专利名称：一种从积雪草总皂苷出发同时制备积雪草苷a与积雪草苷b的方法
技术领域：
本发明涉及一种从积雪草总皂苷出发同时制备积雪草苷A与积雪草苷B的 方法。
背景技术：
积雪草Ce"^/Za aw'加'ca(L. )UrBan为伞形科植物，植物学家林奈(Linnaeus, Carolus)于1764年将积雪草归入天胡荽属(/fydroa 0^)，并定名为/fycfraco^/e w/加'ca L.。在1879年，德国人UrBan根据花瓣的排列以及果实的棱数将其从 天胡荽属中的独立出来并建立积雪草属(<^^&//")，积雪草归入该属并更名为 Cwfe//flay/W/c"(L.)Urb.。积雪草主要分布于南北半球热带和亚热带地区，主产 地为南非、印度、斯里兰卡、马来西亚、印度尼西亚、澳大利亚、日本等，我 国亦产积雪草。积雪草在中国的药用历史已达二千多年之久，民间常用于治疗 感冒、扁桃腺炎、传染性肝炎、痢疾、跌打损伤、疔疮肿毒、外伤出血等。积 雪草现代药理学研究和应用有了很大发展，表明积雪草可用于治疗抑郁症、皮 肤创伤、胃溃疡、传染性肝炎、皮肤病和流行性脑脊髓膜炎等。
积雪草的化学成分复杂，主要有三萜类、黄酮类、挥发油类、多炔烯类等。 其中三萜类化合物是主要的药效成分，包括积雪草苷、积雪草苷A、波热模苷、 波热米苷、参枯尼苷、异参枯尼苷、积雪草酸、羟基积雪草波热米酸、马达积 雪草酸等。积雪草总皂苷是从积雪草中提取得到的皂苷类物质的总称，主要由 三萜苷类物质组成，其中代表性成分主要有积雪草苷(Aisaticoside， CASNo.: 16830-15-2)、积雪草苷A (AsaMcoside A; Madecassoside， CAS No.: 34540-22-2) 和积雪草苷B (AsaiticosideB， CAS No.: 125265-68-1)。积雪草苷A也叫羟基 积雪草苷，积雪草苷B和积雪草苷A是一对同分异构体。积雪草苷A和积雪草 苷B与积雪草苷相比多了一个羟基，极性差异较大，较易实现分离，但积雪草 苷A和积雪草苷B的差异只在于其中一个甲基归属不同，且两个不同的归属处 于邻位关系，这种差异在R基(Glu-Glu-Rha糖键)影响下显得更加微小，因此 积雪草苷A和积雪草苷B的分离非常困难，目前尚无有效的方法报道。
积雪草苷(a)、积雪草苷A(b)与积雪草苷B(c)的结构式分别如下<formula>formula see original document page 5</formula>(a) <formula>formula see original document page 5</formula>(b) <formula>formula see original document page 5</formula>(C)
研究表明，积雪草苷A与积雪草苷B的混合物具有促进伤口愈合、抗皱、 抗炎、抗抑郁、促进智力等药理作用。比较积雪草苷促进伤口愈合，治疗疤痕 的药理作用可以发现，积雪草总皂苷的抗炎、抗抑郁、促进智力等药理作用可 能是积雪草苷A与积雪草苷B起了主要作用。同时还有研究表明，不同浓度以 及不同质量组成的积雪草苷A与积雪草苷B混合物的抗炎药理具有明显的差异， 所以非常有必要分离得到积雪草苷A与积雪草苷B纯品，以进一步研究积雪草 苷A与积雪草苷B的药理作用，为新药的开发提供基础。
发明内容
本发明的目的是提供一种从积雪草总皂苷出发同时制备积雪草苷A与积雪 草苷B的方法。
方法的步骤如下
1) 积雪草总皂苷用甲醇溶解后加入硅胶混合搅拌均匀，蒸干后得拌样硅胶， 积雪草总皂苷与硅胶的质量比例为0.05 0.2: 1;
2) 层析柱中依序加入硅胶和拌样硅胶，采用干法装柱，干法层析柱的高径 比为3 9，硅胶与拌样硅胶的高度比为3 8;
3) 以有机溶剂I一有机溶剂II一水三元混合溶剂为流动相，以0.5-3床层体 积/h的流速洗脱；
4) 洗脱液经TLC分析后合并成三个馏分，馏分l为积雪草苷溶液，馏分2 为积雪草苷、积雪草苷A、积雪草苷B的混合溶液，馏分3为积雪草苷A与积 雪草苷B的混合溶液；
5) 将馏分3真空浓縮、真空干燥后用乙腈一水混合溶剂溶解、过滤后得滤
液；
6) C18硅胶采用湿法装柱，柱子的高径比为4 12，用乙腈一水混合溶剂相 冲洗柱子；
7) 滤液按0.01 0.1 g积雪草苷A与积雪草苷B的混合物/lg C18硅胶的比 例上样，乙腈一水混合溶剂以0.5 3床层体积/h的流速洗脱；
8) 洗脱液经HPLC分析后合并成三个馏分，馏分4为积雪草苷B溶液，馏 分5为积雪草苷B与积雪草苷A的混合溶液，馏分6为积雪草苷A溶液，馏分 4与馏分6经真空浓縮、结晶、真空千燥后分别得积雪草苷B与积雪草苷A产
P
叩 ，
9) C18柱经乙腈一水混合溶剂冲洗再生后可再次上样。
所述歩骤l)中以0.08 0.15 g积雪草总皂苷/lg硅胶的比例加入硅胶搅拌均匀。
步骤3)中有机溶剂I为氯仿或二氯甲烷或乙酸乙酯。 步骤3)中有机溶剂II为甲醇或乙醇。
步骤3)有机溶剂i—有机溶剂n—水三元混合溶剂中有机溶剂i的体积浓度
优选为60~80%。
步骤3)有机溶剂I一有机溶剂II一水三元混合溶剂中有机溶剂II的体积浓 度优选为18~38%。
步骤3)有机溶剂I一有机溶剂II一水三元混合溶剂中水的体积浓度优选为 2 10%。
步骤5)、步骤6)、步骤7)中乙腈一水混合溶剂中乙腈的体积浓度优选为 10~300/0。
步骤7)中滤液按0.02 0.06 g积雪草苷A与积雪草苷B的混合物/lg C18硅
胶的比例上样。
步骤9)中C18柱再生过程为依次用体积浓度为80 95%的乙腈一水和 10 3 0%的乙腈 一 水混合溶剂冲洗。
