取代四氢异喹啉化合物、其制备方法及用途的制作方法

专利名称：取代四氢异喹啉化合物、其制备方法及用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及四氢异喹啉类化合物，尤其涉及取代的3S-6，7-二羟基-四 氢异喹啉-3-羧酸化合物及其制备方法，本发明还涉及该化合物作为抗血栓 剂的应用，属于医药领域。
背景技术：
血管栓塞性疾病对心脑血管疾病的高死亡率负最重要的责任。血栓形成 是血管栓塞性疾病发病的最重要的病因。目前临床使用的治疗急性血栓栓塞 性疾病的链激酶、尿激酶和重组组织型纤溶酶原激活剂等药物普遍存在全身 出血倾向和免疫原性反应，寻找安全有效的溶血栓药物是新药研究的热点之
Arg-Gly-Asp-Ser-0H、 Arg-Gly-Asp-Val-0H及Arg-Gly-Asp-Phe-0H是 纤维蛋白原与血小板表面GP 1Ib/IIIa受体结合的关键序列，具有抗血栓活 性。血小板聚集与Ca离子浓度有关。胞浆内Ca离子浓度升高，血小板激活 并聚集。胞浆内Ca离子浓度降低，血小板抑制。四氢异喹啉类化合物大都 具有钙拮抗和抑制血小板聚集活性。此外，四氢异喹啉分子中的苯环紫外发 色团，方便药物代谢研究。
左旋多巴是人体内合成去甲肾上腺素及多巴胺等的前体物，能透过血脑 屏障进入脑内，经多巴脱羧酶转化成重要的神经递质多巴胺。左旋多巴跨过 血脑屏障在脑组织中脱羧形成多巴胺，脑组织多巴胺含量增高对治疗帕金森 氏病有益。本发明的3S-6，7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸是左旋多巴与甲醛 经Pictet-Spengler环合反应得到。3S-6， 7_二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸是 四氢异喹啉的衍生物，除保留四氢异喹啉的活性外还应当具备跨过血脑屏 障的性能。本发明把Arg-Gly-Asp-Ser-OH 、 Arg-Gly-Asp-Val-0H及 Arg-Gly-Asp-Phe-0H分别通过2位氮或3位羧基与3S-6， 7-二羟基-四氢异 喹啉-3-羧酸偶联，得到的化合物应当具有抗血栓活性尤其是抗脑血栓活性、GP 1Ib/IIIa受体定向性和紫外可检测性。

发明内容
本发明目的之一是将3S-6， 7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸的结构进行修 饰，得到一类具有优秀的抗脑血栓活性、GP 1Ib/IIIa受体定向性和紫外可 检测性的化合物。
本发明目的之一是通过以下技术方案来实现的
具有抗血栓活性的通式工或通式II化合物
HO^jr^^s^CO-Arg-Gly-Asp-AA-OH HO^^^^v^CC^H
HO, "^""^ HU 、AA-Asp-Gly-Arg-H
通式I 通式II
在通式I和通式II中，AA选自Ser、 Val或Phe残基。 本发明目的之二是提供一种上述制备通式I或通式II化合物的方法。
本发明目的之二是通过以下技术方案来实现的
将Arg-Gly-Asp-Ser-0H、 Arg-Gly-Asp-Val-0H或Arg-Gly-Asp-Phe-0H 分别与3S-6， 7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸的2位氮偶联或3位羧基偶联， 得到通式I或通式II化合物。
优选的， 一种制备上述通式I化合物的方法，包括
(1) 按照常规方法分别制备下述3种短肽Arg-Gly-Asp-Ser-0H、 Arg-Gly-Asp-Val-0H、 Arg-Gly-Asp-Phe-0H;将上述3种短肽的C-端和侧链
分别用保护基进行保护；
(2) 按照常规方法制备3S-6， 7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸，然后苄基 化制备3S-6， 7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯或3S-2-Boc-6， 7-二羟基四 氢异喹啉-3-羧酸；
(3) 按照常规方法将C-端和侧链保护的Arg-Gly-Asp-Ser-0H、 Arg-Gly-Asp- Val-0H或Arg-Gly-Asp-Phe-0H分别连接到3S-2_Boc-6， 7-二 羟基四氢异喹啉-3-羧酸的3-羧基上、脱去所有保护基，得到通式I化合物。
优选的， 一种制备上述通式I工化合物的方法，包括 (1)按照常规方法分别制备下述3种短肽Arg-Gly-Asp-Ser-OH、Arg-Gly-Asp-Val-0H、 Arg-Gly-Asp-Phe-OH;将上述3种短肽的N-端和侧链
分别用保护基进行保护；
(2) 按照常规方法制备3S-6， 7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸，然后苄基 化制备3S-6， 7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸节酯或3S-2-Boc-6， 7_二羟基四 氢异喹啉-3-羧酸；
(3) 按照常规方法将N-端和侧链保护的Arg-Gly-Asp-Ser-0H、 Arg-Gly-Asp-Val-OH或Arg-Gly-Asp-Phe-OH分别连接到3S-6， 7-二羟基-四 氢异喹啉-3-羧酸苄酯的2位氮上、脱去所有保护基，得到通式II化合物。
上述制备方法中，3S-6， 7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸可通过由左旋多 巴与甲醛縮合制备得到。
本发明采用大鼠颈动静脉旁路插管血栓模型上评价了通式I和通式II 化合物的抗血栓活性，实验结果表明，本发明通式I和通式n化合物均具 有优秀的抗血栓活性，可作为抗血栓剂应用。


图l通式I化合物的制备路线图；其中AA选自Ser、 Val或Phe残基。 图2通式II化合物的制备路线图；其中AA选自Ser、Val或Phe残基。
具体实施例方式
下面通过实施例对本发明作进一步说明。应当指出，这些实施例仅仅是 本发明的例证，不应理解为对本发明的限制。
实施例1Boc-Arg(N02)_Gly-Asp(0Bz1)-Ser(Bzl)-OBzl的制备 1)制备Boc-Ser(Bzl)-OBzl
将738mg (2. 5薩1) Boc-Ser (Bzl)-OH溶于10ml无水乙醇，加入407mg
(1.25mmol) Cs2C03，室温反应15分钟，TLC显示原料点消失。减压浓縮除 去溶剂，得对应的铯盐。将得到的铯盐先溶于2ml无水N，N-二甲基甲酰胺
(DMF)，再往里加0.3ml (2. 5画1)溴节。反应混合物于50-55°C搅拌16h， TLC (展开剂氯仿甲醇=10: 1)显示Boc-Ser(Bzl)-OH的铯盐消失。反应 混合物减压浓縮至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠
干燥、过滤、滤液37'C减压浓縮，得到874mg (90.7%)标题化合物，为无 色油状物。
2) 制备HCl.Ser(Bz1)-0Bzl
将963mg (2. 5,1) Boc-Ser(Bz1)-0Bzl与10ml氯化氢-乙酸乙酯液(4N) 的混合物室温搅拌3小时，TLC (展开剂氯仿甲醇=10: 1)显示 Boc-Ser(Bzl)-0Bzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水 泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料伊磨洗，将无水 乙醚倾出，反复5次。得到的标题化合物直接用于下步反应。
3) 制备Boc-Asp (OBzl) -Ser (Bzl) -OBzl
将808mg (2. 5腿o1) Boc-Asp(OBzl)-OH溶于10ml无水四氢呋喃(THF)， 冰浴下往里加10ml含338mg (2. 5腿o1) N-羟基苯并三唑(HOBO和619mg (3rnmo1) 二环己基羰二亚胺(DCC)的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌 20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。
将740mg (2, 3画1) HCl' Ser (Bzl)-OBzl和232mg (2.3画1) N-甲基 吗啉先与6ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。得到的反 应混合物室温反应24小时。TLC (展开剂氯仿甲醇二10: 1)显示 Boc-Asp (0Bz 1) -OH消失。反应混合物减压浓縮至干，残留物用乙酸乙酯溶解， 滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出 的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37'C减压浓縮，得1.29g (95 %)标题化合物，为无色油状物。
4) 制备HC1 Asp(0Bzl)-Ser(Bzl)-OBzl
将L 477g (2. 5誦o1) Boc-Asp (OBzl)-Ser (Bzl)-OBzl与10ml氯化氢-乙 酸乙酯液(4N)的混合物室温搅拌3小时，TLC (展开剂氯仿甲醇=10: 1) 显示Boc-Asp (OBzl) - Ser(Bzl)-0Bzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无 水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑 料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复5次。得到的标题化合物直接用于下步反 应。
