专利名称：亚氨基糖和氨基糖的纯化的制作方法
技术领域：
本发明涉及纯化例如D-1-脱氧半乳糖野尻霉素盐酸盐(DGJ.HC1)的亚 氨基或氨基糖的方法。该方法可用于制备数千克量的上述含氮糖。
背景技术：
因为在多种生物过程中已经发现，糖在选择性抑制多种酶功能中起主 要作用，所以它们在药理学中是有价值的。 一类重要的糖为糖苷酶抑制剂， 糖苷酶抑制剂可用于治疗代谢性疾病。半乳糖苦酶催化糖苷键的水解，它 在复合糖的代谢中是重要的。如D-1-脱氧半乳糖野尻霉素(DGJ)的半乳糖 苷酶抑制剂可以用于治疗许多疾病和病症，包括糖尿病(例如U.S.专利 4634765)、癌症(例如U.S.专利5250545)、疱瘆(例如U.S.专利4957926)、 HIV和法布里(Fabry)病(Fan等人，自然医学(Nat. Med.) 1999 5:1， 112-5)。
通常，通过色谱分离纯化糖。对于实验室规模的合成而言，这种方法 是快捷而有效的，但是，当纯化更大量的糖时，柱色谱法和类似的分离技 术变得不大有价值。柱子的大小、所需的溶剂和固定相(例如硅胶)的量和 分离所需的时间各自都随所纯化的产物的量而增加，这使在数千克规模合 成中用柱色谱法纯化不现实。
另一种糖的常规纯化技术为离子交换树脂。该技术可能是烦瑣的，需 要对离子交换树脂进行烦瑣的预处理。可用的离子交换树脂也不一定能够 将糖与盐(例如NaCl)分离。酸性树脂容易将粗产物中存在的金属离子和氨 基糖或亚氨基糖都从溶液中除掉，因此是不可用的。寻找能够选择除去金属阳离子而使氨14t或亚氨14t留存在溶液中是不易的。此外，在用离子 交换树脂纯化糖之后，需要额外的浓缩稀释的水溶液的步骤。该步骤可能 导致糖分解，从而产生污染物并降低收率。
U.S.专利6740780、 6683185、 6653482、 6653480、 6649766、 6605724、 65卯121和6462197描述了制备亚氨基糖的方法。这些化合物通常由羟基 保护的肟中间体通过形成可还原为己糖醇的内酰胺而制备。然而，就安全、 扩大规模、处理和合成复杂性而言，该方法在数千克规模生产中有一些缺 点。例如，几种公开的合成中用快速色镨纯化或离子交换树脂处理，上述 方法不适于在大规模中应用。
一种特别有用的亚氨基糖为DGJ。文献中公开了几种DGJ的制备方 法，其中多数不适于在工业实验室中的制^^见模(例如>100 8)。 一种此类合 成包括从D-半乳糖开始的合成(Santoyo-Gonzalez等人，合成快报(Synlett) 1999 593-595;合成(synthesis) 1998 1787-1792)，其中为了纯化DGJ和DGJ 中间体使用了色语法。还已公开了为纯化DGJ可使用离子交换树脂，但是 没有任何迹象表明树脂可用于在制备规模上纯化DGJ。制备DGJ的公开 的最大规模是13 g(参见Fred-Robert Heiker, Alfred Matthias Schueller， 糖研究(Carbohydrate Research), 1986,119-129)。在该公开书中，通过与离 子交换树脂Lewatit MP 400 (OH)搅拌分离DGJ并从乙醇中结晶。然而， 该方法也不能容易地用于数千克量的规一莫。
类似地，其它工业和药学上有用的糖通常用色谱法和离子交换树脂纯 化，这些纯化方法不易于使纯化规模扩大至数千克量。
因此，需要一种纯化含氮糖、优选氨基或亚氨基己糖的方法，该方法 是简单并对于大规模合成而言为有成本效益的。
发明内容
