取代的杂环及其作为chk1、pdk1和pak抑制剂的应用的制作方法

专利名称：取代的杂环及其作为chk1、pdk1和pak抑制剂的应用的制作方法
专利说明取代的杂环及其作为CHK1、PDK1和PAK抑制剂的应用 发明领域 本发明涉及新的取代的杂环、它们的药用组合物和使用方法。另外，本发明涉及治疗和预防癌症的的治疗方法。

背景技术：
化疗和放射照射是当今治疗癌症的主要选择，但是这两种手段的应用由于其对于正常组织的严重的副作用和频繁发生的肿瘤细胞抗性而受到严格限制。因此，非常需要在不增加与它们相关的毒性情况下改善这样的治疗的功效。达到此目的的一种方法是使用诸如那些在本文描述的特异性敏感药物。
个体细胞通过使其染色体精确拷贝，然后将这些分离(segregating)至分开的各细胞中而复制。DNA复制、染色体分离和分开的循环由维持各步骤有序和确保每一步骤精确进行的细胞内机制调节。这些过程的关键在于细胞周期检查点(Hartwell等，Science，Nov 3，1989，246(4930)629-34)，在这些检查点中，细胞可以停滞以保证DNA修复机制在持续通过循环进入有丝分裂之前有时间进行。细胞周期中有两个这样的检查点——由p53调节的G1/S检查点和由Ser/Thr激酶检查点激酶1(CHK1)监测的G2/M检查点。另外，最近Chk1还被鉴定为在S相期检查点中很重要(Zhao等PNAS，2002年11月12日，99(23)14795-14800；Sorsensen等，Cancer Cell，2003年3月，卷3247-258和Senggupta等，Journal of Cell Biology，卷166，6，801-813)。
因为由这些检查点导致的细胞周期停滞是极其重要的机制，通过该机制细胞可克服由放射治疗或化疗导致的损伤，所以它们被新的药物的消除将增加肿瘤细胞对DNA损伤性治疗的敏感性。另外，大多数肿瘤中的肿瘤的由p53突变的G1/S检查点的特异性消除，可被开发以提供肿瘤选择性药物。设计消除G2/M检查点的化疗敏感剂或放疗敏感剂的一条途径是，开发关键G2/M调节激酶CHK1的抑制剂，并且此途径已经显示在许多概念研究的试验中有效。(Koniaras等，Oncogene，2001，207453；Luo等，Neoplasia，2001，3411；Busby等，Cancer Res.，2000，602108；Jackson等，Cancer Res.，2000，60566)。
某些激酶属于丝氨酸/苏氨酸激酶家族并且位于细胞内和与诸如那些影响肿瘤细胞生长的生物化学信号传递有关。这样的丝氨酸/苏氨酸激酶信号传递通路包括Raf-MEK-ERK级联反应和那些PI3K的下游诸如PDK-1、AKT和mTOR(Blume-Jensen和Hunter，Nature，2001，411，355)。这些丝氨酸/苏氨酸激酶通路也已经显示调节其它丝氨酸/苏氨酸激酶及被所述其它的丝氨酸/苏氨酸激酶所调节，而所述其它丝氨酸/苏氨酸激酶也调节肿瘤生长和入侵的其它的丝氨酸/苏氨酸激酶以及被所述其它的丝氨酸/苏氨酸激酶所调节。一个这样的激酶家族是细胞内丝氨酸/苏氨酸激酶的p21-激活的蛋白质激酶(Pak)家族。
Pak激酶家族作为小p21 Rho GTP酶、Rac和Cdc42的下游效应器起作用(Bokoch，Annual Review of Biochemistry，2003，72，741-781)。已经鉴定出正好分入两个亚家族的六种人Pak激酶。第一个亚家族(组I)包括Pak1(Pakα)、Pak2(Pakγ、hPak65)和Pak3(Pakβ)。另一个亚家族(组II)包括Pak4、Pak5和Pak6。组I家族Paks在它们的激酶域中共享93％的同一性，而组II Paks激酶域与组I激酶域更区别地表现54％的同一性。组1 Pak激酶可被多种GTP酶-依赖的和-不依赖的机制激活。组1 Pak激酶与激活的(GTP-结合的)p21(Rac/Cdc42)相互作用，抑制p21的GTP酶活性并导致激酶自动磷酸化和激活。调节GTP酶的Rho家族的GTP-GDP结合状态的鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEFs)和GTP酶-激活蛋白(GAPs)，是由Pak激活的下游信号传递的重要的决定簇。
Pak激酶家族已经涉及细胞存活、转化、增殖和细胞运动的调节(Bokoch，Annual Review of Biochemistry，2003，72，741-781；Kumar和Hung，Cancer Research，2005，65，2511-2515)。Ras通路的Pak1信号下游和Pak的激活已经显示在细胞转化中起作用。如在比较简单的真核细胞中的那样，Paks在哺乳动物细胞中调节MAPK信号通路，例如，Pak1使Raf1和Mek1两者磷酸化。Paks在导致影响生长因子介导的转移和侵袭的细胞骨架重建的生长因子信号传递中起重要作用。Pak1激活还通过使Bad失活来促进细胞存活，提示Pak1可涉及癌症细胞存活和演进(progression)。
有新的资料指出Pak激酶家族对很多种人类癌症的肿瘤发生直接或间接地产生作用(Vadlamudi和Kumar，2003，Cancer and MetastasisReviews，2003，22，385-393；Kumar和Hung，Cancer Research，2005，65，2511-2515)。例如，已有报告在卵巢乳腺肿瘤中Pak1基因扩增和相应的Pak 1蛋白质向上-调节(Schraml等，American Journal of Pathology，2003，163，985-992)。已有报告Pak1表达增加结肠直肠癌的恶化转移(Carter等，Clinical Cancer Research，2004，10，3448-3456)。此外，已经确定在结肠直肠激酶中Pak4基因扩增和突变(Parsons等，Nature，2005，436，792)。新的资料提示Pak1涉及乳腺癌的演进。例如，小鼠乳腺中的组成性激活(constitutively active)Pak1转基因的表达诱发乳腺上皮增生(Wang等，The EMBO Journal，2002，21，5437-5447)。最后，由Rac/Cdc42和鸟嘌呤交换因子(GEFs)对Pak活性的调节还可参与癌症中Pak信号级联反应的过度激活。例如，有关GEF Vav1在胰腺癌症的肿瘤发生中的关键作用的新的资料已经揭示，在治疗胰腺肿瘤中以Rac-Pak信号通路为标靶，存在可能的机会(Fernandez-Zapico等，CancerCell，2005，7，39-49)。
这些结果提示，药理学上的Pak抑制剂对于治疗多种形式的癌症疾病应该具有治疗价值。
还有证据显示，Pak在调节神经细胞突起和正常脑发育中起作用(Hofmann等，Journal of Cell Science，2004，117，4343-4354；Nikolic，TheInternational Journal of Biochemistry，2002，34，731-745)。Pak抑制剂可用于治疗神经退行性疾病和与神经再生缺陷相关的疾病。此外，Pak抑制剂还可在治疗关节疾病或关节疼痛中具有潜在的用途。
磷脂酰肌醇3’OH激酶(PI3K)通路已知在本质上涉及调节细胞存活和凋亡(Yao和Cooper，Oncogene，1996，13，343-351；Franke等，Oncogene，2003，22，8983-8998)。作为该通路的部分，磷酸肌醇依赖的蛋白质激酶-1(PDK1)和Akt在信号传导中起关键作用(Vanhaesebroeck和Alessi，Biochem.J.，2000，346，561-576)。PI3K的激活导致产生结合于PDK1和Akt的PH结构域(pleckstrin homology)上以作用于膜联合(membrane association)和Akt的激活的(3，4，5)三磷酸磷脂酰肌醇。PI3K通路激酶诸如PI3K、Akt、mTOR的基因突变与包括结肠癌、乳腺癌和前列腺癌的许多人癌症密切相关(Philp等，Cancer Res.，2001，61，7426-7429；Bellacosa等，Int.J.Cancer，1995，64，280-285)。由还原细胞PIP3的脂质磷酸酶PTEN的突变或缺失造成的该通路的混乱，与多种人肿瘤包括乳腺癌、前列腺癌、子宫内膜癌以及黑色素瘤和神经胶质母细胞瘤相关(Steck等，Nat.Genetics，1997，15，356-362)。
得自亚等位基因PDK1敲除的具PTEN缺乏背景的小鼠的在体证据强烈暗示，PDK存在于很多肿瘤类型中(Bayascas等，Curr.Biol.，2005，15，1839-1846)。再有，使用PDK1抑制剂，7-羟基斯托斯波林(stauro-sporine)的在体研究与这些结果相一致(Sato等，Oncogene，2002，21，1727-1738)。因此可以期望，磷酸肌醇依赖的蛋白质激酶-1(PDK1)的抑制剂将用于治疗诸如癌症，例如结肠癌、乳腺癌或前列腺癌的疾病。
发明简述 依据本发明，本申请人在此公开新的化合物，所述化合物为有效的激酶CHK1抑制剂并因此具有预防细胞周期在对DNA损伤的应答中在G2/M检查点停滞的能力。本发明的某些化合物还是PDK1抑制剂。因此本发明化合物由于其抗增殖(诸如抗癌症)活性而是有用的，并且因此用于治疗人或动物体的方法中。
本发明的某些化合物还是Pak激酶抑制剂，例如一个或多个Pak1、Pak 2、Pak 3、Pak 4、Pak 5和Pak 6激酶，特别是Pak 1、Pak 2或Pak 4激酶的抑制剂。具有Pak激酶活性的化合物也期望例如通过抑制细胞存活、细胞转化或细胞运动，用于抑制肿瘤发生。
本发明还涉及用于制备所述化合物的方法，涉及包含所述化合物的药用组合物以及涉及它们在制备药物中的应用，所述药物用于在温血动物诸如人中产生抗癌效应，例如抗增殖效应。
本发明包括这样的化合物的药学上可接受的盐。另外依据本发明，本申请人提供药用组合物和在癌症治疗中应用这样的化合物的方法。
这样的特性期望在治疗与细胞周期停滞、细胞增殖、细胞存活、细胞转化或细胞运动相关的疾病状态中具有价值，所述疾病状态有诸如癌症(实体肿瘤和白血病)、纤维增殖性和分化性疾患、银屑病、类风湿性类关节炎、卡波济氏肉瘤、血管瘤、急性和慢性肾病、粉瘤、动脉粥样硬化、动脉再狭窄、自身免疫性疾病、神经退化性疾病和与神经再生缺陷相关的疾病诸如帕金森氏病和阿尔茨海默氏病、急性和慢性炎症诸如骨关节炎、类风湿性类关节炎或关节疼痛、骨病和伴视网膜血管增生的眼睛疾病。
发明详述 因此，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，
(I) 其中 A和D各自独立选自N、CH、S、O和NR4； L选自NR5、O和S； X和Y各自独立选自N和CH； R1选自氰基、卤代；C1-6烷基、-NR11R12、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂环基、OR6；-CO碳环基、-CO杂环基、-CO(C1-6烷基)、-CONR28R29、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳环基、-S(O)x杂环基、S(O)yNR28R29和-(C1-6烷基)S(O)yNR28R29，其中x独立为0-2和y独立为1或2；和其中R1可在一个或多个碳原子上被一个或多个R9任选取代；和其中如果杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R10的基团任选取代； R2选自(C1-3烷基)NR7R8、含至少一个氮原子的4-至7-元杂环、-CO碳环基、-CO杂环基、-CO(C1-6烷基)、-CONR28R29、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳环基、-CO2杂环基、-CO2NR28R29、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x环烷基、-S(O)x环烯基、-S(O)x杂环基、S(O)yNR28R29和-(C1-6烷基)S(O)yNR28R29，其中x独立为0-2和y独立为1或2和其中R2可在一个或多个碳原子上被一个或多个R13任选取代；和其中如果杂环基还含有-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R14的基团任选取代； R3选自H、苄基、C1-6烷基、环烷基、环烯基、芳基、杂环基、OR6、CHO、-CO碳环基、-CO(C1-6烷基)、-CONR28R29、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳环基、-S(O)x杂环基、S(O)yNR28R29和-(C1-6烷基)S(O)yNR28R29，其中x独立为0-2，y独立为1或2和其中R3可在一个或多个碳原子上被一个或多个R15任选取代；和其中如果杂环基含-NH-部分，则所述氮可被选自R16的基团任选取代； R4选自H、C1-3烷基、环丙基和CF3； R5选自H、C1-6烷基、环烷基、环烯基、杂环基和OR6；其中R5可在碳上被一个或多个R17任选取代；和其中如果所述杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R18的基团任选取代； R6选自H、C1-6烷基、环烷基、环烯基、芳基和杂环基；其中R6可在碳上被一个或多个R19任选取代；和其中如果所述杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R24的基团任选取代； R7和R8独立选自H、C1-6烷基、环烷基、环烯基、芳基和杂环基；其中R7和R8各自独立地可在碳上被一个或多个R20任选取代；和其中如果所述杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R21的基团任选取代； R11和R12独立选自H、C1-6烷基、环烷基、环烯基、芳基、杂环基，其中R11和R12各自独立地可在碳上被一个或多个R32任选取代；和其中如果所述杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R33的基团任选取代； R9、R13、R15、R17、R19、R20、R32和R34各自独立选自卤代、硝基、-NR28R29、氰基、异氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、环烷基、环烯基、杂环基、羟基、酮基(＝O)、-O(C1-6烷基)、-O碳环基、-O杂环基、-O芳基、-OC(O)C1-6烷基、-NHCHO、-N(C1-6烷基)CHO、-NHCONR28R29、-N(C1-6烷基)CONR28R29、-NHCO(C1-6烷基)、-NHCO碳环基、-NHCO(杂环基)、-NHCO2(C1-6烷基)；-NHCO2H、-N(C1-6烷基)CO(C1-6烷基)、-NHSO2(C1-6烷基)、羧基、-脒基、-CHO、-CONR28R29、-CO(C1-6烷基)、-CO杂环基、-CO环烷基、-CO环烯基、-CO芳基、-CO2H、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳环基、-CO2杂环基、-OC(O)(NR28R29)、巯基、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳环基、-S(O)x杂环基和-S(O)xNR28R29；其中x独立为0-2，其中R9、R13、R15、R17、R19、R20、R32和R34各自独立地可在碳上被一个或多个R22任选取代和其中如果杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R23的基团任选取代； R10、R14、R16、R18、R21、R24、R33和R35各自独立选自氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、环烷基、环烯基、杂环基、羟基、-O(C1-6烷基)、-O碳环基、-脒基、-CHO、-CONR28R29、-CO(C1-6烷基)、-CO杂环基、-CO碳环基-CO芳基、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳环基、-CO2杂环基、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳环基、-S(O)x杂环基和-S(O)yNR28R29；其中x独立为0-2和y独立为1或2；其中R10、R14、R16、R18、R21、R24、R33和R35各自独立地可在碳上被一个或多个R25任选取代和其中如果所述杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R26的基团任选取代； R22和R25各自独立选自卤代、硝基、-NR28R29、氰基、异氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、环烷基、环烯基、杂环基、羟基、酮基(＝O)、-O(C1-6烷基)、-O碳环基、-O杂环基、-O芳基、-OC(O)C1-6烷基、-NHCHO、-N(C1-6烷基)CHO、-NHCONR28R29、-N(C1-6烷基)CONR28R29、-NHCO(C1-6烷基)、-NHCO碳环基、-NHCO(杂环基)、-NHCO2(C1-6烷基)；-NHCO2H、-N(C1-6烷基)CO(C1-6烷基)、-NHSO2(C1-6烷基)、羧基、-脒基、-CHO、-CONR28R29、-CO(C1-6烷基)、-CO杂环基、-CO环烷基、-CO环烯基、-CO2H、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳环基、-OC(O)(NR28R29)、巯基、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳环基、-S(O)x杂环基和-S(O)xNR28R29；其中x独立为0-2，其中R22和R25可在碳上被一个或多个R36任选取代和其中如果所述杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R27的基团任选取代； R23和R26各自独立选自氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、环烷基、环烯基、杂环基、羟基、-O(C1-6烷基)、-O碳环基、-脒基、-CHO、-CONR28R29、-CO(C1-6烷基)、-CO杂环基、-CO环烷基、-CO环烯基、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳环基、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳环基、-S(O)x杂环基和-S(O)yNR28R29；其中x独立为0-2和y独立为1或2；其中R23和R26各自独立地可在碳上被一个或多个R30任选取代和其中如果所述杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R31的基团任选取代； R28和R29各自独立选自H、氨基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、环烷基、环烯基、杂环基、羟基、-O(C1-6烷基)、-O芳基、-OCO烷基、-脒基、-CHO、-CO(C1-6烷基)、-CO杂环基、-CO环烷基、-CO环烯基、-SO(C1-6烷基)、-SO2(C1-6烷基)，其中R28和R29各自独立地可在碳上被一个或多个R34任选取代；和其中如果所述杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R35的基团任选取代； R30和R36各自独立选自卤代、硝基、-NR28R29、氰基、异氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、环烷基、环烯基、杂环基、羟基、酮基(＝O)、-O(C1-6烷基)、-O碳环基、-OC(O)C1-6烷基、-NHCHO、-N(C1-6烷基)CHO、-NHCONR28R29、-N(C1-6烷基)CONR28R29、-NHCO(C1-6烷基)、-NHCO碳环基、-NHCO(杂环基)、-NHCO2(C1-6烷基)；-NHCO2H、-N(C1-6烷基)CO(C1-6烷基)、-NHSO2(C1-6烷基)、羧基、-脒基、-CHO、-CONR28R29、-CO(C1-6烷基)、-CO杂环基、-CO环烷基、-CO环烯基、-CO2H、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳环基、-OC(O)(NR28R29)、巯基、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳环基、-S(O)x杂环基和-S(O)xNR28R29；其中x独立为0-2； R27和R31各自独立选自氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、环烷基、环烯基、杂环基、羟基、-O(C1-6烷基)、-O碳环基、-(C1-6烷基)-O-(C1-6烷基)、-脒基、-CHO、-CONR28R29、-CO(C1-6烷基)、-CO杂环基、-CO环烷基、-CO环烯基、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳环基、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳环基、-S(O)x杂环基和-S(O)yNR28R29；其中x独立为0-2和y独立为1或2； 如在本申请中所用的术语“任选取代”，意指取代是任选的并且因此，有可能指定的原子未被取代。一旦取代是必需的，则这样的取代意指指定的原子上的任何数量的氢被选自指定的基团所置换，条件是不超过指定的原子的正常价并且取代导致稳定的化合物。
当环显示在环结构中，其是指环系统是芳族的。
术语“烃”单独使用或作为前缀或后缀使用，指的是任何仅含碳和氢原子的最多至14个碳原子的结构。
术语“烃基团”或“烃基(hydrocarbyl)”单独使用或作为前缀或后缀使用，指的是任何由烃去除一个或多个氢而形成的结构。
术语“烷基”单独使用或作为前缀或后缀使用，除非另有特指，指的是含1个至约12个碳原子的单价直链或支链烃基且包括直链和支链烷基。当提及单个烷基诸如“丙基”时则仅特指直链形式，而当提及单个支链烷基诸如“异丙基”时则仅特指支链形式。例如，“C1-6烷基”包括C1-4烷基、C1-3烷基、丙基、异丙基和叔-丁基。类似的惯例适用于其它基团，例如“苯基C1-6烷基”包括苯基C1-4烷基、苄基、1-苯基乙基和2-苯基乙基。
术语“烯基”单独使用或作为前缀或后缀使用，除非另有特指，指的是具有至少一个碳-碳双健和含至少2个至最多约12个碳原子的单价直链或支链烃基。
术语“炔基”单独使用或作为前缀或后缀使用，除非另有特指，指的是具有至少一个碳-碳叁健和含至少2个至最多约12个碳原子的单价直链或支链烃基。
术语“环烷基”单独使用或作为前缀或后缀使用，指的是饱和的、包含含至少3个至最多约12个碳原子的烃基单价环。当环烷基包含多于一个环，则环可为稠合的或未稠合的并包括双环基。稠合的环一般指的是之间共享两个原子的至少两个环。作为实例的环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基和降冰片基(norboranyl)。
术语“环烯基”单独使用或作为前缀或后缀使用，指的是包含含至少3个至最多约12个碳原子的烃基单价环，但不包括芳族环系统。当环烯基含多于一个环时，则环可为稠合的或未稠合的并包括双环基。作为实例的环烯基包括环己烯基和环庚烯基。
术语“芳基”单独使用或作为前缀或后缀使用，指的是具有芳族特征(如，4n+2个离域电子)和包含6个至最多约14个碳原子的一个或多个多不饱和碳环的烃基，其中该基团位于芳环的碳上。作为实例的芳基包括苯基、萘基和茚基。
术语“烷氧基”单独使用或作为前缀或后缀使用，指的是通式为-O-R的基团，其中-R选自烃基。作为实例的烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、叔-丁氧基、异丁氧基、环丙基甲氧基、烯丙氧基和炔丙基氧基。
术语“碳环基”指的是饱和的、部分饱和的和不饱和的、单环、双环或多环碳环。这些可包括稠合的或桥连的双环或多环系统。碳环基在其环结构中可具有3-12个碳原子，即C3-12碳环基和在具体的实施方案中为在其环结构中具有3-7个碳原子的单环或具有7-10个碳原子的双环。适合的碳环基实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环己烯基、环戊二烯基、茚满基、苯基和萘基。
“杂环基”是含4-12个原子(其中至少一个原子选自氮、硫或氧)的饱和的、部分饱和的或不饱和的单环或双环，除非另有特指，其可为碳或氮连接的，其中-CH2-基团可被-C(O)-任选置换和环硫原子可被任选氧化形成S-氧化物。杂环基可包含多于一个环。当杂环基包含多于一个环时，该环可为稠合的。稠合的环一般指的是之间共享两个原子的至少两个环。杂环基可为芳族的。杂环基的实例包括，但不限于，1H-吲唑基、2-吡咯酮基、2H，6H-1，5，2-二噻嗪基、2H-吡咯基、3H-吲哚基、4-哌啶酮基、4aH-咔唑基、4H-喹嗪基、6H-1，2，5-噻二嗪基、吖啶基、氮杂环庚烷基(azepanyl)、氮杂环丁烷基、环乙亚胺基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋喃基、苯并硫代呋喃基、苯并噻吩基(benzothiophenyl)、苯并二氧杂环戊烯基、苯并嗪基、二氢苯并嗪基、3，4-二氢-1，4-苯并嗪基、苯并唑基、苯并硫代苯基(benzthiophenyl)、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异唑基、苯并噻唑、苯并异噻唑基、苯并咪唑基、苯并咪唑啉酮基(benzimidazalonyl)、咔唑基、4aH-咔唑基、b-咔啉基、苯并二氢吡喃基、苯并吡喃基、噌啉基、十氢喹啉基、2H，6H-1，5，2-二噻嗪基、二氧杂环戊烷基、呋喃基、2，3-二氢呋喃基、2，5-二氢呋喃基、二氢呋喃并[2，3-b]四氢呋喃基、呋喃基、呋咱基、高哌啶基、咪唑基、咪唑烷基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、indolenyl、二氢吲哚基、中氮茚基、吲哚基、异苯并呋喃基、异苯并二氢吡喃基、异吲唑基、异二氢吲哚基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异唑基、吗啉基、萘啶基、八氢异喹啉基、二唑基、1，2，3-二唑基、1，2，4-二唑基、1，2，5-二唑基、1，3，4-二唑基、唑烷基、唑基、环氧乙烷基、唑烷基萘嵌二氮杂苯基、菲啶基、菲咯啉、吩吡嗪基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噻基(phenoxathiinyl)、吩嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶基、蝶啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、嘌呤基、吡喃基、吡咯烷基、吡咯啉基、吡咯烷基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并唑基、吡啶并咪唑基、吡啶并噻唑基、吡啶基、N-氧化物-吡啶基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、吡咯基、吡啶基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、咔啉基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢噻吩基、硫代四氢喹啉基、6H-1，2，5-噻二嗪基、1，2，3-噻二唑基、1，2，4-噻二唑基、1，2，5-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并唑基、噻吩并咪唑基、苯硫基、硫杂丙环基、三嗪基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、1，2，5-三唑基、1，3，4-三唑基和氧杂蒽基(xanthenyl)。在本发明的一个方面， “杂环基”是含5、6或7个原子(其中至少一个原子选自氮、硫或氧)的饱和的、部分饱和的或不饱和的单环，除非另有特指，其可为碳或氮连接的，其中-CH2-基团可被-C(O)-任选置换和环硫原子可被任选氧化形成S-氧化物。杂环基的具体实例包括氮杂环庚烷基、1H-吲唑基、哌啶基、1H-吡唑基、嘧啶基、吡咯烷基、吡啶基和噻吩基。
如用于本文的“含至少一个氮原子的4-至7-元杂环”意指含至少一个氮原子的4-、5-、6-或7-元杂环。作为实例的含至少一个氮原子的4-至7-元杂环包括，但不限于哌啶基、氮杂环丁烷基、氮杂环庚烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、哌嗪基、咪唑基、吗啉基、二氢吲哚基和硫代吗啉基。
术语“卤代”意指氟代、氯代、溴代和碘代。
当任何变量(如，R28、R29等)不只一次在化合物的任何式中出现时，其在每一次出现时的定义均独立于其在其它每一次出现时的定义。
某些式(I)化合物可具有手性中心和/或几何异构中心(E-和Z-异构体)并因此这些化合物可以具体的立体异构形式或几何的形式存在。应该理解，本发明包含所有这样的拥有CHK1、Pak或PDK1激酶抑制活性的光学异构体、非对映异构体和几何异构体及其混合物。本发明还包括所有拥有CHK1、Pak或PDK1激酶抑制活性的的式(I)化合物的互变异构形式。如何例如通过拆分外消旋的形式或通过从光学性起始原料合成制备光学活性形式，为本领域所熟悉。当需要时，可通过本领域已知的方法实现外消旋的原料的分离。除非具体指明特殊的立体化学或异构形式，所有手性形式的、非对映异构形式的、外消旋形式的和所有几何异构形式的结构都是想要的。
以下对于包含在式(I)中的可变基团的取代基为本发明的更进一步的实施方案。这样的特别的取代基在适当时可与在上文或下文定义的任何定义、权利要求书或实施方案一起使用。
X为N。
Y为CH。
X为CH和Y为CH。
D为S。
A为S。
A为N。
A为NR5 D为N。
D为NR5 A为O。
D为O。
A为N和D为O。
A为S和D为N。
X为N和A为S。
X为N和D为S。
X为N和A为O。
X为N和D为O。
X为N；A为S；和Y为CH。
X为N；D为S；和Y为CH。
X为N；A为S；D为CH和Y为CH。
X为N；D为S；A为CH和Y为CH。
至少一个A或D为S。
X为N；A为S；D为N和Y为CH。
X为N；D为S；A为N和Y为CH。
A为CH；D为NR4；X为CH；和Y为CH。
A为CH；D为NH；X为CH；和Y为CH。
L为NR5。
L为NR5和R5为H。
L为NR5和R5为环丙基，其中R5可在碳上被一个或多个R17任选取代。
L为NR5和R5为H或C1-3烷基，其中R5可在碳上被一个或多个R17任选取代。
L为NH。
L为O。
L为S。
R1选自C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基和杂环基，其中R1可在一个或多个碳原子上被一个或多个R9任选取代；和其中如果杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R10的基团任选取代。
R1为芳基，其中R1可在一个或多个碳原子上被一个或多个R9任选取代。
R1为芳基，其中R1可在一个或多个碳原子上被一个或多个R9任选取代，其中R9选自卤代、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、杂环基、-O(C1-6烷基)、-CO(C1-6烷基)、-CONR28R29和-NHCO(杂环基)其中R9可在碳上被一个或多个R22任选取代和其中如果杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R23的基团任选取代。