5) 制备Boc-Gly-Asp (OBzl) -Ser (Bzl) -OBzl
将438mg (2. 5mmol) Boc-Gly-0H溶于6ml无水THF，冰浴下往里加10ml含338mg (2. 5圆o1) HOBt和619mg (3画1) DCC的无水THF溶液。反应混 合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。
将1. 212g (2, 3腿o1) HCl'Asp(0Bz1)-Ser(Bzl)-OBzl和232mg (2. 3画1) N-甲基吗啉先与6ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。得 到的反应混合物室温反应24小时。TLC (展开剂氯仿甲醇=10: 1)显示 HCrAsp(0Bz1)-Ser(Bzl)-OBzl消失。反应混合物减压浓縮至干，残留物用 乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠 水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37°C减压浓縮， 得1.461g (98.1%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z) 649 [M+H]+。 6)制备HC1' Gly-Asp(0Bz1)-Ser(Bzl)-OBzl
将1. 619g (2. 5mmo1) Boc-Gly-Asp (OBzl)-Ser (Bzl)-OBzl与15ml氯化 氢-乙酸乙酯液(4N)的混合物室温搅拌3小时，TLC (展开剂氯仿甲醇=10: 1)显示Boc-Gly-Asp(0Bzl)-Ser(Bz1)-OBzl消失。用水泵将反应液抽干， 加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡 洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复5次。得到的标题化合物直接用于 下步反应。
7 )制备Boc-Arg (N02) -Gly-Asp (OBzl) -Ser (Bzl) -OBzl
将798mg (2. 5画1) Boc-Arg (N02)-OH溶于10 ml无水THF，冰浴下往 里力口 10ml含338mg (2, 5画1) H0Bt和619mg (3國1) DCC的无水THF溶液。 反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。
将1.343g (2. 3誦o1) HC1 Gly-Asp (OBzl)-Ser (Bzl)-OBzl和232mg (2. 3mmol) N-甲基吗啉先与6ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯 溶液混溶。得到的反应混合物室温反应24小时。TLC (展开剂氯仿甲醇=10: 1)显示HCl .Gly- Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-OBzl消失。反应混合物减压浓縮 至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶 液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤 液37°C减压浓縮，得1. 461g(98. 1 % )标题化合物，为无色固体。ESI-MS (m/z) 872 [M+Na] +。
实施例2 Boc-Gly-Asp (OBzl)-Val-OBzl的制备1) 制备HC1 Val-0Bzl
将5. 855mg (50画1) H-Val-0H、 55ml苯甲醇和11. 5g多聚磷酸的悬浮 液于90-95'C搅拌8h，使变澄清。将反应混合液倒入600ml硫酸液中，用乙 醚萃取5次，分出水层。乙醚层用2%盐酸洗涤3次，合并的水相用NaHC03 固体调节pH 9。水相用乙醚萃取3次(100ml X 3)，合并的乙醚层用无水MgS04 干燥。过滤，往滤液里通HC1气体约20分钟。混浊的乙醚层过虑，滤集到 3.034g (25%)标题化合物。 ESI-MS(m/e) 208[M+H]+。
2) 制备Boc-Asp(0Bzl)-Va1-0Bzl
将808mg (2. 5匪o1) Boc-Asp (OBzl) -0H溶于10 ml无水THF，冰浴下往 里加10ml含338mg (2. 5腿o1) HOBt和619mg (3.0,1) DCC的无水THF 溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。
将558mg (2. 3腿o1) HC1 Val-OBzl和232mg (2. 3匪o1) N-甲基吗啉先 与10ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。得到的反应混 合物室温反应24小时。TLC (展开剂氯仿甲醇二10: 1)显示HC1 Val-OBzl 消失。反应混合物减压浓縮至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤 液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用 无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37'C减压浓縮，得1.29g (96%)标题化合物， 为无色固体。
3) 制备HC1 Asp(OBzl)-Val-OBzl
将1. 278g (2. 5腿o1) Boc-Asp(0Bz1)-Val-OBzl与10ml氯化氢-乙酸乙 酯液(4N)的混合物室温搅拌3小时，TLC (展开剂氯仿甲醇二10: 1)显 示Boc-Asp(0Bz1)- Val-OBzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚， 再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗， 将无水乙醚倾出，反复5次。得到的标题化合物直接用于下步反应。
4) 制备Boc-Gly-Asp (OBzl) -Val-OBzl
将438mg (2. 5mmo1) Boc-Gly-OH溶于6 ml无水THF，冰浴下往里加10ml 含338mg (2. 5mrno1) H0Bt和619mg (3. O腿ol) DCC的无水THF溶液。反应 混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。
将1.03g (2. 3腿o1) HC1. Asp (OBzl)-Val-OBzl和232mg (2.3mmol) N—甲基吗啉先与10ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。得 到的反应混合物室温反应24小时。TLC (展开剂氯仿甲醇=10: 1)显示 HC1 Val-0Bzl消失。反应混合物减压浓縮至干，残留物用乙酸乙酯溶解， 滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出 的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37"C减压浓縮，得1.242g(95 %)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z) 592 [M+Na]4。
5) 制备HC1 Gly-Asp(0Bzl)-Val-0Bzl
将1, 423g (2. 5腿o1) Boc-Gly-Asp(0Bz1)-Val-OBzl与15ml氯化氢-乙 酸乙酯液(4N)的混合物室温搅拌3小时，TLC (展开剂氯仿甲醇=10: 1) 显示Boc-Gly-Asp(0Bzl)-Va1-0Bzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水 乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料 铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复5次。得到的标题化合物直接用于下步反应。
6) 制备Boc-Arg(N02)- Gly-Asp (0Bzl) -Val-0Bzl
将798mg (2. 5腿o1) Boc-Arg (N02)-OH溶于10 ml无水THF，冰浴下往 里力口 10ml含338mg (2. 5匪o1) H0Bt和619mg (3誦o1) DCC的无水THF溶液。 反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。 将1. 1638g (2. 3画1) HC1 Gly-Asp (OBzl)-Val-OBzl和232mg (2. 3腿o1) N-甲基吗啉先与6ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。得 到的反应混合物室温反应24小时。TLC (展开剂氯仿甲醇=10: 1)显示 HC1 Gly-Asp (OBzl)-Phe-OBzl消失。反应混合物减压浓縮至干，残留物用 乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠 水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37°C减压浓縮， 得1.68g (95%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z) 841 [M+Na]+。