步骤8)中的真空浓縮、结晶、真空干燥过程如下收集的积雪草苷A与 积雪草苷B洗脱液分别在低于5(TC下真空浓縮至干，以少量甲醇溶解，再加入 8倍量(体积比)的乙酸乙酯结晶，过滤后在低于50。C下真空干燥，分别得积 雪草苷A与积雪草苷B产品。
本发明采用干法和湿法二步层析制备积雪草苷A与积雪草苷B的纯品，具 有工艺过程简单、操作费用低、积雪草苷A与积雪草苷B产品收率和纯度高等 优点，制备得到的纯度95%以上的积雪草苷A与积雪草苷B纯品可用于新药的 开发。
附图是一种从积雪草总皂苷出发同时制备积雪草苷A与积雪草苷B的工艺 流程简图。
具体实施例方式
本发明中C18硅胶的预处理过程C18硅胶在使用前需加甲醇浸泡过夜使
基质上的键合相充分展开，以充分发挥其分离能力。
原料积雪草总皂苷的制备过程:取积雪草干草500g，分别加入6000g， 5000g， 3500g乙醇水溶液浸泡提取三次，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分比为80%, 提取液合并，减压浓縮去除乙醇，得浓縮液2.9L，浓縮液用水稀释后过滤，定 容后得积雪草总皂苷水溶液7.5L，经检测积雪草总皂苷含量为1.5 g/L;在内径 为4 cm的层析柱中装入经预处理的大孔吸附树脂HPD100，树脂柱高为20cm(高 径比为5)，树脂柱的床层体积为251raL;浓縮液以1.5BV/h的流速过层析柱， 至流出液中雪草总皂苷穿透，共加入浓縮液7000mL;先用4个床层体积的水洗 涤树脂柱，接着用乙醇一水混合流动相以2BV/h的流速洗脱积雪草总皂苷，乙 醇一水混合流动相中乙醇的体积百分比为30%，洗脱液经TLC分析后合并，再 经浓縮、结晶、真空干燥后得产品积雪草总皂苷12.3 g，树脂柱纯化过程回收率 为89.5%，经检测产品中积雪草总皂苷质量含量为80.3%。以上过程重复10次， 总共得积雪草总皂苷125.3 g，经检测产品中积雪草总皂苷质量含量为80.7%。
本发明中所用的分析条件如下
薄层色谱(TLC)条件如下硅胶G254薄板，展开剂为正丁醇一乙酸乙酯 —水=4: 1: 5 (取上层溶液使用)，显色剂为10%的浓硫酸乙醇溶液。
高效液相色谱(HPLC)分析条件AgilentllOO液相色谱分析系统，色谱柱为 Phenomenex C-18 column Synergi Fusion - RP 80A (4jx， 150mmx4.60mm ID)，流 动相乙腈一水(20 : 80)，流速0.4 mL/min，柱温20 °C ，紫外检测波长205 nm， 纯度分析使用面积归 一法。 实施例1
取3 g积雪草总皂苷加入烧瓶中，加入100 mL甲醇溶解，再加入60 g硅胶 (拌样比为0.05)，用旋转蒸发器搅拌均匀、真空蒸干后得拌样硅胶;在内径为4cm 的层析柱中加入硅胶，装实后的硅胶高度为12cm，接着加入拌样硅胶，装实后 的拌样硅胶高度为4.0cm (高径比为3，硅胶与拌样硅胶高度比为3，总床层体 积为201ml);以乙酸乙酯—甲醇一水(体积比为15:8:2)三元混合溶剂为流动相， 以1.7mL/min (0.5床层体积/h)的流速洗脱；洗脱液经TLC分析后合并成三个 馏分，馏分l为积雪草苷溶液，馏分2为积雪草苷、积雪草苷A、积雪草苷B
的混合溶液，馏分3为积雪草苷A与积雪草苷B的混合溶液；将馏分3真空浓
缩、真空干燥后得429 mg积雪草苷A与积雪草苷B的混合物；将所得的混合物 用2 mL体积浓度为10%的乙腈一水混合溶剂溶解、过滤后得滤液；内径为2 cm、 高度为8cm的层析柱(高径比4，床层体积25mL，装填C18硅胶量为14 g) 采用湿法装柱，用体积浓度为10%的乙腈一水混合溶剂冲洗柱子；取0.3mL滤 液上样(上样量为0.005 g积雪草苷A与积雪草苷B的混合物/lg C18硅胶)，体 积浓度为10Q/。的乙腈一水混合溶剂以0.2mL/min(0.5床层体积/h)的流速洗脱； 洗脱液经HPLC分析后合并成三个馏分，馏分4为积雪草苷B溶液，馏分5为 积雪草苷B与积雪草苷A的混合溶液，馏分6为积雪草苷A溶液，馏分4经真 空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷B18mg，纯度为96.6%，馏分6经 真空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷A32mg，纯度为98.3%; C18再 生后可重复使用。 实施例2
取3g积雪草总皂苷加入烧瓶中，加入100mL甲醇溶解，再加入43g硅胶 (拌样比为0.07)，用旋转蒸发器搅拌均匀、真空蒸干后得拌样硅胶;在内径为4cm 的层析柱中加入硅胶，装实后的硅胶高度为16cm，接着加入拌样硅胶，装实后 的拌样硅胶高度为4.0cm (高径比为4，硅胶与拌样硅胶高度比为4，总床层体 积为251ml);以乙酸乙酯一乙醇一水(体积比为65:29:6)三元混合溶剂为流动相， 以4.2 mL/min (1床层体积/h)的流速洗脱；洗脱液经TLC分析后合并成三个 馏分，馏分l为积雪草苷溶液，馏分2为积雪草苷、积雪草苷A、积雪草苷B 的混合溶液，馏分3为积雪草苷A与积雪草苷B的混合溶液；将馏分3真空浓 缩、真空干燥后得638 mg积雪草苷A与积雪草苷B的混合物；将所得的混合物 用3 mL体积浓度为15%的乙腈一水混合溶剂溶解、过滤后得滤液；内径为2 cm、 高度为12cm的层析柱(高径比6，床层体积38mL，装填C18硅胶量为21 g) 采用湿法装柱，用体积浓度为15%的乙腈一水混合溶剂冲洗柱子；取1.0mL滤 液上样(上样量为0.01 g积雪草苷A与积雪草苷B的混合物/lg C18硅胶)，体积 浓度为15。/。的乙腈一水混合溶剂以0.6mL/min (1床层体积/h)的流速洗脱；洗 脱液经HPLC分析后合并成三个馏分，馏分4为积雪草苷B溶液，馏分5为积 雪草苷B与积雪草苷A的混合溶液，馏分6为积雪草苷A溶液，馏分4经真空 浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷B51mg，纯度为93.1%，馏分6经真 空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷A88mg，纯度为94.7%; C18再生 后可重复使用。