R1为杂环基，其中R1可在一个或多个碳原子上被一个或多个R9任选取代；和其中如果杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R10的基团任选取代。
R1为芳基，其中R1可在一个或多个碳原子上被一个或多个R9任选取代，其中R9选自卤代和C1-6烷基和其中R9可在碳上被一个或多个R22任选取代，其中R22选自卤代、-NR28R29、氰基、异氰基、芳基、环烷基、环烯基，和其中R22可在碳上被一个或多个R36任选取代和其中如果所述杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R27的基团任选取代。
R1为芳族杂环基，其中R1可在一个或多个碳原子上被一个或多个R9任选取代；和其中如果杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R10的基团任选取代。
R1选自苯并咪唑基、苯并嗪基、二氢苯并嗪基、咪唑啉基、噻吩基、吡唑基；pyradinyl和嘧啶基，其中R1可在一个或多个碳原子上被一个或多个R9任选取代；和其中如果杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R10的基团任选取代。
R2为含至少一个氮原子的4-至7-元杂环，其中所述杂环基可在一个或多个碳原子上被一个或多个R13任选取代；和另外其中如果所述杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R14的基团任选取代。
R2为含至少一个氮原子的4-至7-元饱和杂环，其中所述杂环基可在一个或多个碳原子上被一个或多个R13任选取代；和另外其中如果所述杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R14的基团任选取代。
R2为含至少一个氮原子的4-元杂环，其中所述杂环基可在一个或多个碳原子上被一个或多个R13任选取代；和另外其中如果所述杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R14的基团任选取代。
R2为含至少一个氮原子的5-元杂环，其中所述杂环基可在一个或多个碳原子上被一个或多个R13任选取代；和另外其中如果所述杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R14的基团任选取代。
R2为含至少一个氮原子的6-元杂环，其中所述杂环基可在一个或多个碳原子上被一个或多个R13任选取代；和另外其中如果所述杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R14的基团任选取代。
R2为含至少一个氮原子的7-元杂环，其中所述杂环基可在一个或多个碳原子上被一个或多个R13任选取代；和另外其中如果所述杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R14的基团任选取代。
R2选自哌啶基、氮杂环丁烷基、氮杂环庚烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、哌嗪基、咪唑基、吗啉基、二氢吲哚基和硫代吗啉基，其中所述哌啶基、氮杂环丁烷基、氮杂环庚烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、哌嗪基、咪唑基、吗啉基、二氢吲哚基和硫代吗啉基可在一个或多个碳原子上被一个或多个R13任选取代；和另外其中所述哌啶基、氮杂环庚烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、哌嗪基、咪唑基、吗啉基、二氢吲哚基和硫代吗啉基可在N上被选自R14的基团任选取代。
R2选自吡咯烷-3-基、哌啶-3-基和氮杂环庚烷-3-基，其中所述吡咯烷-3-基、哌啶-3-基和氮杂环庚烷-3-基可在一个或多个碳原子上被一个或多个R13任选取代；和另外其中所述吡咯烷-3-基、哌啶-3-基，或氮杂环庚烷-3-基可在N上被选自R14的基团任选取代。
R3选自H、苄基、C1-6烷基、环烷基、环烯基、芳基、杂环基和OR6，其中R3可在一个或多个碳原子上被一个或多个R15任选取代；和其中如果杂环基含-NH-部分，则所述氮可被选自R16的基团任选取代。
R3为在一个或多个碳原子上被一个或多个R15任选取代的吡嗪基。
R3为H。
R3为甲基。
R4为H。
本发明的另一方面，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中 A为CH； D为S； L为NR5； X为N； Y为CH； R1选自C1-6烷基、芳基和杂环基，其中R1可在一个或多个碳原子上被一个或多个R9任选取代；和其中如果杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R10的基团任选取代； R2为含至少一个氮原子的4-至7-元杂环，其中R2可在一个或多个碳原子上被一个或多个R13任选取代；和其中如果杂环基还含有-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R14的基团任选取代； R3为H； R5为H或C1-3烷基。
本发明的另一方面，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中 A为CH； D为S； L为NR5； X为N； Y为CH； R1选自芳基和杂环基，其中R1可在一个或多个碳原子上被一个或多个R9任选取代；和其中如果杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R10的基团任选取代； R2为(C1-3烷基)NR7R8，其中R2可在一个或多个碳原子上被一个或多个R13任选取代； R3为H； R5为H或C1-3烷基； R7和R8独立选自H、C1-6烷基、环烷基、环烯基、芳基和杂环基；其中R7和R8各自独立地可在碳上被一个或多个R20任选取代；和其中如果所述杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R21的基团任选取代。
在本发明的又一方面，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中 A为CH； D为S； L为NR5； X为N； Y为CH； R1选自芳基和杂环基，其中R1可在一个或多个碳原子上被一个或多个R9任选取代；和其中如果杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R10的基团任选取代； R2为含至少一个氮原子的4-至7-元杂环，其中R2可在一个或多个碳原子上被一个或多个R13任选取代；和如果杂环基还含有-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R14的基团任选取代； R3为H； R5为H或C1-3烷基。
本发明的再一方面，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中 A为CH； D为NR4； L为NR5； X为CH； Y为CH； R1选自C1-6烷基、芳基和杂环基，其中R1可在一个或多个碳原子上被一个或多个R9任选取代；和其中如果杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R10的基团任选取代； R2为含至少一个氮原子的4-至7-元杂环，其中R2可在一个或多个碳原子上被一个或多个R13任选取代；和其中如果杂环基还含有-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R14的基团任选取代； R3为H； R4为H、C1-3烷基、环丙基和CF3； R5为H或C1-3烷基。
本发明的再一方面，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中 A为CH； D为NR4； L为NR5； X为CH； Y为CH； R1选自芳基和杂环基，其中R1可在一个或多个碳原子上被一个或多个R9任选取代；和其中如果杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R10的基团任选取代； R2为(C1-3烷基)NR7R8，其中R2可在一个或多个碳原子上被一个或多个R13任选取代； R3为H； R4为H、C1-3烷基、环丙基和CF3； R5为H或C1-3烷基； R7和R8独立选自H、C1-6烷基、环烷基、环烯基、芳基和杂环基；其中R7和R8各自独立地可在碳上被一个或多个R20任选取代；和其中如果所述杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R21的基团任选取代。
在本发明的还一方面，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中 A为CH； D为NR4； L为NR5； X为CH； Y为CH； R1选自芳基和杂环基，其中R1可在一个或多个碳原子上被一个或多个R9任选取代；和其中如果杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R10的基团任选取代； R2为含至少一个氮原子的4-至7-元杂环，其中R2可在一个或多个碳原子上被一个或多个R13任选取代；和其中如果杂环基还含有-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R14的基团任选取代； R3为H； R4为H、C1-3烷基、环丙基和CF3； R5为H或C1-3烷基。
在本发明的进一步的实施方案中，特别有用的本发明化合物为任一实施例化合物或其药学上可接受的盐。
本发明另外的实施方案涉及制备其中X为N，Y为CH，A为CH，D为S，R3为H和L为NR5的式(I)化合物或其药学上可接受的盐的方法，该方法包括 a.使其中Z为卤代，如溴代、氯代或碘代的式(II)化合物
与其中R2和R5如在式(I)中定义的式(III)胺在下面碱的存在下反应， NHR2R5 (III) 得到式(IV)化合物
b.使式(IV)化合物与其中R1如在式(I)中定义和R’为H或甲基的式(V)化合物或(V’)反应， R1B(OR’)2
(V) (V’) 得到式(VI)化合物
c.使式(VI)化合物水解，形成如式(IA)所示的式(I)化合物
d.和然后如果需要 i)将一种式(I)化合物转化为另一种式(I)化合物； ii)去除任何保护基团； iii)形成药学上可接受的盐。
本发明另一个另外的实施方案涉及制备其中X为N，Y为CH，A为CH，D为S，R3为H和L为O的式(I)化合物或其药学上可接受的盐的方法，该方法包括 a.使其中Z为卤代，如溴代、氯代或碘代的式(II)化合物
与其中R2如在式(I)中定义的式(III’)醇，在下面的碱如氢化钠的存在下反应， R2OH (III’) 得到式(IV’)化合物
b.使式(IV’)化合物与其中R1如在式(I)中定义和R’为H或甲基的式(V)或(V’)化合物反应， R1B(OR’)2
(V) (V’) 得到式(VI’)化合物
c.使式(VI’)化合物水解形成依据式(I)显示为式(IB)的化合物
d.和然后如果需要 i)将一种式(I)化合物转化为另一种式(I)化合物； ii)去除任何保护基团； iii)形成药学上可接受的盐。
本发明的再一个另外的实施方案涉及制备其中X为CH，Y为CH，A为CH，D为NR4和L为NR5和R5为H的式(I)化合物或其药学上可接受的盐的方法，该方法包括 a.使其中R”为H、甲基、乙基或苄基的式(VII)化合物
与式(VIII)酮反应，其中R1如在式(I)中定义
得到式(IX)吲哚
b.使式(IX)吲哚与其中R3如在式(I)中定义的式(X)胺反应 R3NH2 (X) 得到式(XI)化合物
c.使式(XI)化合物还原，形成式(XII)胺
d.使式(XII)化合物与适当的R2的醛、酮、羧酸或磺酰基氯反应， 其中R2如在式(I)中定义，形成如式(IC)所示的式(I)化合物
或者作为选择，使式(XII)化合物与亚硝酸钠和卤化铜反应，形成式(XIII)化合物，其中Z为卤代，如溴代、氯代或碘代，
e.使式(XIII)化合物与其中R2和R5如在式(I)中定义的式(III)胺， NHR2R5 (III) 在催化剂，如钯或铜衍生的催化剂的存在下反应，得到如式(ID)所示的式(I)化合物
d.和然后如果需要 i)将一种式(I)化合物转化为另一种式(I)化合物； ii)去除任何保护基团； iii)形成式(IC)或(ID)化合物的药学上可接受的盐。
应该理解，在上文和下文提及的一些反应中，保护化合物中的任何敏感性基团是需要/想要的。需要或想要的保护的例子以及适合的保护方法为那些本领域技术人员所知。可依据标准操作方法应用常规保护基团(为了阐述参见T.W.Green和P.G.M.Wuts，ProtectiveGroups in Organic Synthesis，第3版，John Wiley和Sons，1999)。从而，如果反应剂中包含基团诸如氨基、羧基或羟基，则在本文提及的一些反应中该基团值得保护。
用于氨基或烷基氨基的适合的保护基团是，例如，酰基，例如烷酰基诸如乙酰基，烷氧基羰基，例如甲氧基羰基、乙氧基羰基或叔-丁氧基羰基，芳基甲氧基羰基，例如苄氧基羰基，或芳酰基，例如苯甲酰基。以上保护基团的去保护条件将必要地因保护基团的选择不同而异。这样，例如，酰基诸如烷酰基或烷氧基羰基或芳酰基，可例如，通过用适合的碱诸如碱金属氢氧化物，例如氢氧化锂或氢氧化锂钠水解去除。或者，酰基诸如叔-丁氧基羰基，可例如，通过用适合的酸如盐酸、硫酸或磷酸或三氟乙酸处理去除，和芳基甲氧基羰基诸如苄氧基羰基可例如，通过在催化剂诸如披钯碳上氢化或用Lewis酸例如三(三氟乙酸)硼(boron tris(trifluoroacetate))处理去除。用于伯氨基的适合的备选保护基团是，例如，可用烷基胺，例如二甲基氨基丙基胺或用肼处理去除的邻苯二甲酰基。
用于羟基的适合的保护基团是，例如酰基，例如烷酰基诸如乙酰基，芳酰基，例如苯甲酰基，或芳基甲基，例如苄基。以上保护基团的去保护条件将必要地因保护基团的选择不同而异。从而，例如，酰基诸如烷酰基或芳酰基，可例如，通过用适合的碱诸如碱金属氢氧化物，例如氢氧化锂或氢氧化锂钠水解去除。或者，芳基甲基诸如苄基，可例如，通过在催化剂诸如披钯碳上氢化去除。
用于羧基适合的保护基团是，例如，酯化基团，例如可通过用碱诸如氢氧化钠水解去除的甲基或乙基，或例如可通过用酸例如有机酸诸如三氟乙酸处理去除的叔-丁基，或例如可例如，通过在催化剂诸如披钯碳上氢化去除的苄基。
保护基团可在合成中的任何便利的阶段，通过采用化学领域所熟悉的常规技术去除。
在另外的实施方案中，本发明涉及前述在制备用作依据式(I)化合物的中间体的式(IV)、(IV’)、(VI)、(VI’)、(IX)、(XI)、(XII)和(XIII)化合物。


其中R1、R2、R3和R5如在式(I)中定义和Z为卤代，如溴代、氯代和碘代。
在再一个实施方案中，本发明涉及如式(IA)、(IB)、(IC)和(ID)所示的式(I)化合物及其药学上可接受的盐
其中变量基团如在式(I)中定义。
依据本发明的再一方面，提供包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药用组合物。
本发明的另一方面，提供如用作药物的前文定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的应用。
在另一个实施方案中，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防癌症的药物中的应用。
在另一个实施方案中，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防肿瘤性疾病的药物中的应用，所述肿瘤性疾病有诸如乳腺癌、卵巢癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌和支气管肺泡性癌症)、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、胆道癌、骨癌、膀胱癌、头颈部癌、肾癌、肝癌、胃肠组织癌、食管癌、胰腺癌、皮肤癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌、宫颈癌、阴道癌或其它组织的癌症，以及白血病和淋巴瘤包括CLL和CML，中枢和外周神经系统的肿瘤和其它肿瘤类型诸如黑色素瘤、多发性骨髓瘤、纤维肉瘤和骨肉瘤和恶性脑肿瘤。
在再一个实施方案中，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防包括自身免疫性疾病、炎症、神经性疾病和心血管疾病的增殖性疾病的药物中的应用。
在另一个实施方案中，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于抑制CHK1激酶活性的药物中的应用。
在另一个实施方案中，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于抑制Pak激酶活性，例如抑制Pak1、Pak2或Pak4激酶活性的药物中的应用。
在另一个实施方案中，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于抑制PDK1激酶活性的药物中的应用。
在另一个实施方案中，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于限制细胞增殖的药物中的应用。
在另一个实施方案中，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于限制肿瘤发生的药物中的应用。
在本发明的另一个方面，提供如前文定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于通过疗法治疗人或动物体的方法中。
在另一个实施方案中，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗或预防与癌症相关的疾患。
在另一个实施方案中，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗或预防肿瘤性疾病，所述肿瘤性疾病有例如乳腺癌、卵巢癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌和支气管肺泡性癌症)、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、胆道癌、骨癌、膀胱癌、头颈部癌、肾癌、肝癌、胃肠组织癌、食管癌、胰腺癌、皮肤癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌、宫颈癌、阴道癌或其它组织的癌症，以及白血病和淋巴瘤包括CLL和CML，中枢和外周神经系统的肿瘤和其它肿瘤类型诸如黑色素瘤、多发性骨髓瘤、纤维肉瘤和骨肉瘤和恶性脑肿瘤。
在另一个实施方案中，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗或预防包括自身免疫性疾病、炎症、神经性疾病和心血管疾病的增殖性疾病。
在本发明的再一方面，提供包含如前文定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的稀释剂或载体的药用组合物，该组合物用于在温血动物诸如人中产生CHK1激酶抑制作用。
在本发明的再一方面，提供包含如前文定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的稀释剂或载体的药用组合物，该组合物用于在温血动物诸如人中产生Pak激酶抑制作用(例如Pak1、Pak2或Pak4激酶抑制作用)。
在本发明的再一方面，提供包含如前文定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的稀释剂或载体的药用组合物，该组合物用于在温血动物诸如人中产生PDK1激酶抑制作用。
在本发明的再一方面，提供包含如前文定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的稀释剂或载体的药用组合物，该组合物用于在温血动物诸如人中产生抗癌作用。
在本发明的再一方面，其提供包含如前文定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的稀释剂或载体的药用组合物，该组合物用于在温血动物诸如人中治疗或预防包括自身免疫性疾病、炎症、神经性疾病和心血管疾病的增殖性疾病。
在另一个实施方案中，本发明提供在人或动物中限制细胞增殖的方法，所述方法包括给予所述人或动物有效治疗量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本发明提供在人或动物中限制肿瘤发生的方法，所述方法包括给予所述人或动物有效治疗量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在再一个实施方案中，本发明提供抑制CHK1激酶的方法，所述方法包括给予需要所述抑制的动物或人有效治疗量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在再一个实施方案中，本发明提供抑制Pak激酶(例如Pak1、Pak2或Pak4激酶)抑制作用的方法，所述方法包括给予需要所述抑制的动物或人有效治疗量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在再一个实施方案中，本发明提供抑制PDK1激酶的方法，所述方法包括给予需要所述抑制的动物或人有效治疗量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗罹患癌症的人或动物的方法，所述方法包括给予所述人或动物有效治疗量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在进一步的实施方案中，本发明提供预防性治疗癌症的方法，所述方法包括给予需要这样的治疗的人或动物有效治疗量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗罹患肿瘤性疾病的人或动物的方法，所述肿瘤性疾病有例如乳腺癌、卵巢癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌和支气管肺泡性癌症)、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、胆道癌、骨癌、膀胱癌、头颈部癌、肾癌、肝癌、胃肠组织癌、食管癌、胰腺癌、皮肤癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌、宫颈癌、阴道癌或其它组织的癌症，以及白血病和淋巴瘤包括CLL和CML，中枢和外周神经系统的肿瘤和其它肿瘤类型诸如黑色素瘤、多发性骨髓瘤、纤维肉瘤和骨肉瘤和恶性脑肿瘤。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗罹患增殖性疾病诸如自身免疫性疾病、炎症、神经性疾病和心血管疾病的人或动物的方法，所述方法包括给予所述人或动物有效治疗量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
本发明的一个实施方案提供通过给予人或动物式(I)化合物或其药学上可接受的盐和抗肿瘤药的治疗癌症的方法。
本发明的一个实施方案提供通过给予人或动物式(I)化合物或其药学上可接受的盐和DNA损伤剂的治疗癌症的方法。
本发明的一个实施方案提供治疗与癌症相关的感染的方法，所述方法包括给予需要这样的治疗的人或动物有效治疗量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
本发明再一实施方案提供用于预防性治疗与癌症相关的感染的方法，所述方法包括给予需要这样的治疗的人或动物有效治疗量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
如在本文所用的，词组“保护基团”意指保护潜在地反应性官能团不受不需要的化学转化的暂时的取代基。这样的保护基团的实例包括羧酸的酯类、醇的甲硅烷基醚和分别为醛和酮的缩醛和缩酮。保护基团化学领域已有综述(Greene，T.W；Wuts，P.G.M.ProtectiveGroups in Organic Synthesis，第3版；WileyNew York，1999)。
如在本文所用的，“药学上可接受的”用在本文指的是在可靠的医学判断范围之内、适合于用在与人和动物组织接触而没有过多毒性、刺激性、过敏反应或其它问题或并发症的、具有与合理的收益/风险比率相当的那些化合物、原料、组合物和/或剂型。
如在本文所用的，“药学上可接受的盐”指公开的化合物的衍生物，其中母体化合物通过形成酸盐或碱盐而被修饰。药学上可接受的盐的实例包括，但不限于碱性残基诸如胺的矿物盐或有机酸盐；酸性残基诸如羧酸的碱性盐或有机盐等。药学上可接受的盐包括例如，由无毒无机酸或有机酸形成的母体化合物的常规的无毒性盐或季铵盐。例如，这样的常规的无毒性盐包括那些衍生自无机酸诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等；和自有机酸诸如乙酸、丙酸、丁二酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、顺丁烯二酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、棕榈酸、顺丁烯二酸、羟基顺丁烯二酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙氧基苯甲酸、反丁烯二酸、甲苯磺酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、草酸、羟乙磺酸等的盐。
可从含碱性或酸性部分的母体化合物，通过常规的化学方法合成本发明的药学上可接受的盐。一般地，通过使这些化合物的游离酸或碱形式与按化学当量计算的量的适当的碱或酸在水中的或在有机溶剂中的或在水和有机溶剂的混合物中反应，可制备这样的盐；一般地，非水溶媒如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈是优选的。适合的盐的名单在Remington′s Pharmaceutical Sciences，第17版，Mack出版公司，Easton，Pa.，1985，第1418页中可找到，其公开内容通过引用结合于本文。
“稳定的化合物”和“稳定的结构”意指化合物足够稳固以从反应混合物分离出有用的纯度和制备成有效的治疗剂。
本文定义的抗癌症治疗可应用作为单独的疗法或除了本发明化合物外，可包括常规的手术和/或放射疗法和/或化疗。这样的化疗可包括一个或多个下列种类的抗肿瘤药 (i)抗增殖剂/抗肿瘤药物及其组合，如在医学肿瘤学中所用的，诸如烷化剂或铂剂(例如顺铂、卡铂、奥沙利铂、环磷酰胺、氮芥、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安和亚硝基脲)；抗代谢剂(例如吉西他滨和氟达拉滨，以及抗叶酸剂诸如氟代嘧啶类如5-氟尿嘧啶和替加氟、雷替曲塞、甲氨蝶呤、阿糖胞苷和羟基脲)；抗肿瘤抗生素(例如蒽环类药如阿霉素、博来霉素、多柔比星、柔红比星、表柔比星、伊达柔比星、丝裂霉素-C、放线菌素D和光神霉素)；抗有丝分裂剂(例如长春花生物碱如长春新碱、长春碱、长春地辛和长春瑞滨和紫杉类药物如紫杉醇和泰索帝)；和拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼素类(epipodophyllotoxins)如依托泊甙和替尼泊苷、安吖啶、拓扑替康、依立替康和喜树碱)； (ii)细胞抑制剂诸如抗雌激素剂(例如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和iodoxyfene)、雌激素受体向下调节剂(例如氟维司群)、抗雄激素药(例如比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特和乙酸环丙孕酮)、LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(例如戈舍瑞林、亮丙瑞林和布舍瑞林)、孕激素类(例如乙酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂(例如象阿那曲唑、来曲唑、vorazole和依西美坦)和5α-还原酶抑制剂诸如非那雄胺； (iii)抑制癌症细胞侵袭的药物(例如金属蛋白酶抑制剂如马立马司他和尿激酶型血纤维蛋白溶酶原激活剂受体功能抑制剂)； (iv)生长因子功能抑制剂，例如这样的抑制剂包括生长因子抗体、生长因子受体抗体(例如抗erbb2抗体曲妥珠单抗[HerceptinTM]和抗erbb1抗体西妥昔单抗[C225])、法尼基转移酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂和丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂，例如表皮生长因子家族的抑制剂(例如EGFR家族酪氨酸激酶抑制剂诸如N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉丙氧基)喹唑啉-4-胺(吉非替尼)、N-(3-乙炔基苯基)-6，7-双(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(埃罗替尼(erlotinib)、OSI-774)和6-丙烯酰氨基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉丙氧基)喹唑啉-4-胺(CI 1033))，例如血小板衍化生长因子家族抑制剂和例如肝细胞生长因子家族抑制剂； (v)抗血管新生剂诸如那些抑制血管内皮生长因子的作用的药物，(例如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗(bevacizumab)[AvastinTM]，诸如那些在国际专利申请WO 97/22596、WO 97/30035、WO 97/32856和WO 98/13354中公开的化合物)和通过其它机制产生作用的化合物(例如整联蛋白αvβ3功能抑制剂利诺胺和血管生长抑素； (vi)血管损伤剂诸如考布他汀A4和在国际专利申请WO99/02166、WO 00/40529、WO 00/41669、WO 01/92224、WO 02/04434和WO 02/08213中公开的化合物； (vii)反义治疗，例如那些涉及以上所列标靶的药物，诸如反义寡核甘酸(antiras antisense)ISIS 2503； (viii)基因疗法手段，包括例如置换异常基因诸如异常的p53或异常的BRCA1或BRCA2的手段、GDEPT(基因导向的酶前体-药物疗法)手段诸如那些使用胞嘧啶脱氨酶、胸腺嘧啶核苷激酶或细菌硝基还原酶和使患者对化疗或放疗耐受增强的手段诸如多重-药物抗性基因疗法；和 (ix)免疫疗法手段，包括例如增强患者肿瘤细胞免疫原性的的体外和体内手段，诸如转染细胞因子诸如白介素2、白介素4或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子，使T-细胞无能减低的手段，使用转染的免疫细胞诸如细胞因子转染的树突细胞的手段，使用细胞因子转染的肿瘤细胞系的手段和使用抗独特型抗体的手段。
这样的联合治疗可通过同时、序贯或分开给予疗法的单个成分达成。这样的联合产物使用其中本文之前描述的剂量范围的本发明化合物和在其批准的剂量范围内的其它药物活性剂。
可通过口服、肠胃外、口含服、阴道内、直肠、吸入、吹入、舌下、肌肉内、皮下、局部、鼻内、腹膜内、胸膜内、静脉内、硬脑膜外、鞘内、脑血管内和通过注射入关节内给予本发明化合物。
当决定最适于具体患者的单个治疗方案和剂量水平时，剂量将取决于给药途径、疾病的严重程度、患者的年龄和体重以及由主治医师通常考虑的其它因素。