实施例3 Boc-Arg(N02)-Gly-Asp (OBzl)-Phe -OBzl的制备 1)制备HCl'Phe-OBzl
将10. 85g (66mrao1) Phe-OH、 74. 6ml苯甲醇和14. 93g多聚磷酸的悬浮液 于90-95'C搅拌8h，使变澄清。将反应混合液倒入600ml硫酸液中，用乙醚 萃取5次，分出水层。乙醚层用2%盐酸洗涤3次，合并的水相用NaHC03固 体调节pH9。水相用乙醚萃取3次(100mlX3)，合并的乙醚层用无水MgS04干燥。过滤，往滤液里通HC1气体约20分钟。混浊的乙醚层过虑，滤集到
5. 641g (30%)标题化合物。ESI-MS(m/e) 256[M+H]+。
2) 制备Boc-Asp(0Bzl)-Phe-0Bzl
将808mg (2. 5腿o1) Boc-Asp (OBzl)-0H溶于10 ml无水THF，冰浴下往 里加10ml含338mg (2. 5腿o1) H0Bt和619mg (3mmo1) DCC的无水THF溶液。 反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。
将668mg (2. 3mmo1) HC1' Phe—0Bzl禾卩232mg (2. 3mmo1) N-甲基吗啉 先与6ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。得到的反应混 合物室温反应24小时。TLC(展开剂氯仿甲醇二10: l)显示HCl' Phe-0Bzl 消失。反应混合物减压浓縮至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤 液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用 无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37'C减压浓縮，得1.461g (98.1%)标题化 合物，为无色固体。ESI-MS(m/z) 561[M+H]+。
3) 制备HC1 Asp(0Bz1)-Phe-OBzl
将1. 398g (2. 5画1) Boc-Asp(OBzl)-Phe-OBzl与15ml氯化氢-乙酸乙酯 液(4N)的混合物室温搅拌3小时，TLC (展开剂氯仿甲醇二10: 1)显示 Boc-Asp(0Bz1)- Phe-0Bzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再 次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗， 将无水乙醚倾出，反复5次。得到的标题化合物直接用于下步反应。
4) 制备Boc-Gly-Asp (0Bzl) -Phe-0Bzl
将438mg (2. 5醒o1) Boc-Gly-0H溶于5 ml无水THF，冰浴下往里加10ml 含338mg (2. 5mrno1) H0Bt和619mg (3画1) DCC的无水THF溶液。反应混 合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。
将1. 141g (2. 3腿o1) HC1. Asp(0Bz1)-Phe-OBzl和232mg (2. 3,1) N-甲基吗啉先与10ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。 得到的反应混合物室温反应24小时。TLC (展开剂氯仿甲醇=10: 1)显示 HCl' ，Asp(0Bz1)-Phe-OBzl消失。反应混合物减压浓縮至干，残留物用乙酸 乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶 液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37"C减压浓縮，得 1.29g (91%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z) 640 [M+Na]'。5) 制备HC1 Gly-Asp(0Bz1)-Phe-0Bzl
将1. 544g (2. 5腿o1) Boc-Gly-Asp(0Bz1)-Phe-OBzl与15ml氯化氢-乙 酸乙酯液(4N)的混合物室温搅拌3小时，TLC (展开剂氯仿甲醇=10: 1) 显示Boc-Gly-Asp (OBzl)-Phe-OBzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水 乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料 铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复5次。得到的标题化合物直接用于下步反应。
6) 制备Boc-Arg(N02)- Gly-Asp (0Bzl)-Phe-0Bzl
将798mg (2. 5mmol) Boc-Arg (N02) -OH溶于10 ml无水THF，冰浴下往 里加10ml含338mg (2. 5腿o1) H0Bt和619mg (3腿o1) DCC的无水THF溶液。 反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。
将1. 189g(2. 3腿ol)HCl'Gly-Asp (OBzl)-Phe-OBzl和232mg(2. 3國1) N-甲基吗啉先与6ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。得 到的反应混合物室温反应24小时。TLC (展开剂氯仿甲醇=10: 1)显示 HC1 'Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl消失。反应混合物减压浓縮至干，残留物用 乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠 水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37"C减压浓縮， 得l,769g (94%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z) 841 [M+Na] +。
实施例4 Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(0cHex)-Ser(Bz1)-OBzl的制备
1) 制备Boc-Ser(Bzl)-OBzl
将738mg (2. 5翻1) Boc-Ser (Bzl)-0H溶于10ml无水乙醇，加入407mg (L25mmo1) Cs2C03，室温反应15分钟，TLC显示原料点消失。减压浓縮除 去溶剂，得对应的铯盐。将得到的铯盐先溶于2ml无水DMF，再往里加0. 3ml (2. 5mmo1)溴苄。反应混合物于50-55"C搅拌16h， TLC (展开剂氯仿甲 醇=10: 1)显示Boc-Ser(Bzl)-OH的铯盐消失。反应混合物减压浓縮至干， 残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱 和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液3/C 减压浓縮，得到874mg (90.7%)标题化合物，为无色油状物。ESI-MS(m/e) 386[M+H]+。
2) 制备HCl'Ser(Bzl)-0Bzl将963mg(2. 5mmol)Boc-Ser(Bzl)-0Bzl与10ml氯化氢-乙酸乙酯液(4N) 的混合物室温搅拌3小时，TLC (展开剂氯仿甲醇=10: 1)显示 Boc-Ser(Bzl)-0Bzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水 泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水 乙醚倾出，反复5次。得到的标题化合物直接用于下步反应。
3) 制备Boc-Asp (0cHex) -Ser (Bzl) -OBzl
将789mg (2. 5腿o1) Boc-Asp(0cHex) -0H溶于10ml无水THF，冰浴下往 里力口 10ml含338mg (2. 5画1) H0Bt和619mg (3腿o1) DCC的无水THF溶液。 反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。