现已发现，用浓盐酸处理粗制的氨基或亚氨基糖，可以有效地以大规 模方法提供含氮糖，即氨基或亚氨基糖。不需要例如用离子交换树脂纯化 时所需的预处理或稀释。含氮糖可溶于浓HC1中，并且在浓HC1中足够稳定。因此，可以用简单、快速和有效的方法，使用HC1将糖从不可溶的碱 或碱土金属氯化物(例如氯化钠)中分离。
这些碱或碱土金属氯化物由其它含有碱或碱土金属的组分形成，所述 含有碱或碱土金属的组分是为了各种目的，例如脱除保护基，在氨基或亚 氨基糖合成步骤之一中使用的组分。所述HC1处理可以用于除去在盐酸中 不溶的其它杂质。在氨基或亚氨基糖的合成中，必须在所需的氨基或亚氨 基糖的最终纯化中将含有碱或碱土金属的组分除去。使用含有碱或碱土金 属的化合物的 一个实例为在氨基或亚氨基糖合成期间使用碱脱除酰基保护 基。例如，在DGJ合成的最后一步中使用溶于甲醇的曱醇钠作为转酯反应 中的催化剂，以除去新戊酰保护基。
根据下面的描述、附随的数据以及所附的权利要求，本发明的其它特 征、优点和实施方案对本领域中的技术人员来说将是显而易见的。
下面的图是本说明书的一部分，并用于对本发明的某些方面进一步说
明。通过参照一个或多个下述图并结合文中提到的具体实施方案的详细说明可以更好地理解本发明。
图1.结晶后的纯化的DGJ的HPLC图。DGJ纯度超过99.5%。 图2A. DGJ(HC1萃取和结晶后)的，H NMR, 0-15 ppm,在DMSO中。 图2B. DGJ(HC1萃取和结晶后)的^ NMR， 0-5 ppm,在DMSO中。 图3A.纯化的DGJ(重结晶后)的1HNMR， 0-15 ppm，在020中。注
意OH基团已经与OD进行了交换。
图3B.纯化的DGJ(重结晶后)的iHNMR， 0-4 ppm，在020中。注
意OH基团已经与OD进行了交换。
图4.纯化的DGJ(重结晶后)的"CNMR, 45-76 ppm。
术语"烷基"指直链或支链的仅由碳和氢原子构成的且不含不饱和现 象的C1-C20烃基团，其通过单键连接到分子的其余部分，例如曱基、乙基、正丙基、l-甲基乙基(异丙基)、正丁基、正戊基、l，l-二甲基乙基(叔丁
基)。文中所用的烷基优选为Cl-C8烷基。
术语"烯基"指含有至少一个碳-碳双键的C2-C20脂肪烃基团，其可 为直链或支链的，例如乙烯基、l-丙烯基、2-丙烯基(烯丙基)、异丙烯基、 2-甲基-l-丙烯基、l-丁烯基、2-丁烯基。
术语"环烷基"指不饱和的非芳香性的单环或多环烃环体系，如环丙 基、环丁基、环戊基、环己基。多环环烷基基团的示例包括桥环基团(全氢 萘基、金刚烷基和降莰烷基)或螺环基团(例如，螺(4，4)-壬-2-基)。
术语"环烷基烷基"指如上定义的环烷基直接连接到如上定义的烷基， 这致使产生了稳定的结构，例如环丙基甲基、环丁基乙基、环戊基乙基。
术语"烷基醚"指含有至少一个掺入到烷基链的氧原子的如上定义的 烷基基团或环烷基基团，例如甲基乙基醚、乙醚、四氢呋喃。
术语"烷基胺"指含有至少一个氮原子的如上定义的烷基基团或环烷 基基团，例如正丁胺和四氢巧恶溱。
术语"芳基，，指约有6-14个碳原子的芳香基，如苯基、萘基、四氢萘 基、茚满基、联苯基。
术语"芳基烷基"指如上定义的芳基基团直接键合至如上定义的烷基 基团，例如-CH2C6Hs和-<:2114<:6115。
