专利名称：：一种转录激活因子及其编码基因与应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种转录激活因子及其编码基因与应用，特别涉及一种可提高纤维素酶和木聚糖酶表达水平的转录激活因子及其编码基因与应用。
背景技术：
：利用木霉生产的纤维素酶，己经在洗涤、制衣、饲料、造纸、食品和纤维素乙醇等各方面得到了广泛的应用。木霉纤维素酶高产菌株常常通过物理、化学诱变的方法得到。木霉也能表达一定水平的木聚糖酶，并分泌到细胞外。木霉中，纤维素酶和木聚糖酶的表达主要在基因转录水平上受到调控。纤维素酶基因是包括至少12个基因的一系列基因，其中，含最强启动子的基因是cM厶它负责CBHI(纤维二糖水解酶I)合成，该酶产量可占胞外分泌蛋白的50%。通过对cM7基因启动子的研究，已经发现有至少4个和纤维素酶合成相关的转录因子负责调控纤维素酶的转录，包括葡萄糖抑制因子CreI以及ACEI、ACEII和Xyrl等，它们不仅负责cM7基因的调控，也负责纤维素酶基因的其它成员和木聚糖酶基因等的表达调控。Crel、ACEI和ACEII均是锌指蛋白，前两者为C2H2型锌指蛋白，CreI含2个锌指，ACEI含3个锌指，负责和纤维素酶和木聚糖酶基因启动子DNA上特定序列的结合；而ACElI为Zri2(Cys)6型锌指蛋白，其锌双核区负责和启动子上特定序列的结合。由于纤维素酶和木聚糖酶受到这三个蛋白的协同调控，因此，在酶基因的启动子区含有能和这三个蛋白结合的特定基序，以1.5kb的cM7基因启动子为例，分别含有4、7和1个相应的基序。以前对木霉的遗传学改造一般只涉及化学和物理方法诱变以及后续的筛选工作；自从Penttila等(1987)建立了一套行之有效的原生质体转化方法，对其进行分子操作也就成为了可能。一般对木霉的分子生物学的操作集中在应用cMJ基因的强大启动子进行外源或内源基因的过表达，通过增加某个基因的拷贝数增加其表达量，或对某个基因进行体内敲除构建含不同表达谱的木霉新菌株。目前，国内外都尚无利用嵌合体转录因子增强木霉纤维素酶和/或木聚糖酶表达的报道。本发明通过对木霉纤维素酶和木聚糖酶基因启动子序列的分析，设计了含有两个DNA结合结构域和一个激活结构域的转录激活因子，即将转录抑制因子CreI和ACEI的DNA结合结构域和转录激活因子ACEII的转录激活结构域连接，形成一个能同时识别启动子上CreI和ACEI的结合位点，且又能发挥激活作用的激活蛋白。
发明内容本发明的目的是提供一种可提高纤维素酶和木聚糖酶表达水平的转录激活因子及其编码基因与应用。本发明所提供的可提高纤维素酶和木聚糖酶表达水平的转录激活因子，是如下(a)或(b)的蛋白质-(a)由序列表中序列1的氨基酸残基序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有可提高纤维素酶和木聚糖酶表达水平的转录激活因子功能的由(a)衍生的蛋白质。其中，序列表中的序列1由588个氨基酸残基组成。为了(a)中的转录激活因子便于纯化，可在由序列表中序列l的氨基酸残基序列组成的蛋白质的N端或C端连接上如表1所示的标签。表l.标签的序列<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>上述(b)中的转录激活因子可人工合成，也可先合成其编码基因，再按照下述方法进行生物表达得到。上述(b)中的转录激活因子的编码基因可通过将序列表中序列1的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5'端连上信号肽的编码序列，和/或在其5'端和/或3'端连上表1所示的标签的编码序列得到。上述可提高纤维素酶和木聚糖酶表达水平的转录激活因子的编码基因也属于本发明的保护范围。所述可提高纤维素酶和木聚糖酶表达水平的转录激活因子的编码基因，具有下述核苷酸序列之一1)序列表中SEQIDN2:2的DNA序列;2)编码序列表中SEQIDNa:1蛋白质序列的多核苷酸；3)与序列标中序列2所述的序列具有90%以上同源性的编码序列表中序列1的氨基酸残基序列的核苷酸序列；4)在高严谨条件下与序列表中SEQIDNe:2限定的DNA序列杂交的核苷酸序列。