将740mg (2. 3画1) HCl' Ser (Bzl)-0Bzl和232mg (2. 3画1) N-甲基 吗啉先与6ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。得到的反 应混合物室温反应24小时。TLC (展开剂氯仿甲醇=10: 1)显示 Boc-Asp(0cHex)-0H消失。反应混合物减压浓縮至干，残留物用乙酸乙酯溶 解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。 分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液3/C减压浓縮，得1.27g (95%)标题化合物，为无色油状物，ESI-MS(m/e) 584 [M+H]。
4) 制备HCl'Asp (0cHex) -Ser (Bzl) -OBzl
将L457g (2. 5讓o1) Boc-Asp(0cHex)-Ser(Bzl)-0Bzl与10ml氯化氢-乙酸乙酯液(4N)的混合物室温搅拌3小时，TLC (展开剂氯仿甲醇=10: 1)显示Boc-Asp (OcHex) _ Ser (Bzl)-OBzl消失。用水泵将反应液抽干，加 入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗， 塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复5次。得到的标题化合物直接用于下步 反应。
5) 制备Boc-Gly-Asp (0cHex) -Ser (Bzl) -OBzl
将438mg(2. 5mmol)Boc-Gly-OH溶于6ml无水THF，冰浴下往里加10ml含 338mg (2. 5腿o1) H0Bt和619mg (3画1) DCC的无水THF溶液。反应混合物 冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。
将1.194g (2.3腿o1) HC1 Asp (OBzl)-Ser (Bzl)-OBzl和232mg (2. 3mmol) N-甲基吗啉先与6ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯 溶液混溶。得到的反应混合物室温反应24小时。TLC (展开剂氯仿甲醇=10:1)显示HC1 Asp(0cHex)-Ser(Bzl)-0Bzl消失。反应混合物减压浓縮至干， 残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱 和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37"C 减压浓縮，得1.443g (98. 1%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z) 641 [M+H]+。
6) 制备HC1 Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl
将1.599g (2.5mrno1) Boc-Gly-Asp(0cHex)-Ser(Bzl)-OBzl与15ml氯 化氢-乙酸乙酯液(4N)的混合物室温搅拌3小时，TLC (展开剂氯仿甲醇 =10: 1)显示Boc-Gly-Asp(0cHex)-Ser(Bzl)-0Bzl消失。用水泵将反应液 抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水 乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复5次。得到的标题化合物直 接用于下步反应。
7) 制备Boc-Arg (Tos) -Gly-Asp (0cHex) -Ser (Bzl) -OBzl
将1. 071g (2. 5mrno1) Boc-Arg(Tos) _0H溶于10 ml无水THF，冰浴下往 里加10ml含338mg (2. 5腿o1) H0Bt和619mg (3讓o1) DCC的无水THF溶液。 反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。
将L 325g (2.3mmol) HC1 Gly-Asp(0cHex)-Ser(Bzl)-OBzl和232mg (2. 3mmol) N-甲基吗啉先与6ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯 溶液混溶。得到的反应混合物室温反应24小时。TLC (氯仿甲醇=10: 1) 显示HC1 .Gly- Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl消失。反应混合物减压浓縮至 干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液 和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液 3/C减压浓縮，得2. 144g (98.1%)标题化合物，为无色固体。Mp 87-887 °C;[a ]。=-11.0106; ESI-MS(m/z) 951 [M+H] +。
实施例5 Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl的制备 1)制备HCl Val-OBzl
将5. 855g (50mmol) H-Val-0H、 55ml苯甲醇和11. 5g多聚磷酸的悬浮 液于90-95"C搅拌8h，使变澄清。将反应混合液倒入300ml (5%)硫酸液 中，用乙醚萃取5次，分出水层。乙醚层用2%盐酸洗涤3次，合并的水相用NaHC03固体调节pH 9。水相用乙醚萃取3次(100mlX3)，合并的乙醚层 用无水Na2S04干燥。过滤，往滤液里通HC1气体约20分钟。混浊的乙醚层 过虑，滤集到3.034g (25%)标题化合物。ESI-MS(m/e) 208[M+H] + 。 2 )制备Boc-Asp (OcHex) -Val-OBzl
将789mg (2. 5画1) Boc-Asp(OcHex) -OH溶于10 ml无水THF，冰浴下 往里加10ml含338mg (2. 5画1) HOBt和619mg (3. 0,1) DCC的无水THF 溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。
将558mg (2. 3mmo1) HC1 Val-OBzl禾B 232mg (2. 3腿o1) N-甲基吗啉先 与10ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。得到的反应混 合物室温反应24小时。TLC (展开剂氯仿甲醇二10: 1)显示HC1 Val-OBzl 消失。反应混合物减压浓縮至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤 液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用 无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37"C减压浓縮，得1. llg (96%)标题化合物， 为无色固体。
3) 制备HC1 Asp(OcHex)-Val-OBzl
将1.261g (2. 5勤1) Boc-Asp(OcHex)-Val-OBzl与10ml氯化氢-乙酸 乙酯液(4N)的混合物室温搅拌3小时，TLC (展开剂氯仿甲醇二10: 1) 显示Boc-Asp(OcHex)- Va卜OBzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙 醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲 磨洗，将无水乙醚倾出，反复5次。得到的标题化合物直接用于下步反应。
4) 制备Boc-Gly-Asp (OcHex) -Val-OBzl
将438mg (2. 5腿o1) Boc-Gly-0H溶于6 ml无水THF，冰浴下往里加10ml 含338mg (2. 5腿o1) HOBt和619mg (3. 0画1) DCC的无水THF溶液。反应 混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。
将1. 014g (2. 3,1) HC1 Asp(0Bz1)-Val-OBzl和232mg (2. 3腿o1) N-甲基吗啉先与10ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。 得到的反应混合物室温反应24小时。TLC (氯仿甲醇=10: 1)显示HC1-Asp(OBzl)-Val-OBzl消失。反应混合物减压浓縮至干，残留物用乙酸乙酯溶 解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。 分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37'C减压浓縮，得1. 242g(95%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z) 584 [M+Na] + 。 5)制备HC1 Gly-Asp(0cHex)-Val-0Bzl
将1.404g (2. 5mmo1) Boc-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl与10ml氯化氢-乙酸乙酯液(4N)的混合物室温搅拌3小时，TLC (展开剂氯仿甲醇二10: 1)显示Boc-Gly-Asp(0cHex)-Va1-0Bzl消失。用水泵将反应液抽干，加入 无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗， 塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复5次。得到的标题化合物直接用于下步 反应。
