专利名称：从长春花中提取长春碱类提取物的方法
技术领域：
本发明涉及一种从长春花中提取长春质碱、文朵灵、长春碱、长 春新碱的新工艺，长春质碱和文朵灵是合成抗肿瘤药物长春瑞滨、长 春碱和长春新碱的重要原料，长春碱、长春新碱可直接作药用。
技术背景长春碱类抗肿瘤药系由夹竹桃科植物长春花分离得到的具有抗 癌活性的双吲哚生物碱及其结构修饰的衍生物。天然的为长春碱、长 春新碱。长春碱用于治疗各种实体瘤，长春新碱主要用于治疗儿童急 性白血病。长春质碱、文朵灵可用于合成长春碱，进一步合成用于治 疗非小细胞肺癌和晚期乳腺癌的长春瑞滨。双B引哚生物碱长春碱在长春花中的含量大约为十万分之一，长 春新碱大约为百万分之一，而植物体内合成长春碱、长春新碱的前体 单吲哚生物碱文朵灵和长春质碱的含量是它们的数倍之多，大约在万 分之一(Uniyal， G， G. et al. Phytochemical Analysis, 12， 206)。双吲 哚生物碱长春碱、长春新碱、脱水长春碱、长春瑞滨可由单吲哚生物 碱文朵灵和长春质碱通过偶合制备，但国内临床使用的长春新碱、长 春瑞滨主要是从长春碱半合成过来。国内的长春花总碱生产从长春花 植物中仅提取含量较低的长春碱，而把大量的单吲哚生物碱文朵灵和 长春质碱作为废料遗弃，造成资源没有得到很好的综合利用
发明内容
本发明的目的在于综合利用长春花，从中能够提取出多种长春碱 类提取物。本发明釆用如下技术方案 一种从长春花中提取长春碱类提取物 的方法，其特征在于该方法包括如下过程(1) 长春花经酸性水拌湿后搅碎，然后用酸性水浸泡，过滤后 滤液用碱调节至碱性，再用氯仿萃取碱水相，收集氯仿相、回收氯仿 后得固体回收物；(2) 将步骤(1)中的固体回收物用酸性水溶解，加乙酸乙酯萃 取，回收酸性水相；(3) 将步骤(2)中回收的酸性水相调节至碱性，用氯仿萃取， 萃取相回收氯仿后得粗制生物碱；(4) 将步骤(3)中获得的粗制生物碱用酸性水溶解，调pH至 碱性，离心收集下层沉淀，沉淀物经干燥后得长春花生碱，长春花生 碱经过溶解后再经氧化铝柱层析分离得长春碱和长春新碱；(5) 步骤(4)中离心所得滤液，用氯仿萃取，萃取相经减压浓 縮，以大孔树脂分离得长春质碱和文朵灵。本发明的提取方法，经过多次萃取、分离，能够从长春花中分别 提取出长春碱、长春新碱、长春质碱和文朵灵，提高了长春花的利用 率，减少了废弃物的排放。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以助于理解本发明 的内容。下面的酸水采用2%的H2S04。1、 总碱的提取称取长春花干草约4kg，加少量酸水拌湿后匀浆机搅碎。将搅碎 后的草渣加8升酸水浸泡24小时，此时酸水浸泡液pH二1 1.5。此 后，过滤收集酸水液，Na0H调碱至pH二7. 5 9.0，氯仿萃取碱水相， 收集氯仿相并用旋转蒸发仪在30 5(TC条件下蒸干并回收固体回收 物。以上操作重复三次后，基本可将长春花中的生物碱全部提出。然 后，将回收物用酸水溶解，加乙酸乙酯萃取，其目的是去除脂溶性杂 质及叶绿素等杂质。回收酸水相调节pH至7.5 9.0呈碱性，再用氯 仿萃取、蒸干，得粗制生物碱IO. 166克。将粗制生物碱用酸水2L溶 解后，再用碱如NaOH调pH至7.5 9.0呈碱性，离心收集下层沉淀，沉淀物用冷冻干燥机干燥，干燥条件为-38i:预冻3小时，ox:升华20小时，25'C干燥4小时，得精制长春花生碱，为淡黄色的粉末， 称重为1.981克。离心后的滤液用氯仿萃取，减压浓縮得生物碱6. 5g，以大孔树 脂AB-8分离，乙醇水梯度洗脱，收集乙醇浓度为45%的洗脱成分， 减压浓縮得长春质碱。收集乙醇浓度为65%的洗脱成分，减压浓縮得 文朵灵。2、 长春碱与长春新碱的分离纯化(1)氧化铝的预处理取一定量已过120目筛的氧化铝，加60 'C以上的蒸馏水浸泡搅拌约IO分钟，如此反复数次，直至洗涤液近