其中，序列表中序列2是由1773个脱氧核苷酸组成，自序列表中序列2的5'端第1位至第1764位核苷酸为编码序列。上述高严谨条件可为在0.1XSSPE(或0.1XSSC)，0.1%SDS的溶液中，在65°C下杂交并洗膜。含有上述可提高纤维素酶和木聚糖酶表达水平的转录激活因子的编码基因的重组表达载体、工程菌或转基因细胞系均属于本发明的保护范围。本发明还提供一种提高生物细胞纤维素酶和/或木聚糖酶表达水平的方法。所述提高生物细胞纤维素酶和/或木聚糖酶表达水平的方法，是将纤维素酶和/或木聚糖酶的编码基因与上述可提高纤维素酶和木聚糖酶表达水平的转录激活因子的编码基因在同一生物细胞中共同表达。所述方法中，所述生物细胞为含有纤维素酶和/或木聚糖酶的编码基因可表达纤维素酶和/或木聚糖酶的生物细胞。所述方法为将上述可提高纤维素酶和木聚糖酶表达水平的转录激活因子的编码基因通过表达载体导入所述可表达纤维素酶和/或木聚糖酶的生物细胞中，筛选得到纤维素酶和/或木聚糖酶表达水平提高的工程菌株。所述将上述可提高纤维素酶和木聚糖酶表达水平的转录激活因子的编码基因通过表达载体导入所述可表达纤维素酶和/或木聚糖酶的生物细胞中时，还可同时导入便于筛选的抗性基因。所述方法中，所述可表达纤维素酶和/或木聚糖酶的生物细胞为木霉属真菌优选为瑞氏木霉；所述纤维素酶和/或木聚糖酶表达水平提高是表达产生的纤维素酶和/或木聚糖酶酶活性和表达量的提高。本发明的转录激活因子及其编码基因可提高纤维素酶和木聚糖酶基因的表达水平。将本发明的转录激活因子的编码基因转入木霉中，在木霉中进行表达以提高纤维素酶和木聚糖酶的表达水平。实验证明，通过构建含有编码该转录激活因子的基因的表达盒的质粒载体，将其转化到瑞氏木霉中后，转化子发酵液中纤维素酶和木聚糖酶酶活大大提高。图1为含有可提高纤维素酶和木聚糖酶表达水平的转录激活因子的编码基因的表达载体的构建流程具体实施例方式实施例1、可提高纤维素酶和木聚糖酶表达水平的转录激活因子及其编码基因的获得及其功能验证。一、可提高纤维素酶和木聚糖酶表达水平的转录激活因子及其编码基因的获得本发明的可提高纤维素酶和木聚糖酶表达水平的转录激活因子的编码基因含有两个DNA结合结构域和一个激活结构域；其中，两个DNA结合结构域分别为编码CreI启动子及CreI蛋白DNA结合结构域基因(具有自GENBANK号为U27356的5'端第23至439位核苷酸)和编码ACEI蛋白DNA结合结构域基因具有自GENBANK号为AF190793的5'端第3218至3656位核苷酸)，激活域为编码ACEII蛋白激活结构域基因具有自GENB認K号为AF220671的5'端第834至1682位核苷酸)；具体获得方法如下所述1、编码CreI启动子及CreI蛋白DNA结合结构域基因的获得将含有1X1(T个木霉QM9414菌株(ATCC26921)孢子的悬液接种到100mL含2%葡萄糖的基础培养基(含有(朋4)25045g/L,KH2P0415.0g/L，MgS047H200.6g/L，CaCl22H200.6g/L，CoCl26H203.7mg/L，FeS047H205mg/L，ZnS047H201.4mg/L，MnS04*H201.6mg/L的培养基)中，250rpm、28。C培养2天，收集菌丝，用氯化节法提取木霉QM9414菌株基因组DNA。以该木霉QM9414菌株基因组DNA作模板，以Pcrelfl(5'GCGGCTCTAGACTCGGTGAGAAGCGTGGAGG3'(下划线处为1&I酶切位点))和Pcrelrl(5'ATTAGGATCCGCCATCGACGTGCATGGGGTG3'(下划线处为^9/rfH位点))为引物，进行PCR扩增编码CreI启动子及CreI蛋白DNA结合结构域的基因，扩增程序为95。CX5min;然后94°CX40s变性，55。