6 )制备Boc-Arg (Tos) -Gly-Asp (0cHex) -Val-0Bzl
将1. 071g (2. 5腿o1) Boc-Arg(Tos)-0H溶于10 ml无水THF，冰浴下往 里加10ml含338mg (2.5画1) H0Bt和619mg (3. Ommol) DCC的无水THF 溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。 将1. 145g (2. 3腿o1) HC1 Gly-Asp(OcHex)-Val-0Bzl和232mg (2. 3画1) N-甲基吗啉先与10ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。 得到的反应混合物室温反应24小时。TLC (氯仿甲醇=10: 1)显示 HC1 Gly-Asp(0cHex)-Val-0Bzl消失。反应混合物减压浓縮至干，残留物用 乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠 水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液3/C减压浓縮， 得1.725g (86%)标题化合物，为无色固体。Mp 78-79。C; [ct]D=-16.1 (c =0.11, CHC13); ESI-MS(m/z) 896 [M+H+Na]+。
实施例6 Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(0cHex)-Phe-0Bzl的制备
1) 制备HCl'Phe-OBzl
将10. 85g (66画1) Phe-0H、 74.6ml苯甲醇和14. 93g多聚磷酸的悬 浮液于90-95"C搅拌8h，使变澄清。将反应混合液倒入600ml (5%)硫酸 液中，用乙醚萃取5次，分出水层。乙醚层用2%盐酸洗涤3次，合并的水 相用NaHC03固体调节pH 9。水相用乙醚萃取3次(100mlX3)，合并的乙醚 层用无水Na2S04干燥。过滤，往滤液里通HC1气体约20分钟。混浊的乙醚 层过滤，滤集到5.641g (30%)标题化合物。ESI-MS(m/e) 256[M+H]+。
2) 制备Boc-Asp(OcHex)-Phe-OBzl将789mg (2. 5mmo1) Boc-Asp(0cHex) -0H溶于10 ml无水THF,冰浴下 往里加10ml含338mg (2. 5,ol) H0Bt禾卩619mg (3匪o1) DCC的无水THF 溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。
将668mg (2. 3腿o1) HC1 Phe-0Bzl和232mg (2. 3腿o1) N-甲基吗啉先 与6ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。得到的反应混合 物室温反应24小时。TLC (展开剂氯仿甲醇=10: 1)显示HC1 *Phe-OBzl 消失。反应混合物减压浓縮至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤 液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用 无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37'C减压浓縮，得1.242g (98.1%)标题化 合物，为无色固体。ESI-MS(m/z) 553[M+H]+。
3) 制备HC1 Asp(0cHex)-Phe-OBzl
将1.381g (2. 5腿o1) Boc-Asp(OcHex)-Phe-OBzl与15ml氯化氢-乙酸 乙酯液(4N)的混合物室温搅拌3小时，TLC (展开剂氯仿甲醇=10: 1) 显示Boc-Asp(OcHex)- Phe-0Bzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙 醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲 磨洗，将无水乙醚倾出，反复5次。得到的标题化合物直接用于下步反应。
4) 制备Boc-Gly-Asp (OcHex) -Phe-OBzl
将438rag (2. 5mmo1) Boc-Gly-OH溶于5 ml无水THF，冰浴下往里加10ml 含338mg (2. 5腿o1) H0Bt和619mg (3腿o1) DCC的无水THF溶液。反应混 合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。
将1. 124g (2, 3腿o1) HC1 Asp(OcHex)—Phe—OBzl禾Q 232mg (2. 3mmol) N-甲基吗啉先与10ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯溶液混溶。 得到的反应混合物室温反应24小时。TLC (展开剂氯仿甲醇二IO: 1)显示 HC1 Asp(0cHex)-Phe-OBzl消失。反应混合物减压浓縮至干，残留物用乙 酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水 溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液3/C减压浓縮， 得1.275g (91%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z) 632 [M+Na]+。
5) 制备HC1 Gly-Asp(0cHex)-Phe-OBzl
将1.524g (2.5腿o1) Boc-Gly-Asp (OcHex)-Phe-OBzl与15ml氯化氢-乙酸乙酯液(4N)的混合物室温搅拌3小时，TLC (展开剂氯仿甲醇=10:1)显示Boc-Gly-Asp(0cHex)-Phe-0Bzl消失。用水泵将反应液抽干，加入 无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗， 塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复5次。得到的标题化合物直接用于下步 反应。
6)制备Boc-Arg (Tos) -Gly-Asp (0cHex) -Phe-0Bzl
将1.071g (2. 5腿o1) Boc Arg(Tos)-OH溶于10 ml无水THF，冰浴下往 里加10ml含338mg (2. 5腿o1) HOBt和619mg (3. O腿ol) DCC的无水THF 溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。
将L 256g (2. 3mmo1) HC1 Gly-Asp (OcHex) -Phe-OBzl和232mg (2. 3腿o1) N-甲基吗啉先与10ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯 溶液混溶。得到的反应混合物室温反应24小时。TLX (展开剂氯仿甲醇=10:
1) 显示HCl Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl消失。反应混合物减压浓縮至干， 残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水溶液和饱 和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液3/C 减压浓縮，得1.925g (91%)标题化合物，为无色固体。Mp88 89°C; [a]D =-10. 8426 (c=0. 10， CHC13); ESI-MS(m/z) 943 [M+Na]+。
实施例7 3S-6， 7- 二羟基-1， 2， 3， 4-四氢异喹啉-3-甲酰基 -Arg-Gly-Asp-Ser-OH (la)的制备 1)制备HCl Arg (N02)-Gly-Asp (OBzl)-Ser (Bzl)-0Bzl
将2. 121g (2. 5画1) Boc-Arg(N02)-Gly_Asp(OBzl)-Ser(Bzl)-0Bzl与 10ml氯化氢-乙酸乙酯液(4N)的混合物室温搅拌3小时，TLC (展开剂氯仿 甲醇=10: 1)显示Boc-Arg (N02)-Gly-Asp (OBzl)-Ser (Bzl)-OBzl消失。用水 泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残 留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复5次。得到的标 题化合物直接用于下步反应。
2) 制备3S-2-叔丁氧羰基-1，2，3，4-四氢-6，7-二羟基异喹啉-3-甲酰基 -Arg (N02) -Gly- Asp (OBzl) -Ser (Bzl) -OBzl
将772. 5mg (2. 5匪o1) 3S-2-叔丁氧羰基-l， 2， 3， 4-四氢-6， 7-二羟基-异喹啉-3-羧酸溶于6 ml无水THF，冰浴下往里加10ml含338mg (2. 5腿o1) H0Bt和619mg (3. Ommol) DCC的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液，待用。