术语"杂环基"指稳定的3至15元环基，其包含碳原子和选自氮、磷、 氧和硫原子的一个至五个杂原子。对于本发明的目的而言，杂环基可以为 单环、双环或三环体系，其可以包括稠环、桥环或螺环体系，并且在杂环 基中的氮、磷、碳、氧或硫原子可以任选被氧化为各种氧化状态。此外， 氮原子可以任选被季铵化；且所述环基可以是部分饱和或完全饱和的(即杂 芳族的(heteroaromatic)或杂芳基芳香族的(heteroaryl aromatic))。 这类杂 环基的示例包括但不限于氮杂环丁烷基、吖t基、苯并间二氧杂环戊烯基、 苯并二氧戊环基、苯并呋喃基、咔唑基、噌啉基、二氧戊环基、吲嗪基、 萘咬基、全氢氮杂革基、吩溱基、吩瘗嚷基、吩巧恶嗪基、酞溱基、吡咬基、 蝶咬基、嘌呤基、喹唑啉基、喹喔啉基、喹啉基、异壹啉基、四唑基(tetrazoyl)、咪唑基、四氩异>##基、哌咬基、哌嚷基、2-氧代派溱基、2-氧代哌咬基、 2-氧代吡咯烷基、2-氧代氮杂萆基、氮杂萆基、吡咯基、4-哌啶酮基、吡咯 烷基、吡溱基、嘧咬基、哒嗪基、噁唑基、噁唑啉基、噁唑烷基(oxasolidinyl)、 三唑基、茚满基、异喁唑基、异噁唑烷基(isoxasolidinyl)、吗啉基、噻唑 基、噻唑啉基、噻唑烷基、异噻唑基、奎宁环基、异瘗唑烷基、吲哚基、 异吲哚基、二氢吲哚基、异二氢吲咮基、八氢吲咮基、八氢异吲咪基、喹 啉基、异奮啉基、十氢异查啉基、苯并咪唑基、噻二唑基、苯并吡喃基、 苯并瘗峻基、苯并喷、唑基、呋喃基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、噻吩基、 苯并噻吩基、硫吗啉基、硫吗啉基亚砜、硫吗啉基砜、二氧磷杂环戊烷基、 喷、二唑基、色满基、异色满基。杂环基可以在能够致使产生稳定结构的任何杂原子或碳原子处与主结 构连接。术语"杂芳基"指其中环为芳香性的杂环。术语"杂芳基烷基"指如上定义的杂芳环基直接键合至烷基基团。杂 芳基烷基可以在能够致使产生稳定结构的烷基基团的任何碳原子处与主结 构连接。术语"杂环基，，指如上定义的杂环基。杂环基连接可以在能够致使产 生稳定结构的任何杂原子或碳原子处与主结构连接。术语"杂环基烷基"指如上定义的杂环基直接键合至烷基基团。杂环 基烷基可以在能够致使产生稳定结构的烷基基团的碳原子处与主结构连 接。在"取代的烷基，，、"取代的烯基"、"取代的炔基"、"取代的环 烷基"、"取代的环烷基烷基"、"取代的环烯基，，、"取代的芳烷基"、 "取代的芳基"、"取代的杂环"、"取代的杂芳环"、"取代的杂芳基 烷基"或"取代的杂环基烷基环"中的取代基可以是下面基团中的一个或 多个相同或不同基团，所述基团选自氢、羟基、鹵素、羧基、氰基、氨基、 硝基、氧代(=0)、硫代(-S)或任选选自以下基团的取代基团烷基、烷氧 基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环、COORx、 -C(O)Rx、 -C(S)Rx、 -C(O)NRxRy、誦C(O)ONRxRy、 -NRxCONRyRz、 -N(Rx)SORy、 -N(Rx)S02Ry、 (=N-N(Rx)Ry)、 -NRxC(O)ORy、國NRxRy、画NRxC(O)Ry画、-NRxC(S)Ry、 -NRxC(S)NRyRz、 -SONRxRy-、 S02NRxRy-、 -ORx、 -ORxC(O)NRyRz、 -ORxC(O)ORy-、 画OC(O)Rx、 -OC(O)NRxRy、 -RxNRyRz、 -RxRyRz、 -RxCF3、 画RxNRyC(O)Rz、 -RxORy、 -RxC(O)ORy、 -RxC(O)NRyRz、 -RxC(O)Rx、 -RxOC(O)Ry、 -SRx、 -SORx、 -S02Rx、 -ON02，其中在以上各基团中的 Rx、 Ry和Rz可以为氢原子、取代或未取代的烷基、卣代烷基、取代或未 取代的芳烷基、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的环烷基、取代 或未取代的环烷基烷基、取代或未取代的杂环、取代的或未取代的杂环基 烷基、取代或未取代的杂芳基或者取代或未取代的杂芳基烷基。 