用于治疗感染的本发明化合物的有效量，是足以达成以下作用的量，即在温血动物中特别是在人中症状性缓解感染症状、减缓感染的进展或降低患有感染症状的患者进一步恶化的风险。
为了从本发明化合物制备药用组合物，惰性的、药学上可接受的载体可或者为固体或者为液体。固体形式的制剂包括粉剂、片剂、可分散的颗粒剂、胶囊剂、扁胶剂和栓剂。
固体载体可为一个或多个物质，其也可作为稀释剂、矫味剂、增溶剂、滑润剂、助悬剂、粘合剂或片剂崩解剂；其也可为包囊材料。
在粉剂中，载体为经细粉碎的固体，其与经细粉碎的活性成分相混合。在片剂中，活性成分与具有必需的粘合特性的载体以适合的比例相混合，并被压制成所需的形状和大小。
为了制备栓剂组合物，首先使低熔点蜡诸如脂肪酸甘油酯和可可油的混合物熔化和通过例如，搅拌将活性成分分散其中。然后将熔化的均相混合物倾入方便(使用)的大小的模具中并任其冷却和固化。
适合的载体包括碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、乳糖、糖粉、果胶、糊精、淀粉、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点的蜡、可可油等。
一些本发明化合物可与各种无机和有机酸和碱形成盐，并且这样的盐也在本发明范围之内。这样的酸加成盐的实例包括乙酸盐、己二酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、胆碱、柠檬酸盐、环己基氨基磺酸盐、二乙二胺、乙烷磺酸盐、反丁烯二酸盐、谷氨酸盐、乙醇酸盐、半硫酸盐、2-羟基乙基磺酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、羟基顺丁烯二酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、顺丁烯二酸盐、甲烷磺酸盐、葡甲胺、2-萘磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、过硫酸盐、苯乙酸盐、磷酸盐、二磷酸盐、苦味酸盐、三甲基乙酸盐、丙酸盐、奎尼酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、氨基磺酸盐、磺胺酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐(对-甲苯磺酸盐)、三氟乙酸盐和十一烷酸盐。碱盐包括铵盐、碱金属盐诸如钠盐、锂盐和钾盐、碱土金属盐诸如铝盐、钙盐和镁盐、与有机碱所成的盐诸如二环己基胺盐、N-甲基-D-葡糖胺形成的盐和与氨基酸诸如精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸形成的盐等。同样，可用以下试剂使含碱性氮的基团季铵化低级烷基卤化物，诸如甲基、乙基、丙基和丁基的卤化物；二烷基硫酸盐如二甲基、二乙基、二丁基；二戊基的硫酸盐；长链(烷基)卤化物诸如癸基、十二烷基、十四烷基和十八烷基卤化物；芳基烷基卤化物如苄基溴化物及其它。尽管诸如在分离或纯化产物时，其它盐也是有用的，但优选无毒的、生理学是可接受的盐。
可用常规方法形成盐，所述方法为例如通过使游离碱形式的产物与一个或多个当量的适当的酸，在盐不溶解的溶剂或溶媒中，或在溶剂诸如水中反应，所述溶剂在真空中去除，或通过冷冻干燥去除或通过在适合的离子交换树脂上用另一个阴离子交换存在于盐中的阴离子而去除。
为了使式(I)化合物或其药学上可接受的盐应用于治疗性治疗(包括预防性治疗)哺乳动物包括人，通常依据标准制药规范将其配制成药用组合物。
除了本发明化合物外，本发明药用组合物还可包含一个或多个在治疗本文涉及的一种或多种疾病病症上有价值的药物，或与所述药物共同给予(同时或序贯)。
术语组合物意欲包含活性成分或药学上可接受的盐与药学上可接受的载体的制剂。例如可通过本领域已知方法将本发明配制成以下形式，例如，片剂、胶囊剂、水性或油性溶液剂、悬浮剂、乳剂、乳膏剂、油膏剂、凝胶剂、鼻喷雾剂、栓剂、细微粉碎的粉剂或用于吸入的气雾剂或喷雾剂和胃肠外应用的(包括静脉内、肌肉内或输注)灭菌水性或油性溶液剂或悬浮剂或灭菌乳剂。
液体形式的组合物包括溶液剂、悬浮剂和乳剂。活性化合物的灭菌水或水-丙二醇溶液可被提及作为适合于胃肠外给药的液体制剂的实例。还可将液体组合物配制成于聚乙二醇水溶液中的溶液剂。通过将活性成分溶解于水中并在需要时添加适合的着色剂、矫味剂、稳定剂和增稠剂，可制备用于口服给药的水溶液剂。通过将细微粉碎的活性成分分散于水中同时加入粘性材料诸如天然合成树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和其它药学制剂领域已知的助悬剂，可制备用于口服的水性悬浮剂。
药用组合物可以单位剂型形式存在。在这样的形式中，组合物被分成含适当量的活性成分的单位剂量。单位剂型可为包装好的制剂，包装含不连续的量的制剂，例如，包装的片剂、胶囊剂和装在小瓶或安瓿中的粉剂。单位剂型还可为胶囊剂、扁胶剂或片剂本身，或者其可为适当的数量的任何这些包装的形式。
式(I)化合物已经显示在体外抑制检查点激酶活性。检查点激酶的抑制剂已经显示使细胞不适当地演进成有丝分裂中期，导致受影响的细胞凋亡，并且因此，具有抗增殖作用。式(I)化合物还已经显示在体外抑制Pak激酶和PDK1激酶活性。因此，相信式(I)化合物及其药学上可接受的盐可用于治疗如上描述的肿瘤性疾病。另外，式(I)化合物及其药学上可接受的盐还预期用于治疗其它增殖性疾病和如上描述的其它疾病。预期式(I)化合物将最有可能与宽泛的DNA损伤剂联合应用，但还可作为单个药物应用或与如上描述的另一个抗肿瘤药物联合应用。
总之，由一个或多个以下描述的分析法确定式(I)化合物具有为100微摩尔或更低的IC50或EC50值。例如，在以下描述的检查点激酶1分析中，实施例5化合物的IC50值为0.016μM、实施例16化合物的IC50值为0.55μM和实施例157化合物的IC50值为0.15μM。作为更进一步的实施例，实施例10化合物在Pak 1酶分析中的IC50值为0.73μM以及在Pak 4酶分析中的IC50值为0.14μM；同样的化合物在PDK1酶分析中的IC50值为0.35μM。实施例14化合物在Pak 1酶分析中的IC50值为0.60μM以及在Pak 4酶分析中的IC50值为0.10μM；同样的化合物在PDK1酶分析中的IC50值为0.16μM。
检测检查点激酶1抑制和效应的分析 检查点激酶1分析该体外分析检测化合物对CHK1激酶的抑制作用。激酶域在杆状病毒中表达并经GST标签纯化。然后将纯化的蛋白质和生物素化的肽底物(Cdc25C)应用于384孔自动亲近闪烁检测法(Scintillation Proximity Assay)(SPA)中。特别地，将肽、酶和反应缓冲液混合并等分加入到含系列化合物和对照物稀释液的384孔板中。然后加入冷的和热的ATP启动反应。2个小时后，加入SPA珠浆液、CsCl2和EDTA终止反应和捕获生物素化的肽。然后在Topcount上对板计数。分析数据并测定各单个化合物的IC50。
消除(Abrogation)分析该细胞分析检测CHK1抑制剂消除引致DNA-损伤的G2/M检查点的能力。在细胞分析中试验有效对抗酶(＜2μM)的化合物。简要地说，在第1天将HT29细胞(结肠癌细胞系、p53 null)铺陈在96孔板中。次日，用喜树碱处理细胞2小时以引起DNA损伤。2小时后，去除喜树碱并用试验化合物和使细胞固定在有丝分裂阶段的纺锤体毒素(spindle poison)诺考达唑(nocodazole)再处理细胞18个小时，消除检查点。然后用甲醛固定细胞、染色以呈现有丝分裂的特有标志phosphohistone H3并用Hoechst染料标记，这样可检测细胞数。采用有丝分裂指数规程(Mitotic Index protocol)在Array Scan(Cellomics)上扫描板。作为消除的阳性对照，使用4mM咖啡因。在12个点测试化合物(一式三份)剂量反应关系。分析数据并测定各化合物的EC50。
检测Pak激酶抑制作用的分析 (a)体外Pak1酶分析 该分析应用亲近闪烁检测分析(SPA)技术(Antonsson等，AnalyticalBiochemistry，1999，267294-299)测定试验化合物抑制由重组Pak1的磷酸化的能力。全长度的Pak1蛋白质在大肠杆菌(E.coli)中表达为GST融合和采用标准纯化技术应用GST标签纯化。
将试验化合物制备为10mM在DMSO中的贮备液并在需要时在水中稀释得到序列终分析浓度。将每一化合物稀释液的等分试样(5μl)铺陈在矩阵(Matrix)384-孔平底白色聚苯乙烯板(目录号4316)的每个孔中。将20μl的重组纯化Pak1酶(30nM)、3μM生物素化的肽底物(生物素-Ahx-Lys-Lys-Glu-Gln-Ser-Lys-Arg-Ser-Thr-Met-Val-Gly-Thr-Pro-Tyr-Trp-Met-Ala-Pro-Glu-NH2；Bachem UK Ltd)、三磷酸腺苷(ATP；3μM)、33P-标记的三磷酸腺苷(33P-ATP；33 nCi/孔)和缓冲溶液[包含Tris-HCl pH 7.5缓冲液(50mM)、EGTA(0.1mM)、小牛血清白蛋白(0.1mg/ml)、二硫苏糖醇(DTT；5mM)和乙酸镁(10mM)]的混合物于室温孵育120分钟。
通过使用5％DMSO替代试验化合物，建立相应于最大酶活性而产生最大信号的对照孔。通过加入在5％DMSO中的EDTA(62.5mM)替代试验化合物，建立相应于全部抑制酶而产生最小信号的对照孔。这些分析溶液也在室温下孵育120分钟。
通过加入30μl的链霉亲和素包被的PVT SPA珠浆液(AmershamBiosciences，目录号RPQ0205；250μg/孔)于含0.05％叠氮化钠的50mM Tris-HCl pH7.5缓冲液中的混合物，随后加入30μl的2.83M氯化铯(最终分析浓度为1M)，使每一反应终止并捕获生物素化的肽。然后将板在工作台放置2个小时，然后在Topcount上计数。
由于Pak1介导的磷酸化，原位形成放射标记的磷酸化的生物素化的肽。SPA珠含可被刺激发射光的闪烁剂。该刺激仅在放射标记的磷酸化的肽与包被在SPA珠上的链霉亲和素表面结合引起可在闪烁计数仪上检测的蓝光发射时发生。因此，Pak1激酶活性的存在产生分析信号。在Pak1激酶抑制剂的存在下，信号强度减弱。
对于给定的试验化合物的Pak1酶抑制用IC50值表示。
(b)体外Pak2酶分析 该分析应用亲近闪烁检测分析(SPA)技术(Antonsson等，AnalyticalBiochemistry，1999，267294-299)测定试验化合物抑制由重组Pak2的磷酸化的能力。N-末端和C-末端His6标记的全长度的Pak2蛋白质在大肠杆菌(E.coli)中表达和采用Ni2+/NTA-琼脂糖纯化。
将试验化合物制备为10 mM的DMSO的贮备液并在需要时在水中稀释得到序列终分析浓度。将每一化合物稀释液的等分试样(5μl)铺陈在矩阵(Matrix)384-孔平底白色聚苯乙烯板(目录号4316)的每个孔中。将20μl的重组纯化Pak2酶(15ng)、1μM生物素化的肽底物(生物素-Ahx-Lys-Lys-Glu-Gln-Ser-Lys-Arg-Ser-Thr-Met-Val-Gly-Thr-Pro-Tyr-Trp-Met-Ala-Pro-Glu-NH2；Bachem UK Ltd)、三磷酸腺苷(ATP；2μM)、33P-标记的三磷酸腺苷(33P-ATP；33 nCi/孔)和缓冲溶液[包含Tris-HCl pH 7.5缓冲液(50mM)、EGTA(0.1mM)、小牛血清白蛋白(0.1mg/ml)、二硫苏糖醇(DTT；5mM)和乙酸镁(10mM)]的混合物于室温孵育120分钟。
通过使用5％DMSO替代试验化合物，建立相应于最大酶活性而产生最大信号的对照孔。通过加入在5％DMSO中的EDTA(62.5mM)替代试验化合物，建立相应于全部抑制酶而产生最小信号的对照孔。这些分析溶液也在室温下孵育120分钟。
通过加入30μl的链霉亲和素包被的PVT SPA珠浆液(AmershamBiosciences，目录号RPQ0205；250μg/孔)于含0.05％叠氮化钠的50mM Tris-HCl pH7.5缓冲液中的混合物，随后加入30μl的2.83M氯化铯(最终分析浓度为1M)，使每一反应终止并捕获生物素化的肽。然后将板在工作台放置2个小时，然后在Topcount上计数。
作为Pak2介导的磷酸化的结果，原位形成放射标记的磷酸化的生物素化的肽。SPA珠含可被刺激发射光的闪烁剂。该刺激仅在放射标记的磷酸化的肽与包被在SPA珠上的链霉亲和素表面结合引起可在闪烁计数仪上检测的蓝光发射时发生。因此，Pak2激酶活性的存在产生分析信号。在Pak2激酶抑制剂的存在下，信号强度减弱。对于给定的试验化合物的Pak2酶抑制用IC50值表示。
(c)体外Pak4酶分析 该分析应用亲近闪烁检测分析(SPA)技术(Antonsson等，AnalyticalBiochemistry，1999，267294-299)测定试验化合物抑制由重组Pak4的磷酸化的能力。Pak4的激酶域(氨基酸291-591)在大肠杆菌(E.coli)中表达为GST融合和采用标准纯化技术应用GST标签纯化。
将试验化合物制备为10mM的DMSO的贮备液并在需要时在水中稀释得到序列终分析浓度。将每一化合物稀释液的等分试样(5μl)铺陈在矩阵(Matrix)384-孔平底白色聚苯乙烯板(目录号4316)的每个孔中。将20μl的重组纯化Pak4酶(10nM)、1μM生物素化的肽底物(生物素-Ahx-Lys-Lys-Glu-Val-Pro-Arg-Arg-Lys-Ser-Leu-Val-Gly-Thr-Pro-Tyr-Trp-Met-Ala-Pro-Glu-NH2；Bachem UK Ltd)、三磷酸腺苷(ATP；2μM)、33P-标记的三磷酸腺苷(33P-ATP；33 nCi/孔)和缓冲溶液[包含Tris-HCl pH 7.5缓冲液(50mM)、EGTA(0.1mM)、小牛血清白蛋白(0.1mg/ml)、二硫苏糖醇(DTT；5mM)和乙酸镁(10mM)]的混合物于室温孵育120分钟。
通过使用5％DMSO替代试验化合物，建立相应于最大酶活性而产生最大信号的对照孔。通过加入在5％DMSO中的EDTA(62.5mM)替代试验化合物，建立相应于全部抑制酶而产生最小信号的对照孔。这些分析溶液也在室温下孵育120分钟。
通过加入30μl的链霉亲和素包被的PVT SPA珠浆液(AmershamBiosciences，目录号RPQ0205；250μg/孔)于含0.05％叠氮化钠的50mM Tris-HCl pH7.5缓冲液中的混合物，随后加入30μl的2.83M氯化铯(最终分析浓度为1M)，使每一反应终止并捕获生物素化的肽。然后将板在工作台放置2个小时，然后在Topcount上计数。
由于Pak4介导的磷酸化，原位形成放射标记的磷酸化的生物素化的肽。SPA珠含可被刺激发射光的闪烁剂。该刺激仅在放射标记的磷酸化的肽与包被在SPA珠上的链霉亲和素表面结合引起可在闪烁计数仪上检测的蓝光发射时发生。因此，Pak4激酶活性的存在产生分析信号。在Pak4激酶抑制剂的存在下，信号强度减弱。
对于给定的试验化合物的Pak4酶抑制用IC50值表示。该化合物的具体活性范围在10nM-20μM。
检测PDK1激酶抑制的分析 (a)PDK1酶分析 该该分析利用阿尔法扫描(Alphascreen)技术(Ullman，EF，等Proc.Natl.Acad.Sci.USA，卷91，第5426-5430页，1994)测定试验化合物抑制PDK1酶活性的能力。6His标记的PDK1酶在昆虫细胞中表达并采用NiNTA珠和常规蛋白质纯化方法纯化。
将试验化合物制备为10mM的DMSO的贮备液并在需要时在水中稀释得到序列终分析浓度。将2μl整数倍的化合物分配在GreinerBio-One低容量的384孔板(目录号784075)中。为了活性分析，向每一孔中加入5μl的下列物质的混合物，48nM天然肽(生物素-Ahx-Ile-Lys-Asp-Gly-Ala-Thr-Met-Lys-Thr-Phe-Cys-Gly-Thr-Pro-Glu-Tyr-Leu-Ala-Pro-Glu-Val-Arg-Arg-Glu-Pro-Arg-Ile-Leu-Ser-Glu-Glu-Glu-Gln-Glu-Met-Phe-Arg-Asp-Phe-Asp-Tyr-Ile-Ala-Asp-Trp-NH2，BachemUK Ltd)和12μM三磷酸腺苷(ATP)的含Tris-HCl pH7.4(60 mM)、乙酸镁(12mM)、EGTA(120μM)、DTT(1.2mM)和小牛血清白蛋白(0.12mg/ml)的反应缓冲液。通过加入5μl新鲜制备的含20ng/ml纯化重组PDK1蛋白的反应缓冲液的溶液启动反应，在室温下孵育45分钟。
通过加入5μl的含Tris-HCl pH 7.4(50mM)、小牛血清白蛋白(1mg/ml)、EDTA(90mM)、抗磷脂Akt T308抗体，R&D系统，目录号RF8871，(200ng/ml)、阿尔法扫描链霉亲和素供体珠，Perkin Elmer目录号6760002B(30μg/ml)和阿尔法扫描蛋白A受体珠，Perkin Elmer目录号6760137R(30μg/ml)的溶液，终止每一反应。然后密封诸板并于低光照条件下孵育过夜，之后在Envision读板器(Perkin Elmer)上读板。
也可在使用与活性分析类似的条件下人工分析检测化合物，但不同的是在2nM磷酸化的肽[生物素-Ahx-Ile-Lys-Asp-Gly-Ala-Thr-Met-Lys-(p)Thr-Phe-Cys-Gly-Thr-Pro-Glu-Tyr-Leu-Ala-Pro-Glu-Val-Arg-Arg-Glu-Pro-Arg-Ile-Leu-Ser-Glu-Glu-Glu-Gln-Glu-Met-Phe-Arg-Asp-Phe-Asp-Tyr-Ile-Ala-Asp-Trp-NH2，Bachem UK Ltd)和18nM天然肽的存在下进行。
通过使用6％DMSO替代试验化合物，建立相应于最大酶活性而产生最大信号的对照孔。通过加入EDTA(0.5M)建立产生最小信号的对照孔用于活性分析或通过加入1.008mM考马斯亮蓝(Coomassieblue)替代试验化合物用于人工分析。
在活性分析中，通过使PDK1活化，形成磷酸化的生物素化的肽，随后与抗磷脂(phospho)Akt T308抗体结合。然后通过链霉亲和素供体珠经由其与生物素的相互作用和蛋白蛋白A受体珠经由其与抗体的相互作用捕获该混合物。供体珠和受体珠的亲近现在已能够使单线态氧从供体珠通过在680nm的激发，转移至受体珠，在520-620nm产生发射。在分析的线性范围内，信号强度与PDK1酶的活性成比例。因此，PDK1活性抑制剂的存在将使在520-620nm的发射减少。
PDK1抑制剂活性以一式两份检测的结果报告IC50值。
(b)PDK1细胞分析 作为PI3K通路的部分，Akt是PDK的PIF口袋独立(pocketindependent)底物并且T308在Akt1上的磷酸化提供细胞PDK1活性的直接检测。可在分析中使用具有PI3K通路(如PTEN，PI3K)突变的细胞类型，以或者避免需要刺激或者使通路流量最大化。细胞分析利用特异性磷酸化抗体，以探测Akt1对T308的磷酸化。
将乳腺癌细胞系MDA-MB-468细胞(PTEN null)接种于96孔板(Packard View板，Perkin Elmer目录号1450-573)中，密度为每孔90μl中104个细胞，并且于37℃、5％CO2下生长过夜。将试验化合物制备为10mM的DMSO的贮备液并在需要时在细胞培养基中稀释得到序列终分析浓度。然后向每个孔中加入10μl的化合物并且使细胞于37℃、5％CO2下孵育2hrs。然后向每个孔中加入20μl 10％甲醛的磷酸盐缓冲盐水(PBS)使细胞固定，于室温下孵育20分钟。去除培养基和固定后，用100μl PBS、0.05％聚山梨醇酯洗涤细胞，然后通过加入100μl PBS、0.5％吐温20渗透并于室温下孵育10分钟。去除渗透缓冲液后，将细胞染色用于显现磷酸化(phospho)Akt1 T308、磷酸化Akt2 T309和磷酸化Akt3 T305。
简要地，将细胞于100μl的封闭缓冲液(PBS，0.05％吐温20，5％BSA)中、于室温下孵育1hr，然后于4℃下，在每孔40μl用封闭缓冲液按1/1000稀释的抗磷酸化Akt T308抗体(Cell SignallingTechnologies，目录号4056)溶液染色过夜。用250μl的PBS、0.05％吐温20洗涤3次后，于室温下将细胞用40μl含用封闭缓冲液按1/1000稀释的羊抗兔IgG(H+L)/Alexa Fluor 488缀合物(Molecular Probes，目录号A11008)溶液染色1hr。在用250μl的PBS、0.05％吐温20、100μl的PBS、0.05％聚山梨醇酯洗涤3次后，加入1μM碘化丙啶并在Acumen Explorer读板器(TTP Labtech)上读板。
所有检测按一式两份进行且定量信号用于评估化合物的IC50值。采用碘化丙啶染色监测对细胞数量的作用。
合成 可用有机合成领域中技术人员熟悉的许多方法制备本发明化合物。更特别地是，可采用本文描述的反应和技术制备本发明新的化合物。应该理解，在以下描述的合成方法中，所有提议的反应条件，包括溶剂选择、反应气氛、反应温度、实验持续时间和后续处理，均选择适于该反应的标准条件。有机合成领域中技术人员应该理解，分子中不同位置上的存在的功能团必须与试剂和所提议的反应相适应。这样的对于不与反应条件相适应的取代基的限制，对于本领域技术人员而言将是显而易见的，因而必须使用备选的方法。
除非另有所指，包括在本文中的实施例的起始原料或者是商业上可获得的或者用标准方法从已知原料容易地制备。合成本发明化合物的一般方法如下从可在以下流程1-10中描述的一般合成方法合成式(I)化合物。用于合成噻吩并吡啶式(I)化合物的一般方法在流程1中描述。用Knovenagel类型方法使由芳基取代的腈可与乙醛酸缩合得到不饱和羧酸酯。产生酰氯后与叠氮化钠反应得到酰叠氮。酰叠氮经Curtius重排，随后采用非常高的温度进行噻吩环的亲电子环化，得到噻吩并吡啶酮。然后通过选择与N-溴-或碘代-琥珀酰亚胺反应，可选择性地使噻吩环的5-位溴化或碘化。使用氧氯化磷脱水和芳构化得到氯代吡啶中间体，其可通过使胺与碳酸钾在NMP中反应经历亲核置换。或者，氯代吡啶中间体可与氧或硫亲核试剂反应得到相应的芳基醚或硫化物(流程2)。在Pd-介导的Suzuki反应中，可使得到的溴代-或碘代-噻吩并吡啶与硼酸或酯在标准偶联条件下反应。通过用浓盐酸或PPA使腈部分水解，可最终产生所需的噻吩并吡啶甲酰胺。在流程3中显示的修改的合成允许在Suzuki偶联之前水解。

流程1
流程3 流程1-3中的溴代、氯代或碘代-噻吩并吡啶也可用于其它Pd-介导的偶联反应中，例如与芳基锡烷的Stille偶联(流程4)、与炔类的Sonogashiri偶联(流程5)和Buchwald胺化(流程6)，形成式(I)化合物。

流程4
流程5
流程6 采用在流程7概述的备选的合成途径，可产生式(I)的其它杂环化合物。杂芳基醛可与丙二酸经历羟醛(Aldol)类型缩合，得到不饱和羧酸。类似于流程1，产生酰氯后，形成酰叠氮和经由Curtius异氰酸盐中间体环化，提供杂环5-6环稠合的吡啶。吡啶环溴化后用氰化铜置换，提供腈吡啶。如前使氧氯化磷和胺置换反应，提供腈前体。然后通过水解腈为所需的甲酰胺，形成目标式(I)化合物。

流程7 按照在流程8中概述的步骤，可合成取代的酰胺是必需的式(I)化合物。从以上流程1-7中任一项中产生的氨基腈，可通过交替使用6 N盐酸水溶液替代浓酸而被完全水解为羧酸。然后可采用任何标准形成酰胺的方法诸如与混合的酸的酸酐反应使酸与胺偶联，或使用酰胺偶联剂/脱水剂诸如，但不限于1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、O-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟代磷酸盐(HBTU)或苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)六氟代磷酸盐(BOP)。

流程8 使用在流程9和10中描述的合成转化，可合成式(I)的非吡啶基化合物。流程9中显示，回流下使用MeOH和无水盐酸可使3-硝基邻氨基苯甲酸盐(anthranilate)衍生物酯化。然后可使氨基酯经历采用在DMSO中的叔-丁氧化钾的一釜法(one-pot)转化，其包括通过与芳基酮反应产生烯胺、去质子化作用、在激活硝基的邻位的亲核芳族取代，随后氧化成吲哚中间体。通过与氯甲酸酯形成混合酸酐，随后与胺反应，可将该步骤的羧酸产物转化为酰胺。使硝基氢化得到苯胺衍生物，其可通过与酮或醛进行还原性胺化转化为式(I)吲哚化合物。或者，通过重氮化方法，可使苯胺转化为卤化物衍生物，然后通过Pd或Cu介导的用胺或醇的置换转化为式(I)化合物。

流程9 合成式(I)的非吡啶基化合物的另一条途径在流程10中概述。用胺、醇或硫醇进行氟的亲核芳族取代，随后产生苯胺，随后用强酸进行缩醛的分子内亲电子芳族取代，可得到不同的5-6稠环系统。使用之前在流程1-9中描述的转化，可将得到的苯胺精制为非吡啶基化合物诸如式(I)的苯并噻吩或苯并呋喃。

流程10 实施例 本发明将在此引用下列说明性的实施例进一步描述，除非另有所指 (i) 给出的温度以摄氏度(℃)计；除非另有所指，于室温下或环境温度下进行操作即是指在18-25℃范围内进行； (ii) 溶液经无水硫酸钠或硫酸镁干燥；有机溶剂的蒸发在减压下(4.5-30mmHg)、于最高至60℃的浴温下使用旋转蒸发器进行； (iii) 层析意指快速硅胶层析；薄层层析(TLC)在硅胶板上进行； (iv) 一般地，反应过程之后进行TLC或液相层析/质谱(LC/MS)和所给出的反应时间仅作说明用； (v) 终产物具有令人满意的质子核磁共振(NMR)频谱和/或质谱数据； (vi) 给出的得率仅作说明用且不必需通过复杂的方法开发可得到的那些得率；如果需要更多原料，可重复制备； (vii) 当给出核磁共振(NMR)数据时，其以德耳塔(δ)值的形式表示主要的诊断性质子，除非另有所指，以相对于四甲基硅烷(TMS)给出的每百万(ppm)分之几作为内标，在d6-DMSO的300MHz测定； (viii)化学符号具有其通常含义； (ix) 溶剂比率以体积∶体积(v/v)术语给出； (x) 罗谢尔盐(Rochelle’s Salt)为酒石酸钠钾； (xi) Hunig’s碱为二异丙基乙基胺(DIEA)； (xii) 使用以下一种或更多种方法进行化合物的纯化 a)常规硅胶上的快速层析； b)使用MPLC分离系统的硅胶快速层析预装填的正相快速柱筒，流速，30-40ml/min； c)使用反相C18柱，100×20mm，5μM(或更大)并用水(0.1％TFA)和MeCN(0.1％TFA)组合作为流动相洗脱的制备型HPLC系统； d)使用手性柱，如Diacel柱(AD、OD、AS和/或OJ固定相)，250×20mm，10μM(或更大)和用己烷、异丙醇、EtOH和/或MeOH(含0.1％二异丙基乙胺)的组合作为流动相洗脱的手性制备型HPLC系统；和 (xiii)使用以下缩写 CIV 真空下浓缩； RT和rt 室温； BOC 叔-丁氧基羰基； BOP 苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)六氟磷酸盐； Bu3N 三丁胺； CBZ 苄氧基羰基； DMF N，N-二甲基甲酰胺； DMSO 二甲亚砜； NMP N-甲基-2-吡咯烷酮； EtOAc乙酸乙酯； ether乙醚； EtOH 乙醇； THF 四氢呋喃； MeOH甲醇； MeCN乙腈； PPA 多聚磷酸； TFA 三氟乙酸；和 TEA 三乙胺。
在以下实施例中制备的大多数化合物基于用于制备化合物的方法被分离成盐酸盐并为NMR数据所证明，此对于本领域技术人员而言将是显而易见的。
实施例1 2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 步骤1 (2Z)-3-氰基-3-(2-噻吩基)丙烯酸。向搅拌的2-噻吩基乙腈(24.8g，0.20mol)的MeOH(300mL)溶液中加入乙醛酸一水合物(18.5g，0.20mol)和碳酸钾(25.5g，0.20mol)。将反应浆液置于氮气氛下并加热至回流。2h后使反应混合物冷却至rt，经过滤得到产物。用大量的MeOH洗涤滤饼，然后在真空烘箱中干燥过夜，得到43.1g(99％)白色结晶的钾盐的标题化合物。1H NMR δ7.95(d，3H)，7.75(d，1H)，7.30(dd，1H)，7.05(s，1H)，3.0-4.0(br s，1H)。LCMS(ES，M+H＝180，M-H＝178)。
步骤2 (2Z)-3-氰基-3-(2-噻吩基)丙烯酰氯。向搅拌的草酰氯(2.6mL，30mmol)于10mL的CH2Cl2溶液中加入溶解于20mL的CH2Cl2的(2Z)-3-氰基-3-(2-噻吩基)丙烯酸钾盐(2.2g，12.3mmol)溶液中。加入额外量的CH2Cl2直至粘性非均质性的反应混合物可轻易搅拌。反应于rt下搅拌约1h。经过滤去除固体并用大量的CH2Cl2洗涤。将滤液和ishes合并，真空下浓缩得到用于下一步的2.0g标题化合物。
步骤3 (2Z)-3-氰基-3-(2-噻吩基)丙烯酰叠氮化物。于0℃，向快速搅拌的于50∶50二氧六环/水(20mL)中的叠氮化钠(2.0g，30mmol)的悬浮液中，加入溶解于10mL的二氧六环的(2Z)-3-氰基-3-(2-噻吩基)丙烯酰氯(2.0g，12.3mmol)溶液。于0℃搅拌反应物30分钟，然后再搅拌1-2h后使其达到rt。然后加入～100mL水至反应物中。形成的沉淀物经过滤，用水洗涤，在真空烘箱中干燥过夜，得到无须进一步纯化即用于下一步的白色固体(2.0g)的标题叠氮化物。
步骤4 4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈。于氮气流下，将二苯醚(260mL)和Bu3N(53mL)的混合物加热至210℃。在2h内(剧烈产生N2气)，逐滴加入(2Z)-3-氰基-3-(2-噻吩基)丙烯酰叠氮化物(15.0g，73.5mmol)于CH2Cl2(30mL)中的浆液。完成加入后，于210℃再搅拌反应物10min，然后使反应冷却至rt，然后置于冰浴中。加入己烷(500mL)和抽气下过滤沉淀物，用大量的己烷洗涤。将得到的固体在真空烘箱中干燥过夜(不加热)得到淡棕色固体样标题化合物(9.89g，76％)。1HNMRδ12.4(br s，1H)，8.29(d，1H)，7.82(d，1H)，7.58(d，1H)。LCMS(ES，M+H＝177，M-H＝175)。
步骤5 2-溴-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈。将N-溴代琥珀酰亚胺(1.6g，9mmol)加入4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(0.8 g，4.5mmol)在DMF/乙酸(20mL)以50∶50的混合物中的溶液中。将该黑色的反应混合物加热至80℃计12h。冷却到rt后，搅拌下将反应物加入到～100mL水中。用饱和NaHCO3调节混浊的溶液的pH至9-10。经过滤，用水洗涤，在真空烘箱中干燥得到产物(1.1g，100％)。1H NMRδ12.6(br s，1H)，8.38(d，1H)，7.77(s，1H)。LCMS(ES，M+H＝255，M-H＝253)。
步骤6 2-溴-4-氯代噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈。将2-溴-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(1.1g，4.5mmol)溶解于POCl3(10mL)的溶液加热至回流过夜。冷却到rt后，真空下将反应物浓缩至干燥。缓慢和小心地将固体悬浮于～50-100mL水中。经过滤，随后用水、饱和NaHCO3、水洗涤，在真空烘箱中干燥得到产物(1.0g，83％)。1H NMRδ9.10(s，1H)，8.20(s，1H)。LCMS(ES，M+H＝275)。