CX40s复性，72'CX2min延伸，共作35个循环；最后72"X10min。将所得PCR产物于1^琼脂糖凝胶上电泳，回收目的条带，得到1802bp的条带，经测序表明该片段含有序列表中序列2自5'端第1至417位核苷酸；PCR获得的片段回收后，用WsI和"s/bHI双酶切，用乙醇和3M乙酸钠沉淀酶切产物，-2(TC保存备用。2、编码ACEI蛋白DNA结合结构域基因的获得将含有1X10'个木霉QM9414菌株(ATCC26921)孢子的悬液接种到100mL含2。/o葡萄糖的基础培养基(含有(NH4)2S045g/L，KH2P0415.Og/L，MgS047H200.6g/L，CaCl22H200.6g/L，CoCl26H203.7mg/L，FeS047H205mg/L，ZnS047H20L4mg/L，MnS04*H201.6mg/L的培养基)中，250rpm、28。C培养2天，收集菌丝，用氯化苄法提取木霉QM9414菌株基因组DNA。以该木霉QM9414菌株基因组DNA作模板，以PaceIf(5'TATTAAGCTTGGCAGCGGTGGCTCCGGCACCAGCCGGTCCATGGCCCGCCGG3'(带下划线处为历'/7din位点))和Pacelr(5'GAGGGAATTCCTAGCTGTAGCTGGGCGTGGAGG3'(带下划线处为fcdU位点))为引物，进行PCR扩增编码ACEI蛋白DNA结合结构域的基因，反应程序为95。CX5min，然后94°CX40s变性，60°CX40s复性，72°CX1min延伸，共作35个循环；最后72°CX10min。将所得PCR产物于1%琼脂糖凝胶上电泳，回收目的条带，得到488bp的条带，经测序表明该片段具有序列表中序列2自5'端第1294至1773位核苷酸；PCR获得的片段回收后，用A'72dll和fcoRI双酶切，用乙醇和3M乙酸钠沉淀酶切产物，-2(TC保存备用。3、编码ACEII蛋白激活结构域基因的获得将含有1X10'个木霉QM9414菌株(ATCC26921)孢子的悬液接种到100mL含2%葡萄糖的基础培养基(含有(NH4)2S045g/L，KH2P0415.Og/L，MgS047H200.6g/L，CaCl22H200.6g/L，CoCl26H203.7mg/L,FeS047H205mg/L，ZnS047H201.4mg/L,MnS04*H201.6mg/L的培养基)中，250rpm、28。C培养2天，收集菌丝，用氯化节法提取木霉QM9414菌株基因组DNA。以该木霉QM9414菌株基因组DNA作模板，以Pace2f(5'CGTGGATCCGGCGGTAGCGGCACCAGCCATAGTCACAGTCACAA3'(带下划线处为^3/zI位点))和Pace2r(5'CACGAATTCTTACTAAAGCTTCAGCAGTCTGGCACTGAC3'(带下划线处依次为fcoRI和沿'/2dlI位点))为引物，进行PCR扩增编码ACEII蛋白激活结构域的基因，反应程序为95°CX5min，然后94°CX40s变性，6(TCX40s复性，72°CX1min延伸，共作35个循环；最后72"CX10min。将所得PCR产物于1X琼脂糖凝胶上电泳，回收目的条带，得到894bp的条带，经测序表明该片段具有序列表中序列2自5'端第418至1299位核苷酸；PCR获得的片段回收后，用Aa/dU和AcdU双酶切，用乙醇和3M乙酸钠沉淀酶切产物，-20。C保存备用。4、编码CreI终止子基因的获得将含有1X1(^个木霉QM9414菌株(ATCC26921)孢子的悬液接种到100mL含2%葡萄糖的基础培养基(含有(NH》2S045g/L，KH2P0415.Og/L，MgS047H200.6g/L，CaCl22H200.6g/L，CoCl26H203.7mg/L，FeS047H205mg/L，ZnS047H201.4mg/L，MnS04H201.6mg/L的培养基)中，250rpm、28。C培养2天，收集菌丝，用氯化苄法提取木霉QM9414菌株基因组DNA。