术语"卤素"指氟、氯、溴和碘。含氮糖可以为至少一个含氧基团被含氮基团代替的戊糖、己糖或庚糖。 在一个优选实施方案中，所述糖为己糖。可以根据本发明进行纯化的含氮糖可以用下式之一表示其中X为NH、 O、 NHR3或N(R3)2;每个R独立地为OH、 NH2、 NHR3 或N(R ；W为H、 OH或W通过-0与另一个糖连接；且R2为H、 CH3、 CH2OH或R2通过-CHrO-与另 一个糖连接；且R3独立地为H或取代或未取代的C广d2烷基、Crd2烯基、CVd2炔基、Cs-C6环烷基、Cs-d2环 烯基、Cs-Q2芳基、Od2杂芳基、C6-d2芳烷基、CVd2杂环基、C6-C12杂环烷基、Cs-d2杂芳基烷基或C2-d2酰基且n为0、 l或2。文中所述的 方法可以用于将极性的无机氯化物与极性的氨基或亚氨基糖分离开来。糖 中存在的一个或多个亚氨基或氨基基团使该糖可以溶于HCl中。因此，当 X为O时，至少一个R必须为NH2或NHRS或N(R3)2。可以有两个或多个独立的NH、 NH2、 NHRS或N(R"2基团在X和/或R位置。由于同离子效应，极性的无机氯化物不溶于浓盐酸中。当将与微溶盐 有相同离子的可溶盐与微溶盐混合时，发生同离子效应，由于同离子浓度 增加，微溶盐的平衡发生改变。根据LeChatelier定律，加在微溶盐平衡 上的应力(增加的浓度)将使平衡移动，以减少同离子浓度，从而降低微溶 盐的溶解度。氨基或亚氨基糖构成一类天然存在的具有重要和多种生物功能的分子 (R.W.Jeanloz， Academic Press, New York, 1969)。许多是天然存在的，特 别是作为各种抗生素和其它重要生物分子的组分存在。氨基或亚氨基糖可 以作为糖苷存在，并可以通过文中所述的方法纯化。这些天然糖苷包含糖 (糖苷配糖基)和生物活性成分(苷元)。这些氨基或亚氨基糖包括葡萄糖类似 物、在链霉菌(Streptomyces)的滤液中发现的野尻霉素和在桑树叶中发现的 l-脱氧野尻霉素(DNJ)。已经将其它天然氨基或亚氨基己糖作为这些母杂环 化合物或糖例如l-脱氧野尻霉素(2S-羟基曱基-3R，4R,5S-三羟基-哌咬或 1，5-二脱氧-l，5-亚氨基-D-葡糖醇)的衍生物进行了系统描述。对于制备这些 糖而言，除了从生物来源分离外，还有许多合成路线。例如，已经从下列 物质合成了 DGJ，所述物质为D-葡萄糖(LeglerG等人，糖研究(Carbohydr Res.) 1986年11月1日；155:119-29); D-半乳糖(Uriel， C， Santoyo-Gonzalez, F.等人，合成快报(Synlett) 1999 593-595;合成(Synthesis) 1998 1787-1792; 吡喃半乳糖(Bernotas RC等人，糖研究1987年9月15日；167:305-11); L曙酒石酸(Aoyagi等人，有机化学杂志(J. Org. Chem.) 1991， 56， 815); quebrachoitol(Chida等人，化学会杂志，化学通讯(J. Chem. Soc， Chem Commuii.) 