中性为止。于10(TC-14(TC的温度下烘干(一般要6-12时)。用板层 进行定级，使其对苏丹红的Rf值控制在0. 2-0. 1之间，然后加入10% 醋酸水溶液降活性，使对苏丹红的Rf值在0.3土0. l范围内(每400 克氧化铝约加10%醋酸溶液4. 5ml)，盛于瓶中密闭保存备用。
(2) 上柱取一端带有活塞的内径为80mm、高度为lm的玻璃 层析管，先加入少量苯，再放入脱脂棉于底部。然后称取已处理过的 氧化铝120克，放入烧杯内，同时加入苯，并用玻棒搅拌，慢慢加入 层析管中，使其自然沉降。打开活塞放出多余的苯，使苯液面与氧化 铝平面相近，静置过夜后再将多余的苯放出。
(3) 加样将长春花生碱加入适量苯溶解后，用吸管沿层析管 壁四周慢慢加入(为了不使氧化铝平面被冲动，可在氧化铝平面上放 一圆形滤纸)。盛长春花生碱的容器用少量苯洗涤3次，用吸管移入 层析管中。打开活塞，以每分钟6ml的流速放出，直至液面与氧化铝 平面相近为止。
(4) 洗脱洗脱流份的体积， 一般视氧化铝活性、层析管的大 小、流速快慢而定。先以苯100毫升洗脱，每分钟6-8ml的流速收集 流份1-7 (每份30ml)。并点少量流份于干净滤纸上，用硫酸铈铵检 査和板层鉴定，前l-6份无生物碱反应，从7份开始有颜色反应。
再以苯和氯仿比例为l: 2 (V/V)的混合液150ml的洗脱，收集 流份16-18，经板层检查，16-17仍为交叉流份。
最后用1: 2 (V/V)苯和氯仿中，加入0.2%无水乙醇的混合液 200ml洗脱，再用1: 2苯和氯仿中加0. 8%无水乙醇的混合液300ml
洗脱，收集19-26流份，经板层检査，显VCR颜色反应(兰灰色)， 27-29流份显其他颜色反应。每收集一个流份，要在80°C-IO(TC的水浴上减压浓縮，并回收 洗涤剂，用吸管移入编号的小瓶内，并用少量氯仿多次洗涤容器，洗 涤液倒入编号小瓶中。浓縮后可以再行板层检査定性，将显兰灰色的 流份合并在一起，显其它颜色的流分合并在一起，经真空干燥，兰灰 色流分得长春碱，其它颜色流份为长春新碱。所述的板层检查条件为吸附剂氧化铝粒度过200目，对苏丹红的Rf值应在0. 35-0. 4之间。显色剂 1%硫酸铈铵磷酸液。展开剂 氯仿乙醚石油醚(沸程3(TC-6(TC) =10: 10: 1(V/V)。
权利要求
1、一种从长春花中提取长春碱类提取物的方法，其特征在于该方法包括如下过程(1)长春花经酸性水拌湿后搅碎，然后用酸性水浸泡，过滤后滤液用碱调节至碱性，再用氯仿萃取碱水相，收集氯仿相回收氯仿后得固体回收物；(2)将步骤(1)中的固体回收物用酸性水溶解，加乙酸乙酯萃取，回收酸性水相；(3)将步骤(2)中回收的酸性水相调节至碱性，用氯仿萃取，萃取相回收氯仿后得粗制生物碱；(4)将步骤(3)中获得的粗制生物碱用酸性水溶解，调pH至碱性，离心收集下层沉淀，沉淀物经干燥后得长春花生碱，长春花生碱经过溶解后再经氧化铝柱层析分离得长春碱和长春新碱；(5)步骤(4)中离心所得滤液，用氯仿萃取，萃取相经减压浓缩，以大孔树脂分离得长春质碱和文朵灵。