以该木霉QM9414菌株基因组DNA作模板，以Pcrelf2(5'GAGAATTCCTAGAATGTCCGGTACTCATGG3'(带下划线处为5boRI位点))和Pcrelr2(5'GCGTCGACCACTAAAGCATCTAAAGTAGG3'(带下划线处为&71位点))为引物，进行PCR扩增编码CreI终止子的基因，反应程序为95°CX5min，然后94°CX40s变性，58"CX40s复性，72。CX2min延伸，共作35个循环；最后72。CX10min。将所得PCR产物于1%琼脂糖凝胶上电泳，回收目的条带，得到1496bp的条带；PCR获得的片段回收后，用&dU和5"s7I双酶切，用乙醇和3M乙酸钠沉淀酶切产物，-2(TC保存备用。5、可提高纤维素酶和木聚糖酶表达水平的转录激活因子的编码基因的获得及含有该基因的表达载体的构建(载体构建流程示意图如图1所示)用fcoRI和5^7I双酶切pBluescriptKS—质粒，产物于1%琼脂糖凝胶上电泳，回收目的条带(3kb的条带)，将回收片段与步骤4获得的用^bdU和&7I双酶切的编码CreI终止子的基因连接，转化大肠杆菌DH5，筛选氨苄抗性转化子。将筛选得到的阳性转化子提取质粒用EcoRI和SalI双酶切检测，将酶切检测表明正确的质粒进行测序验证，将酶切和测序验证表明含有编码CreI终止子的基因的重组载体命名为沐ST(结构简图如图1所示)；将pKST用Xbal和iaMU双酶切，产物于1%琼脂糖凝胶上电泳，回收目的条带(4.5kb的条带)，将回收片段与步骤1获得的用i7^I和As/dlI双酶切的编码CreI启动子及CreI蛋白DNA结合结构域基因连接，转化大肠杆菌DH5，筛选氨苄抗性转化子。将筛选得到的阳性转化子提取质粒用XbaI和BamHI双酶切检测，将酶切检测表明正确的质粒进行测序验证，将酶切和测序验证表明含有编码CreI终止子的基因和编码CreI启动子及CreI蛋白DNA结合结构域基因的重组载体命名为pKSTC(结构简图如图l所示);将pKSTC用5^I和&oRI双酶切，产物于1%琼脂糖凝胶上电泳，回收目的条带(6.3kb的条带)，将回收片段与步骤3获得的用^s/dlI和fC0RI双酶切的编码ACEII蛋白激活结构域的基因连接，转化大肠杆菌DH5，筛选氨苄抗性转化子。将筛选得到的阳性转化子提取质粒用BamHI和EcoRI双酶切检测，将酶切检测表明正确的质粒进行测序验证，将酶切和测序验证表明含有编码CreI终止子的基因和编码CreI启动子及CreI蛋白DNA结合结构域基因以及编码ACEII蛋白激活结构域的基因的重组载体命名为pKSTCC(结构简图如图1所示)；将pKSTCC用历/7dlI和I双酶切，回收目的条带(7.2kb的条带)与步骤2获得的用历'"dll和I双酶切的编码ACEI蛋白DNA结合结构域的基因连接，转化大肠杆菌DH5，筛选氨苄抗性转化子，将筛选得到的阳性转化子提取质粒用历^/ni和fcdU双酶切检测，将酶切检测表明正确的质粒进行测序验证，将酶切和测序验证表明，编码含有本发明的嵌合体转录激活因子的编码基因的表达载体命名为pChi(7.7kb，结构简图如图l所示)。本发明的嵌合体转录激活因子的编码基因，包括依次串联的步骤1获得的编码CreI启动子及CreI蛋白DNA结合结构域基因、步骤2获得的编码ACEI蛋白DNA结合结构域基因和步骤3获得的编码ACEII蛋白激活结构域基因，具有序列表中序列2的核苷酸序列，自序列表中序列2的5'端第1至1767位核苷酸为编码序列，自序列表中序列2的5'端第1位至第1764位核苷酸为编码序列，编码具有序列表中序列2的氨基酸残基序列的蛋白，即本发明的可提高纤维素酶和木聚糖酶表达水平的转录激活因子。本发明的可提高纤维素酶和木聚糖酶表达水平的转录激活因子的编码基因可从上述获得重组载体pChi中酶切或亚克隆得到，或者直接人工合成得到。