将l,85g (2.3rnrno1) HC1 Arg(N02)-Gly-Asp(0Bzl)-Ser(Bzl)-0Bzl和 232mg (2.3mmol) N-甲基吗啉先与10ml无水THF混溶，然后与上面待用的 活泼酯溶液混溶。得到的反应混合物室温反应24小时。TLC (展开剂氯仿 甲醇=10: l)显示HCl' Arg(N02)-Gly-Asp(0Bz1)-Ser(Bzl)-OBzl消失。反 应混合物减压浓縮至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用 饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸 钠干燥、过滤、滤液37"C减压浓縮，硅胶柱纯化，得1.6g (67%)标题化合 物，为无色固体。Mp 111_113°C; [a]D=-3L5(c二0. 12， CH30H) ESI-MS(m/z) 1041 [M+H]+。
3 )制备3S-6， 7- 二羟基-1， 2， 3， 4-四氢异喹啉-3-甲酰基 一Arg-Gly-Asp-Ser-OH
将2.60g (2.5,1) 3S-2-叔丁氧羰基-6， 7-二羟基-1, 2, 3， 4-四氢异喹 啉-3-甲酰基-Arg(N02)-Gly-Asp(0Bz1)-Ser(Bzl)-OBzl溶于20ml水和乙醇 的混合液，再加入300 mg Pd/C (5%)，减压排出反应瓶中的空气，通入氢 气置换，反复置换5次后，通氢气室温搅拌24小时，TLC (展开剂氯仿甲 醇=1: 1)显示3S-2-叔丁氧羰基-6，7-二羟基-1，2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酰 基-Arg(N02)_Gly-Asp(0Bz1)-Ser(Bzl)-OBzl消失。停止反应，滤除Pd/C， 滤液减压浓縮除去溶剂。得1.63g (90%)标题化合物，为淡黄色固体。
将1. 81g (2. 5國1) 3S-2-叔丁氧羰基-6， 7-二羟基-l， 2， 3， 4-四氢异喹 啉_3-甲酰基-Arg-Gly-Asp-Ser-OH与20ml氯化氢-乙酸乙酯液(4N)的混合 物室温搅拌3小时，TLC (展开剂氯仿甲醇=1: 1)显示3S-2-叔丁氧羰基 -6， 7-二羟基-l， 2， 3， 4-四氢异喹啉-3-甲酰基-Arg-Gly-Asp-Ser-OH消失。用 水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。 残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复5次。得 1.48g(95%) Mp 182-183°C; [a ]D=-7. 1667(c=0. 12， CH30H) ESI-MS(m/z)626 [M+H] +
实施例8 3S-6， 7- 二羟基-1， 2， 3， 4-四氢异喹啉_3_甲酰基 -Arg-Gly-Asp-Val-OH (lb)的制备1) 制备HC1 Arg (N02) -Gly-Asp (0Bzl) -Val-0Bzl
将1.596g (2. 5讓o1) Boc-Arg(N02)-Gly-Asp(0Bz1)-Val-0Bzl与15ml 氯化氢-乙酸乙酯液(4N)的混合物室温搅拌3小时，TLC (展开剂氯仿甲 醇=10: 1)显示Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。用水泵将反应液抽干，加 入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗， 塑料l产磨洗，将无水乙醚倾出，反复5次。得到的标题化合物直接用于下步 反应。
)2)制备3S-2-叔丁氧羰基-6， 7-二羟基-1， 2， 3， 4-四氢异喹啉_3-甲酰基 -Arg (N02) -Gly-Asp (0Bzl) -Val-0Bzl
将772. 5mg (2.5mmol) 3S-2-叔丁氧羰基-6， 7-二羟基-1， 2， 3， 4-四氢异 喹啉_3-羧酸溶于6 ml无水THF，冰浴下往里加10ml含338mg (2. 5麗o1) H0Bt和619mg (3.0rnrno1) DCC的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌20分
钟，得对应的活泼酯溶液，待用。
将1.625g (2.3腿o1) HC1 H-Arg(N02)_Gly-Asp(0Bzl)-Val-OBzl和 232mg (2.3mmol) N-甲基吗啉先与10ml无水THF混溶，然后上面待用的活 泼酯溶液混溶。得到的反应混合物室温反应24小时。TLC (展开剂氯仿甲 醇=10: 1)显示HCl Arg(N02)-Gly-Asp (OBzl)-Val-OBzl消失。反应混合物 减压浓縮至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸 氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、 过滤、滤液37'C减压浓縮，硅胶柱纯化，得1.6g (67%)标题化合物，为 无色固体。Mpl80-182°C; [a]D=-20. 0 (c=0. 11， CH30H); ESI-MS(m/z) 962 [M+H]+。
3) 制备 3S-1，2，3，4-四氢-6,7- 二羟基-异喹啉_3-酰基 -Arg-Gly-Asp-Val-OH
将2.403 g (2. 5画1) 3S-2-叔丁氧羰基-6，7-二羟基-1，2，3，4-四氢异 喹啉-3-甲酰基-Arg(N02) -Gly-Asp (OBzl)-Val-OBzl溶于20ml水和乙醇的混 合液，再加入300 mg Pd/C (5%)，减压排出反应瓶中的空气，通入氢气置 换，反复置换5次后，通氢气室温搅拌24小时，TLC(展开剂氯仿甲醇=1: 1)显示3S-2-叔丁氧羰基-6，7-二羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-甲酰基 -Arg(N0》-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl消失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓缩除去溶剂。得1.56g (92%)标题化合物，为淡黄色固体。
将1. 84g (2. 5腿o1) 3S-2-叔丁氧羰基-6， 7-二羟基-l， 2， 3， 4-四氢异喹 啉-3-甲酰基-Arg-Gly-Asp-Val-OH与20ml氯化氢-乙酸乙酯液(4N)的混合 物室温搅拌3小时，TLC (展开剂氯仿甲醇=1: 1)显示3S-2-叔丁氧羰基 -6， 7-二羟基-1， 2, 3， 4-四氢异喹啉-3-甲酰基-Arg-Gly-Asp-Val-0H消失。用 水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。 残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复5次。得 1.48g(93%) Mp 180-182°C; [a]D=-13,9 (c二O. 11， CH3OH); ESI-MS(m/z) 638 [M+H]+。
实施例9 3S-6，7-二羟基-1，2,3，4-四氢异喹啉-3-甲酰基-Arg-Gly-Asp-Phe-OH (Ic)
1)制备3S-2-(叔丁氧羰基)-6， 7-二羟基-l， 2， 3， 4-四氢异喹啉-3-甲酰基 -Arg(N02) - Gly-Asp(OBzl) -Phe-OBzl
将2. 121g (2.5,1) Boc-Arg(N02)-Gly-Asp (OBzl)-Phe-OBzl与10ml 氯化氢-乙酸乙酯液(4N)的混合物室温搅拌3小时，TLC (展开剂氯仿甲 醇=1: 1)显示Boc- Arg(N02)_Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl消失。用水泵将反 应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用 无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复5次。得到的标题化合 物直接用于下步反应。
将772.5mg (2. 5腿o1) 3S-6， 7-二羟基-l， 2， 3， 4-四氢异喹啉-3-羧酸溶 于6 ml无水THF，冰浴下往里加10ml含338mg (2. 5腿o1) HOBt禾卩619mg (3.0mmo1) DCC的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的
活泼酯溶液，待用。
