专利名称：：蓖麻碱的镇痛用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及蓖麻碱的药用用途，尤其涉及蓖麻碱的镇痛用途。技术背景蓖麻子来源于大戟科蓖麻属植物RicinuscommunisL.的种子，又名大麻子、天麻子果等。最早见于《唐本草》，尔后《大明日华诸家本草》、《本草纲目》、《本草逢源》和《本草求真》等本草专著均有较详尽的叙述，《中国药典》I部亦收载过，主要功效为消肿拨毒，润肠通便。蓖麻碱(Ricinine)是1864年Tuson首次从蓖麻籽种分离出来的一种生物碱。化学名3-氰基-4-甲氧基-l-甲基-2-吡啶酮，分子式为C8H8N202，为白色针状或柱状晶体，熔点201.5°C。易溶于热水和三氯甲烷，在热乙醇中亦有一定的溶解度，在乙醚、石油醚和苯中溶解度很小。在水溶液中呈中性，与酸不易形成盐。因其分子中含氰基，所以毒性很大(小鼠的LD5oIP为25mg《g勺。临床表现是呕吐，血压下降，呼吸抑制。蓖麻碱存在于蓖麻的茎叶、籽实和籽壳中，其在茎叶中含量为0.7~1.0%，籽实中含量为0.1~0.2%，籽壳中含量为1.5%。蓖麻碱是蓖麻中的主要毒素之一，在药理方面，一般具有以下所述的活性。蓖麻碱具有一定的肝保护作用(TripathiBK，SrivastavaS，RastogiR，，etal.Hepatoprotectionby3-bromo-6画(4-chlorophenyl)-4-methylthio-2H-pyran-2-oneagainstexperimentallyinducedliverinjuryinrate[J].ActaPharm，2003，53(2):91國100)和中枢神经兴奋作用(FerrazAC，AngelucciME,daCostaML,,etal.Pharmacologicalevaluationofricinine,acentralnervoussystemstimulantisolatedfromRicinuscommunis[J].PharmacolBiochemBehav，1999，63(3):367画375)。Ferraz等在被动回避实验中给小鼠SC蓖麻碱，结果发现，在低剂量时(SC:0.10-0.12mg'Kg"),蓖麻碱具有改善记忆的作用，其剂量-效应关系呈U型曲线，是具有认知加强作用的中枢神经刺激剂的典型曲线。蓖麻碱有较髙的治疗指数(LD50/ED5()=200)，而且在十字迷宫实验中没有表现出致焦虑的效果，也没有神经安定(neuroleptic-like)特性。多数改善记忆力的化合物在大剂量时都有致惊厥作用，蓖麻碱也同样如此。较大剂量(SC:40mg《g")时可作为工具药，用于制备癲痫动物模型来筛选抗惊厥药(FerrazAC,PereiraLF,RibeiroRL,etal.Ricinine國elicitedseizures,Anovelchemicalmodelofconvulsiveseizures[J],PharmacolBiochemBehav,2000,65(4):577-583.)。蓖麻碱或类似化合物可能是一种新的具有加强记忆药理活性的物质(LiuXiao,LiDuan.Biologicalactivityofricinineandoutlookofitsapplieddevelopment[J].ChinJPharmacolToxicol(中国药理学与毒理学杂志)，2006，20(1):76-78)。截至目前为止，所发现的蓖麻碱的药理活性限于上述内容。例如，申请号分别为97119963.9、200410077426.3和200610035170.9的中国专利申请都只是应用了蓖麻碱的毒性。目前，国际上镇痛药物大体有两类一是吗啡类，因其具有成瘾性，在使用上受到很大限制；另一类是阿司匹林类，因镇痛作用弱而难以发挥作用。对于经受疼痛，尤其是剧烈疼痛的患者，例如癌症晚期患者，由于疼痛难熬而致生活质量和生存质量下降，而上述所提及的两类药物都难以满足此类患者的需求。
发明内容本发明解决的技术问题在于，发现蓖麻碱具有镇痛活性，由此蓖麻碱可用于镇痛。本发明所解决的另一技术问题在于，提供一种镇痛用药物组合物，其含有蓖麻碱。本发明所解决的再一技术问题在于，提供一种从含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液，其用于制备蓖麻碱或上述含有蓖麻碱的药物组合物。本发明所解决的又一技术问题在于，提供从上述含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液制备蓖麻碱的方法。本发明是通过以下技术方案实现的，以下对本发明进行详细描述。含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液发明人从蓖麻壳使用水进行提取而得到含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液，经验证，其中含有蓖麻碱，申请人并从其分离提纯得到纯净蓖麻碱。