1994， 1247;呋喃半乳糖(PauIsen等人，化学学报(Chem. Ber.) 1980,113,2601);苯(Johnson等人，四面体快报(Tetrahedron Lett.) 1995, 36,653);阿拉伯糖-己-5-酮糖(arabino-hexos-5-ulose) (Barili等人，四面体 (tetrahedron) 1997， 3407); 5-叠氮基-l，4-内酯(Shilvock等人，合成快报， 1998,554);脱氧野尻霉素(Takahashi等人，糖化学杂志(J. Carbohydr.Chem.) 1998，17，117);乙酰葡糖胺(Heightman等人，Helv. Chim. Acta1995,78,514);肌醇(ChidaN等人，糖研究1992年12月31日；237: 185-94); 二7恶烷基哌。定(dioxanylpiperidene)(Takahata等人，有机快报 (Org. Lett.) 2003; 5(14); 2527-2529);以及(E)-2，4-戊二烯醇(Martin R等 人，有机快报2000年1月；2(l):93-5) (Hughes AB等人，天然产物报告(Nat Prod Rep.) 1994年4月；11(2): 135-62)。 Kiso描述了包含N-曱基-l-脱氧野 屍霉素的寡糖的合成(生物有机药物化学(Bioorg Med Chem.) 1994年9月； 2(ll):1295-308)，其中在糖基助催化剂存在下，将保护的l-脱氧野尻霉素 衍生物与D-半乳糖的曱基-l-硫代糖苷(糖基供体)和三氟甲磺酸盐偶联。第二代糖也可以通过本发明的方法纯化。这些化合物具有对糖苦酶抑 制作用更为提高的特异性，并有更少或更弱的副作用(例如胃肠道问题)。 将可以用文中提供的方法纯化的糖的非限制性清单列在表I中表I含氮的己糖D-l-脱氧半乳糖野尻霉素(DGJ)a-后莫别野屍霉素(a-别-HNJ)栗精胺a-后莫半乳糖野尻霉素(a-半乳糖 -HNJ)苦马豆素N-曱基-1-脱氧半乳糖野尻霉素 (N-Me隱DGJ)l-脱氧野尻霉素(DNJ)N-乙基-1-脱氧半乳糖野尻霉素 (N-Et-DGJ)l-脱氧甘露糖野尻霉素(甘露糖-DNJ)N-丙基-1-脱氧半乳糖野尻霉素 (N-Pr-DGJ)l-脱氧-3-表-野尻霉素(别-DNJ)N- 丁基-1-脱氧半乳糖野尻霉素 (N-Bu-DGJ)1，2-二脱氧半乳糖野尻霉素N-羟基乙基-l-脱氧半乳糖野尻霉素 (N-HE-DGJ)a-后莫野屍霉素(ot-Homonojirimycin) (a-HNJ)(3-l-C-丁基-脱氧半乳糖野尻霉素a-后莫甘露糖野尻霉素(a-甘露糖 誦HNJ)这些化合物粗品的合成和分离是公知的，并可在例如u.s.专利4861892、 4894388、 4910310、 4996329、 5011929、 5013842、 5017704、 5580884、5286877、 5100797、 6291657和6599919中发现。各种脱氧野屍霉素(DNJ) 衍生物的合成描述在U.S.专利5622972、 5200523、 5043273、 4944572、 4246345、 4266025、 4405714和4806650以及U.S.专利申请10/031145中。 另外的糖化合物和它们的合成描述在Jacob, G. S.等人，Cur. Opin. Struct. Biol. (1995) 5:605-611和Winchester, B.