实施例3
取3 g积雪草总皂苷加入烧瓶中，加入100 mL甲醇溶解，再加入43 g硅胶 (拌样比为0.07)，用旋转蒸发器搅拌均匀、真空蒸干后得拌样硅胶;在内径为4cm 的层析柱中加入硅胶，装实后的硅胶高度为20cm，接着加入拌样硅胶，装实后 的拌样硅胶高度为4.0cm (高径比为5，硅胶与拌样硅胶高度比为5，总床层体 积为301ml);以氯仿一甲醇一水(体积比为35:13:2)三元混合溶剂为流动相，以 7.5mL/min (1.5床层体积/h)的流速洗脱；洗脱液经TLC分析后合并成三个馏 分，馏分l为积雪草苷溶液，馏分2为积雪草苷、积雪草苷A、积雪草苷B的 混合溶液，馏分3为积雪草苷A与积雪草苷B的混合溶液；将馏分3真空浓縮、 真空干燥后得675 mg积雪草苷A与积雪草苷B的混合物；将所得的混合物用3 mL体积浓度为20%的乙腈一水混合溶剂溶解、过滤后得滤液；内径为2cm、 高度为16cm的层析柱(高径比8，床层体积50mL，装填C18硅胶量为28 g) 采用湿法装柱，用体积浓度为20%的乙腈一水混合溶剂冲洗柱子；取2.5mL滤 液上样(上样量为0.02 g积雪草苷A与积雪草苷B的混合物/lg C18硅胶)，体积 浓度为20%的乙腈一水混合溶剂以1.3mL/min (1.5床层体积/h)的流速洗脱； 洗脱液经HPLC分析后合并成三个馏分，馏分4为积雪草苷B溶液，馏分5为 积雪草苷B与积雪草苷A的混合溶液，馏分6为积雪草苷A溶液，馏分4经真 空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷B 143 mg，纯度为95.1%，馏分6 经真空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷A245mg，纯度为96.8%; C18 再生后可重复使用。 实施例4
取5g积雪草总皂苷加入烧瓶中，加入100mL甲醇溶解，再加入56g硅胶 (拌样比为0.09)，用旋转蒸发器搅拌均匀、真空蒸干后得拌样硅胶;在内径为4cm 的层析柱中加入硅胶，装实后的硅胶高度为20cm，接着加入拌样硅胶，装实后 的拌样硅胶高度为4.0cm (高径比为5，硅胶与拌样硅胶高度比为5，总床层体 积为301ml);以氯仿一乙醇一水(体积比为35:13:2)三元混合溶剂为流动相，以 10.0mL/min (2床层体积/h)的流速洗脱；洗脱液经TLC分析后合并成三个馏 分，馏分l为积雪草苷溶液，馏分2为积雪草苷、积雪草苷A、积雪草苷B的 混合溶液，馏分3为积雪草苷A与积雪草苷B的混合溶液；将馏分3真空浓缩、 真空干燥后得916 mg积雪草苷A与积雪草苷B的混合物；将所得的混合物用4 mL体积浓度为25%的乙腈一水混合溶剂溶解、过滤后得滤液；内径为2cm、 高度为20cm的层析柱(高径比10，床层体积63mL，装填C18硅胶量为35 g)
采用湿法装柱，用体积浓度为25%的乙腈一水混合溶剂冲洗柱子；取0.2mL滤 液上样(上样量为0.001 g积雪草苷A与积雪草苷B的混合物/lg C18硅胶)，体 积浓度为25。/。的乙腈一水混合溶剂以2.1mL/min (2床层体积/h)的流速洗脱； 洗脱液经HPLC分析后合并成三个馏分，馏分4为积雪草苷B溶液，馏分5为 积雪草苷B与积雪草苷A的混合溶液，馏分6为积雪草苷A溶液，馏分4经真 空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷B 8 mg，纯度为91.6%，馏分6经 真空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷A14mg，纯度为93.2%; C18再 生后可重复使用。 实施例5
取5g积雪草总皂苷加入烧瓶中，加入100mL甲醇溶解，再加入56g硅胶 (拌样比为0.09)，用旋转蒸发器搅拌均匀、真空蒸干后得拌样硅胶;在内径为4cm 的层析柱中加入硅胶，装实后的硅胶高度为24cm，接着加入拌样硅胶，装实后 的拌样硅胶高度为4.0cm (高径比为6，硅胶与拌样硅胶高度比为6，总床层体 积为352ml);以二氯甲烷一甲醇一水(体积比为75:21:4)三元混合溶剂为流动相， 以14.7mL/min (2.5床层体积/h)的流速洗脱；洗脱液经TLC分析后合并成三 个馏分，馏分1为积雪草苷溶液，馏分2为积雪草苷、积雪草苷A、积雪草苷 B的混合溶液，馏分3为积雪草苷A与积雪草苷B的混合溶液；将馏分3真空 浓缩、真空干燥后得868 mg积雪草苷A与积雪草苷B的混合物；将所得的混合 物用4 mL体积浓度为30%的乙腈一水混合溶剂溶解、过滤后得滤液；内径为2 cm、高度为24cm的层析柱(高径比12，床层体积75 mL，装填C18硅胶量为 42 g)采用湿法装柱，用体积浓度为30%的乙腈一水混合溶剂冲洗柱子；取2.9 mL 滤液上样(上样量为0.015 g积雪草苷A与积雪草苷B的混合物/lg C18硅胶)， 体积浓度为30%的乙腈—水混合溶剂以3.1mL/min (2.5床层体积/h)的流速洗 脱；洗脱液经HPLC分析后合并成三个馏分，馏分4为积雪草苷B溶液，馏分 5为积雪草苷B与积雪草苷A的混合溶液，馏分6为积雪草苷A溶液，馏分4 经真空浓縮、结晶、真空干燥后分得积雪草苷B 140 mg，纯度为88.9%，馏 分6经真空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷A241mg，纯度为90.5%; C18再生后可重复使用。 实施例6