本发明提供了一种从蓖麻壳获得的含有蓖麻碱的提取液，其可以通过将蓖麻壳用水提取，优选在沸腾情况下提取进行制备。提取时间优选2小时以上，更优选3—5小时，最优选4小时左右。对蓖麻壳的提取还可以在或微波或超声下进行，其中微波提取蓖麻壳中蓖麻碱的最优选条件为，蓖麻壳与水的比例为蓖麻壳的质量水的体积约为lg:5mL，提取温度约lOOC提取时间约为30min，微波提取功率600-850W;超声提取蓖麻壳中蓖麻碱的最优选工艺条件为，蓖麻壳与水的比例为蓖麻壳的质量水的体积约为lg:5mL，提取温度约为50'C，提取时间10min，间隔10min，重复三次超声，超声提取功率500W左右。蓖麻碱的制备本发明还提供了从含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液制备蓖麻碱的方法，该方法包括以下步骤将上述提取液过滤，浓縮得到棕黄色膏状物；将膏状物装入滤纸包内，置于索氏脂肪浸提器中内，加入三氯甲垸，回流浸提，收集回流液并蒸出其中的三氯甲垸直至得到黄色固体；将所得到黄色固体用滤纸包好，置于索氏脂肪浸提器中，加入乙醚，回流浸提，基本完全除去脂溶性物质后，弃去承受瓶中的乙醚，再换另一干净脂肪承受瓶，并加入无水乙醇回流浸提，得到乙醇一蓖麻碱溶液，浓縮，冷却静置以结晶析出。其中，三氯甲烷回流浸提优选在30—35C更优选在32X:进行，提取时间没有限制，但是一般说来，当提取时间高于3小时时，提取程度高，很少物料浪费。乙醚回流浸提，提取时间一般不低于3小时，若提取时间低于3小时，可能导致脂溶性物质没有完全去除。乙醇回流浸提，提取时间一般优选不低2小时，使得蓖麻碱能够被尽可能提取出来，以免造成浪费。冷却温度没有特别限制，低于室温即可，然而优选低于10"，更优选低于5匸，还更优选为04'C，最有选为约41C。待析出晶体后将其取出，吸去上层乙醇，吹干余下乙醇，即得到纯净的蓖麻碱晶体。含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液成分的分离和鉴定通过高效液相色谱(HPLC)和高效液相色谱/质谱(HPLC/MS)联用技术对本发明含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液进行分析，使用纯净蓖麻碱作为分析对照标准。通过HPLC和HPLC/MS分析发现，该提取液中主要含有蓖麻碱。具体参见试验例1。蓖麻碱以及含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液的镇痛作用发明人经研究发现，由蓖麻壳经水提取获得的提取液，其具有良好的镇痛作用。经分析和试验验证，其镇痛作用是由于其中所含有的蓖麻碱所致。使用上述提取液和蓖麻碱分别进行小鼠扭体试验，发现两者都能明显降低小鼠扭体次数，扭体反应抑制率高，并且其抑制率随剂量增加而显著提高。具体参见试验例2。动物试验，例如小鼠热板试验和小鼠扭体试验证明，蓖麻碱对于与中枢神经系统和外周神经系统有关的疼痛都有明显的镇痛作用。具体参见试验例2。蓖麻碱的有效镇痛剂量蓖麻碱的半数致死剂量为25mg，kg"。通过小鼠扭体试验发现，当腹腔注射剂量为1.43—4.29mg'kg-'时，既有镇痛作用，并且由于剂量远低于半数致死剂量而具有相当的安全性。含有蓖麻碱的镇痛药物组合物本发明还提供了一种镇痛药物组合物，其含有药学有效量的蓖麻碱作为镇痛活性成分，还可以含有其它药学可接受的药用辅料、载体和赋形剂，甚至其它镇痛试剂，只要其不妨碍蓖麻碱的镇痛活性即可。药用辅料、载体和赋形剂的实例非限定性地包括淀粉、滑石粉、丙二醇、等渗盐水、葡萄糖溶液等。该药物组合物可以制成液体、固体或气体制剂，并可以通过口服或肠胃外给药，优选口服或局部给药，口服制剂的实例非限定性地包括片剂、丸剂、粉剂、液体和食物。肠胃外给药制剂的实例非限定性地包括注射剂、局部给药制剂(例如霜剂、膏剂)和喷雾剂。图1是试验例1中蓖麻碱和含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液的HPLC色谱图图2是试验例1中含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液的HPLC/MS总离子流图具体实施方式下面通过具体实施例来进一步描述本发明，本发明的特点将随着描述而更为清楚。但是，这些实施例仅仅范例性的，并不对本发明的保护范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不违背本发明精神和范围情况下，本发明有多种不同的实施方式，这些均应落入本发明的保护范围内。实施例1含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液的制备取蓖麻壳100g，加水200ml，煮沸4小时，趁热过滤，得滤液10-12ml，得到含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液。