二、利用本发明的可提高纤维素酶和木聚糖酶表达水平的转录激活因子提高宿主菌的纤维素酶和木聚糖酶表达水平1、pChi对瑞氏木霉RUTC-30的转化将pChi用XbaI线性化，将pAN7-l质粒(GENBANK号为Z32698)用肠dIII酶切线性化。分别取3iig的线性化pChi和5yg的线性化的p認7-l质粒混合，无水乙醇和乙酸钠共沉淀，将DNA沉淀溶于10uL灭菌水中。将含有1Xl(y个瑞氏木霉RUTC-30菌株(ATCC56765)孢子的悬液接种到100mL含2。/。葡萄糖的基础培养基(含有(NH4)2S045g/L，KH2P0415.Og/L,MgS047H200.6g/L，CaCl22H200.6g/L,CoCl26H203.7mg/L,FeS047H205mg/L，ZnS04*7H201.4mg/L，MnS04H201.6mg/L的培养基)中，250rpm、28。C培养18h。然后用4层纱布过滤收集菌丝，灭菌水洗涤菌丝。用含1.2MMgS04和10raM磷酸钠，pH5.8溶液按照5mg/mLLysingenzymes(SigmaL1412)溶液的量与菌丝混合消化，于28。C、70rpm孵育1.5h。孵育结束后，8000rpm离心收集原生质体，然后用1M山梨醇，lOmMTris-HC1，pH7.5的缓冲液重悬洗涤原生质体2次，将原生质体重悬于200pL含有1M山梨醇，lOraMTris-HC1，和50raMCaCl2，pH7.5的缓冲液中。取100uL原生质体重悬液，和10uL线性化pChi和pAN7-l共沉淀质粒混合，加入lmL含有10mMTris-HC1，50raMCaCl2，和质量百分含量为60%PEG4000，pH7.5的溶液中，于冰上孵育20分钟，加入2mL含有1M山梨醇，10mMTris-HC1，和50rnMCaCl2，pH7.5的溶液，混合均匀，涂布于含150ug/mL的潮霉素平板上，28。C培养5-7天。2、阳性转化子的筛选挑取潮霉素平板上的木霉转化子，接种于5mL含2。/。葡萄糖的基础培养基(含有(NH4)2S045g/L，KH2P0415.0g/L，MgS047H200.6g/L，CaCl22H200.6g/L，CoCl26H203.7mg/L，FeS047H205mg/L，ZnS047H201.4mg/L，MnS04H201.6mg/L的培养基)中，250rpra、28。C培养3天。提取基因组DNA，以Pchif(5，TATAACTAGTATGCCTCGTCCCTACAAGTG3，)禾口Pchir(5，TCAGACTAGTCTAGCTGTAGCTGGGCGTGGAGG3')引物扩增编码本发明转录激活因子的基因，所用条件如下95°CX5min，然后94°CX40s变性，50。CX40s复性，72°CX2min延伸，共作35个循环；最后72°CX10min。将所得PCR产物于1%琼脂糖凝胶上电泳，检测是否有目的条带。出现目的条带者为阳性转化子。结果表明，获得一个检测阳性的转入pChi的瑞氏木霉RUTC-30菌株。3、转入pChi的瑞氏木霉RUTC-30的纤维素酶和木聚糖酶表达水平的检测1)转入pChi的瑞氏木霉RUTC-30的表达将步骤2获得的转入pChi的瑞氏木霉RUTC-30阳性转化子重新划线于土豆培养基(土豆汁1000mL，葡萄糖20g，琼脂20g)平板，挑取单菌落，接种于100mL含2%甘油的基础培养基中，250rpm、28。C培养3天。4层纱布过滤收集菌丝，灭菌水洗涤菌丝。将菌丝按质量百分含量为1%的量接种于100mL含质量百分含量为2%Avicel纤维素的基础培养基(含有(NH4)2S045g/L，KH2P0415.Og/L，MgS047H200.6g/L,CaCl22H200.6g/L，CoCl26H203.7mg/L，FeS047H205mg/L，ZnS047H201.4mg/L，MnS04H201.6mg/L的培养基)中，250rpm、28。C培养5天，以相同条件培养的野生型瑞氏木霉RUTC-30为对照。2)转化子培养物发酵液蛋白浓度、纤维素酶和木聚糖酶酶活的测定将Avicel基础培养基中的转化子培养物取出，离心，收集上清，即为发酵液。