取5g积雪草总皂苷加入烧瓶中，加入100mL甲醇溶解，再加入45g硅胶 (拌样比为0.11)，用旋转蒸发器搅拌均匀、真空蒸干后得拌样硅胶;在内径为4cm 的层析柱中加入硅胶，装实后的硅胶高度为24cm，接着加入拌样硅胶，装实后
的拌样硅胶高度为4.0cm (高径比为6，硅胶与拌样硅胶高度比为6，总床层体 积为352ml);以二氯甲烷一乙醇一水(体积比为40:9:1)三元混合溶剂为流动相， 以17.6mL/min (3床层体积/h)的流速洗脱；洗脱液经TLC分析后合并成三个 馏分，馏分为积雪草苷溶液，馏分2为积雪草苷、积雪草苷A、积雪草苷B 的混合溶液，馏分3为积雪草苷A与积雪草苷B的混合溶液；将馏分3真空浓 縮、真空干燥后得943 mg积雪草苷A与积雪草苷B的混合物；将所得的混合物 用4 mL体积浓度为15%的乙腈一水混合溶剂溶解、过滤后得滤液；内径为2 cm、 高度为12cm的层析柱(高径比6，床层体积38mL，装填C18硅胶量为21 g) 采用湿法装柱，用体积浓度为15%的乙腈一水混合溶剂冲洗柱子；取2.2mL滤 液上样(上样量为0.025 g积雪草苷A与积雪草苷B的混合物/lg C18硅胶)，体 积浓度为15%的乙腈一水混合溶剂以1.9mL/min (3床层体积/h)的流速洗脱； 洗脱液经HPLC分析后合并成三个馏分，馏分4为积雪草苷B溶液，馏分5为 积雪草苷B与积雪草苷A的混合溶液，馏分6为积雪草苷A溶液，馏分4经真 空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷B 123 mg，纯度为91.0%，馏分6 经真空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷A210mg，纯度为92.6%; C18 再生后可重复使用。 实施例7
取5g积雪草总皂苷加入烧瓶中，加入100mL甲醇溶解，再加入45g硅胶 (拌样比为0.11)，用旋转蒸发器搅拌均匀、真空蒸干后得拌样硅胶;在内径为4cm 的层析柱中加入硅胶，装实后的硅胶高度为24cm，接着加入拌样硅胶，装实后 的拌样硅胶高度为4.0cm (高径比为6，硅胶与拌样硅胶高度比为6，总床层体 积为352ml);以乙酸乙酯一甲醇一水(体积比为15:8:2)三元混合溶剂为流动相， 以2.9mL/min (0.5床层体积/h)的流速洗脱；洗脱液经TLC分析后合并成三个 馏分，馏分1为积雪草苷溶液，馏分2为积雪草苷、积雪草苷A、积雪草苷B 的混合溶液，馏分3为积雪草苷A与积雪草苷B的混合溶液；将馏分3真空浓 縮、真空千燥后得931 mg积雪草苷A与积雪草苷B的混合物；将所得的混合物 用5 mL体积浓度为20%的乙腈一水混合溶剂溶解、过滤后得滤液；内径为2 cm、 高度为16cm的层析柱(高径比8，床层体积50mL，装填C18硅胶量为28 g) 采用湿法装柱，用体积浓度为20%的乙腈—水混合溶剂冲洗柱子；取4.5mL滤 液上样(上样量为0.03 g积雪草苷A与积雪草苷B的混合物/lg C18硅胶)，体积 浓度为20。/o的乙腈一水混合溶剂以0.4mL/min (0.5床层体积/h)的流速洗脱； 洗脱液经HPLC分析后合并成三个馏分，馏分4为积雪草苷B溶液，馏分5为
积雪草苷B与积雪草苷A的混合溶液，馏分6为积雪草苷A溶液，馏分4经真 空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷B 225 mg，纯度为97.6%，馏分6 经真空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷A386mg，纯度为99.3%; C18
再生后可重复使用。 实施例8
取6g积雪草总皂苷加入烧瓶中，加入100mL甲醇溶解，再加入46g硅胶 (拌样比为0.13)，用旋转蒸发器搅拌均匀、真空蒸干后得拌样硅胶;在内径为4cm 的层析柱中加入硅胶，装实后的硅胶高度为28cm，接着加入拌样硅胶，装实后 的拌样硅胶高度为4.0cm (高径比为7，硅胶与拌样硅胶高度比为7，总床层体 积为402ml);以乙酸乙酯一乙醇一水(体积比为65:29:6)三元混合溶剂为流动相， 以6.7 mL/min (1床层体积/h)的流速洗脱；洗脱液经TLC分析后合并成三个 馏分，馏分l为积雪草苷溶液，馏分2为积雪草苷、积雪草苷A、积雪草苷B 的混合溶液，馏分3为积雪草苷A与积雪草苷B的混合溶液；将馏分3真空浓 縮、真空干燥后得1254 mg积雪草苷A与积雪草苷B的混合物；将所得的混合 物用5mL体积浓度为25。/。的乙腈一水混合溶剂溶解、过滤后得滤液；内径为2 cm、高度为20cm的层析柱(高径比10，床层体积63 mL，装填C18硅胶量为 35 g)采用湿法装柱，用体积浓度为25%的乙腈—水混合溶剂冲洗柱子;取4.2 mL 滤液上样(上样量为0.03 g积雪草苷A与积雪草苷B的混合物/lg C18硅胶)，体 积浓度为25%的乙腈一水混合溶剂以1.0mL/min (1床层体积/h)的流速洗脱； 洗脱液经HPLC分析后合并成三个馏分，馏分4为积雪草苷B溶液，馏分5为 积雪草苷B与积雪草苷A的混合溶液，馏分6为积雪草苷A溶液，馏分4经真 空浓缩、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷B 254 mg，纯度为92.6%，馏分6 经真空浓缩、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷A435 mg，纯度为94.2%; C18 再生后可重复使用。 实施例9