将1. 736g(2. 3mmol)HCl'H-Arg(N02)-Gly-Asp (OBzl)-Phe-OBzl和232mg (2. 3mmol) N-甲基吗啉先与10ml无水THF混溶，然后与上面待用的活泼酯 溶液混溶。得到的反应混合物室温反应24小时。TLC (展开剂氯仿甲醇二IO: 1)显示HCl'H-Arg(NO》-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl消失。反应混合物减压浓 縮至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠水 溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液37°C减压浓縮，硅胶柱纯化，得1. 6g (67% )标题化合物，为无色固体。 Mp 108-109°C， [a]u=-8. 7 (c二O. 10, CH30H); ESI-MS(m/z) 1010[M+H]+。 2) 制备3S-6，7- 二羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-甲酰基 -Arg-Gly-Asp-Phe-OH
将2. 523g (2. 5mmol) 3S-2-(叔丁氧羰基)-6， 7-二羟基-l， 2， 3, 4-四氢异 喹啉-3-甲酰基-Arg (N02) -Gly-Asp (OBzl) -Phe-OBzl溶于20ml水和乙醇的混 合液，再加入300 mg Pd/C (5%)，减压排出反应瓶中的空气，通入氢气置 换，反复置换5次后，通氢气室温搅拌24小时，TLC(展开剂氯仿甲醇二10: 1)显示3S-2-(叔丁氧羰基)-6，7-二羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-甲酰基 -Arg(NO》-Gly-Asp(0Bz1)-Phe-OBzl消失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压 浓縮除去溶剂。得1.84g (94%)标题化合物，为淡黄色固体。
将1. 96g (2. 5腿o1) 3S-2-(叔丁氧羰基)-6， 7-二羟基-l， 2， 3， 4-四氢异 喹啉-3-甲酰基-Arg-Gly-Asp-Phe-0H与20ml氯化氢-乙酸乙酯液(4N)的混 合物室温搅拌3小时，TLC(展开剂氯仿甲醇=1: 1)显示3S-2-(叔丁氧羰 基)-6, 7-二羟基-1， 2， 3， 4-四氢异喹啉-3-甲酰基-Arg-Gly-Asp-Phe-OH消 失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复 5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复5次。 得1, 64 g(96%) Mp 152-153; [ a ]D=-12. 4 (c=0. 11， CH3OH); ESI-MS(m/z) 685 [M+H]+。
实施例10 3S-2- (Arg-Gly-Asp-Ser) -6， 7_二羟基-1， 2， 3， 4-四氢异喹啉-3-羧酸(IIa)的制备
1) 制备Boc-Arg (Tos) -Gly-Asp (OcHex) -Ser (Bzl) -OH
将2. 375g(2. 5,ol) Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp (OcHex)-Ser (Bzl)-OBzl溶 于20ml水和乙醇的混合液，再加入300 mgPd/C (5。％)，减压排出反应瓶中 的空气，通入氢气置换，反复置换5次后，通氢气室温搅拌24小时，TLC (展 开剂氯仿甲醇二l: 1)显示Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser (Bzl)-0Bzl 消失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓縮除去溶剂。得1.892 g (88%) 标题化合物，为淡黄色固体。
2) 制备3S-2-[(Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(0cHex)-Ser(Bzl)]- 6，7-二羟基-1， 2， 3， 4-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯
将2. 152g (2.5mrno1) Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OH溶 于15 ml无水THF，冰浴下往里加10ml含338mg (2. 5mmol) HOBt和619mg (3.0mmol) DCC的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的
活泼酯溶液，待用。
将687. 7mg (2. 3mmol) 3S_6, 7_二羟基-1， 2， 3, 4_四氢异喹啉-3-羧酸苄 酯和232mg (2. 3mmo1) N-甲基吗啉先与10ml无水THF混溶，然后与上面待 用的活泼酯溶液混溶。得到的反应混合物室温反应24小时。TLX (展开剂氯 仿甲醇=10: 1)显示3S-6，7-二羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯消 失。反应混合物减压浓縮至干，残留物用氯仿溶解，滤除不溶物。滤液依次 用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的氯仿层用无水硫酸钠 干燥、过滤、滤液37'C减压浓縮，硅胶柱纯化，得L 682g (59%)标题化合 物，为无色固体。Mpl01-103°C; [a ]d二-5. 7( ) ; ESI-MS(m/z)1140[M+H] + 3)制备3S-2-(Arg-Gly-Asp-Ser)-6，7-二羟基-1,2, 3，4-四氢异喹啉-3-羧 酸
将0. 305g(0. 25腿ol)3S-2-[(Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(0cHex) -Ser(Bzl)) - 6， 7-二羟基-1， 2， 3， 4-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯置于100ml圆底烧瓶，冰浴 下加入2ml三氟乙酸后，滴加6ml三氟乙酸/三氟甲磺酸二3: 1的混合液，冰 浴下搅拌2小时后，加入50ml无水乙醚，有白色沉淀析出，将乙醚溶液倾 出，反复10次，旋干，G-10柱纯化，得150mg(95. 5%) 。 Mp 150-154; [a]D =-13. 3 (c=0. 10， CH30H); ESI-MS(m/z) 626[M+H]+。
实施例11 3S-2- (Arg-Gly-Asp-Val) -6， 7-二羟基-1， 2, 3， 4-四氢异喹啉-3-羧酸(lib)的制备
1)制备Boc-Arg (Tos) -Gly-Asp (0cHex) -Val-OH
将2. 180g(2. 5mmol) Boc-Arg (Tos)-Gly-Asp (0cHex) -Val-0Bzl溶于 20ml水和乙醇的混合液，再加入300 mgPd/C (5。％)，减压排出反应瓶中的 空气，通入氢气置换，反复置换5次后，通氢气室温搅拌24小时，TLC (展 开剂氯仿甲醇=10: 1)显示Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(0cHex)-Va卜0Bzl消 失。停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓縮除去溶剂。得1.642 g (84%)标题化合物，为淡黄色固体。
2) 制备3S-2-[ Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(0cHex)-Val]-6， 7-二羟基-1， 2， 3， 4-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯
将2. 205g(2. 5ramol)Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(0cHex)-Val-0H溶于15 ml 无水THF，冰浴下往里加10ml含338mg (2. 5画1) H0Bt和619mg (3. O腿ol) DCC的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液， 待用。
将687. 7mg (2. 3mmo1) 3S-6， 7-二羟基-1， 2， 3， 4-四氢异喹啉-3-羧酸苄 酯和232mg (2. 3ramo1) N-甲基吗啉先与10ml无水THF混溶，然后与上面待 用的活泼酯溶液混溶。得到的反应混合物室温反应24小时。TLC (展开剂氯 仿甲醇二10: 1)显示3S-6，7-二羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯消 失。反应混合物减压浓縮至干，残留物用氯仿溶解，滤除不溶物。滤液依次 用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的氯仿层用无水硫酸钠 干燥、过滤、滤液3/C减压浓縮，硅胶柱纯化,得1.53g (53%)标题化合 物，为无色固体。Mp 123-125°C; [a]D=-26. 0(c=0. 11， CHC13); ESI-MS(m/z) 1063 [M+H]+。
3) 备3S-2- (Boc-Arg-Gly-Asp-Val) - 6， 7-二羟基-1， 2， 3， 4-四氢异喹 啉-3-羧酸