实施例2含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液的制备取蓖麻壳200g，加水1000mL,在约IOO'C的温度下进行微波提取，提取时间为30分钟，微波提取功率700W，过滤，得滤液lOOmL，即含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液。实施例3含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液的制备取蓖麻壳200g，加水1000mL，在约50'C的温度下进行超声提取，提取时间10min，间隔10min，重复三次超声，超声提取功率500W左右，过滤，得滤液150mL，即含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液。实施例4从含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液制备蓖麻碱将实施例2所得的蓖麻壳提取液在常压下浓縮，得到棕黄色膏状物。膏状粗提物装入滤纸包内，置索氏脂肪浸提器内加入三氯甲烷回流浸提3小时(321C)。收集回流液并蒸出液中的三氯甲烷直到得到黄色固体。将所得到黄色固体用滤纸包好，置于索氏脂肪浸提器内加入乙醚100ml，回流浸提3小时基本完全除去脂溶性物质后，弃承受瓶中乙醚，再换另一干净脂肪承受瓶并加入100ml无水乙醇回流浸提2小时，得到乙醇一蓖麻碱溶液，收集并蒸发浓縮至3ml左右，置4'C冰箱数天得到蓖麻碱针状结晶。待析出晶体后取出，吸去上层乙醇，余下乙醇用吹风机吹干。称重(瓶+蓖麻碱)59.5280g。在瓶中加入10ml蒸馏水，水浴加热至完全溶解。转移瓶中液体，称重(瓶)59.4994g;.因此蓖麻碱重量0.0286g。蓖麻碱溶液浓度2.86mg/ml，稀释10倍后备用，以后试验例中所用均为经稀释的提取液。试验例1含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液和蓖麻碱的HPLC以及HPLC/MS分析仪器高效液相色谱/质谱联用仪PERKINELMER785AUV/VisDetector;PERKINELMERSeries200Pump;PESCIEXAPI3000LC/MS/MSsystem。高效液相色谱仪Agilent1100series。色谱柱CI8Column(5/mi,4.6x150mm)。HPLC所用流动相乙腈、甲醇等均为HPLC级，购于FisherChemicals公司。流动相流动相15%乙腈和85%水。紫外检测器波长308nm。HPLC以及HPLC/MS分析结果分别见图1和图2。图1是蓖麻碱和含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液HPLC色谱图，色谱图中曲线①为按以上实施例2的方法制备的蓖麻碱标准品的流出曲线，只有一个峰，保留时间为5.7min，色谱图中曲线②为按以上实施例1方法制备的含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液流出曲线，其中在保留时间为5.7min，有一个与曲线①相对应的峰，可以初步判断流出峰为蓖麻碱成分。以蓖麻碱标准品作对照品外标法获得标准曲线f=a+bjc(a=-3899.00，b=50550.77。r=0.993)并测定出蓖麻壳提取物的蓖麻碱含量为0.3736g七"。图2为蓖麻壳提取物HPLC/MS总离子流图，在保留时间5.6min有一最大峰，对其作质谱，正离子质谱图中有m/z为165.0,丰度最高，可以推断为蓖麻碱正离子的m/z比(蓖麻碱分子式为C8HsN202，摩尔质量为1648.11101")，所以保留时间为5.6min时流出成分为蓖麻碱。从图1和图2的蓖麻壳提取物HPLC和HPLC/MS联用技术可以分析得出提取物中的主要成分为蓖麻碱。试验例2含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液以及蓖麻碱的镇痛作用试验动物ICR小鼠，体重1822g，雌雄兼用，用数字表法随机分组(每组10只)。实验动物均由首都医科大学实验动物科学部提供。试验药品冰醋酸(AR)，北京化工厂，临用时配制成1%溶液应用。小鼠热板试验30只小鼠雌雄各半随机分成3组，每组10只。试验前将小鼠置于热板(54士0.5'C)上进行筛选，以小鼠舔后足反应的潜伏期为痛阈指标，将反应潜伏期小于5s或大于30s的小鼠剔除不用。各组小鼠分别腹腔注射(IP)生理盐水、实施例1中含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液O.lmL(相当于蓖麻碱剂量1.87mg/kg)为RD1group、实施例1中含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液0.2mL(相当于蓖麻碱剂量3.74mg/kg)RD2group。