等人，Glycobiol (1992) 2:199-210 中。合成氨基糖的另外的方法描述在例如A. Golebiowski， J. Jurczak，合成 快报(Synlett) 241,1992; J. Du Bois等人，美国化学会杂志(J. Am. Chem. Soc.) 119:3179,1997; K. C. Nicolaou等人，Angew. Chem. Int. Ed. Engl" 39:2525， 2000中。在合成后，文中所述的糖通常会含有必须除去的杂质，所述杂质为含 碱或碱土金属的化合物，例如曱醇钠。对于通过本发明方法纯化而言， 一种特别有价值的氨14l为DGJ。 DGJ或D-l-脱氧半乳糖野尻霉素，也称为(2R，3S，4R，5S)-2-羟甲基-3，4，5-三 羟基哌啶和l-脱氧-半乳糖苷酶抑素(galactostatin)，是如下式的野尻霉素(5-氨基-5-脱氧-D-吡喃半乳糖)衍生物浓盐酸萃取可以用于将残留的NaCl或其它盐及杂质与DGJ产物分 离。DGJ在这些条件下不分解或脱水，且通过一次简单过滤可完全除去氯 化钠。通过用浓盐酸萃取DGJ并结晶，DGJ产品具有很好的纯度和晶体 结构。浓盐酸溶解糖(例如DGJ盐酸盐)，但不溶解NaCl或其它金属盐污染 物，从而使DGJ从盐中分离出来。这至少部分是由于对NaCl的不溶性起 重要作用的同离子效应造成的。DGJ在浓盐酸中稳定且不会如在其它强酸 (如H2S04)中那样发生脱水。在一个实施方案中，用浓盐酸从混合物中将 DGJ盐粗品提取出来，而NaCl不溶解。过滤后，可以将DGJ'HC1沉淀， 例如通过将上述酸溶液倒入四氢呋喃/乙醚溶液中。DGJ盐可以在与浓盐酸溶剂化之前形成，或它可以在加入浓HC1期间形成。上面所述的方法还可以如下改进首先将糖加入水中，而不是加入浓 盐酸中，然后将该溶液用氯化氢气体饱和。氨基或亚氨基糖在浓HC1中可以稳定数小时到数天，从而使得可以在 任何规模中完成后处理，而亚氨基糖不降解。2-氛基葡萄糖对于用本发明的方法纯化而言，其它特别有价值的糖包括2-氨基葡萄 糖(通常称为葡糖胺)和其衍生物。可以通过本领域公知的方法分离或合成 2画氨基葡萄糖。例如，可通过Meyer zu Reckendorf的方法(Chem Ber. 1969; 102(3):1076-9)、辐照D-葡萄糖和氨基酸(Doner LW等人，碳水化合物研究 1976年4月，47(2):342-4)、使用紫尿酸的方法(Moulik SP等人，碳水化合 物研究1972年9月；25(1):197-203)制备2-氨基-2-脱氧-D-葡萄糖。用公知 的技术合成后，将2-氨基葡萄糖粗品溶解于已经预先加热的浓盐酸中。这 通过除去非溶剂合的Na+或其它金属离子杂质使糖纯化，并可使产物结晶。将盐酸氨基或亚氨基糖溶液过滤除去无机不溶盐后，通过用可与浓盐 酸混溶的溶剂或溶剂混合物稀释以及因此导致的结晶，而不用任何另外的 处理(例如浓缩除去溶剂)，即可分离得到氨基或亚^J4t，所述的溶剂或 溶剂混合物例如为四氢呋喃、乙醇、丙酮或四氢呋喃/乙醚。也可^f吏用其它 溶剂和溶剂混合物。在上述操作后，可以用其它溶剂或溶剂混合物再进行 结晶，例如对于DGJ'HCl而言可用7jC/乙醇。纯化DGJ.HC1的收率，包括 从7K/乙醇中两次结晶，约为80%。如文中所用，术语"杂质"指含氮糖中的不是终产物所需的任何成分。 术语"污染的"指杂质存在于污染的样品中。如文中所用"浓Hcr指至 少含有35% HC1的溶液。如文中所用，术语"数千克"、"数kg"和"制 ^M*"指其中在单轮合成中以超过1 kg的量制备产品的合成规模。