取6g枳雪草总皂苷加入烧瓶中，加入100mL甲醇溶解，再加入40g硅胶 (拌样比为0.15)，用旋转蒸发器搅拌均匀、真空蒸干后得拌样硅胶;在内径为4 cm 的层析柱中加入硅胶，装实后的硅胶高度为28cm，接着加入拌样硅胶，装实后 的拌样硅胶高度为4.0cm (高径比为7，硅胶与拌样硅胶高度比为7，总床层体 积为402ml);以氯仿一甲醇一水(体积比为35:13:2)三元混合溶剂为流动相，以 10.0 mL/min (1.5床层体积/h)的流速洗脱；洗脱液经TLC分析后合并成三个 馏分，馏分l为积雪草苷溶液，馏分2为积雪草苷、积雪草苷A、积雪草苷B
的混合溶液，馏分3为积雪草苷A与积雪草苷B的混合溶液；将馏分3真空浓
縮、真空干燥后得1608 mg积雪草苷A与积雪草苷B的混合物；将所得的混合 物用8mL体积浓度为15%的乙腈_水混合溶剂溶解、过滤后得滤液；内径为2 cm、高度为12 cm的层析柱(高径比6，床层体积38 mL，装填C18硅胶量为 21 g)采用湿法装柱，用体积浓度为15。/。的乙腈一水混合溶剂冲洗柱子；取3.6mL 滤液上样(上样量为0.035 g积雪草苷A与积雪草苷B的混合物/lg C18硅胶)， 体积浓度为15。/。的乙腈一水混合溶剂以0.9mL/min (1.5床层体积/h)的流速洗 脱；洗脱液经HPLC分析后合并成三个馏分，馏分4为积雪草苷B溶液，馏分 5为积雪草苷B与积雪草苷A的混合溶液，馏分6为积雪草苷A溶液，馏分4 经真空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷B 170 mg，纯度为90.5%,馏 分6经真空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷A291mg，纯度为92.1%; C18再生后可重复使用。 实施例10
取8 g积雪草总皂苷加入烧瓶中，加入100 mL甲醇溶解，再加入53 g硅胶 (拌样比为0.15)，用旋转蒸发器搅拌均匀、真空蒸干后得拌样硅胶;在内径为4cm 的层析柱中加入硅胶，装实后的硅胶高度为32cm，接着加入拌样硅胶，装实后 的拌样硅胶高度为4.6cm (高径比为8，硅胶与拌样硅胶高度比为7，总床层体 积为459ml);以氯仿一乙醇一水(体积比为35:13:2)三元混合溶剂为流动相，以 15.3mL/min (2床层体积/h)的流速洗脱；洗脱液经TLC分析后合并成三个馏 分，馏分1为积雪草苷溶液，馏分2为积雪草苷、积雪草苷A、积雪草苷B的 混合溶液，馏分3为积雪草苷A与积雪草苷B的混合溶液；将馏分3真空浓縮、 真空干燥后得1745 mg积雪草苷A与积雪草苷B的混合物；将所得的混合物用 8tnL体积浓度为20。/。的乙腈一水混合溶剂溶解、过滤后得滤液；内径为2cm、 高度为16cm的层析柱(高径比8，床层体积50mL，装填C18硅胶量为28 g) 采用湿法装柱，用体积浓度为20%的乙腈一水混合溶剂冲洗柱子；取5.8mL滤 液上样(上样量为0.045 g积雪草苷A与积雪草苷B的混合物/lg C18硅胶)，体 积浓度为20%的乙腈一水混合溶剂以1.7mL/min (2床层体积/h)的流速洗脱； 洗脱液经HPLC分析后合并成三个馏分，馏分4为积雪草苷B溶液，馏分5为 积雪草苷B与积雪草苷A的混合溶液，馏分6为积雪草苷A溶液，馏分4经真 空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷B 274 mg，纯度为87.8%，馏分6 经真空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷A470mg，纯度为89.4%; C18 再生后可重复使用。
实施例11
取8g积雪草总皂苷加入烧瓶中，加入100mL甲醇溶解，再加入47g硅胶 (拌样比为0.17)，用旋转蒸发器搅拌均匀、真空蒸干后得拌样硅胶;在内径为4cm 的层析柱中加入硅胶，装实后的硅胶高度为32cm，接着加入拌样硅胶，装实后 的拌样硅胶高度为4.6 cm (高径比为8，硅胶与拌样硅胶高度比为7,总床层体 积为459ml);以二氯甲烷一甲醇一水(体积比为75:21:4)三元混合溶剂为流动相， 以19.1mL/min (2.5床层体积/h)的流速洗脱；洗脱液经TLC分析后合并成三 个馏分，馏分1为积雪草苷溶液，馏分2为积雪草苷、积雪草苷A、积雪草苷 B的混合溶液，馏分3为积雪草苷A与积雪草苷B的混合溶液；将馏分3真空 浓缩、真空干燥后得1770 mg积雪草苷A与积雪草苷B的混合物；将所得的混 合物用8mL体积浓度为25。/。的乙腈一水混合溶剂溶解、过滤后得滤液；内径为 2 cm、高度为20 cm的层析柱(高径比10，床层体积63 mL，装填C18硅胶量 为35 g)采用湿法装柱，用体积浓度为25%的乙腈一水混合溶剂冲洗柱子；取 6.3 mL滤液上样(上样量为0.04 g积雪草苷A与积雪草苷B的混合物/lg C18硅 胶)，体积浓度为25。/。的乙腈一水混合溶剂以2.6mL/min(2.5床层体积/h)的流 速洗脱；洗脱液经HPLC分析后合并成三个馏分，馏分4为积雪草苷B溶液， 馏分5为积雪草苷B与积雪草苷A的混合溶液，馏分6为积雪草苷A溶液，馏 分4经真空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷B316mg，纯度为89.5%， 馏分6经真空浓缩、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷A541 mg，纯度为91.0%; C18再生后可重复使用。 实施例12