分别测定各组小鼠给药前以及给药30min后的痛阈值。结果如下表1所示。表l小鼠热板试验结果(n-lO，S±s)组别剂量(IP/mL)给药前给药30分钟后对照组017.2±4.914.6±3.1RD1group0.117.4±4.225.7±5.7***RD2group0.216.2±10.329.9±9.7糊'P<0.OOl，与对照组相比。可见，含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液能明显抑制热刺激所致的小鼠痛反应。小鼠热板反应一般有高位中枢的参与，本试验结果显示，含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液能剂量依赖性地延长小鼠舔后足的潜伏期，提高其痛阈。推测其镇痛作用可能与中枢神经系统有关。小鼠扭体试验鼠雌雄各半随机分组，每组10只。各组小鼠分别腹腔注射(IP)生理盐水(controlgroup)、实施例1中蓖麻壳提取物O.l迈L(相当于蓖麻碱剂量1.87mg/kg)为RD1group和实施例1中蓖麻壳提取物0.2mL(相当于蓖麻碱剂量3.74mg/kg)为RD2group;纯蓖麻碱剂量1.43mg/kg为PRDlgroup和4.30mg/kg为PRD2group。30min后每只小鼠均腹腔注射in/。冰醋酸溶液0.15mL，以注射后10、30、60rnin内发生扭体的次数为疼痛定量指标，按下式计算蓖麻壳提取液和蓖麻碱对扭体反应的抑制率以评价其镇痛效果抑制率-(生理盐水组扭体均数-试药组扭体均数)/生理盐水组扭体均数xl0()n/。。结果见下表2和表3。表2蓖麻壳提取液的小鼠扭体试验结果(n=10，c土S)组别剂量(IP/mL)扭体次数60rain时的抑制率(％)lOmin30nim60min对照组020.6±4.454.1±17.072.5±32.4—RD1group0.111.3土5.7"25.8±10.5"33.1土12.4"54.3RD2group0.24.4±4.7W#12,3±11.3"*#16.1±16.7"'#77.8'P<0.01，与对照组相比；"'P<0.001，与对照组相比；*P<0.05，与RD1相比从表2可知，小鼠腹腔注射蓖麻壳提取物的实验组比生理盐水对照组的扭体次数显著性减少并且其痛觉抑制率随剂量增加而显著性提高(P<0.001)。表3蓖貝豕碱的小鼠扭体试验结果(n=10，；±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>P<0.001，与对照组相比从表3可知，小鼠腹腔注射纯蓖麻碱组比生理盐水对照组的扭体次数显著性减少，并且其镇痛抑制率随剂量增加而显著性提髙(P<0.001)。小鼠腹腔注射蓖麻壳提取液或蓖麻碱可以剂量依赖性地减少冰醋酸所致小鼠扭体反应次数，因此具有冰醋酸所致疼痛模型中的镇痛作用。推测其镇痛作用可能与外周神经系统有关。化学刺激法是常用的动物疼痛模型，具有敏感度高、重复性好和操作简便等优点。本实验结果显示，小鼠腹腔注射蓖麻壳提取物或蓖麻碱能剂量依赖性地减少冰醋酸所致小鼠扭体反应次数，因此在冰醋酸所引起的外周组织损伤疼痛中有明显的镇痛作用。权利要求1、蓖麻碱在制备镇痛药物中的用途。2、权利要求1的用途，其中所述疼痛与中枢神经系统或外周神经系统有关。3、一种镇痛药物组合物，其含有蓖麻碱作为镇痛活性成分。4、如权利要求3的药物组合物，该药物组合物为口服或肠胃外给药制剂。5、一种含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液，其通过将蓖麻壳用水提取进行制备。6、如权利要求5的含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液，其中提取在沸腾或微波或超声情况下进行。7、一种从权利要求6所述含有蓖麻碱的蓖麻壳提取液制备蓖麻碱的方法，该方法包括将提取液过滤，浓縮得到棕黄色膏状物；将膏状物装入滤纸包内，置于索氏脂肪浸提器中内，加入三氯甲垸，回流浸提，收集回流液并蒸出其中的三氯甲垸直至得到黄色固体；将所得到黄色固体用滤纸包好，置于索氏脂肪浸提器中，加入乙醚，回流浸提，基本完全除去脂溶性物质后，弃去承受瓶中的乙醚，再换另一干净脂肪承受瓶，并加入无水乙醇回流浸提，得到乙醇一蓖麻碱溶液，浓缩，冷却静置以结晶析出。8、如权利要求7的方法，该方法还包括将所得结晶取出，吸去上层乙醇，吹干余下乙醇。9、如权利要求7或8的方法，其中所述冷却的温度为低于IO'C，更优选低于5X:，还更优选为04TC，最有选为约4TC。全文摘要本发明公开了蓖麻碱的镇痛用途。试验发现，蓖麻碱对与中枢神经系统和外周神经系统有关的疼痛都有良好的镇痛作用。本发明还提供了一种含有蓖麻碱的蓖麻壳提取物，由其可以制备纯净蓖麻碱。文档编号C07D213/85GK101129365SQ20071012165公开日2008年2月27日申请日期2007年9月12日优先权日2007年9月12日发明者芳方,珺李,光赵,瑞郭申请人:首都医科大学