具体实施方式
用下面的实施例进一步举例说明本发明，不应认为是限制本发明的范围。实施例l: DGJ的制备和纯化用曱醇(IO L)和钯炭(10。/。，湿的，44g)在50 psi 112条件下将通过 Santoyo-Gonzalez所述的技术制得的保护的晶体呋喃半乳糖苷，即5-叠氮 基-5-脱氧-l，2，3,6-四新戊酰-a-D-呋喃半乳糖苷(1250 g)氢化1-2天。加入曱 醇钠(25。/o甲醇溶液，1.25L)，在100psiH2下再氢化l-2天。过滤除去催化 剂，将反应用氯化氢曱醇溶液(20。/。，1.9L)酸化并浓缩，得到固体的 DGJ.HC1和氯化钠粗混合物。DGJ的纯度约为70Q/o(w/w分析)，剩余的 30%大部分为氯化钠。将固体用四氢呋喃(2 x 0.5 L)和乙醚(l x 0.5 L)洗涤，然后与浓盐酸(3 L)混合。DGJ进入溶液中，而NaCl不溶解。将得到的混悬液过滤，除去 氯化钠；用另外一部分盐酸(2x(K3L)洗涤氯化钠固体。合并所有的盐酸溶 液，并緩慢倒入搅拌着的四氢呋喃(60L)和乙醚(11,3L)溶液中。随着搅拌 (持续2小时)，沉淀生成。将固体DGJ.HC1过滤，并用四氢呋喃(0.5L)和 乙醚(2 x 0.5 L)洗涂。NMR镨图显示在图2A-2B中。将固体干燥，并从水(1.2mL/g)和乙醇(10ml/lml水)中重结晶。该重 结晶步骤可以重复。用该方法得到白色晶体DGJ.HC1，产率通常约为 70-75%(320-345 g)。纯化的产物，即DGJ'HC1是白色晶体， HPLC>98°/。(w/w分析)，如图1所示。图3A-3D和图4为纯化的DGJ的 NMR镨图，图4显示六个糖碳原子。实施例2: 1-脱氧甘露糖野尻霉素的纯化1-脱氧甘露糖野尻霉素是根据Mariano所述的方法(有机化学杂志(J. Org. Chem.)， 1998， 841-859,见859页，将其在此引入作为参考)制备的。 然而，代替Mariano所述的用离子交换树脂纯化，将1-脱氧甘露糖野尻霉 素与浓盐酸混合。然后将混悬液过滤除去盐，用已知的重结晶1-脱氧甘露 糖野尻霉素的溶剂(用THF结晶，然后用乙醇/7K)将1-脱氧甘露糖野尻霉素盐酸盐进行沉淀结晶。实施例3: (+)-l-脱氧野尻霉素的纯化(+)-l-脱氧野尻霉素是用Kibayashi等人的方法(有机化学杂志，1987， 3337-3342，见3341页，将其在此引入作为参考)制备的。它是由哌咬化合 物(弁14)在HCl/MeOH中合成的。卯％的报道产率表明，该反应基本上是 干净的并且不含有其它糖副产物。因此，Kibayashi所用的柱色谱是用于将 产物与非糖相关的杂质分离开来。因此，代替用硅胶色谱纯化，将(+)-1-脱氧野尻霉素与浓HC1混合。然后将混悬液过滤以除去盐，并用对野尻霉 素重结晶而言为^^知的溶剂将野尻霉素结晶。实施例4:野尻霉素的纯化野尻霉素是按照Kibayashi等人所述的方法(机化学杂志，1987, 3337-3342，见3342页)制备的。然而，在减压蒸干混合物后，代替Kibayashi 所述的通过使用氨-甲醇-氯仿的硅胶色傳法纯化，将野尻霉素与浓HC1混 合。然后将混悬液过滤以除去不溶于HC1的杂质，并用对野尻霉素重结晶 而言为公知的溶剂将野尻霉素结晶。在上面详细说明的启发下，本发明的许多变通方法对于本领域的技术 人员而言是显而易见的。所有这些显而易见的变通方法全部在所附的权利要 求的预期范围内。在本说明书的启发下，本领域的技术人员应当理解，可在文中所公开 的具体实施方案中进行许多改变，仍可得到相似或相近的结果，而不偏离 本发明的精神和范围。将上面提到的专利、专利申请、实验方法、出版物以其全部内容在此 引入作为参考。