步骤7 (3S)-3-[(7-氰基-2-溴代噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。向搅拌的2-溴-4-氯代噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(0.48g，1.76mmol)和(3S)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.40g，2.0mmol)于NMP(5mL)的溶液中加入碳酸钾(0.5g，3.52mmol)。将非均质性的混合物加热至80℃计2h，冷却至rt，然后加至～50mL的水中。产物(880mg)经过滤分离和干燥。经使用MPLC(SiO2；30-50％EtOAc/己烷梯度)进一步纯化得到0.54g，70％亮黄色结晶的固体样标题化合物。1H NMRδ8.36(s，1H)，8.08(s，1H)，7.68(m，1H)，4.02(m，1H)，3.74(m，1H)，3.50(m，1H)，2.70-3.20(m，2H)，1.91(m，1H)，1.74(m，1H)，1.54(m，1H)，1.30-1.45(m，1H)，1.21(s，9H)。LCMS(ES，M+H＝437，439；M-H，435，437)。
步骤8 (3S)-3-{[7-氰基-2-(苯基)噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯。将(3S)-3-[(7-氰基-2-溴代噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.18g.0.41mmol)、苯基硼酸(0.076g，0.62mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(Pd(PPh3)4)(0.10g，0.062mmol)的混合物和碳酸铯(0.41g，1.25mmol)溶解于水(1mL)和二氧六环(3mL)。将该反应混合物于80℃氮气氛下搅拌1h，然后使其冷却至rt。用吸液管去除水和真空下去除二氧六环。残余物经MPLC(SiO2；30-60％EtOAc/己烷)纯化得到标题化合物(140mg，78％)。1H NMRδ8.41(s，1H)，8.34(br s，1H)，7.74(s，1H)，7.73(d，2H)，7.52(dd，2H)，7.42(dd，1H)，4.12(m，1H)，3.81(m，1H)，3.60(m，1H)，2.6-3.2(m，2H)，2.01(m，1H)，1.82(m，1H)，1.62(m，1H)，1.40-1.50(m，1H)，1.24(s，9H)。LCMS(ES，M+H＝435；M-H，433)。
步骤9 2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。将(3S)-3-{[7-氰基-2-(苯基)噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(80mg，0.18mmol)溶液和12 N HCl(浓的，4mL)搅拌24小时。加入水(10-20mL)并用饱和NaHCO3调节溶液的pH至10-11。该原料经过滤分离并用少量冷水洗涤。该原料经干燥，然后经MPLC(SiO2；NH4OH/MeOH/CH2Cl2；2∶10∶88)纯化得到标题化合物(24mg，38％)。1H NMRδ8.58(s，1H)，8.27(s，1H)，7.98(br s，1H)，7.79(d，2H)，7.55(dd，2H)，7.43(dd，1H)，7.34(br s，1H)，7.25(d，2H)，4.22(m，1H)，3.21(d，1H)，2.91(d，1H)，2.48(m，2H)，2.05(m，1H)，1.76(m，1H)，1.55(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝353)。
用与实施例1类似的方式，采用适当的起始原料制备实施例2-51。
实施例52 2-[1-(1，3-苯并噻唑-2-基甲基)-1H-吡唑-4-基]-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 以与实施例1类似的方式但使用2-{[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂戊环-2-基(dioxaborolan-2-yl))-1H-吡唑-1-基]甲基}-1，3-苯并噻唑(如以下描述的合成)作为在步骤8中的起始原料制备。1H NMRδ9.11(br，1H)，8.81(br，1H)，8.50(s，1H)，8.44(s，1H)，8.10(br，2H)，8.08(d，1H)，8.01(d，1H)，7.94(s，1H)，7.55-7.42(m，3H)，5.92(s，2H)，4.51(br，1H)，3.46(m，1H)，3.20(m，1H)，2.95(m，2H)，2.09-1.92(m，2H)，1.82-1.65(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝490)。
2-{[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂戊环-2-基)-1H-吡唑-1-基]甲基}-1，3-苯并噻唑。于23℃，向4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂戊环-2-基)-1H-吡唑(100mg，0.515mmol)和2-(溴代甲基)-1，3-苯并噻唑(118mg，0.515mmol)的DMF(1.7mL)的溶液中加入NaH(60％弥散于油中，23mg，0.567mmol)。将反应混合物搅拌过夜。通过加入NH4Cl猝灭反应并将产物用EtOAc提取。有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥和真空下浓缩。
用与实施例1类似的方式，采用适当的起始原料制备实施例53-57。
实施例58 4-{甲基[(3S)-哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 以与实施例1类似的方式，但使用(3S)-3-(甲基氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(如以下描述的合成)作为在步骤7中的起始原料制备。1H NMR δ9.26(br s，1H)，8.92(br s，1H)，8.59(s，1H)，8.18(br s，1H)，7.94(s，1H)，7.85(m，2H)，7.46(m，2H)，7.40(m，1H)，4.83(m，1H)，3.42(m，1H)，3.29(s，3H)，3.22(m，2H)，2.89(m，1H)，2.00-1.79(m，4H)。LCMS(ES，M+H＝367)。
(3S)-3-(甲基氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。向甲醛(37％，aq.；0.37ml 4.7mmol)于20ml含3分子筛的无水MeOH溶液中加入(3S)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.0g，5mmol)。于N2、rt下搅拌反应物～30h，然后加入固体NaBH4(304mg，8mmol)。于rt下搅拌反应物过夜，然后用1N NaOH(～10ml)猝灭。分离各相并用乙醚(3x)提取剩余的水层。用水和盐水洗涤合并的有机层，干燥和蒸发得到无色油(1.04g，100％)。LCMS(ES，M+H＝215)。
用与实施例58类似的方式，采用适当的起始原料制备实施例59-63。
实施例64 2-[2-(苄氧基)苯基]-4-{甲基[(3S)-哌啶-3-基]氨基}噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 (3S)-3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)(甲基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。于氮气氛下，将(3S)-3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(240mg)溶解于NMP(10mL)。加入氢化钠(63mg)并将反应放置20min。逐滴加入碘代甲烷(108μL)并将反应于rt下搅拌1个小时。一旦反应完成(LCMS 452.69 M+H)，将反应混合物倾入水(120mL)中并用EtOAc提取。有机层用水和盐水洗涤，经MgSO4干燥，真空浓缩。残余物经硅胶柱用30-50％EtOAc/异-己烷洗脱纯化。合并产物流分并经真空浓缩得到黄色胶状物(245mg，91％)。(3S)-3-[[7-(氨基羰基)-2-溴代噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基](甲基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。将(3S)-3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)(甲基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(245mg)溶解于叔-丁醇(10mL)，加入粉末的KOH(110mg)。将得到的反应混合物加热至80℃计30min，LCMS确认完成反应(468.93 M+H)。反应混合物经真空浓缩和与MeOH共沸。将残余物溶解于CH2Cl2，用水和盐水洗涤并经MgSO4干燥，用MeOH稀释，之后应用离子交换柱并用MeOH和MeOH/NH3先后洗脱。将产物在碱性流分中洗脱并在真空中浓缩至黄色固体(207mg)。(3S)-3-[ {7-(氨基羰基)-2-[2-(苄氧基)苯基]噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基}(甲基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯.向(3S)-3-[[7-(氨基羰基)-2-溴代噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基](甲基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(207 mg)中加入2-苄氧基苯基硼酸(151mg)、Pd(PPh3)4(51mg)和碳酸铯(432mg)。该混合物在10mL的二氧六环∶H2O(4∶1)中形成浆液，将其加热至80℃计1h。LCMS指示反应完成(573.09 M+H)。反应混合物于真空下浓缩并再溶解于CH2Cl2，用水、盐水洗涤和经MgSO4干燥。残余物于40g硅胶柱上纯化，并用30-100％EtOAc/己烷洗脱。合并产物流分，在真空中浓缩得到无色胶状产物(182mg)。
2-[2-(苄氧基)苯基]-4-{甲基[(3S)-哌啶-3-基]氨基}噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。将(3S)-3-[{7-(氨基羰基)-2-[2-(苄氧基)苯基]噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基}(甲基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(182mg)溶解于MeOH 6ml中，加入1.5mL的4.0M HCl的二氧六环溶液。然后于室温下搅拌该反应混合物3hr。LCMS指示反应完成(472.87 M+H)。反应完成后将反应混合物于30℃浴温下、真空下小心浓缩并且将残余物在CH2Cl2和几滴MeOH/NH3和饱和NaHCO3之间分配。用盐水洗涤有机物和经MgSO4干燥，干荷载于硅胶上，之后在12g硅胶柱上纯化，用1-12％MeOH/NH3/CH2Cl2洗脱。合并最洁净的产物流分和真空浓缩，得到白色固体，其经用乙醚研磨，过滤和干燥得到标题产物85mg。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ1.40-1.55(m，1H)，1.62-1.75(m，2H)，1.75-1.84(m，1H)，2.32-2.43(m，1H)，2.60-2.70(m，1H)，2.79-2.87(m，1H)，2.87-2.97(m，1H)，2.91(s，3H)，4.36-4.46(m，1H)，5.28(s，2H)，7.09(t，1H)，7.25-7.32(m，1H)，7.32-7.46(m，5H)，7.55(d，2H)，7.73(d，1H)，7.82-8.04(m，1H)，7.99(s，1H)，8.55(s，1H)。LCMS(ES，M+H＝473)。
实施例65 2-苯基-4-{(2-苯基乙基)[(3S)-哌啶-3-基]氨基}噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 以与实施例1类似的方式，但使用(3S)-3-[(2-苯基乙基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(如以下描述的合成)作为步骤7中的起始原料制备。1H NMR(加D2O)δ8.63(s，1H)，767(m，2H)，7.53(s，1H)，7.44(m，3H)，7.14-7.23(m，5H)，4.50(m，1H)，3.85(m，2H)，3.15(m，3H)，2.80(m，3H)，1.80-1.87(m，3H)，1.66(m，1H)。LCMS(ES，M+H＝457)。
(3S)-3-[(2-苯基乙基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。将(3S)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g，5mmol)、(2-溴代乙基)苯(925mg，0.69ml，5mmol)和碳酸钾(1.73g，12.5mmol)加入至微波加热管中并加入DMF(6mL)。
将该混合物于90℃加热1h。各相在EtOAc和水之间分配。用水和盐水洗涤有机层，干燥和蒸发。混合物经MPLC(EtOAC/己烷)纯化得到794mg(52％)的无色油样标题化合物LCMS(ES，M+H＝305)。
以与类似于实施例65的方式，采用适当的起始原料制备实施例66-68。
实施例69 4-{[反式-2-甲基哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 以与实施例1类似的方式，但使用反式-3-氨基-2-甲基哌啶-1-羧酸苄酯(如以下描述的合成)作为步骤7中的起始原料制备。1H NMRδ9.47(m，1H)，9.04(m，1H)，8.59(m，1H)，8.45(s，1H)，8.25(m，1H)，7.71(d，2H)，7.56(m，1H)，7.45(m，2H)，7.35(m，1H)，4.34(m，1H)，3.42(m，1H)，3.22(m，1H)，2.82(m，1H)，2.07(m，1H)，1.83(m，2H)，1.59(m，1H)，1.26(d，3H)。LCMS(ES，M+H＝367)。
((1S)-1-乙酰基-4-{[(苄氧基)羰基]氨基}丁基)氨基甲酸叔丁酯。向装配磁力搅拌棒和加料漏斗的含N5-[(苄氧基)羰基]-N2-(叔-丁氧基羰基)-L-鸟氨酸(36.6g，100mmol)的3-颈烧瓶中加入无水THF(100mL)。加料漏斗中填充了MeLi(1.6M于乙醚中；275mL；440mmol)，随后缓慢加入(超过20分钟)至冷却至0℃的反应混合物中。然后将该溶液温热至rt。再搅拌5h后，通过将反应物倾到至搅拌的冰/水混合物上猝灭反应。用EtOAc(3×100mL)提取含水混合物。然后用盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤和真空下浓缩得到黄色油(6.0g，98％)。使用MPLC(SiO2；25-60％EtOAc/己烷)纯化后，分离澄清油样产物(5.2g，14％)。1H NMRδ7.35(m，5H)，7.25(m，2H)，5.00(s，2H)，3.85(m，1H)，2.98(dd，2H)，2.05(s，3H)，1.63(m，1H)，1.39(s，9H)，1.34(m，3H)。LCMS(ES，M+H＝365)。
[反式-2-甲基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯。向搅拌的((1S)-1-乙酰基-4-{[(苄氧基)羰基]氨基}丁基)氨基甲酸叔丁酯(3.9g，10.7mmol)于MeOH(200mL)的溶液中加入10％Pd/C(0.1mmol)。于大气压下使非均质性的混合物氢化3天(或40 psi过夜)。经硅藻土过滤后分离出澄清油样产物和蒸发滤液，得到无需纯化即用于下一步的标题化合物(2.3g；100％)。LCMS(ES，M+H＝215)。
反式-3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-2-甲基哌啶-1-羧酸苄酯。向搅拌的溶解于冷却至0℃的CH2Cl2(40mL)的[反式-2-甲基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(2.3g，10.7mmol)和二异丙基乙基胺(2.1mL，12mmol)的溶液中，加入氯甲酸苄基酯(1.7mL，12mmol)。然后将反应混合物温热至rt并再搅拌1h。然后用CH2Cl2稀释该混合物并用1N HCl和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤和真空下浓缩，得到黄色油。经用MPLC(SiO2；10-40％EtOAc/己烷)纯化后，分离出结晶的固体样标题化合物(反式非对映异构体)(1.8g)。1H NMRδ7.34(m，5H)，6.99(d，1H)，5.04(s，2H)，4.28(dd，1H)，3.83(m，1H)，3.37(m，1H)，2.86(m，1H)，1.77(m，2H)，1.46(m，1H)，1.36(s，9H)，1.33(m，1H)，1.11(d，3H)。LCMS(ES，M+H＝349)。也分离纯化的顺式非对映异构体，顺式-3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-2-甲基哌啶-1-羧酸苄酯(1.3g)。1H NMRδ7.35(m，5H)，6.97(d，1H)，5.07(s，2H)，4.44(m，1H)，3.80(m，1H)，3.40(m，1H)，2.78(m，1H)，1.63(m，1H)，1.49(m，2H)，1.39(s，9H)，1.36(m，1H)，0.96(d，3H)。LCMS(ES，M+H＝349)。
反式-3-氨基-2-甲基哌啶-1-羧酸苄酯。向溶解于MeOH(10mL)中的反式-3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-2-甲基哌啶-1-羧酸苄酯(1.8g，5.2mmol)溶液中加入HCl(4 N于二氧六环中；20mL)。于rt下搅拌1h后，将反应物于真空下浓缩，再溶解于MeOH中，然后真空下浓缩得到澄清结晶的固体样标题化合物的盐酸盐(1.46g，1 00％)。1H NMRδ8.27(br s，3H)，7.39(m，3H)，7.35(m，1H)，7.32(m，1H)，5.09(s，2H)，4.36(dd，1H)，3.88(m，1H)，3.26(m，1H)，2.92(m，1H)，1.79(m，3H)，1.48(m，1H)，1.16(d，3H)。LCMS(ES，M+H＝249)。
实施例70 4-{[顺式-2-甲基哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 以与实施例1类似的方式，但使用顺式-3-氨基-2-甲基哌啶-1-羧酸苄酯(以下描述)作为步骤7中的起始原料制备。1H NMRδ9.79(m，1H)，8.95(m，2H)，8.51(s，1H)，8.15(m，1H)，7.78(d，2H)，7.49(m，3H)，7.38(m，1H)，4.73(m，1H)，3.71(m，1H)，3.28(m，1H)，3.00(m，1H)，1.95(m，2H)，1.82(m，1H)，1.69(m，1H)，1.30(d，3H)。LCMS(ES，M+H＝367)。
顺式-3-氨基-2-甲基哌啶-1-羧酸苄基酯。向溶解于MeOH(10mL)的顺式-3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-2-甲基哌啶-1-羧酸苄酯(1.2g，3.4mmol)的溶液中加入HCl(4N于二氧六环中；20mL)。于rt下搅拌1h后，将反应物于真空下浓缩，再溶解于MeOH中，然后真空下浓缩得到，澄清结晶的固体样标题化合物的盐酸盐(0.97g，100％)。1H NMRδ8.39(br s，3H)，7.36(m，3H)，7.33(m，2H)，5.09(s，2H)，4.61(dd，1H)，3.83(m，1H)，3.26(m，1H)，2.86(m，1H)，1.72(m，3H)，1.41(m，1H)，1.10(d，3H)。LCMS(ES，M+H＝249)。
以类似的方式制备以下实施例71-74。
通过手性制备型HPLC分离实施例69，制备以下实施例75-76。
通过手性制备型HPLC分离实施例72，制备以下实施例77-78。
实施例79 4-{甲基[反式-2-甲基哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 以与实施例1类似的方式，但使用反式-2-甲基-3-(甲基氨基)哌啶-1-羧酸苄酯(如以下描述合成)作为步骤7中的起始原料制备。1H NMR δ9.57(m，1H)，8.92(m，1H)，8.61(s，1H)，8.14(br s，1H)，7.97(s，1H)，7.87(d，2H)，7.50(m，3H)，7.40(m，1H)，4.82(m，1H)，3.55(m，1H)，3.29(s，3H)，3.23(m，1H)，2.94(m，1H)，1.97(m，4H)，1.21(d，3H)。LCMS(ES，M+H＝381)。
反式-3-[(叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基]-2-甲基哌啶-1-羧酸苄酯。于N2气氛下，向反式-3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-2-甲基哌啶-1-羧酸苄酯(0.10g，0.29mmol)于10mL无水THF的溶液中加入氢化钠(60％于植物油中；8mg，0.32mmol)。搅拌该溶液30分钟，然后加入碘代甲烷(0.017mL，0.287mmol)。搅拌反应物混合物2个小时，缓慢加入10mL的MeOH以猝灭反应。将内容物CIV，将残余物溶解于30mL CH2Cl2中，用水(2x)洗涤。CIV有机层得到0.16g标题产物。1H NMRδ1.14(d，3H)1.38(s，9H)1.54(m，1H)1.68(m，3H)2.73(s，3H)3.06(m，1H)3.74(m，1H)3.84(m，1H)4.04(m，1H)5.07(s，2H)7.34(m，5H)。LCMS(ES，M+H＝363)。
苄基反式-2-甲基-3-(甲基氨基)哌啶-1-羧酸酯。向溶解于MeOH(4mL)的反式-3-[(叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基]-2-甲基哌啶-1-羧酸苄酯(0.16g0.45mmol)溶液中加入HCl(4N于二氧六环中；4mL)。于rt下搅拌2h后，将反应物真空下浓缩，再溶解于MeOH，然后真空下浓缩得到油性结晶的固体样标题化合物的盐酸盐(0.12g)。LCMS(ES，M+H＝263)。
实施例80 4-{[反式-2-(2-羟基乙基)哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7- 甲酰胺 以与实施例1类似的方式，但使用反式-3-氨基-2-(2-羟基乙基)哌啶-1-羧酸苄酯(如以下描述合成)作为步骤7中的起始原料制备。1HNMRδ9.57(m，1H)，8.92(m，1H)，8.61(s，1H)，8.14(br s，1H)，7.97(s，1H)，7.87(d，2H)，7.50(m，3H)，7.40(m，1H)，4.82(m，1H)，3.55(m，1H)，3.29(s，3H)，3.23(m，1H)，2.94(m，1H)，1.97(m，4H)，1.21(d，3H)。LCMS(ES，M+H＝381)。
反式-3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-2-(2-乙氧基-2-氧代乙基)哌啶-1-羧酸苄酯。在干燥的和N2净化的条件下，将{3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]哌啶-2-基}乙酸乙酯(依据在下列文献中描述的方法制备Tetrahedron Lett，1993，34，3593-3594)(0.45g，1.6mmol)溶解于10mL CH2Cl2中。加入0.28mL(1.6mmol)DIEA，然后加入0.22mL(1.59mmol)氯甲酸苄基酯。搅拌该溶液30min。然后用水和盐水先后提取反应混合物。浓缩有机层且残余物经MPLC；0-50％EtOAc/己烷纯化。洗脱标题化合物(43-48％，0.41g)。LCMS(ES，M+H＝421)。
反式-3-氨基-2-(2-羟基乙基)哌啶-1-羧酸苄酯。在应用干燥溶剂的干燥的和N2净化的条件下，将反式-3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-2-(2-乙氧基-2-氧代乙基)哌啶-1-羧酸苄酯(0.41g)溶解于9mL THF和1mLMeOH中。向该反应物中加入0.073g NaBH4并搅拌16hr。加入NaBH4后观察到气体发生。反应用25mL水稀释并用CH2Cl2提取。浓缩有机提取物和将残余物溶解于4mL 4 N HCl的二氧六环溶液中。搅拌该溶液16hr，在高真空下去除溶剂后得到标题化合物，0.20g。LCMS(ES，M+H＝279)。
实施例81 4-{[(3S)-5-苄基哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 以与实施例1类似的方式，但使用苄基(3S)-5-苄基哌啶-3-胺(如以下描述的合成)作为在步骤7中的起始原料制备。1H NMRδ8.64(s，1H)，8.19(m，1H)，8.04(m，2H)，7.59(m，2H)，7.56(m，2H)，7.43(m，3H)，7.30(m，3H)，7.22(m，2H)，3.99(m，2H)，3.72(m，3H)，3.37(d，1H)，2.91(m，1H)，2.70(m，1H)，1.99(m，1H)，1.69(m，1H)。LCMS(ES，M+H＝443)。
4-苄基-N-(叔-丁氧基羰基)-L-谷氨酸二甲基酯。于-78℃，向六甲基二甲硅烷基叠氮化锂(50.0mL，50.0mmol，1M在THF中)溶液中逐滴加入N-(叔-丁氧基羰基)-L-谷氨酸二甲基酯(6.55g，23.8mmol)于30mLTHF的溶液。搅拌得到的溶液30分钟，随后加入苄基溴(5.65mL，47.6mmol)。然后于-78℃搅拌反应物混合物1个小时，此后LCMS指示完全转化为产物。用水(50mL)猝灭反应混合物，用EtOAc(3×100mL)提取。有机层经硫酸镁干燥、过滤并在减压下浓缩，经快速柱层析(100％己烷至100％EtOAc)纯化后得到白色固体样标题化合物(5.68克，65％得率)。LCMS(ES，M+Na＝388)。
[(1S)-3-苄基-4-羟基-1-(羟基甲基)丁基]氨基甲酸叔丁酯。于0℃，向含4-苄基-N-(叔-丁氧基羰基)-L-谷氨酸二甲酯(5.68g，15.5mmol)和氯化钙(6.88g，62.0mmol)于各60mL的EtOH和THF溶液中分批加入NaBH4(4.69g，124mmol)。将反应混合物温热至rt并搅拌12小时直至LCMS指示完全转化为产物。然后用饱和的碳酸氢钠(2×100mL)和水(2×100mL)猝灭反应混合物，随后用EtOAc(3×100mL)提取。合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并在减压下浓缩，得到直接用于下一反应的标题化合物。LCMS(ES，M+H-BOC基团＝210)。
(2S)-4-苄基-2-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-5-[(甲基磺酰基)氧基]戊基甲烷磺酸盐。将[(1S)-3-苄基-4-羟基-1-(羟基甲基)丁基]氨基甲酸叔丁酯(4.42g，14.3mmol)于100mL CH2Cl2的溶液冷却至0℃，其后加入TEA(7.97mL，57.2mmol)，随后加入甲烷磺酰氯(3.32mL，42.9mmol)。于0℃搅拌反应物混合物1个小时，用CH2Cl2稀释，用饱和碳酸氢钠钠洗涤，经硫酸镁干燥，过滤和真空下浓缩，得到直接用于下一反应的标题化合物。LCMS(ES，M+Na＝488)。
[(3S)-1，5-二苄基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯。向(2S)-4-苄基-2-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-5-[(甲基磺酰基)氧基]戊基甲烷磺酸酯(14.3mmol)的溶液中加入30mL的苄基胺。将反应混合物加热至70℃约24小时，其后将该混合物冷却至rt并倾入1N NaOH(100mL)中。用己烷(4×100mL)提取混合物，有机层经硫酸镁干燥，过滤和CIV。得到的油经快速柱层析(100％己烷至100％EtOAc)纯化，得到标题化合物。LCMS(ES，M+H-BOC基团＝281)。
[(3S)-5-苄基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯。于氮气氛下，向[(3S)-1，5-二苄基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(3.28g，8.62mmol)于15mL EtOH的溶液中加入10％Pd/C(900mg)。在帕尔(Parr)装置上用50psi氢气处理反应混合物24小时。反应混合物经硅藻土过滤，用大量MeOH漂洗，减压浓缩滤液，得到直接用于下一反应的标题化合物。LCMS(ES，M+H＝291)。
(3S)-5-苄基哌啶-3-胺。向含有溶解于最少量的MeOH的[(3S)-5-苄基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(1.59g，5.46mmol)的溶液中加入4N HCl的二氧六环(5.0mL)。将得到的溶液于rt下搅拌30分钟。然后减压下浓缩反应混合物，得到标题化合物。LCMS(ES，M+H＝191)。
以与实施例81类似的方式采用适当的起始原料制备实施例82。
实施例83 4-[(2，6-二甲基哌啶-3-基)氨基]-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 2，6-二甲基哌啶-3-胺。于氮气氛下，向含2，6-二甲基吡啶-3-胺(2.08g，17.0mmol)的高压容器中加入水和12N HCl(各10mL)，随后加入氧化铂(IV)(500mg，2.20mmol)。然后于减压下将高压容器抽空并将混合物置于50psi帕尔氢化器中48小时。于氮气氛下，将混合物抽空，于硅藻土垫上过滤并用大量MeOH漂洗。将收集的滤液在真空下浓缩，得到直接用于下一反应的作为异构体混合物的标题化合物。LCMS(ES，M+H＝129)。
2-溴-4-[(2，6-二甲基哌啶-3-基)氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈。向溶解于NMP(10mL)的2，6-二甲基哌啶-3-胺(1.23g，4.50mmol)中加入碳酸钾(1.87g，13.5mmol)和2-溴-4-氯代噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(1.23g，4.50mmol)。将得到的混合物加热至80℃并搅拌12小时或直至LCMS指示完全转化为产物。然后用水(100mL)稀释混合物，得到的固体经过滤，用水(20mL)洗涤和减压下干燥最多8个小时。LCMS(ES，M+H＝366)。
