专利名称：用于区分军团菌临床株和环境株的多克隆抗体及其制备方法
技术领域：
本发明涉及军团菌临床株和环境株检验技术领域，尤其是一种用于区分军 团菌临床株和环境株的多克隆抗体及其制备方法。
背景技术：
1977年在美国首次发现了军团菌及其引起的军团病。此病主要表现为严重 肺炎，并有较高的死亡率；目前在美国占细菌性肺炎发病数的第三位，因此为 世界各国所高度重视。我国政府卫生部也十分关心军团病的防治工作，并于2003 年8月19日和2006年2月16日，颁发了《公共场所集中空调通风系统卫生规 范》等多个文件，规定对集中空调的冷却水冷凝水必须检查军团菌并严加控制。
现己完全清楚，军团菌在全世界的各种环境水体，特别是各种人工水体如 空调冷却水、管道水、家用热水器水等各种外环境水中有着广泛的分布， 一般 在集中空调冷却水标本的军团菌检出率可达30%以上，而这些在全世界自然水 体和人工水体中长年大量稳定存在的军团菌，已证明是无产毒基因的环境株； 它与从患有严重军团菌肺炎病人体内分离出的，有产毒基因和侵入机体能力的 军团菌临床株有着本质上的不同。因此在军团病的防治和研究工作中，特别是 公众场所集中空调的军团菌监测工作中，及时注意区别两类军团菌有着十分重 要的意义。
现有区分军团菌临床株和环境株的方法主要有如下两种1、 表型方法，十多年前，国外开始意识到存在着军团菌临床株和环境株， 并在所建立的军团菌单克隆抗体分型法中加进了部分区分两类军团菌的内容，
以后又对此加以长期的观察研究证明是有效的。近年又^F究了与临床株产毒有 关的菌株黏附力，和与侵入机体有关的进入小鼠体内并繁殖等能力，并用其来 区别两类军团菌。但所有这些表型方法的使用手续较繁杂，需要高技术，代价
昂贵，且未见有商品；就方法本身来说，其效果也不明晰，重复性不够。
2、 遗传学方法，近年来不少人关注并应用分子生物学技术，研究和尝试解 决这个问题，建立了内切酶分析、PCR、菌落杂交、DNA序列分析、DNA指纹 等方法，获得了较好的效果。但未见有商品化的产品，即使有个别此类产品， 也价格昂贵和方法复杂，难以推广使用。
纵观国内外，到目前为止仍然缺少一种有效、简便、经济能被广大防病和 医疗单位接受的区别军团菌临床株和环境株的方法，及其实施该方法的试剂。
发明内容
本发明解决的技术问题在于提供一种有效、简便、经济能被广大防病和医 疗单位接受的用于区分军团菌临床株和环境株的多克隆抗体及其制备方法。
本发明解决的技术问题是通过如下技术方案实现的是从军团菌的临床株 和环境株提炼具有特异性抗原的菌株并制得抗血清、去除非特异性抗体后所得 的抗体。
所述的多克隆抗体制备方法按如下步骤进行
A、 收集包括环境株和临床株的军团菌；
B、 检查各个菌株的抗原性并从中寻找具有临床株或环境株特异性抗原的菌
株；C、 用此类菌株制备抗原并免疫家兔获得抗血清；
D、 用非特异性抗原对此抗血清加以吸收除去该血清中的非特异性抗体。 所收集的军团菌均为嗜肺军团菌1型；其中3株为来源于军团病病人标本的
临床株，其他158株为从环境水分离的环境株。
本发明发现嗜肺1型军团菌(该型菌占军团病病原菌的90%以上)从病人来源 的临床株和环境来源的环境株分别包含有各自特异的耐热脂多糖抗原因子。用 其制备出来的抗血清，经过吸收去除非特异抗体后，可以获得检验用的多克隆 抗体血清；用该多克隆抗体血清能有效准确的鉴别嗜肺1型军团菌的临床株和 环境株。本发明的方法简便；并且，能快速获得结果， 一般在10分钟内可得初 步报告。
具体实施例方式
本发明的多克隆抗体按如下步骤制备先收集161株军团菌(均为嗜肺军 团菌1型，其中3株为来源于军团病病人标本的临床株；其他158株为从环境 水分离的环境株)，反复检查各个菌株的抗原性并从中寻找具有临床株或环境株 特异性抗原的菌株；然后，用此类菌株制备抗原并免疫家兔获得抗血清；再用 非特异性抗原对此抗血清加以吸收除去该血清中的非特异性抗体；最后，可用 全部菌株对筛选出的特异血清进行验证，制作成试剂盒。
使用本发明的多克隆抗体血清试剂进行临床株和环境株区分检验的方法
是
取一清洁无菌的小试管，滴入两滴生理盐水(或PBS)，再从被试菌的菌落 或菌苔取菌制作成较浓(约为30亿个/毫升)的菌悬液。然后用加液枪分别从 试剂盒中临床株诊断血清瓶或环境株血清瓶各取20微升诊断血清，并放置于一张清洁玻片的左右中位处，然后分别加入被测试的菌液各20微升，将玻片左右 处的菌液分别与两种诊断血清充分混匀，观察在两分钟内是否出现显著的玻片 凝集现象；临床株诊断血清出现玻片明显凝集而环境株诊断血清不凝集者，可 报告为嗜肺1临床株军团菌；如结果相反则可报告为LP1环境株军团菌。
本发明的多克隆抗体血清试剂可以有效地用于区分嗜肺1型军团菌的临床 株和环境株；161株两类军团菌所检査的结果显示3株病人来源的嗜肺1型军 团菌可全部判定为临床株；而156株(98. 7%)环境来源的嗜肺1型军团菌可判定 为环境株。
以上是对本发明较佳实施例的描述，但并非对本发明保护范围的限制；凡 依前述说明，本领域技术人员可得之等效技术方案，皆属于本发明的保护范围。
权利要求
1、一种用于区分军团菌临床株和环境株的多克隆抗体，其特征在于是从军团菌的临床株和环境株提炼具有特异性抗原的菌株并制得抗血清、去除非特异性抗体后所得的抗体。
2、 一种权利要求1所述的多克隆抗体制备方法，其特征在于按如下步骤A、 收集包括环境株和临床株的军团菌；B、 检查各个菌株的抗原性并从中寻找具有临床株或环境株特异性抗原的菌株；C、 用此类菌株制备抗原并免疫家兔获得抗血清；D、 用非特异性抗原对此抗血清加以吸收除去该血清中的非特异性抗体。
3、根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于所收集的军团菌均为嗜 肺军团菌1型；其中3株为来源于军团病病人标本的临床株，其他158株为从 环境水分离的环境株。
全文摘要
本发明涉及军团菌临床株和环境株检验技术领域，尤其是一种用于区分军团菌临床株和环境株的多克隆抗体及其制备方法。是从军团菌的临床株和环境株提炼具有特异性抗原的菌株并制得抗血清、去除非特异性抗体后所得的抗体。然后用其进行定性检测。本发明的方法简便、有效、快速；可以广泛应用于军团菌临床株和环境株区分检测中。
文档编号C07K16/12GK101108880SQ200710028588
公开日2008年1月23日 申请日期2007年6月15日 优先权日2007年6月15日
发明者陈长怡 申请人:上海科玛嘉微生物技术有限公司