取8g积雪草总皂苷加入烧瓶中，加入100mL甲醇溶解，再加入40g硅胶 (拌样比为0.2)，用旋转蒸发器搅拌均匀、真空蒸干后得拌样硅胶；在内径为4 cm 的层析柱中加入硅胶，装实后的硅胶高度为36 cm，接着加入拌样硅胶，装实后 的拌样硅胶高度为4.5cm (高径比为9，硅胶与拌样硅胶高度比为8，总床层体 积为509ml);以二氯甲烷一乙醇一水(体积比为40:9:1)三元混合溶剂为流动相， 以25.4mL/min (3床层体积/h)的流速洗脱；洗脱液经TLC分析后合并成三个 馏分，馏分1为积雪草苷溶液，镏分2为积雪草苷、积雪草苷A、积雪草苷B 的混合溶液，馏分3为积雪草苷A与积雪草苷B的混合溶液；将馏分3真空浓 縮、真空干燥后得2170 mg积雪草苷A与积雪草苷B的混合物；将所得的混合 物用8 mL体积浓度为20%的乙腈一水混合溶剂溶解、过滤后得滤液；内径为2 cm、高度为20cm的层析柱(高径比10，床层体积63 mL，装填C18硅胶量为
35 g)采用湿法装柱，用体积浓度为20%的乙腈一水混合溶剂冲洗柱子；取6.4 mL 滤液上样(上样量为0.05 g积雪草苷A与积雪草苷B的混合物/lg C18硅胶)，体 积浓度为20。/。的乙腈一水混合溶剂以3.1mL/min (3床层体积/h)的流速洗脱； 洗脱液经HPLC分析后合并成三个熘分，馏分4为积雪草苷B溶液，馏分5为 积雪草苷B与积雪草苷A的混合溶液，馏分6为积雪草苷A溶液，馏分4经真 空浓縮、结晶、真空-T燥后分别得积雪草苷B 395 mg，纯度为89.5%，馏分6 经真空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷A676mg，纯度为91.0%; C18 再生后可重复使用。 实施例13
取6g积雪草总皂苷加入烧瓶中，加入100mL甲醇溶解，再加入75g硅胶 (拌样比为0.08)，用旋转蒸发器搅拌均匀、真空蒸干后得拌样硅胶；在内径为5.5 cm的层析柱中加入硅胶，装实后的硅胶高度为27.5 cm，接着加入拌样硅胶， 装实后的拌样硅胶高度为3.9 cm (高径比为5，硅胶与拌样硅胶高度比为7，总 床层体积为746ml);以氯仿一甲醇一水(体积比为35:13:2)三元混合溶剂为流动 相，以24.9mL/min (2床层体积/h)的流速洗脱；洗脱液经TLC分析后合并成 三个馏分，馏分1为积雪草苷溶液，馏分2为积雪草苷、积雪草苷A、积雪草 苷B的混合溶液，馏分3为积雪草苷A与积雪草苷B的混合溶液；将馏分3真 空浓縮、真空干燥后得1528 mg积雪草苷A与积雪草苷B的混合物；将所得的 混合物用3mL体积浓度为20。/。的乙腈一水混合溶剂溶解、过滤后得滤液；内径 为2 cm、高度为12 cm的层析柱(高径比6，床层体积38 mL，装填C18硅胶 量为21 g)采用湿法装柱，用体积浓度为20%的乙腈一水混合溶剂冲洗柱子； 取2.5 mL滤液上样(上样量为0.06 g积雪草苷A与积雪草苷B的混合物/lg C18 硅胶)，体积浓度为20%的乙腈一水混合溶剂以1.3 mL/min (2床层体积/h)的 流速洗脱；洗脱液经HPLC分析后合并成三个馏分，馏分4为积雪草苷B溶液， 馏分5为积雪草苷B与积雪草苷A的混合溶液，馏分6为积雪草苷A溶液，馏 分4经真空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷B318mg，纯度为94.6%， 馏分6经真空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷A545 mg，纯度为96.3%; C18再生后可重复使用。 实施例14
取8g积雪草总皂苷加入烧瓶中，加入100mL甲醇溶解，再加入80g硅胶 (拌样比为O.l)，用旋转蒸发器搅拌均匀、真空蒸干后得拌样硅胶；在内径为5.5 cm的层析柱中加入硅胶，装实后的硅胶高度为27.5cm，接着加入拌样硅胶，
装实后的拌样硅胶高度为3.9cm (高径比为5，硅胶与拌样硅胶高度比为7，总 床层体积为746ml);以乙酸乙酯一乙醇一水(体积比为65:29:6)三元混合溶剂为 流动相，以18.7mL/min (1.5床层体积/h)的流速洗脱；洗脱液经TLC分析后 合并成三个馏分，馏分1为积雪草苷溶液，馏分2为积雪草苷、积雪草苷A、 积雪草苷B的混合溶液，馏分3为积雪草苷A与积雪草苷B的混合溶液；将馏 分3真空浓縮、真空干燥后得1871mg积雪草苷A与积雪草苷B的混合物；将 所得的混合物用4mL体积浓度为20。/。的乙腈一水混合溶剂溶解、过滤后得滤液； 内径为2 cm、高度为12 cm的层析柱(高径比6，床层体积38 mL，装填C18 硅胶量为21 g)采用湿法装柱，用体积浓度为20%的乙腈一水混合溶剂冲洗柱 子；取3.1 mL滤液上样(上样量为0.07 g积雪草苷A与积雪草苷B的混合物/lg C18硅胶)，体积浓度为20%的乙腈一水混合溶剂以0.9mL/min(1.5床层体积/h) 的流速洗脱；洗脱液经HPLC分析后合并成三个馏分，馏分4为积雪草苷B溶 液，馏分5为积雪草苷B与积雪草苷A的混合溶液，馏分6为积雪草苷A溶液， 馏分4经真空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷B 347 mg，纯度为91.6%， 馏分6经真空浓缩、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷A595 mg，纯度为93.2%; C18再生后可重复使用。 实施例15