4-[(2，6-二甲基哌啶-3-基)氨基]-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈。向含有2-溴-4-[(2，6-二甲基哌啶-3-基)氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(400mg，1.09mmol)、苯基硼酸(200mg，1.64mmol)、碳酸铯(1.06g，3.27mmol)和二氧六环/水(2mL/1mL)的溶液中加入Pd(PPh3)4(126mg，0.109mmol)。将反应物加热至80℃计1小时，随后使反应冷却至rt，过滤，用硅胶层析(100％CH2Cl2至20％MeOH/CH2Cl2/3％NH4OH)纯化得到标题化合物。LCMS(ES，M+H＝363)。
4-[(2，6-二甲基哌啶-3-基)氨基]-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。向含有4-[(2，6-二甲基哌啶-3-基)氨基]-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈的烧瓶中加入5.00mL的12N HCl。于rt下搅拌反应物混合物并通过LCMS监测。每12小时加入额外的12N HCl得到完全转化的所需产物。待转化完全时，用MeOH稀释反应混合物和减压下浓缩得到产物，其经制备型HPLC(5％-95％H2O/MeCN/0.1％TFA)纯化，得到作为异构体混合物的标题化合物。提供存在于混合物的主要异构体的分析数据1H NMRδ9.96(m，1H)，9.19(m，1H)，9.02(m，1H)，8.50(s，1H)，8.21(m，1H)，7.79(m，2H)，7.49(m，2H)，7.35(m，2H)，4.74(m，1H)，3.67(m，1H)，3.27(m，1H)，1.84(m，4H)，1.36(m，6H)。LCMS(ES，M+H＝381)。
以类似的方式采用适当的起始原料制备以下实施例84-94。
实施例95 2-{3-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 (3S)-3-{[7-氰基-2-(3-甲酰基苯基)-1-苯并噻吩-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯。将(3S)-3-[(7-氰基-2-溴代噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(500mg，1.1mmol)、3-甲酰基苯基硼酸(257mg，1.7mmol)、碳酸铯(1.12g，3.4mmol)和Pd(PPh3)4(198mg，0.17mmol)的混合物于二氧六环(8.2mL)和H2O(2.7mL)中加热至80℃。30min后，使溶液冷却至rt，经由吸液管去除水层且使溶液于真空下浓缩。残余物经MPLC(SiO2；20-50％EtOAc/己烷)纯化，得到标题化合物(185mg，35％)。LCMS(ES，M+H＝463)。
(3S)-3-[(7-氰基-2-{4-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-1-苯并噻吩-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。于rt下，将(3S)-3-{[7-氰基-2-(3-甲酰基苯基)-1-苯并噻吩-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(50mg，0.11mmol)和二甲基胺(0.54mL的于THF中的2 M溶液，1.1mmol)溶液于乙二醇二甲醚(0.54mL)中搅拌。加入乙酸(2滴)，随后加入NaBH(OAc)3(92mg，0.43mmol)。将该溶液加热至80℃计30min。然后使溶液冷却至rt。加入水(2滴)，随后加入1M NaOH(1mL)。该产物经EtOAc提取。用盐水洗涤有机提取物，经MgSO4干燥和真空下浓缩，得到直接用于下一步的标题化合物。LCMS(ES，M+H＝492)。
2-{3-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。将(3S)-3-[(7-氰基-2-{4-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-1-苯并噻吩-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯溶解于12M HCl(4mL)中并保持在于rt下17h。将该溶液于真空下浓缩和与MeOH共沸，得到作为盐酸盐的标题化合物(48mg，98％)。1H NMRδ10.62(br s，1H)，9.70(brs，1H)，9.07(m，2H)，8.57(s，1H)，8.44(br s，1H)，7.96(s，1H)，7.90(m，1H)，7.60(m，3H)，4.65(m，1H)，4.35(d，2H)，3.47(m，1H)，3.20(m，2H)，3.01(m，1H)，2.74(s，3H)，2.73(s，3H)，2.03(m，2H)，1.81(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝410)。
以类似的方式，从适当的原料制备以下实施例96-111。
实施例112 2-(4-{[(1-甲基-1H-吲哚-2-基)羰基]氨基}苯基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 1-甲基-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂戊环-2-基)苯基]-1H-吲哚-2-甲酰胺。于0℃，向1-甲基-1H-吲哚-2-羧酸(364mg，2.08mmol)于CH2Cl2(5.00mL)的溶液中逐滴加入草酰氯(0.536mL，6.24mmol)。向该溶液加入两滴DMF和将得到的溶液于回流下搅拌过夜，然后随后将黑色溶液于真空下浓缩。用5mL的CH2Cl2稀释得到的残余物和于0℃逐滴加入至[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂戊环-2-基)苯基]胺(0.50g，2.28mmol)于5mL的CH2Cl2和N，N-二异丙基乙基胺(DIPEA，0.56mL，3.12mmol)的溶液中。得到的混合物于rt下搅拌3个小时。然后用水(100mL)提取得到的混合物并用饱和氯化钠洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤和减压下浓缩，经柱层析(0-100％EtOAc/己烷)后得到标题化合物(0.417mg，53％得率)。1H NMRδ10.45(s，1H)，7.82(m，2H)，7.67(m，2H)，7.58(d，1H)，7.56(m，2H)，7.36(m，2H)，4.01(s，3H)，1.29(s，12H)。LCMS(ES，M+H＝377)。
(3S)-3-{[7-氰基-2-(4-{[(1-甲基-1H-吲哚-2-基)羰基]氨基}苯基)噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯。向(3S)-3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(203mg，0.464mmol)中加入碳酸铯(452mg，1.39mmol)、1-甲基-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂戊环-2-基)苯基]-1H-吲哚-2-甲酰胺(262mg，0.696mmol)、Pd(PPh3)4(53.6mg，0.0464mmol)和二氧六环/水(2mL/1mL)。将反应加热至80℃计1个小时，随后使反应物冷却至rt，过滤和经硅胶层析(0-100％EtOAc/己烷)纯化，得到标题化合物(156mg，56％得率)。LCMS(ES，M+H＝607)。
2-(4-{[(1-甲基-1H-吲哚-2-基)羰基]氨基}苯基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。向含(3S)-3-{[7-氰基-2-(4-{[(1-甲基-1H-吲哚-2-基)羰基]氨基}苯基)噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯的烧瓶中加入5.00mL的12 N HCl。将反应混合物于rt下搅拌并用LCMS监测。再以每12小时加入12N HCl得到完全转化的所需产物。待转化完全时，反应混合物用水稀释和减压下浓缩，得到产物，经硅胶层析(CH2Cl2至20％MeOH/CH2Cl2/3％NH4OH)纯化得到标题化合物。1H NMRδ10.45(s，1H)，8.50(s，1H)，8.14(s，1H)，7.94(m，2H)，7.73(m，3H)，7.59(d，1H)，7.35(m，2H)，7.15(m，2H)，4.19(m，1H)，4.03(s，3H)，3.14(m，2H)，2.87(m，2H)，1.98(m，1H)，1.74(m，1H)，1.53(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝525)。
以类似的方式制备以下实施例113-115。
实施例116 2-溴-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 向固体(3S)-3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(70mg，0.20mmol)中加入4mL浓HCl并将该溶液于rt下搅拌2天。真空去除溶剂和高真空下干燥后得到作为盐酸盐的标题化合物(78mg，100％)。1H NMRδ1.50(m，2H)，1.67(m，1H)，1.93(m，1H)，2.81(m，2H)，3.11(m，1H)，3.24(m，1H)，4.11(m，1H)，7.20(m，1H)，7.34(m，1H)，7.95(br s，1H)，8.52(s，1H)。LCMS(ES，M+H＝356)。
实施例117 2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氧基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺(3S)-3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。向搅拌的(3S)-3-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.4g，7mmol)于THF(10mL)的溶液中分批缓慢加入NaH(0.3g，7mmol；60％于矿物油中)。15分钟后，将悬浮于THF(10mL)的2-溴-4-氯代噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(1.4g，5.1mmol)缓慢加入预形成的醇盐溶液中。反应混合物于rt下搅拌1h，然后用～80mL的水稀释。提取入EtOAc，随后用饱和NaHCO3、饱和NaCl洗涤和经Na2SO4干燥，得到可直接用于下一步的棕色固体产物(～2g，91％)。1H NMRδ8.66(s，1H)，7.79(s，1H)，5.26(m，1H)，4.13(m，1H)，3.84(m，1H)，2.93(m，1H)，1.94(m，3H)，1.50(m，2H)，0.92(s，9H)。LCMS(ES，M+H＝438，440)。
(3S)-3-[(7-氰基-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。将(3S)-3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2g.4.5mmol)、苯基硼酸(0.83g，6.8mmol)、Pd(PPh3)4(0.8g，0.68mmol)和碳酸铯(4.4g，13.6mmol)的混合物溶解于水(5mL)和二氧六环(20mL)中。于氮气氛下，将该反应混合物于80℃搅拌1h，然后使其冷却至rt。用吸液管去除水，真空下去除二氧六环。残余物经MPLC(SiO2；20-50％EtOAc/己烷)纯化，得到标题化合物(1.0g，45％；2个步骤)。1H NMRδ8.62(s，1H)7.85(d，2H)7.42-7.54(m，3H)6.74(d，1H)5.29(s，1H)4.15(m，1H)3.83(m，1H)3.35(m，1H)2.97(m，1H)1.98(s，3H)1.52(s，1H)0.90(s，9H)。LCMS(ES，M+H＝436)。
2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氧基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。将(3S)-3-[(7-氰基-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.0g，2.3mmol)和12 N HCl(浓的，15mL)溶液搅拌12小时。加入水(100mL)，真空下使溶液浓缩至干燥。将得到的白色固体溶解于100mL的MeOH，真空下浓缩并在高真空下干燥，得到标题化合物(0.86g，96％)。1H NMRδ9.56(d，1H)9.10(s，1H)8.67(s，1H)8.32(s，1H)8.28(s，1H)7.87(d，2H)7.66(s，1H)7.49(t，2H)7.40(t，1H)，5.64(s，1H)3.41(s，2H)3.17-3.28(m，1H)3.03(d，1H)1.91-2.06(m，3H)1.65-1.79(m，1H)。LCMS(ES，M+H＝354)。
以类似的方式，从适当的起始原料制备实施例118-128。
实施例129 2-苯基-4-(哌啶-3-基硫代)噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 以与实施例17类似的方式，但使用3-巯基哌啶-1-羧酸苄酯(如以下描述的合成)作为第一步骤中的起始原料制备。1H NMRδ9.23(br，2H)，8.91(s，1H)，8.45(s，1H)，7.88(d，2H)，7.83(br，1H)，7.82(s，1H)，7.50(t，2H)，7.43(t，1H)，4.41(m，1H)，3.63(m，1H)，3.23(m，1H)，3.09(m，1H)，2.94(m，1H)，2.22-2.13(m，1H)，1.96-1.72(m，3H)。LCMS(ES，M+H＝370)。
3-(乙酰基硫代)哌啶-1-羧酸苄酯。于0℃，向三苯基膦(3.40g，13.0mmol)和偶氮二甲酸二异丙酯(2.65mL，13.7mmol)的THF(10mL)溶液中加入3-羟基哌啶-1-羧酸苄酯(2.57g，10.9mmol)，随后加入硫羟乙酸(1.00mL，14.0mmol)。将反应混合物加热至70℃计18h。冷却后，将反应混合物于真空下浓缩，经MPLC(梯度5-20％EtOAc/己烷)纯化得到所需的黄色油样产物(1.02g，3.49mmol，32％)。1H NMRδ7.41-7.27(m，5H)，5.12-5.01(m，2H)，3.75(m，1H)，3.58-3.13(m，4H)，2.28(br s，3H)，1.91(m，1H)，1.65-1.43(m，3H)。LCMS(ES，M+Na＝316)。
3-巯基哌啶-1-羧酸苄酯。向3-(乙酰基硫代(acetylthio))哌啶-1-羧酸苄酯(541mg，1.85mmol)的MeOH(20mL)溶液中加入NaSMe(582mg，8.31mmol)的MeOH(10mL)溶液。将混合物搅拌2h，此时LCMS分析指示起始原料完全消耗。将反应混合物于真空下浓缩并将残余物在EtOAc和0.5M HCl之间分配。浓缩有机层，得到黄色油样游离硫醇(463mg，1.85mmol，＞98％)。1H NMRδ7.41-7.26(m，5H)，5.13-5.00(m，2H)，3.98(m，1H)，3.76(m，1H)，2.90(m，1H)，2.80(m，1H)，2.70(d，1H)，1.99(m，1H)，1.65(m，1H)，1.40(m，2H)。LCMS(ES，M+Na＝274)。
实施例130 4-{[(3S)-1-甲基哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 (3S)-1-甲基哌啶-3-胺。于0℃，向(3S)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(8.89g，44.4mmol)的THF(176mL)溶液中逐滴加入1M氢化铝锂的THF(88.0mL，88.8mmol)。使得到的灰色溶液温热至rt，于氮气氛下搅拌过夜。于0℃，将10％四水合酒石酸钾钠溶液加至混合物中直至停止起泡。用大量EtOAc、随后用1/1 MeOH/CH2Cl2提取得到的混合物。合并的有机层经MgSO4干燥，过滤和真空下浓缩，得到直接用于下一反应的标题化合物。GCMS (m/z 114)。
2-溴-4-{[(3S)-1-甲基哌啶-3-基]氨基}噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈。向2-溴-4-氯代噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(400mg，1.46mmol)的NMP(2.0mL)溶液中加入碳酸钾(605mg，4.38mmol)和(3S)-1-甲基哌啶-3-胺(333mg，2.92mmol)。将反应混合物加热至130℃直至LCMS指示反应完成。使反应混合物冷却至rt，加入约100mL的水。得到的固体经过滤并真空干燥，得到标题化合物。LCMS(ES，M+H＝353)。
4-{[(3S)-1-甲基哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈。向2-溴-4-{[(3S)-1-甲基哌啶-3-基]氨基}噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(512mg，1.46mmol)中加入碳酸铯(1.43g，4.38mmol)、苯基硼酸(306mg，2.19mmol)、Pd(PPh3)4(169mg，0.146mmol)和二氧六环/水(4mL/2mL)。将反应加热至80℃计1小时，随后使反应冷却至rt，过滤，采用硅胶层析(100％己烷至100％EtOAc)纯化，得到标题化合物。LCMS(ES，M+H＝349)。
4-{[(3S)-1-甲基哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。
向含4-{[(3S)-1-甲基哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈的烧瓶中加入5.00mL的12 N HCl。于rt下搅拌反应物混合物并用LCMS监测。再加入12N HCl，12小时后完全转化为所需的产物。待转化完全时，用水稀释反应混合物和减压下浓缩，得到产物，经用硅胶层析(100％CH2Cl2至20％MeOH/CH2Cl2/3％NH4OH)纯化，得到标题化合物。1H NMRδ8.52(s，1H)，8.20(s，1H)，7.74-7.71(m，3H)，7.48-7.36(m，4H)，7.21(d，1H)，4.28(m，1H)，2.96(m，2H)，2.69(m，2H)，1.93-1.55(m，4H)。LCMS(ES，M+H＝367)。
实施例131 2-(4-氰基苯基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 将固体2-溴-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺(75mg，0.2mmol)、4-氰基苯基硼酸(44.1mg，0.30mmol)、碳酸铯(260mg，0.80mmol)、Pd(PPh3)4(23mg，0.02mmol)溶解于2ml的二氧六环和0.5ml的水中。将反应混合物加热至80℃计2个小时。真空中去除溶剂，残余物经制备型HPLC(H2O/CH3CN/0.1％TFA梯度)纯化。将冻干后得到三氟乙酸盐溶解于MeOH中并用4 N HCl的二氧六环处理，然后于rt下搅拌数小时。真空中去除溶剂和在高真空下干燥后，分离出作为盐酸盐的标题化合物(44mg，54％)，1H NMRδ9.36(s，1H)，8.97(s，1H)，8.83(s，1H)，8.60(s，1H)，8.22(s，1H)，7.96(q，4H)，7.56(s，1H)，4.60(m，1H)，3.21(m，2H)，3.02(m，2H)，2.05(m，2H)，1.77(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝378)。
以类似的方式制备以下实施例132。
实施例133 4-{[(2S)-2-氨基-3-羟基丙基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺3-氨基-N-[(苄氧基)羰基]-L-丙氨酸甲酯。向装备磁力搅拌棒的含3-氨基-N-[(苄氧基)羰基]-L-丙氨酸甲酯(5.0g，21.0mmol)的烧瓶中加入无水MeOH(100mL)。搅拌下向溶液/浆液中鼓泡通入HCl气约10分钟。约2分钟后该发热反应从浑浊白色转化至澄清/无色。将该溶液搅拌过夜，之后真空浓缩和干燥，得到作为白色结晶盐酸盐的标题化合物(6.0g，98％)。1H NMRδ3.05(t，1H)，3.19(t，1H)，3.70(s，3H)，4.45(m，1H)，5.10(s，2H)，7.38(m，5H)，7.95(d，1H)，8.35(br s，3H)。LCMS(ES，M+H＝253)。
N-[(苄氧基)羰基]-3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3-2-c]吡啶-4-基)氨基]-L-丙氨酸甲酯。向搅拌的4-氯-2-溴-噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(0.53g，1.9mmol)和3-氨基-N-[(苄氧基)羰基]-L-丙氨酸甲酯盐酸盐(0.66g，2.3mmol)的NMP(4mL)的溶液中加入碳酸钾(0.44g，3.2mmol)。将非均质性的混合物加热至80℃计2h，冷却至rt，然后加入至～50mL的水中。产物(1.2g)经过滤分离和干燥，得到暗棕色固体。采用MPLC(SiO2；0-100％EtOAc/己烷)纯化该固体，得到标题化合物(0.41g)。LCMS(ES，M+H＝489，491；M-H＝487，489)。
N-[(苄氧基)羰基]-3-[(7-氰基-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]-L-丙氨酸甲酯。向用氮净化的、含N-[(苄氧基)羰基]-3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]-L-丙氨酸甲酯(0.41g.0.85mmol)的烧瓶中加入苯基硼酸(0.21g，1.7mmol)、Pd(PPh3)4(0.10g，0.085mmol)、碳酸铯(0.83g，2.5mmol)、水(2mL)和二氧六环(6mL)。将该反应混合物加热至80℃计15分钟，然后使其冷却至rt。经MPLC(SiO2；0-50％EtOAc/己烷)纯化得到标题化合物(89mg)。LCMS(ES，M+H＝487)。[(1S)-2-[(7-氰基-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]-1-(羟基甲基)乙基]氨基甲酸苄酯。于氮气氛下，向含有溶解于THF (9.5mL)/MeOH(0.5mL)的N-[(苄氧基)羰基]-3-[(7-氰基-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]-L-丙氨酸甲酯(89mg，0.18mmol)的烧瓶中，加入NaBH4(0.014g，0.37mmol)。于rt下搅拌反应物并用LCMS监测。40分钟后，反应完成。真空下浓缩溶剂，得到直接用于下一步的标题化合物，83mg(100％)。LCMS(ES，M+H＝459)。
4-{[((2S)-2-氨基-3-羟基丙基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。在装备磁力搅拌棒的烧瓶中加入[(1S)-2-[(7-氰基-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]-1-(羟基甲基)乙基]氨基甲酸苄酯(83mg，0.18mmol)和12 N HCl(5mL)。将该浆液搅拌24小时。真空去除溶剂并用MPLC(SiO2；50-100％NH4OH/MeOH/CH2Cl2(1∶7∶92))纯化残余物，得到标题化合物(23mg)。1H NMRδ1.35(s，2H)，2.75(m，1H)，3.16(m，2H)，3.33(m，1H)，3.87(q，1H)，4.45(t，1H)，7.04(s，1H)，7.14(t，1H)，7.28(m，3H)，7.50(d，2H)，7.68(s，1H)，7.94(s，1H)，8.30(s，1H)。LCMS(ES，M+H＝343)。
以类似于实施例133的方式，在第一步骤中采用3-氨基-N-[(苄氧基)羰基]-D-丙氨酸甲酯替代3-氨基-N-[(苄氧基)羰基]-L-丙氨酸甲酯制备以下实施例134。
实施例135 3-{[7-(氨基羰基)-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基l氨基}-D-丙氨酸 将N-[(苄氧基)羰基]-3-[(7-氰基-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]-D-丙氨酸(54mg，0.11mmol)[为以类似于制备实施例133的方式制备的实施例134的中间体]溶解于4mL的12N HCl并搅拌过夜。反应混合物经蒸发和高真空下干燥。经制备型HPLC纯化后分离出作为三氟乙酸盐的标题产物(19mg，48％)。1H NMRδ8.65(m，2H)，8.40(m，1H)，8.1-8.3(br s，1H)，7.82(m，2H)，7.59(m，2H)，7.49(m，1H)，4.45(m，1H)，4.17(m，2H)，4.08(m，2H)，3.90(br s，2H)。LCMS(ES，M+H＝357)。
实施例136 4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-2-吡啶-4-基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 3-[(4-氰基-2-吡啶-4-基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。向3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(183mg，0.418mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(2.00mL)溶液中加入Pd(PPh3)4(19.3mg，0.017mmol)、碘化铜(15.9mg，0.084mmol)和4-(三丁基甲锡烷基)吡啶(185mg，0.502mmol)。于80℃、氮气氛下搅拌反应物混合物直至LCMS指示反应完全。过滤得到的黑色反应混合物，用EtOAc漂洗，减压下浓缩，用硅胶层析(100％CH2Cl2至20％MeOH/CH2Cl2)纯化，得到103mg标题化合物(51％得率)。LCMS(ES，M+H＝436)。
4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-2-吡啶-4-基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。向含3-[(7-氰基-2-吡啶-4-基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的烧瓶中加入2.00mL的12N HCl。于rt下搅拌反应物混合物，用LCMS监测。每12小时再加入12N HCl，得到完全转化的所需产物。待转化完全时，用水稀释反应混合物并在减压下浓缩，得到产物，其经硅胶层析(100％CH2Cl2至20％MeOH/CH2Cl2/3％NH4OH)纯化，得到标题化合物。1H NMRδ1.70-1.56(m，2H)，1.99-1.78(m，2H)，2.98-2.89(2H)，3.09(m，1H)，3.24(m，1H)，4.22(m，1H)，7.38(m，1H)，7.66(d，2H)，7.97(m，1H)，8.47(s，1H)，8.57(s，1H)，8.64(d，2H)。LCMS(ES，M+H＝354)。
以类似的方式采用适当的起始原料制备以下实施例137。
实施例138 2-(苯基乙炔基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 2-碘代-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈。将N-碘代琥珀酰亚胺(10.2g，44mmol)加入到4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(4.0g，22mmol)于50∶50的DMF/乙酸(32mL)的混合物中的溶液中。将该黑色反应混合物加热至80℃计12h。冷却到rt后，边搅拌边将反应物加入至～150mL的水。用饱和NaHCO3将该浑浊溶液的pH调节至9-10。经过滤，用水洗涤并在真空烘箱中干燥得到产物(5.0g，76％)。1H NMRδ12.5(br s，1H)，8.31(d，1H)，7.83(s，1H)。LCMS(ES，M+H＝303，M-H＝301)。
4-氯-2-碘代噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈。将溶解于POCl3(50mL)中的2-碘代-4-氧代-4，5-二氢噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(5.0g，16.6mmol)的溶液加热至回流过夜。冷却到rt后，真空下将反应物浓缩至干燥。将该固体缓慢和小心地悬浮于～300mL的水中。经过滤，随后用水、饱和NaHCO3、水洗涤并在真空烘箱中干燥得到产物(4.3 g，84％)。1H NMRδ8.80(s，1H)，8.05(s，1H)。LCMS(ES，M+H＝321)。
(3S)-3-[(7-氰基-2-碘代噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。向搅拌的4-氯-2-碘代噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(2.5g，7.8mmol)和(3S)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.9g，9.4mmol)的NMP(14mL)溶液中加入碳酸钾(2.2g，15.6mmol)。将此非均质性混合物加热至80℃计2h，冷却至rt，然后加入至～100-150mL的水中。过滤和干燥得到无需纯化而直接用于下一步的、暗棕色固体产物(4.4g，100％)。LCMS(ES，M+H＝485；M-H，483)。
(3S)-3-{[7-氰基-2-(苯基乙炔基)噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯。向(3S)-3-[(7-氰基-2-碘代噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(150mg，310mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(1.00mL)中加入PdCl2(PPh3)2(16.1mg，0.023mmol)、碘化铜(4.40mg，0.023mmol)、TEA(0.130mL，0.930mmol)和苯乙炔(81.7μL，0.744mmol)。于rt、氮气氛下搅拌反应物混合物直至LCMS指示反应完全。向得到的反应混合物中加入10mL水，随后用EtOAc(4×20mL)提取混合物，有机层经MgSO4干燥，过滤和减压下浓缩溶剂，得到黑色残余物，经制备型HPLC(5-95％MeCN，H2O，0.1％TFA)纯化，得到标题化合物。LCMS(ES，M+H＝459)。
2-(苯基乙炔基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。
向含(3S)-3-{[7-氰基-2-(苯基乙炔基)噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯的烧瓶中加入1.00mL的12N HCl。于rt下搅拌反应物混合物并用LCMS监测。每12小时再加入12N HCl，得到完全转化的所需产物。待转化完全时，将反应混合物冷却至0℃，用6NNaOH逐滴处理直至达到pH 12。用EtOAc以及CH2Cl2/MeOH(1/1)提取混合物，有机层经硫酸镁干燥，过滤和真空下浓缩得到产物，其经制备型HPLC(5-95％MeCN，H2O，0.1％TFA)纯化，得到标题化合物。1H NMRδ1.99-1.63(m，4H)，2.91-2.83(m，2H)，3.3 1-3.20(m，2H)，4.48(m，1H)，7.26(m，1H)，7.48(m，3H)，7.55(m，2H)，8.10(s，1H)，8.71-8.57(重叠m和s，2H)。LCMS(ES，M+H＝377)。
以类似于实施例1的方式，在步骤8中使用(3S)-3-[(7-氰基-2-碘代噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯制备以下实施例139-145。
实施例146 2-(1H-吲唑-1-基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 (3S)-3-{[7-氰基-2-(1H-吲唑-1-基)噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯。氮气氛下，向CuI(2.7mg，0.014mmol)、吲唑(79.2mg，0.670mmol)和碳酸铯(191mg，0.586mmol)的溶液中加入(3S)-3-[(7-氰基-2-碘代噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(135mg，0.279mmol)、反式-1，2-环己烷二胺(4.2L，0.056mmol)和无水1，4-二氧六环(1.0mL)。于110℃搅拌反应物混合物24小时，在该时间点使反应物冷却至rt并用CH2Cl2稀释。过滤该混合物和减压下去除溶剂。用制备型HPLC(5-95％MeCN，H2O，0.1％TFA)纯化黑色残余物，得到标题化合物。LCMS(ES，M+H＝475)。
2-(1H-吲唑-1-基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。向含(3S)-3-{[7-氰基-2-(1H-吲唑-1-基)噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯的烧瓶中加入1.00mL的12N HCl。于rt下搅拌反应物混合物并用LCMS监测。每12小时再加入12N HCl，得到完全转化的所需产物。待转化完全时，使反应混合物冷却至0℃并用6NNaOH逐滴处理直至达到pH 12。用EtOAc以及CH2Cl2/MeOH(1/1)提取混合物，有机层经硫酸镁干燥，过滤和真空下浓缩得到标题化合物。1H NMRδ1.73-1.61(m，2H)，2.00-1.80(m，2H)，3.02-2.92(m，2H)，3.24(m，1H)，3.38(m，1H)，4.28(m，1H)，7.38(m，2H)，7.94(t，1H)，7.96(d，1H)，8.03(s，1H)，8.20(d，1H)，8.46(s，1H)，8.55(s，1H)。LCMS(ES，M+H＝393)。
以类似的方式制备以下实施例147。
实施例148 2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基][1，3]噻唑并[4，5-c]吡啶-7-甲酰胺 2-苯基-噻唑-5-甲醛。向2-氯代丙醛(malonaldehyde)(500mg，4.69mmol)于5.00mL丙酮的溶液中加入硫代苯甲酰胺(643mg，4.69mmol)。于室温下搅拌反应物混合物直至LCMS指示反应完成。减压下浓缩反应混合物，得到直接用于下一步的固体。1H NMRδ7.57(m，3H)，8.09(d，2H)，8.78(s，1H)，10.1(s，1H)。LCMS(ES，M+H＝190)。(2E)-3-(2-苯基-1，3-噻唑-5-基)丙烯酸。向2-苯基-噻唑-5-甲醛(888mg，4.69mmol)中加入丙二酸(684mg，6.57mmol)、吡啶(0.859mL)和哌啶(0.046mL)。将得到的混合物加热至回流6个小时，随后冷却至rt。将反应混合物倾入水(20mL)中并搅拌10分钟后，过滤得到的固体，用水漂洗和减压下干燥，得到标题化合物(899mg，83％得率)。1H NMR δ6.25(d，2H)，7.53(m，3H)，7.83(d，1H)，7.95(m，2H)，8.26(s，1H)，12.57(br s，1H)。LCMS(ES，M+H＝232)。
(2E)-3-(2-苯基-1，3-噻唑-5-基)丙烯酰叠氮化物。于0℃，向(2E)-3-(2-苯基-1，3-噻唑-5-基)丙烯酸(899mg，3.89mmol)于15.0mL丙酮的溶液中，逐滴加入异丁基氯甲酸酯(0.661mL，5.05mmol)。于0℃搅拌得到的溶液1个小时，随后加入叠氮化钠(328mg，5.05mmol)于3.00mL水中的溶液。于0℃搅拌反应物30分钟，随后使反应物温热至rt并搅拌30分钟。加入水(50mL)至得到的溶液中。过滤黄色固体，随后用水洗涤，得到884mg(89％得率)的标题化合物。1H NMRδ6.40(d，1H)，7.55(m，3H)，7.99(m，2H)，8.06(s，1H)，8.40(s，1H)。2-苯基[1，3]噻唑并[4，5-c]吡啶-4(5H)-酮。于230℃，向苯基醚(3.60mL)和三丁胺(0.900mL)的溶液中逐滴加入于约5.00mL的CH2Cl2中的5-[(1E)-3-氧代-3-(215-三氮-1-烯-2-炔-1-基(triaz-1-en-2-yn-1-y1))丙-1-烯-1-基]-2-苯基-1，3-噻唑。于230℃搅拌混合物30分钟，随后使反应物冷却至rt，接着加入50mL己烷，得到黄色固体。用己烷洗涤得到的固体，减压下干燥得到标题化合物(84％得率)。1H NMRδ6.96(d，1H)，7.36(m，1H)，7.55(m，3H)，8.01(m，2H)，11.76(br s，1H)。
7-溴-2-苯基[1，3]噻唑并[4，5-c]吡啶-4(5H)-酮。向2-苯基[1，3]噻唑并[4，5-c]吡啶-4(5H)-酮(600mg，2.61mmol)于乙酸(8.00mL)的溶液中逐滴加入溴(0.144mL，2.81mmol)。将该反应混合物加热至回流30分钟。30分钟后，使溶液冷却至rt并加入40mL水。过滤残余的固体，用水漂洗并减压下干燥，得到标题化合物(728mg，90％得率)。1H NMR δ7.56(m，3H)，7.72(s，1H)，8.06(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝309)。4-氯-2-苯基[1，3]噻唑并[4，5-c]吡啶-7-腈。向7-溴-2-苯基[1，3]噻唑并[4，5-c]吡啶-4(5H)-酮(728mg，2.35mmol)于约10.0mL的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中加入氰化铜(I)(464mg，5.18mmol)。于回流下搅拌反应物10小时，随后冷却至rt。将氯化铁(III)的溶液(4.57g，28.2mmol)溶解于1.30mL的浓HCl中，然后加入7.30mL的水。于70℃搅拌该混合物15分钟，随后冷却至rt。加入水(40.0mL)并过滤固体并减压下干燥。用7.00mL的氧氯化磷处理得到的固体并回流4小时，随后使反应冷却至rt。真空去除溶剂。将残余物溶解于CH2Cl2，用饱和NaHCO3洗涤，有机层经MgSO4干燥，过滤和减压下浓缩。得到的固体经硅胶层析(100％CH2Cl2)纯化，得到标题化合物(189mg，30％得率)。1HNMRδ7.83-7.74(m，3H)，8.22(d，2H)，8.95(s，1H)。LCMS(ES，M-H＝272)。
(3S)-3-[(7-氰基-2-苯基[1，3]噻唑并[4，5-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。向4-氯-2-苯基[1，3]噻唑并[4，5-c]吡啶-7-腈(189mg，0.690mmol)的NMP(3.0mL)溶液中加入碳酸钾(229mg，1.66mmol)和(3S)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(691mg，3.45mmol)。将反应混合物加热至100℃直至LCMS指示反应完成。然后过滤反应混合物，得到粘性油，其经硅胶柱层析(100％己烷至100％EtOAc)纯化，浓缩至干，得到255mg的标题化合物(85％得率)。1H NMRδ1.35(s，9H)，1.96-1.69(m，4H)，2.90(m，2H)，4.07-3.66(m，2H)，4.16(m，1H)，7.61(m，3H)，7.96(br s，1H)，8.15(m，2H)，8.49(s，1H)。LCMS(ES，M+H＝436)。
2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基][1，3]噻唑并[4，5-c]吡啶-7-甲酰胺。向(3S)-3-[(7-氰基-2-苯基[1，3]噻唑并[4，5-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(255mg)中加入3.00mL的12N HCl。于rt下搅拌该浑浊溶液，通过LCMS监测反应完成情况。反应混合物冷却至0℃，用6 N NaOH逐滴处理直至达到pH 12。用EtOAc以及CH2Cl2/MeOH(1/1)提取混合物，有机层经硫酸镁干燥，过滤和真空下浓缩得到产物，其经制备型HPLC(5-95％MeCN，H2O，0.1％TFA)纯化得到100mg的标题化合物(48％得率)。1H NMRδ1.99-1.65(m，4H)，2.91-2.83(m，2H)，3.24(m，1H)，3.38(m，1H)，4.56(m，1H)，5.2-6.2(br s，2H)，7.47(m，3H)，7.65(d，1H)，8.12(m，2H)，8.67-8.61(重叠m和s，2H)。LCMS(ES，M+H＝354)。
以类似于实施例148的方式，采用适当的起始原料制备以下实施例149-155。
实施例156 2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]呋喃并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺(2E)-3-(5-苯基-2-呋喃基)丙烯酸。将5-苯基-2-呋喃基醛(2.82g，16.4mmol)用丙二酸(2.4g，23.0mmol)、吡啶(3ml)和哌啶(0.16ml)处理。于回流加热混合物6个小时，之后冷却至rt。然后边搅拌中将混合物倾入水(50ml)中。过滤得到的黄色固体，用水洗涤和空气干燥得到标题化合物(3.5g，99％)。1H NMRδ12.39(br s，1H)，7.83(d，2H)，7.47(t，2H)，7.38(t，2H)，7.13(d，1H)，7.05(d，1H)，6.33(d，1H)。LCMS(ES，M+H＝215)。
(2E)-3-(5-苯基-2-呋喃基)丙烯酰叠氮化物。于0℃，向(2E)-3-(5-苯基-2-呋喃基)丙烯酸(1.63g，7.6mmol)和Et3N(1.40ml，9.9mmol)于丙酮(20ml)的溶液中，逐滴加入ClCO2iBu(1.3ml，9.9mmol)。于0℃搅拌1h后，加入叠氮化钠(643mg，9.9mmol)的水(5ml)溶液，再于0℃搅拌得到的混合物30min，然后于rt下搅拌30min，然后加入水(100ml)。过滤得到黄色固体样标题化合物，其用水洗涤并风干(1.21g，67％)。1H NMRδ7.88(d，2H)，7.60(d，1H)，7.48(t，2H)，7.39(t，1H)，7.22(d，2H)，6.44(d，1H)。LCMS(ES，M+H＝240)。
2-苯基呋喃并[3，2-c]吡啶-4(5H)-酮。于230℃，向搅拌的苯基醚(36.4ml)和Bu3N(9.1ml)的混合物中逐滴加入(2E)-3-(5-苯基-2-呋喃基)丙烯酰叠氮化物(2.29g，9.56mmol)于CH2Cl2(18ml)的溶液。控制加液的速率，这样使内部温度保持高于190℃。加入后，将得到的棕色溶液搅拌30min，之后冷却至rt。加入己烷(90ml)并过滤黄色固体，用己烷洗涤和在空气中干燥，得到标题化合物(1.3g，64.5％)。1H NMRδ11.51(s，1H)，7.84(d，2H)，7.48(t，3H)，7.37(m，2H)，6.70(d，1H)。LCMS(ES，M+H＝212)。
7-溴-2-苯基呋喃并[3，2-c]吡啶-4(5H)-酮。于rt下，用溴(320mg，1.93mmol)处理2-苯基呋喃并[3，2-c]吡啶-4(5H)-酮(369mg，1.75mmol)于乙酸(5ml)的溶液并将得到的混合物于回流加热30min。冷却到rt后，加入水(20ml)至混合物中。形成的黄色固体经过滤，用水洗涤和在空气中干燥，得到直接用于下一步的标题化合物和6，7-二溴-2-苯基呋喃并[3，2-c]吡啶-4(5H)-酮化合物的混合物(2∶1，400mg，52％)。4-氧代-2-苯基-4，5-二氢呋喃并[3，2-c]吡啶-7-腈。将7-溴-2-苯基呋喃并[3，2-c]吡啶-4(5H)-酮(472mg，1.63mmol)和CuCN(320mg，3.58mmol)于DMF的混合物于回流下加热16小时，之后冷却至rt。然后加入FeCl3(3.32g，20mmol)于浓HCl(0.9ml)和水(5ml)的溶液，以分解该铜复合物。于70℃搅拌该混合物计15min，然后使其冷却至rt。加入水(35ml)，使形成的黄色固体过滤，用水洗涤和在空气中干燥。标题化合物和4-氧代-2-苯基-4，5-二氢呋喃并[3，2-c]吡啶-6，7-二腈的混合物无需纯化用于下一步。
4-氯-2-苯基呋喃并[3，2-c]吡啶-7-腈。用POCl3(5ml)处理粗品4-氧代-2-苯基-4，5-二氢呋喃并[3，2-c]吡啶-7-腈，将该混合物于回流下加热4个小时。减压下去除溶剂，使残余物在CH2Cl2和碳酸氢钠水溶液之间分配。分离有机相和经硫酸镁干燥。去除溶剂，随后经硅胶柱层析(洗脱液CH2Cl2和MeOH)得到白色固体样标题化合物(287 mg，两个步骤的得率69.7％)。1H NMRδ8.35(s，1H)，8.06(d，2H)，7.86(s，1H)，7.57(m，3H)。LCMS(ES，M+H＝254)。
(3S)-3-[(7-氰基-2-苯基呋喃并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。向4-氯-2-苯基呋喃并[3，2-c]吡啶-7-腈(287mg，1.13mmol)和碳酸钾(376mg，2.72mmol)于NMP(5ml)的混合物中，加入(3S)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.14g，5.67mmol)，于110℃搅拌得到的混合物16小时。然后冷却混合物并加入水(50ml)，过滤形成的沉淀物得到标题化合物(178mg)。
2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]呋喃并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。用浓HCl(5ml)处理(3S)-3-[(7-氰基-2-苯基呋喃并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(178mg)，且于rt下搅拌该混合物过夜。去除溶剂后，用制备型HPLC纯化残余物，得到作为三氟乙酸盐的标题化合物。将该盐溶解于MeOH(1ml)，然后用4 N HCl/二氧六环(2ml)填充。搅拌过夜后，过滤白色固体并风干得到标题化合物(53mg)。1H NMRδ9.14(br s，1H)，8.89(brs，1H)，8.34(s，1H)，7.91(d，2H)，7.85(s，1H)，7.67(s，2H)，7.55(t，2H)，7.45(t，1H)，4.47(m，1H)，3.19(m，2H)，2.96(m，2H)，2.03(m，2H)，1.72(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝337)。
实施例 157 2-甲基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺(2E)-3-(5-甲基-2-噻吩基)丙烯酸。向5-甲基噻吩-2-甲醛(13.1mL，120mmol)中加入丙二酸(17.5g，168mmol)、吡啶(22.0mL)和哌啶(118mL)。使得到的混合物加热至回流过夜，随后冷却至rt。然后将反应混合物倾入水(200mL)中并搅拌10分钟后，过滤得到的固体，用水漂洗并减压下干燥得到标题化合物(13.2g，66％得率)。1H NMRδ12.3(s，1H)，7.68(d，1H)，7.32(s，1H)，6.86(s，1H)，6.03(d，1H)，3.36(s，3H)。LCMS(ES，M+H＝169)。
(2E)-3-(5-甲基-2-噻吩基)丙烯酰叠氮化物。于0℃，向(2E)-3-(5-甲基-2-噻吩基)丙烯酸(13.2g，78.3mmol)的300mL丙酮的溶液中，逐滴加入氯甲酸异丁基酯(13.3mL，102mmol)。于0℃搅拌得到的溶液1个小时，随后加入叠氮化钠(6.63g，102mmol)的64.0mL的水溶液。然后于0℃搅拌反应物30分钟，随后使反应物温热至rt并再搅拌30分钟。向得到的溶液中加入水(500mL)。过滤黄色固体，用水洗涤，得到标题化合物(83％得率)。1H NMRδ7.85(d，1H)，7.47(s，1H)，6.91(s，1H)，6.14(d，1H)，3.32(s，3H)。
2-甲基噻吩并[3，2-c]吡啶-4(5H)-酮。于230℃，向苯基醚(149mL)和三丁胺(37.0mL)的溶液中逐滴加入于约5.00mL的CH2Cl2中的(2E)-3-(5-甲基-2-噻吩基)丙烯酰叠氮化物(7.60g，39.3mmol)。于230℃搅拌混合物30分钟，随后使反应冷却至rt，随后加入200mL己烷，得到黄色样固体。用己烷洗涤得到的固体并在减压下干燥得到标题化合物(4.84g，74％得率)。1H NMRδ 11.3(s，1H)，7.14(s，2H)，6.73(d，1H)，3.32(s，3H)。
7-溴-2-甲基噻吩并[3，2-c]吡啶-4(5H)-酮。向2-甲基噻吩并[3，2-c]吡啶-4(5H)-酮(4.84g，28.9mmol)于乙酸(84.0mL)的溶液中逐滴加入溴(1.64mL，31.8mmol)。将反应混合物加热至回流1个小时。1个小时后，将溶液冷却至rt，加入水直至形成固体。过滤残余的固体，用水漂洗和真空下干燥，得到标题化合物(6.01g，85％得率)。1H NMRδ11.7(br s，1H)，7.47(s，1H)，7.30(s，1H)，3.38(s，3H)。LCMS(ES，M+H＝245)。
4-氯-2-甲基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈。向7-溴-2-甲基噻吩并[3，2-c]吡啶-4(5H)-酮(2.76g，11.3mmol)的约24.0mL N，N-二甲基甲酰胺(DMF)的溶液中加入氰化铜(I)(2.22g，24.9mmol)。于回流下搅拌反应物10个小时，随后冷却至rt。然后加入溶于6.30mL的浓HCl和35.0mL的水中的氯化铁(III)溶液(11.0g，67.8mmol)。于70℃搅拌混合物15分钟，随后冷却至rt。加入水(192mL)并过滤固体并在减压下干燥。然后用34.0mL的氧氯化磷处理得到的固体和置于回流4个小时，随后反应冷却至rt。真空去除溶剂。将残余物溶解于CH2Cl2，用饱和NaHCO3洗涤，和有机层经MgSO4干燥，过滤和减压下浓缩得到标题化合物(943mg，40％得率)。1H NMRδ8.78(s，1H)，7.49(s，1H)，3.33(s，3H)。LCMS(ES，M+H＝209)。
(3S)-3-[(7-氰基-2-甲基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。向4-氯-2-甲基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(943mg，4.52mmol)的NMP(5.0mL)的溶液中加入碳酸钾(1.49g，10.8mmol)和(3S)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.72g，13.6mmol)。将反应混合物加热至130℃直至LCMS指示反应完成。将反应混合物冷却至rt和加入约100mL的水。过滤得到的固体和真空干燥，得到标题化合物。LCMS(ES，M+Na＝395)。2-甲基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。向含(3S)-3-[(7-氰基-2-甲基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的烧瓶中加入5.00mL的12N HCl。于rt下搅拌反应物混合物并用LCMS监测。每12小时再加入12N HCl，得到完全转化的所需产物。待转化完全时，用水稀释反应混合物和减压下浓缩得到产物，经硅胶层析(100％CH2Cl2至20％MeOH/CH2Cl2/3％NH4OH)纯化得到标题化合物。1HNMRδ8.42(s，1H)，7.81(br s，1H)，7.41(s，1H)，7.14(s，1H)，7.14(br s，1H)，6.96(d，1H)，4.11(m，1H)，3.31(s，3H)，3.14(m，2H)，2.82(m，2H)，1.94(m，1 H)，1.52(m，1H)，1.36(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝291)。
实施例158 2-(3-氟苯基)-7-[(3S)哌啶-3-基氨基]噻吩并[2，3-c]吡啶-4-甲酰胺(2Z)-3-氰基-3-(3-噻吩基)丙烯酸。向3-噻吩乙腈(166mmol)中加入乙醛酸(174mmol)、MeOH(332mL)和碳酸钾(174mmol)。将得到的混合物加热至回流3个小时，随后冷却至rt。过滤得到的固体，用MeOH漂洗并在真空烘箱中干燥，得到标题化合物(26.6g，90％得率)。LCMS(ES，M-H＝178)。
(2Z)-3-氰基-3-(3-噻吩基)丙烯酰氯。向草酰氯(27.3mL，313mmol)于CH2Cl2(57mL)的溶液中分部分加入(2Z)-3-氰基-3-(3-噻吩基)丙烯酸(26.6g，149mmol)。于rt下搅拌得到的溶液直至LCMS指示反应完全。然后过滤反应混合物并用CH2Cl2漂洗。收集滤液，减压下浓缩和真空下干燥，得到直接用于下一反应的黄色固体样标题化合物(18.5g，63％得率)。
(2Z)-3-氰基-3-(3-噻吩基)丙烯酰叠氮化物。于0℃，向叠氮化钠(12.2g，187mmol)于二氧六环/水(23mL)中的1∶1混合物的溶液中加入于33mL的二氧六环中的(2Z)-3-氰基-3-(3-噻吩基)丙烯酰氯(18.5g，93.5mmol)。于0℃搅拌反应物15分钟，随后使反应物温热至rt。约1.5个小时后，加入水(100mL)至反应并过滤得到的固体，并在真空烘箱中干燥，得到标题化合物(15.1g，82％得率)。1H NMRδ 8.24(s，1H)，7.76-7.71(m，2H)，7.25(s，1H)。LCMS(ES，M-H＝204)。
7-氧代-6，7-二氢噻吩并[2，3-c]吡啶-4-腈。于230℃，向苯基醚(224mL)和三丁胺(53.0mL)的溶液中逐滴加入于约10mL的CH2Cl2中的(2Z)-3-氰基-3-(3-噻吩基)丙烯酰叠氮化物。于230℃搅拌混合物30分钟，冷却至rt，随后加入500mL己烷，得到黄色样固体。用己烷洗涤得到的固体和真空下干燥，得到标题化合物(4.61 g，44％得率)。1H NMR δ12.4(br s，1H)，8.26(m，2H)，7.42(d，1H)。
2-溴-7-氧代-6，7-二氢噻吩并[2，3-c]吡啶-4-腈。向7-氧代-6，7-二氧噻吩并[2，3-c]吡啶-4-腈(2.30g，13.1mmol)于1/1乙酸/DMF(10mL)中的溶液中加入N-溴代琥珀酰亚胺(11.6g，65.3mmol)。将反应混合物加热至80℃计1小时。使溶液冷却至rt并用100mL的水稀释。然后用饱和的碳酸氢钠中和反应，随后过滤得到的固体，其在真空烘箱中干燥，得到标题化合物(3.20g，96％得率)。1H NMRδ12.7(br s，1H)，8.41(s，1H)，8.32(d，1H)。LCMS(ES，M+H＝256)。
2-溴-7-氯代噻吩并[2，3-c]吡啶-4-腈。向2-溴-7-氧代-6，7-二氢噻吩并[2，3-c]吡啶-4-腈(3.20g，12.5mmol)中加入45.0mL的氧氯化磷。使反应加热至回流过夜，之后LCMS指示反应完成。然后使反应冷却至rt和减压下去除挥发物。向得到的残余物中加入约200mL的水。过滤黑色固体并用大量的水漂洗和真空下干燥，得到标题化合物(2.80g，82％得率)。1H NMRδ8.97(s，1H)，8.71(s，1H)。
(3S)-3-[(2-溴-4-氰基噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。向2-溴-7-氯代噻吩并[2，3-c]吡啶-4-腈(2.80g，10.2mmol)的NMP(10.0mL)溶液中加入碳酸钾(4.23g，30.6mmol)和(3S)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(4.92g，24.6mmol)。将反应混合物加热至130℃直至LCMS指示反应完成。然后将反应混合物冷却至rt，加入约100mL的水。过滤得到的固体，真空干燥，得到标题化合物。1H NMRδ 8.47(s，1H)，8.35(s，1H)，7.90(br s，1H)，4.14(m，1H)，3.38(m，1H)，3.24(m，1H)，2.93(m，2H)，1.94-1.73(m，4H)，1.37(s，9H)。LCMS(ES，M+H＝33 8)。
(3S)-3-{[4-氰基-2-(3-氟苯基)噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯。向(3S)-3-[(2-溴-4-氰基噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(428mg，0.979mmol)中加入碳酸铯(957mg，2.94mmol)、3-氟苯基硼酸(206mg，1.47mmol)、Pd(PPh3)4(113mg，0.0979mmol)和二氧六环/水(4mL/2mL)。将该反应物加热至80℃1个小时，随后将反应冷却至rt，过滤并用硅胶层析(100％己烷至100％EtOAc)纯化，得到标题化合物(241mg，54％得率)。LCMS(ES，M+H＝453)。2-(3-氟苯基)-7-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[2，3-c]吡啶-4-甲酰胺。向含(3S)-3-{[4-氰基-2-(3-氟苯基)噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯的烧瓶中加入约2.00mL的PPA。于110℃搅拌反应物混合物12小时。用10.0mL的水稀释反应混合物并用6N NaOH调至碱性pH。然后用EtOAc(4×100mL)，随后用CH2Cl2/MeOH(1/1，4×100mL)提取混合物，经MgSO4干燥和减压下浓缩，得到产物，经硅胶层析(100％CH2Cl2至20％MeOH/CH2Cl2/3％NH4OH)纯化得到标题化合物。1H NMRδ 8.01(s，1H)，7.91(s，1H)，7.51(s，1H)，7.38(m，1H)，7.36(m，4H)，7.34(br s，1H)，6.80(m，1H)，4.21(m，1H)，3.15(m，2H)，2.87(m，2H)，1.92-1.46(m，4H)。LCMS(ES，M+H＝371)。
以类似的方式采用适当的起始原料制备以下实施例159。
实施例160 2-苯基-4-(哌啶-3-基氨基)-1H-吲哚-7-甲酰胺 2-氨基-4-硝基苯甲酸甲酯。向2-氨基-4-硝基苯甲酸(24g，0.132mol)的MeOH(500mL)溶液中缓慢加入亚硫酰氯(96mL)。将得到的溶液回流过夜。待冷却后，经过滤分离结晶的产物，在高真空下干燥(22.9g，88％)。1H NMRδ7.90(d，1H)7.67(d，1H)7.25(dd，1H)7.13(s，2H)3.84(s，3H)。
4-硝基-2-苯基-1H-吲哚-7-羧酸。向冷却至-15℃的2-氨基-4-硝基苯甲酸甲基酯(2.2g，11.2mmol)和苯乙酮(2.8g，23.3mmol)的DMSO(30mL)溶液中加入固体KOtBu(2.7g，24mmol)。搅拌20分钟后，然后于rt下再搅拌2h，用饱和NH4Cl(200mL)猝灭反应，然后于rt下再搅拌1h。过滤红色沉淀物，用水洗涤和高真空下干燥，得到标题化合物(2.85g，90％)。1H NMR δ12.05(s，1H)7.99(d，1H)7.89(d，2H)7.65(d，1H)7.50(t，2H) 7.44(s，1H)7.41(d，1H)7.30(br s，1H)。LCMS(ES，M-H＝281)。
4-硝基-2-苯基-1H-吲哚-7-甲酰胺。于-1 5℃，向4-硝基-2-苯基-1H-吲哚-7-羧酸(0.60g，2.1mmol)和N-甲基吗啉(2.3mmol)的CH2Cl2(20mL)的溶液中加入氯甲酸异丁基酯(0.5mL，3.8mmol)。搅拌1h后，向反应混合物中鼓泡通入NH3(g)10-15分钟，然后于rt下再搅拌1h。去除溶剂后，残余物经MPLC(SiO2；50-100％EtOAc/己烷)纯化，得到暗黄色固体样产物(0.50g，85％)。1H NMRδ11.72(s，1H)8.46(s，1H)8.11(d，1H)8.02(d，2H)7.92(s，1H)7.76(d，1H)7.50-7.57(m，3H)7.47(d，1H)。LCMS(ES，M+H＝282；M-H＝280)。
4-氨基-2-苯基-1H-吲哚-7-甲酰胺。向用氮-净化的、搅拌的、溶解于MeOH(30mL)的4-硝基-2-苯基-1H-吲哚-7-甲酰胺(0.50g，17.8mmol)溶液中加入10％Pd/C(30mg)。将得到的非均质性混合物添加H2(g)气球。于rt下搅拌过夜后，过滤反应物(0.45u，Teflon)。滤液经真空下浓缩得到亮黄色固体样标题化合物(0.35g，80％)。1H NMRδ10.90(s，1H)7.74(d，3H)7.53(q，4H)7.35(t，1H) 7.12(d，1H)6.22(d，1H)6.10(s，2H)。LCMS(ES，M+H＝252；M-H＝250)。