2、 如权利要求1所述的从长春花中提取长春碱类提取物的方法， 其特征在于所述的酸性水是指PH值为1 1. 5的水溶液。
3、 如权利要求1所述的从长春花中提取长春碱类提取物的方法， 其特征在于所述步骤(l)、 (3)和(4)中的碱性是指PH值为7.5 9.0。
4、 如权利要求1所述的从长春花中提取长春碱类提取物的方法， 其特征在于将所述的步骤(1)中的浸泡至步骤(3)的提取过程重复进行三次以充分提取出粗制生物碱。
5、 如权利要求1至4中之一所述的从长春花中提取长春碱类提 取物的方法，其特征在于所述的步骤(4)中沉淀物的干燥是冷冻 干燥。
6、 如权利要求5所述的从长春花中提取长春碱类提取物的方法， 其特征在于所述的冷冻干燥条件为-38 -45'C预冻2 4小时， -10 5°(3升华至冰晶消失，25。C干燥3 5小时。
7、 如权利要求1至4中之一所述的从长春花中提取长春碱类提 取物的方法，其特征在于所述的步骤(4)中用氧化铝柱层析分离的 过程为(1) 氧化铝的预处理取氧化铝加蒸馏水浸泡搅拌，直至洗涤 液近中性为止；于100°C-140。C的温度下烘干6-12小时；用板层进 行定级，使其对苏丹红的Rf值控制在0.2-0. l之间，然后加入100/。 醋酸水溶液降活性，使对苏丹红的Rf值在0.3士0. l范围内，盛于容 器中密闭保存备用；(2) 上柱取一端带有活塞的玻璃层析管，装预处理好的氧化 铝装柱；(3) 加样将长春花生碱加入适量苯溶解后，沿层析管壁四周 慢慢加入，盛长春花生碱的容器用少量苯洗涤，移入层析管中，打开 活塞，放出直至液面与氧化铝平面相近为止；(4) 洗脱先以苯100毫升洗脱，每分钟6-8ml的流速收集流 份，并点少量流份于滤纸上，用硫酸铈铵检査和板层鉴定，至有颜色 反应后，再以苯和氯仿的体积比例为1: 2的混合液150ml的洗脱， 收集流份；最后用l: 2体积比的苯和氯仿，加入0.2%无水乙醇的混 合液200ml洗脱，再用l: 2体积比的苯和氯仿中加0.8。/。无水乙醇的 混合液300ml洗脱，收集流份，经板层检查，显VCR颜色反应为兰灰 色，以后的流份显其他颜色反应；将显兰灰色的流份合并在一起，显 其它颜色的流分合并在一起，要在80°C-IO(TC的水浴上减压浓縮， 经真空干燥，兰灰色流分得长春碱，其它颜色流份为长春新碱。
8、如权利要求1至4中之一所述的从长春花中提取长春碱类提 取物的方法，其特征在于所述的大孔树脂为AB-8。
全文摘要
一种从长春花中提取长春碱类提取物的方法，包括如下过程(1)长春花经酸性水拌湿后搅碎，然后用酸性水浸泡，过滤后滤液用碱调节至碱性，用氯仿萃取碱水相，收集氯仿相，回收氯仿后得固体回收物；(2)回收物用酸性水溶解，加乙酸乙酯萃取，回收酸性水相；(3)将步骤(2)中回收的酸性水相调节至碱性，用氯仿萃取，萃取相回收氯仿得粗制生物碱；(4)将步骤(3)中获得的粗制生物碱用酸性水溶解，调pH至碱性，离心收集下层沉淀，沉淀物经干燥后得精制长春花生碱，经氧化铝柱层析分离得长春碱、长春新碱；(5)将步骤(4)中离心所得滤液，用氯仿萃取，减压浓缩，以大孔树脂分离得长春质碱、文朵灵。这种方法可以提高长春花的利用率。
文档编号C07D519/00GK101157699SQ20071018781
公开日2008年4月9日 申请日期2007年11月13日 优先权日2007年11月13日
发明者刘全胜 申请人:刘全胜