取12g积雪草总皂苷加入烧瓶中，加入100mL甲醇溶解，再加入100g硅 胶(拌样比为0.12)，用旋转蒸发器搅拌均匀、真空蒸干后得拌样硅胶；在内径为 5.5cm的层析柱中加入硅胶，装实后的硅胶高度为33cm，接着加入拌样硅胶， 装实后的拌样硅胶高度为5.5cm (高径比为6，硅胶与拌样硅胶高度比为6，总 床层体积为914ml);以乙酸乙酯一乙醇一水(体积比为65:29:6)三元混合溶剂为 流动相，以22.9mL/min (1.5床层体积/h)的流速洗脱；洗脱液经TLC分析后 合并成三个馏分，馏分1为积雪草苷溶液，馏分2为积雪草苷、积雪草苷A、 积雪草苷B的混合溶液，馏分3为积雪草苷A与积雪草苷B的混合溶液；将馏 分3真空浓縮、真空干燥后得3243 mg积雪草苷A与积雪草苷B的混合物；将 所得的混合物用4 mL体积浓度为25%的乙腈一水混合溶剂溶解、过滤后得滤液； 内径为2 cm、高度为12 cm的层析柱(高径比6，床层体积38 mL，装填C18 硅胶量为21 g)采用湿法装柱，用体积浓度为25%的乙腈一水混合溶剂冲洗柱 子；取2.1 mL滤液上样(上样量为0.08 g积雪草苷A与积雪草苷B的混合物/lg C18硅胶)，体积浓度为25%的乙腈一水混合溶剂以1.3mL/min (2床层体积/h) 的流速洗脱；洗脱液经HPLC分析后合并成三个馏分，馏分4为积雪草苷B溶
液，馏分5为积雪草苷B与积雪草苷A的混合溶液，馏分6为积雪草苷A溶液， 馏分4经真空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷B 365 mg，纯度为87.8%， 馏分6经真空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷A626 mg，纯度为89.4%; C18再生后可重复使用。 实施例16
取12g积雪草总皂苷加入烧瓶中，加入100mL甲醇溶解，再加入100g硅 胶(拌样比为0.12)，用旋转蒸发器搅拌均匀、真空蒸干后得拌样硅胶；在内径为 5.5cm的层析柱中加入硅胶，装实后的硅胶高度为33cm，接着加入拌样硅胶， 装实后的拌样硅胶高度为5.5cm (高径比为6，硅胶与拌样硅胶高度比为6，总 床层体积为914ml);以氯仿一甲醇一水(体积比为35:13:2)三元混合溶剂为流动 相，以30.5mL/min (2床层体积/h)的流速洗脱；洗脱液经TLC分析后合并成 三个馏分，馏分1为积雪草苷溶液，馏分2为积雪草苷、积雪草苷A、积雪草 苷B的混合溶液，馏分3为积雪草苷A与积雪草苷B的混合溶液；将馏分3真 空浓縮、真空干燥后得3109 mg积雪草苷A与积雪草苷B的混合物；将所得的 混合物用4mL体积浓度为25。/。的乙腈一水混合溶剂溶解、过滤后得滤液；内径 为2 cm、高度为16 cm的层析柱(高径比8，床层体积50 mL，装填C18硅胶 量为28 g)采用湿法装柱，用体积浓度为25%的乙腈一水混合溶剂冲洗柱子； 取3.2 mL滤液上样(上样量为0.09 g积雪草苷A与积雪草苷B的混合物/lg C18 硅胶)，体积浓度为25%的乙腈一水混合溶剂以L3mL/min (1.5床层体积/h)的 流速洗脱；洗脱液经HPLC分析后合并成三个馏分，馏分4为积雪草苷B溶液， 馏分5为积雪草苷B与积雪草苷A的混合溶液，馏分6为积雪草苷A溶液，馏 分4经真空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷B521mg，纯度为85.6%， 馏分6经真空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷A893 mg，纯度为87.1%; C18再生后可重复使用。 实施例17
取10 g积雪草总皂苷加入烧瓶中，加入100 mL甲醇溶解，再加入77 g硅 胶(拌样比为0.13)，用旋转蒸发器搅拌均匀、真空蒸干后得拌样硅胶；在内径为 4.5 cm的层析柱中加入硅胶，装实后的硅胶高度为31.5 cm,接着加入拌样硅胶， 装实后的拌样硅胶高度为6.3cm (高径比为7，硅胶与拌样硅胶高度比为5，总 床层体积为601ml);以氯仿-甲醇一水(体积比为35:13:2)三元混合溶剂为流动 相，以20.0mL/min (2床层体积/h)的流速洗脱；洗脱液经TLC分析后合并成 三个馏分，馏分l为积雪草苷溶液，馏分2为积雪草苷、积雪草苷A、积雪草
苷B的混合溶液，馏分3为积雪草苷A与积雪草苷B的混合溶液；将馏分3真
空浓縮、真空干燥后得2722mg积雪草苷A与积雪草苷B的混合物；将所得的 混合物用6mL体积浓度为20。/。的乙腈一水混合溶剂溶解、过滤后得滤液；内径 为2 cm、高度为12 cm的层析柱(高径比6，床层体积38 mL，装填C18硅胶 量为21 g)采用湿法装柱，用体积浓度为20%的乙腈一水混合溶剂冲洗柱子； 取4.6 mL滤液上样(上样量为0.1 g积雪草苷A与积雪草苷B的混合物/lg C18 硅胶)，体积浓度为20%的乙腈一水混合溶剂以1.3 mL/min (2床层体积/h)的 流速洗脱；洗脱液经HPLC分析后合并成三个馏分，馏分4为积雪草苷B溶液， 馏分5为积雪草苷B与积雪草苷A的混合溶液，馏分6为积雪草苷A溶液，馏 分4经真空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷B417mg，纯度为84.0%， 馏分6经真空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷A 715 mg，纯度为85.4%; C18再生后可重复使用。 实施例18
