体
式IV中的R和R1各自独立为氢或(C1-C6)烷基，Pr代表羟基保护基，A如式I中定义；
(b)用有机溶剂除去式IV的羟基保护基Pr以形成式V第二中间体
式V中的R和R1各自独立为氢或(C1-C6)烷基，A如式I中定义；和
(c)将所述式V第二中间体与赖氨酸在pH为4.2-5.5的溶剂中反应以制备所述式I的单赖氨酸盐。
16.根据权利要求15的方法，其中Pr保护基是叔丁基。
17.根据权利要求15或16的方法，其中步骤(a)的溶剂是四氢呋喃。
18.根据权利要求15-17任一项的方法，其中步骤(a)中使用的碱是氢化钠。
19.一种制备水溶性单赖氨酸盐的方法，所述单赖氨酸盐具有式I
其中R和R1各自为氢或(C1-C6)烷基，和
A选自如下基团
和式(i)
其中，在式(i)中，
R3代表被一个或多个卤素原子取代的苯基；
R4代表氢或CH3；
R5代表氢，或与R4一起代表＝CH2；和
R6代表噻唑基、嘧啶基或三唑基，其中每个环任选被一个或多个选自卤素、＝O、CH＝CH-(C6H4)-OCH2CF2CHF2、和被一个或多个选自CN和OCH2CF2CHF2的基团取代的苯基、或被一个或多个选自卤素和甲基吡唑基的基团取代的苯基的基团所取代；
所述方法包括
(a)将式A-OH化合物，其中A如上述式I中所定义，与式III化合物反应
其中式III中的R和R1各自独立为氢或(C1-C6)烷基，Pr代表羟基保护基；所述反应在惰性有机溶剂中，在碱存在下和大约25℃到50℃的温度下进行，形成式IV第一中间体
式IV中的R和R1各自独立为氢或(C1-C6)烷基，Pr代表羟基保护基，A如式I中定义；
(b)用有机溶剂除去式IV的羟基保护基Pr以形成式V第二中间体
式V中的R和R1各自独立为氢或(C1-C6)烷基，A如式I中定义；
(c)将所述式V第二中间体与赖氨酸在pH为4.2-5.5的溶剂中反应以制备所述式I的单赖氨酸盐；和
(d)将所述单赖氨酸盐在溶剂中结晶以制备所述单赖氨酸盐的溶剂化物。
20.根据权利要求19的方法，其中步骤(d)中的溶剂是含水乙醇。
21.根据权利要求19或20的方法，其中步骤(d)中的溶剂是含水异丙醇。
22.根据权利要求19-21任一项的方法，其中步骤(d)中的溶剂是含水正丙醇。
23.根据权利要求15-22任一项的方法，其中原料A-OH的A是式(i)
24.具有如下结构的((2R，3R)-3-(4-(4-氰苯基)噻唑-2-基)-2-(2，4-二氟苯基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)丁-2-基氧基)甲基二氢磷酸酯的单赖氨酸盐
或其药学上可接受的溶剂化物。
25.根据权利要求23的单赖氨酸盐或其溶剂化物，所述盐或其溶剂化物是晶体形式。
26.根据权利要求24的单赖氨酸盐的溶剂化物，其中所述其溶剂化物是乙醇溶剂化物。
27.根据权利要求24的单赖氨酸盐的溶剂化物，其中所述其溶剂化物是异丙醇溶剂化物。
28.根据权利要求24的单赖氨酸盐的溶剂化物，其中所述其溶剂化物是正丙醇溶剂化物。
29.一种药物组合物，其包含
有效量的根据权利要求24的单赖氨酸盐或其药学上可接受的溶剂化物，和
药学上可接受的辅料、稀释剂、或载体。
30.根据权利要求29的药物组合物，其中所述组合物为片剂、胶囊、粉末、溶液、悬浮液、乳液、软膏、洗液、乳膏剂或喷雾剂。
31.一种治疗真菌感染的方法，所述方法包括
对需要该治疗的哺乳动物宿主施用有效抗真菌量的根据权利要求24的单赖氨酸盐，或其药学上可接受的溶剂化物。
32.一种治疗真菌感染的方法，所述方法包括
对需要该治疗的哺乳动物宿主口服施用有效抗真菌量的根据权利要求24的单赖氨酸盐，或其药学上可接受的溶剂化物。
33.一种治疗真菌感染的方法，所述方法包括
对需要该治疗的哺乳动物宿主胃肠外给药施用有效抗真菌量的根据权利要求24的单赖氨酸盐，或其药学上可接受的溶剂化物。
34.一种制备具有如下结构的水溶性单赖氨酸盐的方法，
所述方法包括
(a)将式B化合物
与式III’化合物反应
其中式III’的Pr代表羟基保护基；
所述反应在惰性有机溶剂中，在碱存在下和大约25℃到50℃的温度下进行，形成式IV’第一中间体
其中式IV’的Pr代表羟基保护基；
(b)用有机溶剂除去式IV’的羟基保护基Pr以形成式V’第二中间体
和
(c)将所述式V’第二中间体与赖氨酸在pH为4.2-5.5的溶剂中反应以制备所述单赖氨酸盐。
35.根据权利要求34的方法，其中Pr保护基是叔丁基。
36.根据权利要求34或35的方法，其中步骤(a)的溶剂是四氢呋喃。
37.根据权利要求34-36任一项的方法，其中步骤(a)中使用的碱是氢化钠。
38.一种制备水溶性单赖氨酸盐的溶剂化物的方法，该单赖氨酸盐具有下式
所述方法包括
(a)将式B化合物
与式III’化合物反应
其中式III’的Pr代表羟基保护基；所述反应在惰性有机溶剂中，在碱存在下和大约25℃到50℃的温度下进行，形成式IV’第一中间体
其中式IV’的Pr代表羟基保护基；
(b)用有机溶剂除去式IV’的羟基保护基Pr以形成式V’第二中间体
(c)将所述式V’第二中间体与赖氨酸在pH为4.2-5.5的溶剂中反应以制备所述单赖氨酸盐，和
(d)将所述单赖氨酸盐在溶剂中结晶以制备所述单赖氨酸盐的溶剂化物。
39.根据权利要求38的方法，其中步骤(d)中的溶剂是含水乙醇。
40.根据权利要求38或39的方法，其中步骤(d)中的溶剂是含水异丙醇。
41.根据权利要求38-40任一项的方法，其中步骤(d)中的溶剂是含水正丙醇。
42.根据权利要求1-9任一项的单赖氨酸盐在制备用于治疗真菌感染的药剂中的应用。
43.根据权利要求24的单赖氨酸盐在制备用于治疗真菌感染的药剂中的应用。
全文摘要
提供具有仲羟基或叔羟基的三唑化合物的单赖氨酸盐。更特别的，提供了新的水溶性的三唑抗真菌单赖氨酸盐化合物，或其溶剂化物，其具有通式I其中通式I中的A代表包含仲羟基或叔羟基的类型的三唑抗真菌化合物的非羟基部分。通式I中的R和R1可各自为氢原子或具有1到6个碳原子的烷基。该新颖的水溶性唑类化合物被可于治疗真菌感染并可口服、局部和胃肠外给药。
文档编号C07D405/14GK101213193SQ200680015029
公开日2008年7月2日 申请日期2006年5月1日 优先权日2005年5月3日
发明者琦 高, C-P·H·陈, M·G·法克斯, Y·R·彭德里, S·基亚乌, B·瓦卡拉加达 申请人:卫材R&D管理有限公司