权利要求
1.纯化被含碱或碱土金属的化合物污染的含氮糖粗品的方法，该方法包括(a)将下式含氮糖或其HCl盐与浓盐酸混合或与氯化氢气体混合至饱和，或其中X为NH、O、NHR3或N(R3)2；每个R独立地为OH或NH2或NHR3或N(R3)2；R1为H、OH或-O-糖；R2为H、CH3、CH2OH或-CH2-O-糖；每个R3独立地为H或取代或未取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C5-C6环烷基、C5-C12环烯基、C5-C12芳基、C4-C12杂芳基、C6-C12芳烷基、C4-C12杂环基、C6-C12杂环烷基、C5-C12杂芳基烷基或C2-C12酰基；且n为0、1或2；条件是如果X为O，则至少一个R必须为NH2或NHR3或N(R3)2；(b)除去碱或碱土金属化合物的氯化物，其中氯化物为固体；和(c)通过加入与盐酸混溶的溶剂使糖结晶。
2. 权利要求l的方法，其中糖与水混合，然后用氯化氢气体饱和。
3. 权利要求l的方法，其中糖与浓盐酸混合。
4. 权利要求l的方法，其中糖为亚氨基糖。
5. 权利要求4的方法，其中R1为H且R2为CH2OH。
6. 权利要求4的方法，其中糖为DGJ。
7. 权利要求4的方法，其中糖为聚亚氨基糖。
8. 权利要求l的方法，其中糖为氨基糖。
9. 权利要求8的方法，其中糖为2-氨基葡萄糖。
10. 4又利要求1的方法，其中糖为二糖。
11. 权利要求1的方法，其中含有金属的化合物是由加入曱醇钠形成的。
12. 权利要求1的方法，其中使糖结晶包括加入7JV乙醇溶剂混合物。
13. 权利要求1的方法，另外包括通过过滤除去碱或碱土金属的氯化物。
14. 权利要求1的方法，其中按重量计算，纯化使含有金属的化合物 的量减到小于0.01%。
15. 权利要求1的方法，其中纯化的糖纯度至少为98%。
16. 权利要求1的方法，其中纯化的糖纯度至少为99%。
17. 权利要求l的方法，其中制备了至少5kg纯化的己糖。
18. 权利要求l的方法，另外包括由糖起始原料合成所述糖。
19. 纯化被含碱或碱土金属的化合物污染的D-l-脱氧半乳糖野尻霉素 (DGJ) 4且品的方法，该方法包括(a) 将DGJ或其HC1盐与浓盐酸混合；(b) 除去碱或碱土金属化合物的氯化物；和(c) 对DGJ'HC1进行结晶。
20. 权利要求19的方法，其中使DGJ.HCl结晶包括加入水/乙醇溶剂 混合物。
21. 权利要求19的方法，另外包括通过过滤除去碱或碱土金属的氯化物。
22. 权利要求19的方法，其中纯化的糖纯度至少为98%。
23. 权利要求19的方法，其中纯化的糖纯度至少为99%。
24. 权利要求19的方法，另外包括由糖起始原料合成DGJ。
25. 权利要求24的方法，其中糖起始原料为半乳糖。
全文摘要
本发明涉及纯化例如D-1-脱氧半乳糖野尻霉素(DGJ)的亚氨基或氨基糖的新方法。特别是，描述了用盐酸纯化数千克规模的糖的方法。
文档编号C07H5/04GK101277969SQ200680027146
公开日2008年10月1日 申请日期2006年6月9日 优先权日2005年6月8日
发明者M·梅杰, R·彼得森, S·科辛斯基 申请人:阿米库斯治疗学公司