取8 g积雪草总皂苷加入烧瓶中，加入100 mL甲醇溶解，再加入53 g硅胶 (拌样比为0.15)，用旋转蒸发器搅拌均匀、真空蒸干后得拌样硅胶;在内径为4 cm 的层析柱中加入硅胶，装实后的硅胶高度为28cm，接着加入拌样硅胶，装实后 的拌样硅胶高度为5.6cm (高径比为7，硅胶与拌样硅胶高度比为5，总床层体 积为422ml);以乙酸乙酯一甲醇一水(体积比为15:8:2)三元混合溶剂为流动相， 以10.6mL/min (1.5床层体积/h)的流速洗脱；洗脱液经TLC分析后合并成三 个馏分，馏分1为积雪草苷溶液，馏分2为积雪草苷、积雪草苷A、积雪草苷 B的混合溶液，馏分3为积雪草苷A与积雪草苷B的混合溶液；将馏分3真空 浓縮、真空干燥后得2071 mg积雪草苷A与积雪草苷B的混合物；将所得的混 合物用8 mL体积浓度为25%的乙腈一水混合溶剂溶解、过滤后得滤液；内径为 2cm、高度为16cm的层析柱(高径比8，床层体积50 mL，装填C18硅胶量为 28 g)采用湿法装柱，用体积浓度为25%的乙腈一水混合溶剂冲洗柱子;取6.5 mL 滤液上样(上样量为0.06 g积雪草苷A与积雪草苷B的混合物/lg C18硅胶)，体 积浓度为25%的乙腈一水混合溶剂以1.7mL/min (2床层体积/h)的流速洗脱； 洗脱液经HPLC分析后合并成三个馏分，馏分4为积雪草苷B溶液，馏分5为 积雪草苷B与积雪草苷A的混合溶液，馏分6为积雪草苷A溶液，馏分4经真 空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷B 410 mg，纯度为93.1%，馏分6 经真空浓縮、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷A703 mg，纯度为94.7%; C18 再生后可重复使用。
权利要求
1.一种从积雪草总皂苷出发同时制备积雪草苷A与积雪草苷B的方法，方法的步骤如下1)积雪草总皂苷用甲醇溶解后加入硅胶混合搅拌均匀，蒸干后得拌样硅胶，积雪草总皂苷与硅胶的质量比例为0.05～0.2∶1；2)层析柱中依序加入硅胶和拌样硅胶，采用干法装柱，干法层析柱的高径比为3～9，硅胶与拌样硅胶的高度比为3～8；3)以有机溶剂I-有机溶剂II-水三元混合溶剂为流动相，以0.5～3床层体积/h的流速洗脱；4)洗脱液经TLC分析后合并成三个馏分，馏分1为积雪草苷溶液，馏分2为积雪草苷、积雪草苷A、积雪草苷B的混合溶液，馏分3为积雪草苷A与积雪草苷B的混合溶液；5)将馏分3真空浓缩、真空干燥后用乙腈-水混合溶剂溶解、过滤后得滤液；6)C18硅胶采用湿法装柱，柱子的高径比为4～12，用乙腈-水混合溶剂相冲洗柱子；7)滤液按0.01～0.1g积雪草苷A与积雪草苷B的混合物/1g C18硅胶的比例上样，乙腈-水混合溶剂以0.5～3床层体积/h的流速洗脱；8)洗脱液经HPLC分析后合并成三个馏分，馏分4为积雪草苷B溶液，馏分5为积雪草苷B与积雪草苷A的混合溶液，馏分6为积雪草苷A溶液，馏分4与馏分6经真空浓缩、结晶、真空干燥后分别得积雪草苷B与积雪草苷A产品；9)C18柱经乙腈-水混合溶剂冲洗再生后可再次上样。
2. 根据权利要求1所述的一种从积雪草总皂苷出发同时制备积雪草苷A与 积雪草苷B的方法，其特征在于所述步骤1)中以0.08 0.15 g积雪草总皂苷/lg 硅胶的比例加入硅胶搅拌均匀。
3. 根据权利要求1所述的一种从积雪草总皂苷出发同时制备积雪草苷A与 积雪草苷B的方法，其特征在于所述步骤3)中有机溶剂I为氯仿或二氯甲烷或 乙酸乙酯。
4. 根据权利要求1所述的一种从积雪草总皂苷出发同时制备积雪草苷A与 积雪草苷B的方法，其特征在于所述步骤3)中有机溶剂II为甲醇或乙醇。
5. 根据权利要求1所述的一种从积雪草总皂苷出发同时制备积雪草苷A与积雪草苷b的方法，其特征在于所述步骤3)有机溶剂i一有机溶剂n—水三元混合溶剂中有机溶剂I的体积浓度为60~80%。
6. 根据权利要求1所述的一种从积雪草总皂苷出发同时制备积雪草苷A与 积雪草苷B的方法，其特征在于所述步骤3)有机溶剂I一有机溶剂II一水三元 混合溶剂中有机溶剂II的体积浓度为18 38%。
7. 根据权利要求1所述的一种从积雪草总皂苷出发同时制备积雪草苷A与 积雪草苷B的方法，其特征在于所述步骤3)有机溶剂I—有机溶剂II一水三元混 合溶剂中水的体积浓度为2~10%。
8. 根据权利要求1所述的一种从积雪草总皂苷出发同时制备积雪草苷A与 积雪草苷B的方法，其特征在于所述步骤5)、步骤6)、步骤7)中乙腈一水混合 溶剂中乙腈的体积浓度为10~30%。
9. 根据权利要求1所述的一种从积雪草总皂苷出发同时制备积雪草苷A与 积雪草苷B的方法，其特征在于所述步骤7)中滤液按0.02 0.06 g积雪草苷A 与积雪草苷B的混合物/lg C18硅胶的比例上样。
10. 根据权利要求1所述的一种从积雪草总皂苷出发同时制备积雪草苷A 与积雪草苷B的方法，其特征在于所述步骤9)中C18柱再生过程为依次用体积 浓度为80 95%的乙腈_水和10 30%的乙腈_水混合溶剂冲洗。
全文摘要
本发明公开了一种从积雪草总皂苷出发同时制备积雪草苷A与积雪草苷B的方法，方法为积雪草总皂苷用甲醇溶解，加硅胶搅拌，蒸干得拌样硅胶；层析柱中依序加入硅胶和拌样硅胶，干法装柱；以有机溶剂I-有机溶剂II-水三元混合溶剂为流动相洗脱；洗脱液经TLC分析后合并成三个馏分，取其中富含积雪草苷A与积雪草苷B的馏分，真空浓缩、真空干燥后溶解、过滤得滤液；C18硅胶采用湿法装柱，滤液上样，用乙腈-水混合溶剂洗脱；洗脱液经HPLC分析后合并成三个馏分，分别取其中富含积雪草苷B、积雪草苷A的馏分真空浓缩、结晶、真空干燥。该方法具有工艺过程简单、操作费用低、积雪草苷A与积雪草苷B纯度高等优点，可用于新药的开发。
文档编号C07J63/00GK101182346SQ20071016447
公开日2008年5月21日 申请日期2007年12月5日 优先权日2007年12月5日
发明者吕秀阳, 贾广韬, 郑兴芳 申请人:浙江大学