3-{[7-(氨基羰基)-2-苯基-1H-吲哚-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯。向溶解于AcOH(15mL)的4-氨基-2-苯基-1H-吲哚-7-甲酰胺(0.60g，2.4mmol)和3-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.6g，2.8mmol)的溶液中加入Na2SO4。将混合物于rt下搅拌1h，然后缓慢加入用三乙酰氧基硼氢化钠(1.5g，7.2mmol)。于rt下搅拌反应物1h。用EtOAc和水稀释该混合物，用饱和NaHCO3、1N HCl和饱和NaCl洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤和CIV。残余物经MPLC(SiO2；50-80％EtOAc/己烷)纯化得棕褐色固体标题产物(0.3g，30％)。LCMS(ES，M+H＝435；M-H＝433)。2-苯基-4-(哌啶-3-基氨基)-1H-吲哚-7-甲酰胺。将4.0N HCl的二氧六环(10mL)加入搅拌的3-{[7-(氨基羰基)-2-苯基-1H-吲哚-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.15g，0.35mmol)的MeOH(10mL)溶液中。于rt下搅拌反应物2h，然后真空下浓缩得到盐酸盐。用2.0N NH3的MeOH(10mL)溶液稀释残余物和CIV。残余物经MPLC(SiO2；10％MeOH/CH2Cl2/1.5％NH4OH-20％MeOH/CH2Cl2/3％NH4OH)纯化，得到灰白色固体样标题化合物(90mg，78％)。1H NMRδ10.87(s，1H)7.69(d，2H)7.57(d，1H)7.45(t，2H)7.28(t，1H)7.20(s，1H)6.96(br s，1H)6.15(d，1H)6.02(d，1H)3.50(d，1H)3.30(s，2H)3.05-3.20(m，2H)2.84(d，1H)2.34-2.46(m，1H)1.98(s，1H)1.60-1.72(m，1H)1.43-1.58(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝335；M-H＝333)。
通过与制备实施例158类似的方式，采用适当的起始原料制备以下实施例161-169。
经实施例160的手性制备型HPLC分离，制备以下实施例170-171。
经实施例166的手性制备型HPLC分离，制备以下实施例172-173。
经实施例161的手性制备型HPLC分离，制备以下实施例174-175。
经实施例162的手性制备型HPLC分离，制备以下实施例176-177。
实施例178 N-甲基-2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺4-{[(3S)-1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-羧酸。向(3S)-3-[(7-氰基-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.00克，4.60mmol)中加入6 N HCl(50mL)，将得到的溶液加热至回流过夜或直至LCMS指示完全转化为产物。然后将反应混合物冷却至rt，减压下浓缩并在真空烘箱中干燥24小时得到标题化合物。LCMS(ES，M+H＝3 54)。
(3S)-3-({7-[(甲基氨基)羰基]-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基}氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。将4-{[(3S)-1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-羧酸加入含HATU(81.0mg，0.213mmol)、甲基胺(2 M的THF，0.200mL，0.426mmol)、DIPEA(0.037mL，0.213mmol)和DMF(1.0mL)的圆底烧瓶中。于rt下搅拌反应物12小时，随后用饱和NH4Cl溶液(2×20mL)洗涤反应混合物，用EtOAc(2×20mL)提取。合并有机层，经硫酸镁干燥、过滤并在减压下浓缩。用MPLC(SiO2；100％己烷至100％EtOAc)纯化混合物，得到标题化合物。LCMS(ES，M+H＝467)。
N-甲基-2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。向(3S)-3-({7-[(甲基氨基)羰基]-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基}氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯中加入4 N HCl的二氧六环溶液(5.0mL)，于rt下搅拌反应物20分钟，随后减压浓缩反应物，得到标题化合物。1H NMR δ8.93(m，1H)，8.77(m，1H)，8.49(m，2H)，8.28(m，1H)，7.73(d，2H)，7.50(m，2H)，7.38(m，1H)，4.54(m，1H)，3.21(m，2H)，2.92(m，2H)，2.83(d，3H)，2.00(m，2H)，1.72(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝367)。
以类似的方式合成实施例179。
实施例180 2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-N-吡嗪-2-基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 4-{[(3S)-1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-羧酸。向(3S)-3-[(7-氰基-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.00克，4.60mmol)中加入6N HCl(50mL)，得到的溶液加热至回流过夜或直至LCMS指示完全转化为产物。然后将该反应物冷却至rt，减压下浓缩并在真空烘箱中干燥24小时，得到标题化合物。LCMS(ES，M+H＝354)。
(3S)-3-({2-苯基-7-[(吡嗪-2-基氨基)羰基]噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基}氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。于0℃，向含氨基吡嗪(113mg，1.19mmol)的甲苯(1.0mL)溶液的圆底烧瓶中加入三甲基铝(2.0M在己烷中，0.600mL，1.19mmol)。于rt下搅拌该溶液30分钟，然后将其加入含4-{[(3S)-1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-羧酸(108mg，0.238mmol)、HATU(136mg，0.358mmol)、DIPEA(0.064mL，0.358mmol)和DMF(1.0mL)的圆底烧瓶中。于100℃搅拌反应物12小时，随后用饱和NH4Cl溶液(2×20mL)洗涤反应混合物并用EtOAc(2×20mL)提取。合并有机层，经硫酸镁干燥、过滤并在减压下浓缩，混合物经制备型HPLC(5％至95％MeCN/水/0.1％TFA)纯化得到标题化合物。LCMS(ES，M+H＝531)。
2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-N-吡嗪-2-基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。向(3S)-3-({2-苯基-7-[(吡嗪-2-基氨基)羰基]噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基}氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯中加入4 N HCl的二氧六环溶液(5.0mL)，于rt下搅拌反应物20分钟，随后减压下浓缩反应物，得到标题化合物。1H NMRδ11.12(s，1H)，9.44(s，1H)，8.94(s，1H)，8.80(br s，1H)，8.48(s，1H)，8.42(s，1H)，8.34(s，1H)，7.88(m，1H)，7.76(m，2H)，7.52(m，2H)，7.40(m，1H)，4.61(m，1H)，3.24(m，2H)，2.94(m，2H)，2.02(m，2H)，1.75(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝431)。实施例181 4-{[2-(羟基甲基)哌啶-3-基]氧基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)吡啶-3-醇。向2-(羟基甲基)吡啶-3-醇(14.86g，91.96mmol)于150mL THF中加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯(15.2g，101mmol)和N，N-二甲基氨基吡啶(20.0g，101mmol)。于rt下搅拌反应物4个小时，随后用EtOAc(3×100mL)提取反应物并用水洗涤。合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并在减压下浓缩，经MPLC(SiO2；100％己烷至100％EtOAc)纯化后得到白色固体样标题化合物。LCMS(ES，M+H＝240)。
2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)哌啶-3-醇。于氮气氛下，向含2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)吡啶-3-醇(4.00g，16.7mmol)的高压容器中加入各10mL的EtOH和水，随后加入氧化铂(IV)(1.00g)。减压下抽空高压容器并置于50psi帕尔氢化器中24小时。然后于氮气氛下抽出混合物，经硅藻土垫过滤并用大量MeOH漂洗。真空下浓缩收集的滤液，得到作为异构体的混合物的标题化合物(约10％的次要非对映异构体)。LCMS(ES，M+H＝246)。
2-溴-4-{[2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)哌啶-3-基]氧基}噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈。向溶解于3.0mL THF的2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)哌啶-3-醇(295mg，1.20mmol)中加入氢化钠(30.0mg，1.20mmol)，将得到的混合物于rt下搅拌20分钟。然后加入2-溴-4-氯代噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(293mg，1.07mmol)于3.0mL THF中的浆液，并于rt下搅拌反应物1个小时。用碳酸氢钠(10mL)稀释并用EtOAc(2×20mL)提取得到的混合物。合并有机层，经硫酸镁干燥、过滤并在减压下浓缩，得到标题化合物。LCMS(ES，M+H＝483)。
4-{[2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)哌啶-3-基]氧基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈。向2-溴-4-{[2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)哌啶-3-基]氧基}噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(516mg，1.07mmol)中加入苯基硼酸(194mg，1.61mmol)、碳酸铯(1.04g，3.21mmol)、二氧六环/水(4 mL/2 mL)，然后加入Pd(PPh3)4(1 24mg，0.107mmol)。将该反应物加热至80℃计1个小时，随后使反应冷却至rt，过滤并用MPLC(SiO2，100％己烷至100％EtOAc)纯化，得到标题化合物。LCMS(ES，M+H＝480)。
4-{[2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)哌啶-3-基]氧基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。向含4-{[2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)哌啶-3-基]氧基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈的烧瓶中加入5.00mL的12N HCl。于rt下搅拌反应物混合物并用LCMS监测。每12小时再加入12N HCl，得到完全转化的所需产物。待转化完全时，用MeOH稀释反应混合物和减压下浓缩得到产物，其经MPLC(SiO2，100％CH2Cl2至20％MeOH/CH2Cl2/3％NH4OH)纯化，得到作为异构体的混合物的标题化合物(约10％的次要非对映异构体)。提供存在于混合物中的主要异构体的分析数据1H NMRδ9.31(m，1H)，8.93(m，1H)，8.64(s，1H)，8.44(s，1H)，8.27(m，1H)，7.84(d，2H)，7.69(m，1H)，7.46(m，3H)，5.70(m，1H)，3.68(m，2H)，3.54(m，1H)，3.34(m，1H)，3.06(m，1H)，2.17(m，1H)，1.85(m，2H)，1.67(m，1H)。LCMS(ES，M+H＝384)。实施例182 4-{[2-(羟基甲基)哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 2-(甲氧基羰基)烟酸。向呋喃并[3，4-b]吡啶-5，7-二酮(41.0g，275mmol)中加入200mL的MeOH。将该反应物加热至回流约1个小时，随后真空浓缩得到作为异构体的混合物标题化合物和3-(甲氧基羰基)吡啶-2-羧酸(分别为2.3∶1)。LCMS(ES，M+H＝182)。
3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]吡啶-2-羧酸甲酯。向2-(甲氧基羰基)烟酸和3-(甲氧基羰基)吡啶-2-羧酸(10.46g，57.7mmol)的混合物中加入叔-丁醇(100mL)和TEA(8.85mL，63.5mmol)。于rt下搅拌反应物5分钟，然后加入二苯基磷酰基叠氮化物(13.1mL，60.6mmol)。将该反应物加热至回流并搅拌约4个小时。将反应混合物冷却至rt，浓缩至干燥，再溶解于EtOAc并用水和饱和的碳酸氢钠(各为2×20mL)洗涤。合并有机层，经硫酸镁干燥、过滤并在减压下浓缩。混合物经柱层析纯化(100％己烷至100％EtOAc)，得到标题化合物和2-[(叔-丁氧基羰基)氨基]烟酸甲基酯(9.24g，64％得率)。LCMS(ES，M+Na＝275)。[2-(羟基甲基)吡啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯。向3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]吡啶-2-羧酸甲酯和2-[(叔-丁氧基羰基)氨基]烟酸甲酯(5.00g，19.8mmol)中加入THF/MeOH(30mL/3mL)，使反应冷却至0℃，随后加入硼氢化钠(1.49g，39.6mmol)。将反应温热至rt并搅拌4个小时。然后将反应混合物溶解于EtOAc中并用饱和的碳酸氢钠溶液洗涤。合并有机层，经硫酸镁干燥、过滤并在减压下浓缩，经制备型HPLC(5-95％MeCN/水/0.1％TFA)分离，得到标题化合物和[3-(羟基甲基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯。所需的异构体经1D NOE NMR实验证实。1H NMRδ8.78(br s，1H)，8.17(m，1H)，8.10(d，1H)，7.27(dd，1H)，4.64(s，2H)，1.46(s，9H)。LCMS(ES，M+H＝225)。
[2-(羟基甲基)哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯。氮气氛下，向含[2-(羟基甲基)吡啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(1.46g，6.51mmol)的高压容器中加入各5mL的EtOH和水，随后加入氧化铂(IV)(500mg)。减压下抽空高压容器并置于50psi帕尔氢化器中24小时。然后于氮气氛下抽出混合物，经硅藻土垫过滤并用大量MeOH漂洗。真空下浓缩收集的滤液，得到作为异构体的混合物的标题化合物。MS m/z 231(M+H)。
3-氨基-2-(羟基甲基)哌啶-1-羧酸苄酯。向圆底烧瓶中加入[2-(羟基甲基)哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(785mg，3.41mmol)，DIPEA(0.653mL，3.75mmol)和CH2Cl2(10mL)。将烧瓶冷却至0℃，加入氯代碳酸苄基酯(benzyl chloridocarbonate)(0.504mL，3.58mmol)。将反应物温热至rt并搅拌12小时，随后用CH2Cl2和EtOAc提取该混合物并用饱和碳酸氢钠洗涤。合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并在减压下浓缩。残余物经MPLC(SiO2；100％己烷至100％EtOAc至20％MeOH/CH2Cl2)纯化和直接用4N HCl的二氧六环溶液(5mL)处理30分钟。减压下浓缩反应混合物，得到标题化合物。LCMS(ES，M+H＝265)。
3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]-2-(羟基甲基)哌啶-1-羧酸苄酯。向含3-氨基-2-(羟基甲基)哌啶-1-羧酸苄酯(246mg，0.932mmol)的圆底烧瓶中加入2-溴-4-氯代噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(128mg，0.466mmol)、碳酸钾(100mg，0.700mmol)和NMP(5.0mL)。将反应混合物加热至80℃，每小时用LCMS监测反应完成，随后将混合物冷却至rt。加入水(50mL)并过滤得到的固体，在减压下干燥12小时得到标题化合物。LCMS(ES，M+H＝502)。
3-[(7-氰基-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]-2-(羟基甲基)哌啶-1-羧酸苄酯。向3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]-2-(羟基甲基)哌啶-1-羧酸苄酯(0.466mmol)中加入苯基硼酸(0.699mmol)、碳酸铯(0.932mmol)、二氧六环/水(2.0mL/1.0mL)，然后加入Pd(PPh3)4(0.0466mmol)。将反应物加热至80℃计1个小时，随后将反应冷却至rt，过滤并用MPLC(SiO2；100％己烷至100％EtOAc)纯化得到标题化合物。LCMS(ES，M+H＝499)。
4-{[2-(羟基甲基)哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。向含3-[(7-氰基-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]-2-(羟基甲基)哌啶-1-羧酸苄酯的烧瓶中加入5.00mL的12N HCl。于rt下搅拌反应物混合物并用LCMS监测。每12小时再加入12N HCl，得到完全转化的所需产物。待转化完全时，用MeOH稀释反应混合物，在减压下浓缩得到产物，其经制备型HPLC(5-95％MeCN/水/0.1％TFA)纯化，得到作为异构体的混合物的标题化合物(大约比例为1/1)。1H NMRδ9.95(m，1H)，9.21(m，1H)，8.98(m，1H)，8.70(m，1H)，8.51(m，1H)，8.38(m，1H)，8.15(m，1H)，7.77(m，2H)，7.44(m，3H)，4.88(m，1H)，3.76(m，1H)，3.28(m，2H)，2.96(m，2H)，2.10(m，2H)，1.87(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝383)。
实施例183 2-苯基-7-[(3S)-哌啶-3-基氧基]-1H-苯并咪唑-4-甲酰胺 4-氟-3-硝基苯甲酰胺。向4-氟-3-硝基苯甲酸(12.0g，64.8mmol)中逐滴加入CH2Cl2(300mL)、草酰氯(16.7mL，195mmol)和约0.100mL DMF。于rt下搅拌该混合物3个小时，随后将反应冷却至-78℃和向溶液中鼓泡通入液体NH3约20分钟。得到的黄色固体经MPLC(SiO2；100％己烷至100％EtOAc)纯化，得到标题化合物(9.00g，76％得率)。LCMS(ES，M-H＝183)。
(3S)-3-[4-(氨基羰基)-2-硝基苯氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。向含有溶解于5.00mL的DMF的(3S)-3-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.97g，19.7mmol)的溶液中加入氢化钠(473mg，19.7mmol)。于rt下搅拌所得到的溶液30分钟，随后加入溶解于5.00mL DMF的4-氟-3-硝基苯甲酸(3.29g，17.9mmol)。于rt下搅拌该混合物12小时或直至LCMS指示完全转化为产物。然后向反应混合物中加入20mL水，过滤所得到的固体并在减压下干燥，得到标题化合物(4.15g，63％得率)。LCMS(ES，M+H＝366)。(3S)-3-[2-氨基-4-(氨基羰基)苯氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。
向溶解于50mL MeOH的(3S)-3-[4-(氨基羰基)-2-硝基苯氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(4.15g，11.4mmol)的溶液中加入10％Pd/C(800mg)。向得到的混合物中充填氢12小时或直至LCMS指示完全转化为产物。经硅藻土过滤混合物并用大量MeOH漂洗，经MPLC(SiO2；100％己烷至100％EtOAc至20％MeOH/CH2Cl2)纯化后得到所需的产物。LCMS(ES，M+H＝336)。
(3S)-3-(4-(氨基羰基)-2{[亚氨基(苯基)甲基]氨基}苯氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。于0℃，将三甲基铝(2M在己烷中，17.9mL，35.8mmol)加入(3S)-3-[2-氨基-4-(氨基羰基)苯氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.20g，3.58mmol)的20mL THF的溶液中。将该混合物温热至rt并搅拌1个小时，随后加入苄腈(3.66mL，35.8mmol)的10mL THF溶液。于60℃搅拌溶液直至LCMS指示起始原料完全消耗。将混合物冷却至0℃。逐滴加入10％四水合酒石酸钾钠溶液(约20mL)。用EtOAc(4×20mL)提取混合物，有机层经硫酸镁干燥，过滤和真空下浓缩得到一物质，经MPLC(SiO2；CH2Cl2至20％MeOH/CH2Cl2)纯化，得到标题化合物(464mg，30％得率)。LCMS(ES，M+H＝439)。
(3S)-3-{[4-(氨基羰基)-2-苯基-1H-苯并咪唑-7-基]氧基}哌啶-1-羧酸叔丁酯。向溶解于各3.0mL MeOH和水的(3S)-3-(4-(氨基羰基)-2-{[亚氨基(苯基)甲基]氨基}苯氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯溶液中，逐滴加入次氯酸钠(0.100mL，1.17mmol)。于rt下搅拌所得到的溶液5分钟，随后加入碳酸钠(148mg)的3.0mL水溶液。然后将溶液加热至回流并用LCMS监测反应完成。待起始原料一消耗，将该混合物冷却至rt，用EtOAc和CH2Cl2/MeOH(1/1)提取，有机层经硫酸镁干燥、过滤并在减压下浓缩。得到的混合物经MPLC(SiO2；100％CH2Cl2至20％MeOH/CH2Cl2)纯化，得到标题化合物。LCMS(ES，M+H＝437)。
2-苯基-7-[(3S)-哌啶-3-基氧基]-1H-苯并咪唑-4-甲酰胺。向(3S)-3-{[4-(氨基羰基)-2-苯基-1H-苯并咪唑-7-基]氧基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(18.7mg，0.043mmol)中加入5.0mL的4.0N HCl的二氧六环溶液。于rt下搅拌反应物约30分钟，真空减压下浓缩，高真空下干燥，得到标题化合物。1H NMRδ9.60(m，1H)，9.10(m，2H)，8.48(s，2H)，7.98(m，1H)，7.85(m，1H)，7.63(m，3H)，7.03(d，1H)，5.16(m，1H)，4.13(m，1H)，3.69(m，1H)，3.46(m，1H)，3.27(m，1H)，2.00(m，2H)，1.79(m，1H)，1.62(m，1H)。LCMS(ES，M+H＝337)。
实施例184 2-{4-[4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基]苯基}-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 1-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂戊环-2-基)苯基]哌嗪。向4-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂戊环-2-基)苯基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(235mg，0.656mmol)中加入5.0mL的4N HCl的二氧六环溶液，于rt下搅拌得到的溶液2个小时，随后减压下浓缩该溶液，得到白色固体样标题化合物。1H NMRδ9.14(br s，1H)，7.54(d，2H)，6.96(d，2H)，3.43(m，4H)，3.18(m，4H)，1.25(s，12H)。
(3S)-3-{[7-氰基-2-(4-哌嗪-1-基苯基)噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯。向1-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂戊环-2-基)苯基]哌嗪(58.0mg，0.225mmol)中加入(3S)-3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(361mg，0.826mmol)、碳酸铯(806mg，2.48mmol)、Pd(PPh3)4(95.4mg，0.0826mmol)和二氧六环/水(2.0mL/1.0mL)。于80℃搅拌反应物30分钟、冷却至rt，过滤，用大量EtOAc漂洗，经硫酸镁干燥和减压下浓缩。用MPLC(SiO2；100％CH2Cl2至20％CH3OH/CH2Cl2/3％NH4OH)纯化混合物得到标题化合物。LCMS(ES，M+H＝519)。
(3S)-3-[(7-氰基-2-{4-[4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基]苯基}噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。向溶解于5.0mL THF的(3S)-3-{[7-氰基-2-(4-哌嗪-1-基苯基)噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(74.0mg，0.143mmol)中逐滴加入TEA(0.0239mL，0.172mmol)，然后逐滴加入甲烷磺酰氯(0.0133mL，0.172mmol)。于rt下搅拌反应物约1个小时，随后用饱和的碳酸氢钠溶液(2×20mL)洗涤并用EtOAc(2×20mL)提取反应混合物。有机层经硫酸镁干燥、过滤并在减压下浓缩，用MPLC(SiO2；100％CH2Cl2至20％CH3OH/CH2Cl2/3％NH4OH)纯化后得到标题化合物。LCMS(ES，M+H＝597)。
2-{4-[4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基]苯基}-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。向(3S)-3-[(7-氰基-2-{4-[4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基]苯基}噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯中加入约5mL 12N HCl和于rt下搅拌所得到的溶液12小时或直至LCMS指示完全转化为所需的产物。用MeOH稀释得到的反应混合物，减压下浓缩并用MPLC(SiO2；100％CH2Cl2至20％CH3OH/CH2Cl2/3％NH4OH)纯化，得到标题化合物。1H NMRδ9.40(m，1H)，8.87(m，1H)，8.48(s，2H)，8.31(m，2H)，7.66(d，2H)，7.12(d，2H)，4.53(m，1H)，3.38(m，5H)，3.25(m，5H)，3.03(m，2H)，2.94(s，3H)，2.01(m，2H)，1.78(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝515)。
以类似的方式，采用适当的起始原料制备实施例185-189。
实施例190 4-[(4-羟基哌啶-3-基)氨基]-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 以与实施例1类似的方式，但使用反式-3-氨基-4-羟基哌啶-1-羧酸苄酯(按在J.Med.Chem.1997，40，226中描述合成)作为步骤7中的起始原料制备。1H NMRδ9.29(m，1H)，8.85(m，1H)，8.60(m，1H)，8.51(s，1H)，8.19(m，1H)，7.77(d，2H)，7.56(m，1H)，7.50(dd，2H)，7.40(dd，1H)，4.42(m，1H)，4.0-4.3(br s，1H)，3.88(m，1H)，3.51(m，1H)，3.27(m，1H)，3.05(m，2H)，2.16(m，1H)，1.73(m，1H)。LCMS(ES，M+H＝369)。
以类似的方式制备实施例191。
实施例192 4-[(3-羟基哌啶-4-基)氨基]-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 以与实施例1类似的方式，但使用反式-4-氨基-3-羟基哌啶-1-羧酸苄酯(按在J.Med.Chem.1997，40，226中描述合成)作为步骤7中的起始原料制备。1H NMR δ 8.85(m，1H)，8.73(m，1H)，8.48(s，1H)，8.36(br，1H)，8.08(m，1H)，7.75(d，2H)，7.55(br，1H)，7.51(t，2H)，7.40(t，1H)，5.74(br，1H)，4.33(m，1H)，3.93(m，1H)，3.38(m，2H)，3.04(m，1H)，2.86(m，1H)，2.27-2.16(m，1H)，1.90-1.67(m，1H)。LCMS(ES，M+H＝369)。
以与实施例192类似的方式制备实施例193。
以与实施例58类似的方式，采用适当的起始原料制备实施例194-195。
以与实施例69-70类似的方式，采用适当的起始原料制备实施例196-197。

权利要求
1.一种式(I)化合物或其药学上可接受的盐，
其中