Folin-酚法测定蛋白质浓度，另外采用DNS法分别测定纤维素酶和木聚糖酶酶活。转化子的发酵液中的总蛋白浓度、纤维素酶滤纸酶酶活和木聚糖酶酶活分别为1.01mg/mL、0.91IU/mL和11.41IU/mL，相比瑞氏木霉RUTC—30的(0.87mg/mL、0.47IU/mL和5.12IU/mL)，分别提高了16.1%、93.6%和122.9%。此株转化子的纤维素酶的主要组成部分一cbhl酶活(1.27nkat/mL)、CMCase酶活(6.54IU)和葡萄糖苷酶酶活(1.10nkat/mL)，相较出发菌株RUTC-30的cbhl(1,13nkat/mL)、CMCase酶活(3.80IU)和葡萄糖苷酶酶活(0.99nkat/mL)比较，分别提高了15.5%、72.2%和11.1%。序列表<160>2<210>1<211〉588<212>PRT<213〉人工序列〈220〉<223〉〈400〉1MetGinArg1ThrSerThrValThrAla65GlySerAsnGinGlyAla50PheGluArgSerGly130SerAlaGinSerAlaValAsp5AlaAlaGlyGinAspSerGly2025lieLysProAsnGlyProlie3540AsnGluLeuProArgProTyr55HisArgLeuGluHisGinThr70LysProHisAlaCysGinPhe85SerAspGluLeuThrArgHis100105ArgArgGlyAsnLysGlyGin115120MetProHisProMetHisVal135GlyThrSerHisSerHisSerPheSer10AlaMetProGlyLysCysArgHis75ProGly90SerArgAsnLeuLeuSerThrThrPro60lieCyslieGinGinHisAspGlyGly140HisAsnHisGin45LeuArgSerHisGin125SerAsnAla30SerAsn15AlaLysSer110LeuGlyGlyLys95AsnProValThrGluCysAspLysThrHisThr80PheProHisHisSerValGlyGly145ValSerPheAspTrp165Gin150LeuProGinHisGinGinGinGly180LeuAlaAlaLeuAspLeuMetGin155LeuGluGinGinSer170ProProProValSerGluArg195ProSerSerLeuPro185CysAlaLeuAspGin175ThrAlaVal210ArgGlu225LeuAspTyrAlaAspSerLeuThr230HisAsp215ValLeu200MetHisHisValHisAlaGinLeu245AlaSerPheAsnGlyThrGlyAlaSer220AspLeuGinSerPhe235LeuAlaSerLeuGluAlaValPro260CysAlaValProAsp250ArgThrThrAlaAspAlaLeu275ThrThrProLeuLeuHis290ValMet305GluHisTyrAspAlaProLeuGin370AspGin385ArgLeuAsp280ILysLys265CysValHisGinTyr255GluAlaCysHisGlyProCysArgPro295ArgLeuLeuLeuAspHislie310CysAlaPheMetMet325PheAlaValProLys340AspThrAlaAlaThr355ThrValLeuValGlu345MetAspAspVal330lieVal315AlaArgLeuAla300MetThrLeuProValAspThrLeuLeuGlyLeuLeuSerSer360ArgValLysAspValGinLysCysAspGlyAsp390lieAla375AlaArgAlaLysAlaLeuLeuGluArgArg395AlaLeu380GluGluVal365ValAlaSerThr350ValAlaLysThrPro335PheValMetValLeu160GluLeuGin190MetLeuGinArg205ArgGinGinLeuThr240SerAlaAla270ArgThrSerAsp285LeuLeuAsnLeuAla320AspValGluValVal400Gly<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>〈400>2atgcaacgagcacagtctgccgtggatttttccaacctcctgaatccaacgtcggcagca60gg3C鄉3C8gcggcgccatgtctaccgccgcggtc織gtcatcaagcccaatgggccc120attccELggaacacagtcgaccgagactgccaacgagctgcctcgtccctacaagtgccct180ctttgcg3caaggctttccaccgcctggagC3cceigaccaggcacattcgcscccacscg240ggcgagaagccccatgcctgccagttccctggctgcagcaagaa_gttctcccgctccgat300g3gCtg3Cg3ggcactcgaggatacacagcaaccccaaictcetaggcgcggcaacaagggc360cagcagcagcaccagcttcaCC3CC3gggCatgcctcaccccatgcacgtcgatggcgga420tccggatccggcggtagcggcaccagccatagtcacagtcacaatcataacggggtaggc480gtcagctttgactggctcgatctcatgagcttggagcagcagcaggagcagcaacaaggc540cagcctcaacatcctccaccaccagtccaaaccctctccg犯cggctggcagctcttctg600tgtgccctggaccgcatgctccaagccgtaccctcatccctcgeicatgcatcacgtctca660aggcagcagctgagagagtacgccgacaccgtggg肪ccggcttcgacctgcagtccaxx720ctcgacagcctcctccaccacgccceiggatctcgcctccctctattccgaggccgtaccc780gcctcgttcaacaagcgcacaaccgctgccg郷ccgacgccctctgtgccgttccggac840tgcgteicaccaggaccgcacctcgttgcacacgacgccgttgcccaagctggaccacgcc900ctgttgaacctcgtcatggcgtgccacatccgtctgctcgatgtC3tggeicactctcgca960g昭C3CgggCggatgtgcgccttcatggtggccactctgccgccggactacgaccccaag1020tttgcggttcctgagatacgggtgggcacttttgtcgcccctaccgeitacggctgcctca1080atgctgctctctgttgtcgtggsgcttcaaacggtgctggtggcgsgggtC肌gg3Cttg1140gtggccatggttgaccaggtgaaggatgatgca卿gcggcgeigagaagcaaaggtcgtt1200cgtctgcagtgtgggatttt3ctgga^cg3gccgagtcgacgcttgg卿gtggtccagg1260ttcaaggacgggctggtcagtgccagactgctgaagcttggcagcggtggctccggcacc1320agccggtccatggcccgccggccacccccgaggacgtggcgcccaagaag1380tgccgcgagcccggctgcaccaaggagttcaagcgcccttgcgacctcaccaagcacgag1440a_3ga_ctc3Ctctcgtccctggsagtgccccatccccacttgcaagtaccacgagtacggc1500tggcccaccgagaaggaaatggaccgccacatcaacgacaagcactcggacgccccggcc1560atgtacgaatgcctcttcaagccctgcccgtacaagtcgaagcgtgagtcgaactgcaag1620C3gC3C3tggaaaaggcccacggctggacctatgtccgcacc肌g3cca8cggcaagaag1680gcaccgagccagaatggctccactgcccagc昭accccccctctcgccaacgtgtctacg1740ccttcctccacgcccagctacagctaggaattc177权利要求1、一种可提高纤维素酶和木聚糖酶表达水平的转录激活因子，是如下(a)或(b)的蛋白质(a)由序列表中序列1的氨基酸残基序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有可提高纤维素酶和木聚糖酶表达水平的转录激活因子功能的由(a)衍生的蛋白质。2、权利要求1所述可提高纤维素酶和木聚糖酶表达水平的转录激活因子的编码基因。3、根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于所述可提高纤维素酶和木聚糖酶表达水平的转录激活因子的编码基因，具有下述核苷酸序列之一1)序列表中SEQIDNq:2的DNA序列;2)编码序列表中SEQIDNa:l蛋白质序列的多核苷酸；3)与序列标中序列2所述的序列具有90%以上同源性的编码序列表中序列1的氨基酸残基序列的核苷酸序列；4)在高严谨条件下与序列表中SEQIDNq:2限定的DNA序列杂交的核苷酸序列。4、含有权利要求2或3所述编码基因的重组表达载体、工程菌或转基因细胞系。5、一种提高宿主细胞纤维素酶和/或木聚糖酶表达水平的方法，是将纤维素酶和/或木聚糖酶的编码基因与权利要求2或3所述的编码基因在同一宿主细胞中共同表达。6、根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述宿主细胞为含有纤维素酶和/或木聚糖酶的编码基因可表达纤维素酶和/或木聚糖酶的宿主细胞。7、根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述方法为将权利要求2或3所述编码基因通过表达载体导入所述可表达纤维素酶和/或木聚糖酶的宿主细胞中，筛选得到纤维素酶和/或木聚糖酶表达水平提高的工程菌株。8、根据权利要求7所述的方法，其特征在于将权利要求2或3所述编码基因通过表达载体导入所述可表达纤维素酶和/或木聚糖酶的宿主细胞中时，还可同时导入便于筛选的抗性基因。9、根据权利要求8所述的方法，其特征在于所述可表达纤维素酶和/或木聚糖酶的宿主细胞为木霉属真菌；所述纤维素酶和/或木聚糖酶表达水平提高是表达产生的纤维素酶和/或木聚糖酶酶活性和表达量的提高。10、根据权利要求9所述的方法，其特征在于所述可表达纤维素酶和/或木聚糖酶的宿主细胞为瑞氏木霉。全文摘要本发明公开了一种转录激活因子及其编码基因与应用。该转录激活因子可提高纤维素酶和木聚糖酶表达水平，是如下(a)或(b)的蛋白质(a)由序列表中序列1的氨基酸残基序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有可提高纤维素酶和木聚糖酶表达水平的转录激活因子功能的由(a)衍生的蛋白质。本发明的转录激活因子及其编码基因可提高纤维素酶和木聚糖酶基因的表达水平。文档编号C07K14/37GK101182352SQ200710177828公开日2008年5月21日申请日期2007年11月21日优先权日2007年11月21日发明者苏小运,董志扬申请人:中国科学院微生物研究所