专利名称：动物肝脏中提纯高精度卵磷脂的制作方法
技术领域：
本发明涉及动物肝脏来源的一类特异性磷脂酰胆碱的分离纯化工艺流程及其对肝损伤的保护作用。 技术背景
磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine, PC)俗称卵磷脂，是真核生物细胞膜的重要组分之一，它不但维持 生物膜正常的结构和功能，与细胞的生长、增殖、分化及癌变密切相关，而且其降解产物还参与细胞的信 号转导和代谢调控，具有防衰老、降血脂、抗肿瘤、健脑、保肝等多种生理作用。早在70年代，美国就 开始把卵磷脂用于保健食品，总销量仅次于复合维生素C和维生素E列第三。
近年来，我国对植物源卵磷脂(大豆)的研究应用较多，但其中磷脂酰胆碱的含量均较低,还处在产
品的粗加工阶段；而对动物磷脂的研究和开发较少，动物肝脏卵磷脂(磷脂酰胆碱)的开发几乎还处在空
白阶段。另外，磷脂酰胆碱在肝脏中还存在着一条特异性的合成路线，这也预示了其独特生物学功能的存
在，所以对其开发应用已迫在眉睫。
常用的PC分离方法主要有超滤法、沉淀法、色谱法、超临界流体法等。其中由于柱色谱法操作简便，
成本较低，因而被广泛釆用。但以往柱色谱法中采用的洗脱剂如正己烷、氯仿和甲醇等毒性较大，且不适 于工业化生产的需要。最近，还有文献报道，使用高分子膜和C02超临界萃取精致高精度磷脂酰胆碱，但 这该方法生产成本高，设备复杂，不易推广普及。
发明内容
本发明在综合国内外先进工艺的基础上，根据动物肝磷脂各组分不同的物化性能，研究出了以猪肝为 原料，应用全溶剂法制备高精度动物肝脏卵磷脂(磷脂酰胆碱)的方法。该方法工艺简单，成本低廉，纯 度高，产率高，有着很高的实用和推广价值。
本发明还发现了此法获得的动物肝脏卵磷脂(磷脂酰胆碱)对肝损伤的保护作用，为进一步药物开发 突定了坚实的理论和实验基础。
图1是柱色谱法分离纯化动物肝脏卵磷脂的示意图，将一定量肝脏磷脂粗提物(》0.4g)经滤膜抽滤后, 加入到制备好的色谱柱(直径》15mm)中，打开色谱柱下端的流速控制器，调节流速为1.0 5.0ml/min。 在波长203 208nm下检测收集。研究发现，运用本发明选用的柱色谱法，可以得到髙产量、高纯度的动物 肝脏卵磷脂(磷脂酰胆碱)，克服了以前方法产量少、纯度低、洗脱剂毒性大等不足，为工业化色谱法制 备动物肝脏卵磷脂(磷脂酰胆碱)提供了实验依据和技术支持。
图2是四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)测定动物肝脏卵磷对癌细胞增殖的影响。抑制率=1-实验孔
吸光值/对照组吸光值X100。/。。 CBRH7919是大鼠肝癌细胞系，K562是人的白血病细胞株。我们分别用 12.5、 25、 50 u mol的色谱纯肝脏卵磷脂处理CBRH7919和K562细胞12和24h， MTT法检测其对大鼠肝 癌细胞CBRH-7919增殖的影响，并与K562细胞作了比较。结果提示(l)不同剂量的PC对CBRH-7919 和K562细胞均有一定的抑制作用，但对CBRH7919细胞的抑制作用明显，抑制率超过40%，而对K562 的抑制率低于10%; (2)肝脏卵磷脂作用12h和24h对癌细胞生长的影响没有显著的差别。
由此我们推测肝源性的PC对癌细胞的增殖抑制作用可能具有细胞特异性或组织特异性，这可能与肝 脏中特殊的PC合成路径与合成的不同PC分子种有关。这种特异性为今后开发保肝、抗肝癌药物或保健 品的开发提供一种新的思路。
具体实施例方式
将活化的Al203的悬浊液灌入色谱柱中，用95%乙醇平衡后，上样洗脱，然后旋转蒸发得到高精度磷 脂酰胆碱的浓縮液。
利用不同浓度的CCU作用HL7702细胞不同时间后，发现CC14能够使HL7702细胞存活率降低，谷草 转氨酶与谷丙转氨酶的比值增大，诱导细胞发生损伤；CC14对HL7702细胞的损伤作用呈剂量和时间相关 性；观察了不同浓度的PC对15mmol/L的CC14造成的肝损伤作用24后，对HL7702细胞的保护作用，发 现磷脂酰胆碱可以使死亡细胞比例下降；谷草转氨酶与谷丙转氨酶的比值降低。
尽管已经通过具体的实施方案描述了本发明，但某些修改和等效对于精通此领域的技术人员是显见 的，且这些变化被认为包括在本发明的范围之内。
权利要求
1.动物肝脏卵磷脂(磷脂酰胆碱)的分离纯化及保肝作用，其特征是从动物肝脏中获得高精度磷脂酰胆碱的生产工艺及其对肝损伤的保护。
2. 根据权利要求l所述，其特征是 一种动物肝脏来源的特异性磷脂酰胆碱。
3. 根据权利要求1所述，其特征是该分离纯化过程为可获得高精度动物肝脏卵磷脂(磷脂酰胆碱)且 适合工业化生产的工艺流程。
4. 根据权利要求1所述，其特征是通过上述方法获得的动物肝脏卵磷脂(磷脂酰胆碱)对肝损伤具有 保护作用。
全文摘要
本发明涉及一种动物肝脏卵磷脂(磷脂酰胆碱)的分离纯化流程。它是以动物肝脏为原料，用单一乙醇洗脱剂，采用合理的工艺(柱色谱法等)提纯制备的高精度卵磷脂，磷脂酰胆碱含量可达85％以上。本发明工艺简单，精度高，得率高，成本低，生产过程环保，产品质量高，有着很高的实用和推广价值。目前，卵磷脂已经广泛应用于医疗保健、农业、工业等领域，而动物肝脏卵磷脂(磷脂酰胆碱)其性能指标优于大豆、卵黄卵磷脂，可广泛用于食品、保健品、化妆品、抗癌药物原料等领域，尤其是对肝损伤具有很好的保护作用，并具有明显的抗肝癌作用等。
文档编号C07F9/10GK101205237SQ20071019680
公开日2008年6月25日 申请日期2007年12月5日 优先权日2006年12月14日
发明者亮 王, 伟 邹 申请人:辽宁师范大学