将0.2657g (0.25讓o1) 3S-2-[ Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(0cHex)-Val]-6， 7-二羟基-1， 2， 3， 4-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯置于100ml圆底烧瓶，冰浴下加入 2ml三氟乙酸后，滴加6ml三氟乙酸/三氟甲磺酸^: 1的混合液，冰浴下搅 拌2小时后，加入50ml无水乙醚，有白色沉淀析出，将乙醚溶液倾出，反 复10次，旋干，走G-10纯化，得140. 14mg(88%)。 Mp 190-192。C; [a]D =-5.2 (c=0. 11， CH30H); ESI-MS(m/z) 637[M+H]+。
实施例12 3S-2- (Arg-Gly-Asp-Phe) _6， 7_二羟基-1， 2， 3， 4-四氢异喹啉-3-羧酸(lie)的制备
1)制备Boc-Arg (Tos) -Gly-Asp (OcHex) _Phe_0H
将2. 299g(2. 5匪o1) Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(0cHex)-Phe-OBzl溶于 20ml水和乙醇的混合液，再加入300 mg Pd/C (5%)，减压排出反应瓶中的空气，通入氢气置换，反复置换5次后，通氢气室温搅拌24小时，TLC (展 开剂氯仿甲醇二l: 1)显示Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(0cHex)-Phe-0Bzl消失。 停止反应，滤除Pd/C，滤液减压浓縮除去溶剂。得1.847 g (89%)标题化 合物，为淡黄色固体。
2) 制备3S-2-[ Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(0cHex)-Phe] -6，7-二羟基 -1， 2， 3， 4-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯
将2. 050g (2. 5臓o1) Boc-Arg (Tos) -Gly-Asp (0cHex) -Phe-0H溶于15 ml 无水THF,冰浴下往里加10ml含338mg (2. 5mmo1) H0Bt和619mg (3. Ommol) DCC的无水THF溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液， 待用。
将687. 7mg (2. 3圆1) 3S-6， 7-二羟基-1， 2， 3， 4-四氢异喹啉-3-羧酸苄 酯和232mg (2. 3腿o1) N-甲基吗啉先与10ml无水THF混溶，然后与上面待 用的活泼酯溶液混溶。得到的反应混合物室温反应24小时。TLC (展开剂氯 仿甲醇=10: 1)显示3S-6，7-二羟基-l，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯消 失。反应混合物减压浓縮至干，残留物用氯仿溶解，滤除不溶物。滤液依次 用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗。分出的氯仿层用无水硫酸钠 干燥、过滤、滤液37°C减压浓縮，硅胶柱纯化，得1.26g (46%)标题化合 物，为无色固体。Mp 110-112°C; [a ]。=-14. 9(c二0. 12， CHC13); ESI-MS(m/z) 1112 [M+H]+。
3) 制备3S-2- (Arg-Gly-Asp-Phe) -6， 7-二羟基- 1， 2， 3， 4-四氢异喹啉 -3-羧酸将0. 2778g (0, 25mmo1) 3S-2- [ Boc-Arg (Tos) -Gly-Asp (0cHex) -Phe] -6， 7-二羟基-1， 2， 3， 4-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯置于100ml圆底烧瓶，冰浴 下加入2ml三氟乙酸后，滴加6ml三氟乙酸/三氟甲磺酸^3: 1的混合液，冰 浴下搅拌2小时后，加入50ml无水乙醚，有白色沉淀析出，将乙醚溶液倾 出，反复10次，旋干，G-10柱纯化，得0. 1428g(84%)标题化合物。Mp 174-176。C;;[a ]。=-4. 0 (c二O. 10， CH30H); ESI-MS(m/z) 685 [M+H]+。
试验例l本发明通式I (la-c)和通式I化合物(Ila-c)抗血栓活性测定 1)实验动物SD雄性大鼠，体重200-260g (购自北京医科大学实验动物部，许可证号为医动字第01-3056)
2) 实验材料聚乙烯管(外径1.6ram及1.3mm两种)、肝素(50IU/ml)、 戊巴比妥钠(5%)。
3) 测定方法
雄性SD大鼠(体重200 g至260 g)腹腔注射戊巴比妥钠溶液进行麻醉， 分离出右颈总动脉和左颈外静脉，在聚乙烯管的中段放入事先称重的6cm长 的丝线，以肝素生理盐水(50IU/kg)充满聚乙烯管，将一端插入左颈外静脉， 用注射器将生理盐水(3ml/kg)，阿司匹林的生理盐水溶液(20mg/kg)，分别 将本发明实施例所制备的Ia、 Ib、 Ic、 IIa、 IIb或IIc (5umol/kg)的生 理盐水溶液从另一端缓慢注入聚乙烯管中，此时管中原有的肝素己被推入左 颈外静脉中，管内大部分为被测化合物溶液，然后将注射药物端插入右颈总 动脉。血液从右颈总动脉经聚乙烯管流向左颈外静脉，15min后中断血流， 取出丝线称重，总重量减去丝线重量即为血栓湿重，统计各组的血栓湿重的 均值和标准差OT士S)，并作t检验。
4)结果见表l。无论异喹啉羧酸的2位还是3位引入RGD肽都明显增 强抗血栓活性。
表1 Ia-c和IIa-c的抗血栓活性
组别X土Smg
生理盐水24.76±1.85
阿司匹林8.13±1.01b
异喹啉羧酸15.36±3.12a
RGDS18.82±2.25a
RGDV20.58±2.10a
RGDF16.35±2.56a
Ia12.16±3.44b
Ib11.99±0.85b
Ic13.84±2.05b
IIa11.76±1.76b
lib12.29±1.06b
IIc12.89±2.01bn=10，阿司匹林的剂量-20mg/kg; RGDS， RGDV， RGDF，异喹啉羧酸，Ia-c或IIa-c的剂量= 5/miol/kg; a)与生理盐水组比pO.01; b)与生理盐水组，异喹啉羧酸，RGDS， RGDV 禾口RGDF组比pO.Ol。
权利要求
1、通式I的化合物通式I其中，AA选自Ser、Val或Phe残基。
2、 通式II的化合物<formula>formula see original document page 2</formula>通式II其中AA选自Ser、 Val或Phe残基。
3、 一种制备权利要求1所述通式I化合物的方法，包括(1) 按照常规方法分别制备下述3种短肽Arg-Gly-Asp-Ser-0H、 Arg-Gly-Asp-Val-0H、 Arg-Gly-Asp-Phe-0H;将上述3种短肽的C-端和侧链分别用保护基进行保护；(2) 按照常规方法制备3S-6， 7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸，然后苄 基化制备3S-6， 7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯或3S-2-Boc-6， 7-二羟基 四氢异喹啉-3-羧酸；(3) 按照常规方法将C-端和侧链保护的Arg-Gly-A印-Ser-0H、 Arg-Gly-Asp- Val-0H或Arg-Gly-Asp-Phe-OH分别连接到3S-2-Boc_6， 7-二 羟基四氢异喹啉-3-羧酸的3-羧基上、脱去所有保护基，得到通式I化合物。
4、 一种制备权利要求2所述通式II化合物的方法，包括(1) 按照常规方法分别制备下述3种短肽Arg-Gly-Asp-Ser-0H、 Arg-Gly-Asp-Val-0H、 Arg-Gly-Asp-Phe-0H;将上述3种短肽的N-端和侧链分别用保护基进行保护；(2) 按照常规方法制备3S-6， 7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸，然后苄 基化制备3S-6， 7-二羟基-四氢异喹啉-3-羧酸苄酯或3S-2-Boc-6， 7-二羟基 四氢异喹啉-3-羧酸；(3) 按照常规方法将N-端和侧链保护的Arg-Gly-Asp-Ser-0H、Arg-Gly-Asp-Val-0H或Arg-Gly-Asp-Phe-OH分别连接到3S-6， 7-二羟基-四 氢异喹啉-3-羧酸苄酯的2位氮上、脱去所有保护基，得到通式II化合物。
5、 按照权利要求3或4的方法，其特征在于所述的3S-6，7-二羟基 -四氢异喹啉-3-羧酸由左旋多巴与甲醛縮合制备得到。
6、 一种治疗抗血栓药物组合物，由有效量的权利要求1所述的通式 I化合物和药学上可接受的载体或辅料组成。
7、 一种治疗抗血栓药物组合物，由有效量的权利要求2所述的通式 II化合物和药学上可接受的载体或辅料组成。
8、 权利要求1所述的通式I化合物在制备抗血栓药物中的用途。
9、 权利要求2所述的通式II化合物在制备抗血栓药物中的用途。
全文摘要
本发明公开了具有抗血栓活性的通式I和通式II化合物，其制备方法以及它们作为抗血栓剂的应用。采用大鼠颈动静脉旁路插管血栓模型上评价了通式I以及通式II化合物的抗血栓活性，实验结果表明，本发明通式I或通式II化合物均具有优秀的抗血栓活性，临床上可作为抗血栓剂应用。
文档编号C07K7/06GK101318995SQ20071010003
公开日2008年12月10日 申请日期2007年6月4日 优先权日2007年6月4日
发明者崔国辉, 彭师奇, 斌 杨, 明 赵 申请人:北京大学