A和D各自独立选自N、CH、S、O和NR4；
L选自NR5、O和S；
X和Y各自独立选自N和CH；
R1选自氰基、卤代；C1-6烷基、-NR11R12、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂环基、OR6；-CO碳环基、-CO杂环基、-CO(C1-6烷基)、-CONR28R29、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳环基、-S(O)x杂环基、S(O)yNR28R29和-(C1-6烷基)S(O)yNR28R29，其中x独立为0-2和y独立为1或2；和其中R1可在一个或多个碳原子上被一个或多个R9任选取代；和其中如果杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R10的基团任选取代；
R2选自(C1-3烷基)NR7R8、含至少一个氮原子的4-至7-元杂环、-CO碳环基、-CO杂环基、-CO(C1-6烷基)、-CONR28R29、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳环基、-CO2杂环基、-CO2NR28R29、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x环烷基、-S(O)x环烯基、-S(O)x杂环基、S(O)yNR28R29和-(C1-6烷基)S(O)yNR28R29其中x独立为0-2和y独立为1或2和其中R2可在一个或多个碳原子上被一个或多个R13任选取代；和其中如果杂环基还含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R14的基团任选取代；
R3选自H、苄基、C1-6烷基、环烷基、环烯基、芳基、杂环基、OR6、CHO、-CO碳环基、-CO(C1-6烷基)、-CONR28R29、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳环基、-S(O)x杂环基、S(O)yNR28R29和-(C1-6烷基)S(O)yNR28R29，其中x独立为0-2，y独立为1或2和其中R3可在一个或多个碳原子上被一个或多个R15任选取代；和其中如果杂环基含-NH-部分，则所述氮可被选自R16的基团任选取代；
R4选自H、C1-3烷基、环丙基和CF3；
R5选自H、C1-6烷基、环烷基、环烯基、杂环基和OR6；其中R5可在碳上被一个或多个R17任选取代；和其中如果所述杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R18的基团任选取代；
R6选自H、C1-6烷基、环烷基、环烯基、芳基和杂环基；其中R6可在碳上被一个或多个R19任选取代；和其中如果所述杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R24的基团任选取代；
R7和R8独立选自H、C1-6烷基、环烷基、环烯基、芳基和杂环基；其中R7和R8各自独立地可在碳上被一个或多个R20任选取代；和其中如果所述杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R21的基团任选取代；
R11和R12独立选自H、C1-6烷基、环烷基、环烯基、芳基、杂环基，其中R11和R12各自独立地可在碳上被一个或多个R32任选取代；和其中如果所述杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R33的基团任选取代；
R9、R13、R15、R17、R19、R20、R32和R34各自独立选自卤代、硝基、-NR28R29、氰基、异氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、环烷基、环烯基、杂环基、羟基、酮基(＝O)、-O(C1-6烷基)、-O碳环基、-O杂环基、-O芳基、-OC(O)C1-6烷基、-NHCHO、-N(C1-6烷基)CHO、-NHCONR28R29、-N(C1-6烷基)CONR28R29、-NHCO(C1-6烷基)、-NHCO碳环基、-NHCO(杂环基)、-NHCO2(C1-6烷基)；-NHCO2H、-N(C1-6烷基)CO(C1-6烷基)、-NHSO2(C1-6烷基)、羧基、-脒基、-CHO、-CONR28R29、-CO(C1-6烷基)、-CO杂环基、-CO环烷基、-CO环烯基、-CO芳基、-CO2H、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳环基、-CO2杂环基、-OC(O)(NR28R29)、巯基、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳环基、-S(O)x杂环基和-S(O)xNR28R29；其中x独立为0-2，其中R9、R13、R15、R17、R19、R20、R32和R34各自独立地可在碳上被一个或多个R22任选取代和其中如果杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R23的基团任选取代；
R10、R14、R16、R18、R21、R24、R33和R35各自独立选自氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、环烷基、环烯基、杂环基、羟基、-O(C1-6烷基)、-O碳环基、-脒基、-CHO、-CONR28R29、-CO(C1-6烷基)、-CO杂环基、-CO碳环基-CO芳基、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳环基、-CO2杂环基、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳环基、-S(O)x杂环基和-S(O)yNR28R29；其中x独立为0-2和y独立为1或2；其中R10、R14、R16、R18、R21、R24、R33和R35各自独立地可在碳上被一个或多个R25任选取代和其中如果所述杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R26的基团任选取代；
R22和R25各自独立选自卤代、硝基、-NR28R29、氰基、异氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、环烷基、环烯基、杂环基、羟基、酮基(＝O)、-O(C1-6烷基)、-O碳环基、-O杂环基、-O芳基、-OC(O)C1-6烷基、-NHCHO、-N(C 1-6烷基)CHO、-NHCONR28R29、-N(C1-6烷基)CONR28R29、-NHCO(C1-6烷基)、-NHCO碳环基、-NHCO(杂环基)、-NHCO2(C1-6烷基)；-NHCO2H、-N(C1-6烷基)CO(C1-6烷基)、-NHSO2(C1-6烷基)、羧基、-脒基、-CHO、-CONR28R29、-CO(C1-6烷基)、-CO杂环基、-CO环烷基、-CO环烯基、-CO2H、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳环基、-OC(O)(NR28R29)、巯基、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳环基、-S(O)x杂环基和-S(O)xNR28R29；其中x独立为0-2，其中R22和R25可在碳上被一个或多个R36任选取代和其中如果所述杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R27的基团任选取代；
R23和R26各自独立选自氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、环烷基、环烯基、杂环基、羟基、-O(C1-6烷基)、-O碳环基、-脒基、-CHO、-CONR28R29、-CO(C1-6烷基)、-CO杂环基、-CO环烷基、-CO环烯基、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳环基、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳环基、-S(O)x杂环基和-S(O)yNR28R29；其中x独立为0-2和y独立为1或2；其中R23和R26各自独立地可在碳上被一个或多个R30任选取代和其中如果所述杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R31的基团任选取代；
R28和R29各自独立选自H、氨基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、环烷基、环烯基、杂环基、羟基、-O(C1-6烷基)、-O芳基、-OCO烷基、-脒基、-CHO、-CO(C1-6烷基)、-CO杂环基、-CO环烷基、-CO环烯基、-SO(C1-6烷基)、-SO2(C1-6烷基)、其中R28和R29各自独立地可在碳上被一个或多个R34任选取代；和其中如果所述杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R35的基团任选取代；
R30和R36各自独立选自卤代、硝基、-NR28R29、氰基、异氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、环烷基、环烯基、杂环基、羟基、酮基(＝O)、-O(C1-6烷基)、-O碳环基、-OC(O)C1-6烷基、-NHCHO、-N(C1-6烷基)CHO、-NHCONR28R29、-N(C1-6烷基)CONR28R29、-NHCO(C1-6烷基)、-NHCO碳环基、-NHCO(杂环基)、-NHCO2(C1-6烷基)；-NHCO2H、-N(C1-6烷基)CO(C1-6烷基)、-NHSO2(C1-6烷基)、羧基、-脒基、-CHO、-CONR28R29、-CO(C1-6烷基)、-CO杂环基、-CO环烷基、-CO环烯基、-CO2H、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳环基、-OC(O)(NR28R29)、巯基、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳环基、-S(O)x杂环基和-S(O)xNR28R29；其中x独立为O-2；
R27和R31各自独立选自氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、环烷基、环烯基、杂环基、羟基、-O(C1-6烷基)、-O碳环基、-(C1-6烷基)-O-(C1-6烷基)、-脒基、-CHO、-CONR28R29、-CO(C1-6烷基)、-CO杂环基、-CO环烷基、-CO环烯基、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳环基、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳环基、-S(O)x杂环基和-S(O)yNR28R29；其中x独立为0-2和y独立为1或2。
2.依据权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2选自(C1-3烷基)NR7R8和含至少一个氮原子的4-至7-元杂环，其中R2可在一个或多个碳原子上被一个或多个R13任选取代；和其中如果杂环基还含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R14的基团任选取代。
3.依据权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2为含至少一个氮原子的4-至7-元杂环，其中R2可在一个或多个碳原子上被一个或多个R13任选取代；和其中如果杂环基还含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R14的基团任选取代。
4.依据权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1选自芳基和杂环基和其中R1可在一个或多个碳原子上被一个或多个R9任选取代；和其中如果杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R10的基团任选取代。
5.依据权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3为H。
6.依据权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中X为N；Y为CH；A为CH和D为S。
7.依据权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中X为CH；Y为CH；A为CH和D为NR4。
8.依据权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中L为NR5。
9.依据权利要求1的式I化合物或其药学上可接受的盐，其中
A为CH；
D为S；
L为NR5；
X为N；
Y为CH；
R1选自C1-6烷基、芳基和杂环基，其中R1可在一个或多个碳原子上被一个或多个R9任选取代；和其中如果杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R10的基团任选取代；
R2为含至少一个氮原子的4-至7-元杂环，其中R2可在一个或多个碳原子上被一个或多个R13任选取代；和其中如果杂环基还含有-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R14的基团任选取代；
R3为H；
R5为H或C1-3烷基。
10.依据权利要求1的式I化合物或其药学上可接受的盐，其中
A为CH；
D为NR4；
L为NR5；
X为CH；
Y为CH；
R1选自C1-6烷基、芳基和杂环基，其中R1可在一个或多个碳原子上被一个或多个R9任选取代；和其中如果杂环基含-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R10的基团任选取代；
R2为含至少一个氮原子的4-至7-元杂环，其中R2可在一个或多个碳原子上被一个或多个R13任选取代；和其中如果杂环基还含有-NH-部分，则所述部分的氮可被选自R14的基团任选取代；
R3为H；
R4为H、C1-3烷基、环丙基和CF3；
R5为H或C1-3烷基。
11.依据权利要求1的式I化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物选自
1) 2-苯基-4-[(3 S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
2) 4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-2-(3-噻吩基)噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
3) 2-(3-氟苯基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
4) 4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-2-(2-噻吩基)噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰 胺；
5) 2-(4-氟苯基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
6) 2-(3，4-二氟苯基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
7) 2-(1-苄基-1H-吡唑-4-基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
8) 4-{甲基[(3S)-哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
9) 2-(3-氟苯基)-4-{甲基[(3S)-哌啶-3-基]氨基}噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
10) 2-(4-氟苯基)-4-{甲基[(3S)-哌啶-3-基]氨基}噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
11) 4-{甲基[(3S)-哌啶-3-基]氨基}-2-(3-噻吩基)噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
12) 4-{[反式-2-甲基哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
13) 2-(3-氟苯基)-4-{[反式-2-甲基哌啶-3-基]氨基}噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
14) 4-{[反式-2-甲基哌啶-3-基]氨基}-2-(3-噻吩基)噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
15) 2-(4-氟苯基)-4-{[反式-2-甲基哌啶-3-基]氨基}噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
16) 4-{[(2R，3S)-2-甲基哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
17) 4-{[(2R，3S)-2-甲基哌啶-3-基]氨基}-2-(3-噻吩基)噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
18) 4-{甲基[反式-2-甲基哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
19) 4-[(2，6-二甲基哌啶-3-基)氨基]-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
20) 4-[(2，6-二甲基哌啶-3-基)氨基]-2-(3-氟苯基)噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
21) 4-[(2，6-二甲基哌啶-3-基)氨基]-2-(3-噻吩基)噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
22) 4-[(6-甲基哌啶-3-基)氨基]-2-(3-噻吩基)噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
23) 4-[(6-甲基哌啶-3-基)氨基]-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
24) 2-{4-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
25) 4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-2-[4-(哌啶-1-基甲基)苯基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
26) 2-[4-(吗啉-4-基甲基)苯基]-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
27) 2-(4-氯苯基)-4-(哌啶-3-基氨基)-1H-吲哚-7-甲酰胺；
28) 2-(4-氟苯基)-4-(哌啶-3-基氨基)-1H-吲哚-7-甲酰胺；
29) 2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-1H-吲哚-7-甲酰胺；
30) 2-(3-氟苯基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-1H-吲哚-7-甲酰胺；
31) 2-(4-氯苯基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-1H-吲哚-7-甲酰胺；
32) 2-(4-氟苯基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-1H-吲哚-7-甲酰胺；
33) 4-{乙基[(3S)-哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
34) 4-{乙基[(3S)-哌啶-3-基]氨基}-2-(3-噻吩基)噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
35) 4-[(反式-2-乙基哌啶-3-基)氨基]-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；和
36) 4-[(顺式-2-乙基哌啶-3-基)氨基]-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。
12.一种权利要求1-11中任何一项要求的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物用于治疗或预防与癌症相关的疾患。
13.一种权利要求1-11中任何一项要求的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物用于治疗或预防肿瘤性疾病，如乳腺癌、卵巢癌、肺癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、胆道癌、骨癌、膀胱癌、头颈部癌、肾癌、肝癌、胃肠组织癌、食管癌、胰腺癌、皮肤癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌、宫颈癌、阴道癌或其它组织的癌症，以及白血病和淋巴瘤，包括CLL和CML，中枢和外周神经系统的肿瘤和其它肿瘤类型诸如黑色素瘤、多发性骨髓瘤、纤维肉瘤和骨肉瘤和恶性脑肿瘤。
14.一种权利要求1-11中任何一项要求的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物用于治疗或预防包括自身免疫性疾病、炎症、神经性疾病和心血管疾病的增殖性疾病。
15.一种在人或动物中限制细胞增殖的方法，所述方法包括给予所述人或动物有效治疗量的权利要求1-11中任何一项要求的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
16.一种治疗罹患癌症的人或动物的方法，所述方法包括给予所述人或动物有效治疗量的权利要求1-11中任何一项要求的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
17.一种预防性治疗癌症的方法，所述方法包括给予需要这样的治疗的人或动物有效治疗量的权利要求1-11中任何一项要求的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
18.一种治疗罹患肿瘤性疾病的人或动物的方法，所述肿瘤性疾病为例如乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、胆道癌、骨癌、膀胱癌、头颈部癌、肾癌、肝癌、胃肠组织癌、食管癌、胰腺癌、皮肤癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌、宫颈癌、阴道癌或其它组织的癌症，以及白血病和淋巴瘤，包括CLL和CML，中枢和外周神经系统的肿瘤和其它肿瘤类型例如黑色素瘤、多发性骨髓瘤、纤维肉瘤和骨肉瘤，及恶性脑肿瘤，权利要求1-11中任何一项的要求的或其药学上可接受的盐。
19.一种治疗罹患增殖性疾病如自身免疫性疾病、炎症、神经性疾病和心血管疾病的人或动物的方法，所述方法包括给予所述人或动物有效治疗量的权利要求1-11中任何一项要求的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
20.一种治疗癌症的方法，所述方法包括给予人权利要求1-11中任何一项要求的式(I)化合物或其药学上可接受的盐和抗肿瘤药。
21.一种治疗癌症的方法，所述方法包括给予人或动物权利要求1-11中任何一项要求的式(I)化合物或其药学上可接受的盐和DNA损伤剂。
22.一种治疗与癌症相关联的感染的方法，所述方法包括给予需要这样的治疗的人或动物有效治疗量的权利要求1-11中任何一项要求的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
23.一种预防性治疗与癌症相关联的感染的方法，所述方法包括给予需要这样的治疗的人或动物有效治疗量的权利要求1-11中任何一项要求的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
24.一种药用组合物，它包含权利要求1-11中任何一项要求的式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
25.权利要求1-11中任何一项要求的式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的应用。
26.权利要求1-11中任何一项要求的式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防癌症的药物中的应用。
27.权利要求1-11中任何一项要求的式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防肿瘤性疾病的药物中的应用，所述肿瘤性疾病为例如乳腺癌、卵巢癌、肺癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、胆道癌、骨癌、膀胱癌、头颈部癌、肾癌、肝癌、胃肠组织癌、食管癌、胰腺癌、皮肤癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌、宫颈癌、阴道癌或其它组织的癌症，以及白血病和淋巴瘤包括CLL和CML，中枢和外周神经系统的肿瘤和其它肿瘤类型诸如黑色素瘤、多发性骨髓瘤、纤维肉瘤和骨肉瘤，及恶性脑肿瘤。
28.权利要求1-11中任何一项要求的式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防增殖性疾病的药物中的应用，所述增殖性疾病包括自身免疫性疾病、炎症、神经性疾病和心血管疾病。
29.一种抑制CHK1激酶的方法，所述方法包括给予需要所述抑制的动物或人有效治疗量的权利要求1-11中任何一项要求的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
30.权利要求1-11中任何一项要求的式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于抑制CHK1激酶活性的药物中的应用。
31.权利要求1-11中任何一项要求的式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于限制细胞增殖的药物中的应用。
32.一种抑制Pak激酶的方法，所述方法包括给予需要所述抑制的动物或人有效治疗量的权利要求1-11中任何一项要求的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
33.权利要求1-11中任何一项要求的式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于抑制Pak激酶活性的药物中的应用。
34.一种在人或动物中限制肿瘤发生的方法，所述方法包括给予所述人或动物有效治疗量的权利要求1-11中任何一项要求的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
35.一种用于在温血动物中产生Pak激酶抑制作用的药用组合物，它包含与药学上可接受的稀释剂或载体混合的权利要求1-11中任何一项定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
36.权利要求1-11中任何一项要求的式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于限制肿瘤发生的药物中的应用。
37.式(IV)、(1V’)、(VI)、(VI’)、(IX)、(XI)、(XII)和(XIII)化合物，所述化合物在权利要求1定义的式(I)化合物或其盐的制备中用作中间体
其中R1、R2、R3和R5如在式(I)中定义和Z为卤代。
38.一种制备依据权利要求1的式(I)化合物或其药学上可接受的盐的方法，其中X为N，Y为CH，A为CH，D为S，R3为H和L为NR5，所述方法包括
a.使式(II)化合物
其中Z为卤代，如溴代、氯代或碘代，与其中R2和R5如在式(I)中定义的式(III)胺在以下碱的存在下反应，
NHR2R5
(III)
得到式(IV)化合物
b.使式(IV)化合物与式(V)或(V’)化合物反应，
R1B(OR’)2
(V)(V’)
其中R1如在式(I)中定义和R’为H或甲基，得到式(VI)化合物
(VI)；
c.使式(VI)化合物水解，形成式(IA)所示的依据式(I)的化合物
d.然后如果需要
i)将一种式(I)化合物转化为另一种式(I)化合物；
ii)去除任何保护基团；
iii)形成药学上可接受的盐。
39.一种制备式(I)化合物或其药学上可接受的盐的方法，其中X为N，Y为CH，A为CH，D为S，R3为H和L为O，所述方法包括
a.使式(II)化合物
其中Z为卤代，如溴代、氯代或碘代，与其中R2如在式(I)中定义的式(III’)醇，
R2OH
(III’)
在碱的存在下反应，得到式(IV’)化合物
b.使式(IV’)化合物与式(V)或(V’)化合物反应，
R1B(OR’)2
(V)(V’)
其中R1如在式(I)中定义和R’为H或甲基，得到式(VI’)化合物
c.水解式(VI’)化合物，形成式(IB)所示的依据式(I)的化合物
d.然后如果需要
i)将一种式(I)化合物转化为另一种式(I)化合物；
ii)去除任何保护基团；
iii)形成药学上可接受的盐。
40.一种制备式(I)化合物或其药学上可接受的盐的方法，其中X为CH，Y为CH，A为CH，D为NR4和L为NR5，所述方法包括
a.使其中R”为H、甲基、乙基或苄基的式(VII)化合物
与其中R1如在式(I)中定义的式(VIII)酮反应，
得到式(IX)吲哚
b.使式(IX)吲哚与其中R3如在式(I)中定义的式(X)胺反应
R3NH2
(X)
得到式(XI)化合物
c.使式(XI)化合物还原，形成式(XII)胺
d.使式(XII)化合物与适当的R2的醛、酮、羧酸或磺酰氯反应，其中R2如在式(I)中定义，形成式(IC)所示的依据式(I)的化合物
或者作为选择，使式(XII)化合物与亚硝酸钠和卤化铜反应，形成式(XIII)化合物，其中Z为卤代，
e.使式(XIII)化合物与其中R2和R5如在式(I)中定义的式(III)胺，
NHR2R5
(III)
在催化剂的存在下反应，得到式(ID)所示的依据式(I)的化合物
f.然后如果需要
i)将一种式(I)化合物转化为另一种式(I)化合物；
ii)去除任何保护基团；
iii)形成式(IC)或(ID)化合物的药学上可接受的盐。
全文摘要
本发明涉及新的式(I)化合物和它们的药用组合物和它们的使用方法。这些新的化合物具有CHK1激酶抑制活性、PDK1抑制活性和Pak激酶抑制活性，因此用于癌症的治疗和/或预防。
文档编号C07D495/04GK101189243SQ200680019862
公开日2008年5月28日 申请日期2006年4月5日 优先权日2005年4月6日
发明者K·达利, N·赫伦, A·赫德, S·乔安尼迪斯, J·W·简特卡, P·莱恩, J·斯科特, D·托德, M·瓦斯宾德, D·余, Y·余 申请人:阿斯利康(瑞典)有限公司